LABORATRIO DE BIOQUMICA CLNICA

Profa Rosilene Linhares Dutra

Ramo do laboratrio clnico no qual os mtodos

qumicos e bioqumicos so aplicados para pesquisa de uma doena.

Compreendem mais de 1/3 de todas as investigaes laboratoriais de um hospital;

Analitos testados: - sangue; - urina; - aspirado do suco gstrico;

- Lquor;

USO TESTES BIOQUMICOS

DIAGNSTICO EXCLUSO DE DIAGNSTICO MONITORAMENTO DE TRATAMENTO MONITORAMENTO CURSO DA DOENA ESTABELECER PROGNSTICO TRIAGEM

PROCEDIMENTOS
PR-ANALTICOS: - POP da coleta; - Orientaes ao paciente; - Obteno da amostra; - Tipos de amostra; - Processamento da amostra; - Armazenamento da amostra; - Transporte da amostra;

ANALTICOS: - Equipamentos; - Metodologia: . reaes segundo o produto formado; . reaes segundo o procedimento tcnico;
PS-ANALTICOS: - Clculos corretos; - Linearidade do mtodo; - Valores dos controles; - Resultados x quadro clnico paciente; - Liberao do resultado;

PROCEDIMENTOS PR-ANALTICOS
1.
2.

RECEBIMENTO E LEITURA DA SOLICITAO MDICA;

ORIENTAES AO PACIENTE: - Necessidade de jejum? Por quanto tempo?

- Restrio alimentar?
- Tipo de amostra - Fornecimento de frasco, orientaes de coleta; - Quantidade de amostra que deve ser coletada; - Horrio da coleta x horrio entrega ao laboratrio;

- Cuidados com a manipulao da amostra,

armazenamento, tempo.

3.

COLETA DA AMOSTRA:

- Quantidade adequada;
- Identificao do paciente e da amostra; - Informaes sobre o caso clnico; - Registro do paciente e da amostra; - Tipo de tubo para coleta; - Viabilidade da amostra;

3.1) TIPOS DE AMOSTRAS PUNO VENOSA SORO: - Parte lquida do sangue; - Coletar sem anticoagulante; - Centrifugar aps a coagulao PLASMA: - uria, glicose, creatinina - coletar com anticoagulante inibidor de gliclise - Obtido aps centrifugao SANGUE TOTAL - Hemoglobina glicada

Sistema de Coleta com Vcuo

PUNO ARTERIAL SANGUE ARTERIAL: Sangue oxigenado pelos pulmes e bombeado do corao para todos os tecidos; essencialmente uniforme em composio em todo corpo; Nvel hospitalar; UTI Gasometria: . ngulo de 30 a 45 (artria radial); . ngulo de 45 60 (artria braquial); . ngulo de 45-90 (artria femoral)

LOCAIS DE PUNO ARTERIAL

PUNO CAPILAR

- Controle da glicemia - Coagulao

LQUIDOS CORPREOS LCR; Sinovial; Asctico; Pleural; Pericrdico URINA

- Provas bioqumicas; - TTGO

3.2) SELEO DA VEIA

Facilmente palpvel; Brao sem realizao de mastectomia;, Brao sem infuso IV; Local sem hematoma, edema, contuso; Local sem mltiplas punes; Uso de bolsa de gua quente; NO APLICAR TAPINHAS NO LOCAL A SER PUNCIONADO; No dobrar o brao aps a coleta....aplicar presso no local suficiente; Retirar objetos do brao do paciente a ser puncionado;

3.3) MICROCOLETA DE SANGUE CAPILAR E VENOSO PARA NEONATOS E BEBS:

Puno digital; Puno do calcanhar; Profundidade da lanceta: 2,4 mm Coletar em macas com auxlio de outro profissional.

- Coagulao Puno lbulo da orelha

3.4) ERROS NA COLETA:

- Tcnica aplicada na coleta: hemlise, liberao de K+

das HM; - Estase prolongada (garrote > 2 minutos) durante a puno venosa; - Amostra insuficiente; - Erros na cronometragem: ex: Urina de 24hs - Recipiente incorretos; - Local de coleta inadequado; - Tubos de soro coletados antes dos tubos contendo anticoagulante; - Armazenamento incorreto: K+, PO42-, enzimas das HM

Hemlise

4.

