TEMAS

PROPOSTAS
NMERO 1

DE
JULHO
DE

PARA DESENVOLVER EM SALA DE AULA

1995 EDITORA MODERNA

BIOLOGIA
o foi na In O primeiro glater ra caso de id ames de D entificao NA ocorre criminal at u em 1985 condado, ravs , na Inglat rodeado de erra. Em um de ex montanhas acesso, um pequeno e com um a mulher fo a nica es i estuprad trada de "L havia a e assass um genetic in ad a. ma encontra ista, Alec Jeffreys, qu do na vtim e colheu o a e fez o ex outro crim esperame de DN e similar. N A. Mais ta ovamente Je trado na v rde houve ffreys anal tima. Era do isou o sm mesmo ho crime", co en enconmem que nta Jos M cometera o aria Marle USP. primeiro t, professo r de medic ina legal da As autorida de s locais fo de sangue rjaram um cuja finalid a campanh ade era id habitantes a de doa entificar o fo ram doar o ag ressor. T sangue, m igual ao do odos os as nenhum estuprador deles poss . ua DNA "A polcia prosseguiu havia um vi com as inve ajante no co stigaes e ndado. Qua descobriu vidado a do ndo o suje que ar sangue. ito voltou, Feito o test Jeffreys co foi cone de DNA nc luiu que no sangue o cdigo ge mo do estu colhido, ntico do prador", co viajante er nta Marlet. a o mesFonte: Fo lha de So Paulo 28/0 5/95

IDENTIFICANDO PESSOAS PELO DNA: UMA SIMULAO

J. M. Amabis * e G. R. Martho

m maio de 1995, nos Estados Unidos, os promotores do julgamento de O. J. Simpson, ex-astro do futebol americano acusado de assassinar a esposa, pediram bioqumica Robin Cotton que desse aos jurados uma aula sobre DNA, o material hereditrio dos seres vivos. A anlise do sangue encontrado no local do crime havia revelado a presena de DNA supostamente pertencente a Simpson. O exemplo acima ilustra como conhecimentos antes restritos aos especialistas tornam-se hoje acessveis ao grande pblico. As pessoas querem saber o que DNA e por que ele comparvel a uma impresso digital que identifica seu portador. Desenvolver e aproveitar temas como esse pode tornar mais interessante e produtivo o trabalho do professor em sala de aula. Neste nmero apresentamos uma proposta de atividade cujo principal objetivo levar os estudantes a compreender a importncia prtica da Engenharia Gentica na identificao de pessoas.

1 a. identifi ca

As tcnicas da Engenharia Gentica permitem identificar pessoas pela anlise de suas molculas de DNA (cido desoxirribonuclico), a substncia que constitui os genes. Com exceo dos gmeos univitelinos, cada pessoa possui um conjunto de genes, e portanto de molculas de DNA, nico e particular. O processo mais simples para caracterizar um DNA consiste em cortar as molculas dessa substncia com o auxlio de "tesouras moleculares", as chamadas enzimas de restrio, analisando em seguida o tamanho dos fragmentos que se formaram. Uma enzima de restrio corta a molcula de DNA em pontos especficos, somente onde ocorre determinada seqncia de bases nitrogenadas. Como cada pessoa tem seqncias tpicas de bases nitrogenadas, o nmero e os tamanhos dos fragmentos obtidos pelo corte enzimtico acaba por caracterizar seu DNA. O tamanho dos "fragmentos de restrio", como so chamados os fragmentos obtidos aps o corte enzimtico, determinado atravs da tcnica de eletroforese. A mistura de fragmentos de DNA aplicada em uma camada de gelatina (gel) e submetida a um campo eltrico. Nessas condies, os fragmentos se movem a velocidades inversamente proporcionais ao seu tamanho, isto , os fragmentos menores deslocam-se mais rapidamente que os maiores. Quando o campo eltrico desligado, fragmentos de mesmo tamanho estacionam juntos em determinada posio do gel, formando uma faixa. O padro de faixas que surge caracterstico para cada pessoa, e corresponde sua "impresso digital" gentica.
*

Neste nmero sugerimos a simulao de experimentos nos quais amostras de DNA de diferentes pessoas so tratadas com uma enzima de restrio hipottica, que corta as molculas onde houver dois pares de bases C-G/C-G em seqncia. O preenchimento dos grficos, onde os fragmentos do DNA cortado so dispostos por ordem de tamanho, simula a separao eletrofortica. Apresentamos, ainda, um processo simples e prtico para extrair DNA de uma amostra, no caso, de clulas de cebola.

Foto de um gel de eletroforese iluminado com luz ultravioleta. Sob essa luz, o DNA previamente tratado fluoresce, revelando um padro de faixas tpico do DNA analisado.

