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Norm As Adolfo Lutz
Norm As Adolfo Lutz
Norm As Adolfo Lutz
Edies anteriores
1 edio 1967
Coordenao: Ariosto Bller Souto
Mrio Sampaio Mello
2 edio 1976
Coordenao: A. B. Walkyria H. Lara
Germnio Nazrio
Maria Eliza Wohlers de Almeida
Waldomiro Pregnolatto
3 edio 1985
Coordenao: Waldomiro Pregnolatto
Neus Sadocco Pascuet
4 edio 2005
Coordenao: Odair Zenebon
Neus Sadocco Pascuet
Instituto Adolfo Lutz (So Paulo). Mtodos fsico-qumicos para anlise de alimentos
/coordenadores Odair Zenebon, Neus Sadocco Pascuet e Paulo Tiglea -- So Paulo:
Instituto Adolfo Lutz, 2008
p. 1020
verso eletrnica
1. Anlise de alimentos
de sade pblica
SES/CCD/CD 12/08
II - IAL
2. Alimentos / mtodos
3. Servios laboratoriais
CDD 614.028
NLM QU50
1 Edio Digital
Coordenadores
Odair Zenebon
Neus Sadocco Pascuet
Paulo Tiglea
IV edio
1 Edio Digital
So Paulo, 2008
IAL - III
IV - IAL
IAL - V
VI - IAL
APRESENTAO
A sade direito de todos e dever do Estado,
garantido mediante polticas sociais e econmicas que visem
reduo do risco de doena e de outros agravos e ao acesso
universal e igualitrio s aes e servios para sua promoo,
proteo e recuperao.
presentar uma obra de tamanho vulto , sem sombra de dvida, uma grande
responsabilidade e um imenso prazer. Principalmente por se tratar de uma obra
iniciada em 1967 e que desde seu lanamento teve todos os seus exemplares
esgotados rapidamente, dado o interesse que desperta em profissionais da
indstria, estudantes e profissionais de sade pblica do Brasil e de outros pases da
Amrica Latina.
Esta Obra o resultado da evoluo e avanos cientficos e tecnolgicos,
que refletem na elaborao de novos mtodos Analticos, personificando os esforos
e dedicao dos pesquisadores e tcnicos da Diviso de Bromatologia e Qumica,
elaborada sobre a coordenao do Dr. Odair Zenebon, Neus Sodocco Pascuet e Paulo
Tiglea.
Com todos os avanos cientficos e tecnolgicos, tambm no poderia
deixar de ser incorporado o modelo de publicao desta edio, agora na sua verso
digital, disponvel gratuitamente no site do Instituto Adolfo Lutz, no momento que
comemoramos os 20 anos da criao do Sistema nico de Sade - SUS.
So Paulo, 28 de outubro de 2008.
Marta Lopes Salomo
Diretora Geral do IAL
IAL - VII
VIII - IAL
INTRODUO
s vezes mais trabalhosos, mas de preciso e exatido equivalentes aos mtodos que
utilizam equipamentos sofisticados; por exemplo, os colorimtricos para a determinao de ferro e cobre, respectivamente, em gua e aguardente; os volumtricos, como,
para a determinao de clcio, como alternativas opcionais viveis aos laboratrios
que no dispem de espectrmetro de absoro atmica. A determinao de fsforo
em alimentos, em substituio ao mtodo com ICP OES, poder ser efetuada por
tcnica colorimtrica. Da mesma maneira, a determinao de colesterol em produtos alimentcios com ovos, em substituio ao mtodo Cromatografia lquida de alta
eficincia - CLAE.
Neste livro apresentamos, como novidade em relao edio anterior, um
captulo de anlise de elementos traos (nutrientes inorgnicos) em alimentos.
O Laboratrio de Alimentos, como qualquer outro que realiza anlises fsicoqumicas, para configurar a confiabilidade de seus resultados, dever estar engajado em
Programas de Garantia da Qualidade, envolvendo o controle de qualidade analtica e
tambm a biossegurana. Levando-se em conta que os critrios para seleo e escolha
de uma determinada metodologia analtica esto dentro da contextualizao da
qualidade laboratorial, achamos por bem fazer constar neste livro um captulo sobre
a qualidade.
