Quim. Nova, Vol. 27, No.

1, 131-138, 2004 MICROEMULSES: ESTRUTURA E APLICAES COMO SISTEMA DE LIBERAO DE FRMACOS Anselmo Gomes de Oliveira*, Maria Virgnia Scarpa, Marcos Antonio Correa, Luciane Flvia Rodrigues Cera e Thalita Pedroni Formariz Departamento de Frmacos e Medicamentos, Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade Estadual Paulista Jlio de Mesquita Filho, CP 502, 14801-902 Araraquara - SP Recebido em 25/9/02; aceito em 27/6/03

MICROEMULSIONS: STRUCTURE AND APPLICATION AS DRUG DELIVERY SYSTEMS. Depending on formula composition, microemulsions may be used as a vehicle for drug administration. In this work the main applicable parameters used in the development of pharmaceutical microemulsions (ME) are analyzed. The conceptual description of the system, theoretical parameters related to formation of internal phases and some aspects of ME stability are described. The pseudo ternary phase diagram is used to characterize ME boundaries and to describe different structures in several regions of the diagram. Some applications of ME as drug delivery systems for different administration routes are also analyzed. ME offer advantages as drug delivery systems, because they favor drug absorption, being in most cases faster and more efficient than other methods in delivering the same amount of drug. Keywords: microemulsions; drug incorporation; drug delivery.

INTRODUO A interao de frmacos com interfaces de agregados supramoleculares de compostos anfiflicos ou de polmeros representa um aspecto importante em tecnologia farmacutica, pelas implicaes biolgicas da presena destes compostos em frmulas farmacuticas, interferindo no perfil de biodisponibilidade, alterando constantes de ionizao de frmacos cujo efeito teraputico depende substancialmente da frao ionizada da droga ou modificando a estabilidade de grande nmero de compostos de uso teraputico1-3. Independentemente de como se possa definir uma interface, podemos imaginar uma superfcie, a partir da qual pode ser descrita uma regio externa, contnua, representada pelo meio dispersante, geralmente de natureza aquosa, e outra regio, representada pela prpria interface, com caractersticas particulares e propriedades fsicoqumicas bastante diferentes das do meio dispersante. Estas propriedades diferenciadas permitem a utilizao destas estruturas em tecnologia farmacutica, com o objetivo de ampliar as alternativas de aplicao em teraputicas especficas4. Assim, uma membrana biolgica, a superfcie de um polmero, micelas, microemulses e lipossomas representam exemplos de interfaces, em cuja superfcie uma srie de fenmenos especiais pode ocorrer. Raramente a experincia clnica com agentes teraputicos satisfaz as expectativas criadas em torno de resultados pr-clnicos com medicamentos, desde que entre o local de administrao e o rgo ou tecido alvo existe uma srie de barreiras anatmicas, qumicas ou biolgicas que contrariam a obteno do efeito teraputico desejado. Neste contexto est inserido o conceito dos sistemas transportadores de frmacos, os quais so capazes de compartimentalizar a substncia ativa e direcion-la para os stios onde dever exercer o efeito farmacolgico, alm de poder controlar a velocidade de liberao, sem alterar a estrutura qumica da molcula transportada4-6. Dessa forma, esses sistemas envolvem as seguintes concepes bsicas: a- sistemas matriciais ou monolticos, nos quais o frmaco est

intimamente misturado com os excipientes da frmula, podendo proporcionar maiores tempos de liberao do mesmo. As micropartculas esto includas nesse conceito6,7; b- sistemas reservatrios, nos quais o frmaco encontra-se separado do meio de dissoluo atravs de um revestimento, uma membrana ou uma interface, devendo transpor essa barreira para ser liberado para o meio8-11. As microemulses so sistemas reservatrios, nos quais a fase interna constitui um microambiente dimensionalmente restrito, com propriedades particulares, podendo ligar ou associar molculas com diferentes polaridades12,13. MICROEMULSES As microemulses (ME) so geralmente caracterizadas como agregados esfricos e com dimetros menores que 1400 , tipicamente da ordem de 100 14,15. Apesar da denominao micro, o sistema envolve gotculas com tamanhos suficientemente pequenos para ser opticamente transparente. Por essa razo, outras denominaes, como submicron emulsion e nanoemulsion tm sido utilizadas para designar esse sistema4. Alm dos agregados esfricos, outros tipos de estruturas internas, como as bicontnuas e bicontnuas tubulares foram demonstradas16-21. ME so, de forma geral, definidas como sistemas termodinamicamente estveis, isotrpicos e transparentes, de dois lquidos imiscveis, (usualmente gua e leo) estabilizados por um filme de compostos tensoativos, localizados na interface leo/gua3,22-29. As ME foram introduzidas na literatura por Hoar e Shulman30, em 1943, ao descreverem sistemas transparentes formados espontaneamente quando leo e gua eram misturados com quantidades relativamente grandes de tensoativo inico misturado a um lcool de cadeia mdia. Entretanto, o termo microemulso foi utilizado somente no final da dcada de 1950 por Schulman e colaboradores31. Do ponto de vista farmacutico, as ME podem ser definidas como emulses transparentes, nas quais um leo ou um frmaco lipoflico disperso num meio aquoso (ou vice-versa), contendo um tensoativo, associado ou no a um co-tensoativo apropriado, gerando um sistema termodinamicamente estvel (Figura 1).

