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Procedimento Operacional Padro DOSAGEM DO COLESTEROL

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COLESTEROL-PP
PRINCPIO DO TESTE Os steres do colesterol so hidrolisados pela colesterol esterase (CHE) formando colesterol livre que aps oxidao pela colesterol oxidase (CHOD) forma perxido de hidrognio. Este, reagindo com o fenol e 4-aminoantipirina, atravs de copulao oxidativa catalisada pela peroxidase (POD), produz uma quinonimina de cor vermelha. A absorbncia do complexo formado, medida em 500 nm, diretamente proporcional concentrao de colesterol da amostra. CHE steres do colesterol Colesterol + cidos graxos CHOD Colesterol + O Colest - 4 - en - ona + H O 2 2 2
POD 2H2 O2 + Fenol + 4 Aminoantip irina 4H2 O + quinoneimin a

APLICAO CLNICA A dosagem do colesterol no sangue, juntamente com a de triglicrides e de colesterol HDL, empregada principalmente na avaliao de risco de doena arterial coronariana e no monitoramento de pacientes com hipotireiodismo, diabticos e obesos. AMOSTRA Preparo do Paciente Colher sangue pela manh aps jejum 12 horas, salvo orientaes mdicas. Amostras utilizadas Soro ou plasma. Anticoagulantes como heparina, oxalato, fluoreto ou EDTA, no interferem. Estabilidade e armazenamento da amostra O analito estvel por 7 dias a 2-8 C. Volume ideal utilizado para anlise (Definir o volume ideal a ser encaminhado para anlise). Volume mnimo utilizado para anlise (Definir o volume mnimo a ser encaminhado para anlise). Critrios para rejeio da amostra No utilizar amostras fortemente hemolisadas. Fazer referncia ao manual ou POP de coleta, separao e distribuio de material. REAGENTE UTILIZADO COLESTEROL PP CAT. 460 MS 80022230064

GOLD ANALISA DIAGNSTICA LTDA CNPJ 03.142.794/0001-16 Av. Nossa Senhora de Ftima, 2363 Belo Horizonte MG Brasil Farmacutico Responsvel: Homero Jackson de Jesus Lopes CRF MG - 2010 Componentes do kit Conservar entre 2-8C. 1- Padro - Contm Colesterol 200 mg/dL 2- Reagente de Cor - Contm tampo Pipes 35 mmol/L pH 7,0, colato sdico 0,5 mmol/L, fenol 28 mmol/L, colesterol esterase > 200 U/L, colesterol oxidase > 100 U/L, peroxidase > 800 U/L, e 4aminoantipirina 0,5 mmol/L. Cuidados e Precaues Especiais 1- O kit destina-se somente para uso diagnstico in vitro. 2- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostra biolgica. Fazer referncia ao manual ou POP de segurana. 3- Os reagentes utilizados em condies tcnicas adequadas e armazenados nas condies especificadas so estveis at a validade citada na embalagem. 4- O reagente uma vez usado, contm soro, plasma ou urina, eventualmente infectado, e deve ser tratado como material potencialmente infeccioso. Fazer o descarte em lugar apropriado.

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5- Os reagentes no contm substncias perigosas nas quantidades reportadas. Em caso de vazamento acidental, lavar o local com gua corrente. 6- Recomenda-se o uso de luvas descartveis durante o manuseio das substncias. Em caso de contato com os olhos ou pele, lavar abundantemente com gua corrente. Em caso de ingesto, procurar atendimento mdico. 7- Aconselhamos no pipetar diretamente do frasco Reagente de Cor (2) para evitar contaminao. 8- O Reagente de Cor poder apresentar uma colorao rsea, mas isso no interferir no resultado do teste. A leitura da absorbncia do reagente branco dever ser inferior a 0,200 durante toda a sua utilizao ou at a expirao da data de validade do mesmo. EQUIPAMENTOS Procedimento Tcnico Manual Banho-Maria a 37C Espectrofotmetro ou fotmetro para leituras em 500 nm Pipetas automticas Cronmetro Procedimento Tcnico Automatizado Citar nome, modelo e o local onde se encontra o equipamento; Fazer referncia ao manual ou POP para utilizao do mesmo. Procedimento Tcnico Alternativo Citar o equipamento alternativo e os procedimentos para medio dos ensaios. Indicar as possveis diferenas quando os procedimentos manuais substiturem os procedimentos automatizados. PROCEDIMENTO Procedimento Manual Amostras lipmicas devem ser muito bem homogeneizadas, antes de iniciar a dosagem. 1- Deixar os reagentes atingirem a temperatura ambiente ou a do banho-maria antes da realizao do teste. 2- Identificar 3 tubos de ensaio com "Branco", Teste e "Padro" e proceder: Tubos Branco Teste Padro Amostra 10 L Padro (1) 10 L Reagente de Cor (2) 1000 L 1000 L 1000 L 3- Homogeneizar bem e incubar os tubos durante 10 minutos temperatura ambiente (15-30C) ou durante 5 minutos a 37C . 4- Ler a absorbncia (A) do Padro (Ap) e do Teste (At), zerando o aparelho com o Branco em 500 nm. 5- A cor estvel durante 2 horas. Procedimento em Analisadores Automticos Mencionar o manual ou POP para utilizao do equipamento analtico. Anexar o guia de aplicao dos reagentes para o sistema automtico. CLCULOS Ver linearidade Como a metodologia obedece lei de Lambert-Beer, calcular a concentrao do teste atravs do Fator de Calibrao (FC). Concentrao do Padro =Cp Concentrao do Teste = Ct Exemplo: Cp = 200 mg/dL
Fc = Cp 200 = = 576 Ap 0,347

