SINALIZAO CELULAR

PRINCPIOS GERAIS DA
COMUNICAO CELULAR
MOLCULAS
SINALIZADORAS
EXTRACELULARES
RECEPTORES
MOLCULAS
SINALIZADORAS
INTRACELULARES:
- Ex: 2 mensageiros (Ca
2+
,
AMPc)
- Cinases/quinases
PROTENAS ALVO:
- Ptn reguladoras gnicas
- Canais Inicos
- Protenas do citoesqueleto
- Etc...
Molcula sinal extracelular
Protena Receptora
Protenas de Sinalizao
intracelular
Protenas Alvo
- Aminocidos, peptdeos, protenas, nucleotdeos, esterides, lipdeos, aminas
biognicas (catecolaminas, 5-HT etc..), gases etc...
MOLCULAS SINALIZADORAS EXTRACELULARES
Clula
sinalizadora
Clula
Alvo
Clula
Alvo
Clula
sinalizadora
Sinalizao por molculas secretadas
Sinalizao por molculas ligadas a membrana
Ligao de uma molcula
sinalizadora extracelular a um
receptor especfico
Ligantes: aminocidos, peptdeos,
protenas, nucleotdeos, esterides,
lipdeos, aminas biognicas, gases.
Receptores:
- Superfcie: localizados na
membrana ligantes hidroflicos.
- Intracelulares: localizados no
citoplasma ou ncleo ligantes
pequenos e hidrofbicos.
Receptor de superfcie celular
Receptor Intracelular
FORMAS DE SINALIZAO INTERCELULAR
FORMAS DE SINALIZAO INTERCELULAR
Desenvolvimento
e resposta imune
Difuso restrita:
- Recaptao
-Degradao
enzimtica
- Reteno na
matriz
- Um mesmo tipo de molcula pode atuar na sinalizao parcrina, sinptica e endcrina.
- Principais diferenas: rapidez e seletividade da comunicao
-Especificidade
- Rapidez
Comunicao
- Mais lenta
- Duradoura
- Menos
precisa
Dependente de contato Parcrina
Sinptica
Endcrina
Sinalizao Autcrina
- Quando a clula secreta
molculas sinalizadoras que se
ligam aos seus prprios
receptores
Exemplos:
-Efeito comunidade durante
desenvolvimento
- Clulas cancerosas
Junes do tipo GAP/Junes Comunicantes
- Junes especializadas clula-clula
- Conectam o citoplasma atravs de canais aquosos
- Permite a troca de pequenas molculas sinalizadoras intracelulares (ons,
nucleotdeos cclicos etc...)
- Permite a coordenao de respostas entre clulas vizinhas. Ex: presente
nos discos intercalares no msculo cardaco.
-Cada clula responde a um
conjunto de molculas
sinalizadoras
- Diferentes combinaes de
molculas podem induzir
diferentes respostas celulares
- Clulas dependem de um
conjunto de sinais para sua
sobrevivncia
Resposta a uma molcula sinalizadora extracelular depende:
- Receptores: determinam o subgrupo de sinais ao qual uma clula pode responder.
Clulas diferentes podem responder de forma
diferente mesma molcula sinalizadora
-Mecanismo de transduo intracelular: determina qual ser a resposta celular.
Acetilcolina M2
Nicotnico
M3
Uma nica molcula sinalizadora pode
induzir diferentes respostas de acordo
com a clula alvo
RECEPTORES DE SUPERFCIE CELULAR
Ativados por molculas hidrossolveis
Atuam como transdutores de sinal.
Podem ser de trs classes:
- Receptores ionotrpicos
- Receptores associados a protena G
- Receptores associados a enzima
RECEPTORES DE SUPERFCIE CELULAR
RECEPTORES IONOTRPICOS
Receptores ionotrpicos/receptores associados a canais
inicos/canais inicos controlados por ligante
- Canal inico a prpria protena receptora.
- Efeitos: alteraes de permeabilidade da membrana plasmtica
altera potencial de membrana altera excitabilidade
- Ex: Receptores GABA
A
, Nicotnico da Ach, 5-HT
3
(Serotonina)
- Em geral: respostas rpidas e pouco duradouras;
Receptor GABA
A
Receptor Nicotnico de Acetilcolina
RECEPTORES ASSOCIADOS A PROTENA G
- Superfamlia de receptores proticos transmembrnicos de sete passos
- Regulam indiretamente atividade de uma protena-alvo ligada membrana
plasmtica
- A interao do receptor-protena efetora mediada pela protena trimrica
ligadora de GTP Protena G
Receptor-protena G
enzima
Canais inicos
RECEPTORES ENZIMTICOS
- Funcionam como enzimas ou esto associados diretamente a enzimas;
- Protenas transmembrnicas unipasso;
- Ex: receptores cinases (tirosina ou serino/treonino cinases) ou associados);
Receptores associados a enzima
MOLCULAS DE SINALIZAO INTRACELULAR
MOLCULAS DE SINALIZAO INTRACELULAR
Tranferem os sinais recebidos por receptores associados a
protena G ou receptores associados a enzimas para o interior da clula
O destino final da cadeia de eventos de sinalizao celular a
alterao de protenas-alvo
Mensageiros Intracelulares Pequenos ou
Segundos Mensageiros
- Gerados em grandes concentraes
- Transmitem o sinal ligando-se a protenas de sinalizao especficas
Podem ser:
- Hidrossolveis:
Ex: AMP cclico
GMP cclico
Ca
2+
- Lipossolveis:
Ex: Diacilglicerol (DAG)
COMUTADORES MOLECULARES
So protenas de sinalizao intracelular que ao receber
um sinal passam do estado inativo para o estado ativo, at que
algumoutro processo as inative.
