INSTITUTO SUPERIOR DE CIÊNCIAS DE

SAÚDE (ISCISA)
Curso de Anatomia patológica - III Ano

Coloração de Grocott

Discentes: Docente:
Hélio Venâncio Mário Monjane
Hélder Agostinho
João Fernando
Zedequias Ferrão
Maputo, Julho 2021
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 Intodução

Este trabalho é referente à cadeira de Histocitoctenologia aplicada,

que irá abordar o tema refente a técnica Grocoot.

A técnica de Grocoot, que é basicamente uma das técnicas especiais

usadas na coloração e visualização dos fungos nos tecidos.

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 Objectivos

Objectivo geral.

Conhecer a tecnica de Grocott e sua aplicacao na detencao de fungos.

Objectivos específicos.

Explicar o princípio do uso da tecnica de grocotte e sua finalidade;

Descrever as condições de armazenamento dos reagentes usados na

tecnica de grocott;

Descrever os procedimentos tecnicos do seu uso;

Caracterizar o controlo de qualidade.

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 Fungos
São organismos eucariontes, maioritariamente multicelulares,
emboora alguns possam ser unicelulraes (leveduras) que geramente
possuem paredes constituidas por quitina e outros materiais.

• Alguns são essenciais para a vida do homem, outros são

extremamente prejudiciais, podendo causar graves doenças

• Fungos são relativamente grandes com membrana celular rica em

polissacáridos

• As infeções que originam são denominadas de micoses

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 Técnica de Grocoot
A técnica de grocoot é a impregnação por metais pesados maìs
utilizados para a marcação de diversos fungos, tais como:
Aspergillus fumigatus,
Actymices israeeli,
Blastomyces dermatiids,
 Candida albicans,
Coccidioides immitis,
 Cryptococcus neoformans,
 Histoplasma capsulatum,
 Nocardia asteróides,
 Pneumocystis jiroveci,
Sporothrix schenckii.
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 Reagentes
Solução de ácido crômico (trióxido de cromo) a 4%;

Solução de nitrato de prata a 5%;

Solução de metenamina (hexametilenotetramina) a 3%;

Solução de bórax a 5%;

Solução estoque de nitrato de prata-metenamina;

Solução de cloreto de ouro a 0,1%;

Solução de bissulfito de sódio ou metabissulfito de sódio a

1%: Preparar no momento de usar;

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 Equipamento e materiais.

Recipientes com reagentes;

Lâmina e lamela;

Pinça plástica;

Estufa;

Cronómetro.

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 Tipo de amostra ou material

Fragmentos de pulmão;

Fragmentos de pele;

Fragmentos da mucosa respiratória;

Fragmentos da mucosa oral;

Fragmentos da mucosa vaginal;

Fragmentos hepáticos.

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 Protocolo – Grocott

• Desparafinar e hidratar;
• Oxidar os cortes em ácido crómico;
• Lavar em água corrente, depois passar por água destilada;
• Lavar o corte com bissulfito de sódio;
• Lavar em água corrente, depois lavagens em água destilada;
• Submergir as lâminas numa solução de prata e incubar a 60º;
• Várias lavagens em água destilada;
• Tratar com cloreto de ouro;
• Várias lavagens em água destilada;
• Fixar em tiossulfato de sódio;
• Lavar em água corrente;
• Contrastar com verde luz;
• Desidratar, diafanizar e montar;
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 Princípio da técnica de Grocoot
Baseia se na oxidação dos polissacarídeos existentes na parede dos
fungos, promovida pelo ácido crómico. Esta oxidação é prolongada de
modo a permitir a falência de determinados grupos aldeídos formados,
impossibilitando os de se ligarem à prata.

O ácido crómico actua sobre os grupos glicólicos e glicoamínicos

presentes na cadeia polissacarídea oxidando-os em grupos aldeídicos com
a consequente ruptura da cadeia. . O cloreto de prata, que faz parte do
complexo prata-metenamina, é reduzido a prata metálica pelos novos
grupos aldeídicos tornando-se, desta forma, visível.

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 Resultados

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 Inconvenientes da técnica

• O agente oxidante utilizado –ácido crómico- apresenta uma elevada

toxicidade, que incide sobretudo a nível renal, é corrosivo para a
pele e mucosas, cancerígeno, pelo que a sua utilização deveria ser
idealmente eliminada:

• É uma técnica morosa, nomeadamente na atuacção do agente

oxidante (1H);
• é morosa a impregnação com solução de prata metenamina na
estufa a 60 C (1H)

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Condições de armazenamento e transporte
dos reagentes.
Armazenamento:

• Conservar o preparado a 2 – 8 °C;

• Manter as embalagens devidamente fechadas;

• Deve se armazenar no laboratório as quantidades necessárias

para uso diário;

• Os reagentes não devem ser armazenados em ordem

alfabética, mas devem ser armazenados de acordo com o grau
de risco dos reagentes.

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 Condições de armazenamento e transporte
dos reagentes.
Transporte

• A retirada dos frascos do armário deve ser feita com muita

cautela;

• Os frascos devem ser transportados individualmente;

• Não devem ser encostados ao peito;

• Quando necessário transportar vários frascos, utiliza- se

carrinhos próprios para tal.

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 Cuidados necessários/ Biossegurança

Usar correctamente os EPI’s;

Utilizar sempre água destilada recente;

 Usar apenas material de vidro rigorosamente limpo;

Evitar a acumulação de pó nas secções;

Nunca colocar objectos metálicos (pinças, etc.) em contacto

com as soluções.

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 Controlo de qualidade

Resultados:

Fungos: nitidamente delineados em preto;

Mucina: cinza-escuro;

Parte interna de micélios e hifas: rosa-acinzentado;

Fundo: verde.

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Obrigado pela atenção dispensada...

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Bilbiografia

Caputo, L.F.G. ; Gitirana .L.B. ; Manso,P.P.A. (Tecnicas

histologicas).

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