HPLC ; MALDI

teoria a aplicao.
Introduo HPLC

Separao de misturas por interao diferencial dos seus

componentes entre uma FASE ESTACIONRIA (C-18; C-2;
Excluso de tamanho) e uma FASE MVEL(H2O 0,1%TFA;
ACN 0,1%TFA).

A deteco dos compostos analisados pode ser feita

atravs de vrias tcnicas, o que temos a disposio hoje
a deteco por ultravioleta.
Introduo HPLC
O CROMATOGRAMA um grfico que mostra a resposta do
detector em funo do tempo de corrida.
t r: Tempo de retenopara cada componente o
tempo necessrio aps a injeo da mistura na
coluna at aquele componente alcanar o
detector.

tm: Mnimo tempo possvel para a FM no retida

percorrer a coluna. Solutos que no interagem com
a FE so eludos neste tempo

tr: Tempo de reteno ajustado o tempo

adicional necessrio para o soluto percorrer o
comprimento da coluna, alm do tempo utilizado
pelo solvente no-retido
Introduo HPLC
Fator de separao, :
O fator de separao de uma coluna definido como:
Ambos os

fatores esto
relacionados

=


com a
Fator de reteno ou capacidade, Ka: RESOLUO
O fator de reteno de uma coluna definido como: dos picos no
cromatograma

=

Introduo HPLC
Como mudar o fator de separao, , e seu influncia no cromatograma.
 Introduo HPLC

Como mudar o fator de reteno, , e sua influncia no cromatograma.

Equipamento e coluna disponveis

Colunas disponveis atualmente:

C-18 3um tamanho de partcula.
C-18 5um tamanho de partcula.
C-2 5um tamanho de partcula.
Introduo ao MALDI
A sigla MALDI refere-se a : Ionizao e Dessoro a Laser Assistida por Matriz.

uma tcnica de
ionizao branda onde
uma quantidade mnima
de energia transferida
ao analito durante o
processo de ionizao.
Introduo ao MALDI
Preparo da amostra:
Um passo crucial no resultado da anlise, o mtodo de
melhor desempenho escolhido pelo grupo o sanduche.

Pipetar Pipetar Pipetar

0,5uL de 0,5uL de 0,5uL de
matriz amostra amostra

Deixar o
spot
secar
 Introduo ao MALDI
A detector de massas ToF Tempo de Voo separa os ons gerados com base na sua
velocidade.

ons com uma menor relao

carga massa, m/z, alcanam
uma maior velocidade
comparada aos ons de
maior m/z.
Introduo ao MALDI
Fatores que podem melhorar a relao sinal/rudo do seu espectro:
Introduo ao MALDI

Espectros de massas bom e ruim.

 Introduo ao MALDI
A tcnica MS/MS:

A tcnica MS/MS envolve dois

estgios de MS. No primeiro os
ons de massa desejada so
selecionados e isolados. Este
ons denominados ONS
PRECURSOS sofre ento uma
segunda ionizao gerando
assim os ONS PRODUTOS.
Equipamento e matrizes disponveis

Alpha - cyano DHB Sinapnico

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