INSTRUES DE USO

COLESTEROL HDL
Mtodo com precipitao para a determinao enzimtica do Colesterol HDL.

FINALIDADE O conjunto Colesterol HDL um sistema que se destina separao do colesterol ligado frao HDL no soro sangneo. PRINCPIO DE AO A mistura cido fosfotngstico/cloreto de magnsio precipita os quilomicra , as lipoprotenas de baixa densidade (LDL) e muito baixa densidade (VLDL) sem alterar a solubilidade das lipoprotenas de alta densidade (HDL). Aps centrifugao, recolhe-se o lquido sobrenadante que contm a frao HDL cujo contedo em colesterol (Colesterol HDL) determinado enzimaticamente. REAGENTES Conjunto para 200 determinaes de colesterol HDL, contendo: 1. Precipitante: 01 frasco com 50 mL de soluo aquosa contendo cido fosfotngstico 1,50 mmol/L e cloreto de magnsio 54 mmol/L. Conservar entre 2 e 8C. 2. Padro: 01 frasco com 5,0 mL de padro contendo colesterol 20 mg/dl ( 0,52 mmol/L) em soluo aquosa e azida sdica 0,1 g/dL. Conservar entre 2 e 8C. MATERIAIS NECESSRIOS NO FORNECIDOS Espectrofotmetro Centrfuga Banho-maria Cronmetro Vidraria Pipetas manuais ou automticas gua destilada ou deionizada CUIDADOS NO ARMAZENAMENTO E TRANSPORTE DOS REAGENTES As datas de fabricao e validade aparecem no rtulo da embalagem. No usar reagentes cuja data de validade tenha expirado. Todos os reagentes devem ser mantidos sob refrigerao, na faixa de 2 a 8C. No congelar. Os reagentes devem permanecer fora do refrigerador apenas o tempo necessrio para as dosagens. Antes de serem abertos, os reagentes podem ser transportados na faixa de temperatura entre 15 a 25C, at um limite de 48 horas. PRECAUES E CUIDADOS ESPECIAIS Somente para uso diagnstico in vitro. Usar pipetas de vidro e ponteiras descartveis separadas para cada amostra, controle ou reagente a fim de evitar contaminao cruzada.O reagente 2 contm azida sdica, irritante para pele e mucosas. Caso haja contato com esses reagentes, lavar imediatamente a rea afetada com gua em profuso. Em caso de ingesto acidental, procurar auxlio mdico imediato. O espectrofotmetro ou mesmo equipamentos automatizados devem ficar livres de contaminao microbiana, serem

calibrados corretamente e receberem manuteno de acordo com as instrues do fabricante. No misturar ou trocar diferentes lotes de reagentes. Evitar contaminao microbiana dos reagentes e no utilize reagentes que tenham sinais de contaminao ou precipitao. O reagente n 2 (Padro) fornecido em concentrao usual fixa. O desempenho do ensaio pode ser afetado se este reagente for modificado ou no for armazenado nas condies recomendadas. Ver cuidados no armazenamento e transporte dos reagentes. No comer, beber, fumar, armazenar ou preparar alimentos, ou aplicar cosmticos dentro da rea de trabalho onde reagentes e amostras estiverem sendo manuseados. Usar luvas descartveis quando manusear amostras clnicas ou reagentes. Lavar sempre as mos aps trabalhar com material potencialmente infeccioso. AMOSTRA Soro. A amostra sangnea deve ser obtida com o paciente em jejum de 12 horas. Sob refrigerao, o colesterol HDL no soro estvel por trs dias. Todo o material biolgico deve ser processado como sendo potencialmente contaminante. Usar luvas descartveis durante a manipulao. As amostras devem ser descartadas, aps o uso, em recipientes especficos. No dispensar em coletores de lixo comuns ou nas redes de gua e esgotos. PROCEDIMENTO Ler cuidadosamente as instrues. Os reagentes esto prontos para uso. A. Precipitao: Pipetar em tubo de ensaio 0,25 mL de soro e adicionar 0,25 mL de Precipitante. Agitar vigorosamente durante 30 segundos e deixar em repouso por 10 minutos na temperatura ambiente. Centrifugar durante 15 minutos a 3000 rpm. Pipetar o sobrenadante lmpido imediatamente aps a centrifugao. Proceder determinao do colesterol HDL utilizando o mtodo enzimtico para determinao do colesterol total, como descrito abaixo. Usar o kit Colesterol Total KATAL para a etapa de colorimetria. B. Colorimetria: Separar 3 tubos de ensaio e proceder como a seguir: BRANCO SOBRENADANTE PADRO REAGENTE DE COR 1,0 mL TESTE 0,1 mL 1,0 mL PADRO 0,1 mL 1,0 mL

Homogeneizar bem e colocar em banho-maria a 37C durante 10 minutos. Determinar as absorbncias do teste e do padro em 500 nm acertando o zero com o branco. A cor formada estvel 60 minutos.
Para espectrofotmetros que requeiram volumes de leitura superiores aos indicados, usar 0,20 mL de Amostra ou Padro e 2,0 mL de Reagente Enzimtico.

