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Junho/2015

Espectrometria de
massa Imaging
Trabalho de reviso

Joana Cristina Barbosa Loureiro


Loureiro
Qumica
Bioanaltica

ndice
1.

2.

Espetrometria de massa Imaging ......................................................................................... 2


1.1.

Mtodos de ionizao para MSI .................................................................................... 3

1.2.

Instrumentao ............................................................................................................. 5

1.3.

Preparao da amostra ................................................................................................. 7

1.4.

Anlise de dados ......................................................................................................... 10

Aplicao biolgica .............................................................................................................. 11

Bibliografia .................................................................................................................................. 16

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1. Espetrometria de massa Imaging


O presente trabalho visa fazer uma abordagem a uma tcnica recente de
espetrometria de massa, o MSI (Mass spectrometry imaging). Numa segunda seo
ser apresentada uma das aplicaes biolgicas que esta tcnica j demostrou ter bem
como o potencial que esta representou ao nvel desse mesmo estudo.
A tcnica de espetrometria de massa imaging resulta de uma combinao de
anlise molecular com informao espacial obtida, permitindo a visualizao de
molculas em superfcies complexas. Assim, esta tcnica vista como tendo potencial
na caracterizao biomolecular da superfcie de tecidos histolgicos [1].
A MSI tem sido muito estudada e tem tambm apresentado vrios progressos
nos ltimos anos [2]. Ela foi desenvolvida, h 35 anos atrs, no ano de 1962 na
Universidade de Orsay por Georges Slodzian e Raymons Castaing, tendo sido aplicada
microanlise de amostras de minerais. Os dois foram tambm os primeiros a surgir
com a ideia de que seria possvel construir um sistema de coleo tica de ies,
anlogo aos que utilizam nas lentes dos microscpios de luz, de forma a preservar-se a
relao espacial dos ies desde a amostra at ao detetor [3]. Relativamente
aplicao da tcnica na rea da Biologia, esta foi usada primeiramente por Pierre Galle,
mais tarde, no ano de 1970 [4].
Atualmente, vrias so as potencialidades da tcnica que aumentam o
interesse de muitos investigadores: a capacidade de registar as distribuies espaciais
de vrios tomos e molculas como farmacuticos, lpidos, pptidos, protenas
metabolitos e polmeros; a capacidade de fazer estas anlises tendo as amostras no
estado nativo, sem recorrer a marcadores; permitir uma correlao cruzada dos
resultados de MSI com imagens obtidas de outras tcnicas analticas [5]. No entanto,
ainda se nota uma carncia de informao homognea no que diz respeito
instrumentao usada bem como aos mtodos de processamento dos dados [2]. O que
se verifica tambm que a complexidade dos dados obtidos com esta tcnica
reduzida, uma vez que se obtm a traduo dos dados numa imagem de duas
dimenses, resultando ento numa perda de informao inevitvel. Como
consequncia da diferente forma como estas imagens so apresentadas (diferente

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escala de cor, normalizao, interpolao espacial), torna-se difcil a sua comparao,


por no se poder afirmar que esteja estandardizada a forma de apresentao de
resultados. No sentido de ultrapassar este problema foram surgindo projetos que tm
em vista criar formatos standard dos dados existentes, bem como foram estabelecidos
repositrios para armazenamentos dos mesmos e consulta pblica [2].
Tambm na rea da clnica a MSI assume uma grande importncia. Vrias
tcnicas so usadas nesta rea para localizao de substncias em tecidos. As que so
baseadas em fluorescncia e marcao com anticorpos so altamente especficas, com
elevada resoluo espacial. Tcnicas in vivo como MRI e PET marcam uma
determinada classe de molculas, mas com baixa especificidade dentro dessa classe. A
MSI permite detetar diferentes classes de molculas, sem recurso de marcadores,
diretamente na superfcie duma seo de tecido [1].

1.1.

