APOSTILA - An-Lise Org-Nica Cl-Ssica II

Textos curriculares de Anlise Orgnica QMC 5215 e QMC 5226 Prof.
Moacir Geraldo Pizzolatti Departamento de Qumica -UFSC
CAPTULO - I INTRODUO
A Anlise Orgnica trata dos mtodos de separao, purificao e identificao dos compostos de carbono obtidos de organismos vivos (metablitos primrios e secundrios de plantas e animais), de fsseis (carvo, petrleo, gs, sedimentos orgnicos) e de snteses de laboratrio (instituies de ensino e pesquisa, indstrias qumicas, petroqumica, farmacutica, alimentos). A metodologia utilizada na anlise orgnica tem ampla aplicao em
determinaes laboratoriais diversas envolvendo a identificao e quantificao de espcies qumicas das mais variadas procedncias, bem como na pesquisa e desenvolvimento tecnolgico. Assim, os princpios bsicos da Anlise Orgnica se faz presente em laboratrios de anlises clnicas, indstria farmacutica, tecnologia de alimentos, indstria qumica, engenharia qumica, engenharia sanitria, bioqumica, biologia, meio ambiente, toxicologia, medicina forense, materiais, controle de qualidade, etc. A Sistemtica de Anlise Orgnica evoluiu ao longo dos tempos e acompanhou o desenvolvimento dos conceitos fundamentais da qumica orgnica e o conhecimento das
reaes qumicas. Desde os tempos mais remotos da Qumica Orgnica, os compostos orgnicos eram identificadas atravs do estudo de suas propriedades fsicas e qumicas. O estudo destas propriedades e de como determin-las levou a construo de equipamentos de anlise os quais se tornaram cada vez mais sofisticados com o desenvolvimento tecnolgico da cincia. Com a descoberta das propriedades espectroscpicas das molculas e a construo e desenvolvimento de equipamentos espectromtricos, uma nova gerao de metodologias passam a dominar, a espectroscopia aplicada a Anlise Orgnica. Os arranjos estruturais dos compostos orgnicos so virtualmente infinitos. At meados de 1970, estimava-se que mais de cinco milhes de compostos orgnicos j haviam sido caracterizados. Sabemos que a cada ano milhares de novos compostos orgnicos so identificados, assim, a anlise sistemtica essencial pois atravs das propriedades de um composto desconhecido pode-se rapidamente excluir milhares de possibilidades estruturais, ficando algumas poucas para estudos mais avanados. importante destacar para o aluno, que o estudo da Anlise Orgnica requer a
organizao dos conhecimentos acumulados com respeito as propriedades fsico-qumicas, estruturais e reaes estudadas na Qumica Orgnica. Os conhecimentos bsicos a serem adquiridos em Anlise Orgnica tais como: a)
identificao dos compostos orgnicos atravs de suas propriedades fsico-qumicas e espectroscopicas; b) mtodos de separao e purificao e anlises cromatogrficas; c) aplicao de mtodos espectroscpicos e cromatogrficos em anlises qumico-farmacutica, bioqumica, clnica mdica, alimentos, indstria, sade pblica, meio ambiente, controle de qualidade (fitoterpicos, matria prima, produo de medicamentos, etc.) e muitas outras reas
Textos curriculares de Anlise Orgnica QMC 5215 e QMC 5226 Prof. Moacir Geraldo Pizzolatti Departamento de Qumica -UFSC
de atuao do qumico e farmacutico-bioqumico, daro o suporte necessrio para uma boa formao profissional seja qual for a escolha de sua rea de atuao futura. De uma forma descritiva, podemos abordar o estudo da Anlise Orgnica do ponto de vista da evoluo dos conhecimentos das propriedades da matria e o desenvolvimento cientfico e tecnolgico. O estudo da Anlise Orgnica, cronologicamente, permite a distino de dois importantes perodos: a) PERODO CLASSICO - As substncias orgnicas eram separadas e identificadas atravs de suas propriedades fsicas e propriedades qumicas. b) PERODO MODERNO - A identificao e determinao estrutural das substncias orgnicas resulta principalmente da anlise de suas propriedades espectroscopicas e a separao de misturas e o isolamento de substncias puras atravs de mtodos instrumentais. Com o advento das tcnicas hifenadas, constituintes de mixturas complexas j podem ser identificados com alto grau de segurana. A Identificao Sistemtica dos Compostos Orgnicos envolve trs aspectos importantes a serem pr considerados: I) Separao de misturas e isolamento do composto puro, II) anlise qualitativa e III) Anlise quantitativa.
I - SEPARAO DE MISTURAS E ISOLAMENTO DO COMPOSTO PURO:
A investigao estrutural de compostos orgnicos muito mais difcil e trabalhosa que a dos compostos inorgnicos, pelo fato de serem substncias muito mais complexas em estrutura, ter uma infinidade de possibilidades estruturais e geralmente so encontrados em misturas complexas de difcil separao, como no caso de produtos naturais. Tambm por apresentarem uma reatividade extremamente diversificada e com reaes muitas vezes de maior dificuldade de compreenso. Para que um composto orgnico seja efetivamente identificado necessrio separ-lo da mistura. A separao de cada componente de uma mistura realizada com base nas diferenas de suas propriedades fsicas e qumicas, como por exemplo, valendo-se da Mudana de Estado Fsico da Matria podemos obter a separao e purificao de determinados Compostos Orgnicos por destilao e/ou sublimao. Outras propriedades como as diferenas de Solubilidade permite a separao utilizando tcnicas de precipitao e cristalizao. Um dos mtodos de maior eficincia na separao de misturas e por isso mesmo de longe o mais utilizado em problemas de separao e purificao de compostos orgnicos a Cromatografia. A cromatografia um termo geral que descreve inmeras tcnicas de
separao utilizando as diferenas nas propriedades da matria. Assim podemos estudar os mtodos cromatogrficos classificando-os em: Mtodos tradicionais - Cromatografia em camada fina (CCF ), Cromatografia em papel, Cromatrografia em coluna (CC); Mtodos
instrumentais - Cromatografia gasosa (CG), Cromatografia Gasosa de Alta Resoluo (CGAR), Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE), Eletroforese
II - ANLISE QUALITATIVA
A anlise qualitativa tem por objetivo a identificao de cada componente da amostra problema, seja a anlise elementar de uma molcula ou a identificao das substncias qumicas presentes numa mistura. Na anlise qualitativa de uma determinada substncia orgnica pode ser aplicado os mtodos clssicos de anlise orgnica sistemtica ou a anlise instrumental e mtodos hifenados. Mtodos Clssicos de Anlise Orgnica: Os mtodos clssicos de anlise orgnica compreende a anlise elementar, a
determinao das propriedades fsicas e a identificao sistemtica dos grupos funcionais atravs de suas reatividades especficas. Mtodos Instrumentais: Os mtodos instrumentais de identificao esto fundamentados nas propriedades moleculares tais como densidade atmica na cristalografia por Raio-X, fora das ligaes na Espectrometria de Massas (EM) e nas propriedades espectroscopicas das molculas orgnicas como na Espectroscopia na Regio do Ultravioleta e Visvel (UV-VIS), Espectroscopia na Regio do Infravermelho (IV), Espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear (RMN). Os mtodos cromatogrficos tais como a cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR), a cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) e a eletroforese so alternativas na identificao atravs dos parmetros de reteno cromatogrfica. Estes mtodos cromatogrficos quando acoplados a espectroscopia molecular ou espectrometria de massas so excelentes ferramentas nas identificao dos compostos orgnicos, constituin do os mtodos hifenados de anlise. Assim temos a Cromatografia Gasosa de Alta Resoluo acoplada a Espectrometria de Massas (CGAR-EM) ou Espectroscopia no Infravermelho (CGAR-IV) e a Cromatografia Lquida de Alta Eficincia acoplada a Espectrometria de Massas (CLAE-EM).
III- ANLISE QUANTITATIVA
A anlise quantitativa tem por objetivo determinar a quantidade de cada componente na amostra problema. Do ponto de vista da anlise elementar, a composio centesimal dos elementos qumicos de uma molcula pode ser obtida, e juntamente com a determinao da massa molecular a frmula molecular fica estabelecida. A anlise quantitativa tambm se ocupada da quantificao de cada composto qumico presente em uma mistura, bem como a determinao do grau de pureza de uma substncia. De modo geral a metodologia de anlise quantitativa est fundamentada na correlao linear existente entre a quantidade de uma substncia e uma determinada propriedade fsica, qumica ou espectroscpica, conforme apresentado no esquema da figura 1.1.
Figura 1.1- Esquema ilustrativo de uma anlise quantitativa.
Diversas mtodos instrumentais foram desenvolvidos para medir as propriedades de uma molcula e assim determinar sua quantidade. O quadro abaixo mostra algumas
propriedades e a instrumentao para medi-las:
Propriedade Medida Absoro de Radiao Eletromagntica
Emisso de Radiao Eletromagntica
Espalhamento da Radiao Eletromagntica
Refrao da Radiao Eletromagntica Rotao da Luz Polarizada Absoro Atmica Emisso Atmica Potencial Eltrico Carga Eltria Corrente Eltrica Resistncia Eltria Razo Massa/Carga
Mtodo Instrumental Espectroscopia UV-VIS Espectroscopia de Infra-Vermelho Espectroscopia de R. M. N. Fluorimetria Fosforimetria Lumnescncia Turbidimetria Nefalometria Espectroscopia Raman Refratometria Interfcerometria Polarimetria Espectrometria de Abbsoro Atmica Espectrometria de Emisso de Chama Potenciometria Coulometria Voltametria Condutimetria Espectrometria de Massas
O calculo da quantidade ou concentrao de uma substncia feito com auxlio de uma curva de calibrao (figura 2.2) que correlaciona linearmente a intensidade da propriedade medida dessa substncia com sua massa. Esta curva de calibrao pode ser construda preparando-se uma srie de solues padro de concentrao (massa) conhecida cuja propriedade selecionada medida. Um grfico ento construdo plotando-se a massa do padro no eixo x e a correspondente intensidade da propriedade medida no eixo y, obtendo-se a melhor reta pelo mtodo da regresso linear. Importante determinar a faixa linear dinmica apropriada para cada tipo de trabalho e de acordo com a sensibilidade do mtodo. Para que se possa aplicar os parmetros estatsticos de confiabilidade, deve-se fazer no mnimo trs replicatas para cada medida. tambm recomendvel obter cinco pontos para a construo da reta, ou seja da curva de calibrao.
Na aplicao do mtodo da regresso linear simples para a construo da curva de calibrao, trabalha-se com duas variveis: uma varivel independente (eixo x) que representa a massa da substncia, e uma varivel dependente (eixo y) que representa a intensidade da propriedade medida. Supondo-se que a varivel independente x se conhea sem erro, todo o erro estar associado a medida da varivel dependente y que calculada atravs da equao da reta: y = a + bx
Para cada valor de x, calcula-se o valor de y correspondente. no valor de y calculado que esto expressos os erros. Os valores dos coeficientes angular a, que a inclinao da reta, e linear b, que a interseo da reta com o eixo y, so calculados aplicando as equaes:
1,2
Propriedade Medida
1,0
0,8
0,6
0,4
0,2 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0
Concentrao
Figura 2.2 Ilustrao de uma curva de calibrao
a=
( y x ) ( y yx ) n y ( y )
2 2 2
b=
n xy x y n y 2
( y )
2
onde n o nmero de pontos da reta.
O valor numrico de y nestas equaes a mdia aritmtica da propriedade medida a cada concentrao de padro. Para cada ponto (cada concentrao de padro), devero ser realizadas m medidas ( no mnimo trs) repetindo a cada medida todo o desenvolvimento da metodologia desde o princpio, para que se possa fazer a anlise estatstica e definir o desvio padro. Os valores de y assim calculados, devem representar os erros e os desvios do mtodo analtico os quais devero ser tratados por mtodos estatsticos com parmetros prestabelecidos, o que fundamental para a optimizao do mtodo. Trs parmetros fundamentais que devem ser descritos so o desvio padro , o coeficiente de correlao linear r e o ndice de confidncia, cujos valores devero serem bem estabelecidos:
(x y )
n 1
( xi )2 2 b xi n r= ( yi )2 2 yi n
2
O coeficiente de correlao linear r diz o quanto uma reta linear. Uma reta perfeita, onde todos os pontos calculados ficariam exatamente encima da reta, apresentaria um coeficiente de correlao linear r=1, ou seja, 100% reta. Dependendo da preciso do mtodo e da faixa linear dinmica, pode-se trabalhar com coeficientes de correlao inferior a um, at 0,95 ( 95%)
CAPTULO - II
MTODOS CLSSICOS DE ANLISE ORGNICA IDENTIFICAO SISTEMTICA DE COMPOSTOS ORGNICOS

