BIOTECNOLOGIA

E
MANIPULAÇÃO GENÉTICA

Lilian Rosalina
O QUE É BIOTECNOLOGIA?
DEFINIÇÃO

 "Biotecnologia define-se pelo uso de conhecimentos sobre

os processos biológicos e sobre as propriedades dos seres
vivos, com o fim de resolver problemas e criar produtos
de utilidade.“
DEFINIÇÃO AMPLA

 É o uso de organismos vivos ou parte deles, para

a produção de bens e serviços.

 Nesta definição se enquadram um conjunto de

atividades que o homem vem desenvolvendo há
milhares de anos, como a produção de alimentos
fermentados (pão, vinho, iogurte, cerveja, e
outros).
DEFINIÇÃO AMPLA

 Por outro lado a biotecnologia moderna se

considera aquela que faz uso da informação
genética, incorporando técnicas de DNA
recombinante.
TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE
 Ideia: isolamento de moléculas de DNA e inserir
em outros organismos. Esta técnica é utilizada
para fazer organismos transgênicos, clonagem de
DNA, eletroforese e outros.

 Para esta técnica necessita-se de:

-Enzimas de restrição: enzimas que cortam
trechos do DNA exatamente onde se quer.
TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE
 Ex.:
-Uma bactéria possui uma
enzima de restrição chamada
Eco R1, que corta o DNA toda
vez que encontra a seguinte
sequência de bases
nitrogenadas:
TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE
TÉCNICA DO DNA RECOMBINANTE
CLONAGEM DE DNA (GÊNICA)
 Ideia: produzir inúmeras cópias idênticas de um
mesmo fragmento da molécula de DNA.
-Utiliza-se esta técnica também para fazer
organismos transgênicos e biblioteca de DNA.

 Para esta técnica necessita-se de:

-Enzima de restrição: com a técnica do DNA
recombinante.
-Vetores: bactérias e vírus que são facilmente
manipulados.
CLONAGEM DE DNA (GÊNICA): BACTÉRIA
 Técnica em bactérias:
 Bactérias possuem um DNA circular, além do
DNA normal, chamado de Plasmídeo.
CLONAGEM DE DNA (GÊNICA): BACTÉRIA
CLONAGEM DE DNA (GÊNICA): VÍRUS
 ORGANISMOS TRANSGÊNICOS
 Ideia:
- Organismos transgênicos ou organismos geneticamente
modificados são aqueles organismos que possuem pelo
menos um gene externo, ou seja, um gene que não é da
sua espécie (e sim de outra espécie) a fim de torná-lo
com características vantajosas e que produza
substâncias de interesse.

o Para esta técnica necessita-se de: - técnica do DNA

recombinante e clonagem de DNA (gênica).
- Ex.: A mais conhecida é para a produção de insulina
humana para diabéticos.
 ORGANISMOS TRANSGÊNICOS

 Produção de insulina:
ORGANISMOS TRANSGÊNICOS
 TERAPIA GÊNICA
 Ideia:
- Consiste em substituir o gene anormal que causa
doença pelo alelo normal a fim de curar uma doença
genética.

- Ex.: síndrome da deficiência imunológica combinada

severa (SCID) -“menino da bolha”.

- Para esta técnica necessita-se de: - técnica do DNA

recombinante e clonagem de DNA (gênica) com vetores
(vírus). A ideia é que o vírus introduza na célula
humana o gene normal.
TERAPIA GÊNICA

 David Vetter Phillip nasceu

em 21 de setembro de 1971 e
faleceu em 22 de fevereiro de
1984, aos 13 anos.

 Ele era americano do estado do Texas e sofria de

uma doença genética rara conhecida agora como
síndrome da deficiência imunológica combinada
severa (SCID).
TERAPIA GÊNICA

 Forçado a viver em um ambiente

esterilizado, ele tornou-se popular
com a mídia como o menino da bolha de plástico.

 Ele passou a maior parte de sua vida no Texas

Children's Hospital.

 Ele morreu de câncer em 1984, depois de um

transplante de medula óssea inigualável de sua
irmã.
TERAPIA GÊNICA
 Uma cama casulo especial esterilizada foi
preparado para David no seu nascimento.

 Menos de 10 segundos depois de ser removido do

útero de sua mãe, David entrou na bolha de
plástico, ambiente livre de germes que seria a
sua casa durante a maior parte de sua vida.