*e-mail: oliveiag@fcfar.unesp.br

Divulgao

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Figura 1. Estrutura das microemulses

A formao da microemulso geralmente envolve a combinao de trs a cinco componentes, tais como, tensoativo, fase aquosa, fase oleosa e, quando necessrio, o co-tensoativo3,26,29, sendo que a orientao para sistemas O/A ou A/O dependente das propriedades fsico-qumicas do tensoativo, traduzidas principalmente pelo seu equilbrio hidrfilo/lipfilo (EHL)3,22. A principal caracterstica do sistema formar espontaneamente a fase interna por homogeneizao suave dos componentes da frmula. Sua estabilidade termodinmica oferece vantagens sobre as disperses instveis, tais como as suspenses e emulses, podendo ser utilizada por tempo muito mais amplo3,24,26. Considerando que as ME O/A so formadas por gotculas de leo dispersas em gua, contendo o tensoativo na interface leo/gua, elas possuem tima capacidade de solubilizao de substncias e tm sido usadas para aumentar a estabilidade, a solubilidade e a biodisponibilidade de frmacos, pois permitem a incorporao de vrios tipos de compostos na fase interna oleosa (baixa constante dieltrica), na regio interfacial (constante dieltrica intermediria entre o leo e a gua) ou na fase externa aquosa (alta constante dieltrica)13,22,23,32. Teoria da formao Quando dois lquidos imiscveis so misturados, mantendo-se agitao constante, as duas fases tendem, inicialmente, a formar gotculas dispersas de um dos lquidos no interior do outro. Quando a agitao cessa, as gotculas tendem a coalescer e os lquidos separam-se novamente. Podemos, ento, definir o tempo de vida de uma emulso, como o tempo decorrido desde o momento em que os lquidos esto completamente homogeneizados, at a separao total do sistema. Assim, o tempo de vida maior quanto melhor for a estabilidade do sistema. Neste ponto interessa-nos analisar mais detalhadamente os motivos que levam desestabilizao da emulso. Quando um dos lquidos dividiu-se no interior do outro formouse uma fase interna, dispersa ou descontnua, rodeada por uma fase externa, dispersante ou contnua. Assim, o processo de emulsificao implica num grande aumento de rea interfacial (S1 S2), a qual leva a um aumento brusco da energia livre de superfcie (G1 G2)9,27. Este fenmeno, em condies de temperatura constante, pode ser descrito pela Equao: G = G2 G1 = i x S (1)

na qual, i representa a tenso interfacial entre as fases aquosa e oleosa. Se considerarmos que o aumento da rea interfacial (S1 S2) imprescindvel do ponto de vista tecnolgico, uma das alternativas para a estabilizao de uma emulso seria fornecer energia mecnica, continuamente, de modo a manter a rea interfacial aumentada8,33. Este fator, embora necessrio para a disperso, por si s no suficiente, pois vence a barreira da tenso superficial apenas tempo-