1- EXAME PRELIMINAR
Com uma simples inspeo visual cuidadosa e com consumo mnimo de material e tempo podemos obter informaes valiosas sobre a composio da amostra em anlise.
1.1- Estado fsico:
A verificao do estado fsico da amostra a ser analisada, a
temperatura ambiente, a primeira observao a ser anotada. Orienta na determinao das constantes fsicas, nos processos de separao e purificao a serem utilizados e os valores dos pontos de ebulio ou fuso podem dar uma indicao do tamanho da cadeia carbnica. Assim, por exemplo uma amostra no estado slido pode ser purificada utilizando tcnicas de recristalizao ou sublimao. Por outro lado, uma amostra lquida os procedimentos de purificao podero serem direcionados s tcnicas de destilao .
1.2 Homogeneidade: uma importante observao que pode dar informao quanto a pureza da amostra. Por ex. a observao de duas fases para lquidos imissveis, solues coloidais, supenso e a observao das diferentes formas cristalinas nos slidos.
1.3- Cor: Uma parcela significativa dos compostos orgnicos incolor frente a luz natural. A observao da cor fornece informaes importantes tais como a presena de grupos cromforos que podem conferir coloraes caractersticas substncia, presena de determinados metais, oxidao, impurezas etc. A observao de mudanas na colorao da amostra, se expontnea podem indicar degradao da substncia mas quando induzidas por reativos pode fornecer informaes estruturais.
1.3- Odor: A verificao das propriedades organolpticas pode dar pistas a respeito da composio da amostra atravs de Odores e Sabores caractersticos e familiares. Desde que muitos compostos orgnicos no apresentam cheiro, esta informao poder ser de grande valia na identificao da presena de certos compostos conhecidos pelos seus odores caractersticos, sobretudo aqueles componentes de leos essencias tais como eugenol (cravo), limoneno (limo e laranja), mentol (hiortel), eucalipetol (eucalipto), pineno (pinho), cinamaldedo (canela) entre outros. Devido a grande sensibilidade do olfato, estes compostos podem ser identificados mesmo quando presentes em baixssimas concentraes. A presena de odor tambm um indicativo da presena de estruturas volteis e de baixo PM.
1.4- Teste de Ignio: Este um dos mais rudimentares experimentos utilizados na identificao de espcies qumicas. O teste de ignio uma ferramenta muito til que permite uma rpida e econmica anlise preliminar. Quando um material desconhecido for colocado na chama de um bico de Bunsen, pode-se fazer as seguintes observaes: No Queima, significa que o material inorgnico Queima, significa que o material orgnico Se o resultado da queima fornecer uma chama fuliginosa, significa que a combusto incompleta, caracterstica de compostos orgnicos insaturados. Se aps a combusto permanecer algum resduo, um indicativo da presena de metais. Neste caso pode-se fazer o teste da chama com o resduo, como na anlise de compostos inorgnicos. Alguns metais quando submetidos a uma chama redutora emitem radiao na regio do visvel com comprimentos de onda caractersticos. Assim pode-se identificar certos metais como o chumbo (chama azul), cobre (chama verde), ltio (chama carmim), clcio (chama vermelho-amarelo), potssio (chama violeta) e sdio (chama amarela).
2 - DETERMINACO DA PUREZA
A determinao da pureza de uma determinada espcie qumica deve obedecer alguns critrios a saber: Uma nica mancha, quando analisado por cromatografia em camada fina (CCF) e eluda com dois ou mais sistemas de solventes diferentes ou quando a mesma for desenvolvida no modo bidimensional (Fig. 2.1- a, b). Um nico sinal, como resultado da anlise por cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) ou cromatografia gasosa de alta resoluo (CGAR) usando duas ou mais colunas de polaridades diferentes (Fig. 2.1- c, d).
Figura 2.1 - a) composto puro por CCF, b) amostra impura, c) composto puro por CGAR ou CLAE e d) amostra impura.
Apresentar ponto de fuso (PF) e ou ponto de ebulio (PE) constantes (Figura 2.2). Neste caso um bom critrio de pureza aceita uma variao de 0,50C
3 - PROPRIEDADES FSICAS
Toda substncia aps sua purificao dever ter suas constantes fsicas determinadas e comparadas com os dados da literatura, em alguns casos estes parmetros por si s podem permitir a identificao de substncias bem conhecidas.
3.1 - Ponto de Fuso:
O ponto de fuso pode ser definido como sendo a temperatura na qual a fase slida e a fase lquida de uma substncia esto em equilbrio. A maioria dos compostos orgnicos fundem abaixo de 300 0C. Substncias como acares e proteinas so degradadas a temperaturas elevadas antes mesmo de atingir seu ponto de fuso. O ponto de fuso de uma espcie qumica depende da energia da rede cristalina a qual est diretamente relacionada a estrutura molecular. Assim, o valor do ponto de fuso permite de certo modo uma avaliao das foras de interao intermoleculares e intramoleculares , destacando as pontes de hidrognio, interaes dipolo-dipolo e o tamanho da cadeia carbnica. No processo de fuso, as molculas ordenadamente agrupadas na rede cristalina, passam a se movimentar livremente deslizando umas sobre as outras. A temperatura em que isto ocorre depende da intensidade das foras de atrao na rede cristalina o que permite inferir dados com respeito ao tamanho e arranjo estrutural das molculas.
TEMPERATURA
250
200
150
FUSO
100
50
15
20
25
30
TEMPO
Figura 2.2 - Comportamento da fuso de uma substncia pura e de uma substncia impura.
3.2 - Ponto de Ebulio: (correlao com estrutura)
O ponto de ebulio pode ser definido como sendo a temperatura na qual as fases lquida e de vapor de uma substncia se encontram em equilbrio a uma determinada presso. Tambm podemos definir como a temperatura na qual a presso de vapor de um lquido igual a presso que est sendo exercida na sua superfcie. O valor do ponto de ebulio pode ser considerado uma medida imprecisa das foras de interao intermolecular (as foras que mantm as molculas unidas). Estas foras de atrao so eletrostticas e variam com a estrutura das molculas e vo desde as fracas interaes das foras de Van der Waals passando pelas interaes dipolo-dipolo de vrias intensidades at as fortes linteraes por ligaes de hidrognio. Assim, algumas informaes estruturais como tamanho, disposio espacial, flexibilidade, polaridade e natureza qumica das molculas podem ser estimadas a partir dos valores destas propriedades fsicas. O estudo do ponto de ebulio, assim como do ponto de fuso, permite a obteno de importantes correlaes estruturais como ilustrado no grfico da figura 2.3 que correlaciona os pontos de ebulio de sries homlogas. Observa-se nestas correlaes que se pode predizer estruturas e propriedades, por ex. o aumento do ponto de ebulio com o aumento da cadeia carbnica numa srie homloga; ou o aumento do ponto de ebulio com o aumento da polaridade numa srie heterloga. Assim podemos destacar a importncia da polaridade e da natureza qumica dos grupos funcionais nas foras de atrao molecular.
P.E.
200 150 100 50 0 -50 -100 20 40 60 80 100 120 140
HIDROC. TER ALDEIDO CETONA LCOOL
P.M.
Figura 2.3 - Correlao estrutura-ponto de ebulio para sries homlogas de hidrocarbonetos, teres, aldedos, cetonas e lcoois.
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3.3 - Ponto de Congelamento
a temperatura na qual uma substncia lquida passa para o estado slido. Na prtica, quando um composto orgnico slido a presso e temperatura ambiente, determina-se o ponto de fuso. Por outro lado, quando a substncia for lquida, pode-se determinar o ponto de congelamento, que o equivalente ao ponto de fuso. Porm, como o ponto de congelamento de um lquido muito difcil medir com preciso, mais til determinar o ponto de ebulio.
3.4 - Densidade Especfica
A densidade especfica uma outra constante fsica importante na caracterizao dos compostos orgnicos e um parmetro necessrio para o clculo da frao molar. Pode ser determinada diretamente comparando a massa da amostra com a massa de um igual volume de gua, usando um pequeno aparelho chamado de picnmetro. A dendidade da gua a 4 C um.
DA =
mA DH 2 O mH 2 O
3.5 - ndice de Refrao
O ndice de refrao definido como sendo a razo entre a velocidade da luz no ar e no composto. A determinao do ndice de refrao feita com auxlio de um equipamento denominado refratmetro, e expresso como nD T = temperatura na qual a medida realizada, geralmente 20 C. D = Comprimento de onda da luz empregada, linha D do sdio. A refrao molar Mr calculada atravs da equao:
T
M n2 1 Mr = d n2 + 2
M = massa molecular da substncia d = densidade n = ndice de refrao
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3.6 - Rotao tica
Os compostos orgnicos que tem assimetria molecular por possurem um ou mais carbonos quirais apresentam atividade tica. Esta propriedade a medida do desvio do plano da luz polarizada realizada em um polarmetro que usa um prisma de Nicol como polarizador. Esta propriedade expressa como rotao tica especfica
[ ]T D
[ ]TD = 100
l c
= rotao em graus observada no polarmetro
l = caminho tico em dm c = concnetrao em g/100 ml T = temperatura na qual a medida realizada D = comprimento de onda da linha D do sdio
4 - DETERMINAO DA MASSA MOLECULAR
4.1 - Aplicando a Lei de Raoult
A determinao da Massa Molecular pode ser abordada aplicando alguns conceitos fundamentais da fisico-qumica. Isto levou ao desenvolvimento de vrios mtodos clssicos que sempre deixou um certo grau de incerteza na determinao da Massa Molecular, principalmente para substncias desconhecidas. Estes mtodos esto fundamentados no princpio de que a presena de um soluto num determinado solvente, proporciona alteraes em suas propriedades coligativas as quais esto diretamente relacionadas ao peso molecular do soluto. Esses mtodos so na verdade uma aplicao da lei de Raoult (figura 2.4) que trata das trocas na presso de vapor sob adio de um soluto no voltil a um solvente puro: A presso parcial de cada componente em uma soluo ideal dependente da presso de vapor dos componentes individuais e da frao molar dos mesmos componentes
