Aprenda como calcular o Fator de Calibrao em procedimentos

manuais e automticos.
Na realizao de testes cinticos para determinao das enzimas, muitas vezes nos deparamos com
algumas dificuldades no momento de definir o Fator de Calibrao exato de trabalho. Isto acontece porque
o Fator depende de uma srie de variveis que devem ser computadas juntas para ento chegarmos ao seu
valor.
Estas variveis so:

- Volume de Amostra (VA),
- Volume de Reagente (VR),
- Volume de Diluente (VD), quando utilizado,
- Volume Total (VT) = VA + VR + VD,
- Caminho ptico do equipamento em centmetros (C) e
- Coeficiente de Absortividade do Composto Corado/Substrato ( ) (Epsilon)
O corresponde a quanto que um composto absorve a luz em um dado comprimento de onda, num
caminho ptico de 1 cm e na concentrao de 1 mM.
Por exemplo: o do NADH a 340 nm e 1 mM = 6,3.

A Tabela abaixo mostra os s de alguns compostos correspondentes aos reagentes BioTcnica, com seus
respectivos comprimentos de onda ( ), em nanmetros.
OBS:
1-Os reagentes cinticos Creatinina e Uria UV no entram neste grupo pois, alm de no serem enzimas,
utilizam padres de concentrao definida para calibrao e gerao do Fator.
Reagente Substrato

Alfa-amilase (AMIL) GalG2-CloroNitroFenol 14,5 405
Creatina Quinase (CK) NADP 6,3 340
Creatina Quinase - MB (CKMB) NADP 6,3 340
Desidrogenase Ltica (LDH) NADH 6,3 340
Fosfatase Alcalina (FAL) p-NitroFenilFosfato (pNPP) 18,5 405
Gama Glutamil Transferase (GGT) Gama-glutamil p-NitroAnilida 9,5 405
Transaminase Glutamato Oxalactica (TGO) NADH 6,3 340
Transaminase Glutamato Pirvica (TGP) NADH 6,3 340

13,4
2-Os compostos corados NADH (e NADPH) e NAD (e NADP) so formas diferentes do mesmo
composto e denotam se a reao crescente ou decrescente: NADH NAD = decrescente ;
NAD NADH = crescente.
3-As unidades de foram retiradas do texto de forma a simplificar o seu entendimento.
Tendo agora em mos os s dos compostos dos reagentes BioTcnica, basta agora inserir as informaes
na frmula abaixo e obter o Fator para QUALQUER tcnica e para QUALQUER equipamento.
Exemplo 1: Fator da Gama GT no COBAS
VA = 25 L
VR = 225 L
VD = 25 L
VT = 275 L
C = 0,6 cm
e = 9,50
FATOR = 275 x 1000 / 25 x 9,5 x 0,6 = 1930
Exemplo 2: Fator da Gama GT no Bio2000
VA = 100 L
VR = 1000 L
VD = ---
VT = 1100 L
C = 1,0 cm
e = 9,50
FATOR = 1100 x 1000 / 100 x 9,5 x 1,0 = 1158
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