rariamente, enquanto durar a agitao. Atravs da Equao 1 podese verificar que o caminho mais vivel para a estabilizao do sistema a diminuio da tenso interfacial da disperso, como forma de reduzir a energia livre derivada da expanso da rea interfacial. possvel verificar, tambm, que a estabilidade da emulso dever ser maior, quanto menor for a energia livre remanescente da expanso da rea interfacial, tendendo a um sistema termodinamicamente estvel, caso o aumento da energia livre seja totalmente compensado pela diminuio da tenso interfacial. Neste aspecto, os agentes tensoativos, com propriedade de diminuir a tenso interfacial entre o leo e a gua, encontram seu papel fundamental na estabilizao de emulses e microemulses8. Entretanto, esses compostos, com certas excees, no conseguem diminuir a tenso interfacial a ponto de contrariar totalmente a energia livre de superfcie provocada pelo aumento da rea interfacial. Dessa forma, as emulses comuns so consideradas sistemas termodinamicamente instveis e, no desenvolvimento tecnolgico, procura-se utilizar meios que possam retardar pelo maior tempo possvel a separao das fases. Enquanto que as emulses so estabilizadas por agentes emulsivos comuns (tensoativo), as microemulses geralmente so adicionadas de um co-tensoativo, cuja funo diminuir a tenso interfacial para valores abaixo dos limites proporcionados pelo emulsivo comum. No entanto, nos casos em que os tensoativos so capazes de cumprir integralmente essa funo, a presena dos co-tensoativos no necessria e a composio da microemulso restringe-se aos outros trs componentes. As microemulses diferem das emulses no somente por serem opticamente transparentes mas, essencialmente, pela estabilidade termodinmica. Assim, em propores adequadas entre seus componentes e em condies de temperatura, presso e fora inica constantes, o sistema forma-se espontaneamente, quando a energia remanescente da interface est prxima de zero (G 0)27. Alm disso, devido s dimenses reduzidas da fase interna, as gotculas possuem altos valores de ngulo de curvatura e de coeficiente de difuso, se comparadas com as emulses. Uma das teorias disponveis para explicar a formao das microemulses originada do conceito da Tenso Negativa Transiente na Interface 27,34. A energia livre de superfcie pode ser definida pela Equao 1 temperatura, volume e nmero de moles constantes. Essa equao mostra que G varia diretamente com a rea interfacial e que se, i for negativo, G ser < 0 e a emulsificao espontnea ser possvel. Esse conceito foi utilizado para sistemas microemulsionados de quatro componentes (gua, leo, tensoativo e co-tensoativo) e pode ser analisado a partir de um filme misto monomolecular de tensoativo/ co-tensoativo, adsorvido na interface leo-gua. As molculas orientam-se na interface com as cabeas polares voltadas para a fase aquosa e as cadeias carbnicas para a fase oleosa (Figura 2). Na Figura 2, O/A representa a tenso interfacial inicial entre o leo e a gua. Quando aumenta o nmero de molculas por unidade de rea, elas comeam a se comprimirem, umas ao lado das outras, desenvolvendo uma presso lateral bidimensional (). A anlise do filme mostra que a tenso de superfcie (i) na interface diminui proporcionalmente com o aumento da presso. Esse fenmeno pode ser expresso pela Equao 2, a qual mostra que quando a repulso entre as espcies do filme (presso ) exceder O/A, i ser negativa: i = O/A (2)

Desse modo, a variao de energia (i x S) torna vivel a expanso espontnea da interface. A existncia temporria de > O/A

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Figura 4. Representao da formao do tipo de microemulso em relao ao gradiente da tenso interfacial entre as fases aquosa e oleosa Figura 2. Organizao da mistura de agentes emulsivos na interface leogua

orienta a fora que reduz o tamanho das gotas, a partir de um volume fixo de leo, at no haver mais necessidade de energia para aumentar a rea interfacial. O equilbrio atingido quando a tenso negativa volta a zero, em virtude da descompresso das molculas, com a conseqente diminuio da presso na interface. Uma anlise mais criteriosa do sistema mostra que a tenso negativa resultado no s da alta presso inicial do filme, mas tambm da grande diminuio da tenso original entre o leo e a gua (O/A). Esta depresso comea porque o co-tensoativo (lcool de cadeia mdia), sendo solvel tanto na fase oleosa como na interface, vai particionar em ambas as fases, fazendo com que a frao dissolvida no leo diminua a tenso original de O/A para (O/A)a (Figura 3).

Figura 3. Representao do gradiente da tenso interfacial entre as fases aquosa e oleosa nas microemulses

A presso do filme (G) fica, ento, contrariada por uma tenso muito menor (), descrita pela Equao 3: = (O/A)a - G (3)

na qual, (O/A)a e G, representam a tenso interfacial original entre leo e gua e a presso no filme antes da curvatura, respectivamente. Esta seqncia de fatos leva a um mecanismo de curvatura do filme, o qual aplicvel no somente para a formao de microemulses O/A e A/O, mas tambm para a magnitude da curvatura do filme. O filme de tensoativo/co-tensoativo, na interface gua-leo, possui diferentes tenses (ou presses) em cada lado. Devido a essas diferentes tenses, ocorre a curvatura (Figura 4), dissipando a tenso gradiente at que ambos os lados estejam com tenso equilibrada. O lado com maior tenso ser cncavo e, conseqentemente, vai englobar o outro lquido deste lado tornando-o a fase interna do sistema. Durante este processo a tenso (O/A)a, que contraria as presses nos dois lados do filme monomolecular na interface permanece constante. A presso total no filme igual soma das presses de cada lado. Assim, G representa a presso transiente inicial, resultante da presso gradiente devido a o e A atravs do filme e a soma de o e A (Figura 4).