Professor do Departamento de Biologia do Instituto de Biocincias da Universidade de SoPROPOSTAS Paulo

PARA DESENVOLVER EM SALA DE AULA

SUGESTES E PR-REQUISITOS
Na pgina direita apresentamos um modelo para a folha de atividades dirigida ao estudante. Nela se encontram todas as informaes objetivas para resolver s duas questes formuladas: "Quem o criminoso? Quem o pai da criana?". As respostas a essas questes encontram-se no verso da folha de atividades. Sugerimos que o professor oriente verbalmente o estudante sobre a diferena de procedimentos entre a deteco do criminoso e a do pai da criana. No primeiro caso basta encontrar, entre os suspeitos, um padro eletrofortico idntico ao da amostra de pele sob as unhas da vtima. J no segundo caso preciso, inicialmente, identificar na criana as faixas eletroforticas correspondentes me, para em seguida procurar, nos pretendentes a pai, aquele que possui as faixas que faltam. Essas faixas devem estar necessariamente presentes no pai, uma vez que a criana recebe um cromossomo materno e um homlogo paterno. No quadro abaixo fornecemos informaes prticas para executar, na prpria sala de aula, um experimento simples de extrao de DNA. Apesar de simplificados, os procedimentos so muito parecidos aos utilizados nos laboratrios bioqumicos, e permitem ao estudante visualizar, ainda que macroscopicamente, o aspecto do material hereditrio. O tema ser mais bem aproveitado se o estudante j dominar os conceitos bsicos relativos s estruturas do DNA e dos cromossomos. Em nossas obras de Biologia esses assuntos podem ser encontrados nos seguintes volumes:
AMABIS, J. M. & MARTHO, G. R. Fundamentos da Biologia moderna, So Paulo, Ed. Moderna, 1997: Estrutura dos cidos nuclicos (pgs. 102-103); Genes: estrutura qumica e duplicao (pgs. 152-153); Engenharia gentica (pgs. 540-545).

Biologia das clulas (vol. 1), So Paulo, Ed. Moderna, 1994: A estrutura dos cromossomos (pgs. 178-180); Cromossomos e genes (pgs. 182-185); A estrutura do gene (pgs. 311-313).

Biologia das populaes (vol. 3), So Paulo, Ed. Moderna, 1995: A base celular da hereditariedade (pgs. 7-9).

EXTRAINDO
MATERIAL  uma cebola gr a  faca de cozinh americano o tip s  dois copo 60C)  banho-mar ia ( da tra  gua fil  sal de cozinha uas lo  detergente para gelado (a cerca % 95 co li et  lcool
de 10C) eira vidro ou mad  basto fino de l f, de pape coador de ca g) ande ( 200

DE A DNA EM SALA

ULA
CNICAS

  gelo modo

: te de trs etapas ndamentalmen fu ta ns co es nt cario omossomos NA de clulas eu bramento dos cr A extrao de D cleos; b) desmem n s do s demais o a er o do DNA do lulas para lib enas; c) separa a) ruptura das c ot pr e NA D , nentes bsicos em seus compo mpem des, que se ro lulares. ar clulas gran componentes ce nt se re ap r po bola foi usado O bulbo de ce cada. cebola, liberando do a cebola pi os das clulas da m so os facilmente quan om cr ra os os e de sdio, desnatu sintegra os ncle u lauril) sulfato (o cil O detergente de de do o e, detergent componentes do o DNA. Um dos cromossmico. NA D de DNA se parando-as do e as molculas as protenas, se o, faz com qu lin sa te en bi do, em am ada. O lcool gela sa e esbranqui assa filamento m a um do an aglutinem, form

INFORMAES T

PROCEDIMENTO

s de 0,5 cm. er das bola em pedao ente e uma colh 1. Pique a ce minutos. sopa de deterg de es er lh co ro por cerca de 15 at qu ao banho-maria 2. Coloque ve le utos. e in l, m sa 5 e de te a . o de detergen lo durante cerc lu ge so completamente a no m po co co o po co , colocando cebola picada no as fases, a -a rapidamente . 3. Coloque a a. Formam-se du maria e resfrie onh um copo limpo ba em do a do ur tra mente pela bord ist fil sa m o a ro e ga do tir va en r Re lh rre co 4. de caf, re ando-o esco ura no coador ol gelado, deix erados 5. Coe a mist o copo de lco que so aglom ei m de a rc ce branquiados, do es tra s fil fio e ao -s e on am ci 6. Adi r, aquosa. as fases. Form ica, e a inferio ulares, mistur e superior, alcol ovimentos circ m m co e, po o basto no co 7. Mergulhe as de DNA. ul c de mol
Tcnica modificada de J. Schollar e D. Madden Centro de Educao Biotecnolgica da Universidade de Reading Inglaterra

meio copo de ch de sal em

d'gua, mexendo

bem at dissol

ver

2 PROPOSTAS PARA DESENVOLVER EM SALA DE AULA

ATIVIDADE:
Nome:

I DENTIFICANDO PESSOAS PELO DNA

Srie:

P-1
CA
C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C C-G C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T G-C T-A A-T A-T G-C C-G C-G T-A A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T C-G C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T C-G T-A A-T C-G A-T T-A G-C G-C

P-2
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P-3
CA
C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C T-A C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T A-T T-A A-T G-C G-C T-A C-G T-A A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T T-A C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T C-G T-A G-C C-G A-T T-A G-C G-C

P-4
CA
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P-5

CB
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19

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P-1
  ' & % $ # " !    ' & % $ # " ! 

P-2

P-3

P-4

P-5

Quem o criminoso?
Restos de pele encontrados sob as unhas de uma pessoa assassinada foram submetidos ao teste de DNA, revelando o padro eletrofortico P-5. Trs pessoas, P-1, P-2 e P-3, suspeitas do crime, tambm foram submetidas ao teste de DNA. Qual delas a provvel culpada?

Nmero de pares de bases por fragmento

Quem o pai da criana?

Dois homens, P-1 e P-2, disputam a paternidade de uma criana, P-4, filha da mulher P-3. Com base no teste de DNA dos quatro implicados, quem o provvel pai da criana?
PROPOSTAS PARA DESENVOLVER EM SALA DE AULA

18

12

15 4 12 4 21

CA
C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C T-A C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T A-T T-A A-T A-T G-C T-A C-G C-G A-T T-A G-C A-T A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T C-G C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G T-A T-A A-T C-G T-A G-C C-G A-T T-A G-C G-C

CB
C-G C-G A-T T-A T-A A-T A-T A-T T-A C-G G-C C-G T-A A-T G-C C-G C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T G-C A-T A-T T-A A-T A-T G-C T-A C-G C-G A-T T-A G-C G-C A-T G-C A-T T-A C-G G-C A-T A-T T-A G-C A-T T-A C-G A-T T-A G-C C-G A-T T-A C-G C-G T-A A-T C-G T-A G-C C-G A-T T-A G-C G-C

10 1

Nesta atividade voc aplicar os princpios da identificao de pessoas pelo DNA na soluo de duas questes judiciais. Em uma delas identificar um criminoso entre trs suspeitos, e em outra descobrir quem o pai de uma criana. Ao lado esto representados segmentos de DNA de cinco pessoas (P-1 a P-5). Cada uma tem dois segmentos, correspondentes a um par de cromossomos homlogos (CA e CB). As seqncias de bases dos homlogos podem ser ligeiramente diferentes em funo da diferena entre os genes alelos. O primeiro passo para a anlise do DNA cort-lo com uma enzima de restrio hipottica que, neste exemplo, reconhece a seqncia de dois pares de bases C-G adjacentes (dois C em uma cadeia e dois G na outra). Para facilitar, essas "seqncias de corte" esto destacadas no DNA. Localize, nos dois segmentos de DNA de cada pessoa, todas as seqncias de corte. Marque-as lpis com um trao horizontal, de modo a separar um par C-G do par C-G adjacente. O passo seguinte organizar os fragmentos obtidos por ordem de tamanho. Para isso, conte o nmero de pares de bases de cada fragmento e complete o preenchimento do grfico localizado na parte inferior esquerda da figura. Cada coluna do grfico simula o padro eletrofortico de uma pessoa, onde os fragmentos de DNA se distribuem em faixas por ordem de tamanho. A ttulo de exemplo, a coluna correspondente ao padro da pessoa P-5 j est preenchida. A seguir, responda s questes abaixo.

P-1
Nmero de pares de bases por fragmento
  ' & % $ # " !    ' & % $ # " ! 

P-2

P-3

P-4

P-5

RESPOSTAS
Quem o criminoso?
P-2. O padro eletrofortico do DNA deste suspeito idntico ao da amostra de pele encontrada sob as unhas da vtima (P-5).

Quem o pai da criana?

P-1. A criana P-4 pode ter recebido da me (P-3) DNA relativo s faixas de nmeros 1, 4, 10, 12, 13, 18 e 19. As faixas 5, 8, 11 e 15 de P4 provm necessariamente do pai. P-2, o outro postulante, no apresenta as faixas 5, 8 e 11.
A identificao positiva do DNA de um suspeito pela tcnica mostrada na atividade, particularmente se forem utilizados diferentes tipos de enzimas de restrio, atinge a mais de 99% de acerto. H uma probabilidade nfima de duas pessoas no-gmeas idnticas apresentarem o mesmo padro eletrofortico do DNA.

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