 Os médicos decidiram que um transplante de

medula óssea poderia melhorar o sistema
imunológico de David. Infelizmente não
aconteceu.
TERAPIA GÊNICA
 A operação a que ele se submeteu atualmente, é mais
avançada, e impede a existência de outros garotos
dentro de uma bolha.
 Entretanto, continua sendo difícil diagnosticar a
doença, que atinge em média uma em cada 100 mil
pessoas.
 Por isso, vários portadores da síndrome morrem antes

dos 2 anos.
 VACINAS GÊNICAS
 Ideia:
-Consiste em utilizar o trecho do DNA, que codificam
proteínas causadores da doença, do organismo
patogênico.
-Esses trechos são inseridos em bactérias e o produto da
atividade destes genes são utilizados na vacina.

 Para esta técnica necessita-se de:

- Técnica do DNA recombinante e clonagem de DNA.
VACINAS GÊNICAS
 No Brasil, a vacina da tuberculose é feita assim. Isso
evita,que na produção comum de vacinas, alguns
organismos patogênicos estejam ativos causando
doença.
VACINAS GÊNICAS
TÉCNICA DE REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE
(PCR)
 Ideia:
- Aumentar a quantidade de DNA pelo processo de
duplicação do DNA.
- Utiliza-se essa técnica para se fazer a
eletroforese, como no teste de paternidade.

o Para esta técnica utiliza-se: - Amostras de DNA

que se quer aumentar em quantidade.
TERMOCICLADOR
COMPONENTES DA PCR
 ELETROFORESE

 A eletroforese isola fragmentos de

DNA de diferentes tamanhos através
de um gel (poliacrilamida e gel de
agarose) submetido a um campo
elétrico.

 As moléculas são separadas de acordo com o seu tamanho, pois as

de menor massa irão migrar mais rapidamente que as de maior
massa.

 Os fragmentos de DNA formam faixas/bandas que podem ser

visualizados por corantes ou luz ultravioleta.

 Em alguns casos, o formato da moléculas também influi, pois

algumas terão maior facilidade para migrar pelo gel.
 APLICAÇÕES DA ELETROFORESE

 Ciência forense– para comparar

o DNA encontrado no local do crime
com o de possíveis suspeitos.

 Genética– teste de paternidade, diferenciação de

espécies ou linhagens e engenharia genética.

 Microbiologia– detecção de diferentes patógenos

como vírus, bactérias e fungos.

 Bioquímica– detecção da expressão de proteínas.

ELETROFORESE E A IDENTIFICAÇÃO DE PESSOAS
 Eletroforese é uma técnica utilizada para identificar a
“impressão digital” do DNA também conhecida como
DNA fingerprint.

 O DNA humano contém 40 mil genes diferentes, mas

isso é apenas 3% do conteúdo do genoma humano. O
restante é DNA não-codificante, ou seja, DNA que não
codifica proteína.

 Uma parte desta sequência de DNA não-codificante é

chamada de VNTR (número variável de repetições em
sequência). Cada indivíduo tem um padrão específico
desses VNTRs e são herdados dos pais.
ELETROFORESE E A IDENTIFICAÇÃO DE PESSOAS
 Com a técnica do DNA recombinante, corta-se esses
trechos de VNTR com enzimas de restrição e obtém-se
então o trechos de DNA fingerprint para as amostras.
ELETROFORESE E A IDENTIFICAÇÃO DE PESSOAS
 Quais os filhos biológicos do casal?
 PCR E ELETROFORESE NA PRÁTICA
 Teste de DNA confirma paternidade de bebê perdido
no tsunami

 Um casal do Sri Lanka que alegava ser os pais de um bebê

encontrado após o tsunami que atingiu a Ásia, em dezem-
bro, obteve a confirmação do fato através de um exame de
DNA. O menino, que ficou conhecido como “Bebê 81” por ser
o 81 ó sobrevivente a dar entrada no hospital de Kalmunai,
era reivindica-do por nove casais diferentes.

Folha online, 14/02/2005. Adaptado.

 PCR E ELETROFORESE NA PRÁTICA
 Algumas regiões do DNA são sequências curtas
de bases nitrogenadas que se repetem no genoma;

 o número de repetições dessas regiões varia entre as pessoas.

 Existem procedimentos que permitem visualizar essa

variabilidade, revelando padrões de fragmentos de DNA que são
“uma impressão digital molecular”.