interruptores
Protenas de Ligao a GTP
Estado inativo: GDP ligado
Estado ativo: GTP ligado
Apresentam atividade GTPsica
intrinseca
Ex: Protena G trimrica
(subunidade alfa)
- Protenas monomricas de
ligao a GTP (ex: Ras)
Protenas ativadas ou
inativadas por fosforilao
Fosforiladas por uma cinase
Desfosforiladas por uma
fosfatase
Cascatas de fosforilao
Ex: serinotreonino cinases
tirosinocinases
SINALIZAO POR MEIO DE
RECEPTORES DE SUPERFCIE
ASSOCIADOS A PROTENA G
Receptores Associados a Protena G
- Ligantes variados: protenas, peptdeos, derivados de aminocidos,
ftons etc..
- Um mesmo ligante pode ativar diferentes membros desta famlia de
receptores
- Estrutura semelhante
- Associam-se a uma protena G para modular atividade de
Canais inicos
Enzimas
ESTRUTURA DE UMA PROTENA G INATIVA
- Localizada na face citoplasmtica da membrana
- Composta de trs subunidades:
- Estado inativo: GDP ligado a subunidade
Ativao de uma protena G por
um receptor ativado
- Receptor ativado interage
com protena G e altera sua
conformao.
-Subunidade perde afinidade
por GDP e liga a GTP
- Protena G se dissocia (ou
no) em dois componentes
ativos:
subunidade
complexo
- Protena G atua como um comutador molecular
- Inativao da protena G se d pela atividade GTPsica da
subunidade
Atividade GTPsica da subunidade
da protena G
- Subunidade ativada ativa sua
protena-alvo
- Subunidade se auto-inativa pela
hidrlise de GTP a GDP
- Subunidade se dissocia da
protena-alvo e reassocia ao complexo
, formando novamente uma protena
G inativa
- Subunidade uma GTPase ineficiente
- Atividade GTPsica da subunidade aumentada pela ligao de
uma protena auxiliar (GAPs: protenas de ativao de GTPase)
- Protena auxiliar: protena-alvo ou um modulador especfico
- Ex: Regulador de protena G sinalizadora (RGS)
- Protenas RGS atuam como protenas ativadoras de GTPase
(GAPs) especficas para a subunidade
Receptor
Ativado
Protena
G
Enzimas
Canais Inicos
Produo de
segundos
mensageiros
Alterao do
potencial de
membrana
Adenilil ciclase (AC)
Regulao da Produo de AMPc por protena G
1) Adenilil ciclase (AC)
- Grande protena de membrana, vrias isoformas
- Catalisa produo de AMP cclico a partir do ATP
- 1950: descoberta do segundo mensageiro AMPc
- Concentrao intracelular normal: 10
-7
M
Receptor
ativado
Ativao de
protena G
estimulatria
(Gs)
Ativao
da adenilil
ciclase
Aumento
da [AMPc]
- cAMP sintetizado, a partir do ATP,
por uma reao de ciclizao, catalizada
pela adenililciclase.
- o cAMP uma molcula instvel na
clula, rapidamente hidrolisada por ao
de fosfodiesterases de AMPc formando
adenosina 5- monofosfato (5-AMP).
Sntese e degradao do AMP
cclico
Protena G inibitria (Gi):
- Inibe adeniliciclase
- Regula diretamente canais inicos
- Complexo tambm pode aumentar ou reduzir atividade da AC,
dependendo da complexo e da isoforma de adenilil ciclase, bem como
pode ter outras protenas alvo.
Efeitos do AMP Cclico
- Pode modular diretamente canais inicos em clulas
especializadas.
- Ativa protena cinase dependente de AMP cclico
(PKA).
- PKA fosforila resduos especficos de serina ou treonina
em protenas-alvo (ex: protenas citoesqueleto, canais
inicos, enzimas etc)
- Substratos de PKA variveis = diferentes respostas
celulares ao aumento na concentrao de cAMP.
Ativao da PKA
PKA
2 subunidades
reguladoras
2 subunidades catalticas
Respostas rpidas (segundos) mediadas por
cAMP
Ex: Efeito cronotrpico e inotrpico positivo
mediado por receptores adrenrgicos no
corao.
Resposta lentas (horas) mediadas por
cAMP:
- Envolvem alterao na transcrio gnica.
- Elemento de resposta ao AMPc (CRE) em
regies reguladoras de genes.
- Protena de ligao ao CRE (CREB).
- Protena de ligao ao CREB (CBP).
CRE
Fosfatases tornam transitrios os efeitos
de PKA e outras cinases
Fosfoprotenofosfatases de serina/treonina
I desfosforila muitas proteinas-alvo da PKA
IIA ampla especificidade
IIB calcineurina, ativada por Ca
2+
IIC
- Atividade de protenas reguladas por fosforilao
depende do equilbrio entre a atividade de cinases e
fosfatases.
- Clulas devem ser capazes de desfosforilar as
protenas que foram fosforiladas por cinases, para que
os efeitos sejamtransitrios.