Figura 2.4 - Variao da presso de vapor total de uma mistura binria com a frao molar do composto 1 quando a Lei de Raoult obedecida.
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a) Determinao da Massa Molecular pela Diminuio do Ponto de Congelamento: A diminuio do ponto de congelamento est relacionada a massa molecular atravs da equao:
Mol =
K m1 100 T m0
Mol = Massa Molecular K = Constante de diminuio do ponto de fuso molecular correspondente ao solvente empregado. Estes valores So encontrados em tabelas. m1 = Massa em gramas do soluto m0 = Massa em gramas do solvente
T = Diminuio do ponto de congelamento
b) Determinao da Massa Molecular pela Elevao do Ponto de Ebulio: A elevao do ponto de ebulio est relacionada a massa molecular atravs da equao:
Mol =
K B m1 100 T m0
Mol = Massa Molecular KB = Constante de elevao do ponto de ebulio molecular. m1 = Massa em gramas do soluto m0 = Massa em gramas do solvente
T = Elevao do ponto de ebulio
4.2- Espetrometria de Massas
Com o advento da Espectrometria de Massas (Cap. .....) e sua grande evoluo culminando na construo de Espectrometos de Massas de Alta Resoluo, tem sido possvel a determinao da Massa Molecular com alto grau de preciso, levando ao abandono dos mtodos clssicos para este propsito.
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5 - DETERMINAO DA FRMULA MOLECULAR
A frmula molecular de um composto orgnico pode ser inferida com bastante segurana atravs dos dados espectroscopicos de 1H e 13C RNM (Cap......) e Massas. Do ponto de vista da Anlise Orgnica Clssica, a determinao da frmula molecular requer o conhecimento da massa molecular e da anlise qualitativa e quantitativa de cada elemento qumico que compe a substncia. Atualmente a anlise elementar realizada em um equipamento denominado CHN que determina simultaneamente os teores de Carbono, Hidrognio e Nitrognio em uma molcula orgnica. No passado, a anlise elementar seguia um roteiro sistemtico como mostrado na sequncia:
5.1- Anlise Elementar Qualitativa
Neste tipo de anlise
determina-se a natureza qumica dos elementos que compem
a amostra. A amostra ao ser submetida a fuso com sdio produzir deternadas substncias inorgnicas simples que so caracterizadas atravs de reaes qumicas especficas que resultam na formao de complexos coloridos e ou precipitados caractersticos do elemento.
A - Fuso com Sdio
Nesta tcnica, 10 mg da amostras adicionada a 30 mg de sdio metlico em um cadinho de platina. A mistura aquecida gentilmente para eliminar volteis e ento aquecida at obter a fuso. Aps esfriar, adicionar 2 ml de metanol e 2 ml de gua, levar fervura e aps diluir com gua e filtrar. O filtrado ento analisado para NaX, NaCN, Na2S, NaCNS . A reaes envolvidas neste processo so: C, H, O, N, S, X + Na0 + calor NaX, NaCN, Na2S, NaCNS NaX + AgNO3 AgX (pto)
-Teste p/ Haletos:
-Teste p/ Nitrognio: NaCN + Fe (NH4)2 (SO4)2 Complexo Ciano -Teste para Enxofre: Na2S + PbOAc PbS (pto) B - Fuso com Nitrato de Amnia:
A amostra submetida a fuso com nitrato de amonia e o resduo obtido submetido a Marcha Analtica Inorgnica Qualitativa
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5.2 - Anlise Elementar Quantitativa - CHN
O composto orgnico submetido a uma combusto completa resultando na degradao da amostra a gs carbnico, gua e nitrognio quando for o caso. AMOSTRA + COMBUSTO CO2 + H2O + N2 Os gases obtidos desta combusto completa so seletiva e quantitativamente adsorvidos no substrato apropriado e sua massa determinada:
-H2O: Adsorso em Cloreto de Clcio -CO2: Adsorso em NaOH/Asbesto -N : -O : Determinado por volume Determinado por diferena
Clculo da frmula mnima e molecular Exemplo de como determinar a formula molecular com base nos dados das anlises qualitativa e quantitativa: Considerando que o resultado da anlise qualitativa e quantitativa seja o seguinte: C = 67.39%; H = 7.92%; N = 15.72% e O = 8,88%
Dividindo a porcentagem de cada elemento pela sua massa atmica e o resultado dividido pelo menor valor, teremos o nmero de cada elemento na frmula molecular. A porcentagem de oxignio calculada por diferena do que falta para o 100%. Isto resulta na frmula molecular C10H14N 2O C = 67.39% 12.01 = 5.61 0.56 = 10 H = 7.92% 1.01 = 7.84 0.56 = 14 N = 15.72% 14.01 = 1.12 0.56 = 2 O = 8.88% 16.00 = 0.56 0.56 = 1 Clculo do N0 de Insaturaes (I): I= [i ni (vi-2) + 2]/2 ; ni = n0 tomos i, vi = valncia do tomo i O conhecimento do nmero de insaturaes de uma determinada substncia orgnica uma informao bastante valiosa na determinao estrutural. As insaturaes, ou deficincias de hidrognio, refere-se a ligaes mltiplas e a estruturas cclicas: Insaturaes: -ligaes duplas (C=C, C=O, C=N, N=O) -ciclos (cada ciclo vale uma insaturao) -anel aromtico (cada anel vale quatro insaturaes)
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6 - TESTES DE SOLUBILIDADE
As diferenas na solubilidade dos compostos orgnicos entre si, em solventes inertes ou reativos de conformidade com seu carter cido, bsico ou neutro e suas caractersticas polares, permitem a construo de esquemas de solubilidade para a classificao dos Compostos Orgnicos. Estes ensaios orientam a determinao estrutural no que se refere a grupos funcionais, polaridade e tamanho da cadeia carbnica. Alm disso o conhecimento da solubilidade dos compostos orgnicos e a sua inrcia ou reatividade perante os solventes se faz necessrio para o desenvolvimento dos processos qumicos e separao dos compostos. No esquema apresentado nas figuras 2.5 e 2.6 convenciona-se um limite mnimo de solubilidade: o soluto dever ser no mnimo 3% solvel no solvente do esquema, colocando a amostra no respectivo grupo de solubilidade. Na aplicao da classificao por solubilidade devemos ter em mente que muitos compostos no cairo rigorosamente em um grupo, mas em uma posio intermediria. Conforme os esquemas das figuras 2.5 e 2.6, atravs de testes de solubilidade conduzido de acordo com o esquema, podemos classificar os compostos orgnicos dentro das referidas classes, o que de grande valia na orientao das etapas seguintes a serem seguidas na marcha sistemtica de anlise orgnica. Utilizando o fato de que a solubilidade dos compostos orgnicos permite agrup-los com propriedades similares e tamanho de cadeia carbnica, poderemos optimizar mtodos de separao por extrao. Um exemplo disto a metodologia de extrao de princpios alcalides de plantas por extrao cido-base, usando a propriedade bsica dos alcalides
ESQUEMA
DE
SOLUBILIDADE
PARA
CLASSIFICAO
DOS
COMPOSTOS
ORGNICOS Inicialmente a amostra a ser analisada testada quanto sua solubilidade em gua. Se a amostra for solvel em gua, seguir o esquema da figura 2.5, se a amostra se mostrar insolvel em gua, seguir o esquema da figura 2.6.
Figura 2.5 - Esquema para os testes de solubilidade em amostras solveis em gua
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Figura 2.5 - Esquema para os testes de solubilidade em amostras insolveis em gua
Classes de conpostos representativas dos grupos de solubilidade
Grupo 1: cidos e
Bases de baixo peso molecular com at cinco tomos de carbono e
compostos neutros de baixa polaridade. Grupo 2: Sais orgnicos, cares, amino cidos e outros compostos neutros polifuncionais de alta polaridade. Grupo 3 : cidos Orgnicos Fortes com mais de seis carbonos. Grupo 4: cidos orgnicos fracos com mais de seis carbonos. Grupo 5: Compostos bsicos com mais de ouito carbonos. Grupo 6: Hidrocarbonetos, Haletos de alquila e aromticos Grupo 7: lcoois, aldedos, ctonas, steres com mais de cinco carbonos. Grupo 8: Alcenos, alcinos, tres com mais de seis carbonos
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7 - TESTES QUMICOS PARA GRUPOS FUNCIONAIS
Os grupos funcionais de uma molcula podem ser determinados atravs de reaes qumicas especficas. Isto envolve o conhecimento da reatividade das funes orgnicas obtida nas disciplinas Qumica Orgnica A e B. A seguir so esquematisados alguns exemplos de reaes teis na identificao dos grupos funcionais:
Aminas
-Benzenosulfonil cloreto - aminas prim., sec. e terc -cido Nitroso - corantes azo -Cloretos de cido
Haletos
-Soluo etanlica de nitrato de prata -Iodeto de sdio em acetona
Aldedos e cetonas
-Phenilhidrazina e 2,4-dinitrofenilhidrazina -Cloridrato de hidroxilamina -Bissulfito de sdio -Teste do Iodofrmio - metilcetonas
Aldedos
-Reao de Benedict - Cobre -Reao de Tollens - Espelho de Prata -Fuchsina
Fenis
-gua de Bromo -Cloreto Frrico -Cloreto de cido
Insaturao
-Permanganato de Potssio -Bromo em tetracloreto de carbono
Nitro compostos
-Zinco em cloreto de amnia -Hidroxido ferroso -Hidrxido de sdio
Esteres
-Saponificao -Cloridrato de hidroxilamina
lcoois
-Reao de Lucas - cido clordrico/cloreto de zinco
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-Nitrato crico -cido peridico Hidrocarbonetos Aromticos -Sulfonao - cido sulfrico fumegante -Azo - cloreto de alumnio e azoxibenzeno
Eteres
-cido clordrico -gua de bromo
8- PREPARO DE DERIVADOS
A preparao de derivados uma ferramenta de grande utilidade na determinao estrutural, confirmao de determinadas estruturas e o estabelecimento da reatividade qumica da substncia. Servem tambm como pr-tratamento de amostras para anlises
cromatogrficas e doseamento de princpios ativos. O desenvolvimento da qumica medicianl, um dos mais importantes e atuais temas da qumica farmacutica, tem utilizado a preparao de derivados para a obteno de
correlaes quantitativas
de estrutura atividade (QSAR) que tem se tornado uma
poderosssima ferramenta na obteno de novos medicamentos, bem como no aprimoramento da medicina alternativa, como o estudo de plantas medicinais. Alm disso, os estudos de QSAR podem contribuir decisivamente na elucidao dos mecanismos de ao de drogas, permitindo tambm o planejamento de sntese de drogas especficas. Algumas das reaes mais utilizadas na preparao de derivados so: Oxidao, Reduo, Metilao, Acetilao, Silanizao.
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CAPTULO - III MTODOS DE SEPARAO E PURIFICAO