Diagramas de fase Quando se modifica progressivamente a composio de uma mistura de solventes miscveis, as mudanas que se produziro na soluo podem ser traduzidas por importantes variaes nas propriedades termodinmicas dos compostos que a compe. Por outro lado, as observaes dessas propriedades e sua evoluo com a composio da soluo podem fornecer informaes especficas sobre a estrutura do meio. As microemulses, com o aspecto de soluo homognea, mas com estrutura micro-heterognea, constituem um campo de aplicao desse tipo de estudo. Nos sistemas microemulsionados, o objetivo principal obter uma combinao crtica entre os componentes, de modo a conseguir uma solubilizao mxima da fase interna ou dispersa33,35,36. O diagrama de fases descreve em que condio experimental possvel se obter microemulses e as regies limites de transio entre emulses, fases separadas e microemulses O/A e A/O. O modo mais usual de descrever esses sistemas de quatro componentes atravs do diagrama de fases pseudoternrio, onde fase aquosa, fase oleosa e mistura de tensoativo/co-tensoativo so representadas nos vrtices do tringulo. Esse tipo de diagrama tambm suporta outras misturas, como por exemplo leo, co-tensoativo e gua/ tensoativo37. Outra forma de representar o sistema atravs do diagrama de fases quaternrio, onde tensoativo, co-tensoativo e gua esto representados nos vrtices do tringulo e o leo na projeo bidimensional do mesmo36,38. Neste caso, o primeiro tringulo corresponde a zero de leo e, portanto, a um sistema de micelas mistas contendo gua e tensoativo/co-tensoativo. Por isso, muitas vezes as microemulses so tratadas como uma extenso de solues micelares. Se a gua e o leo forem misturados com um tensoativo capaz de produzir uma emulso leitosa, e essa emulso for titulada com um co-tensoativo apropriado at formar um sistema opticamente transparente, pode-se determinar a relao tensoativo/co-tensoativo ideal para a obteno da microemulso. O diagrama de fases definido para cada relao tensoativo/cotensoativo. Para isso podem-se preparar misturas binrias dos componentes, correspondentes a cada lado do tringulo, como segue: Mistura emulsiva (T) / fase oleosa (O) em vrias propores, titulando-se com a fase aquosa (A). Essas titulaes so representadas, no diagrama, pelas linhas traadas direcionadas ao infinito de fase aquosa, isto , convergentes ao vrtice do tringulo que representa 100% de fase aquosa (Figura 5a). O mesmo procedimento pode ser utilizado para a mistura emulsiva (T) / fase aquosa (A), a qual titulada com a fase oleosa (O). Geralmente esses dois procedimentos so suficientes para se definir o diagrama de fases (Figura 5b). Os pontos da titulao referem-se s modificaes verificadas no sistema, tais como, separao de fases, sistema transparente lquido, sistema transparente gel, sistema opaco, etc. Esses pontos so calculados a partir das novas propores entre os componentes da ME depois da titulao (Figura 5b).

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Descrio das regies do diagrama de fase A regio denominada de ME, na Figura 5b, representa o domnio da existncia do sistema opticamente transparente. As regies 15 da Figura 5b descrevem as condies experimentais da existncia dos diferentes tipos de sistemas. Regio 1: Existe grande predomnio de fase aquosa. A concentrao relativa de tensoativo pequena <20%. Representativa de ME O/A. Numa diluio infinita com fase aquosa o sistema tende formao de micelas mistas da mistura emulsiva, contendo a fase oleosa dissolvida em seu interior hidrofbico. O volume de fase interna pequeno (Figura 5b). O volume de fase interna definido pela expresso seguinte3: = 1 ( . ) (4)

tes, esses sistemas podem ser classificados no diagrama de fases de acordo com Winsor34,40,41. Regio Winsor I, contendo uma fase oleosa em equilbrio com uma fase emulsionada contendo leo, gua e a maior parte de mistura de tensoativo. Winsor II, tambm bifsica, constituda de uma fase aquosa em equilbrio com uma emulso. Winsor III, trifsica, contendo uma fase aquosa e outra oleosa, separadas por uma fase emulsionada. Winsor IV, correspondente a uma regio monofsica, representada por uma emulso homognea (Figura 6).