A conscientizao sobre biossegurana, felizmente, est cada vez mais incorporada
nas atividades dos laboratrios analticos; neste escopo, o nosso objetivo foi o de
apresentar os conceitos bsicos de segurana no laboratrio, tais como cuidados na
manipulao e descarte de reagentes qumicos, principais providncias em casos de
acidentes com produtos qumicos, entre outros.
Finalizando e com o propsito de brindar os 20 anos da implantao do
SUS, comemorado neste ano, estamos disponibilizando, gratuitamente, na pgina
eletrnica do Instituto Adolfo Lutz, a IV edio revisada deste livro para que toda
comunidade interessada em anlise bromatolgica possa ter acesso a esta importante obra.
Odair Zenebon
IAL - XI
XII - IAL
Sumrio
SUMRIO
SUMRIO
CAPTULO I
Apresentao................................................................................................................................................. 35
Introduo .................................................................................................................................. ..............39
Siglas, Sites e Definies................................................................................................................................ 40
Implantao do Sistema da Qualidade........................................................................................................... 51
Motivao .................................................................................................................................................... 51
Capacitao................................................................................................................................................... 52
Pessoal........................................................................................................................................................... 55
Elaborao dos Documentos da Qualidade.................................................................................................... 55
Controle dos Documentos............................................................................................................................ 56
Treinamento nos documentos da qualidade................................................................................................... 57
Preparao das unidades organizacionais ........................................................................................ .............. 57
Controle de acesso......................................................................................................................................... 58
Calibrao, controle e manuteno de equipamentos..................................................................................... 58
Apresentao dos resultados....................................................................................................................... ....59
Auditorias internas........................................................................................................................................ 59
Critrios para qualificao de auditores internos............................................................................................ 60
Garantia da qualidade dos resultados de ensaio.............................................................................................. 60
Anlise crtica pela alta administrao............................................................................................................ 61
Referncias bibliogrficas............................................................................................................................... 62
CAPTULO II
GENERALIDADES..................................................................................63-72
Sumrio
CAPTULO V
ADITIVOS............................................................................................161-278
Aditivos....................................................................................................................................................... 163
Acidulantes/Reguladores de acidez............................................................................................................... 164
Antioxidantes.............................................................................................................................................. 164
Aromatizantes............................................................................................................................................. 164
Conservadores............................................................................................................................................. 164
Corantes...................................................................................................................................................... 165
Edulcorantes............................................................................................................................................... 165
Gomas......................................................................................................................................................... 165
Espessantes.................................................................................................................................................. 165
Geleificantes................................................................................................................................................ 165
Estabilizantes............................................................................................................................................... 166
Emulsificantes............................................................................................................................................. 166
058/IV Acidulantes Identificao de cido ctrico, lctico e tartrico por cromatografia em papel............. 166
059/IV Acidulantes Identificao de cido ctrico..................................................................................... 167
060/IV Acidulantes Quantificao de cido ctrico................................................................................... 168
061/IV Antioxidantes Titulao de cido ascrbico e ismeros com soluo de iodo................................ 169
062/IV Antioxidantes Determinao de cido ascrbico e ismeros pelo mtodo de Tillmans................. 170
063/IV Antioxidantes Titulao de cido ascrbico e ismeros com soluo de iodo na presena de
polissorbato 80............................................................................................................................................ 171
064/IV Antioxidantes Identificao de cido ascrbico por reduo da soluo de Fehling...................... 172
065/IV Antioxidantes Identificao de cido ascrbico por reduo de soluo de Tillmans.................... 173
066/IV Antioxidantes Identificao de cido ascrbico pela reao com bicarbonato de sdio e sulfato
ferroso............................................................................................................................................. 174
IAL - XV
Sumrio
Sumrio
IAL - XIX
CAPTULO X
BEBIDAS NO ALCOLICAS..........................................................461-475
Sumrio
Cacau......................................................................................................................................................... 479
Chocolate e produtos base de chocolate.................................................................................................. 479
263/IV Determinao de lipdios com hidrlise prvia................................................................................ 479
264/IV Pesquisa de gorduras estranhas em chocolate................................................................................... 481
CAPTULO XIV
EMBALAGENS E EQUIPAMENTOS EM CONTATO COM ALIMENTO................ 533-566
Embalagens e equipamento em contato com alimentos............................................................................ 535
Terminologia . ........................................................................................................................................... 537
IAL - XXI
Sumrio
CAPTULO XXII..