1 CRISTALIZAO
A cristalizao um dos mtodos mais versteis e eficientes para a purificao de substncias slidas quando o solvente de cristalizao for devidamente selecionado. Em linhas gerais a substncia slida a ser purificada dissolvida sob aquecimento num solvente no qual ela apresenta pouca solubilidade. A soluo ainda quente filtrada a fim de remover impurezas slidas ou em suspenso. Com o lento resfriamento da soluo, a substncia vai se solidificando, depositadas numa rede cristalina. de tal forma que suas molculas so organizadamente Os cristais formados so removidos por filtrao do
solvente de cristalizao. Este sobrenadante, que contm as impurezas solveis, numa linguagem coloquial denominado de "liquor me". Os cristais so lavados em sua superfcie com uma nova poro de recristalizao. Em regra, quanto mais lenta a cristalizao mais perfeitos sero os cristais formados e consequentemente mais puros. No raro os cristais podem trazer impurezas, necessitando de novas recristalizaes at se atingir o grau de pureza desejado. Alm das impurezas, o liquor me poder conter uma maior ou menor quantidade da substncia de interesse, conforme for o seu produto de solubilidade naquele solvente. Assim, para aumentar o rendimento procedese a evaporao parcial do solvente de cristalizao e espera-se novas cristalizaes da substncia. Nos trabalhos em escala semi-micro pode-se fazer uso de pequenos frascos para cristalizao como por ex. em pequenos tubos de ensaio ou vidrinhos de penicilina. Aps ocorrer a formao adequada de cristais, o liquor me resultante pode ser removido com uma pequena seringa ou pipeta Pasteur contendo um pequeno tufo de algodo na ponta para fazer o papel de filtro. importante evitar que o solvente de cristalizao se evapore completamente pois isto contaminaria os cristais formados. Uma outra tcnica o uso de mistura de solventes. Neste caso normalmente trabalhase com um solvente apolar no qual o soluto insolvel. Um solvente mais polar ento adicionado, cuidadosamente sob aquecimento at a completa solubilizao da substncia. Com o resfriamento e a mudana na composio percentual da mistura de solventes, tem-se a cristalizao do soluto. Finalmente devemos lembrar que o sucesso de uma boa cristalizao est na pacincia de esperar o fenmeno ocorrer lenta e naturalmente, podendo levar horas, dias ou at semanas. solvente ou, se necessrio, so redissolvidos para uma nova
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2 DESTILAO
A destilao o processo mais freqente e importante de separao e purificao de substncias lquidas. O mtodo est baseado no fenmeno de mudana de estado fsico lquidovaporlquido (evaporao seguida de condensao) de acordo com as leis da fsica que regem o equilbrio entre as fases lquida e de vapor. Quando um lquido colocado em um recipiente fechado e todo o ar for removido, ele se evapora at que seu vapor atinja uma determinada presso que depende somente da temperatura. Esta presso que exercida pelo vapor em equilbrio com o lquido chamada presso de vapor a temperatura T, cujo valor tem uma relao direta com a temperatura. Considerando um lquido em recipiente aberto, aumentando-se a temperatura, sua presso de vapor aumenta e quando esta atinge 760 mmHg (presso atmosfrica experimento a nvel do mar) o lquido entra em ebulio (ponto de ebulio). Se o vapor for conduzido a um condensador, este retornar ao estado lquido com o resfriamento. Existem vrias tcnicas de destilao as quais devero ser selecionadas para cada tipo de problema em particular e de acordo com os objetivos a serem alcanados.
2.1 - DESTILAO SIMPLES e DESTILAO A VCUO
Na destilao simples o lquido a ser destilado colocado num balo de destilao o qual aquecido at atingir a temperatura de ebulio do lquido que marcada no termmetro. O vapor ao passar pelo condensador (normalmente refrigerado pela passagem de gua corrente) condensa e o lquido recolhido num segundo balo imerso em banho de gelo. Este processo pode separar eficientemente um lquido voltil de uma ou mais substncias no volteis, como solutos slidos ou lquidos no volteis. Porm falha na separao de dois ou mais lquidos volteis mesmo que seus pontos de ebulio sejam bem diferentes. Isto porque o lquido menos voltil sempre ter uma determinada presso de vapor e estar presente no vapor do lquido mais voltil sendo arrastado por ele, resultando na contaminao do composto voltil. Nos casos de lquidos com alto ponto de ebulio, cuja elevada temperatura poderia degradar as substncias ou mesmo ser difcil atingir o equilbrio para a destilao, usa-se o artifcio de aumentar a presso de vapor pela diminuio da presso exercida na superfcie do lquido em ebulio, atravs de uma destilao a vcuo, fig 3.1. Fazendo-se presso negativa (menor que 1 atm. = 760 mmHg) diminui-se a temperatura de ebulio dos lquidos. A presso negativa aplicada pode ser controlada atravs de um manmetro apropriado. Um outro mtodo muito til na remoo de solventes de substncias slidas a
temperaturas relativamente baixas e com bastante rapidez a evaporao rotatria. Este mtodo faz uso de um equipamento denominado evaporador rotatrio ou rotavapor, no qual o
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solvente a ser removido colocado num balo imerso em Banho Maria e acoplado a um eixo que gira a uma velocidade controlada e a um sistema de vcuo. A evaporao do solvente facilitada por dois fatores: diminuio da presso de vapor e aumento da superfcie de evaporao. Desta forma possvel destilar gua rapidamente a 40 0C por exemplo.
Figura 3.1 - Esquema de um sistema para destilao simples a vcuo.
2.2 - DESTILAO POR ARRASTE DE VAPOR
Na destilao por arraste de vapor, substncias lquidas ou slidos volteis so arrastadas junto com o vapor de gua super aquecido que se faz passar atravs da matriz que contm os volteis. A figura 3.2 ilustra o equipamento bsico constitudo de um gerador de vapor com um tubo equalizador de presso e vlvula de segurana. No frasco de extrao, que deve ficar sob aquecimento, colocada a matriz contendo a substncia voltil. O vapor de gua superaquecido ao passar pelo frasco extrator arrasta as substncias volteis e ambos so condensados ao passar pelo condensador e so finalmente recolhidos no frasco coletor imerso em banho de gelo. A substncia voltil, um slido ou leo imissvel com a gua, separado por filtrao ou por meio de um funil de separao.
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A destilao por arraste de vapor baseia-se no princpio de que dois lquidos completamente imissveis entre si, exercem sua prpria presso de vapor independentemente um do outro. Deste modo a presso total de vapor a resultante da soma aritmtica da presso de vapor de cada componente. Sabendo-se a presso de vapor do material voltil a ser destilado e aplicando a lei de Raout pode-se determinar a composio do vapor de gua e assim o quanto de material est sendo recuperado. A tcnica de destilao por arraste de vapor particularmente til quando a substncia a ser destilada apresenta alta presso de vapor e se decompe prximo de seu ponto de ebulio. Nestse casos destilao por arraste de vapor permite a destilao a temperaturas aqum do ponto de ebulio.
Figura 3.2 - Esquema de um sistema de destilao por arraste de vapor
A figura 3.3 mostra um esquema alternativo para a destilao por arraste de vapor do tipo clevenger. O prprio frasco extrator gera o vapor d'gua que arrasta os constituintes volteis at o condensador e o condensado recolhido no frasco de separao.
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A destilao por arraste de vapor substitui com vantagem a destilao a vcuo sobretudo quando se tem pequenas quantidades de material voltil em misturas com grande quantidade de material slido. A utilizao desta metodologia bastante diversificada nos laboratrios de Qumica Orgnica e na indstria. Alguns exemplos podem ser mencionados como na purificao de produtos de sntese que esto impurificados com grande quantidade de subprodutos resinosos. freqentemente utilizado no isolamento de produtos naturais, na obteno de leos essenciais que podem ser extrados de ervas e plantas aromticas (ex. casca de laranja [limoneno], cravo da ndia [eugenol], folhas de eucalipto [eucaliptol], capim limo [citral], hortel, essncia de rosas, jasmim, e outras matrias primas na obteno de perfumes e aromas).
condensador
fase oleosa fase aquosa frasco extrator e gerador de vapor
banho de aquecimento
Figura 3.3 - Esquema alternativo de um aparelho para destilao por arraste de vapor.
2.3 - DESTILAO FRACIONADA
A destilao fracionada, figura 3.4, uma excelente tcnica de purificao de lquidos volteis os quais so separados em funo de seus pontos de ebulio. Neste tipo de destilao a separao dos lquidos ocorre numa coluna de fracionamento que funciona como se fosse vrias destilaes simples sucessivas. A cada seco da coluna de fracionamento, figura 3.5, se estabelece um equilbrio vapor-lquido de tal modo que a medida que se avana
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na coluna, diminui a concentrao do lquido menos voltil contaminando o vapor do lquido mais voltil. Desta forma, quando o vapor atinge o topo da coluna de fracionamento, os vapores do lquido mais voltil estaro livres das molculas do lquido menos voltil e portanto puro. Quando o lquido menos voltil for totalmente destilado, a temperatura do sistema aumenta at atingir o ponto de ebulio do lquido menos voltil que da mesma forma ser purificado ao longo da coluna de fracionamento. A tcnica permite a separao de vrios lquidos de pontos de ebulio bastante prximos, desde que a coluna de fracionamento seja apropriadamente dimensionada. O tratamento terico da destilao fracionada requer um conhecimento da relao entre os pontos de ebulio ou presses de vapor das misturas das substncias e sua composio. Se estas curvas forem conhecidas ser possvel prever se a separao ser difcil ou no ou mesmo se ser possvel. A separao de misturas de lquidos por destilao fracionada pode ser melhor explicada atravs da lei de Raout:
pA = pA ' xA
a presso de vapor de um componente a uma dada temperatura igual a presso de vapor da substncia pura multiplicada pela sua frao molar na soluo Considerando uma mistura formando uma soluo ideal e aplicando a lei de Raout para cada componente:
pA = pA ' xA
pB = pB ' xB
a presso total ser a soma aritmtica das presses parciais pA e pB, assim a composio da fase de vapor ser dada por:
v xA =
pA p A + pB
v xB =
pB pB + p A
Tomando como exemplo dois componentes A e B cujas presso de vapor so 60 e 100 mmHg e a frao molar 0,25 e 0,75 respectivamente, a composio molar da fase de vapor ser xA = 0,167 e xB = 0.833. Assim esta soluo est em equilbrio com um vapor contendo 16,7 moles por cento do componente A e 83,3 moles por cento do componente B. O componente B com presso de vapor maior est relativamente mais concentrado na fase de vapor que na fase lquida.
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Figura 3.4 - Esquema de um aparelho de destilao fracionada.
Figura 3.5 - Diferentes tipos de coluna de fracionamento
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Considerando que ao longo de uma coluna de fracionamento temos n equilbrios fase lquida-fase de vapor, e que a cada equilbrio superior temos um aumento da frao molar do componente B em relao ao componente A na fase de vapor, a partir do equilbrio ni a fase de vapor ser composta de 100% do componente B. Desta forma poderemos dimensionar colunas de fracionamento para problemas especficos de separao.
2.4 MICRODESTILAO
Em alguns casos a quantidade de material a separar muito pequena para se colocar num aparelho de destilao. Para isto pode-se usar tcnicas de microdestilao bastante simples, coforme ilustrado na figura 3.6.
Figura 3.6 - Esquema para microdestilao. (a) um tubo de vidro dobrado formando dois U. A amostra colocada na parte da esquerda e esta extremidade ento selada. A primeira dobra em U (que contm a amostra) aquecida e os vapores sero condensados na
segunda dobra em U que colocada num banho de gelo. (b) a amostra colocada no bulbo inferior e ento aquecida. Os vapores se condensam na parede do tubo refrigerada e o lquido condensado pode ser recolhido com uma seringa ou capilar nos bulbos laterais.
3 SUBLIMAO
A sublimao uma propriedade que alguns slidos tem de passar diretamente do estado slido para o estado de vapor, como por ex. a naftalina e a cnfora. Estes compostos podem ser eficientemente purificados por tcnicas de sublimao, figura 3.7, que consiste em aquecer o slido pulverizado aqum de seu ponto de fuso. Os vapores oriundos da sublimao voltam a solidificar no condensador interno tipo dedo frio de onde posteriormente recuperado. O aparelho de sublimao pode ser conectado a uma linha de vcuo para diminuir a presso de vapor do slido.
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Os processos de destilao e sublimao esto intimamente relacionados. Com o aquecimento de substncias termicamente estveis ocorre a vaporizao que poder ocorrer de trs maneira distintas: a) se a substncia for lquida nas condies ordinrias, ela entra em ebulio a uma temperatura definida que depende da presso, b) se a substncia for slida nas condies ordinrias, a medida em que for aquecida, primeiramente sofrer o processo de fuso a uma temperatura definida e finalmente entra em ebulio como um lquido ordinrio, c) um slido pode volatilizar antes de entrar em processo de fuso, a uma temperatura definida que depende da presso.
sada de gua
entrada de gua
condensador tipo dedo frio
vcuo
composto sublimado
material a ser sublimado banho maria
Figura 3.7 - Esquema de um aparelho de sublimao
Por outro lado, a condensao do vapor de uma substncia estvel poder ocorrer de trs maneiras diferentes: a) o vapor condensa voltando a fase lquida, b) o vapor liqefeito e em seguido se solidifica, c) o vapor condensa diretamente para o estado slido sem a formao intermediria de um lquido. A compreenso do fenmeno da sublimao pode ser alcanada com o estudo dos equilbrios slido-lquido-vapor mostrado na figura 3.8. Como se pode observar, no diagrama
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representando o equilbrio entre as fases slida-lquida-gasosa quando se relaciona temperatura e presso, a linha TW representa a curva de presso de vapor do lquido para o sistema lquido vapor, a linha TV representa o processo de fuso (observe que este processo praticamente independe da presso) e a linha ST representa a curva de presso de vapor do slido (condies de temperatura e presso em que slido e vapor esto em equilbrio). O encontro das trs linhas chamado de ponto trplice T. O fenmeno da sublimao ocorre quando o vapor submetido a uma presso abaixo do ponto trplice e resfriado suficientemente para atingir a linha ST. Para que um slido possa sublimar no se deve deixar a presso de vapor exceder o ponto trplice o que pode ser alcanado aplicando uma presso negativa e aquecendo aqum do ponto de fuso do slido. Por ex. o ponto trplice da cnfora determinado pela temperatura 179 0C e 370 mmHg de presso.
Figura 3.8 - Diagrama de equilbrio entre fases slida, lquida e gasosa.
4- EXTRAO
A extrao uma das tcnicas mais empregadas para a separao de um produto orgnico de uma mistura de reao ou para isolar uma substncia ou grupo delas a partir de suas fontes naturais utilizando um solvente voltil extrator.
