Disciplina: Gentica II

Profa. Dra. Ana Elizabete Silva

O que so as hemoglobinopatias ?






-Distrbios das hemoglobinas humanas.
-Doena monognica mais comum
- OMS (1982) 7% portadores de genes
350.000 homoz. ou heteroz./ano.

Estrutura e funo
FUNO: transportador de oxignio em hemcias de vertebrados.

ESTRUTURA: tetrmero 2 cadeias tipo alfa (o)
2 cadeias tipo beta (|)

Cada subunidade :
-cadeia polipeptdica globina
-grupo prosttico (cofator):
grupo Heme

-

Formao da
estrutura
quaternria da
hemoglobina.
4 cadeias so dobradas
tetrmero globular, com
peso molecular de 64.500 D
CARACTERSTICAS DA ESTRUTURA DAS GLOBINAS
- estrutura bem conservada ao longo da evoluo
Estrutura terciria: quase todas as globinas possuem as 8 regies
helicoidais A - H

2 aminocidos histidina (resduo F8)
conservados fenilalanina (resduo CD1)

stios internos: resduos apolares invlucro
hidrofbico.
superfcie da molcula: resduos polares
(hidroflicos)
Mutaes conformao/
substituio aa. conservados/alterao
do invlucro hidrofbico
Hemoglobinopatias.
CARACTERIZAO DAS CADEIAS DE GLOBINA
Cadeias o e |: tamanhos semelhantes

cadeia o 141aa | 146 aa









-genes da cadeia o: cromossomo 16 ,; o2; o1

- genes da cadeia |: cromossomo 11 c; G; A; o; |
| e diferem em 10 aa

Genes das globinas, distribudos em dois cromossomos.

Cluster Beta LCR (REGIO CONTROLADORA DO
LOCUS)
-responsvel pela expresso em alto nvel do gene da |-globina nos tecidos
apropriados e durante o desenvolvimento:
- controla expresso dos genes da famlia beta globina: atividade de estimulao,
inibio interao de fatores de transcrio com o DNA e maquinaria da RNA
polimerase Atua como um SUPERACENTUADOR de transcrio
- LCR localizado ~20 kb do gene psilon possui 5 stios hipersensveis (HS)
-delees da LCR no expressam os genes do grupo da |-globina
- alvo para terapia gnica.
http://www.med.yale.edu/obgyn/reproimmuno/courses/class3/sld007.htm
Como ocorre a ativao e silenciamento dos genes da globina
durante o desenvolvimento?
Expresso dos genes da globina durante o desenvolvimento


Mudanas temporais da sntese de globina alteraes no
local da eritropoiese.
SNTESE DE GLOBINA EMBRIONRIA:
- 3
a
8
a
semanas de gestao: eritropoiese no saco vitelnico
Hb embrionrias globinas , e c (combinao com as
demais)

3 Hb embrionrias Hb Gower 1 (,2 c2 )
Hb Gower 2 (o2 c2 )
Hb Portland (,2 2 )


SNTESE DA HEMOGLOBINA FETAL
5
a
semana gestao:
hematopoiese muda para o fgado fetal mudana na sntese de ,
para o e de c para Hb fetal o
2

2
(Hb F).

-predominante (vida fetal)
-70% da Hb total ao nascimento, mas na idade adulta 1%.
Cadeias |:
- detectveis no incio da gestao sntese significativa prximo
ao nascimento.
Cadeia o:
-sntese inicia no final da vida fetal, continuando aps nascimento,
no atinge + de 2% da Hb adulta.


















Hb F
SNTESE DA HEMOGLOBINA ADULTA

-hematopoiese: medula ssea
-Recm-nascido: HbF (o
2

2
): 70-90%
HbA (o
2
|
2
): 0-10%

-Aps 6 meses de vida: hemoglobinas do adulto
HbA (o
2
|
2
): 95%
HbA
2
(o
2
o
2
): 2-3%
HbF (o
2

2
): at 2%
















DOSAGEM GNICA, ONTOGENIA E DOENAS
CLNICAS

-globina o: 4 genes
-globina |: 2 genes

-uma nica mutao no gene o-globina 25%.
-mutaes da o-globina doena severa na vida fetal e ps-natal.