ALGUMAS RESPOSTAS
CELULARES
MEDIADAS POR AMPc
Tecido Alvo Hormnio Resposta Principal
Tireide TSH Sntese e Secreo de
hormnios da Tireide
Crtex Adrenal ACTH Secreo Cortisol
Ovrio LH Secreo progesterona
Msculo Adrenalina Degradao glicognio
Ossos Paratormnio Reabsoro ssea
Corao Adrenalina Aumento FC e fora de
contrao
Fgado Glucagon Degradao Glicognio
Rim Vasopressina Reabsoro de gua
Tecido Adiposo Adrenalina, ACTH,
Glucagon e TSH
Degradao de
Triglicerdeos
Receptor
Adrenrgico
1 cardaco
Subunidade
de Gs
Gs
Estmulo AC
1
[AMPc] e
ativao PKA e
fosforilao
protenas alvo
Abertura de
canais e
condutncia
ao Ca
2+
Inotropismo e
cronotropismo
(+)
Receptores B1 ativados
Canais de
Clcio
[AMPc] + PKA
Tempo de
Abertura
Aumenta
Aumenta
Influxo de
Clcio
Extracelular
Aumenta
armazenamento
de Ca
2+
no RS
Aumenta Ca
2+
liberado
Fosfolambam
Aumenta Atividade da
Ca
2+
ATPase no RS
Inotropismo (+)
Encurta tempo de ligao Ca
2+
-
Troponina
Menor durao da contrao
Remoo mais rpida de Ca
2+
do citosol
Receptor 2 em
vasos sanguneos
msculo
esqueltico
Subunidade
de Gs
Gs
Estmulo AC
2
[AMPc] e ativao
PKA e fosforilao
de protenas alvo
Relaxamento
musculatura
lisa/Vasodilatao
-Cinase da cadeia leve da miosina,
menor afinidade por
clcio/calmodulina;
- Canais inicos/Reduo influxo de
Ca
+2
.
- Ativao canais de K
+
,
hiperpolarizao de membrana e
reduo do influxo de Ca
+2
via canais
dependentes de voltagem
Receptor
muscarnico
de Ach (M2)
no corao
Subunidade
de Gi
Gi
Complexo

Inibe AC
Abre canais de
K
+
- Abertura de canais de K
+
, hiperpolarizao, efeitos inibitrios da
acetilcolina no corao.
M2
- M2 e M4 via PTN Gi
Receptor 2 em
terminaes
nervosas pr-
sinpticas e
vasculatura
2
Subunidade
de Gi
Gi
Complexo

Inibe AC e reduz
AMPc
Abre canais de
K
+
-Efetores: Reduo AMPc, Reduo Abertura de Canais de Clcio e
Aumento da abertura de Canais de Potssio.
- Efeitos relatados: inibio da liberao de neurotransmissores, agregao
plaquetria, contrao msculo liso vascular em alguns leitos (os principais
envolvidos na contrao de msculo liso so l'').
Fosfolipase C- (PLC-)
Ativao da rota de Sinalizao do
Fosfolpideo de inositol
(fosfoinositdeo) por protena G
2) Fosfolipase C- (PLC-)
- Enzima de membrana que atua sobre o fosfolipdeo de inositol:
fosfatidilinositol 4,5-bifosfato [PI(4,5)P
2
]
-Receptores que atuam por meio da rota de sinalizao do fosfolpideo de
inositol ativam Proteina Gq
- Proteina Gq ativa PLC- que age sobre [PI(4,5)P
2
]
Inositol 1,4,5- trifosfato (IP
3
)
[PI(4,5)P
2
]
Diacilglicerol (DAG)
Ativa protena
cinase C (PKC)
Libera Ca
2+
do
retculo
endoplasmtico
Sinalizao por Inositol 1,4,5 trifosfato (IP
3
)
- Canais de Ca
2+
dependentes de IP
3
no retculo endoplasmtico (RE)
Trmino da sinalizao por IP
3
a) IP3 desfosforilado formando IP
2
b) IP
3
fosforilado formando IP
4
( que tambm age como um
sinalizador)
c) Ca
2+
liberado bombeado para fora do citosol.
Sinalizao por Diacilglicerol (DAG)
Clivagem
cido
araquidnico
- Permanece na membrana plasmtica,
mensageiro
Sntese de Eicosanides
(Protaglandinas e Leucotrienos)
Ativao da Protena cinase dependente de Ca
2+
(PKC)
(+importante):
- [Ca
2+
] altera PKC e esta se desloca para a membrana
- Na membrana PKC ativada por Ca
2+
, DAG e fosfatidilserina
(fosfolipdeos de membrana carregado - )
1)
2)
Obs: Enzima Fosfolipase A2 (PLA2) tambm pode clivar fosfolipdeos e gerar cido araquidnico
Ativao de PKC mediada por DAG
Mimetizao dos ramos da rota de sinalizao do fosfolipdeo
de inositol por agentes farmacolgicos
IP
3
DAG
Molcula
mimetizada
Ionforos de Ca
2+
(A23187,
ionomicina)
steres de
forbol
(Forbol ster)
Ativao
direta de PKC
Entrada de
Ca
2+
pra o
citosol
Agente
farmacolgico
Efeito
Tecido Alvo Molcula Sinal Resposta Principal
Fgado Vasopressina Degradao do
Glicognio
Pncreas Acetilcolina Secreo Amilase
Msculo Liso Acetilcolina Contrao muscular
Plaquetas Trombina Agregao plaquetria
ALGUMAS RESPOSTAS CELULARES
NAS QUAIS GPCRS ATIVAM PLC-B
Ca
2+
como mensageiro intracelular
-Gradiente de Ca
2+:
[Ca
2+
] no citosol : ~10
-7
M (0,0000001)
[Ca
2+
] no meio extracelular e RE : ~10
-3
M (0,001)
-Diversos sinais extracelulares podem induzir elevaes na [Ca
2+
]
Onda de clcio citoslico durante fertilizao de vulo por espermatozide
Canais de Ca
2+
a) Canais de Ca
2+
dependentes de voltagem
-Na membrana plasmtica, respondem a despolarizao.