Absorbncia do Padro = Ap Absorbncia do Teste = At Ap = 0,347 At = 0,301

Ct = FC x At = 576 x 0,301 = 173 mg/dL RESULTADOS Unidade de Medida: mg/dL Fator de Converso de Unidades (mg/dL para SI): mg/dL de colesterol x 0,026 = mmol/L de colesterol

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CONTROLE DA QUALIDADE Materiais Identificar os materiais de controle interno e externo da qualidade, citando fabricante e nmero de catlogo. Referenciar POP para limpeza e secagem dos materiais utilizados. Controle Interno Descrever a calibrao peridica de pipetas, equipamentos utilizados, controle de temperatura ambiente e geladeiras para armazenamento dos kits. Citar a utilizao de soros controles (nvel normal cdigo --------- e patolgico cdigo -------) nas anlises realizadas juntamente com a freqncia da utilizao dos mesmos. Descrever o procedimento de verificao de novos lotes de controles e reagentes. Citar POP para controle interno. Controle Externo Descrever os procedimentos utilizados nas avaliaes de qualidade feitas por programas de comparao entre laboratrios ou outros controles de qualidade : PNCQ-SBAC e/ou PELM-SBPC Gerenciamento dos dados obtidos no Controle Interno e Externo Definir como os dados de controle so arquivados e gerenciados. Fazer referncia ao manual ou POP de garantia da qualidade. VALORES DE REFERNCIA Desejvel Limtrofe Aumentado Colesterol (mg/dL) < 200 200 - 239 240

SIGNIFICADO CLNICO O colesterol o principal esterol do organismo, estando presente em todas as clulas como um componente estrutural das membranas e das lipoprotenas (HDL, VLDL e principalmente, LDL). tambm o precursor na formao dos hormnios esteroides pelas gnadas e crtex adrenal. Cerca de 70 a 75% do colesterol plasmtico encontra-se na forma de ester e 25 a 30% existe como colesterol livre. Alm do colesterol absorvido a cada dia pelo tubo gastrintestinal, que denominado colesterol exgeno, grande quantidade, designada como colesterol endgeno, formada nas clulas corporais. A aterosclerose caracteriza-se pelo acmulo de lpides dentro e ao redor das clulas na ntima das artrias e est associada com a proliferao celular e fibrosa provocando o estreitamento do lmen do vaso. O desenvolvimento da aterosclerose est ativa em todos os indivduos e permanece sem qualquer manifestao por dcadas. Subitamente pode-se manifestar por dor torcica, infarto agudo do miocrdio ou morte sbita. Estudos populacionais longitudinais como os de Tecumset, Albany, Framinghan, Evans, Chicago, Oslo entre outros, e tambm dados epidemiolgicos e estudos experimentais em animais, demonstraram uma correo positiva entre os nveis do colesterol, mais precisamente do colesterol LDL e o risco de doena arterial coronariana (DAC). Ao mesmo tempo, foi evidenciado que os nveis de colesterol HDL, so inversamente proporcionais ao risco de DAC. Valores aumentados de colesterol so encontrados na nefrose, hipotireoidismo, doenas colestticas do fgado e nas hiperlipoproteinemias dos tipos Iia, Iib e III. Nveis diminudos so encontrados no hipertireoidismo, doenas consuntivas e desnutrio crnica. O nvel de colesterol srico, juntamente com a hipertenso e o fumo, constituem fatores de risco de aterosclerose e doena arterial coronariana.

LINEARIDADE E LIMITE DE DETECO Linearidade A reao linear at 1000 mg/dL (26 mmol/L). Quando for obtido um valor igual ou maior que 1000 mg/dL, diluir a amostra com NaCl 0,9 g%, realizar nova determinao e multiplicar o valor obtido pelo fator de diluio. Limite de deteco O Limite de deteco do kit foi verificado no comprimento de onda de 500 nm, sendo que a alterao mnima detectvel foi de 0,3 mg/dL. O intervalo de medida vai de 0,3 mg/dL at 1000 mg/dL.

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LIMITAES DO MTODO Os resultados devero ser usados em conjunto com informaes disponveis da avaliao clnica e outros procedimentos diagnsticos. Interferncias No utilizar amostras fortemente hemolisadas. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1- Alain CA, Poon LS, Cahn CSG, Richmond W, Fu PC. Clin Chem 1974;20:470. 2- Burtis CA, Ashwood ER. Tietz Fundamento de Qumica Clnica, 4a Ed - Guanabara Koogan; 1998. 3- Fredriickson DS, Levy RJ, Lee RS. New Engl J Med 1967; 276:24, 94, 148, 215, 276. 4- Good NE, Winger GD, Winter W, Connoly TN, Izawa S, Singh RMM. Biochemistry 1966;5:467. 5- Inmetro - Boas Prticas de Laboratrio Clnico e Listas de Verificao para Avaliao, Qualimark Editora, Rio de Janeiro, 1997. 6- Meiattini F, et al. Clin Chem 1978; 24:2161-2165. 7- Rifai N, Warnick GR, Dominiczak MH. Handbook of lipoprotein testing. AACC Press, Washington, 1997: 75-97. 8- Svensson L, et al. Scand J Clin Lab Invest 1982; 42:99-105. 9- Westgard JO, Barry PL, Hunt MR. Clin. Chem. 1981; 27: 493-501. 10- COLESTEROL-PP, Instrues de Uso, Gold Analisa Diagnstica. Nome Elaborado por: Aprovado por: Implantado por: Substitui POP: Revisado por: Revisado por: Revisado por: Desativado por: Razo: Nmero Cpias Destino Assinatura Data ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___ ___/___/___