- uma nica mutao no gene |-globina afeta 50% das cadeias |.
- mutaes da |-globina no trazem consequncias pr-natais
(globina e a Hb F).


diplide
DISTRBIOS GENTICOS DA HEMOGLOBINA
A. Variantes estruturais: alteram a globina (mudanas na
sequncia de aminocidos), sem afetar a taxa de sntese
B. Talassemias: alterao na sntese desequilbrio nas
quantidades das cadeias do tipo alfa e beta

1. Variantes estruturais: maioria provm de mutaes de
ponto.
- > 900 variantes descritas
- anemia hemoltica
- transporte de O
2
alterado
- Brasil: mais comuns Hb S, Hb C e Hb D

Classificao das Hbs Variantes
Grupo 1: Hemoglobinas sem alteraes fisiolgicas:
maioria das variantes, com interesse bioqumico,
gentico, antropolgico no produzem efeitos
clnicos significativos nem alteraes hematolgicas.
Grupo 2: Hemoglobinas de agregao: as Hb S e
Hb C, formao de agregaes com repercusses
clnicas e hematolgicas variveis.
Grupo 3: Hemoglobinas instveis: graus variveis de
manifestaes clnicas e hematolgicas corpos de
incluso nos eritrcitos.
Grupo 4: Hemoglobinas com alteraes funcionais:
hemoglobinas que causa metemoglobinemias por Hb
M e alteraes na afinidade pelo oxignio.
Grupo 5: Hemoglobinas variantes com fentipo
talassmico: Hb Lepore e Hb Constant Spring
fentipo de talassemia beta e alfa, respectivamente.

HEMOGLOBINAS DE AGREGAO

ANEMIAS HEMOLTICAS


Hb S (primeira Hb anormal detectada)
alterao: 1 aa. dos 146 da |-globina
|6 Glu Val (A T)

Mutao em homozigose Anemia falciforme.





PATOLOGIA MOLECULAR DA HB S
Pauling et al. (1949): Hb A e Hb S por eletroforese
Ingram (1956): substituio de 1 dos 146 aa. na cadeia da |-
globina.


Ac. Glutmico: carga negativa
Valina: neutro mobilidade eletrofortica mais lenta da HbS
DISTRIBUIO GEOGRFICA
- frica equatorial: 1/50 nascimentos
- Regio do Mediterrneo
- ndia e pases onde essas pessoas migraram.
- incidncia: 1/400 a 1/600 afro-americanos.
- hemcias: forma afoiada ( tenso de O
2
)



http://cienciahoje.uol.com.br/114271
AFOIAMENTO E SUAS CONSEQUNCIAS

Hb com subunidades | mutantes
-condies de tenso de O
2
Hb S agregam-se em
polmeros que distorcem o eritrcito (insolubilidade)
- so menos flexveis, no se comprimem nos capilares,
obstruindo o fluxo sanguneo hipxia local.

Como explicar a l frequncia do alelo mutante
(|
2
S
) em algumas regies da frica?


Duas explicaes possveis para a seleo contra
homozigotos mutantes:
1. l taxa mutao ou
2. Heterozigotos portadores mais adaptados
http://www.assis.unesp.br/~egalhard/errmetab.htm
-certas situaes ambientais: heterozigotos portadores maior
vantagem seletiva que os homozigotos normais.

- gene falcmico : l frequncia em certas regies da frica
heterozigotos so mais resistentes ao Plasmodium vivax (parte do ciclo
evolutivo nas hemcias do hospedeiro)
Regies endmicas:
- Homozigotos Normais mais susceptveis
- Homozigotos Anemia falciforme + desvantagem
- Heterozigoto hemcias inspitas para o parasita.