na qual a relao entre a massa de fase aquosa e a massa total de microemulso e a relao entre as densidades da microemulso e da fase aquosa. Regio 2: Onde predomina a fase oleosa, pobre em fase aquosa e em mistura emulsiva. Representativa de ME A/O. Numa diluio infinita tende a formar micelas reversas, compostas por grande parte de fase externa oleosa, com fase aquosa dissolvida nas micelas inversas. O volume de fase interna da ME pequeno (Figura 5b). Regio 3: Rica em mistura emulsiva, contm muito pouca fase aquosa e fase oleosa (Figura 5b). A estrutura que melhor representa essa regio consiste de uma fase contnua onde a mistura de tensoativo/co-tensoativo, leo e gua encontram-se em fase lamelar, na qual o tensoativo e o co-tensoativo organizam-se na interface contnua leo/gua, separando ambas as fases. Regio 4: intermediria entre as duas regies (1 e 2) que possuem estruturas bem definidas (Figura 5b). A microestrutura do sistema corresponde a fases bicontnuas, as quais podem explicar a passagem gradual de um sistema O/A para A/O. Esse fenmeno pode ser acompanhado facilmente medindo-se a variao da condutividade, utilizando-se como parmetro a adio de leo numa microemulso A/O ou de gua numa microemulso O/A. Regio 5: Corresponde regio onde o sistema muito instvel e ocorre separao entre as fases aquosa e oleosa. Para elucidar as modificaes microestruturais que acontecem nas vrias regies do diagrama de fases, tcnicas de espalhamento de Raios X (SAXS - Small Angle X-ray Scattering) e de Neutrons baixo ngulo (SANS - Small Angle Neutron Scattering), associadas ou no a tcnicas reolgicas, tm sido utilizadas em ampla faixa de condies experimentais16,39.

Figura 6. Emulses obtidas com diferentes concentraes do tensoativo polietilenoglicol perfluoroalquilado com a fase oleosa brometo de perfluorooctila (BPFO). Representao da classificao de Winsor. (A) Winsor I (fase oleosa em equilbrio com fase emulsionada). (B) Winsor III (fase emulsionada em equilbrio com a fase aquosa e fase oleosa). (C) Winsor II (fase aquosa em equilbrio com fase emulsionada). (D) Winsor IV (emulso homognea). (E) Microemulso

Algumas aplicaes de ME como sistema de liberao de frmacos Substncias farmacologicamente ativas, quando veiculadas em formas farmacuticas convencionais, geralmente no conseguem atingir concentrao aprecivel no tecido alvo do organismo porque, entre o local de aplicao e o local onde deve exercer seu efeito farmacolgico, interpe-se uma srie de barreiras biolgicas, as quais expem os tecidos normais do organismo aos efeitos potencialmente txicos do frmaco6,24,25. Na atualidade, o estudo de novos sistemas de liberao de frmacos, particularmente as ME, tem sido muito relevante na rea farmacutica, porque pode proporcionar alternativas teraputicas modernas, farmacologicamente mais eficientes e com efeitos colaterais bastante reduzidos, a partir de frmacos j existentes, muitas vezes pouco utilizados em razo de sua potencial toxicidade12. As ME so adequadas a esses propsitos e tm sido utilizadas, visando a modificao da biodisponibilidade e a diminuio da toxicidade de vrios frmacos24,42. De forma geral, a literatura mostra que ME podem proteger frmacos da decomposio ou acelerar esses processos1-3, assim como apresentam grande potencial no uso teraputico como sistemas reservatrios de frmacos25,26,43 ou so capazes de direcionar frmacos para tecidos ou clulas especficas do organismo44-48. Trabalhos desenvolvidos em nosso laboratrio mostram que ME aumentam significativamente a solubilidade de antiinflamatrios no esterides25,26,49,50 e antibiticos1-3, funcionando como sistema reservatrio que proporciona atividade teraputica mais intensa e por tempo prolongado. Foi demonstrado que ME constituem um veculo muito mais eficiente que a soluo aquosa para a administrao de vacinas de DNA por via oral13. ME tambm tm sido utilizadas na estratgia de aumentar o ndice teraputico dos

Figura 5. (a) Titulao com fase aquosa; (b) representao dos pontos de titulao e regies do diagrama de fases

A mistura dos constituintes da ME nem sempre conduzir a um sistema disperso homogneo, podendo coexistir diferentes estruturas. Dependendo da natureza e do nmero de fases lquidas presen-

