MEIOS DE CULTURA

At cerca de 1880 os microrganismos eram cultivados em meios lquidos, quando

Robert Koch e sua equipe introduziram os meios de cultura slidos, os quais permitiram o
estudo de espcies isoladas culturas puras!, separando"as de espcies contaminantes#
$eios de cultura consistem da associa%&o qualitativa e quantitativa de subst'ncias
que (ornecem os nutrientes necess)rios ao desenvolvimento cultivo! de microrganismos
(ora do seu meio natural# *endo em vista a ampla diversidade metablica dos
microrganismos, e+istem v)rios tipos de meios de cultura para satis(azerem as variadas
e+ig,ncias nutricionais# Alm dos nutrientes preciso (ornecer condi%-es ambientais
(avor)veis ao desenvolvimento dos microrganismos, tais como p., press&o osmtica,
umidade, temperatura, atmos(era aerbia, microaerbia ou anaerbia!, dentre outras#
/s meios de cultura s&o classi(icados quanto ao estado fsico em slidos, quando
contm agentes solidi(icantes, principalmente )gar cerca de 1 a 0,0 1!2 semi-slidos,
quando a quantidade de )gar e ou gelatina de 0,034 a 0,4 1, dando uma consist,ncia
intermedi)ria, de modo a permitir o crescimento de microrganismos em tens-es variadas de
o+ig,nio ou a veri(ica%&o da motilidade e tambm para conserva%&o de culturas2 e lquidos,
sem agentes solidi(icantes, apresentando"se como um caldo, utilizados para ativa%&o das
culturas, repiques de microrganismos, provas bioqumicas, dentre outros#
/s meios de cultura podem ainda ser classi(icados quanto a procedncia dos
constituintes em naturais ou complexos, quando usa ingredientes com composio
qumica no definida, tais como e+tratos de vegetais malte, tomate, amido de tubrculos,
peptona de so5a, etc#! de animais carne, crebro, (gado, casena, etc#! e de microrganismos
levedura! e artificiais, sintticos ou ainda quimicamente definidos quando a composio
qumica conhecida usados para trabalhos de pesquisa! e seus componentes servem para
suprir as e+ig,ncias nutritivas dos microrganismos, em (ontes de carbono, nitrog,nio,
vitaminas, energia, sais minerais, dentre outros, quando ent&o s&o conhecidas as
necessidades nutricionais espec(icas# 6uanto a composi%&o qumica podem ser simples
meios b)sicos! ou comple+os#
Bsicos s&o aqueles que permitem o crescimento bacteriano, sem satis(azer contudo
nenhuma exigncia em especial 7+# caldo e )gar simples!#
Especiais quando cumprem com as exigncias vitais de determinados microrganismos,
como meio de in(us&o de crebro e cora%&o, )gar suco de tomate, )gar sangue, meio de
8oe((ler com soro bovino!, )gar chocolate agar simples (undido, adicionado de sangue e
aquecido a 809:!, $eio de *arozzi com (ragmento de (gado " para anaerbios!, $eio de
8o;enstein, meios <hahidi =erguson >er(ringens <=>!, *riptose <ul(ito :iclosserina
*<:! , ?aird">ar@er com gema de ovo! meios ricos ou meios enriquecidos com as
subst'ncias citadas!, etc#
!"etivos
7sta parte trata de (amiliarizar o aluno com o preparo e esteriliza%&o de meios de cultura,
bem como conhecer e discutir a aplica%&o dos diversos tipos de meios de cultura#
APLICAO DOS MEIOS DE CULTURA
Ae acordo com a (inalidade bacteriolgica ou micolgica os meios especiais podem ser
classi(icados emB
#eios de pr-enriquecimento - s&o aqueles que permitem a dessensibiliza%&o de
microrganismos in5uriados, i#e#, para amostras que so(reram algum tipo de tratamento
trmico ou qumico!# 7+# Cgua peptonada, caldo lactosado isolamento de salmonelas de
leite em p!#
#eios de Enriquecimento - quando proporcionam nutrientes adequados ao crescimento de
microrganismos presentes usualmente em bai+os nDmeros ou de crescimento lento, bem
como microrganismos e+igentes e (astidiosos# 7sses meios t,m a propriedade de estimular
o crescimento de determinados microrganismos, mas e+istem alguns que tambm podem
