Universidade Estadual do Cear UECE

Faculdade de Veterinria FAVET

Disciplina: Parasitologia Veterinria II
Avaliao de protena anticongelante III para criopreservao
de smen de bfalos Nili-Ravi (Bubalus bubalis)
Qadeer, S. et al

Animal Reproduction Science, 2014
Prelecionista: Fbio Ranyeri
2
Introduo
1 prenhez atravs
da IA com smen
congelado
Tcnica adotada
por criadores de
bfalos
No se tornou
popular
Baixa fertilidade do
smen congelado
(30%)
3
Introduo
Danos funcionais e
estruturais durante
a criopreservao
Crioprotetores
Antioxidantes
Protenas
Aminocidos
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Introduo
Qualidade do smen
de bfalo
Motilidade Massal
Motilidade Inidividual
Viabilidade
Morfologia Espermtica
Integridade e reao acrossomtica
Integridade de MP e Cromatina espermtica
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Introduo
Classe de
Polipeptdeos
Protenas Anticongelantes
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X
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Peixes Polares Insetos Plantas
Ligam-se aos
cristais de gelo
Impedem
crescimento normal
e recristalizao
Vazamento de
ons atravs da
MP
6
Objetivo
7
Objetivo
Avaliar o efeito da protena anticongelante III no diluidor
seminal de bfalos na motilidade progressiva, integridade de
membrana plasmtica, viabilidade e crista apical normal de
espermatozoides criopreservados.
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Material e Mtodos
9
Material e
Mtodos
Preparao do Diluidor
Tris-cido ctrico
- 1,56g cido ctrico

- 3g Tris

- 73ml gua destilada
- 0,2% Frutose

- 7% Glicerol

- Benzil Penicilina (1000UI/mL
- Sulfato de estreptomicina
(1000g/mL) (Sinbiotic)

- 20% gema de ovo
Acrescido
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Material e
Mtodos
Preparao do Diluidor
Experimento I
Experimento II
- 0, 0.1, 1 e 10 g/mL
- 0, 0.01, 0.1 e 1 g/mL
Macrozoarces Americanus
Extrao de Protena
Anticongelante III (AFP-III)
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Material e
Mtodos
Coleta do smen e avaliao inicial
2 ejaculados consecutivos/ 3 semanas
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Divididos em 4 alquotas em banho maria por 15 minutos
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Material e
Mtodos
Diluio e criopreservao do smen
Alquotas diludas no diluidor experimental
50 x 10
6
sptz mveis/mL
Resfriamento 4C 2h Equilbrio por 4h
Palhetas 0.5mL
pr-resfriadas
10min sobre
Vapor de N
2
L
Armazenado em
N
2
L (-196C)
Descongelamento
em banho maria
37C por 30s
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Material e
Mtodos
Diluio e criopreservao do smen
Alquotas diludas no diluidor experimental
50 x 10
6
sptz mveis/mL
Resfriamento 4C 2h Equilbrio por 4h
Palhetas 0.5mL
pr-resfriadas
10min sobre
Vapor de N
2
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Armazenado em
N
2
L (-196C)
Descongelamento
em banho maria
37C por 30s
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Material e
Mtodos
Diluio e criopreservao do smen
Alquotas diludas no diluidor experimental
50 x 10
6
sptz mveis/mL
Resfriamento 4C 2h Equilbrio por 4h
Palhetas 0.5mL
pr-resfriadas
10min sobre
Vapor de N
2
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Armazenado em
N
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L (-196C)
Descongelamento
em banho maria
37C por 30s
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Material e
Mtodos
Diluio e criopreservao do smen
Alquotas diludas no diluidor experimental
50 x 10
6
sptz mveis/mL
Resfriamento 4C 2h Equilbrio por 4h
Palhetas 0.5mL
pr-resfriadas
10min sobre
Vapor de N
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Armazenado em
N
2
L (-196C)
Descongelamento
em banho maria
37C por 30s
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Material e
Mtodos
Diluio e criopreservao do smen
Alquotas diludas no diluidor experimental
50 x 10
6
sptz mveis/mL
Resfriamento 4C 2h Equilbrio por 4h
Palhetas 0.5mL
pr-resfriadas
10min sobre
Vapor de N
2
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Armazenado em
N
2
L (-196C)
Descongelamento
em banho maria
37C por 30s
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Material e
Mtodos
Diluio e criopreservao do smen
Alquotas diludas no diluidor experimental
50 x 10
6
sptz mveis/mL
Resfriamento 4C 2h Equilbrio por 4h
Palhetas 0.5mL
pr-resfriadas
10min sobre
Vapor de N
2
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Armazenado em
N
2
L (-196C)
Descongelamento
em banho maria
37C por 30s
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Material e
Mtodos
Ensaios funcionais no smen descongelado
Motilidade Progressiva Microscopia de Contraste de Fase
Integridade de Membrana Plasmtica Teste Hiposmtico
Viabilidade Espermtica Colorao Azul de Tripan/Giemsa
Crista Apical Normal Formol citrato 1 %/ Microscopia de Contraste de Fases (objetiva de 100x)
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Material e
Mtodos
Anlise estatstica
Efeito da adio de diferentes
concentraes de AFP III
Anlise de varincia em um
delineamento em blocos
casualizados (RCBD) usando
MSTAT-C (Ver. 1,42)
Comparao das mdias
quando a relao-F foi
encontrada significativa
(P <0,05)
Teste de diferena dos mnimos quadrados
20
Resultados
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AFP III g/mL Ensaios de qualidade do Smen
Motilidade Integridade de MP Viabilidade Integridade
acrossomal
0.0 51.7 0.57bc 58.9 4.17bc 47.8 2.79 76.0 1.85
0.1 61.67 1.93a 70.0 2.74a 47.4 4.57 62.2 2.54
1 56.67 3.48ab 62.8 2.99b 47.9 1.73 73.8 1.49
10 48.87 0.57c 58.2 2.89c 49.8 4.51 73.5 3.98
Tabela 1 - Efeitos da AFP-III no diluidor sobre a qualidade do smen de bfalo ps-descongelao, experimento 1 (MdiaDP)
Os valores com letras diferentes dentro da mesma coluna diferem significativamente (P < 0,05)
Resultados
22
AFP III g/mL Ensaios de qualidade do Smen
Motilidade Integridade de MP Viabilidade Integridade
acrossomal
0.0 47.2 2.23bc 50.0 1.15bc 38.7 2.56 77.2 3.08
0.01 43.9 1.10c 49.2 2.04b 40.3 1.03 70.8 4.78
0.1 53.3 1.67a 59.2 1.87a 41.9 0.49 79.7 3.84
1 50.6 0.57ab 56.7 1.67a 44.3 2.67 75.8 4.76
Tabela 2 - Efeitos da AFP-III no diluidor sobre a qualidade do smen de bfalo ps-descongelao, experimento 2 (MdiaDP)
Os valores com letras diferentes dentro da mesma coluna diferem significativamente (P < 0,05)
Resultados
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Concluso
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Concluso

O estudo indicou que a adio de protena anticongelante III ao
diluidor na concentrao de 0.1 g/mL melhorou a motilidade e a
integridade de membrana plasmtica no smen de bfalo
criopreservados.

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Obrigado!