Universidade Estadual do Cear UECE

Faculdade de Veterinria FAVET

Disciplina: TOXICOLOGIA VETERINRIA
Prof. Dr: LCIA LOPES

TIPOS DE ENSAIOS DE TOXICIDADE

ALYSSON SENA
BRBARA LEAL
FBIO RANYERI
SABRINA GOMES
VICTOR BARBOSA

FORTALEZA-CE
2014

SUMRIO

1 - INTRODUO SOBRE ENSAIOS DE TOXICIDADE.......................................3

2 - ENSAIOS DE TOXICIDADE AGUDA...................................................................5
3 ENSAIOS DE TOXICIDADE SUBAGUDA E SUBCRONICA...........................6
4 ENSAIOS DE TOXICIDADE CRONICA..............................................................6
5 ENSAIOS PARA AVALIAR A TOXICIDADE SOBRE A REPRODUO.....7
6 ENSAIOS PARA AVALIAR OS EFEITOS TERATOGNICOS.......................9
7 TESTES DE AVALIAO DO POTENCIAL CARCINOGNICO DE
SUBSTNCIAS QUMICAS.........................................................................................9
7.1 ESTUDO CRNICO DE CARCIONOGIENICIDADE IN VIVO EM
ROEDORES...................................................................................................................10
7.2 TESTES ADICIONAIS...................................................................................11
8 TESTES DE MUTAGENICIDADE......................................................................11
8.1 TESTE DE AMES (in vitro)...........................................................................11
8.2 TESTE EM Sacharomyces cerevisiae (in vitro)............................................11
8.3 TESTE EM Drosophila melanogaster (in vivo).............................................11
8.4 ANLISE DE MICRONCLEOS (in vivo).................................................12
8.5 TESTE COMETA (in vivo)............................................................................12
8.6 TESTE DO DOMINANTE LETAL (in vivo)..............................................12
8.7 BIOLOGIA MOLECULAR..........................................................................13
9 ENSAIOS DE EFEITOS LOCAIS SOBRE A PELE E OLHO..........................13
10 ENSAIOS DE SENSIBILIZAO CUTNEA ................................................16
11 ENSAIOS SOBRE O SISTEMA IMUNE...........................................................16
12 ENSAIO RELATIVOS A EFEITOS DE ANTIBITICOS SOBRE A
MICROBIOTA DO TRATO GASTROINTESTINAL.............................................18
13 ENSAIOS DE TOXICOCINTICA....................................................................19
14 ENSAIOS DE ECOTOXICIDADE.....................................................................19
REFERNCIA BILIGRFICA..................................................................................20

1 - INTRODUO SOBRE ENSAIOS DE TOXICIDADE

Ensaios de toxicidade consiste em experimentos que devem ser realizados cada
nova substncia a ser utilizada, com o objetivo de conhec-la e definir melhor as
condies prprias para seu uso, evitando danos ao ambiente e aos seres vivos,
auxiliando assim nas tomadas das decises sobre a segurana na utilizao de novos
produtos.
Os ensaios so aplicados em animais de laboratrio, sob condies prestabelecidas, sendo necessrio o uso de tcnicas e procedimentos adequados ao modelo
animal a ser usado, sua manipulao e ao local de habitao.
No brasil ainda no existe uma legalizao que estabelea normas para a criao
desses animais para pesquisa, contudo, h um embasamento a partir da legislao
internacional e princpios ticos que norteiam o uso desses animais de forma correta.
importante a criao de comisses de tica dentro das instituies que fazem
os experimentos, estabelecendo as diretrizes, avaliando e aprovando os protocolos
desses ensaios. Estes, devem conter: a espcie e o nmero de animais que sero
utilizados, uma justificativa pra escolha desses animais e uma completa descrio dos
procedimentos que sero empregados, incluindo a eutansia.
Existe um princpio fundamental a ser seguido chamado conceito dos 3 Rs
(refine, reduction, replacement) sugerido por Wiliam Russel e Rex Burch, em 1959, ou
seja, no refinamento, na reduo e na substituio racional dos animais, minimizando,
assim, seu uso e sofrimento, sem comprometer a qualidade do trabalho cientfico
realizado.