SAL..................................................................................................713-734
Sal.............................................................................................................................................................. 715
377/IV Determinao da granulometria...................................................................................................... 716
378/IV Determinao da umidade............................................................................................................. 717
379/IV Determinao de insolveis totais em gua...................................................................................... 717
380/IV Determinao de insolveis inorgnicos em gua............................................................................ 719
381/IV Determinao de cloretos em cloreto de sdio................................................................................. 719
382/IV Determinao de iodo adicionado na forma de iodeto.................................................................... 720
383/IV Determinao de iodo adicionado na forma de iodato.................................................................... 721
384IV Determinao da turbidez............................................................................................................... 722
385/IV Determinao de clcio por permanganometria.............................................................................. 723
386/IV Determinao de clcio por titulao com EDTA........................................................................... 724
387/IV Determinao de magnsio por precipitao................................................................................... 726
388/IV Determinao de magnsio por titulao com EDTA...................................................................... 727
389/IV Determinao de sulfatos por precipitao...................................................................................... 728
390/IV Determinao de sulfatos por titulao com EDTA........................................................................ 730
XXIV - IAL
Sumrio
Sumrio
APNDICE I
APNDICE II
ndice........................................................................................................................... ...............................942
01. Metas e objetivos................................................................................................................................... 943
02. Introduo............................................................................................................................................ 944
03. Definies e terminologia...................................................................................................................... 945
Ensaios de proficincia............................................................................................................... .................947
04. Acreditao............................................................................................................................................ 948
05. Escopo.................................................................................................................................................. 953
06. A tarefa analtica.................................................................................................................................... 954
07. Especificao do requisito analtico........................................................................................................ 954
08. Estratgia analtica................................................................................................................................. 955
09. Anlises fora-de-rotina........................................................................................................................... 955
10. Pessoal................................................................................................................................................... 957
11. Amostragem, manuseio e preparao de amostras.................................................................................. 958
12. Ambiente.............................................................................................................................................. 965
13. Equipamentos....................................................................................................................................... 966
14. Reagentes.............................................................................................................................................. 969
15. Rastreabilidade...................................................................................................................................... 970
16. Incerteza de medio............................................................................................................................. 972
17.Mtodos/procedimentos para ensaios e calibrao.................................................................................. 976
18. Validao do mtodo............................................................................................................................. 977
19.Calibrao.............................................................................................................................................. 982
20. Materiais de referncia (MR)................................................................................................................. 985
21.Controle de qualidade e ensaios de proficincia...................................................................................... 987
22. Computadores e sistemas controlados por computador......................................................................... 989
23. Auditoria do laboratrio e anlise crtica................................................................................................ 993
Referncias bibliogrficas............................................................................................................................. 994
Siglas......................................................................................................................................................... 1002
IAL - XXIX
CAPTULO
GESTO DA
QUALIDADE
LABORATORIAL
IAL - 33
34 - IAL
Apresentao
IAL - 35
Estabelecer um padro internacional e nico para atestar a competncia dos laboratrios para realizao de ensaios e/ou calibraes, incluindo amostragem. Tal padro
facilita o estabelecimento de acordos de reconhecimento mtuo entre os organismos
de credenciamento nacionais;
Facilitar a interpretao e a aplicao dos requisitos, evitando ao mximo opinies
divergentes e conflitantes. Ao incluir muitas notas que apresentam esclarecimentos
sobre o texto, exemplos e orientaes, a 17.025 reduz a necessidade de documentos
explicativos adicionais;
Estender o escopo em relao ISO Guia 25, abrangendo tambm amostragem e
desenvolvimento de novos mtodos;
Estabelecer uma relao mais estreita, clara e sem ambigidade com a ISO 9.001 e
9.002 (a 17.025 de 1999, portanto antes da publicao da 9.001:2000).