a) Canais de liberao de Ca
2+
com portes IP
3
/ Canais de Ca
2+
dependentes de IP
3
:
- Respondem a IP
3
e liberam Ca
2+
do RE, inativados por elevadas
[Ca
2+
]
a) Receptores de Diidropiridina e de Rianodina
- Liberao de Ca
2+
do retculo sarcoplasmtico estimulados por
voltagem e por Ca
2+
.
-Ex: clulas musculares
Manuteno de Baixas Concentraes de Ca
2+
no Citosol
Bomba de
Ca
2+
Canal de troca
Na
+
- Ca
2+
Bomba de
Ca
2+
no RE
Molculas
ligadoras de
Ca
2+
no
citoplasma
Importao
de Ca
2+
para a
mitocndria
A freqncia das oscilaes da [Ca
2+
] influencia a resposta celular
- Sinal extracelular forte e persistente induz ondas de Ca
2+
- Pico inicial de Ca
2+
, seguido por sries de picos adicionais, durando
segundos.
- Freqncia reflete fora do estmulo extracelular.
- Resposta Celular dependente da freqncia de oscilaes Ca
2+
Protenas de Ligao ao Ca
2+
Troponina
-Msculo esqueltico
-Contrao muscular
Calmodulina:
- Cerca de 1% total de protenas
- Receptor intracelular polivalente de Ca
2+
- Cadeia polipeptdica nica
- 4 stios de ligao para o Ca
2+
-
Quando ativada sofre mudana conformacional
Calmodulina responde de forma cooperativa ao aumento na
concentrao de Ca
2+
- Calmodulina ativada por dois ou mais ons de Ca
2+
- Ativao anloga a da PKA por AMPc
- Complexo Ca
2+
/calmodulina no tem atividade enzimtica
- Atua ligando a protenas-alvo
Alterao de conformao do complexo
Ca
2+
/ calmodulina ao ligar protena-alvo
Complexo Ca
2+
/ calmodulina atua mediante ligao a protenas-
alvo:
Ex: -Protenas transportadoras de membrana (bomba de Ca
2+
na
membrana plasmtica)
- Cinases (principais alvos)
Protenas Cinase dependentes de Ca
2+
e Calmodulina
(CaM-cinases)
- Fosforilam resduos de serina ou treonina em protenas-alvo
- Exemplos de CaM-cinases:
-Cinase de cadeia leve de miosina ativa contrao
msculo liso
-Fosforilase cinase ativa degradao do
glicognio
-CaM-cinase II
Receptor
adrenrgico l
em clulas
musculares
lisas
1
PLC
Gq
IP
3
aumento
[Ca
2+
]i
DAG e
ativao
PKC
PIP2
IP
3
aumento
[Ca
2+
]i
DAG e
ativao
PKC
Ca
2+
/calmodulina
Ativao da Cinase da
Cadeia Leve de Miosina e
Contrao Msculo Liso
Contrao arterolas da pele,
membranas mucosas, vsceras;
aumento resistncia vascular perifrica
Vrias respostas
mediadas por Ca
2+
Receptor
Muscarnico
M3 em clulas
endoteliais
PLC
Gq
M3
IP
3
aumento
[Ca
2+
]i
DAG e
ativao
PKC
PIP2
Ca
2+
/calmodulina
Ativao NO Sintase e
produo xido ntrico
Difuso para clulas
musculares lisas e
efeito vasodilatador
Obs:
- Msculo liso dos vasos sem inervao parassimptica
- M3 no msculo liso brnquios e trato gastrointestinal =
contrao e aumento da motilidade.
- M1, M3 e M5 via PTN Gq.
- Mais bem estudada CaM-cinase multifuncional
- Presente em todas as clulas animais
- Abundante no sistema nervoso, 2% da massa proteca em
algumas regies
- Protena grande, 12 subunidades
CaM-cinase II
Propriedades importante:
1) Capacidade de autofosforilao
- mecanismo de memria: permanece ativa mesmo na
ausncia de Ca
2+
/calmodulina.
Ativao da CaM-cinase II
2) Atua como decodificador de freqncia
-Altera sua atividade de acordo com a freqncia de oscilaes na
concentrao de Ca
2+
- Atividade aumenta proporcionalmente freqncia.
Atividade da CaM-cinase II aumenta
proporcionalmente freqncia de oscilaes na
[Ca2+]
Protenas G regulam canais inicos
- Ativao ou inativao direta de canais inicos
Ex: acetilcolina liberada pelo nervo vago no msculo
cardaco
Receptor do
tipo
muscarnico
de acetilcolina
(M2)
Subunidade
de Gi
Gi
Complexo

Inibe adenilil
ciclase
Abre canais de
K
+
Abertura de canais de K
+
dificulta a despolarizao,
contribuindo para os efeitos inibitrios da acetilcolina no corao.