inibir o crescimento de outros# 7+# :aldo *etrationato e <elenito":istina para cultivo de
<almonelas lquidos!, :aldo *ioglicolato para Clostridium perfringens#
$iferenciais " quando contm subst'ncias que permitem estabelecer di(eren%as entre
microrganismos muito parecidos, tais como meio de *eague ou 7osina Azul de $etileno
di(erencial para coli(ormes!, Cgar $ac:on@eE para a di(erencia%&o de enterobactrias,
Cgar sangue, agar ?aird">ar@er para isolamento e di(erencia%&o de cocos Fram positivos
slidos!#
%eletivos " os que contm subst'ncias que inibem o desenvolvimento de determinados
grupos de microrganismos, permitindo o crescimento de outros# 7+emploB meios com
telurito de pot)ssio para isolamento de Corynebacterium diphtheriae!, )gar <almonella"
<higella <<! e )gar $ac:on@eE, meios com sais biliares e verde brilhante para isolamento
seletivo de Salmonella, meios com 3,41 de cloreto de sdio, meio ?aird">ar@er, para
isolamento de Staphylococcus aureus, meios com antibiticos para isolamento de diversos
microrganismos *<:, <=>, , meio de ?laser, meio de <@irro;, etc#!# A maioria deles
tambm di(erencial, permitindo di(erenciar as colGnias slidos! dos microrganismos#
#eios de triagem " meios que avaliam determinadas atividades metablicas permitindo
caracteriza%&o e identi(ica%&o per(unctria ou presuntiva de muitos microrganismos )gar
trplice a%Dcar e (erro, meio Hnstituto Adol(o 8utz, uria, etc#!2
&dentificao " prestam"se para a realiza%&o de provas bioqumicas e veri(ica%&o de
(un%-es (isiolgicas de organismos submetidos a identi(ica%&o meios
/+ida%&oI=ermenta%&o, Cgar :itrato, :aldo nitrato, meio semi"slido, caldo tripto(ano,
meio de <ul(ito Hndol $otilidade, etc#2
$osagem " empregados nas determina%-es de vitaminas, antibiticos e amino)cidos2
'ontagem " empregados para a determina%&o quantitativa da popula%&o microbiana Agar
de :ontagem em >lacas, *<:, Agar ?atata Ae+trose, Cgar ?aird">ar@er, etc#!2
Estocagem ou manuteno " utilizados para conserva%&o de microrganismos no
laboratrio, i#e# garantem a viabilidade de microrganismos Cgar <abouraud, $eios com
leite, Cgar suco de tomate, Cgar sangue, Cgar <imples, meio semi"slido, etc#!#
()E(*) $E #E&% $E '+,-+)*
'aldo %imples - formulao.
7+trato de carne ############ 0,J g
>eptona ######################### 1,0 g
:lor7to de sdio ############ 0,4 g
Cgua destilada ############## 100,0 ml
/ )gar simples obtido adicionando"se 1,0 a 1,4 1 de )gar")gar ao meio de caldo
simples o meio pode (icar um pouco amolecido, a depender da qualidade do )gar!#
Aumentando"se a concentra%&o de )gar para 0,01 o meio (ica bem slido e pode"se evitar
que certos microrganismos se espalhem, como os Proteus#
(reparao
1# >esar as subst'ncias e coloc)"las em um bquer a e+ce%&o do )gar!
0# Acrescentar a metade dos 100 ml de )gua destilada ou desmineralizada, medida com
uma proveta
J# Aissolver os ingredientes em )gua agitando continuamente com um bast&o de vidro ou
com um agitador eltrico uso de barra magntica!, evitando a (orma%&o de espuma#
Aps a (orma%&o de uma suspens&o homog,nea, completar o volume do meio com o
restante da )gua
K# 6uando necess)rio, dissolver os ingredientes do meio de cultura em banho"maria, vapor
(luente em autoclave ou utilizando a chama do bico de ?unsen, ou chapa aquecedora
eltrica, protegida com tela de amianto, ou ainda em (orno de microondas, at a
ebuli%&o, agitando sempre# 7vitar o aquecimento desnecess)rio
4# =iltrar em papel de (iltro qualitativo para retirar as impurezas
L# Meri(icar o p. atravs de potenciGmetro ou (ita indicadora de p. e a5ustar para 3,0
usando solu%&o de )cido l)tico 0,1 1! ou hidr+ido de sdio 1,0 N!, com pipeta de 1
mililitro, gote5ando aos poucos# / p. do Oagar simplesP a5ustado antes da adi%&o do
)gar")gar
3# Aistribuir 40 ml do meio em tubos de ensaio 4 a 3 ml por tubo!
