TITULAR Luis Cezar Rodrigues

TTULO DO PROJETO Processo oxidativo biocatalisado utilizando gua de coco de Cocos nucifera como meio reacional e fonte de peroxidase.

Joo Pessoa Maio/2012

Introduo

A regio e estereoespecifidade das reaes de acoplamento bimolecular de radicais fenoxilas, de especial importncia na biossntese de ligninas e lignanas, so claramente controlados de alguma forma in vivo; sendo que no acoplamento por oxidases in vitro, com uma peroxidase comercial, Horseradish Peroxidase (HRP) por exemplo, se produz sempre uma mistura diasteroisomrica (Fig. 1). Em outras palavras, as lacases e peroxidases so incapazes de controlar a regioestereoespecifidade das reaes por si mesmas, portanto, algum outro agente deve existir para orientar a estereoqumica in vivo.
' - -O O
'

MeO
' -

'

OH H

HO O

OMe

HO

1 6 5 4 3

HO -5'

OMe
4' 5'

' -4 -O O

H2O

OH OMe

HO

MeO

H2O2 HRP

MeO O
-O -4 '

HO HO HO

OH

OH O
4'

OMe OMe

HO

Fig. 1 Produtos do acoplamento aleatrio dos radicais fenoxilas por HRP comercial J foi demonstrado em reaes estereoseletivas in vivo, tais como na Forsythia suspensa,1 a existncia de protenas auxiliares que estariam encarregadas de direcionar os radicais fenoxilas. Propomos investigar a existncia de uma sintetase similar na gua de coco, ou seja, verificar a existncia de um cofator presente no suco de Cocos nucifera que auxilia a
1

Stereoselective Bimolecular Phenoxy Radical Coupling by an Auxiliary (Dirigent) Protein Without an Active Center. Laurence B. Davin, et al. Science 275, 362 (1997)

forma como os radicais se acoplam para formar os diversos compostos de forma estereoseletiva. Em trabalho desenvolvido anteriormente neste laboratrio, j comprovamos a estereoseletividade destas reaes, quando da preparao de alguns compostos de interesse, tal como a Licarina A e Iangambina. Pretendemos seguir com as investigaes, buscando aplicar o mtodo a vrios outros fenilpropenides. Com as condies de acoplamento j controladas, temos agora especial interesse na produo de heterodmeros, ou seja, o acoplamento oxidativo entre diferentes lcoois fenilpropenicos, como entre o lcool sinptico e o conifrico. Seu mecanismo de ao presumivelmente envolve a captura dos radicais livres do lcool conifrico gerados pela ao da peroxidase, promovendo o subsequente acoplamento estereosseletivo para dar (+)-Pinoresinol (Fig. 2).
OH HO

1 6 5 4 3

OMe

H2O

H OH
(S)

O MeO

H HO

H H

MeO

H2O2 HRP

OMe O

-'

(R)

'

(R)

OH E-coniferol

( S) '

Orientao promovida pela protena auxiliar

(+)-Pinoresinol MeO OH

Fig. 2 (+)-Pinoresinol formado por acoplamento in vivo dos radicais fenilpropenides

Metodologia

A gua de coco recm-extrada usada como solvente e fonte de peroxidase, filtramos a gua atravs de funil com algodo para um erlenmeyer, acrescentamos o substrato fenilpropenide (1 equivalente), gua oxigenada (1 equivalente) e mantemos em agitao magntica, a formao dos produtos ser monitorada por cromatografia em camada delgada analtica (CCDA). Para a preparao da Iangambina, utilizaremos o lcool sinptico, gua oxigenada e gua de coco (Fig. 3).

OH MeO

HO

OMe

MeO OH

OMe

agua de cco (peroxidase) H2O 2

H O H OMe MeO OH O

lcool sinptico

MeO MeO MeI K2CO3 Me2CO

(+)-Siringaresinol OMe

H O H OMe MeO OMe O

Iangambina

Fig. 3 Preparao da Iangambina Aps metilao do siringaresinol com iodeto de metila, tendo carbonato de potssio como base e acetona como solvente, obtm-se a Iangambina. A preparao da Licarina A ser atravs do acomplamento oxidativo biocatalisado, utilizando o isoeugenol como substrato (Fig. 4). OMe O agua de cco (peroxidase)
(E) ( R)

OMe OH

OMe OH Isoeugenol

(R)

H2O2 Licarina A Fig. 4 Preparao da Licarina A

Atravs de procedimento similar podemos preparar o (+)-Pinoresinol (Fig. 5),

OH

HO

OMe

OMe OH E-Coniferol

agua de cco (peroxidase) H2O2

H O H O

MeO (+)-Pinoresinol

OH

Fig. 5 Preparao do (+)-Pinoresinol Para a preparao do lcool sinptico, partimos do cido 3,4,5-trimetoxicinmico, esterificamos com metanol e aps desproteo regioseletiva da metoxila em para, reduzimos com H-DIBAL para dar o lcool desejado (Fig. 6).
HO O MeO O MeO O

SOCl 2 MeOH MeO OMe OMe MeO OMe OMe

AlCl 3 CH2Cl2, rt MeO OH OH OMe

H-DIBAL cyclohexano MeO OH OMe

Fig. 6 Preparao do lcool sinptico Para a preparao do lcool conifrico podemos provar atravs de reao de Wittig entre a vanilina e o e o sal de fosfina correspondente (Fig. 7).