Protenas G podem regular de forma indireta a atividade de
canais inicos:
a) Fosforilao (PKA, PKC, CaM-cinases)
b) Induzindo produo ou degradao de nucleotdeos
cclicos que ativam ou inativam diretamente canais
inicos.
Canais inicos controlados por
nucleotdeos cclicos
Olfato
(AMPc)
Viso
(GMPc)
Mecanismos de Adaptao/
Dessensibilizao/Taquifilaxia
- Endocitose ou sequestro do receptor
- Down-regulation do receptor
- Inativao do receptor
- Inativao de protenas de sinalizao intracelular
- Produo de protena inibidora
Dessensibilizao de Receptores Associados
Protena G
Dessensibilizao de Receptores Associados Protena G:
1) Inativao
2) Sequestro
3) Degradao (Down-regulation)
Fosforilao do Receptor por enzimas PKA, PKC ou
cinase da famlia de cinases de receptores associados
protena G (GRKs)
- Fosforilam serinas e treoninas nos receptores aps sua ativao
- Receptor fosforilado se liga a uma protena da famlia das arrestinas
Cinases de Receptores Associados Protena G (GRKs)
Arrestina
Inativa receptor impedindo interao com protena G
Atua como protena adaptadora que direciona
endocitose por vesculas revestidas por clatrina
SINALIZAO POR MEIO DE
RECEPTORES DE SUPERFCIE
CELULAR ASSOCIADOS A ENZIMAS
- Funcionam como enzimas ou esto associados diretamente a enzimas;
- Protenas transmembrnicas unipasso;
- Ex: receptores cinases (tirosina ou serino/treonino cinases) ou associados);
Receptores associados a enzima
RECEPTORES ASSOCIADOS A ENZIMAS
- Segundo tipo mais importante de receptores de superfcie celular.
- Respondem a sinais que promovem crescimento, proliferao,
diferenciao e sobrevivncia.
- Ligantes: hormnios e fatores de crescimento; mediadores locais, 10
-9
a
10
-11
M
- Respostas lentas, regulao de transcrio.
- Muitas etapas de sinalizao
- Papel importante destes receptores em distrbios de sinalizao
envolvidos no cncer
Consideraes Gerais:
Caractersticas dos Receptores Associados a Enzimas :
- Protenas transmembrana
- Duas ou mais cadeias proticas formando dmeros ou oligmeros
- Cada subunidade protica com apenas um domnio
transmembrnico
- Domnio citoslico diretamente associado com uma enzima ou com
atividade enzimtica intrnseca
CLASSES DE RECEPTORES ASSOCIADOS A ENZIMAS
1) Receptores tirosino-cinases
2) Receptores associados a tirosino-cinase
3) Receptores tipo tirosino-fosfatases
4) Receptores serinotreonino-cinases
5) Receptores guanililciclase
6) Receptores associados a histidino-cinase
Receptores Tirosino-cinases
Receptores Tirosino-cinases
Ligantes:
- Fatores de crescimento e hormnios:
EGF PDGF FGF
HGF insulina IGF-I
EVGF M-CSF neurotrofinas (ex: NGF)
- Protenas sinalizadoras ligadas a superfcie celular: efrinas
Ex: Efrinas e seus receptores eph
Regulam adeso celular e respostas de repulso migratrias
durante o desenvolvimento
Receptores eph atuam como receptor e como ligante, promovendo
sinalizao bidirecional
7 subfamlias de receptores tirosino-cinases
+ de 16 subfamlias estruturais
Receptores Tirosino-cinases
SIGNALING
LIGAND
RECEPTORS SOME RESPONSES
EGF EGF receptor stimulates proliferation of various cell types
Insulin insulin receptor stimulates carbohydrate utilization and protein
synthesis
IGF- and IGF-2 IGF receptor-1 stimulate cell growth and survival
Nerve growth factor
(NGF)
Trk A stimulates survival and growth of some neurons
PDGF AA, BB, AB PDGF receptors
(a and b)
stimulate survival, growth, and proliferation of
various cell types
M-CSF M-CSF receptor factor stimulates monocyte/macrophage proliferation and
differentiation
FGF-1 to FGF-24 FGF receptors (FGF-
R1-FGF-R4, plus
multiple isoforms of
each)
stimulate proliferation of various cell types; inhibit
differentiation of some precursor cells; inductive
signals in development
VEGF VEGF receptor stimulates angiogenesis
Ephrins (A and B
types)
Eph receptors (A and B
types)
stimulate angiogenesis; guide cell and axon migration
INTERAO DO LIGANTE COM UM RECEPTOR TIROSINO-CINASE
1) Ativao do domnio tirosino-cinase intracelular pela chegada do ligante.
2) Autofosforilao cruzada de mltiplas tirosinas nos domnios citoplasmticos
do receptor.
3) Criao de stios de ancoramento para protenas sinalizadoras intracelulares.
- Ligante deve interagir simultaneamente com duas cadeias adjacentes
do receptor
- Ligantes podem ser monmeros (EGF), dmeros (ex: PDGF),
multmeros (FGF)
Inibio, pelo excesso de proteinas mutantes, da sinalizao via
receptores tirosino-cinases normais
- Transfeco de clulas com DNA codificando uma forma mutante de receptor
- Forma mutante oligomeriza normalmente mas possui domnio cinase inativo
- Receptores inativos induzem inibio negativo-dominante
- Objetivos da manipulao:
- Demonstrar a importncia da oligomerizao e fosforilao cruzada
- Permite investigar a importncia de um receptor tirosino-cinase especfico
para uma determinada resposta
- Autofosforilao de tirosinas no domnio cinase aumenta atividade cinsica do receptor
- Fosforilao das tirosinas fora do domnio cinase cria stios de ancoramento de alta
afinidade para a ligao de protenas sinalizadoras intracelulares
- Alm da fosfotirosina, os
domnios de ligao especficos
reconhecem caractersticas da
cadeia polipeptdica.