As espcies mais utilizadas so os ratos, camundongos e os coelhos, pois so

animais de baixo custo, fcil obteno, manuteno e manuseio. O manuseio de
fundamental importncia para evitar doenas e estresse, afim de no alterar os
resultados do estudo. Assim como o local a ser feito o experimento, o qual deve possuir
luz, ventilao e sanidade adequadas. O perfil gentico tambm pode determinar o
nmero de animais necessrios para o experimento e a confiabilidade dos dados
experimentais obtidos.
A identificao de cada animal de forma correta essencial para uma
experimentao acurada, devendo ser considerados fatores como adaptabilidade para a
espcie, durao da marcao e o custo do sistema utilizado.
Como a toxicidade est ligada estrutura qumica indispensvel que a
substancia em estudo seja quimicamente caracterizada quanto a presena de impurezas e
que sejam conhecidas suas propriedades fsico-qumicas (odor, cor, ponto de fuso e
ebulio, presso de vapor, densidade, viscosidade, solubilidade e volatilidade). Essas
propriedades auxiliam na escolha dos solventes para dissoluo da amostra e via de
administrao.
Os ensaios so divididos em duas categorias. A primeira composta por testes
delineados especificamente para avaliar os efeitos gerais da substancia qumica em
animais de experimentao. Os testes dessa categoria diferem entre si pela durao ou
extenso da exposio dos animais substancia qumica. Esses testes so identificados
como agudos, subagudos, subcrnicos e crnicos.
A segunda categoria de testes toxicolgicos consiste naqueles especficos para
avaliar, em maiores detalhes, um tipo especifico de toxicidade. So chamados ensaios
prolongados ou crnicos, que avaliam os efeitos txicos gerais de uma substncia a
4

longo prazo e mais detalhadamente. Esta, foi desenvolvida especialmente para obter
ensaios especficos como testes teratognicos, de hepatoxicidade, de nefrotoxicidade,
mutagnicos, carcinognicos ou para avaliar interferncias com o potencial reprodutivo
dos animais.
2 - ENSAIOS DE TOXICIDADE AGUDA
Esse teste conduzido para toda substncia qumica de efeito biolgico, onde se
administra o composto em uma nica dose ou vrias doses dirias no intervalo de 24
horas, observando o animal geralmente at 24 horas aps a ltima administrao e
determinando sinais e sintomas subsequentes. Caso a substncia a ser utilizada seja
absorvida ou metabolizada lentamente pelo organismo desejvel observar os animais
por at 14 dias.
A dose nica determina a potncia do composto enquanto doses mltiplas
avaliam o efeito cumulativo desse composto.
O procedimento inicial comea com a escolha adequada da espcie para o estudo
e via a ser utilizada. Geralmente utiliza-se a via oral particularmente quando se pretende
utilizar os resultados para inferncia do risco decorrente da ingesto, pelo ser humano,
de resduos de medicamentos veterinrios em alimentos. Depois faz-se uma bateria de
avaliaes com diferentes doses do composto e um experimento definitivo para
estabelecer uma curva dose-resposta para letalidade. Obtendo-se, dessa forma, dados
extremamente uteis para a escolha da dose a ser utilizada nos ensaios de toxicidade de
longo a mdio prazo, bem como para o clculo da dose letal.
Protocolos implicam que se obtenham doses no letais e doses com 100% de
letalidade, escolhendo a partir destas, por progresso logartmica, doses intermediarias
para uso.
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3 - ENSAIOS DE TOXICIDADE SUBAGUDA E SUBCRONICA

So considerados ensaios de toxicidade subaguda quando o perodo do
experimento superior a 14, 21 ou 28 dias. Os ensaios de toxicidade subcrnica feito
por um perodo superior a 90 dias de estudo. O perodo no excede 10% da vida do
animal e deve ser feito em 3 espcies, sendo uma delas no roedora. Geralmente ratos,
camundongos e ces.
Estes so realizados para avaliar e caracterizar todos os efeitos txicos de uma
substncia administrada repetidamente em animais de experimentao. O objetivo
observar a dose que no produz efeito toxico, caracterizar possveis leses orgnicas,
bem como alteraes hematolgicas e bioqumicas e verificar se os efeitos so
reversveis. Envolvendo avaliao anatomopatolgica e histopatolgica em todos os
animais ao final do experimento, devendo estes serem devidamente eutanasiados em
caso de doena, necropsiados e os rgos retirados para anlise.
Uma aplicao adicional dos testes de toxicidade aguda, subaguda e subcrnica
avaliar a exposio dos organismos a duas substncias qumicas ao mesmo tempo.
Observando a interao desses compostos. comum avalia-los isoladamente e em
conjunto na proporo 1:1. Alm disso, os testes de toxicidade subaguda e subcrnica
so amplamente empregados para a escolha da dose que ser utilizada nos estudos de
exposio crnica.
4 - ENSAIOS DE TOXICIDADE CRONICA

