Universidade do Algarve Faculdade de Cincias e Tecnologias

Disciplina Tcnicas Laboratoriais de Anlise Ano: : Curso: Bioqumica Bloco: Ano Alunos: Marta Santos n 40631 2009/2010 lectivo: Vanessa Viegas n 40633 Docentes: Jos Paulo Pinheiro / Conceio Mateus

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Identificao de Produtos de Decomposio da Napropamida por HPLC e GC-MS e sua quantificao por HPLC
RESUMO: Nesta actividade experimental pretende-se identificar os produtos de decomposio fotoqumica da napropamida por HPLC e GC-MS e a sua quantificao por HPLC. A tcnica de cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC-High Performance Liquid Chromatography) caracteriza-se por ser uma tcnica de cromatografia lquido-lquido em que o enchimento da coluna constitudo por partculas de dimetro extremamente pequeno, o que aumenta muito a eficincia da separao cromatogrfica, por outro lado a tcnica de cromatografia de gases (GC) acoplada a espectrometria de massa (MS) junta a capacidade separativa da cromatografia capacidade de identificao de compostos por

espectrometria de massa, pelo que uma tcnica muito poderosa para identificao de componentes numa mistura.

PARTE EXPERIMENTAL: Material e aparelhagem: -Microseringa de 25l 0.5l (Marca: Hamilton) -Balo Volumtrico de 20ml 0.04ml (Marca: A) -Copo de Precipitao de 100ml (Marca: DIN) -Cromatgrafo HPLC, contitudo por um programador de eluentes, bomba, vlvula de injeco, coluna e detector PDA. -Coluna cromatogrfica: Lichrospher RP-18 e Lichrocart 125-4 1

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Solues a preparar: Como fase mvel usa-se uma mistura de gua, metanol, acetonitrilo. Estes solventes devem ser previamente filtrados por membrana, para eliminar quaisquer partculas que possam posteriormente contribuir para a degradao da coluna. Procedimento experimental: a) Ligar os cromatgrafos HPLC ou GC/MS e correr eluente/gs de arrastamento at obter um sinal estvel. b) Tomar nota das condies de anlise optimizadas para esta separao: HPLC: caudal de eluente, composio/programao eluente, tempo de eluio. GC-MS: caudal de gs de arrastamento, temperatura de injeco, programao de temperaturas. c) injectar e traar o cromatograma da amostra no irradiada. d) injectar a amostra irradiada. e) Identificar pico(s) relativo(s) a produtos de decomposio. f) Injectar soluo(es) padro de produtos de decomposio (naftol ou naftoquinona) g) Comparar tempos de reteno e espectros de componentes, para confirmao da identificao h) injectar amostr irradiada no GC-MS i) injectar padres no GC-MS j) comparar tempos de reteno e espectros de massa na amostra e padres.

RESULTADOS E CLCULOS: HPLC: V = 20 l = 280 mm Fluxo = 1.5 ml/min

1 2 3 4 5 Padro (mg/dm) rea (m) 1,69 4978 3,39 10230 6,78 20318 13,6 42737 27,1 74409

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Tempo (min) 0 8 15 18 20 21

Tabela de Precentagens ao longo do tempo % gua % Metanol % Acetomitrilo (H2O) (CH3OH) (CH3CN) 85 15 0 50 15 35 40 15 45 15 15 70 15 15 70 85 15 0

nr 1

Napropamida Padro Tempo (min) rea (m) 14,89 74199

rea (m) % 98,300

nr 1 2 3 4

Tabela de Propamida Tempo (min) rea (m) 10,54 4296 11,68 18448 14,86 27144 15,87 13403

rea (m) % 6,788 29,148 42,887 21,177

nr 1 2 3 4

Tabela de Propamida + Naftol Tempo (min) rea (m) 10,52 44240 11,65 15447 14,85 23837 15,86 14088

rea (m) % 45,322 15,825 24,420 14,433

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Grfico da Recta de Calibrao da rea vs Concentrao

80000 70000 60000

rea (m)

50000 40000 30000 20000 10000 0 0 5 10 15 20 25 30 y = 2747,5x + 1652,6 R = 0,9941

Concentrao para a Napropamida

y = mx + b y(rea) e x(concentrao) y = 2747.5x + 1652.6

sm

sy S xx N x x i
2 i

sb s y

2 i

sy

x N x
i 2 i

sy

y y
i i

N 2

S yy m 2 S xx N 2

Sxx = Sm = 321.908

= 977.388 N=5

Syy = L=2

= 7884474378

Sb = 4527.34

Sy = 10063.888

tN-2 = t3= 3.182

Com um intervalo de confiana de 95% 4

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y = (m tn-2 x Sm)x + (b tn-2 x Sb) y = (2747.5 3.182 x 321.908)x + (1652.6 3.182 x 4527.34) y = (2747.5 1024.312)x + (1652.6 14405.995)

Na Soluo de Propamida, a concentrao de Napropamida : x= = 9.278 mol

Na Soluo de Propamida + Naftol, a concentrao de Napropamida : x= = 8.074 mol

A mdia de concentrao de Napropamida :

= 8.676 mol

Sc

= 3.073

GC-MS: L = 30m = 30000 mm V = 20 l = 280 mm Fluxo = 1.5 mm/min

K = ( RS = N = 16 x H=

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Tabela de valores de factores de reteno K'1 5,382 K'2 6,030 K'3 6,059 K'4 6,295

tm=1,792

W1 W2 W3 W4

Tabela das bases 0,0806 0,0806 0,0968 0,0968

Tabela do nmero de pratos N1 322106 N2 390889 N3 273201 N4 291779

Tabela da altura de cada prato H1 0,9314 H2 0,7675 H3 1,0981 H4 1,0282

Tabela dos Factor de Resoluo Rs1,2 14,417 Rs2,3 0,575 Rs3,4 4,37

Tabela dos Factores de Separao 1,2 2,3 3,4 1,193 1,007 1,058

DISCUSSO E CONCLUSO: O copo irradiado no ficou bem fechado e ficou extremamente diludo. Relativamente 1-4 naphtalenedione (naftaquinona), no seu espectro de massa experimental poder notar-se a ausncia da banda cromtica 26, apresentando outras bandas que no esto presentes no espectro padro do elemento. As bandas cromticas 50, 76, 102 e 130 encontram-se em pouca abundncia, obtendo-se uma qualidade de 95%. Quanto Napropamida, no seu espectro de massa experimental identifica-se a ausncia das bandas cromticas 29, 44 e 213 e verifica-se a existncia de outras bandas no presentes no espectro padro do elemento. As bandas cromticas 100, 128, 144, 171 e 271 encontram-se abundantemente no espectro, demonstrando uma qualidade de 95%. Em relao ao 1 Naphtalenol (neftol-turno 1) no seu espectro de massa experimental faltam as bandas cromticas 18, 39 e 63 e facilmente 6

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reconhecvel a presena de outras bandas no existentes no espectro padro do elemento. A banda cromtica 115 est em abundncia comparativamente s restantes, apresentando uma qualidade de 94%. Por fim, no 1 Naphtalenol (neftol-turno 2) observa-se no seu espectro de massa experimental a ausncia das bandas cromticas 18, 39 e exibe outras bandas no presentes no espectro padro do elemento. Poder-se- afirmar que relativamente banda cromtica 115, esta se encontra em abundncia, demonstrando uma qualidade de 94%.

TERMO DE RESPONSABILIDADE

As responsveis pelo relatrio tomaram ambas conhecimento:

_______________________________________________________ (Marta Santos)

_______________________________________________________ (Vanessa Viegas)