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Os solventes mais empregados nos procedimentos de extrao so na sua ordem crescente de polaridade: ter de Petrleo, Hexano, Benzeno, ter Etlico, Cloreto de Metileno, Clorofrmio, Acetato de Etila, Acetona, n-Butanol, Etanol e gua. A extrao a transferncia de um soluto de uma fase para outra. O soluto removido de uma fase pela adio de um solvente imissvel no qual o soluto tambm solvel. Em geral, a regra de que semelhante dissolve semelhante adequada na escolha do solvente extrator. Existem vrias tcnicas de extrao envolvendo duas fases lquidas de solventes imissveis, extrao lquido-lquido ou de uma fase lquida e outra fase slida, extrao lquidoslido. Em cada trabalho devemos selecionar o mtodo mais adequado.
4.1- EXTRAO LQUIDO-LQUIDO: K = CA/CB A extrao lquido lquido baseia-se na distribuio de um soluto entre duas fases lquidas imissveis. Em Qumica Orgnica uma das fases normalmente aquosa e a outra um solvente orgnico. Um soluto X, colocado num sistema de dois solventes imissveis, dever ser distribudo nas duas fases (partio) em funo de sua solubilidade relativa em cada um dos dois
solventes. O sistema atinge um equilbrio de transferncia de fase dado pela equao:
onde
XA e XB so as concentraes do componente X nas fases A e B
Esta expresso segue a Lei de Ao das Massas para o Equilbrio dado pela equao:
Kp =
onde Partio Kp
(X A ) (X B )
a Constante de Equilbrio de Distribuio ou Constante de
XA e XB so as concentraes do componente X nas fases A e B A determinao de Kp de um componente X entre dois lquidos imissveis fornece informaes adequadas para a escolha do sistema de extrao para o isolamento e purificao de espcies envolvendo estas tcnicas. Permite tambm calcular quantas extraes so
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necessrias e qual o volume de solvente extrator mais adequado para uma completa recuperao do soluto X. Considerando a extrao de um soluto X a uma concentrao de 5 g em 300 ml de gua, cujo Kp = 10 num sistema gua/ter, extrado com 100 ml de ter. Quando o equilbrio for atingido:
K p = ( X gua )
( X eter )
(5 x 100 ) 10 =
'
x'
300
operando esta equao teremos: x = 1,5 g (quantidade do soluto X na fase aquosa) (5 1,15) = 3,85 que a quantidade do soluto X na fase orgnica (ter) Este resultado mostra que trs extraes com pores de 100 ml de ter resulta na remoo de 98,8 % do soluto X da fase aquosa (permanecendo, portanto 0,06g do soluto X na fase aquosa). Se no lugar de trs extraes com pores de 100 ml de ter fosse feita uma nica extrao com 300 ml de ter, aplicando os clculos o resultado seria a extrao de apenas 91% do soluto X, restando 0,45 g do soluto X na fase aquosa. Estes dados mostram
claramente que um maior nmero de extraes mais eficiente que o uso de uma maior quantidade de solvente extrator numa nica extrao. Em alguns casos no possvel ter um coeficiente de partio favorvel para a
extrao de um determinado componente de tal modo que n extraes se faz necessrio. Assim podemos estimar o nmero de extraes necessrias para que se tenha uma
adequada recuperao do soluto aplicando a seguinte equao:
VA (C A ) = C . KV +V B A
( )
0 A
(CA) = concentrao final do soluto na fase aquosa (C0A) = concentrao original do soluto na fase aquosa K = coeficiente de distribuio VA e VB = volume das fases A e B respectivamente n = nmero de extraes
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Quando o coeficiente de distribuio Kp for particularmente desfavorvel para a extrao de um determinado componente, o mais adequado o uso de extrao lquido-lquido ou lquido-slido contnua. A figura 3.9 ilustra algumas tcnicas de extrao lquido-lquido. Para trabalhos em macro-escala, faz-se uso do funil de separao. Em laboratrio de Qumica Orgnica so disponveis funis de separao de 2000ml, 1000ml, 500ml, 250 ml, 100ml, 60 ml e 30 ml. Se o solvente orgnico extrator for mais denso que a gua, por ex. numa extrao entre clorofrmiogua, o clorofrmio forma uma fase inferior que facilmente drenada ao abrir a torneira do funil de separao. Se o solvente orgnico extrator for menos denso que a gua, como por ex. um sistema constitudo de ter-gua, o solvente orgnico forma a fase superior. Neste caso, aps a separao das fases, primeiro se remove a fase aquosa inferior para ento recuperar o solvente orgnico extrator. Nas extraes com pequenas quantidades de material, trabalha-se em micro escala. Neste caso a separao das duas fases pode ser feita na prpria pipeta Pasteur (fig. 3.9 A). Alternativamente, a extrao pode ser realizada em um tubo de centrfuga (fig. 3.9 B) onde a fase inferior removida com uma pipeta Pasteur
Figura 3.9 - Ilustrao de tcnicas de extrao lquido-lquido. A) uso do funil de separao e pipeta Pasteur para quantidades muito pequenas, B) uso de tubos de centrfuga.
A extrao lquido-lquido um excelente mtodo para a separao de cidos e bases orgnicas, pois o controle do pH da fase aquosa permite um grande aumento ou grande diminuio da solubilidade destas espcies qumicas em gua conforme se apresentam na forma inica ou molecular respectivamente.
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Bases orgnicas, como as bases nitrogenadas, quando colocadas em soluo aquosa cida passa para a forma inica tornando-se muito solveis em gua. Em pH alcalino,
adquirem a forma molecular e ficam insolveis em gua. Um bom exemplo a anilina. Em meio cido ocorre a formao do do on anilnium:
NH2 + H3O
+ NH3 + H2O
insolvel em gua
solvel em gua
Da mesma forma os cidos em pH alcalino se apresentam na forma inica e, portanto, solveis em gua. A pH cido, voltam a forma molecular e se tornam insolveis em gua. Por Ex., O cido bemzico que insolvel em gua, em meio alcalino se torna solvel:
COOH + _ HO
_ COO
+ H2O
insolvel em gua
solvel em gua
Considerando uma mistura de cido bernzico (cido mais forte), fenol (cido mais fraco), anilina (base) e tolueno (composto neutro), cada componente desta mistura pode ser facilmente separado na sua forma pura, aplicando o procedimento de extrao cido-base. O procedimento ilustrado como segue: Primeiro se faz uma extrao com gua acidificada com HCl para remover a anilina na forma de on anilinium. A anilina ento recuperada aps uma segunda extrao com ter etlico da fase aquosa basificada com hidrxido de sdio. A fase orgnica contendo Tolueno, cido Benzico e Fenol primeiramente extrada com soluo aquosa de bicarbonato de sdio (uma base fraca) para a extrao do cido benzico (cido mais forte) na forma de benzoato. Segue uma segunda extrao com soluo aquosa de hidrxido de sdio (base forte) para extrair o fenol (cido mais fraco) na forma de fenolato, deixando o tolueno puro. O cido benzico e o fenol so posteriormente recuperados aps a acidificao das respectivas fases aquosas, extrao com ter etlico seguido de remoo do ter por destilao. A formao de emulses ocorre com bastante freqncia sobretudo quando se agita muito vigorosamente e tambm conforme for a composio do material que est sendo
extrado. Em geral a emulso se desfaz com o tempo ou aplicando um movimento circular suave ao funil de separao. Em sistemas mais fortemente emulsionados, estas podem
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romper-se aplicando-lhe uma agitao vigorosa com um basto de vidro ou atravs de uma centrifugao. Uma outra maneira de romper a emulso a saturao da fase aquosa com NaCl que tambm traz uma vantagem adicional de diminuir a solubilidade de molculas orgnicas em gua devido ao efeito salino.
4.2 - EXTRAO LQUIDO-LQUIDO CONTNUA
Nos casos em que o coeficiente de partio for altamente desfavorvel o que deve requerer infinitas extraes e quando o sistema forma emulses estveis, recorre-se aos mtodos de extrao contnua. As extraes lquido-lquido contnua empregam um dos dois aparelhos mostrados na figura 2.10. que permitem o tratamento automtico de solues aquosas com resultados semelhante ao que se obteria com infinitas extraes empregando pequenas quantidades de solvente extrator. A escolha de um dos dois aparelhos de extrao lquido-lquido contnua ilustrado abaixo depende da escolha do solvente extrator: Com solvente extrator menos denso que a gua usa-se o aparelho I. O solvente orgnico colocado no balo de destilao D e submetido a ebulio. Os vapores so condensados no condensador A que ao cair conduzido ao fundo do balo extrator C atravs do tubo B. Cada gota de solvente ao subir atravs do leito de fase aquosa extrair a
Figura 3.10 - Aparelhos para extrao lquido-lquido contnua. I) quando o solvente extrator menos denso que a gua. II) quando osolvente extrator mais denso que a gua. A=solvente extrator, B=material extrado, C=amostra de onde est sendo extrado os componentes, E=tubo que conduz o solvente extrator ao fundo do bao onde se encontra a amostra, D=condensador
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quantidade de soluto regida pela lei do equilbrio de distribuio. Quando a fase orgnica superior atingir o nvel de comunicao entre os dois bales, retorna ao balo D acumulando a os solutos extrados. Para a utilizao de solventes mais densos que a gua, escolhe-se o aparelho II. O solvente extrator colocado no balo D e posto em ebulio. Os vapores ao serem
condensados em A gotejam sobre a fase aquosa extraindo os solutos durante sua descida ao fundo do balo B. O solvente extrator retorna ao balo B atravs do tubo comunicador que liga o fundo do balo extrator ao colo do balo D concentrando a os solutos extrados da fase aquosa.
4.3 - EXTRAO LQUIDO-SLIDO
A extrao lquido-slido utilizada para a separao ou isolamento de substncias slidas, lquidas ou oleosas contidas numa matriz slida. Podemos exemplificar alguns usos deste tipo de extrao na obteno de leos de diversos gros e cereais, obteno de extratos com princpios ativos de plantas, anlise de material orgnico em solos, determinao de leos e graxas em gua para avaliar grau de poluio, etc. Neste tipo de extrao a matriz slida contendo as substncias de interesse colocada em ntimo contato com o solvente extrator. O solvente extrator dever ser suficientemente voltil para permitir sua completa remoo sem prejuzo do rendimento e propriedades do material extrado. No caso da obteno de extratos de plantas, o material triturado com o objetivo de romper os tecidos vegetais. Em contato com o solvente (meio hipotnico) as clulas sofrem plasmlise derramando os metablitos extrao lquido-slido
intracelulares que so arrastados pelo solvente. O resultado da
influenciado por vrios fatores como o tamanho da partcula que compe a matriz slida, natureza do solvente, temperatura , pH do meio e tempo de extrao. As condies de extrao devem ser selecionadas em funo do resultado que se deseja obter. Para isso temos vrias tcnicas de extrao lquido-slido.
4.3.2 DECOCO Decoco ou cozimento consiste submeter a matriz slida submersa, em gua sob fervura por alguns minutos. Se por um lado a fervura aumenta o poder extrativo da gua, por outro lado tem a desvantagem de degradar substncias mais termolbeis. Assim deve-se ter muito cuidado na escolha do mtodo de extrao.
4.3.1 INFUSO A tcnica de extrao por infuso consiste em adicionar gua fervente sobre a matriz slida previamente fragmentada em pequenas peas e deixar repousar por alguns minutos. O processo conhecido popularmente por ch, uma boa tcnica de extrao de metablitos secundrios de plantas. Mesmo as substncias que no so solveis em gua so extradas
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para o meio aquoso. Isto possvel porque, com o extravasamento do contedo celular em consequncia da plasmlise, no meio aquoso estaro presentes substncias tais como cidos graxos que tem a funo de produzir micelas carregando no seu interior os compostos apolares e a permanecem na forma de colides ou dispersas em microgotculas que as mantm em suspenso.
4.3.3 - PERCOLAO A percolao consiste na passagem de um solvente atravs de um leito preparado com a matriz slida a ser extrada. A matriz slida previamente triturada colocada dentro de um percolador (Figura 3.11). Um solvente apropriado adicionado at cobrir toda a matriz slida. Abre-se o registro na parte inferior do percolador e se deixa o solvente fluir a uma determinada velocidade. Em farmcias de manipulao, para obteno de tinturas ou extratos a partir de plantas medicinais, este procedimento feito com alcool de cereais. Porm na pesquisa de plantas medicinais, o procedimento de extrao pode envolver outros solventes e assim obter vrios extratos da mesma matriz vegetal. Com este procedimento possvel, por ex., extrair
separadamente grupos distintos de produtos naturais ao se fazer extraes sucessivas com solventes de polaridades crescente como hexano, ter, acetato de etila, n-butanol e etanol.
4.3.4 - MACERAO A tcnica de extrao por macerao consiste em deixar o solvente extrator em contato com a matriz slida, devidamente triturada, por um certo tempo a temperatura ambiente. Uma variao que permite um aumento no poder extrativo aquecer o sistema entre 30-40 0C. O aumento da temperatura alm de aumentar a solubilidade dos compostos aumenta a
capacidade extrativa do solvente devido a diminuio de sua viscosidade.
Figura 3.11 - Percolador utilizado na obteno de tinturas e extratos de plantas medicinais
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O processo de macerao pode ser feito num percolador (figura 3.11) desde que se mantenha o registro fechado durante o perodo de macerao. Como na percolao, a macerao tambm pode ser feita com diferentes solventes usando a mesma matriz vegetal. A vantagem da macerao a obteno de extratos com rendimentos muito superiores aos obtidos pelo processo de percolao.
4.3.5-EXTRAO LQUIDO-SLIDO CONTNUA SOXHLET
a extrao repetida e contnua de uma matix slida por um lquido extrator. O aparelho de Soxhlet , Figura 2.12, utilizado para esta finalidade compe-se de trs partes: Um balo de destilao no qual se coloca o solvente extrator, uma pea intermediria que o extrator propriamente dito e onde c olocada a matrix slida a ser extrada, e na parte superior do sistema fica o condensador. O solvente extrator colocado no balo o qual aquecido ebulio do lquido
extrator. Seus vapores so conduzidos ao condensador atravs do tubo lateral do extrator. Ao condensar, o solvente extrator goteja sobre a matriz slida colocada dentro do extrator. Quando o solvente atingir o nvel do sifo cobrindo toda a matriz slida, retorna ao balo de ebulio carreando o material extrado, e de onde novamente evaporado para repetir o ciclo.
Figura 3.12 - Esqueme do aparelho de Soxlet para extrao lquido slido contnua
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4.3.6 - EXTRAO COM FLUIDO SUPERCRTICO (CO2 SS) Alguns gases com o CO2 quando submetidos a determinadas condies de
temperatura e presso adquirem um certa fluidez. Nestas condies apresentam propriedades fsico-qumico prprias. Possuem as propriedades de um gs e a fluidez de um lquido e so chamados de fludos supercrticos. A grande vantagem dos fludos supercrticos na extrao que possuem um alto poder de extrao e ao sarem do sistema voltam a ser gs deixando os solutos extrados livres de solvente instantaneamente.
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5 - CROMATOGRAFIA
O termo cromatografia, primeiramente descrito em 1906 pelo botnico russo Mikhail Semenovich Tswet para a separao de pigmentos naturais, sobre uma coluna de carvo, refere-se a uma variedade de tcnicas de separao fundamentadas na migrao diferencial dos componentes de uma mistura quando so seletivamente retidos por uma fase estacionria. A Cromatografia pode ser definida como sendo uma srie de mtodos de separao e purificao de misturas moleculares por distribuio diferencial entre duas fases. A distribuio de uma molcula entre duas fases regida por um equilbrio que depende das propriedades fsico-qumica da molcula e das fases na qual ela est sendo distribuda. Os processos de separao cromatogrfica esto fundamentados nos equilbrios de interao fsico-qumica entre trs componentes: soluto, fase estacionria e fase mvel: a) fase estacionria - A fase estacionria pode ser um Lquido ou um Slido de grande rea superficial, que permanece estacionrio e interage com as molculas do soluto segurandoas seletivamente conforme suas propriedades fsico-qumicas. b) fase mvel - A fase mvel poded ser um Lquido ou um Gs que flui atravs da Fase Estacionria, a uma determinada velocidade arrastando-as consigo. c) soluto - Denominamos de Soluto os componentes da mistura molecular que se deseja separar. 5.1 - O SISTEMA CROMATOGRFICO Todas as formas de cromatografia apresentam um sistema bsico de componentes que constituem o Sistema Cromatogrfico conforme ilustrado esquematicamente na Figura 3.13: e interage com as molculas do soluto