Esse tipo de ensaio determina a ausncia de toxicidade do composto a ser testado

em doses dirias verificando se existe efeito cumulativo. Avalia o potencial
carcinognico ou mutagnico da substancia.
Os ensaios de toxicidade crnica seguem o mesmo protocolo dos testes de
toxicidade subcrnica, porm o perodo de tratamento vai at 2 anos em roedores e 1
ano em no roedores. Utiliza-se de 50 a 100 animais para cada dose e sexo, e o dobro de
animais para grupo controle. Os grupos experimentais so divididos em subgrupos que
recebem baixa, intermediria e alta concentrao do composto a ser testado.
Antes do incio do ensaio deve ser feita a avaliao clnica de todos os animais
que sero utilizados e durante o ensaio, deve-se avaliar os animais pelo menos uma vez
por semana. Essa avaliao deve ser feita por um profissional com profundo
conhecimento sobre a fisiologia da espcie utilizada. Alm disso, os animais devem ser
pesados em perodos de tempo pr-estabelecidos, sendo o consumo de gua e de rao,
assim como a excreta, avaliada e notada.
Esse tipo de ensaio exige a realizao de testes bioqumicos que so feitos uma
vez a cada 6 meses ou 12 meses.
Assim como no ensaio de toxicidade subaguda e subcrnica haver tambm
avaliaes anatomopatolgicas e histopatolgicas em todos os animais ao final de cada
experimento.
5 - ENSAIOS PARA AVALIAR A TOXICIDADE SOBRE A REPRODUO
Para que a toxicidade de uma substncia sobre a reproduo seja avaliada, deve-se
estudar as mudanas que ocorrem na anatomia e fisiologia de machos, fmeas vazias e
fmeas prenhes e sua prole.

A atuao de substncias que afetam a reproduo pode ser sobre as funes gonadais,
ciclo estral, taxa de concepo ou na fertilizao e implantao do vulos psfertilizao. Todos esses efeitos, caso ocorram, vo influenciar diretamente sobre a
capacidade reprodutivas dos animais, humanos ou no.
Os testes, geralmente feitos em laboratrio, utilizam os ratos, camundongos ou coelhos,
por conta de seu fcil acesso e sua alta prolificidade. O mesmo deve ser feito com a
observao de no mnimo trs geraes, para que seja, ento, comprovada a toxicidade
de determinado contedo administrado aos animais.
A substncia a ser utilizada deve ser adicionada na comida e na gua ofertadas durante
toda a vida do animal experimental, geralmente necessitando de oferta por galvagem
(sonda), para que no haja desperdcio, dando mais confiabilidade nos resultados
obtidos.
Aps analisados os efeitos provocados sem que haja a reproduo dos animais, ou seja,
sobre sua fisiologia reprodutiva, a qual permite a conservao da espcie. Parte-se para
a reproduo em si, com a juno dos machos e fmeas, observando cuidadosamente
para identificar o dia zero da prenhes.
Aps confirmada a prenhez, esperado at o perodo final da organognese, o qual
depende da espcie, para que metade das fmeas no experimento sejam separadas e
retirados os embries e analisar anatomopatologicamente e histopatologicamente as
fmeas em questo.
A outra metade restante das fmeas em experimento analisada aps o parto para
verificar possveis anomalias provocadas nos filhotes e na fase de lactao. Sendo
portanto, fortes dados a respeito da fertilidade, gestao, parto e lactao.