As principais modificaes introduzidas pela 17.025 com relao ISO Guia 25
podem ser divididas em dois grupos: mudanas estruturais e mudanas conjunturais. As
estruturais dizem respeito introduo de novos conceitos e enfoques, bem como ao ordenamento e disposio dos requisitos listados na ISO/IEC 17.025, cuja apresentao
difere completamente da estrutura existente na ISO Guia 25. So diferenas no apenas
de forma, mas tambm de contedo, e que demonstram claramente a preocupao da
nova norma em estabelecer orientaes gerais e modernas para que os laboratrios desenvolvam um slido gerenciamento das suas atividades segundo padres de qualidade reconhecidos internacionalmente. Alm disso, o aprofundamento de alguns requisitos de carter tcnico, antes superficiais na ISO Guia 25, propiciar melhores condies para que
os laboratrios demonstrem de forma mais consistente sua competncia tcnica. Dentre
as principais mudanas de carter estrutural introduzidas pela 17.025, destacam-se:
Na ISO/IEC 17.025 h uma ntida separao entre os requisitos gerenciais e os requisitos tcnicos; a seo 4 contm os requisitos para a administrao, e a seo 5
especifica os requisitos para a competncia tcnica dos ensaios e/ou calibraes que o
laboratrio realiza. Essa separao facilita a conduo das avaliaes, quer sejam internas ou externas;
Maior ateno deve ser dada aos clientes do laboratrio (item 4.7 Atendimento ao
cliente). Dever ser privilegiada uma cooperao mais estreita com os clientes no que
tange aos aspectos contratuais e ao acesso do cliente s reas do laboratrio para acompanhamento dos ensaios e/ou calibraes. Embora no sejam requisitos auditveis, os
laboratrios so encorajados a estabelecer canais de comunicao e obter feedback dos
clientes;
Foi includo o requisito que trata das aes preventivas a serem tomadas pelo laboratrio (item 4.11), pelo qual devero ser identificadas oportunidades de melhoria;
Como conseqncia da extenso do escopo com o desenvolvimento de novos mtodos
36 - IAL
38 - IAL
O uso da ISO/IEC 17.025 facilitar a cooperao entre laboratrios e outros organismos, auxiliando na troca de informaes e experincias, bem como na harmonizao de
normas e procedimentos, o que poder significar reduo de custos.
Em suma, a adequao das atividades gerenciais e tcnicas do laboratrio de acordo com os critrios da ISO/IEC 17.025 deve ser vista no como um custo, mas como um
investimento de mdio e longo prazos, cujo retorno comercial e financeiro certamente
ser garantido pela comprovao da competncia tcnica do laboratrio perante o mercado. (Valle & Bicho)
Introduo
Atualmente indiscutvel a importncia do trabalho com qualidade, em qualquer
esfera profissional. A demonstrao da competncia tcnica alicerada em regras internacionais consensuadas pr-requisito para a sobrevivncia de qualquer laboratrio. O artigo que apresenta este captulo a prova cabal da importncia da implantao da norma
NBR ISO/IEC 17025.
O primeiro passo para a concretizao de um Sistema de Qualidade em um laboratrio a criao de uma Comisso Permanente da Qualidade, capitaneada por um gerente ou coordenador da qualidade e um substituto ou vice-gerente, com a total aprovao
da alta administrao do laboratrio.
Esta comisso deve desenvolver vrias atividades no sentido de implementar o Sistema de Qualidade, de acordo com os requisitos da norma ABNT ISO/IEC 17.025, sendo que a maioria delas diz respeito motivao, conscientizao e capacitao dos funcionrios, preparando-os para incorporar uma mentalidade pr-ativa, capaz de lidar com as
mudanas de forma dinmica e de enxergar as oportunidades de melhoria onde antes s
viam problemas. Deve tambm, na medida do possvel, prover os laboratrios dos meios
necessrios para o desenvolvimento das atividades relacionadas com a qualidade.