MANIFESTAES CLNICAS

destruio prematura dos
eritrcitos afoiados
anemia nos dois primeiros
anos,
atraso crescimento e atraso
da puberdade,
esplenomegalia,
infeces repetidas
(hipofuno esplnica),
infartos nos tecidos
(ulcerao)
problemas osteoarticulares e
renais
http://www.ufv.br/dbg/BIO240/DG112.htm
HEMOGLOBINA C

substituio na 6
a
posio da cadeia | (GAG AAG):
|6 Glu Lys
- menos solvel que a Hb A cristaliza-se nas hemcias
distrbio hemoltico leve.
- anemia sob estresse ou durante a gravidez
-gene |
C
frequente na frica ocidental e em
descendentes dessa regio.
-Hb SC: indivduos possuem alelo
|
S
no outro locus da |-globina.
-distrbio hemoltico mais
leve que a anemia falciforme


HEMOGLOBINA INSTVEL
HB HAMMERSMITH
mutao de ponto substituio na cadeia |42 Phe Ser
fenilalanina resduo CD1 - aa conservados (alojar o
Heme)
-resduo de serina menor
Heme sai do lugar
- instabilidade ( hemoglobina
precipita formando incluses)
- afinidade por O
2
cianose.
http://www.ciencianews.com.br/hemoglobinopatias/hemoglobinopatias-index.htm
HEMOGLOBINAS COM ALTERAES FUNCIONAIS
TRANSPORTE DE O
2
ALTERADO
-mutaes que alteram a capacidade da Hb transportar O
2
Metemoglobinas Hb M
Oxihemoglobina: forma normal da Hb em que o ferro est
no estado reduzido (ferroso)
Metemoglobina: o ferro encontra-se na forma frrica
(oxidada) incapaz de transportar O
2
cianose;
assintomtica nos heterozigotos.

- Ex.: Hb Hyde Park - |92 His Tyr
- histidina: aa conservado (resduo F8)
http://www.hemoglobinopatias.com.br/hemoglobinopatias/listagem.htm

HB VARIANTES COM FENTIPOS DE
TALASSEMIA

Hb Constant Spring (gene alfa)
Substituio: cdon finalizador UAA ou UAG
CAA ou CAG
-Continuao da traduo at o prximo cdon de
finalizao : acrscimo de 31 aa na cadeia alfa da globina
(172 aa)
-Sntese prejudicada e instabilidade da cadeia alfa
alongada: hemlise e fentipo de alfa-talassemia
HB VARIANTES COM FENTIPOS DE
TALASSEMIA - Hb Lepore
- alguns pacientes com fentipo de |-talassemia:
- cadeias globnicas hbridas o|: metade N-terminal de
uma cadeia o fundida com a metade C-terminal de uma
cadeia | normal
- Fuso da poro 5 do gene o com 3 do gene |

pareamento desigual na MEIOSE
crossing-over homlogo
(genes homlogos)

Pareamento normal
Pareamento anormal
Crossing-over desigual
Anti-Lepore
Lepore
Hb Lepore: cadeias o| fusionadas.

- mutao provoca reduo ou ausncia na sntese de
uma das cadeias o ou |, sem alterar a sequncia de
aminocidos
- cadeia produzida na taxa normal: excesso relativo
precipitao na clula lesando a membrana
destruio prematura da hemcia.
2 grupos o talassemias
| talassemias
TALASSEMIAS
Distribuio geogrfica ao redor do Velho mundo:
Mediterrneo, Oriente Mdio e partes da frica, ndia e sia.
Thalassa: mar
ALFA-TALASSEMIAS
-distrbios genticos na produo da o-globina afetam a formao
das Hb fetal (HbF o
2

2
) e adulta (HbA o
2
|
2
)
-Ausncia de cadeia o: talassemia o
0
-Reduo de cadeia o: talassemia o
+

- ausncia de cadeias de o-globina: cadeias de |-globina formam
um tetrmero.
-maioria das o-talassemias delees


Recombinao homloga desigual
Formas de Talassemia Alfa
Deleo 4 genes alfa: formao de
4
Hb Barts forma
major hidropisia fetal
Deleo de 3 genes alfa: tetrmero |
4
Doena da Hb H
precipitam na hemcia destruio e anemia hemoltica
Deleo de 2 genes alfa: anemia leve (trao talassmico)
Deleo de 1 gene alfa:
portador silencioso
- o-talassemia por deleo homozigota (ausncia de cadeias o)
restrita ao SE asitico.
- estado heterozigoto (2 genes o normais e 2 mutantes).