a- Fase Mvel - pode ser um lquido, gs ou fludo super crtico. b- Injetor - dispositivo para a introduo da mistura a ser separada no sistema cromatogrfico. O modo pelo qual a mistura introduzida no sistema depende do tipo de cromatografia que se est desenvolvendo. O sucesso de uma separao cromatogrfica depende em parte de uma boa tcnica de introduo da amostra no sistema. c- Fase Estacionria - pode ser um Lquido imobilizado na superfcie de um suporte slido ou um Slido de grande rea superficial. A Fase Estacionria o corao do sistema cromatogrfico, pois a que ocorrem as interaes que resultam na separao dos componentes da mistura d- Registro do resultado obtido - Todo resultado de uma separao cromatogrfica deve ser registrado. O mais comum o registro na forma de um grfico correlacionando o tempo de anlise em funo da resposta do detetor. O grfico assim obtido denominado de Cromatograma
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Figura 3.13 - Esquema de um Sistema Cromatogrfico
5.2 - EQUAO FUNDAMENTAL PARA A DISTRIBUIO DE UM SOLUTO ENTRE DUAS FASES NUM SISTEMA CROMATOGRFICO
Durante o processo cromatogrfico, ocorre uma srie de equilbrios envolvendo as molculas do soluto, a fase mvel e grupos qumicos existentes na superfcie da fase
estacionria. Assim as molculas do soluto interagem com a fase estacionria e com a fase mvel. A fase mvel interage com a fase estacionria e com as molculas do soluto. Deste modo, a concentrao das molculas do soluto em cada fase, regida por um equilbrio dinmico o qual definido por uma constante de distribuio caracterstica de cada composto orgnico em particular e da natureza das fases mvel e estacionria. Estes eqilbrios mltiplos esto ilustrados na Figura 3.14. Num determinado par de FE-FM, cada composto qumico tem uma constante de distribuio cujo valor caracterstico dela prpria, como uma constante fsica, e depende essencialmente de sua natureza qumica e propriedades moleculares.
SFM SFE
KD = [S]FM / [S]FE
KD = Constante de distribuio [S]FM = Concentrao do Soluto na Fase Mvel [S]FE = Concentrao do Soluto na Fase Estacionria Observe que no esquema da Figura 3.14, os equilbrios so competitivos. Um sito ativo da fase estacionria interage competitivamente com grupos qumicos do soluto e com as molculas da fase mvel. Do mesmo modo, as fases mvel e estacionria competem com as molculas do soluto. Da grandeza destas interaes que so definidas as concentraes relativas do soluto nas fases mvel e estacionria como descrita pela equao da Constante de Distribuio .
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Figura 3.14 - Esquema ilustrando as multiplas interaes entre as moleculas do soluto e as fases mvel e estacionria.
5.3 - TIPOS DE CROMATOGRAFIA - CLASSIFICAO Hoje existem inmeras tcnicas de separao baseadas no princpio bsico da
cromatografia: a distribuio diferencial dos componentes de uma mistura entre duas fases. Pra facilitar o estudo, os vrios tipos de cromatografia podem ser classificados em relao a determinados critrios, tais como a) estado fsico da fase mvel, b) estado fsico da fase estacionria, c) mecanismo de separao, d) quantidade de material a ser separado, e) tcnicas experimentais.
5.3.1 - QUANTO AO ESTADO FSICO DA FASE MVEL Levando em considerao o estado fsico da fase mvel, os mtodos cromatogrficos podem ser divididos em dois grandes grupos Cromatografia Gasosa - Quando a fase mvel um gs. Cromatografia Lquida - Quando a fase mvel um lquido.
5.3.2 - QUANTO AO ESTADO FSICO DA FASE ESTACIONRIA A Fase Estacionria de um sistema cromatogrfico pode ser um Slido ou um Lquido no voltil imobilizado na superfcie de um slido. Segundo este critrio podemos ter: Cromatografia de Fase Estacionria slida Cromatografia de Fase Estacionria lquida Da combinao destes dois critrios de classificao surgem cromatografia: quatro tipos bsicos de
CROMATOGRAFIA LQUIDA: Cromatografia Lquido Lquido (C L L) = FM lquido e FE lquido. Cromatografia Lquido Slido (C L S) = FM lquido e FE slido
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CROMATOGRAFIA GASOSA: Cromatografia Gs Slido (C G S) = FM gs e FE slido Cromatografia Gs Lquido (C G L) = FM gs e FE lquido
5.3.3 - QUANTO AO MECANISMO DE SEPARAO Os quatro tipos bsicos de cromatografia acima definidos, podem ser subdivididos segundo o mecanismo envolvido na separao cromatogrfica. O mecanismo de separao cromatogrfica por sua vez depende essencialmente da natureza da Fase Estacionria. Desta forma poderemos ter a separao dos componentes de uma mistura orientada por inmeros mecanismos conforme o tratamento que dermos para a Fase Estacionria. Segundo os mecanismos de seprao, as cromatografia mais empregadas so: CROMATOGRAFIA DE ADSORO (FASE DIRETA) CROMATOGRAFIA DE PARTIO (FASE REVERSA, FASE LIGADA) CROMATOGRAFIA DE FASE QUIRAL CROMATOGRAFIA DE TROCA INICA CROMATOGRAFIA DE EXCLUSO (GEL FILTRAO) CROMATOGRAFIA DE COMPLEXAO
5.3.4 - SEGUNDO A QUANTIDADE DE MATERIAL A SER SEPARADO Do ponto de vista experimental e em funo do objetivo a ser alcanado, a cromatografia pode ser realizada em escala analtica, semi-preparativa e preparativa
conforme for a quantidade de mistura a ser usada na separao. Na cromatografia analtica, objetiva-se obter o cromatograma da mistura o qual dar informaes quanto a quantidade de cada componente e sua identificao, onde se obtm um perfil da amostra. Nas cromatografias semi-preparativa e preparativa objetiva-se isolar fisicamente cada componente da mistura a fim de submete-los as anlises fsico-qumicas e espectroscpicas e outros estudos ou aplicaes que requerem compostos puros.
CROMATOGRAFIA ANALTICA ( AT 1 mg) CROMATOGRAFIA SEMI-PREPARATIVA (1-100 mg) CROMATOGRAFIA PREPARATIVA (MAIS DE 100 mg)
5.3.5 - DO PONTO DE VISTA EXPERIMENTAL De acordo com as tcnicas experimentais utilizadas no desenvolvimento das separaes cromatogrficas, a cromatografia pode ainda ser classificada em:
a) CROMATOGRAFIA PLANAR: Na cromatografia planar a fase estacionria depositada em uma superfcie plana na forma de uma fina camada. A fase mvel lquida flui atravs da fase estacionria por
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capilaridade e o resultado da separao visualizado na superfcie da prpria estacionria. Varias tcnicas cromatogrficas utilizam a cromatografia planar: Cromatografia em Camada Fina (CCF) - Uma fina camada de fase estacionria (Alumina, Silica Gel, Celulose, etc) depositada na superfcie de uma lmina de vidro ou de Alumnio. Eletroforese - No caso de eletroforese a fase estacionria o prprio acetato de celulose que compe as fitas e os solutos migram ao se aplicar uma diferena de potencial. Cromatografia de papel - desenvolvida em papel filtro. A fase estacionria a prpria celulose que compe o papel. fase
b) CROMATOGRAFIA EM COLUNA A fase estacionria colocada no interior de um tubo (geralmente de vidro ou de ao) como se fosse um recheio. A fase mvel lquida introduzida no topo da coluna e flui atravs dela por ao da gravidade. Na extremidade inferior da coluna, uma torneira controla a velocidade de fluxo da fase mvel. O resultado da separao visualizado quando os componentes deteco. c) CROMATOGRAFIA LQUIDA DE ALTA EFICINCIA - CLAE (HPLC) um tipo particular de cromatografia em coluna cujo tamanho das partculas da fase estacionria to pequeno que para a fase mvel lquida fluir atravs dela necessrio ser bombeada a alta presso. a presso e o pequeno tamanho das partculas da fase estacionria e proporcionam a alta eficincia da separao. d) CROMATOGRAFIA GASOSA DE COLUNA EMPACOTADA Na cromatografia gasosa tradicional a fase estacionria lquida ou slida colocada como recheio de uma coluna de vidro ou ao (geralmente de 2mm de dimetro interno por 2-6 m de comprimento). e) CROMATOGRAFIA GASOSA DE ALTA RESOLUO - CGAR A cromatografia gasosa de alta resoluo, tambm chamada de cromatografia gasosa capilar, usa um tubo capilar de vidro ou slica fundida onde a fase estacionria imobilizada na superfcie interna deste tubo capilar. As dimenses da coluna capilar geralmente so de 10 a 50 m de comprimento, 0,25 mm de dimetro interno e um filme lquido de 0,25 . da mistura efluem da coluna, onde pode ser adaptado alguma forma de
f) CROMATOGRAFIA POR GOTAS EM CONTRA CORRENTE - DCC um tipo especial de cromatografia lquido-lquido onde as fases mvel e estacionria so lquidos imissveis de diferentes densidades. A fase lquida estacionria permanece dentro de colunas de vidro, em nmero de 60 colunas (geralmente 3 mm de dimetro po 30 cm de comprimento), e a fase estacionria flui atravs dela na foram de uma gota ascendente ou
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descendente conforme for menos densa ou mais densa que a fase estacionria. As gotas de fase mvel ao passar pela fase estacionria vo extraindo a molculas de soluto como se fosse uma extrao lquido lquido e a separao se d pelos diferentes coeficientes de partio dos componentes da mistura.
O esquema na Figura 3.15, ilustra a classificao da cromatografia levando em conta os critrios acima descritos. Os dois grandes grupos de cromatografia (Cromatografia Gasosa e Cromatografia Lquida) e suas subdivises do ponto de vista experimental. Observe que cada tipo de cromatografia pode ser desenvolvida segundo um ou mais mecanismos de separao.
Figura 3.15 - Esquema ilustrando os tipos de cromatografia
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5.4 - MECANISMOS DE SEPARAO CROMATOGRFICA 5.4.1 CROMATOGRAFIA DE ADSORO As tcnicas cromatogrficas que usam Fase Estacionria Slida com superfcie ativa (presena de grupos qumicos) tais como Cromatografia Lquido Slido e Cromatografia Gs Slido fazem a separao segundo o mecanismo de adsorso. Na Cromatografia por Adsoro, a separao cromatogrfica depende do Equilbrio Adsorso-Desorso. A adsorso um fenmeno de superfcie onde molculas do soluto se grudam na superfcie de um slido atravs das foras de interao intermoleculares como as fracas foras de van der Walls e interaes polares como interaes dipolo-dipolo e pontes de hidrognio. A desorso a remoo das molculas da superfcie do slido promovida por outras foras de interao (Soluto-Fase, Mvel e Fase Mvel-Fase Estacionria) que substituem aquelas foras envolvidas no fenmeno de Adsorso. Dentro do sistema cromatogrfico temos um equilbrio dinmico envolvendo interaes intermoleculares entre molculas do Soluto com molculas da Fase Mvel, entre molculas do Soluto e a superfcie da Fase Estacionria e entre molculas da Fase Mvel e a superfcie da Fase Estacionria. Este conjunto de interaes atinge um equlbrio de Adsorso-Desorso que regido pela competio entre molculas do Soluto (S) e molculas da Fase Mvel (M) por um stio na superfcie ativa da Fase Estacionria. Este conjunto de equilbrios pode ser representado pela equao de equilbrio:
SFM + nMFE
SFE + nMFM
K ad =
[S FE ][M FM ] [S FM ][M FE ]
Onde: SFM = molculas do soluto na fase mvel SFE = molculas do soluto na fase estacionria MFE = molculas da fase mvel adsorvidas na fase estacionria MFM = molculas de fase mvel na fase mvel n = nmero de molculas de fase mvel adsorvidas que devem ser deslocadas pela adsorso de S.
A intensidade com que uma molcula adsorvida superfcie da Fase Estacionria varia consideravelmente e depende essencialmente da natureza de sua polaridade. Assim podemos ter molculas fracamente adsorvidas (onde a nica interao so as fracas foras de van der Walls, at molculas fortemente adsorvidas com o envolvimento de ligaes de hidrognio. Estas foras interativas so de natureza fsica e o fenmeno envolvido a
Fisisorso. Porm, dependendo da natureza qumica das molculas do soluto, estas podem se combinar com os grupos qumicos da superfcie da Fase Estacionria atravs de uma ligao qumica covalente, resultando em Quimisorso. O fenmeno da quimisoro geralmente tem lugar entre molculas altamente polares e fases estacionrias muito ativas como xidos de alumnio, florisil e slica. Esta a grande desvantagem da cromatografia de adsorso que pode
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inviabilizar a separao de compostos altamente polares por se adsorverem irreversivelmente fase estacionria. A cromatografia por adsorso tem a vantagem de ser um mtodo de separao bastante verstil, de baixo custo e de fcil aplicao em trabalhos rotineiros de purificao. Os adsorventes so bastante estveis quimicamente e podem ser facilmente recuperados e
reutilizados inmeras vezes. Por outro lado tem a desvantagem de proporcionar adsorses irreversveis (quimisorso) em presena de molculas muito polares. Os adsorventes mais comuns como a slica (que fracamente cida) e alumina (que fracamente bsica) podem tambm decompor molculas de soluto sensveis a troca de pH como tambm permitir a quimisorso. Em alguns casos uma lavagem com cido ou base recomendada para remover as molculas quimisorvidas. Em geral os adsorventes podem ser recuperados por tratamento com agentes oxidantes em meio cido, como por ex. gua oxigenada.
Fatores que influem na separao por cromatografia de adsorso
a) Polaridade das molculas do soluto A fora com que molculas do soluto se adsorvem a Fase Estacionria est diretamente relacionada a sua polaridade. Por exemplo, na fase estacionria slica, a superfcie hidroxlica interage com os grupos funcionais das molculas de soluto e dependendo da fora desta interao adsorve preferencialmente um ou outro soluto. A tabela abaixo lista os grupos funcionais em ordem crescente de fora com que se adsorvem.Alm da polaridade, certas caractersticas estruturais do soluto tambm so muitoimportantes na separao. Isto pode ser exemplificado pela separao dos ismeros o, m, p-hidroxianilina em slica gel (Fig. 3.16). Os ismeros meta e para interagem com os grupos hidroxilas da superfcie da slica atravs de duas ligaes de hidrognio ao passo que o ismero orto faz apenas uma destas interaes. A diferenciao entre os ismeros meta e para se faz pelas diferentes intensidades das interaes devido as direfentes distncias em que se encontramos grupos hidroxi e amino.
Figura
3.16
Ilustrao
das
interaes entre os ismeros orto, meta e para hidroxi anilina com a superfcie da slica gel.
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Polaridade da fase mvel (fora da Fase Mvel) A capacidade da fase mvel de remover molculas do soluto adsorvidas a superfcie da Fase Estacionria est diretamente relaciona com sua polaridade. Aumentando a polaridade da Fase Mvel, ocorre uma maior competio ente soluto e fase mvel pelos stios ativos na superfcie da fase estacionria. Esta maior interao da fase mvel com a fase estacionria e menor interao do soluto com a fase estacionria, facilita a desoro do soluto que arrastado para fora da Fase Estacionria. O efeito do aumento da polaridade da fase mvel pode ser observado na Figura 3.17 que ilustra a separao de duas cumarinas de distintas polaridades em xido de alumnio como fase estacionria.
solvente fraco
H3C H3C
O O
O H
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
solvente forte
H3C
O O
H3C O H3C H3C CH3 O H3C H3C H3C CH3 O O HC 3 H3C
H3C
O H3C CH3 O H3C CH3 O