A grande maioria dos laboratrios que desenvolvem suas atividades no controle da
qualidade de alimentos deve optar pela Norma ABNT ISO/IEC 17.025. Entretanto, aqueles que, alm das atividades de rotina desenvolvem pesquisas como nos seguintes casos:
a) estudos que fundamentem a concesso, renovao ou modificao de registro de aditivos para alimentos, agrotxicos, alimentos transgnicos, raes e outros afins, por organismos regulamentadores/fiscalizadores com fins de responsabilizao para comercializao.
b) estudos conduzidos em resposta a questionamentos de organismos de qualquer setor
governamental, devero tambm seguir as Boas Prticas de Laboratrio (BPL), alm da
norma descrita acima para suas atividades de rotina.
IAL - 39
40 - IAL
Farmacopia Americana
http://www.usp.org
Farmacopia Britnica
http://www.pharmacopoeia.org.uk
Farmacopia Europia
http://www.pheur.org
Farmacopia Francesa
http://agmed.sante.gouv.fr/htm/pharma/accueil.htm
Farmacopia Japonesa
http://moldb.nihs.go.jp/jp/index.html
Farmacopia Mexicana
h t t p : / / w w w. s s a . g o b . m x / u n i d a d e s / d g c i s / f a rm a c o p e a / i n d e x F E U M . h t m
Index of Pharmacopoeias, by WHO
http://www.who.int/medicines/organization/qsm/activities/qualityassurance/pharmacopea/who-edm-qsm-2002_6.doc
ndice de farmacopias mundiais, compilado pela Organizao Mundial de Sade - OMS.
Associao Brasileira de Normas Tcnicas - ABNT
http://www.abntdigital.com.br
Responsvel pela normalizao tcnica no pas, fornecendo a base necessria ao desenvolvimento tecnolgico brasileiro.
Fundao Nacional de Sade - Funasa
http://www.funasa.gov.br
rgo executivo do Ministrio da Sade, tem como misso ser uma agncia de excelncia
em promoo e proteo sade.
Fundao Oswaldo Cruz - FIOCRUZ
http://www.fiocruz.br
Fundao vinculada ao Ministrio da Sade do Brasil, desenvolve aes na rea da cincia
e tecnologia em sade.
Fundao Jorge Duprat Figueiredo de Segurana e Medicina do Trabalho - FUNDACENTRO
http://www.fundacentro.gov.br
Entidade vinculada ao Ministrio do Trabalho e Emprego - o centro brasileiro de pesIAL - 41
http://www.ianz.govt.nz
Instituio que conglomera os organismos da sia e Pacfico com responsabilidade de
credenciamento de laboratrios, ensaios e calibrao.
Association of Official Analytical Chemists - A.O.A.C. International
http://www.A.O.A.C..org
Instituio americana que trata de credenciamento de laboratrios de alimentos
Bundesnastait fr Materialforachung und - prfung - BAM
http://www.bam.de
Instituio pblica alem que trata de teste em materiais.
Bureau International des Poids et Mesures (BIPM)
http://www.bipm.fr
Organizao Metrolgica Internacional sediada em Paris-Frana, estabelecida pela Conveno do Metro (Convention of the Metre) com a a atribuio de assegurar a uniformidade mundial de pesos e medidas e sua rastreabilidade ao Sistema Internacional de
Unidades (SI).
Code of Reference Materials (COMAR)
http://www.comar.bam.de
Informaes sobre o COMAR (Base de Dados de Materiais de Referncia Certificados),
criado com o intuito de auxiliar aos profissionais de laboratrios de ensaios na busca por
materiais de referncia (MRs) adequados aos seus trabalhos. Idealizado pelo Servio de
Materiais de Referncia do Laboratrio Nacional de Ensaios (Reference Materials Service
of the Laboratoire National dEssais), um dos 5 laboratrios bsicos do Departamento
Nacional de Metrologia Francs (French Bureau National de Mtrologie), foi desenvolvido e mantido com a colaborao de vrios pases.