ARMAZENAMENTO, CONSERVAO E TRANSPORTE

- Possibilitar a manuteno da integridade dos

elementos;

-Contribuir para estabilidade das substncias qumicas;

- Orientaes ao paciente; - Tempo mximo 1hora at o laboratrio; - Refrigerao 2-10C; - Atividade enzimtica estvel por 4 dias entre 1525C; - Turbulncia excessiva leva a hemlise; - Evaporao de amostras;

PROCEDIMENTOS ANALTICOS
1. EQUIPAMENTOS: - Centrfuga; - Espectrofotmetro; - Densitmetro para eletroforese; - Fotmetro de chama; - Deionizador; - Banho-maria; - Estufa para secagem

CENTRIFUGAO: - Aps repouso de 20-30 minutos para coagulao; - Suave; - Tempo determinado para o analito (3500rpm/10min); - Retirar o cogulo rapidamente.

ESPECTROFOTMETRO
A espectrofotometria baseia-se na absoro da radiao

nos comprimentos de onda entre o ultravioleta e o infravermelho; Quando luz passa atravs de uma amostra ou quando ela refletida de uma amostra, a quantidade de luz absorvida a diferena entre a radiao incidente (I0) e a radiao transmitida (I). A quantidade de luz absorvida expressa

tanto como transmitncia ou absorbncia.

COMPONENTES BSICOS DA FOTOMETRIA Fonte de energia eltrica Fonte de energia radiante

Lmpada de Tunstnio UV prximo e visvel Lmpada de Hidrognio regio do UV

Monocromador Porta Cubetas

Quadradas Redondas

Detectores: E radiante transmitida em E eltrica Circuito medidor: E eltrica emitida e medido em A e/ou T

Io
feixe de luz de intensidade Io
soluo 10 g/l

IT1

Io
soluo 20 g/l

IT2

A absoro da luz tanto maior quanto mais concentrada for a soluo por ela atravessada

Io
feixe de luz de intensidade Io
1 cm

IT1

Io
3 cm

A absoro da luz tanto maior quanto maior for a distncia percorrida pelo feixe luminoso atravs das IT3 amostras

 Logo: Quando a Eradiante atravessa uma soluo, a

quantidade de E transmitida com: - espessura atravessada (LEI DE LAMBERT); - da concentrao ou intensidade da cor da soluo (LEI DE BEER); LEI DE LAMBERT-BEER
A relao entre E emergente / E incidente indica a transmitncia da soluo

Se a luz passa em uma soluo onde no h absoro nenhuma, a absorvncia ser zero e a transmitncia ser 100.

ESPECTRO UV / VISVEL

Na faixa de leitura entre 400 700 nm

ESPECTRO UV

O espectro UV est dividido em 3 partes: UVC (< 280nm), UVB (280320nm), UVA (320400nm).

UVA Luz Negra 320:400 nm

Bronzeado; Formao da catarata;

UVB Regio do eritema 280:320nm

Regio potencialmente carcinognica; Protetores solares;

UVC Bactericida e Germicida - < 280 nm

Protegidos pela camada de oznio; Lmpadas de vidro bloqueiam completamente esses raios;

PRINCPIO DA COR COMPLEMENTAR

OU SEJA:

Uma soluo AZUL absorve o VERMELHO com maior

intensidade e portanto deve-se escolher a poro vermelha para medida da soluo azul

OBJETIVO: Utilizar uma faixa no espectro na qual a E radiante seja absorvida ao mximo ou aproximadamente

ESPECTRO IV
til na determinao de grupos funcionais em compostos orgnicos; Quando a ligao covalente entre os tomos sofre ao de E elas vibram e deformam; O retorno ao estado

original, libera E que

medida;

DENSITMETRO
-Instrumento de controle utilizado para medir a densidade ptica em amostras opacas;

- Uso em eletroforese de protenas, lipdios e Hb;

FOTMETRO DE CHAMA
Medida de concentrao de um determinado produto qumico, alcalino ou alcalino terroso, quando introduzido em uma chama na forma de aerossol.
Chama excita os tomos com produo de espectros caractersticos. Converte amostras lquidas em estados gasosos, decompondo em tomos.