Mtodos de ionizao para MSI

Secondary ion mass spectrometry SIMS


A ionizao por SIMS conseguida quando a superfcie da amostra atingida
por ies. Normalmente, isto acontece recorrendo elevada energia de ies como Ar+,
Ga+, In+. Estes ies primrios penetram na superfcie da amostra e induzem uma
cascata de colises com tomos e molculas dessa regio. Desta forma, verifica-se que
so libertados ies da superfcie, os ies secundrios.
Frequentemente, a ionizao por SIMS ocorre para pequenas molculas. O
mximo de intervalo de massas est limitado aos 1000 m/z, como consequncia da
extensa fragmentao que ocorre na superfcie do tecido em anlise. Este limite pode,
no entanto, ser ultrapassado se for usada a metodologia de deposio de matriz MESIMS (que ser abordada na prxima seco), atravs da qual usada uma matriz
orgnica MALDI. Desta forma consegue-se melhorar a deteo de espcies de massa
superior.
A ionizao por SIMS pode ser distinguida em ionizao em modo esttico e em
modo dinmico. Cada um destes modos usado para fins distintos e provoca
diferentes danos ao nvel da superfcie da amostra.

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Quanto SIMS em modo esttico, usado um fluxo de ies primrios baixo,


cerca de 1012 ies/cm2. Este fluxo baixo vai permitir que seja minimizada a interao
dos ies primrios com a monocamada de molculas que se encontra mais
superfcie. Cada io destes vai atingir uma regio intacta levando a que a interao
entre o feixe de ies e os tomos seja limitada a menos de 1%.
Relativamente SIMS em modo dinmico, usado um fluxo de ies primrio
superior. Consequentemente, verifica-se que ocorrem interaes dos ies primrios
com tomos e molculas de camadas mais profundas da superfcie da amostra.
Tendo em conta as diferenas entre estes dois modos, foi j referido ento as
diferentes formas como eles podem ser aplicados, sendo que o modo esttico
preferencial para a gerao de imagens de carcter qualitativo (localizao de
compostos) enquanto que o modo dinmico ser mais indicado, principalmente, para
imagiologia quantitativa [1].

Matrix-assisted laser desorption/ionization MALDI


O mtodo de ionizao por MALDI consiste na adio de um solvente amostra
e posterior adio de uma soluo de matriz, em excesso, superfcie da amostra. Este
passo permite a extrao dos analitos da superfcie da amostra com posterior
formao de cristais, por ocorrer evaporao do solvente da soluo de matriz.
Contendo ento a seo de tecidos j com a matriz, colocadas numa placa de MALDI,
segue-se uma fase que requer a incidncia de um laser nesses cristais (normalmente
um laser de nitrognio a um comprimento de onda de 337nm), para provocar a
ionizao das molculas a analisar [1] [6].
De forma a que a deposio de matriz ocorra de forma reprodutvel e
homognea, so referidas duas metodologias para a deposio: por alta densidade ou
baixa densidade, como se pode verificar na figura seguinte, dependendo da resoluo
espacial que se pretende obter [7].

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Figura 2 Comparao de duas metodologias de deposio da matriz: Por


alta e baixa densidade de deposio [7].

Figura 1 Comparao de duas metodologias de deposio de matriz: por alta e baixa


densidade de deposio. Adaptado de [7].

Desorption electrospray ionization DESI


A DESI um mtodo que proporciona a interao entre um electrospray com
gotculas com carga e a superfcie da amostra. Esta interao provoca a produo de
gotculas carregadas de segunda gerao contendo molculas da superfcie da amostra
dissolvidas. Estas gotculas vo depois transformar-se em ies gasosos tambm pela
formao de um electrospray, sendo ento depois analisadas no espectrmetro de
massa. Tanto o ngulo como ocorre a electropulverizao secundria, bem como o
ngulo da entrada destes ies gasosos no espectrmetro so de grande relevncia,
pois devem ser otimizados de modo a permitir um volume mximo de ies que
entram. A classe de molculas que predominantemente detetada na superfcie de
amostras por DESI so lpidos. Esta metodologia de ionizao permite ainda que a
anlise seja feita sem que seja necessrio pr-tratamento da amostra. No entanto, em
comparao com MALDI e SIMS apresenta uma menor resoluo espacial [1].