Environment, Health and Safety - OECD
http://www.oecd.org
Organizao econmica que trata das questes tcnicas na comunidade europia e discute no Painel GLP os seus critrios.
EURACHEM
http://www.eurachem.bam.de
Instituio europia que conglomera instituies que tratam da qumica analtica na Europa.
European Co-operation for Accreditation EA
http://www.european-accreditation.org
Instituio europia que conglomera instituies de organismos credenciadores na Europa e em outros continentes
IAL - 43
European Federation of National Associations of Measurament, Testing and Analytical Laboratories EUROLAB
http://141.63.4.16/maintext.html
Instituio europia com enfoque em qumica analtica na comunidade europia.
European Information System on Proficiency Testing Schemes - EPTIS
http://www.eptis.bam.de
Sistema de informao europeu de teste de proficincia.
Food Analysis Performance Assessment Scheme - FAPAS
http://ptg.csl.gov.uk/fapas.cfm
Organismo do Reino Unido que trata de credenciamento de laboratrio de alimentos.
Indian Systems of Medicine & Homoeopathy
http://indianmedicine.nic.in
Site do Sistema Indiano de Medicina e Homeopatia.
Instituto Portugus da Qualidade IPQ
http://www.ipq.pt
Organismo portugus destinado ao credenciamento de laboratrios.
International Laboratory Accreditation Cooperation ILAC
http://www.ipq.pt
Instituio internacional que conglomera instituies credenciadoras de laboratrios de
ensaio e calibrao.
International Organization for Standardization
http://www.iso.ch
Organizao no governamental estabelecida em 1947, tem por misso promover o desenvolvimento mundial da padronizao e demais atividades relacionadas, visando facilitar o intercmbio internacional de bens e servios e fomentar a cooperao nas esferas
intelectual, cientfica, tecnolgica e da atividade econmica.
National Athletic Trainers Association NATA
http://www.nata.asn.au
Instituio privada australiana que trata do credenciamento de laboratrios microbiolgicos.
National Committee for Clinical Laboratory Standards NCCLS
http://www.nccls.org
Organismo normalizador na rea laboratorial no E.E.U.U que desenvolve padres que
44 - IAL
melhoram os valores dos testes clnicos dentro da comunidade de sade atravs do desenvolvimento e disseminao dos padres, guias e melhores prticas.
National Conference of Standards Laboratories NCSL
http://www.ncsli.org
Sociedade de normalizao americana com interesse na cincia da medio e sua aplicao na pesquisa, desenvolvimento e educao nos laboratrios de anlises clnicas.
National Institute of Health Sciences - NIHS (Japo)
http://www.nihs.go.jp
Instituio de sade japonesa estabelecida em Tkio em 1874, originalmente com o nome
de Tokyo Drug Control Laboratory (Laboratrio de Controle de Drogas de Tkio),
hoje a principal organizao dentro do Ministrio da Sade e Bem-Estar do Japo, sendo
tambm o mais antigo instituto de pesquisa naquele pas.
National Institute of Standards and Technology NIST
http://www.nist.gov
Instituio pblica americana que trata da metrologia, padres e tecnologias de medio.
Organizao Pan-Americana da Sade OPAS
http://www.opas.org.br
Organismo internacional de sade pblica com um sculo de experincia, dedicado a
melhorar as condies de sade dos pases das Amricas. Ela tambm atua como Escritrio Regional da Organizao Mundial da Sade (OMS/WHO) para as Amricas e faz
parte dos sistemas da Organizao dos Estados Americanos (OEA/OAS) e da Organizao das Naes Unidas (ONU/UN).