O mesmo protocolo aplicado sobre as duas geraes subsequentes, adquirindo dados

sobre os efeitos txicos de determinados agente qumicos, fsicos e biolgicos sobre a
reproduo dos organismos.
6 ENSAIOS PARA AVALIAR OS EFEITOS TERATOGNICOS
O aumento da ocorrncia de anomalias estruturais e funcionais dos descentes
caracterizado como efeito teratognico, o qual pode ser causado por uma gama de
fatores. No estudo em questo, uma substncia que entra em contato com o organismo
animal e provoca essas tais anomalias considerada uma substncia teratognica, a qual
pode ser aplicada antes ou durante a prenhez, tambm podendo ser aplicada diretamente
no feto. O teste parecido com o utilizado para deteco dos efeitos sobre a reproduo,
porm com um foco maior nos feitos sobre a prole, as anomalias apresentadas, e
repetidamente observadas.
Usam-se, geralmente, 30 animais, sendo 10 por dose testada, sendo as principais
espcies utilizadas tambm os ratos, camundongos e coelhos. A dose testada sempre
entre os valores minimamente txicos, para no chegar a provocar fortes efeitos txicos
na me e prejudicar a gravidez, em caso de bito. Pouco antes do dia do parto, a prenhez
interrompida, os fetos removidos, vivos e mortos, e analisados a fundo para identificar
qualquer malformao apresentada. Encerrando assim, a pesquisa e a determinao do
potencial teratognico de uma determinada substncia.
7-

TESTES DE AVALIAO DO POTENCIAL CARCINOGNICO DE

SUBSTNCIAS QUMICAS
Testes de rotina para avaliao do potencial carcinognico de substncias tiveram seu
incio em meados da dcada de 1960 com o uso de protocolos padronizados pelo
National Institute of Health (NTH) nos Estados Unidos. A implementao do Estudo
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de carcinognese de dois anos, pelo Programa Nacional de Toxicologia do NTH

envolve testes in vitro e in vivo para avaliar o risco genotxico de qualquer substncia a
ser lanada no mercado.
At hoje so feitos muitos esforos e pesquisa para avaliao do risco de substncias
naturais ou compostos industrializados, sendo que a busca por novos modelos e
mtodos confiveis ainda extremamente investigada.
7.1 - ESTUDO CRNICO DE CARCIONOGIENICIDADE IN VIVO EM
ROEDORES:
Neste teste so empregados roedores expostos sistematicamente por dois anos, inclusive
por via drmica, a altas doses do agente testado. Ao final do teste, compara-se a
incidncia de neoplasias em relao a um grupo controle no tratado. No decorrer
desses dois anos, so realizados estudos auxiliares sobre biodisponibilidade,
biotransformao, farmacocintica, toxicidade reprodutiva, teratologia, avaliao
comportamental e imunotoxicologia.
Ao final do perodo, o potencial carcinognico da substncia classificado em:
- Evidncia clara de atividade carcinognica.
- Alguma evidncia de atividade carcinognica.
- Evidncia de atividade carcinognica.
- Sem evidncia de atividade carcinognica.
- Estudo inadequado para evidenciar atividade carcinognica (sujeito a novos estudos).
O teste de dose mxima tolerada ainda muito utilizado durante o processo, porm
um assunto bastante debatido dentro da toxicologia.
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7.2 TESTES ADICIONAIS

So vrios testes de curta durao em roedores, eles servem como um pr-teste antes da
avaliao do Estudo crnico de carcinogenicidade in vitro em roedores. Entre eles
esto o teste do tumor pulmonar em camundongos A, o teste de neoplasia mamria em
ratos, o teste de injeo subcutnea, o teste de aplicao drmica, o modelo de
hepatocarcinogenicidade em ratos, o modelo da carcinognese de bexiga em ratos, o
modelo de carcinognese estomacal, tireoide, pancretico, clon, o modelo em ratos
neonatos e, recentemente, o emprego de animais geneticamente modificados.
8- TESTES DE MUTAGENICIDADE
So geralmente empregados para prever o desenvolvimento de cncer, so realizados
testes in vitro e in vivo.
8.1 TESTE DE AMES (in vitro):
Faz o uso da Salmonella tiphymurium mutante para avaliar a capacidade de produzir
histidina.
8.2 - TESTE EM Sacharomyces cerevisiae (in vitro):
Faz a avaliao da mutagnese espontnea e induzida por agentes oxidativos em cepas
de Sacharomyces cerevisiae deficientes em reparao de bases.
8.3 TESTE EM Drosophila melanogaster (in vivo):

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Possibilita o estudo de mutaes pontuais, delees e translocaes (crossing-over) por

conhecer bem o material gentico do animal e pela versatilidade de manipulaes
genticas possveis na espcie.