 Não existem duas pessoas com o mesmo padrão de fragmentos

com exceção dos gêmeos monozigóticos. Metade dos fragmentos
de DNA de uma pessoa é herdada de sua mãe e metade, de seu
pai.
PCR E ELETROFORESE NA PRÁTICA
Com base nos padrões de fragmentos de DNA
representados abaixo, qual dos casais pode ser
considerado como pais biológicos do bebê 81?
PCR E ELETROFORESE NA PRÁTICA
SEQUENCIAMENTO
 PCR E ELETROFORESE NA PRÁTICA
 Link PCR e eletroforese:
https://www.youtube.com/watch?v=q1QFpB33Bwg

 Link para sequenciamento:

 https://www.youtube.com/watch?v=MvuYATh7Y74

 https://www.youtube.com/watch?v=FU8r_9jPJgM

 https://www.youtube.com/watch?v=c2sWCvo6OI8
CLONAGEM
CLONAGEM
 Ideia: Produzir indivíduos geneticamente idênticos
(clones).

 Isso pode ser reprodução assexuada ou por

manipulação do genoma* da espécie.

 *genoma de um organismo é uma sequência de DNA

completa de um conjunto de cromossomos; por
exemplo, um dos dois conjuntos que um indivíduo
diploide contém em cada uma das suas células
somáticas.
CLONAGEM

 O Projeto Genoma Humano consiste em codificar a

sequência de bases nitrogenadas de todo o DNA
humano e a sequência dos genes.

 Há projetos genomas de vários seres vivos. Há

também o Projeto Proteoma que tenta decifrar os
genes e a sequência de bases desses genes pela
sequência de aminoácidos de uma proteína.
CLONAGEM

 O primeiro mamífero clonado ocorreu em 1997,

conhecida como Ovelha Dolly.

 A técnica consiste em escolher o animal a ser

clonado (utilizando o núcleo de uma célula
somática), uma fêmea doadora de óvulos (da
mesma espécie) e uma fêmea “barriga de aluguel”
(também da mesma espécie).

 No Brasil, o primeiro mamífero clonado foi uma

vaca, chamada Vitória, em 2001.
CLONAGEM: OVELHA DOLLY
CLONAGEM: OVELHA DOLLY
 A ovelha Dolly (5 de julho de 1996 — 14 de fevereiro de 2003) foi
o primeiro mamífero a ser clonado com sucesso a partir de
uma célula adulta.

 Os cientistas tornaram pública a experiência somente em 22 de

fevereiro de 1997, quando Dolly já estava com sete meses de vida.

 Dolly foi criada por investigadores do Instituto Roslin, na Escócia,

onde viveu toda a sua vida. Os créditos pela clonagem foram
dados a Ian Wilmut, mas este admitiu, em 2006, que Keith
Campbell seria na verdade o maior responsável pela clonagem.

 O nome Dolly é uma referência ao nome da atriz e cantora Dolly

Parton. Dolly foi clonada a partir das células da glândula
mamária de uma ovelha adulta com cerca de seis anos, através de
uma técnica conhecida como transferência somática de núcleo.
CLONAGEM: OVELHA DOLLY
 Apesar das suas origens, Dolly teve uma vida comum de ovelha
e deu à luz a seis filhotes, sendo cuidadosamente observada em
todas as fases.
 Em 1999 foi divulgado na revista Nature que Dolly poderia
tender a desenvolver formas de envelhecimento precoce, uma
vez que os seus telómeros eram mais curtos que os das ovelhas
normais.
CLONAGEM: OVELHA DOLLY

 Esta questão iniciou uma acesa disputa na comunidade

científica sobre a influência da clonagem nos processos
de envelhecimento, que está ainda hoje por resolver.

 Em 2002 foi anunciado que Dolly sofria de um tipo de

doença pulmonar progressiva, o que foi interpretado por
alguns setores como sinal de envelhecimento.

 Dolly foi abatida em fevereiro de 2003, aos 7 anos, para

evitar uma morte dolorosa por infecção pulmonar
incurável. O seu corpo empalhado está exposto no Museu
Real da Escócia, em Edimburgo, Escócia.
CLONAGEM: OVELHA DOLLY
COMO ACONTECE A CLONAGEM ?
COMO ACONTECE A CLONAGEM ?

Link para reportagem sobre a ovelha Dolly:

https://www.youtube.com/watch?v=n132tVEaMIM
ATIVIDADE PARA CASA

Exercício pag 95 a 96 .
Questões de 1 a 10 .