2 gentipos o/ o
/ oo


prognie /

Hidropisia fetal

Pais
Hidropisia Fetal
Pais
Trao o-talassmico (_ _/ o o) :
- anemia leve.
- comum em orientais e SE asitico
Hemoglobina H
Doena da Hb H (|4): deleo
de 3 genes (_ _/ _ o)
moderadamente grave.
alteraces sseas,
esplenomegalia
afeta orientais e brancos
DOENA DA HB H
Trao o-talassmico
(_o/_ o)
SO sia, negros
americanos e
brasileiros
Pais
descendentes
TRAO ALFA-TALASSMICO
BETA-TALASSEMIAS
-produo reduzida ou ausente de |-globina anemia
microctica hipocrmica.
-Ausncia de cadeia | : talassemia |
0
-Reduo de cadeia o: talassemia |
+

-desequilbrio da sntese de o-globinas precipitao das cadeias
o danos na hemcia.
- cadeia | importante no perodo ps-natal sntese aps o
nascimento (|-globina substituiria a e a sntese de Hb A ).
- maioria das |-talassemias so decorrentes de mutaes pontuais
sntese de RNA
- sntese de Hb F reduz a gravidade da doena.
-indivduos homozigotos para |-talassemia talassemia major
-indivduos heterozigotos para |-talassemia talassemia minor
http://www.hemoglobinopatias.com.br/talassemias/tal-beta.htm



Figura 7.13: Relao entre quantidade de globinas alfa livre, nveis de Hb A, Hb
A
2
e Hb Fetal, e gravidade do quadro clnico em pacientes com talassemia beta menor e maior.





Figura 7.13: Relao entre quantidade de globinas alfa livre, nveis de Hb A, Hb
A
2
e Hb Fetal, e gravidade do quadro clnico em pacientes com talassemia beta menor e maior.



http://www.hemoglobinopatias.com.br/talassemias/tal-beta.htm
DESEQUILBRIOS DAS GOBINAS ALFA E BETA
http://www.hemoglobinopatias.com.br/talassemias/tal-beta.htm
TIPOS DE TALASSEMIA BETA
Sinais Clnicos
-anemia intensa antes dos 2
anos (|Hb F ps-natal),
-atraso do crescimento,
-ictercia,
-hepatoesplenomegalia,
-alteraes esquelticas
(expanso da medula ssea).

Tratamento
- transfuso sangunea
- administrao de agentes
quelantes
-transplante de medula ssea
-Terapia gnica
TALASSEMIA MAJOR ANEMIA DE COOLEY
Eletroforese de hemoglobinas em gel
de agarose alcalina: (1) Hb AF de
talassemia beta maior; (2) Hb S/beta
talassemia ou SF, onde m indica o
fracionamento da metaemoglobina S e
a a globina alfa livre; (3) Hb AA2 e
Fetal em tal. beta menor; (4) Hb AS
(trao falciforme); (5) Hb AA
(normal).
Cadeias o normais em excesso precipitam-se formando
os corpsculos de Heinz na hemcia em forma de
lgrima.
Risco para casamentos entre portadores de talassemia beta
TALASSEMIA MINOR -
TRAO TALASSMICO

-portadores de um alelo
mutante (heterozigoto)
-Geralmente assintomticos
- anemia leve
-diagnstico: eletroforese
(| Hb A
2
).

1. Mutao nos promotores (TATA box)
2. Mutao no splicing do mRNA
3. Mutao da cobertura (cap) do
mRNA
4. Mutaes sem sentido e de matriz de
leitura
DIAGNSTICO LABORATORIAL
Eletroforese em acetato de celulose (pH alcalino ou cido):
rpida e baixo custo, mas sensibilidade limitada Hbs co-
migram na mesma posio.
DIAGNSTICO LABORATORIAL
Eletroforese de Focalizao isoeltrica: tcnica de alta
preciso identifica Hbs com co-migrao
A Hb migra no gel e se precipita ao encontrar seu ponto
isoeltrico (conforme o pH no gradiente do gel)

DIAGNSTICO LABORATORIAL
HPLC (Cromatografia lquida de alta presso): diagnstico
diferencial das hemoglobinopatias (dados quantitativos e
qualitativos)
Tcnicas moleculares: identificao da mutao (PCR,
sequenciamento)