8.4 ANLISE DE MICRONCLEOS (in vivo):

Os agentes avaliados como mutagnicos, nesse teste, so chamados de clastognicos,
pois induzem mutaes por causa da quebra de DNA. um dos testes mais bem
avaliados e aceitos; avalia a formao de microncleos em clulas da medula ssea por
meio de investigao citogentica.
8.5 TESTE COMETA (in vivo):
Avalia os danos no DNA e mostra probabilidade do surgimento de mutaes.
8.6 - TESTE DO DOMINANTE LETAL (in vivo):
O termo dominante letal utilizado para descrever a morte embrionria resultante do
dano gentico em clulas germinativas parentais. A introduo do teste dominante letal
em camundongos como indicador de danos genticos foi demonstrada na dcada de
1950. Logo em segui a, esse teste passou a integrar a bateria de testes de avaliao de
mutagnese. O teste baseado na observao da viabilidade da implantao uterina. As
implantaes que morrem nos estgios iniciais so reconhecidas como decidouma ou
mole. O decidium o crescimento do tecido uterino materno sobre os estmulos da
implantao do ovo. Esse crescimento autnomo permanece ate o decimo primeiro dia
de gestao, perodo em que se encerra.

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Nas mortes iniciais, o deciduoma permanece, em parte, inalterado e apresenta necrose

na parte superior durante toda a gestao, sendo eliminado durante o nascimento com o
restante do contedo uterino. Os eventos genticos que do inicio as mortes prematuras
so predominantemente erros cromossmicos em clulas germinativas parentais, que
resultam em uma mutao dominante letal. Os tipos de aberraes cromossmicas mais
comuns so, predominantemente, os duplos fragmentos, as trocas e a deleo entre
cromtides. A induo de dominantes letais calculada pela comparao entre a
frequncia da perda de zigotos pr e ps-implantados
8.7 BIOLOGIA MOLECULAR
Com o surgimento da biologia molecular diversos novos procedimentos vem sendo
incorporados aos ensaios de mutagenicidade, como:
- Uso do teste de linhagem de clulas do Hamster Chins.
- Teste em linhagens celulares de linfomas murinos.
- Teste de locus especfico murinho.
- Emprego de animais de laboratrio manipulados geneticamente.
9 ENSAIOS DE EFEITOS LOCAIS SOBRE A PELE E OLHO
Atualmente, tem-se o conhecimento de que uma substncia qumica, seja ela
qual for, possui um potencial capaz de afetar o organismo quando colocada em contato
com o mesmo. Essas leses que so ocasionadas por agentes qumicos podem ocorrer
por meio de uma enorme variedade de vias de exposio, incluindo-se o contato com a
pele e com os olhos. E essa capacidade do composto de produzir leses no corpo
(incluindo-se na pele e nos olhos, pela via tpica) objeto de anlise toxicolgica, na

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qual se procura mensurar o tipo e do grau do efeito. Em relao pele e olhos, os

principais efeitos que podem ocorrer so irritao, corroso, sensibilidade cutnea,
fototoxicidade e fotoalergia.
Nos ensaios de efeitos locais sobre a pele e sobre os olhos

se utilizam

geralmente coelhos ( em testes para pele e olhos), ratos ( em para pele) e cobaias
( ocasionalmente para pele ) e so analisados quanto a presena de irritao sobre a pele
intacta ( eritema, escara, edema, corroso) e sobre os olhos ( alteraes de conjuntiva,
crnea, Iris e cristalino).
Os testes normalmente empregados so:

Irritao local aguda: verificado se a resposta reversvel. Entende-se

por irritao irreversvel aquela que prolonga-se por mais de catorze dias.

Irritao cumulativa: Resposta dmica de exposio repetida.

Irritao induzida fotoquimicamente: Irritao primaria resultante de luz

induzindo modificaes moleculares da substancia colocada na pele.

Toxicidade cutnea a curto prazo para ratos: Nesse teste, utilizam-se trs
doses da substancia, empregando-se cinco animais machos e cinco fmeas por
dose. O volume da substancia aplicada deve ocupar pelo menos 10% da
superfcie corprea, sendo que o local da aplicao devera ser protegido por
gaze porosa durante, pelo menos, 24 horas, com perodo de observao de

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catorze dias. Verifica-se a ocorrncia de possveis alteraes da pele dos pelos,

das mucosas, dos sistemas respiratrio e circulatrio, do peso corpreo, do
consumo de alimentos e de gua; analisa-se, tambm, o hemograma e procedemse exames anatomopatolgicos das leses eventualmente presentes.