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quimioterpicos antineoplsicos, com a conseqente reduo dos efeitos txicos severos desses frmacos45,47. As propriedades das microemulses so extremamente variadas, sendo que a grande diversidade de suas aplicaes conseqncia direta desse aspecto. Desde que quantidades apreciveis de gua e leo podem ser readicionadas s microemulses, este sistema tambm constitui um excelente meio de solubilizao de compostos polares e apolares, suportando altas concentraes de frmacos nas fases aquosa e oleosa1,51. A aplicao de microemulses como sistemas capazes de modular a liberao transdrmica de frmacos e o potencial dessa utilizao tem sido descrito e discutido por vrios autores52-54. Microemulso de liberao tpica As caractersticas e propriedades das ME como veculo de frmulas farmacuticas so fundamentais para a liberao tpica de frmacos. Osborne e colaboradores55 caracterizaram um sistema modelo de ME gua em leo com essa finalidade, formado por gua/ octanol/dodecilsulfosuccinato de sdio (DSS) contendo at 70% de contedo de gua, tendo verificado que o aumento da proporo de gua de 15 a 58% em peso, implica no aumento da mdia do coeficiente de autodifuso da gua (D/Dw) pelo fator de 10 vezes (Tabela 1). D/Dw foi definido como o valor da unidade do coeficiente de autodifuso da gua na ME dividido pelo coeficiente de autodifuso da gua em gua. Dessa forma, a interpretao do valor de D/Dw correspondente a 0,1, na Tabela 1, significa que a gua no ambiente de 45% de gua na ME difunde com 1/10 da velocidade que a molcula pode difundir no ambiente aquoso puro. Isso implica em que as molculas de gua adicionadas ao sistema esto fortemente ligadas cabea polar do DSS e difundem na velocidade de difuso do tensoativo. Entretanto, como os stios primrios de solvatao ao redor do DSS esto saturados, a gua livre comear a ser incorporada ao sistema e ser vivel para difuso e, ento, D/Dw ir aumentar de acordo com o aumento do contedo de gua55. Verifica-se, portanto, que a liberao da poro polar da gua da ME altamente dependente da composio do sistema. Para o fluxo transdrmico normatizado de gua da ME os valores apresentados possuem um perfil semelhante nas mesmas condies de contedo de gua. Desde que, obviamente, o veculo tambm afeta a barreira da permeabilidade da pele, quando a quantidade de gua aumenta no sistema observa-se aumento de 5 vezes nos valores de fluxo transdrmico para a mesma amostra de pele (Tabela 1)55. Tabela 1. Coeficiente de autodifuso e fluxo transdrmico da gua para a microemulso contendo DSS/octanol 58:42 (p/p) gua (%) 15 35 45 52 58 67 D/Dw 0,035 0,072 0,100 0,200 0,353 0,363 Fluxo Normalizado 0,84 2.5 n/d n/d 5,2 4,5

cutnea aumentada e a penetrao de substncias, que normalmente no passariam atravs dessa barreira, fica bastante facilitada. A permeao in vitro de lcool cetlico, atravs de pele humana, foi avaliada usando ME A/O. Nesse estudo utilizou-se a clula de Frans e micrtono criosttico de micro-seccionamento para quantificar a velocidade e a profundidade da penetrao das substncias, respectivamente56. A penetrao do lcool cetlico contido em ME foi cerca de 3,7 vezes maior que num creme e 5 vezes maior que numa loo correspondente, ao longo de 4 h. Experimentos conduzidos em nosso laboratrio mostram que ME O/A, contendo miristato de isopropila como fase interna e mistura de brometo de hexadeciltrimetilamomnio (CTAB)/etanol (1:1) como tensoativo, aumentam significativamente a solubilidade do antiinflamatrio no esteride naproxeno Np, Figura 7.

Figura 7. Estrutura qumica do naproxeno (cido (S)-6-Metoxi--metil-2naftalenoactico)

O espectro de absoro de UV-Vis mostra deslocamento do max para regies de menor comprimento de onda e forte dependncia da absoro em relao ao volume de fase interna da microemulso (Figura 8). Essa diferena espectral reflete o aumento de solubilidade do Np na presena da ME e mostra a dependncia da solubilidade em relao ao volume de fase interna do sistema, o que pode interferir diretamente nos parmetros de liberao in vitro e de atividade antiinflamatria in vivo, j que a disponibilidade do Np vai depender tambm da velocidade de sada do frmaco da fase interna da ME.

Figura 8. Espectro de absoro do naproxeno (1,5 x 10 -4 M) incorporado microemulso de CTAB/etanol (1:1), miristato de isopropila e tampo citrato pH 6,0. ME contendo volumes crescentes de fase interna i (0,147) a f (0,695)

D/Dw: Coeficiente de autodifuso da gua; n/d: no determinado Microemulso de liberao transdrmica A pele exerce intensa funo de barreira, deixando penetrar apenas algumas substncias e em determinadas condies. Em razo de seu contedo em substncias tensoativas, as microemulses podem interagir com o extrato crneo desestruturando a bicamada lipdica do mesmo. Dessa forma, os lipdios passam de uma forma cristalina ordenada para uma forma lquida desordenada, a permeabilidade

De fato, a liberao in vitro do Np mostra intensa dependncia da velocidade de liberao, com decaimento exponencial, em relao ao aumento do volume de fase interna da ME (Figura 9). Esse parmetro demonstra que possvel controlar a concentrao de frmaco disponvel no stio de ao atravs da modificao do volume de fase interna da ME, o que pode intensificar o efeito antiinflamatrio in vivo49. A avaliao da atividade antiinflamatria do Np, em ratos, medindo-se o efeito da aplicao do antiinflamatrio incorporado ou