1.2.

Instrumentao

Relativamente instrumentao necessria para executar a tcnica MSI, tmse verificado inmeros desenvolvimentos ao nvel do equipamento usado de forma a
aumentar o rendimento da anlise, o poder resolvente, a exatido na determinao de
massas, ou ainda a resoluo espacial. Verifica-se que a introduo automtica de

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cortes de tecido no espectrmetro torna o processo mais rpido, e ainda novas


tecnologias tm sido implementadas como ion-mobility based mass spectrometry
imaging, MALDI FT-ICR MS (Fourier transform ion cyclotron resonance mass
spectrometry) e MALDI FT-Orbitrap, de forma a proporcionarem uma informao
espacial de melhor qualidade. Quanto primeira, a sua combinao com MS imaging
tem vindo a proporcionar o mapeamento de frmacos anti-cancro como a Vimblastina.
Mtodos como FT-ICR MS e FT-Orbitrap oferecem grande poder de resoluo e grande
exatido na determinao de massas.
referido tambm que o aumento da resoluo espacial em MSI conseguido
por diminuio do tamanho do spot onde ocorre a incidncia do laser que provoca a
ionizao ou do feixe de ies. No entanto, ainda existem algumas limitaes quanto a
esta abordagem [1]. Em MSI so utilizadas duas tecnologias de imagiologia, o modo de
microssonda ou o modo microscpio (figura 2). Uma abordagem alternativa para
aumento da resoluo espacial o uso de uma tecnologia em modo microscpio. A
diferena entre estes dois modos reflete-se na forma como obtida a informao
espacial. A tecnologia por microssonda a mais utilizada em MSI e a mais simples
concetualmente. Um laser de ionizao focado numa regio pequena a analisar da
amostra. O espectro de massa resultante armazenado em conjunto com as
coordenadas espaciais dessa regio onde incidiu o laser. Uma nova regio analisada e
outro espectro gerado, repetindo-se o processo at toda a rea de amostra ter sido
analisada. Com esta tecnologia, toda a informao espacial obtida a partir de cada foco
de ionizao perdida.

Figura 2 Comparao entre a tecnologia em modo microssonda e modo microscpio. Adaptado de [5].

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Pela tecnologia em modo microscpio, a informao obtida independente do


tamanho do spot onde incide o laser ionizante. Atravs do uso deste modo de
espectrometria de massa, considerando o analisador TOF, os ies produzidos pelo
laser passam pelo TOF formando uma imagem a partir desses ies, ao nvel de um
detetor sensvel posio. So ento separadas sries moleculares pelas diferentes
razes m/z, gerando diferentes imagens que permitem obter detalhes espaciais a
partir do spot de incidncia do laser. A juno dessas diferentes sries de imagens
permite obter a imagem total. A informao gerada determinada pelo poder de
ampliao do microscpio, pela qualidade tica dos ies, e pela resoluo do detetor.
Esta metodologia permite analisar uma rea muito maior sem ter que se mover a
amostra ou o laser [5] [8].

1.3.

Preparao da amostra

Para a preparao da amostra que se pretender analisar vrios fatores devem


ser tidos em conta, desde a colheita da amostra at ao tratamento feito superfcie
onde queremos localizar o nosso composto. Caso a anlise em questo implique o uso
de tecido obtido de interveno cirrgica o mesmo deve ser tratado de imediato de
forma a impedir a sua degradao bem como a reorganizao espacial de molculas.
Para a anlise em MSI necessrio ter como ponto de partida superfcies finas
e lisas. Para tal, o corte de tecidos efetuado atravs de micrtomos. O tecido
seccionado pode ser aplicado diretamente numa placa de MALDI metal MALDI
target. No entanto, anteriormente a este passo devem ser executados passos como
lavagem, digesto enzimtica, deposio de matriz. Contudo, a execuo destes
ltimos vai tambm depender da molcula em anlise, do analisador e do mtodo de
ionizao [1].

