Atividade de Mtodos instrumentais de anlise referente ao artigo

Anomalous Protein Diffusion in Living Cells as Seen by Fluorescence

Correlation Spectroscopy. Publicado em Biophysical Journal Volume 84,
Issue 6, June 2003, Pages 40434052
O artigo trata dos desafios e limitaes que so encontrados referentes ao estudo
da dinmica de protena de membrana in vivo por meio de espectroscopia de correlao
de fluorescncia (FCS).
O essa tecnica impe um comportamento inicial da funo de autocorrelao e
quantidades relacionadas para pequenos momentos. Usando essa informao, os autores
mostraram por FCS que as protenas da membrana residentes no complexo de Golgi
movem-se subdiffusamente isso tambm ocorre no retculo endoplasmtico e complexo
de Golgi in vivo. Com base em simulaes de Monte Carlo para FCS em superfcies
curvas, o que exclui que a difuso anmala observado um resultado da topologia
complexa da membrana. A mobilidade aparente de partculas, conforme determinado
por FCS, no entanto, mostrada a depender crucialmente da forma da membrana e o
seu movimento ao longo do tempo. Devido a este fato, o raio hidrodinmico das
partculas podem ser facilmente rastreados e superestimados por uma ordem de
magnitude.
A anlise fractal foi realizada por meio de um algoritmo de contagem de caixa,
ou seja, a curva F (t) coberto com quadrados de comprimento e o nmero de caixas
preenchido () contado. Linhagens celulares estveis HeLa foram construdos por
transfeco com plasmdeo de DNA que codifica as protenas de trans-membrana
GalNAc-T2 ou p241 fundida protena fluorescente verde (GFP) e protena
fluorescente amarela (YFP), respectivamente, e selecionada para a G418 usando como
descrito anteriormente (Storrie et al., 1998). A idia princpio moderno da FCS
monitorar o total de fluorescncia F (t) que surgem devido densidade flutuante de
partculas marcadas em um ponto de laser confocal de largura. Estas oscilaes so uma
consequncia da partculas de movimento difusivo dentro e fora do volume confocal,
que tem um volume V. Difuso anmala implica que mdia deslocamento das partculas
cresce assintoticamente como (Ax) 2 = 4t, 1.
Os autores puderam observar a funo de autocorrelao normalizada C () para
GalNAc-T2 descrito igualmente bem por para difuso anmala e para uma expresso
que descreve a coexistncia de duas populaes de clulas com diferentes mobilidades.
No entanto, estes ajustes descrevem comportamentos completamente diferentes: o
primeiro passo que prediz uma correlao dependente do tempo o coeficiente de difuso
D (t) = 0,2 / t0.25 um2 / s0.75 como = 0,75, a segunda prev duas populaes
GalNAc-T2 com constantes de difuso D1 = 0,3 um2 / s e D2 = 7 um2 / s. Confirmando
semelhana com relatos anteriores por (SCHWILLE et al., 1999a e SCHWILLE et al.,
1999b), no se pode determinar qual dos dois cenrios realmente subjacente aos dados
experimentais.