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Gasco e colaboradores52. No estudo, a injeo intramuscular de 500 g/ml de um anlogo de LH-RH veiculado em ME A/O foi aplicada em ratos e o nvel de testoterona foi determinado, mostrando um efeito prolongado, com durao entre 10 e 20 dias quando comparado com a administrao de 100 g/kg de LH-RH em soluo tamponada. Foi demonstrado na literatura que a liberao de substncias ativas dissolvidas na fase interna de ME O/A mais lenta em relao ao frmaco livre, mostrando a habilidade desse tipo de agregado como sistema reservatrio que pode proporcionar efeito prolongado. Nossos estudos com o antiinflamatrio no esteride piroxicam (Figura 11) utilizando microemulses catinicas demonstraram claramente esse fenmeno25,26,50.

Figura 9. Efeito do volume de fase interna () da ME na liberao in vitro do naproxeno em diferentes tempos. 60 min; 120 min; 180 min; 240 min Figura 11. Estrutura qumica do piroxicam. (4-hidroxi-2-metil-N-2-piridinil2H-1,2-benzotiazina-3-carboxamida 1,1-dixido)

no em ME, contra um controle de ME sem frmaco, utilizando-se as metodologias da dermatite por leo de crton e a permeabilidade vascular induzida por histamina, revelou que em todos os casos a atividade antiinflamatria foi significativamente mais intensa com ME como veculo, do que a do Np veiculado em sistema tampo (Figura 10)49.

A composio das microemulses utilizadas nos experimentos de liberao in vitro e de avaliao do efeito antiinflamatrio in vivo est detalhada na Tabela 2. Tabela 2. Composio das frmulas de microemulses contendo piroxicam Componentes F1 Piroxicam Carbopol 940 Microemulso q.s.p. TpF pH 5,5 q.s.p. TpF = Tampo fosfato 0,5 100 Frmulas F2 0,5 100 F3 0,5 3,0 100 -

Figura 10. Efeito de ME catinica na atividade antiinflamatria tpica do naproxeno (Np) usando como controle ME sem frmaco: (a) mtodo da dermatite em orelha de camundongos, provocada pelo leo de crton usando dexametasona como antiinflamatrio padro; (b) mtodo de permeabilidade vascular em ratos induzidas por histamina

Microemulso de liberao prolongada Um sistema de microemulso biocompatvel de liberao prolongada contendo hormnio luteinizante (LH-RH) foi descrito por

O perfil de liberao in vitro do piroxicam em tampo fosfato pH 5,5 (F1), em ME (F2) e em ME contendo polmero carboxivinlico (Carbolpol 940) (F3), atravs de membrana de acetato de celulose a 37 oC mostra que a incorporao do piroxicam na ME catinica interfere muito significativamente no processo de liberao in vitro, produzindo inibio significativa da velocidade de liberao (Figura 12)25. A caracterstica mais importante evidenciada nos resultados foi o parmetro de reteno da substncia ativa pela fase interna oleosa da ME, a qual proporciona a liberao constante e regular numa faixa mais ampla de tempo, quando comparada ao controle (Figura 12). O fator de reteno da substncia ativa provocado pela ME foi da ordem de 10 vezes. A presena do polmero carboxivinlico acentua o grau de reteno do piroxicam em razo do aumento da viscosidade do sistema, o que dificulta ainda mais a sada do antiinflamatrio da fase interna da ME. Esses resultados so importantes, pois fornecem uma base comparativa complementar para a interpretao dos resultados da atividade antiinflamatria in vivo. A propriedade das ME como sistemas que proporcionam efeito prolongado foi testada in vivo utilizando o mtodo de formao de tecido granulomatoso, ideal para avaliao de processos inflamatrios crnicos (Figura 13). A durao do efeito antiinflamatrio foi avaliada utilizando-se piroxicam veiculado em sistema tampo e nos

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Microemulses: Estrutura e Aplicaes como Sistema de Liberao de Frmacos