Tratamento da superfcie para SIMS


O limite mximo do intervalo de massas que se pode obter com SIMS deve-se

muito ao tratamento da superfcie a analisar. Normalmente, numa vertente mais


biomdica, so utilizadas duas abordagens para preparao do tecido: MetA-SIMS
(metal-assisted SIMS) e ME-SIMS (matrix-enhanced SIMS).

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Na primeira, uma camada muito fina (1-5 nm) de metal, normalmente ouro,
colocada a revestir a amostra. Esta camada de metal pode ser rpida e
reprodutivamente aplicada por pulverizao catdica. A utilizao de uma fonte
alternada de frequncia elevada, permite a pulverizao de quase todo o tipo de
materiais. A polarizao alternada do alvo faz com que durante a alternncia negativa,
o ctodo atraia ies do plasma, pulverizando o alvo.
A segunda abordagem usa uma matriz orgnica MALDI depositada na superfcie
do tecido alvo. Esta tcnica permite aumentar o intervalo de massa para 2000 m/z de
forma a que pptidos que no eram detetados, nas preparaes normais para SIMS,
sejam agora observados. Tal como a utilizao de uma matriz uma semelhana entre
o MALDI e o ME-SIMS, tambm os espectros gerados por estes dois mtodos so
muito semelhantes [1].

Seleo da matriz e deposio no MALDI e no ME-SIMS


O passo da deposio de matriz deve ser reprodutvel, homogneo, permitir

obteno de suficiente sensibilidade no mtodo e deve ser um procedimento de


simples execuo. A deposio de matriz o passo crtico j que o tamanho do cristal
que se forma vai determinar a resoluo espacial deste mtodo. Dada a importncia
deste passo, sero discutidos alguns pontos a considerar sobre a deposio de matriz
no contexto do MSI.
Quanto escolha da matriz, esta no deve reagir com os analitos no tecido e
deve ainda ter uma taxa de sublimao baixa, o que importante dado que muitas das
anlises MSI so conduzidas em condies UHV (ultra-high vacum). Para a escolha da
matriz deve ainda ter-se em conta o tipo e tamanho molecular dos analitos de
interesse.
Outro aspeto que deve ter-se em considerao ainda o mtodo como se
processa a deposio de matriz. Deve garantir-se que haja uma distribuio
homognea da mesma de forma a evitar variaes locais ao nvel da dessoro e
ionizao. Tambm as condies do ambiente, como humidade e presena de
oxignio, so importantes nesta fase, porque as mesmas podem condicionar a
interao entre a matriz e os analitos. Existem ento diferentes metodologias descritas
que se usam para deposio de matriz na espetrometria de massa imaging [1].

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Dried-droplet method:
A soluo de matriz aplicada na amostra de forma manual, com recurso a uma
pipeta. Este mtodo rpido e simples, no entanto no est recomendado quando o
propsito o MSI. A difuso pode ocorrer no interior do spot da matriz, sendo que o
tamanho desse spot tipicamente grande e pode, por isso, ocorrer distribuio
irregular dos cristais da matriz.

Pneumatic nebulization:
Neste a soluo de matriz pulverizada na amostra por meio de um spray. Esta
pulverizao feita de forma suave permitindo a formao de uma camada de cristal
homognea na superfcie da amostra. Como o spray tem que ser otimizado para cada
aplicao o que se verifica que surgem, consequentemente, problemas de
reprodutibilidade.

Chemical inkjet printer:


Pequenas gotas da soluo de matriz so aplicadas com recurso a um
dispositivo piezoeltrico de impresso de gotculas. Com esta tcnica obtm-se a
deposio de pequenos volumes por spot (100pL), por cada ciclo. A deposio de
matriz feita de um modo muito preciso, altamente reprodutvel, sendo as gotas
aplicadas de tamanho uniforme. Dado o tamanho das gotas, esta metodologia est
mais indicada para MSI de baixa resoluo espacial.