- Protenas de sinalizao
intracelular apresentam domnios
de ligao especficos para
diferentes stios de fosfositirosina
no receptor ativado.
Autofosforilao da cauda citoslica do receptor
Receptores de insulina e IGF-I
- Receptores tetrmeros
- Maioria dos stios de ancoramento so gerados em outra
protena e no no prprio receptor.
-Receptor ativado fosforila:
- Domnio cinase
- Mltiplas tirosinas em IRS-1(substrato-1 do receptor de
insulina)
- IRS-1: protena de ancoramento especial
Tirosinas fosforiladas servem de stios de ancoramento
para protenas sinalizadoras intracelulares
- Protenas sinalizadoras intracelulares podem se ligar s fosfotirosinas dos
receptores ativados ou ligar a protenas de ancoramento especiais (ex: IRS-1):
Ex: Fosfolipase (PLC-): semelhante PLC-
Protena cinase Src
Fosfatidilinositol 3-cinase (PI 3-cinase): gera molculas lipdicas
especficas na membrana plasmtica, as quais atraem molculas sinalizadoras.
Protenas sinalizadoras intracelulares se ligam s fosfotirosinas
de receptores ativados atravs de domnios de ligao
Domnios de ligao fosfotirosinas altamente conservados:
- Domnios SH2 (Src homology region/regio de homologia com Src)
- Domnios PTB (phosphotyrosine-bindind / ligao fosfotirosina)
Domnios de ligao permitem interao especfica de protenas sinalizadoras
intracelulares comoutras protenas:
- Domnios SH3: liga a motivos ricos em prolina nas protenas
intracelulares
Protenas que se ligam a receptores tirosino-cinase ativados via domnios SH2
podemagir inibindo a sinalizao
Ex: c-Cbl que cataliza a ubiquitinao de receptores, internalizao, e
degradao (down-regulation)
Protenas Adaptadoras
Formadas, quase exclusivamente, por domnios SH2 e SH3.
Auxiliam no acoplamento de protenas sinalizadoras, como a Ras.
Protenas Ras
- Superfamlia de GTPases monomricas
- Ancorada face citoplasmtica da membrana
- Existem mltiplas protenas Ras
- Ras: protena transmissora
- Transmitem sinais provenientes de receptores de superfcie pra o ncleo
- Atuao: estmulo na proliferao, diferenciao, alterao de expresso gnica
- Protenas ligadoras de
GTP
Inativas: ligadas GDP
Ativas: ligadas a GTP
Mutaes da Ras
Ras mutantes negativo-dominantes
- Bloqueio de proliferao e diferenciao celular
Ras mutantes hiperativos
- Efeito mimetiza a estimulao por um ligante
- Ras identificada como um mutante hiperativo do gene mutante
Ras que provoca cncer
- 30%de tumores humanos apresentammutao do gene ras
Protenas Ras
Duas classes de protenas regulama atividade da Ras:
1) Fatores permutadores de nucleotdeos Guanina (GEF):
Estimulampermuta de GDP por GTP citoslico, ativando Ras
2) Protenas ativadoras de GTPase (GAPs)
Estimulamatividade GTPsica da Ras promovendo volta ao estado inativo
Mutantes de Ras hiperativos so resistentes
estimulao da funo GTPase promovida pelas GAPs
Protenas adaptadoras ligam receptores tirosino-cinase Ras
Protena Grb-2
Domnios
SH2
Reconhecem
Fosfotirosinas em
receptores ativados
Domnios
SH3
Reconhecem motivos
ricos em prolina em um
GEF denominado Sos
Receptor
tirosino-cinase
ativado
Protena
adaptadora
Shc
Grb-2
Sos
(ou outros
GEFs)
Ras propaga o sinal
cascata de fosforilao
serina/treonina
MAP-cinase
Ativao
da Ras
Receptor
tirosino-cinase
ativado
Grb-2
Sos
(ou outros
GEFs)
Ativao
da Ras
GEF de
Ras
(Ex:
Sos)
Protena adaptadora
Grb-2
Receptor
tirosino-cinase
ativado
Transmisso do
sinal por
mltiplas vias
Cascata de fosforilao serina/treonina
envolvendo MAP-cinase
- Ras inicia cascatas de fosforilao de serina/treonina que
tmmaior durao em relao s fosforilaes de tirosinas
- Vrias protenas participam, com trs cinases constituindo o
mdulo principal
- A ltima protena fosforilada nessa cascata proteno-cinase
ativada por mitgeno (MAP-cinase)
- MAP-cinase: requer fosforilao em dois resduos, serina e
treonina, separados por um nico aminocido.
MEK
(MAP-cinase-cinase)
Raf
(MAP-cinase-
cinase-cinase)
MAP-cinase
Ras
ativada
RAF
MEK
MAP
Vias de MAP-cinase envolvendo protenas de suporte em leveduras
- Os mdulos de sinalizao de trs componentes da MAP-cinase ocorrem em todas as
clulas animais e em leveduras
- Mdulos diferentes atuam em diferentes respostas numa mesma clula.