Especificidade analtica: A comparao com mtodo similar, que tambm utiliza a metodologia do cido fosfotngstico/cloreto de magnsio, j validado, mostrou um coeficiente de correlao, r, igual a 0,996 a partir de amostras aleatrias oriundas de pacientes de ambulatrio. A equao de regresso obtida foi : Y = 0,99X 0,95 Sensibilidade analtica: O mtodo apresenta uma variao de absorbncia em 500 nm igual a 0,007 em cada acrscimo de 1 mg/dL na concentrao de colesterol HDL. O limite de deteco do mtodo igual a 4,5 mg/dL INTERFERENTES Amostras lipmicas podem apresentar sobrenadante turvo. Neste caso, diluir o soro 1:2 com NaCl 0,85% e repetir a determinao. Multiplicar o resultado final por 2. Hemlise acentuada e bilirrubina acima de 10 mg/dl interferem com o teste. REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. 2. 3. 4. 5. 6. Friedewald,W.T. et al : Clin. Chem. 18:707,1977 Warnick,R.G. et al : Clin. Chem. 2:217,1985 Bergmeyer, H.U. (Ed.) Methods of Enzymatic Analysis, Academic Press 2nd. ed., p 148,1985 Virella, M.F.L. et al : Clin. Chem.23:882,1977 Kostner,G.M., et al : Clin.Chem. 25(6):939,1979 Katal : Dados de arquivo.

CLCULOS - Colesterol HDL (mg/dL) = (Absorbncia do TesteAbsorbncia do Padro) x 40* *OBS: O valor 40 leva em conta a diluio do soro na etapa de precipitao. - Fator de calibrao = 40 Absorbncia do Padro - Colesterol HDL (mg/dL) = Absorbncia do Teste x Fator Exemplo: - Absorbncia do teste = 0,365 - Absorbncia do padro = 0,285 - Colesterol HDL (mg/dL) = (0,365 0,285) x 40 = 51 mg/dL - Fator de calibrao = 40 0,285 = 140 - Colesterol HDL (mg/dL) = 140 x 0,365 = 51 mg/dL Clculo das fraes LDL e VLDL atravs da equao de Friedewald (vlida apenas para valores de Triglicrides abaixo de 400 mg/dL): - Colesterol VLDL = [Triglicrides] 5 - Colesterol LDL = Colesterol total - (Colesterol HDL + Colesterol VLDL) CONTROLE DA QUALIDADE O laboratrio deve ter como prtica de rotina o uso de soros controle comerciais. Preferivelmente deve participar de programas de controle externo de qualidade, a exemplo daqueles oferecidos pela SBAC e SBPC. VALORES DE REFERNCIA (mg/dL) Desejvel Colesterol LDL De 2 a 19 anos > 19 anos Colesterol Total Colesterol HDL De 2 a 9 anos De 10 a 19 anos > 20 anos < 110 < 100 < 200 40 35 40 Limtrofe 110-129 100-159 200-239 Elevado 130 160 240

APRESENTAO N de testes 200 Volume / teste 0,25 mL

CONDIES DE GARANTIA DA QUALIDADE DO PRODUTO O desempenho deste sistema diagnstico, medido pelas propriedades descritas nesta Instruo de Uso, est garantido at a sua data de vencimento, desde que obedecidas as seguintes condies: 1. 2. 3. A adeso estrita, pelo usurio, ao quadro de procedimento tcnico. As condies de armazenamento estarem de acordo com o recomendado nesta Instruo de Uso. Os materiais necessrios e no fornecidos com o produto, estarem em boas condies de uso.

ASSESSORIA TCNICA Para esclarecimentos de dvidas e Assessoria Tcnica ligue: (0xx11) 3429-2555 - e-mail: assessoria@interteck.com.br Produo: Katal Biotecnolgica Ind. Com. Ltda. Rua: Leiria, 1.160 - CEP 31255-100 Belo Horizonte - MG Brasil CNPJ: 71.437.917/0001-04 Responsvel Tcnico: Dr. Mrcio Henrique Lacerda Arndt CRBio 37928/04-D Distribuio: Interteck Internacional Imp. Exp. Ltda. R. Sabarabuu, 149 CEP: 04755-080 So Paulo SP CNPJ: 02.668.836/0001-94 Registro ANVISA: 10377390081 Edio desta Instruo de Uso: 06Jun/11

DADOS ESTATSTICOS DE DESEMPENHO DO TESTE Recuperao: 98,7%. Coeficiente de variao intra-ensaio (repetitividade): A realizao de 20 determinaes de uma mesma amostra com valor dentro da faixa de referncia, mostrou um coeficiente de variao igual a 2,00%. Coeficiente de variao inter-ensaio (reprodutibilidade): A realizao de 20 determinaes de uma mesma amostra dentro da faixa de referncia, analisada em dias diferentes, mostrou um coeficiente de variao igual a 3,2%.

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