Automated vibrational spray coater:


Este dispositivo especialmente usado para MALDI imaging MS e produz uma
camada de matriz homognea com pequenos cristais, operando num sistema fechado.
O controlo do tamanho das gotas limita a difuso da superfcie e o tempo de interao
entre o analito e a matriz pode ser otimizado para uma co-cristalizao mxima.

Matrix sublimation:
Uma matriz colocada numa seco especfica de um condensador e a amostra
ligada ao condensador com uma cassete de face dupla condutiva termicamente

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voltada para a matriz slida. A sublimao ocorre sob presses baixas e temperaturas
altas (125C) que permitem matriz condensar na superfcie fria da amostra. Com este
mtodo consegue-se obter uma maior pureza relativamente matriz que aplicada na
amostra, bem como cristais pequenos desta e ainda uma deposio uniforme.

Dry-coating:
Neste mtodo a matriz em estado slido (pequenos gros) filtrada para o
tecido diretamente, passando apenas as partculas de menor dimenso. Esta
metodologia til para uma rpida e reprodutvel aplicao da matriz no que diz
respeito anlise de lpidos. Tal como no mtodo de sublimao, a difuso na
superfcie limitada devido ausncia de solventes na matriz.
De um modo geral mtodos automatizados representam a melhor escolha de
tcnica de deposio de matriz quando se trata de um estudo que envolva grande
nmero de amostras e quando se pretende obter rendimentos maiores neste passo. J
os mtodos manuais so os eleitos quando se esto a testar novos protocolos. Cada
vez mais se tm estudado metodologias para a deposio de matriz, uma vez que se
acredita que este passo seja limitante no rendimento obtido em MSI [1].

1.4.

Anlise de dados

Inmeros softwares so usados para a gerao de imagens. Estes incluem o


Novartis BioMap, o Brukers Flex e o AMOLFs datacube generator and viewer.
O PCA (principal component analysis) permite a anlise de dados e aplicado a MSI.
Este usado para identificar grupos de variveis fortemente correlacionadas e
identificar coordenadas espaciais. PCA combinado com anlise cannica de correlao
(ACC) pode ser usado para correlacionar dados de MSI obtidos de diferentes tcnicas,
pois permite relacionar os componentes espaciais e espectrais de um conjunto de
resultados, melhorando esses mesmos individualmente [1].

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2. Aplicao biolgica
Com o intuito de demonstrar o potencial em reas biolgicas da tcnica
abordada, ser descrito nesta seco um estudo [9] onde se recorre espectrometria
de massa imaging para a localizao de um frmaco a nvel celular.
O cancro do colo retal (CCR) um dos cancros com maior mortalidade no
mundo. A quimioterapia por si s pode permitir perodos de sobrevivncia mdia at
20 meses, sendo o frmaco mais utilizado o fluorouracil. No entanto, tm surgido
novos frmacos como o cetuximab, o irinotecan ou o oxaliplatin, entre outros. Estes
frmacos atuam por bloqueio da angiognese atravs da inibio do fator de
vascularizao endotelial (VEGF) ou por inibio de fatores de crescimento derivados
de plaquetas (PDGF), de forma a impedir a vascularizao do tumor bem como levar
sua regresso.
O sunitinib um frmaco de administrao oral com ao anti-angiognica, por
inibio de recetores de tirosina cinase, como recetores de PDGF e VEGF. Para alm da
sua utilizao nesta neoplasia ele tem sido testado noutras como meningioma,
carcinoma das clulas renais, cancro da mama metasttico, entre outras.
No desenvolvimento de um frmaco torna-se muito relevante toda a sua
farmacocintica, farmacodinmica bem como a interao deste ao alvo especfico da
via onde se pretende atuar. Esta afinidade ao alvo vai ditar a localizao espacial do
frmaco em estudo. A MALDI-MSI uma tecnologia que permite o mapeamento de
molculas em seces finas de tecido com uma resoluo de 30-50 m. Tem ainda a
vantagem, como j referido na seo anterior, de permitir identificar a massa absoluta
de compostos intactos, dos seus fragmentos moleculares e dos metabolitos
(informao que no se obtm com outras tcnicas de imaging).
A distribuio da droga revela os seus stios de acumulao e d informao
sobre onde esta efetiva ou txica. Como estudos in vivo obrigam a ter um grande
nmero de animais e so mais demorados, o estudo introduz a abordagem in vitro
para comparao com experincias feitas in vivo, de forma a verificar se o mtodo in
vitro permite tirar concluses acerca do que acontece efetivamente em modelos
animais.