O O OH O Ph3P MeO OH OMe MeO

OMe

HO

H-DIBAL MeO OH OH

Fig. 7 Preparao do lcool conifrico

Caracterizao do problema

Nos acoplamentos radicalares de fenilpropenides, com o uso de peroxidase comercial, cloreto frrico ou de outros reativos promotores da formao de radicais, se observa a formao de uma mistura no estereoseletiva de subprodutos. Sabendo que na planta estas reaes so estritamente controladas, com formao de apenas um estereoismero, propomos tirar proveito desta eficcia e baixo custo, utilizando esta emulso aquosa como meio reacional e fonte econmica de peroxidase, promovendo assim o uso de uma qumica verde, com perspectivas futuras de aplicao no aproveitamento do casco da fruta, outro problema ambiental que poderia ser revertido em fonte de insumo de alto valor agregado.
Justificativa

Vrias ligninas e lignanas j foram extradas, purificadas e identificadas nos laboratrios do Programa de Ps-graduao em Produtos Naturais e Sintticos Bioativos, muitos apresentaram interessante bioatividade, desta forma, uma metodologia para a preparao estereoseletiva destes compostos servir para fornecer material adicional aos promissores ensaios biolgico em curso. A investigao da presena de protenas auxiliares na sntese de compostos lignides representa uma importante contribuio para a compreenso da biosntese desta formidvel classe de compostos.

Objetivos

Temos como objetivo principal a preparao de compostos lignides, utilizando para isso processo biocatalisado, tendo como fonte enzimtica e meio reacional a gua de

coco. Entre os compostos que temos interesse em sintetizar, temos o siringaresinol, iangambina e licarina A (Fig. 8) que possuem interessante atividade biolgica. Esta metodologia nos abre a porta para a sntese de lignides naturais nunca antes sintetizadas, o que representa uma excelente oportunidade para analisar pela primeira vez estas molculas, inclusive em busca de possveis bioatividade de interesse. Como objetivo secundrio, vamos observar os fatores que podem interferir na estereoseletividade das reaes, entre elas a presena de uma protena auxiliar, que seria um possvel agente orientador dos radicais quando dos acoplamentos radicalares. MeO MeO H O H OMe MeO OMe MeO OH O O H H O OMe HO OMe

Iangambina OMe O
(R)

(+)-Pinoresinol OMe OH

(R) (E)

Licarina A Fig. 8 Iangambina, (+)-Pinoresinol e (-)-Licarina A

Fundamentao Terica

Nosso trabalho parte do conhecimento prvio do possvel mecanismo de ao da enzima HRP. A figura 9 ilustra a gerao de uma serie de radicais a partir dos quais seria possvel propor a formao dos compostos desejados.

Trabalho anteriormente publicado na revista Science de janeiro de 1997 demonstrou a presena de uma protena auxiliar no extrato bruto de Forsythia suspensa que seria responsvel pela estereoespecificidade no acoplamento do lcool conifrico; desde ento outros pesquisadores tem constatado a presena de protenas similares em outros extratos vegetais.
R42 N R38 NH H NH2 N NH2

H2O2 Estado Nativo

X

H O O H

H2O
O H

Composto I
X

Y O

Fe3+ Intermediario de transicao

R38 NH2 N R42 N R38 NH2 N H O O Y O H H O H H NH O H Y NH2

H2O

R42 N H

H NH

NH2

e
O N

Fe4+ Composto I

P139

e
O N

X O

Fe4+ Composto II

P139
O H

Y X X

Composto II

X CH3 CH2OH CH2OH CO2H CO2Me CO2H CO2Me CO2Me CO2Et CO2Ar

Y OMe H OMe H H OH OH OMe OMe OMe

X Y O O Y O Y O Y

D
Y O X

B
X

A
X

Y O

tauromerisa

Y HO

Y O

Fig. 9 Formao dos radicais

OH

Mtodos para a sntese de licarina A empregando peroxidase (HRP) comercial j foi descrito na literatura.2 Sendo a primeira vez que se emprega gua de coco para esta reao. Outra vantagem adicional, que entre as poucas formas descritas na literatura, no existe nenhum mtodo simples para obter estereoseletividade nesta classe de reaes.

Referncias adicionais

Tetrahedron (2000), 56, 9181-9193 J. Biol. Chem. (1980), 255, 8199-8205 J. Biol. Chem. (1999), 274, 35005-35011 Synthesis (2003), 17, 25952625

PROJETO:

Processo oxidativo biocatalisado utilizando gua de coco de Cocos nucifera como meio reacional e fonte de peroxidase.
MS Acoplame nto c/ coniferol Acoplame nto c/ isoeugenol Acoplame nto c/ sinaptol Acoplame nto mistos Ensaios Biolgicos

1 x

2 x

3 x

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11

12

x x x x x x x x x

Regio- and Diastereo-selective Synthesis of Dimeric Lignans Using Oxidative Coupling. Francesco Chioccara, et al. Acta Chemica Scandinavica 47, 610-616 (1993).