8# *amponar os tubos, proteg,"los com papel e amarr)"los com barbante
Q# 7sterilizar em autoclave a 1019: 1 atmos(era de press&o! por 00 minutos# Aei+ar dois
tubos sem esterilizar, incub)"los a J39: por 0K a K8 horas, para constatar a necessidade
de esteriliza%&o#
/bserva%&oB Alguns meios de cultura s&o preparados da mesma (orma, porm se (or
necess)rio utilizar algumas subst'ncias termol)beis uria! ou que rea5am com as
subst'ncias dos meios amino)cidos, a%Dcares!, as mesmas s&o esterilizadas R parte ou por
(iltra%&o utilizando =iltro <eitz ou =iltros contendo membranas de nitrocelulose ou acetato
de celulose! com poros de 0,00um de di'metro $illipore, <artorius!, e depois
incorporadas, asspticamente, ao meio previamente esterilizado# Ainda, podem ser
esterilizados por tindaliza%&o, tambm conhecida como esteriliza%&o (racionada 1009: por
1 hora por J dias consecutivos, intercalados por incuba%&o entre J0 a K49:!, ou a 1109: por
10 a 14 minutos, a depender do tipo e carga microbiana#
/gar %imples
1# Aos 40 ml de caldo simples restantes, acrescentar 0,4 a 1,0 g de )gar")gar
0# :olocar o bquer sobre uma tela de amianto a5ustada num trip met)lico tendo por
bai+o o bico de ?unsen aceso!
J# Aissolver o )gar no meio, me+endo sempre com um bast&o de vidro, para n&o aderir ao
bquer, at a completa dissolu%&o, evidenciada pela aus,ncia de gr'nulos de )gar nas
paredes do recipiente, tornando"se lmpido# Hsto somente se consegue com a ebuli%&o do
meio
K# :olocar em 7rlenmeEer, tampar, proteger com papel e barbante
4# 7sterilizar em autoclave a 1019: por 00 minutos
L# Retirar do autoclave, es(ri)"lo a 40"309: e distribuir cerca de 14 a 00 ml por cada placa!
em placas de >etri 14 + 100mm! estreis# /u ainda, caso necess)rio, colocar em banho"
maria a K4"449:, adicionar 10 ml de sangue o+alatado de coelho ou de ovino Cgar
<angue!, e distribuir em placas de >etri estreis# previamente esterilizadas!# <e antes da
distribui%&o este meio (or aquecido a 809: at (icar de cor marrom, temos o Agar
chocolate#
Funo das substncias do gar e Caldo simples
7+trato de carne " =onte de carbono org'nico, nitrog,nio, vitaminas e sais minerais e, nesse
caso de energia
>eptona S protena semi"digerida que serve como (onte de nitrog,nio
:loreto de sdio " aumenta a press&o osmtica e mantm a isotonia do meio
Cgar")gar " <ul(ato de )cido poligalacturGnico e+trado de v)rias espcies de algas do
g,nero Gellidum e outras algas a(ins# *em como (un%&o solidi(icar os meios e n&o
metabolizado por bactrias de interesse clnico#
/bs# 1# A adi%&o de e+trato de levedura 0,41! e glicose 0,4 a 1,0 1! ao caldo simples
enriquece o meio (ornecendo vitamina ?, (onte adicional de nitrog,nio e carbono, e pode
at permitir o crescimento de alguns microrganismos e+igentes# 0# /s meios de cultura aps
esteriliza%&o devem ser incubados em condi%-es ambientais temperatura e atmos(era!
adequadas para veri(ica%&o da esterilidade >rova da esterilidade!# J# A estocagem dos
meios de cultura esterilizados e es(riados deve ser (eita acondicionando"os invertidos, em
sacos pl)sticos (echados, para reduzir a desidrata%&o dos mesmos, colocando"os em
re(rigera%&o por, no m)+imo 14 dias#