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Relativamente metodologia, os tumores foram obtidos de ratos BAlb/C


sujeitos a tratamento com sunitinib durante 10 dias sendo que estes foram
posteriormente sacrificados. Os tumores obtidos foram seccionados em cortes de 10
m de espessura. Quanto ao modelo in vitro, a administrao de sunitinib foi feita
direitamente em seces obtidas de tumor de ratos controlo.
No que diz respeito preparao das amostras, foi inicialmente preparada uma
matriz cido -ciano-4-hidroxicinamico (CHCA) em acetonitrilo a 50% (para posterior
LC-MS) e cido trifluorocetico (TFA) a 0,1%. Um mililitro da soluo da matriz foi
adicionado a um pulverizador Aztek A470 de forma a que as seces de tecidos foram
cobertas com a matriz (mantendo uma distncia de 10-12 cm entre a superfcie de
tecido e o spray), por pulverizao recorrendo a nitrognio comprimido. A ionizao
ocorreu ento tendo uma soluo pura (1mg de sunitinib em MEOH 50%) misturados
com 3mg/mL CHCA colocados numa placa de MALDI. Aps a deposio de matriz esta
secou, permitindo a formao de cristais.
A anlise MALDI-MS foi feita num espectrmetro MALDI LTQ Orbitrap XL,
usando um mtodo que emprega a incidncia de um laser a 10 J, promovendo a
ionizao do analito. Primeiramente foi feita uma anlise considerando intervalos de
massa de 200 m/z a 500, utilizando-se um analisador Orbitrap de resoluo 60 000. A
segunda anlise foi feita por espectrometria tandem (MS/MS) com fragmentao por
dissociao induzida por coliso (CID) para a qual se considera o intervalo de massa de
105 a 500 m/z, utilizando um analisador Ion Trap em modo linear.
Os ficheiros gerados foram executados com o software ImageQuest e as
massas do io precursor ou fragmentados de sunitinib foram identificadas mostrando
a sua localizao nos tecidos em estudo. A distribuio do io precursor do sunitinib
(m/z 399,218) foi normalizada relativamente contagem total de ies e aos seus ies
filho (m/z 326,1) ao mximo de resoluo de imagem permitido. Para estimar a
concentrao de sunitinib nas seces do tecido foi usado o io precursor normalizado.
Para proceder colorao histolgica foi efetuada a remoo da matriz e
recorreu-se colorao com Hematoxicilina-Eosina (H&E). Foi utilizado o software
Aperio ImageScope Viewer para obteno de fotografias das zonas coradas
selecionadas.

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A utilizao desta tcnica permitiu obter vrios resultados. Verificou-se pelas


imagens obtidas que a distribuio do frmaco semelhante em trs seces
analisadas do tumor e que os maiores nveis obtidos se encontram nas zonas
perifricas do mesmo (figura 3), como foi demonstrado pelos cromatogramas de io
extrado (XIC) do precursor de m/z 399,218 (Estes cromatogramas so criados pelo
registro da intensidade do sinal observado para um determinado valor ou conjunto de
valores de m/z numa srie de espectros de massas registados em funo do tempo de
reteno). A verificao desta localizao foi feita posteriormente por MS/MS. Os
nveis de frmaco obtidos indicam que este pode ser absorvido pelo tecido do tecido
tumoral.