Toxicidade cutnea a mdio prazo (90 dias) para ratos: Nesse teste,
utiliza-se praticamente o mesmo protocolo do teste anterior, tendo como
diferena a utilizao de dez ratos machos e dez fmeas por grupo, sendo o
perodo de observao de 28 dias aps o termino dos experimentos.

Irritao/corroso cutnea a curto prazo: importante salientar que a

irritao definida, nesse caso, como uma alterao inflamatria reversvel, e a
corroso como uma leso tecidual irreversvel. Nesse teste, geralmente utilizamse trs coelhos albinos por dose, sendo cada animal o seu prprio controle.
Especificamente, em outro local do mesmo animal, aplica-se um volume
idntico do material utilizado para diluir a substancia qumica em teste
(controle).As doses encontram-se em ate 0,5 mL ou 0,5 g, sendo aplicadas em
um local coberto por uma gaze porosa, com tempo de exposio de 4 horas.
Deve-se observar os animais 0,5; 1; 24; 48 e 72 horas aps a aplicao ou ate a
regresso dos efeitos, o que normalmente ocorre em um perodo inferior a
catorze dias.

Avaliao da irritao/corroso ocular a curto prazo: Nesse teste,

utilizando-se um dos olhos de trs coelhos albinos por dose da substancia

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qumica em teste; O outro olho do animal e mantido como controle. As doses

so contidas em at 0,1 mL, colocadas no saco conjuntival de um dos olhos do
animal. Se esse procedimento causar dor, deve-se utilizar anestsico local em
ambos os olhos. A durao da exposio de 24 horas, sendo as observaes
feitas 1, 24,48 e 72 horas aps a aplicao.

10 ENSAIOS DE SENSIBILIZAO CUTNEA

No caso de haver a possibilidade de contato repetido de uma substancia toxica
com a pele, so geralmente utilizados ensaios de sensibilizao cutnea. Nestes testes
so utilizados coelhos e cobaias, que ficam submetidos a exposies repetidas
substancia qumica em estudo por um perodo de uma ou duas semanas. Aps duas ou
trs semanas da ultima exposio, os animais so expostos novamente substancia em
estudo, sendo monitorado o aparecimento de eritema. De maneira geral, esses testes
podem ser feitos:

Com uso concomitante de um adjuvante completo de Freund (ACF), o

qual um imunoponteciador ou facilitador de sensibilizao.

Sem utilizao do adjuvante.

Nesses testes, deve-se ter sempre o cuidado de utilizar substancias qumicas

puras, pois a presena de traos de impureza pode levar a um resultado positivo.

11 ENSAIOS SOBRE O SISTEMA IMUNE

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O sistema imune um sistema multicelular, que compreende granulcitos,

linfcitos, macrfagos e mediadores solveis. As clulas desse sistema multicelular
esto espalhadas por diversos rgos, como, por exemplo, no bao, no timo, nos
linfonodos e na medula ssea. Os ensaios realizados sobre o sistema imune tm seus
estudos voltados especificamente anlise de possveis efeitos adversos provocados por
uma determinada substancia qumica sobre uma ou mais clulas ou rgos. Para se
obter um maior aprendizado sobre os estes efeitos, recomendado ainda a anlise do
peso relativo do bao, do timo, dos linfonodos e a histologia desses rgos.
preciso ressaltar que, muitas vezes, no se possvel detectar as alteraes no
sistema imune induzidas por substancias qumicas ( em geral imunossupresso e
sensibilizao ), sendo preciso a utilizao de diversos testes in vivo e in vitro para a
avaliao da imunidade celular humoral. Normalmente so utilizados ratos e
camundongos nos testes que avaliam o sistema imune, tanto direta como indiretamente.
Alm de, como j citado, se avaliar o peso dos rgos linfoides, so realizados
testes do uso de marcadores de superfcie, resposta primaria a um anticorpo, atividade
da clula NK, citotoxicidade do linfcito T, resposta hipersensibilidade tardia, testes
mitognicos e resistncia do hospedeiro.
Devido a importncia da clula NK contra diverso tipos de tumores, o teste para
avaliar sua atividade acaba se tornando um dos mais importantes. Elas desempenham
um papel importante na inibio do crescimento de tumores primrios e no
desenvolvimento de metstase (em virtude da sua capacidade de lisar as clulas
tumorais ), alm de estarem envolvidas no controle da regulao imune frente a
infeces bacterianas.