- O cruzamento de rotas evitado pela utilizao de protenas suporte
Fator de acasalamento
PI 3-Cinase produz stios de ancoramento na membrana
plasmtica, formados por fosfolipdeos de inositol
- Clulas devem crescer para proliferar
- Uma das principais vias de promoo de crescimento envolve a Cinase de
fosfatidilinositol 3 (PI 3-cinase)
- PI 3-cinase: cataliza a fosforilao na posio 3 do anel de inositol
- Gera lipdeos: PI(3)P, PI(3,4)P2 e PI(3,4,5)P3
- PI(3,4)P2 e PI(3,4,5)P3 : stios de ancoramento para protenas de sinalizao intracelular
Protena Ras
Via das MAP-
cinases
Alteraes na expresso gnica e
atividade protca, regulao de
proliferao e diferenciao
PI 3-cinase
Sobrevivncia e
crescimento
Receptores
tirosino-cinase
ativados
Protenas sinalizadoras intracelulares se ligam ao PI(3,4)P2 e ao
PI(3,4,5)P3 por meio do domnio homlogo plequistrina (PH)
- Domnios PH primeiramente identificados na protena
plaquetria plequistrina
- Domnios PH se ligam a motivos de fosfolipdeo de
inositol fosforilados.
-Protenas que possuem domnios PH e podem se ligar a
PI(3,4)P2 e PI(3,4,5)P3:
Sos (GEF ativadora de Ras)
PKC (atpica, no necessita Ca
2+
para ativao)
Tirosino-cinase BTK
PLC-
Outras
Receptores Associados a Tirosino-Cinases
Receptores Associados a Tirosino-Cinases
- Dependem de fosforilao de tirosinas para sua
atividade mas no possuemdomnio tirosino-cinase prprio
- Agem por meio de tirosino-cinases citoplasmticas
associadas
- So semelhantes aos receptores tirosino-cinases e
devemsofrer oligomerizao para sua ativao.
- Estrutura tridimensional do hormnio de crescimento humano ligado a dois
receptores idnticos
- Receptores idnticos reconhecendo partes diferentes do ligante monomrico
Famlia Src
- Src: maior famlia de tirosino-cinases citoplasmticas de mamferos
- Membros da famlia Src:
Src Yes Fgr Fyn
Lck Lyn Hck Blk
- Apresentam domnios SH2 e SH3 e esto no lado citoplasmtico da membrana
- Diferentes membros da famlia esto associados com receptores diferentes e
fosforilamdiferentes grupos de protenas-alvo.
- Estimulao mtua entre receptor ativado e a cinase
Receptores de citocinas:
- Uma das principais subfamlias de receptores associados a enzimas
- Maior e mais diversificada classe de receptores associados a tirosino-cinases
- Ligantes: citocinas (mediadores locais) e hormnios (ex: prolactina e hormnio
do crescimento)
Receptores de citocinas ativam a via de sinalizao Jak-STAT
- Uma das rotas mais diretas de sinalizao a partir da superfcie celular at o
ncleo.
- Descoberta a partir do estudo com Interferons
- Interferons: citocinas liberadas durante a resposta imune anti-viral
- Receptores de interferon ativam as cinases citoplasmticas Janus cinases
(Jaks)
- Jaks: ativam um grupo de protenas reguladoras gnicas denominadas STATs
(signal transducers and activators of transcription/ transdutores de sinal e
ativadores de transcrio)
- STATs: se deslocampara o ncleo e ativam a transcrio
Receptores de citocinas
- Formados por duas ou mais cadeias polipeptdicas
- Esto associados com uma ou vrias Jaks
- 4 Jaks conhecidas: Jak1, Jak 2, Jak 3 e Tyk2.
SIGNALING
LIGAND
RECEPTOR-
ASSOCIATED JAKS
STATS ACTIVATED SOME RESPONSES
-interferon Jak1 and Jak2 STAT1 activates
macrophages;
increases MHC
protein expression
-interferon Tyk2 and Jak2 STAT1 and STAT2 increases cell
resistance to viral
infection
Erythropoietin Jak2 STAT5 stimulates production
of erythrocytes
Prolactin Jak1 and Jak2 STAT5 stimulates milk
production
Growth
hormone
Jak2 STAT1 and STAT5 stimulates growth by
inducing IGF-1
production
GM-CSF Jak2 STAT5 stimulates production
of granulocytes and
macrophages
IL-3 Jak2 STAT5 stimulates early blood
cell production
A ligao do interferon
provoca a unio de
receptores adjacentes e
as Jaks fosforilam
reciprocamente suas
tirosinas
As Jaks ativadas
fosforilam as
tirosinas dos
receptores
STATs ancoram em
fosfotirosinas do receptor e
so fosforiladas pelas Jaks
STATs se
dissociam do
receptor
STATs migram para o ncleo,
ligam-se ao DNA e a outras
protenas reguladoras gnicas.
Receptores tipo tirosino-fosfatases
Receptores tipo tirosino-fosfatases
- Cerca de 30 tirosino-fosfatases (PTPs)
- Ocorrem em formas citoplasmticas e formas transmembrnicas
- Removem grupos fosfato de fosfotirosinas em substratos especficos
- Tirosino-fosfatases com domnios SH2
SHP1
SHP2
Participam na
extino de respostas
a citocinas
(desfosforilao de
Jaks) e mediadas por
receptores tirosino-
cinases.