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efeito adicional na reteno da substncia ativa no experimento de liberao in vitro, no mostrou o mesmo perfil na avaliao do efeito antiinflamatrio in vivo. Esses resultados mostram claramente o efeito reservatrio in vivo proporcionado pela fase interna da microemulso, o qual demonstra o efeito prolongado da ME como veculo para a administrao de antiinflamatrios no esterides (AINE). Microemulso para liberao oral de frmacos A liberao de peptdeos e protenas, atravs de administrao oral, possui muitos obstculos em sua aplicao devido s barreiras enzimticas e fsicas do trato gastrintestinal. Degradao de peptdeos ocorre freqentemente em vrios locais, tais como lume intestinal e mesmo intracelularmente. O direcionamento de certos peptdeos por via linftica pode ser interessante, pois a corrente sangunea muito mais eficiente em remover compostos absorvidos do que a linfa54. Teoricamente, os frmacos lipoflicos e com boa solubilidade em triglicerdeos seriam preferencialmente absorvidos pela via linftica. Estudos mais recentes tm mostrado o grande potencial das ME lipdicas na liberao de frmacos, desde que podem se comportar como sistemas lquidos ou gel, mantendo sua estabilidade termodinmica12. Esses sistemas so capazes de proteger e favorecer a absoro de frmacos peptdicos via oral. ME lipdicas para liberao de DNA em vacina gnica por via oral, contra a tuberculose, foram desenvolvidas utilizando-se ME A/O contendo derivados de cidos graxos de cadeia mdia Captex 200 (dicaprilato/dicaprato de propilenoglicol) e Capmul MCM (Caprilato/caprato de glicerila) como fase oleosa e mistura de Cremophor EL (Triricinooleato de polioxietilenoglicerol 35)/fosfatidilcolina de soja como tensoativo13. Plasmdeos contendo gene reprter -gal ou gene hsp65 (heat shock protein de 65kDa, de Mycobacterium leprae) foram incorporados na fase interna da ME. A imunizao de camundongos Balb/c com hsp65 mostrou produo de anticorpos IgG total e IgG2a aumentadas em relao aos grupos controle, resposta proliferativa e produo de INF- especfica nas culturas de clulas esplnicas dos camundongos. Os dados so indicativos que a transfeco foi alcanada e que a resposta imune desenvolvida seja especfica e de padro Th1, adequado para proteo contra a tuberculose13. Medicamentos desenvolvidos no campo das ME tm permitido a ampliao das possibilidades teraputicas de frmacos potencialmente txicos, como a doxorrubicina57 e ciclosporina58. A ciclosporina, um peptdeo cclico com 11 aminocidos, com forte efeito imunossupressor, foi formulada como uma microemulso completa, pr-concentrada, na qual o tensoativo tem a funo de reduzir a variao da absoro da ciclosporina, resultante das modificaes do fluxo de bile. Em presena de gua a ME forma um sistema homogneo, opticamente transparente, cujas gotculas da fase interna so menores do que 100 nm, causando um aumento significativo na absoro da ciclosporina58. CONCLUSES Ao lado das aplicaes mencionadas, certamente existem muitas outras aplicveis na rea farmacutica. Por exemplo, as ME contendo leos fluorocarbonados em gua podem ser usadas como componentes de sangue artificial, j que so capazes de estocar oxignio e liber-lo na presena de dixido de carbono. Desde que os dimetros das gotculas da fase interna so menores que 1000 , isto faz o sistema aplicvel em razo de que podem passar livremente atravs dos capilares. Existem certas vantagens no uso das microemulses como sistemas de liberao de frmacos, incluindo o fato de que os frmacos so imediatamente absorvidos e, na maioria dos casos, de forma mais rpida e eficiente do que a mesma quantidade de frmaco administrado em comprimidos ou em cpsulas.

Figura 12. Perfil de liberao in vitro do piroxicam a 37 oC. Tampo fosfato pH 5.5 (F1); incorporado em microemulso (F2); incorporado em microemulso contendo Carbopol 940 (F3)25. Ver detalhes na Tabela 2

sistemas contendo ME25. Administrou-se dose nica de piroxicam (10 mg/kg) por via subcutnea, determinando-se o efeito antiinflamatrio depois de 3, 6 e 9 dias. Ao final do terceiro dia observou-se que todas as frmulas exibiram efeito antiinflamatrio significativamente maior do que o grupo controle (p < 0,05), sendo que F2 e F3 mostraram efeito superior ao de F1. Ao final do sexto dia F2 e F3 mantinham o efeito antiinflamatrio superior a F1. Os resultados da Figura 13 indicam que a atividade antiinflamatria de F2 e F3 aumentou de 43 e 33%, para 59 e 58%, respectivamente. Por outro lado, F1, contendo piroxicam no sistema tampo, j no terceiro dia exibia atividade mxima de 21,80%, decaindo no sexto dia para 16,80%. Esse fenmeno foi bem evidenciado no final de 9 dias, quando a atividade antiinflamatria provocada por F1 no foi significativa em relao ao controle (p > 0,01). Ficou evidente, tambm, que a presena do polmero carboxivinlico, embora tenha exercido um

Figura 13. Efeito da administrao subcutnea das frmulas F1, F2 e F3, em dose nica 10 mg/kg, na formao de tecido granulomatoso. Controle: tampo fosfato pH 5,5. As barras representam a mdia + E.P. com 6 ratos

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Oliveira et al.

Quim. Nova

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