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O teste de atividade das clulas NK um procedimento feito com o objetivo de

estimar a atividade ltica de suspenses de clulas. As clulas provenientes da cultura
celular YAK -1 so radiomarcadas com sdio cromo 51 e suspensas em uma soluo
nutritiva livre de istopos. Essa suspenso de clulas alvo adicionada a uma placa de
cultura que contem clulas NK, as quais so preparadas com uma suspenso simples
feita a partir de tecido de camundongos tratados ou no com a substancia. Aps 4 horas
de incubao, determinam-se os nveis de cromo 51 liberado no meio, sendo a atividade
da clula NK mensurada indiretamente por meio da porcentagem especfica de citlise.

12 ENSAIO RELATIVOS A EFEITOS DE ANTIBITICOS SOBRE A

MICROBIOTA DO TRATO GASTROINTESTINAL
Trata-se da avaliao das consequncias que os alimentos de origem animal causam a
microbiota do trato gastrointestinal (TGI), sendo esses possivelmente danosos quando
em sua composio albergam resduos de antibiticos. Um exemplo de alimento que
possa causar efeitos txicos ao ser humano o leite de vacas recentemente tratadas
contra mastite, as quais so submetidas a doses dirias de antibiticos intramamrios,
onde, durante a ordenha o antimicrobiano administrado possa ser carregado juntamente
com o leite.
O rgo responsvel pela monitorao e anlise de produtos alimentcios de origem
animal a Organizao Mundial de Sade (FAO/OMS). Que qualifica os produtos de
acordo com a Ingesto Diria Aceitvel (IDAs) e o Limite Mximo de Resduo (LMRs).
Os testes para esse tipo de ensaio podem ser in vitro ou in vivo, em que os testes
realizados em animais sempre possuem maior confiabilidade, pois levam em conta a
interaes metablicas do organismo animal e da microbiota residente. J os testes que
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so realizados externamente ao organismo animal so teis devido a possibilidade de

serem realizados com frequncia e serem determinantes da Concentrao Inibitria
Mnima (CIM).
O teste de cultura de bactrias isoladas um exemplo de metodologia realizada in vitro.
Para isso so utilizadas culturas de algumas bactrias que residem na microbiota do
trato gastrointestinal de humanos, onde so determinadas CIM para cada bactria
testada.
O sistema de cultura contnua ou semi-contnua, reproduz a interao existente entre as
bactrias da microbiota do trato gastrointestinal humano. Esse teste oferece dados para a
anlise dos efeitos causados pelos antibiticos aos processos metablicos das bactrias
testadas conjuntamente.
Os testes realizados em animais so reproduzidos em animais germ free, que aps o
nascimento sofrem processos de adaptao para que sua microbiota se componha por
bactrias presentes na micrufauna do TGI de humanos. Estes testes possibilitam a
anlise do efeito de doses teraputicas de antibiticos sobre a microbiota de roedores.
13 ENSAIOS DE TOXICOCINTICA
Os ensaios de toxicocintica permitem a avaliao do comportamento de vrias
substncias qumicas quando esto dentro do organismo animal. Esse comportamento se
d pela absoro, distribuio, armazenamento, biotransformao e excreo.
14 ENSAIOS DE ECOTOXICIDADE
Esses ensaios permitem o monitoramento das substncias txicas quando entram em
contato com o meio ambiente. Alguns txicos podem se tornar biomagnificados de
acordo com alteraes climticas, por isso esse tipo de ensaio tem como critrios de
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avaliao o aumento da temperatura e o ndice pluviomtrico das diferentes regies, que

podem facilitar a disperso e expandir a rea de contaminao desses agentes. Tambm
so considerados fatores como, o potencial de biodegradao, mobilidade do solo,
capacidade de adsroo e dessoro do solo.
fundamental que se tenha o conhecimento da toxicidade aguda e crnica do agente
txico em microrganismos, plantas, animais invertebrados, peixes, pssaros e
mamferos. Os ensaios de ecotoxicidade tem como funo avaliar a interao do txico
com os organismos acima citados.

REFERNCIA BIBLIOGRFICA
Spinosa, H.S.; Grniak, S.L,; Palermo-Neto, J. Toxicologia Aplicada Medicina
Veterinria. Barueri, Manole, 2008. 943p.

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