Tecnologia de Biorreatores e Propagao Fotoautotrfica

Ricardo Penchel Wagner Otoni Aloisio Xavier

Justificativas para Automao

Aplicao da tecnologia em escala comercial.

+
Necessidade de minimizar custos na micropropagao industrial

Desenvolvimento de novas estratgias e equipamentos de automao

Biorreatores
Termo geralmente utilizado para descrever um recipiente contendo uma reao biolgica. (De Bry, 1986) Refere a um recipiente utilizado para a cultura aerbica de clulas, fermentadores ou colunas de clulas imobilizada ou enzimas. (Combs, 1986)

Obteno de grande nmero de brotos ou plntulas em ciclos de produo e custos mais reduzidos

Histrio de Biorreatores em Plantas

1972 Utilizao de fermentadores convencionais em suspenso celular de embries somticos (Kessel & Carr, 1972) Primeiro relato sobre a utilizao da tcnica de biorreatores na micropropagao de begnia (Takayama, 1981) Utilizao da tcnica de imerso temporria e peridica do explante em meio lquido (Tisserat & Vandercook, 1985) Produo em larga-escala de espcies ornamentais (Lrio, bromlia) e agrnmicas (batata, estvia, banana). Desenvolvimento de novos equipamentos para cultivo de embries somticos, multiplicao de gemas e brotos de vrias espcies. Utilizao comercial na micropropagao de espcies arbreas em biofbricas.
Gupta & Ibaraki, 2006

1981

1985 1986-96

2000-05

2005-07

Primeiros Biorreatores
Fermentadores:
Desenvolvidos para fungos e bactrias Imerso contnua dos explantes Agitao mecnica e borbulhamento Sofisticados e caros Adaptados para cultivo de clulas No se prestam para cultivo de gemas e plntulas

Biorreatores
Vantagens
Alta produtividade e

Desvantagens
Hiperidricidade

eficincia do processo Melhor controle das condies da cultura Suprimento timo de nutriente/bioregulado r Automao do processo Mudana e adequao do meio

do explante Variao do tamanho da plntula Contaminao microbiana Recalcitrncia de algumas espcies

Ziv, 2005

Comparao Biorreator x gar

Itens
Recipientes Volume (L) Capacidade (L) Quantidade Quantidade inculo Perodo cultivo (dias) Espao cultivo (m) Mo de obra (min) Tempo operacional Preparo meio Autoclavagem Inoculao Manejo culturas

Biorreator
20 - 500 15 - 300 6 - 10 90 - 100 90 1-2 200 60 10 45 55

gar
0,5 1,0 0,05 0,10 1.000 150 - 200 60 35 - 40 2.500 450 140 1.250 360

Variao
99 % 99 % 100 X 84 % 33 % 27 X 92 % 87 % 93 % 96 % 85 %

Takayama & Akita, 2006

Biorreator
Aerador agitador

Descrio
Agitao por hlices em eixo giratrio. Movimento leve e rotacional em dois eixos. Filtro conectado ao eixo central por membrana. Borbulhamento de ar no fundo do frasco. Borbulhamento de ar dentro de tubo vertical. Meio cultura pulverizado sobre o explante. Aerao via canalizao porosa em espiral. Aerao via ventilao forada sobre o meio.

Aplicao
Cultivo celular e embries somticos. Cultivo de embries e brotos. Cultivo de embries somticos. Multiplicao de gemas e alongamento brotos. Multiplicao de gemas e alongamento brotos. Cultivo de clulas, tecidos e rgos. Cultivo de tecidos e rgos. Cultivo de cculas e tecidos.

Tambor rotatrio
Filtro rotatrio

Borbulhamento
Levantamento ar Fase gasosa Aerao por membrana porosa Sobreaerao

Imerso temporria

Meio em contato rpido com explante.

Multiplicao de gemas e alongamento brotos.