O Al O Al O Al O Al O Al O
CH3 H3C CH3 O

Al O Al O
CH3
H
O H3C
CH3
H3C
CH3 O
O
O O O O O
O
Al Al Al O Al O Al O
Al
Al
Al
Al
Al
Al
Al
O Al
alumina
Figura 3.17 - Ilustrao das interaes do soluto com a fase estacionria alumina, num solvente fraco (hexano) e num solvente mais forte (acetona), que compete com o soluto pelos stios ativos da fase estacionria.
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c) Atividade do Adsorvente (Fora do Adsorvente) A atividade dos adsorventes est relacionada com grupos qumicos polares existentes na sua superfcie. A presena destes grupos qumicos tambm permite introduzir modificaes alterando sua atividade quanto as interaes polares. Na tabela que segue, na primeira coluna esto relacionados categorias de solutos em ordem crescente de polaridade. Na segunda coluna, uma srie eluotrpica dos solventes mais comuns utilizados como Fase Mvel. Na terceira coluna esto relacionados os Adsorventes mais usados como Fase Estacionria, em ordem crescente de atividade. qumicas na Fase Estacionria,
SOLUTO Hidrocarbonetos Olefinas teres Comp. . Halogenados Comp. . Aromticos Cetonas Aldedos steres Amidas Aminas lcoois cidos e bases fortes
FASE MVEL (SOLVENTE) ter de petrleo Ciclohexano Benzeno Diclorometano
FASE ESTACIONRIA (ADSORVENTE) Celulose Amido Acares Silicato de Mg
ter etlico
Sulfato de Ca
Clorofrmio Acetato de etila Acetona n-propanol Etanol Metanol gua
Slica Florisil xido de Mg Aluminas Carvo ativo
cido frmico
d) Relao Quantidade Soluto-Adsorvente - A fase estacionria dever ser dimensionada de acordo com a quantidade de material a ser separado. Assim a quantidade de fase estacionria dever proporcionar uma superfcie suficientemente grande para que todas as molculas do soluto possam interagir com a fase estacionria. Para uma mesma quantidade de fase estacionria, aumentando-se a quantidade de amostra a ser separada mais sitios ativos sero utilizados at que num determinado ponto chega-se a saturao do sistema com toda a superfcie da fase estacionria comprometida com as molculas do soluto. A partir deste ponto crtico, as molculas excedentes de soluto deslizam umas sobre as outras sem interagir com a fase estacionria e o sistema perde a capacidade de separao. O fenmeno da saturao do sistema cromatogrfico est ilustrado na figura 3.18.
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Figura 3.18 Ilustrao mostrando a capacidace de um sistema cromatogrfico e sua saturao.
Neste ponto devemos introduzir um outro termo utilizado na cromatografia: a Eluio cromatogrfica que pode ser definida como a passagem do solvente (Fase Mvel) atravs da Fase Estacionria arrastando seletivamente as molculas do soluto. A eluio cromatogrfica pode ocorrer de duas formas: a) Eluio no modo Isocrstico Neste modo seleciona-se um sistema de solventes (um nico solvente, uma mistura binria ou ternria) como fase mvel para a eluio do sistema do incio ao fim sem que sua composio varie. b) Eluio no modo Gradiente Neste modo seleciona-se um par de solventes sendo um apolar e outro mais polar para compor a fase mvel. A eluio inicia com o solvente apolar seguido do aumento gradativo da polaridade da fase mvel pelo aumento da proporo do solvente mais polar.
5.4.2- CROMATOGRAFIA DE PARTIO
Na cromatografia de partio, cromatografia lquido lquido, o soluto particionado entre duas fases lquidas imissveis. A separao depende da solubilidade relativa das
molculas do soluto na fase mvel lquida e fase estacionria lquida. A concentrao relativa do soluto nas fases mvel e estacionria regida pela grandeza da constante equilbrio de partio :
K part . =
[S FM ] [S FE ]
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A fase estacionria constituda por um lquido que est de alguma forma
imobilizado na superfcie de um suporte slido finamente dividido a fim de proporcionar uma grande rea superficial. Portanto a fase estacionria forma um delgado filme lquido na superfcie dos grnulos do suporte slido. A interao do soluto com a fase estacionria
lquida um processo de absoro, ou seja, as molculas do soluto passam para o interior da fase estacionria onde so solubilizadas. O filme lquido que constitui a fase estacionria na cromatografia de partio pode ser um lquido polar ou no polar. Quando a fase estacionria for polar, a fase mvel dever ser apolar e denominamos de cromatografia lquido lquido ou de fase direta. Quando a fase estacionria for apolar, a fase mvel dever ser polar e denominamos de cromatografia lquido lquido em fase reversa. Isto essencialmente necessrio para evitar a miscibilidade de fases. A eluio pode ser no modo isocrstico usando um nico sistema de solvente do incio ao fim do processo de separao. Na cromatografia lquido lquido de fase reversa a eluio no modo gradiente, ao contrrio da cromatografia de adsorso, inicia com o solvente mais polar. Ao contrrio da cromatografia de partio, na cromatografia em fase reversa a ordem de eluio do soluto do mais polar para o menos polar. Como ilustrado na Figura 3.19,
molculas mais apolares tendem a se dissolver mais na fase estacionria apolar. Em conseqncia disto a fase mvel polar interage nenos com o soluto deixando-o mais tempo retido na fase estacionria. Por outro lado, molculas mais polares interagem mais intensamente com a fase mvel polar sendo por ela arrastadas com maior facilidade. Consequentemente sua reteno na fase estacionria bem menor.
FASE
Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si
ESTACIO NRIA
O O O O O
APO LAR - C-18
FASE H
O H O O
M VEL
H O
PO LAR
O H
H O H O H O H O H
H H
O
H
O O O O O O H H H O O
H H
O
H
O
H
H
H parte apolar parte polar O H
SO LUTO
Figura 3.19 - Ilustrao de uma separao por Cromatografia de partio em fase reversa.
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Na cromatografia gasosa, onde a fase mvel um gs, o soluto quando na fase mvel tambm estar na fase gasosa. Deste modo a velocidade com que as molculas do soluto passam da fase lquida estacionria para a fase mvel gasosa depende fundamentalmente de sua presso de vapor (volatilidade) que est intimamente relacionada com seu ponto de ebulio. Assim, de modo geral, a ordem de eluio obedece a ordem de seu ponto de ebulio. Porm devemos ressaltar que as fases lquida estacionria preparadas para a cromatografia gasosa pode ter vrios graus de polaridade o que proporciona outras interaes com o soluto tambm influindo na ordem de eluio.
5.4.3 CROMATOGRAFIA POR EXCLUSO
A cromatografia por excluso tambm chamada de gel filtrao, separa as molculas do soluto por ordem de tamanho. Neste tipo de cromatografia a fase estacionria deve ser quimicamente inerte, portanto no ocorre nenhum tipo de interao fsica ou qumica,
simplesmente um processo mecnico como uma filtrao. A fase estacionria um gel constitudo por gros porosos. Cada tipo de gel tem gros com porosidades distintas que podem excluir molculas em determinadas faixas de peso molecular. As molculas pequenas entram nos poros existentes nos gros do gel ficando a retidas por determinado tempo. As molculas grandes, que no cabem nos poros, so rapidamente arrastadas pelo solvente. Molculas de tamanhos intermedirios, algumas entram nos poros outras no, tendo reteno intermediria. Considerando que o nico fenmeno envolvido a difuso molecular, a o tamanho das molculas do soluto depende de seu raio hidrodinmico, isto , o raio definido pela rotao da molcula em torno de seu centro. Deste modo a reteno tambm depende da topografia molecular. Assim, dentro da mesma faixa de peso molecular, molculas com grandes cadeias lineares so retardadas em relao as molculas curtas (mais ramificadas). O equilbrio estabelecido na cromatografia por excluso descrito pela equao:
K=
[S FE ] = k ' VFM [S FM ] V FE
Onde: SFM e SFE so as quantidades de soluto na fase mvel e estacionria K = coeficiente de distribuio VFM = volume intersticial total da fase mvel VFE = volume da fase mvel dentro dos poros disponvel para o soluto No processo de permeao, assume-se que todos os poros so acessveis a um soluto, ento [SFE] = [SFM] e K = 1. Se nenhum poro est disponvel ao soluto, [SFE] = 0 e K = 0. Deste modo os valores da constante de distribuio K podem variar de 1 a 0, isto quer dizer que todos os componentes do soluto eluem num volume finito.
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5.4.4 CROMATOGRAFIA POR TROCA INICA
A cromatografia por troca inica utiliza como fase estacionria
slidos porosos,
geralmente resinas, contendo grupos inicos ligados a sua estrutura. Estas resinas trocadoras de ions podem ser de dois tipos conforme sua natureza inica: -Resinas Catinicas So aquelas cujo grupo inico um nion e so utilizadas para a separao de ctions. -Resinas Aninicas So resinas cujo grupo inico um ction e so utilizadas para a separao de nions. Este mtodo de separao geralmente aplicado a compostos inicos ou ionizveis como cidos e bases. O processo de troca inica pode ocorrer tanto em meio aquoso como em meio no aquoso, porm a fase mvel dever conter um contra ion oposto em carga ao grupo inico da superfcie da resina para manter com ela um equilbrio na forma de um par inico. Geralmente sistemas tampes so bastante adequados como fase mvel. Numa resina catinica, por ex., os ctions do soluto interagem eletrostaticamente com a superfcie da fase estacionria negativamente carregada deslocando o contra ons a presente. Este ction s ser deslocado quando um outro ction, que constitui a fase mvel, ocupar o seu lugar. Deste modo temos uma competio entre os ons do soluto e da fase mvel pela superfcie inica da fase estacionria numa forma de equilbrio conforme ilustrado na Figura 3.20 representando resinas catinica e aninica.
Figura 3.20 Ilustrao da estrutura de resinas catinicas e aninicas com a representao dos equilbrios de troca inica.
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O equilbrio do processo de troca de nions estabelecido numa resina trocadora de ons pode ser representado pela equao:
K=
[NR [NR
4 4
X Cl Cl X
][ ] ][ ]
O coeficiente de distribuio K depende de parmetros experimentais como pH, carga inica, raio inico, porosidade da resina, fora inica e solvente. Diferentes ons podem ser seletivamente removidos da superfcie inica da fase estacionria alterando a composio inica da fase mvel. Por ex. na separao de
aminocidos, estes podem ser separados em funo de seus pontos isoeltricos variando o pH do sistema tampo que constitui da fase mvel.
5.4.5 CROMATOGRAFIA DE FASE QUIRAL
A cromatografia quiral utiliza fases estacionrias quirais especialmente preparadas para problemas de separao de misturas quirais. Molculas quirais apresentam as mesmas foras de interao com fases estacionais comuns (adsorso e partio) devido que possuem os mesmos grupos qumicos na molcula, a diferena que uma molcula a imagem especular da outra. Veja o exemplo mostrado na Figura 3.21
OH C R G
OH C R G
Figura 3.21 Representao de um par de nantiomeros
Uma fase quiral especialmente preparada reter apenas uma espcie do par de enantimeros por permitir uma melhor interao com a fase estacionria. como ilustrado na figura abaixo. A Figura 3.22 ilustra os mecanismos de separao para as cromatografias de adsoro, partio, toca inica, excluso e cromatografia quiral.
53
Figura 3.22 - Ilustrao dos mecanismos de separao para as cromatografias de adsoro, partio, toca inica, excluso e cromatografia quiral.
5.5 - TEORIA DA SEPARAO CROMATOGRFICA ALGUNS PARMETROS RELEVANTES
5.5.1 - RETENO CROMATOGRFICA A Reteno Cromatogrfica um parmetro que descreve o quanto as molculas do soluto interagem com a fase estacionria e depende da estrutura molecular do soluto. Num determinado sistema cromatogrfico, cada composto orgnico tem uma reteno
cromatogrfica que lhe prpria como uma propriedade fsica qualquer. Por isto mesmo utilizado para a identificao dos compostos orgnicos por cromatografia. A reteno cromatogrfica pode ser medida de diversas maneiras dependendo do tipo de cromatografia:
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I - TEMPO DE RETENO:
tR = tR- tM
no sistema
tR o tempo contado desde o momento da injeo de uma substncia cromatogrfico at a mesma sair da coluna.
tM = TEMPO MORTO o tempo em que a fase mvel levaria para percorrer toda a extenso da fase estacionria sem fazer nenhuma interao com a fase stacionria. tR = TEMPO DE RETENO AJUSTADO o tempo real em que o soluto permanece na fase estacionria. No cromatograma hipottico da figura 3.24, o tempo de reteno medido experimentalmente 6 min. O tempo de reteno ajustado calculado pela equao tR = tR- tM de 5 min.
Figura 3.24 - Cromatograma hipottico mostrando os parmetros de reteno cromatogrfica relacionadas ao tempo
O tempo de reteno o parmetro de reteno mais utilizado na cromatografia gasosa e na cromatografia lquida de alta eficincia.
II - VOLUME DE RETENO:
vR = vR - vM
vR = VOLUME DE RETENO AJUSTADO definido como o volume real de fase mvel necessria para eluir o soluto. vM = Volume morto o volume intersticial de uma coluna, isto o volume de fase mvel dentro da coluna. O volume de reteno usado em cromatografia gasosa e em cromatografia lquida em coluna e pode servir para calcular a quantidade de solvente necessrio para efetuar a separao de determinada mistura.
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III - FATOR DE RETENO:
Rf = dS / dM
dM = distncia percorrida pela fase mvel desde a origem a frente do solvente. dS = distncia percorrida pelo soluto O fator de reteno ou reteno relativa (Rf) o parmetro de reteno utilizado na cromatografia planar e refere-se o quanto uma substncia migra em relao a frente do solvente. A figura 3.25 ilustra o clculo do fator de reteno num sistema cromatogrfico hipottico. Num determinado sistema cromatogrfico (fase estacionria-fase mvel) cada composto orgnico tem um fator de reteno (Rf) que lhe prprio e o parmetro de
comparao para diferenciar e identificar os componentes de uma mistura.
Figura 3.25 - Hipottica cromatografia em camada fina mostrando os fatores de reteno. Como se pode observar, a frente da fase mvel deslocou 12 unidades, o componente deslocou 6 unidades. Aplicando a esquo, obtem-se um Rf = 0.5 para este hipottico composto.
5.5.2 - RESOLUO O objetivo da cromatografia separar os componentes de uma mistura dentro de uma zona de separao e tempo razoveis. A resoluo um parmetro que define o quanto dois componentes podem ser separados um do outro num determinado sistema cromatogrfico. Considerando o cromatograma da figura 3.26 para a separao de uma mistura binria, a resoluo entre os dois picos dada pela equao:
R=
t R 2 t R1 (w2 w1 ) / 21
56
Figura 3.26 - Cromatograma mostrando a resoluo entre os componentes de uma mistura binria, onde: tR2 e tR1 = tempo de reteno medido desde o momento de introduo da at o mximo do pico, respectivamente para os e 2 w2 = largura da base do pico para os componentes 1
amostra no sistema cromatogrfico componentes 1 e 2. w1 e respectivamente.
Considerando que a largura de dois picos correspondentes a dois compostos que eluem em tempos de reteno muito prximos no varia (w1 = w2) a resoluo pode ser dada por:
R=
t SELETIVIADE = w2 EFICINCIA
direta da diferena dos tempos de
A equao que define a resoluo funo
reteno (SELETIVIDADE) e inversa da largura do pico (EFICINCIA). Portanto a resoluo depende de dois fatores: a) - LARGURA DO PICO = EFICINCIA b) - DISTNCIA ENTRE OS MAXIMOS = SELETIVIDADE
5.5.3 - EFICINCIA A eficincia de uma coluna cromatogrfica determinada pela largura do pico, isto a extenso em que cada componente de uma mistura se espalha pela fase estacionria. A eficincia funo dos parmetros da coluna: - FLUXO DA FASE MVEL - GRADIENTE DE ELUIO - NATUREZA DA F. M.
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- PRESSO - NATUREZA DA F. E. - TEMPERATURA - GRANDEZA DA PARTCULA - DIMETRO DA COLUNA OU ESPESSURA DA CAMADA DELGADA
O NMERO DE PRATOS TERICOS (N) a expresso quantitativa da eficincia do sistema cromatogrfico e definido pela equao:
t t N = R = 16 R w
onde tR o tempo de reteno e o desvio padro do pico (Fig. 3.22). O pico cromatogrfico a distribuio Gausina do componente na coluna cujos limites na prtica so dados pela largura do pico: w = 4. O nmero de pratos tericos um conceito originrio da teoria da destilao e usamos aqui para medir a eficincia da coluna (ou da capa fina). Basicamente a formula compara a largura do pico com o tempo em que o componente permanece na coluna. Assim uma coluna eficiente leva a obteno de picos estreitos. Como a largura do pico depende do tempo em que o componente permanece na coluna, o nmero de pratos tericos depende do comprimento da coluna (ou da distncia percorrida pela frente do solvente na cromatografia planar). Desta forma definimos um outro termo mais geral para expressar quantitativamente a eficincia e comparar colunas de diferentes comprimentos, a altura equivalente a um prato terico (H).
H =L
Na prtica o nmero de pratos tericos pode ser calculado a partir dos dados de um cromatograma como segue como ilustrado na Figura 3.27.
Figura 3.27 - Cromatograma tpicomostrando o tempo de reteno (tR), a largura do pico (w) e o desvio padro () tomado a meia altura.
58
5.5.4 - FONTES DE ALARGAMENTO A largura do pico depende do tempo em que o soluto permanece na coluna. Quanto mais tempo um componente permanece na coluna maior a probabilidade de se espalhar pela fase estacionria devido a uma srie de fenmenos que ocorrem durante a eluio. Porm podemos descrever trs fontes principais que contribuem para o alargamento: a) caminhos mltiplos, b) difuso molecular e c) transferncia de massas.
A - CAMINHOS MLTIPLOS: As molculas de um mesmo componente atravessam a coluna (ou a capa fina) a diferentes velocidades resultando em tempos de reteno diferentes como mostra a ilustrao da figura 3.28. O mximo do pico representa o tempo mdio. Assim: - a velocidade mdia que determina o TEMPO DE RETENO ( tR) - diferentes velocidades causam ZONA DE DISPERSO (ALARGAMENTO) A expresso para zona de alargamento dada por:
HP = 2 dp
HP = contribuio das diferentes velocidades dp = dimetro da partcula de fase estacionria
= empacotamento, regularidade com que as partculas de FE so acomodadas