Figura 3 Trs rplicas de tecidos aps colorao com H&E, e observao da localizao do frmaco nos
tecidos a partir das intensidade de io precursor m/z 399,218 e do io produto extrado m/z 326,1 [9].

A distribuio de sunitinib no modelo in vivo, ao longo do tempo, foi tambm


investigada. O contnuo tratamento com o frmaco demonstrou acumulao deste em
todo o tumor, como comprovam os altos nveis de composto ativo detetados aps
quatro dias de administrao. Os nveis de frmaco foram ainda estimados atravs de
uma intensidade mdia de sinal obtido do io precursor normalizado em cada seco
de tecido tumoral ao longo de diferentes dias (figura 4). Assim verificou-se uma
acumulao crescente de sunitinib, com mxima acumulao ao dia 7.

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Figura 4 Nveis estimados de sunitinib nos tecidos aos dias 1,4,7 e 10, aps administrao de frmaco, por
anlise da mdia de intensidade de sinal do io precursor 399,218 [9].

Este aumento pode dever-se ao facto da entrada do frmaco nas clulas ser
mais rpida do que a velocidade com que estas conseguem metaboliza-la e excreta-la.
Relativamente

metodologia

in

vitro,

foram

aplicadas

diferentes

concentraes superfcie das seces de tecido de forma a obter a concentrao de


sunitinib que corresponda a intensidades de sinal semelhantes aos obtidos no modelo
in vivo. Os modelos in vivo e in vitro mostraram nveis de sunitinib semelhantes com
homogeneidade de distribuio entre dois tumores tratados in vitro que foram
analisados (Figura 5).

Figura 5 Seces de tecido analisadas por abordagem in vitro. Observao da localizao do frmaco nos
tecidos a partir da intensidade de io precursor m/z 399,218 [9].

Por comparao de ambos os modelos, foi observada uma distribuio de


frmaco semelhante. Diferenas biolgicas em tumores podem contribuir para a
localizao especficas dos frmacos administrados bem como da intensidade do seu
sinal. Ainda variaes individuais podem explicar fenmenos de supresso de sinal ou

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amplificao, que no surgem em todos os tumores de forma igual. Fenmenos de


supresso inica podem ainda ocorrer causados por diversos fatores como sais, ionpairing agents, metabolitos ou ainda protenas, bem como o prprio tipo de tecido
em anlise. Com este trabalho percebeu-se que a forma de atuao do frmaco contra
o seu alvo bem como a sua distribuio ocorrem de forma semelhante entre os dois
modelos utilizados de tal forma que o estudo do potencial de um composto possa
inicialmente ser feito em seces de tecido para prever o que ocorre em animais e,
como objetivo primordial, em humanos.
Assim, como concluso, tanto in vitro como in vivo uma nica dose de sunitinib
permitiu a sua localizao nos tumores atravs da tcnica MALDI-MSI. Verificou-se um
aumento de frmaco detetado perante tratamento continuado. Os dados obtidos
permitiram ainda suspeitar que vrios fatores biolgicos do crescimento do tumor
possam influenciar os nveis de sunitinib detetados. Uma vez que a aplicao deste
modelo experimental em tumores de animais no tratados permitiu reproduzir os
nveis de frmaco obtidos pelos estudos in vivo dos tumores de animais tratados,
pode-se acreditar que este procedimento experimental tenha potencial para ser
aplicado no estudo da distribuio de drogas em diferentes tecidos. O facto de se
poder obter este tipo de resultados pode levar ao surgimento de um melhor
conhecimento da atuao de frmacos em tumores especficos e, portanto, alcanar
teraputicas mais personalizadas.
Fica ento aqui evidenciado o papel promissor que a tcnica de espectrometria
de massa imaging assume perante reas como a biologia e a bioqumica, onde permite
identificar e quantificar relativamente compostos em sees histolgicas.

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Bibliografia
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