Biorreator de Imerso Temporria

R I T A:
Imerso da parte area Cultivo heterotrfico Baixo risco contaminao Ideal para multiplicao Baixa hiperidricidade Alvard et al. 1993

T R I:
Imerso da parte radicial Cultivo autotrfico Ausncia contaminao Ideal para aclimatao Ausncia hiperdricidade Afreen et al. 2002

RITA Vs. TRI

Cultura Fotoautotrfica de Caf

Nguyen et al. 2001 Zobayed et al. 2000

Montagem do Biorreator Rita

Eucalipto em BIT

Fonte: SBW International

Eucalipto em BIT

Pesquisa em andamento em biorreatores comerciais 50 litros Liberao controlada de nutrientes e fitoreguladores no meio cultura Marcadores para alteraes fisiolgicas e morfo-anatmicas na cultura
Fonte: SBW International

Imerso Temporria

Produo de Mudas de Eucalipto

3R-System

Agroinvest, University Debrecen e Faculdade de Horticultura Zsent Istvn (Hungria). Concepo modular de biorreator que rene versatilidade e praticidade de operao.

3R-System

Permite o enriquecimento da atmosfera com CO2 O2 e H2O. Cilindros dos reatores podem ser construdos com capacidade de 0,5 a 15,0 litros. Novas verses otimizadas do biorreator j se encontram em fase de comercializao.

Biorreatores Comerciais

air lift bioreactor

Impactos de Biorreatores
Reduo Mo Obra Reduo nmero frascos Aumento volume frascos Reduo da frequencia de repicagens Menor tempo na troca de meio cultura Menor tempo etiquetagem
Maior segurana quanto pureza e limpeza

Reduo Energia Uso frascos descartveis estreis Dispensa esterilizao em autoclave Esterilizao do meio em filtros, UHT, qumica Menor demanda autoclave
Maior flexibilidade de produo

Menor custo de produo

Uso Potencial no Viveiro

Agilizar a produo de plntulas para reestabelecer matrizes rejuvenescidas ou revigoradas no jardim clonal. Multiplicao massiva de microestacas in vitro em biorreatores e subsequente estaqueamento, enraizamento ex vitro e produo de plntulas.
1 unidade Biorreator (50 litros) 50 unidades Biorreator (50 litros)

45 estacas / explante/ms

1 mil explantes/ biorreator

45 mil plntulas por ms

27 milhes plntulas por ano

540 milhes plntulas por ano

Aspecto das Plntulas in vitro

Pouco lignificadas Paredes pouco espessadas Abundncia de espaos intercelulares Sistema vascular pouco desenvolvido Baixa sustentao da plntula

POSSVEIS DESORDENS FISIOLGICAS

Sistema Fotoautotrfico
O conceito baseia na alta capacidade fotossinttica da cultura com consequncias positivas sobre o crescimento e percentual de sobrevivncia ex vitro, aumentada ainda mais com aumento das trocas gasosas nos recipientes de cultivo. (Kozai et al., 1999)

CO2

CO2

Estgio de Multiplicao
Condio fotomixotrfica

Alongamento/Enraizamento

Condio Fotoautotrfica
Sugar-free Alta [CO2] Alta DFF Florialite

Substrato Florialite

Cmara de crescimento Biotron (Nippon Medical & Chemical Instruments, Japo)

Crescimento Fotoautotrfico de Eucalipto

Crescimento Fotoautotrfico de Gmelina

Agradecimentos
Alexandre Missiaggia Andreia Henrique Clemencia Sndahl Conny de Wit Gabriel Dehon Joo Teixeira Jocemar Reis Justo Gonzlez Maro Sndahl Mikls Fri Reginaldo Mafia Toyoki Kozai Vincent Chen Aracruz Aracruz Bionova Sbw Aracruz Embrapa Aracruz Bioplantas Bionova Agroinvest Aracruz Chiba University Exon Brasil Brasil Brasil Holanda Brasil Brasil Brasil Cuba Brasil Hungria Brasil Japo Taiwan