na coluna
Figura 3.28 - Variaes na velocidade do fluxo da fase mvel devido ao empacotamento e diferentes tamanhos de partcula.
B - DIFUSO MOLECULAR: A difuso molecular um fenmeno fsico bastante conhecido. Qualquer soluto ao ser colocado num meio lquido ou gasoso, suas molculas tendem a se dispersarem at ficarem uniformemente distribudas por todo o meio. Num sistema cromatogrfico a difuso longitudinal ocorre tanto na fase estacionria como na fase mvel. Porm a difuso na fase estacionria to lenta que pode ser ignorada para efeitos prticos.
59
A difuso molecular depende do tempo de permanncia do soluto na F. E. Assim, a difuso aumenta com a diminuio do fluxo da fase mvel. Na figura 3.29 so ilustradas a distribuio do soluto na fase mvel em funo da velocidade da fase mvel. A contribuio da difuso molecular para a altura equivalente a um prato terico dada pela equao: Dm = coeficiente de difuso molecular do soluto na
Hd = 2 Dm /
fase mvel
= velocidade do fluxo da F. M. = fator tortuosidade (empacotamento)
Figura 3.29 - Ilustrao da distribuio do soluto com o aumento da difuso molecular.
5.6 - CROMATOGRAFIA EM CAMADA FINA
5.6.1 - Preparo da ccf A cromatografia em camada fina um tipo de cromatografia planar em que a fase estacionria espalhada numa superfcie plana tal como uma placa de vidro, folha de alumnio ou outro material apropriado. As placas de cromatografia em camada fina podem ser preparadas no laboratrio em placas de vidro com dimenses variadas, sendo que as mais utilizadas so placas 20 x 20 cm para anlise de at 20 amostras, placas 5 x 20 cm para anlise de at seis amostras ou laminas de microscpio (2,5 x 7,5 cm para anlise de at cinco amostras. A espessura da camada de fase estacionria de aprocimadamente 0,2 mm para propsitos analticos e de at 2 mm para separaes preparativas. Para confeccionar as placas de ccf de slica gel, prepara-se uma suspenmso de slica em agua destilada na proporo de 1 parte de slica gel para 1/3 partes de gua,
60
homogenizando bem at a obteno de uma suspenso de consistncia apropriada. Espalhase esta suspenso sobre placas de vidro, manualmente ou com auxlio de aplicadores especiais. Deixa-se as placas secarem ao ambiente em uma superfcie plana e nivelada. Antes do uso as placas de ccf devem ser ativadas em estufa a uma temperatura de 110 C por um perodo mnimo de 30 minutos. Alternativamente, existem placas prontas de ccf sobre folhas de alumnio em embalagens de 20 placas de dimenses 20 x20 cm. Esta placas podem ser cortadas com tesoura ou estilete no tamanho desejado.
5.6.2 - Aplicao da Amostra As amostras a serem analisadas por ccf devem ser aplicadas diretamente na placa, sobre uma linha imaginria a 1 cm de uma das extremidades da placa e a pelo menos 1 cm das laterais. A amostra deve ser previamente dissolvida num solvente voltil apropriado e a uma concentrao que no permita asaturao do ponto de aplicao. Com auxlio de um capilar de vidro feita a amostragem da amostra dissolvida e ento aplicada na placa na forma de um pequeno pnto. O ponto de aplicao deve ser o menor possvel para minimizar os problemas de alargamento de banda. Nas camadas preparativas, a amostra previamente dissolvida deve ser aplicada ininterruptamente ao longo de uma linha imaginria dista a 1 cm de uma das extremidades e das laterais da placa cromatogrfica. A figura 3.30 ilustra a tcnica de aplicao da amostra num sistema analtico (Fig. 3.30 A) e prepartivo (Fig. 3.30 B).
Figura 3.30 -: Ilustrando a aplicao da amostra na ccf: A) analtica, B) preparativa.
5.6.3 - Escolha da fase mvel Dois fatores so importantes na escolha da fase mvel: a fora e a seletividade. A fora do solvente Fase Mvel faz com que o Soluto migre na superfcie da Fase Estacionria e a seletividade permite a migrao diferencial de dois ou mais componentes. Assim, se a FM for
61
muito forte (ou seja, muito polar na cromatografia de adsoro) ela carrega os componentes da mistura para a extremidade da placa sem permitir sua separao. Se a FM for muito fraca, por outro lado, ela deixa os componentes da mistura prximo ao ponto de aplicao. No entanto, uma FM com fora intermediria e boa seletividade, promove a separao eficiente dos componentes da mistura. A figura 3.31 ilustra estas situaes.
Figura 3.31 Ilustrao da anlise de uma amostra mostrando a eluio com uma FM fraca, FM forte e uma FM ideal.
A escolha adequada da FM um dos fatores mais importantes no sucesso de uma separao cromatogrfica. A escolha da FM ideal pode ser feita rapidamente testando misturas binrias de solventes do seguinte modo: em uma plaquinha de ccf aplica-se trs pontos com a amostra e espera evaporar o solvente. A seguir, com auxlio de um capilar, dispesar diferentes FM sobre os pontos e permir que o solvente se espalhe radialmente carreando os
componentes da amostra. Observa-se visualmente a melhor separao como ilustrado na figura 3.32.
Figura 3.32 - Escolha da Fase Mvel: A) FM fraca, B) FM forte demais, C) FM ideal
5.5.4 Eluio e Anlise Uma vez que as amostras a serem analisadas forem aplicadas na linha de origem da placa de ccf como mostr a figura 3.31. A placa colocada numa cuba contendo a fase mvel e a mesma permitida subir por capilaridade atravs da camada de fase estacionria,
62
arrastando seletivamente os componentes da amostra. A figura 3.33 ilustra a sequncia de eluio de uma cromatografia em camada fina (ccf).
Figura 3.33 Ilustrao para a eluio de uma placa de ccf.
Aps a eluio a placa ccf pode ser visualisada numa cmara sob luz UV ou atravs de revelarores qumicos, como ilustra a figura 3.34. A migrao de cada componente da amostra uma caracterstica de sua estrutura e pode ser utilizada como identificao. Esta migrao quantificada pleo fator de reteno (Rf) que calculado pela raso entre a distncia de migrao do componente dx pela distncia de migrao do eluente ds (linha superior mostrada nas ccf da figura 3.31): Rf=dx/ds. Os componentes da amostra podem ento serem identificados atravs da comparao dos seus Rf com os de padres eludos nas mesmas condies como ilustra a figura 3.35.
Figura 3.34 Ilustrao de ccf visualisada com revelarores qumicos
63
Figura 3.35 Ilustrao de uma anlise por ccd hipotticas com a identificao dos componentes da amostra atravs da comparao com padres.
5.7 CROMATOGRAFIA EM COLUNA
64

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Textos curriculares de Anlise Orgnica QMC 5215 e QMC 5226 Prof.

Moacir Geraldo Pizzolatti Departamento de Qumica -UFSC

I - SEPARAO DE MISTURAS E ISOLAMENTO DO COMPOSTO PURO:

III- ANLISE QUANTITATIVA

Figura 1.1- Esquema ilustrativo de uma anlise quantitativa.

propriedades e a instrumentao para medi-las:

Propriedade Medida Absoro de Radiao Eletromagntica

Emisso de Radiao Eletromagntica

Espalhamento da Radiao Eletromagntica

0,2 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0

Figura 2.2 Ilustrao de uma curva de calibrao

onde n o nmero de pontos da reta.

MTODOS CLSSICOS DE ANLISE ORGNICA IDENTIFICAO SISTEMTICA DE COMPOSTOS ORGNICOS

1.1- Estado fsico:

A verificao do estado fsico da amostra a ser analisada, a

3.1 - Ponto de Fuso:

HIDROC. TER ALDEIDO CETONA LCOOL

3.4 - Densidade Especfica

3.5 - ndice de Refrao

M = massa molecular da substncia d = densidade n = ndice de refrao

4 - DETERMINAO DA MASSA MOLECULAR

4.1 - Aplicando a Lei de Raoult

T = Diminuio do ponto de congelamento

T = Elevao do ponto de ebulio

4.2- Espetrometria de Massas

5.1- Anlise Elementar Qualitativa

Neste tipo de anlise

determina-se a natureza qumica dos elementos que compem

A - Fuso com Sdio

Figura 2.5 - Esquema para os testes de solubilidade em amostras solveis em gua

Figura 2.5 - Esquema para os testes de solubilidade em amostras insolveis em gua

Classes de conpostos representativas dos grupos de solubilidade

Bases de baixo peso molecular com at cinco tomos de carbono e

-Soluo etanlica de nitrato de prata -Iodeto de sdio em acetona

-Phenilhidrazina e 2,4-dinitrofenilhidrazina -Cloridrato de hidroxilamina -Bissulfito de sdio -Teste do Iodofrmio - metilcetonas

-Reao de Benedict - Cobre -Reao de Tollens - Espelho de Prata -Fuchsina

-gua de Bromo -Cloreto Frrico -Cloreto de cido

-Permanganato de Potssio -Bromo em tetracloreto de carbono

-Zinco em cloreto de amnia -Hidroxido ferroso -Hidrxido de sdio

-Saponificao -Cloridrato de hidroxilamina

-Reao de Lucas - cido clordrico/cloreto de zinco

-cido clordrico -gua de bromo

de estrutura atividade (QSAR) que tem se tornado uma

CAPTULO - III MTODOS DE SEPARAO E PURIFICAO

2.1 - DESTILAO SIMPLES e DESTILAO A VCUO

Figura 3.1 - Esquema de um sistema para destilao simples a vcuo.

2.2 - DESTILAO POR ARRASTE DE VAPOR

Figura 3.2 - Esquema de um sistema de destilao por arraste de vapor

fase oleosa fase aquosa frasco extrator e gerador de vapor

2.3 - DESTILAO FRACIONADA

Figura 3.4 - Esquema de um aparelho de destilao fracionada.

Figura 3.5 - Diferentes tipos de coluna de fracionamento

condensador tipo dedo frio

material a ser sublimado banho maria

Figura 3.7 - Esquema de um aparelho de sublimao

Figura 3.8 - Diagrama de equilbrio entre fases slida, lquida e gasosa.

solventes. O sistema atinge um equilbrio de transferncia de fase dado pela equao:

XA e XB so as concentraes do componente X nas fases A e B

a Constante de Equilbrio de Distribuio ou Constante de

adequada recuperao do soluto aplicando a seguinte equao:

4.2 - EXTRAO LQUIDO-LQUIDO CONTNUA

4.3 - EXTRAO LQUIDO-SLIDO

intracelulares que so arrastados pelo solvente. O resultado da

capacidade extrativa do solvente devido a diminuio de sua viscosidade.