- Existem muitas tirosino-fosfatases transmembrncias com funo
desconhecida
- Acredita-se que funcionemcomo receptores
- So consideradas tirosino-fosfatases similares a receptor pois ainda no foram
identificados ligantes para esses receptores
Ex: CD45
Algumas tirosino-fosfatases
Receptores serinotreonino-cinases
Receptores serinotreonino-cinases
- Seus ligantes abrangem a superfamlia dos fatores de crescimento e de
transformao (TGF-)
- Protenas dimricas secretadas e estruturalmente relacionadas
- Atuam como hormnios e como mediadores locais
- Proliferao, diferenciao, produo de matriz extracelular e morte celular
- Famlia composta de: TGFs- , ativinas e protenas morfognicas dos ossos
(BMP)
- Protenas transmembrnicas unipasso, medeiam via mais
direta de sinalizao para o ncleo.
- Possuem domnio serinotreonino-cinase na face citoslica da
membrana plasmtica
- Duas classes de receptores serinotreonino-
cinase
Tipo I
Tipo II
- Membros da superfamlia dos TGF- ligam-se a receptores
Tipo I e Tipo II, e ambos so necessrios para a sinalizao.
- Ligante interage com o receptor Tipo II, ativando-o, e este
recruta , fosforila e ativa receptor Tipo I, formando um
complexo ativo.
- O receptor Tipo I se liga a uma protena reguladora gnica da
famlia Smad e a fosforila
TGF-
Ativinas
Receptores
Smad 2 ou Smad
3
Smad fosforilada
BMP Smad 1, Smad 5 ou Smad 8
Passo
seguinte
Fosforilao
de Smad 4
Smads inibitrias: Smad 6 e Smad 7
Receptores Guanilil-ciclase
Receptores Guanilil-ciclase
- Protenas transmembrnicas unipasso
- Stio extracelular de ligao para molculas sinalizadoras e domnio intracelular
comatividade de ciclase
- Interao do receptor com seu ligante ativa stio cataltico e ocorre sntese de
GMPc
- PKG (proteno-cinase dependente de GMPc) ativada por GMPc e fosforila
serinas e/ou treoninas em protenas-alvo
- Ligantes:
Petideo Natriurtico Atrial (ANP)
Petideo Natriurtico Cerebral (CNP)
Peptdeo Natriurtico (NP)
- Regulam balano de sais e de gua e dilatam vasos sangneos
Receptores Associados a histidino-cinase
Receptores Associados a histidino-cinase
- Protenas transmembrnicas dimricas
-Abrangemos receptores de quimiotaxia bacterianos
-Receptores de quimiotaxia:
Se ligama atrativos ou a repelentes especficos
Regulamo motor flagelar:
Giro anti-horrio: flagelos organizados, deslocamento
deslizante (presena de atrativos)
Giro horrio: flagelos separados, movimentos
desordenado (presena de repelentes)
SINALIZAO POR MOLCULAS
PEQUENAS/HIDROFBICAS
- Atravessam a membrana plasmtica da clula alvo
- Regulam diretamente a atividade de uma protena intracelular especfica
-Exemplos:
xido Nitrico (NO)
Monxido de carbono (CO)
SINALIZAO POR MOLCULAS PEQUENAS/HIDROFBICAS
xido Ntrico
- Meia-vida: 5-10 segundos
- Estimula guanililciclase a produzir GMP cclico (GMPc) a partir de GTP
- GMPc degradado rapidamente a GMP por ao de fosfodiesterases de GMPc
- Sildenafil (Viagra): inibe fosfodiesterases
- Nitroglicerina
LIGAO DE MOLCULAS SINALIZADORAS
A RECEPTORES INTRACELULARES
Molculas que se Ligam a Receptores Intracelulares
- Hormnios esterides
- Hormnios tireideos
- Hormnios sexuais
- Vitamina D3
Caractersticas da sinalizao
por molculas insoluveis em gua:
- So transportadas ligadas a protenas carreadoras
- Sinalizao de longa durao :
ex: Hormnios esterides horas
Hormnios tireideos dias
- Atuaminduzindo respostas mais duradouras
- Ligama receptores proticos intracelulares e regulamtranscrio gnica
molcula
sinalizadora
Ligao ao receptor
intracelular e ativao
Ligao a stios especficos
no DNA e regulao da
transcrio
Superfamlia de receptores nucleares:
- Receptores nucleares orfos
- Receptores localizados no citosol e translocados para o ncleo. Ex: cortisol
- Receptores ligados ao DNA. Ex: hormnios tireideos
Superfamlia de Receptores Nucleares
Estrutura
tridimensional de um
domnio de ligao
Sem o ligante
Com o ligante
Respostas induzidas pela ativao de umreceptor hormonal nuclear
- Resposta Primria: ativao direta de grupos de genes
- Resposta Secundria: ativao de genes por produtos gnicos da resposta primria
- Repertrio de receptores
- Combinao de outras protenas reguladoras especficas
Conjunto caracterstico de respostas a um hormnio depende :
Bibliografia
- Alberts, B. et al. Biologia Molecular da Clula, 5 edio, 2010.
(captulo 15).
- Goodman-Gilman, A. As bases farmacolgicas da teraputica,
9ed. McGraw-Hill interamericana editores, S.A. 1996, Rio de
Janeiro.
- Rang, H.P. et al. Farmacologia, 6 edio, 2007. (captulo 3, 4,
9, 10, 11).