Para dosagem de:

- Na
-K - Li

- Ca

DEIONIZADOR
So teis para obter gua desmineralizada com alto grau de pureza aninica e catinica;

Utiliza mtodo de Resina de troca inica: - Remoo dos ctions presentes na gua bruta

RESINA H+;
- Remoo dos nions presentes na gua bruta RESINA HO-;

Elementos retirados: - Clcio; - magnsio; - Sdio; - Potssio; - Nitrato; - Slica; - Hidrognio; - Ferro; - Mangans; - CO2;

- Bicarbonato; - Cloretos - Carbonatos; - Sais;

BANHO MARIA
Aquecimento lento e uniforme sem exceder 100C; Acima de 100C, o calor transferido gua transformado em energia cintica, formando vapor;

ESTUFA PARA SECAGEM No inserir vidraria volumtrica

Vidraria volumtrica: Vidraria No-volumtrica:

- Bales volumtricos; Pipetas volumtricas.

- Tubos de ensaio; - Frascos para reagentes; - Funil; - Bquer **; - Proveta **;

Problemas analtico: Calibrao equipamento; Limpeza do instrumento; Qualidade dos reagentes; Controle de qualidade do equipamento; Manuteno de peas do equipamento;

2.

METODOLOGIA:

SEGUNDO PRODUTO FORMADO

AGLUTINAO

COLORIMTRICA

PRECIPITAO

SEGUNDO PROCEDIMENTO TCNICO

REAO DE PONTO FINAL: Aquelas reaes que formam produtos cuja concentrao chega a um ponto mximo permanecendo estvel por um certo tempo;

REAO DE CINTICA CONTNUA: Reaes que utilizam medidas contnuas da formao de produtos;

REAES CINTICAS DE TEMPO FIXO: Reaes que utilizam um tempo fixo de incubao sendo a formao de produtos interrompida por qualquer processo. REAO DE CINTICA DE 2 PONTOS: til para diminuir tempo de reao, eliminar interferentes.

3. LIMPEZA MATERIAL LABORATRIO VIDRARIA Deve ser imersa, logo aps o uso, em uma soluo de detergente neutro (Extran) a 2,0%, por mnimo 1hora (over night); Secar a temperatura ambiente. PIPETAS E TUBOS: Colocadas aps uso, submersas em frasco contendo soluo de detergente a 2,0% Enxaguados exaustivamente com gua de torneira e lavados no mnimo 2 x com gua destilada ou deionizada; Secar em estufa a 80C;

PONTEIRAS: - Colocadas aps uso, submersas em frasco de boca larga contendo soluo de detergente a 2,0% ou de NaOH a 1%; - Agitar vigorosamente por cerca de 30 minutos e enxaguar exaustivamente com gua de torneira e com gua destilada; - Secar em estufa a 37C; CUBETAS: - Lavadas aps o uso com gua deionizada;

PROCEDIMENTOS PS - ANALTICOS
1. 2. 3. 4. 5. Clculos corretos? H linearidade do mtodo? Valores dos controles esto dentro do limite estabelecido? H valores de referncia? Resultados e quadro clnico so compatveis?

FATORES BIOLGICOS QUE AFETAM A INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Sexo; Idade; Dieta; Horrio da coleta; Estresse e ansiedade; Postura do paciente; Exerccios; Histrico mdico do paciente; Gravidez; Ciclo menstrual; Medicamentos;

Classificao das
CAUSAS DE ERROS nas dosagens bioqumicas

ERROS INADMISSVEIS
ENGANOS: - Troca de rtulo;

- Troca de amostras durante o processamento; - Troca de amostras ou reagentes durante a pipetagem; - Leitura incorreta de instrumentos;

- Clculos errados;
- Erro na transcrio de resultados;

ERROS OCASIONAIS

ACIDENTAIS:

- Presena de substncias interferentes na amostra;

- Tubos ou pipetas contaminadas; - Diferentes tcnicos;

ERROS SISTEMTICOS REPETITIVOS:

- Tcnicas de baixa preciso e exatido;

- Reagentes deteriorados ou de m qualidade;

- Perda de preciso da vidraria e equipamentos;

- Curva ou fator de calibrao errados;

Exerccio em Dupla
1 - Cite e comente os cuidados que devem ser tomados nos procedimentos que antecedem a anlise do sangue? 2 Cite e comente dois problemas que podem ocorrer durante a anlise do sangue no setor de bioqumica? 3 Por que as vidrarias devem ser lavadas com sabo neutro e gua deionizada? Que problemas teremos se no forem lavadas corretamente? 4 Quando uma coleta de urina de 24 horas foi orientada incorretamente o que acontecer com o resultado liberado no laboratrio de bioqumica? 5 Voc centrifugou um sangue e observou que o soro est hemolisado. Qual etapa do procedimento poder ter ocasionado o rompimento dos glbulos vermelhos? Explique?