Panalimentos.org
http://www.panalimentos.org
Pgina mantida pelo Instituto Pan-americano de Proteo de Alimentos e Zoonose
(INPPAZ), organizao que tem a misso de fornecer cooperao tcnica em inocuidade
alimentar a todos os pases das Amricas, com o objetivo de diminuir os riscos para a
sade da populao humana, originados pelas enfermidades transmitidas por alimentos,
e considerando todas as etapas da cadeia alimentar.
Physikalisch Techaische Bundesanstalt PTB
http://www.ptb.de
Instituio pblica alem que trata da poltica e guarda dos padres primrios e poltica
de calibrao.
IAL - 45
46 - IAL
Auditado Laboratrio ou organizao que est sendo auditada; deve concordar com os
elementos da auditoria.
Auditor da qualidade Pessoa qualificada para desenvolver uma auditoria da qualidade;
deve conhecer as ferramentas da qualidade.
Auditoria da qualidade Exame sistemtico e permanente, independente, para verificar se as atividades da qualidade e seus objetivos e resultados esto de acordo com as
disposies planejadas.
Calibrao Conjunto de operaes que estabelece, sob condies especificadas, a relao entre os valores indicados por um instrumento de medio ou sistema de medio
ou valores representados por uma medida materializada ou um material de referncia e os
valores correspondentes das grandezas estabelecidas por padres.
Cliente Comprador firmado em contrato; destinatrio de um produto ou servio; consumidor final; usurio; segunda parte.
Comparaes interlaboratoriais Organizao, desempenho e avaliao de ensaios nos
mesmos itens ou em itens de ensaios similares, por dois ou mais laboratrios, de acordo
com condies predeterminadas.
Competncia Capacidade demonstrada para aplicar conhecimento e habilidades.
Conformidade Atendimento a requisitos especificados.
Contratado Fornecedor firmado em contrato.
Documentos da qualidade So todos os documentos gerados internamente ou obtidos
de fontes externas e que fazem parte do sistema da qualidade. Ex.: manuais de equipamentos, legislaes, pops, manual da qualidade, instrues, registros, dados brutos, etc.
Eficcia Extenso na qual as atividades planejadas e os resultados planejados, alcanados.
Eficincia Relao entre o resultado alcanado e os recursos usados.
Ensaio Operao tcnica que consiste na determinao de uma ou mais caractersticas
de um dado produto, processo ou servio, de acordo com procedimento especificado.
Ensaio de proficincia Determinao do desempenho de ensaios de laboratrios, por
meio de comparaes interlaboratoriais.
IAL - 47
Este captulo no tem a pretenso de capacitar o leitor para implantar um Sistema de Qualidade Laboratorial. Nossa inteno fornecer alguns subsdios da experincia do Instituto Adolfo Lutz que talvez possam ser teis para iluminar um pouco
mais o caminho daqueles laboratrios que esto iniciando a implantao de seu Sistema da Qualidade.
Para a implantao de um Sistema de Qualidade em um laboratrio, independentemente de seu tamanho e nmero de anlises realizadas, sugere-se seguir as seguintes etapas: motivao, capacitao, elaborao dos documentos da qualidade, treinamento nos documentos da qualidade, preparao do laboratrio, auditorias internas,
habilitao/acreditao.
Motivao
difcil definir exatamente o conceito de motivao, uma vez que este termo
tem sido utilizado com diferentes sentidos. De um modo geral, motivo tudo aquilo
que impulsiona a pessoa a agir de determinada forma ou, pelo menos, que d origem
a uma propenso a um comportamento especfico. Este impulso ao pode ser provocado por um estmulo externo (provocado pelo ambiente) ou interno (provocado
pelo prprio indivduo).
O ponto de partida para a implantao da qualidade em um laboratrio ou em
qualquer organizao o fator motivacional. Estamos vivenciando uma poca de mudanas constantes e velozes e as organizaes e seus funcionrios devem se moldar a esta
realidade para competirem e sobreviverem. medida que as organizaes crescem, o
nmero de nveis hierrquicos aumenta e ocorre um distanciamento entre a alta administrao e os funcionrios, o que conduz a um conflito entre os objetivos individuais
(pessoais) e organizacionais (da alta administrao).
A implantao da qualidade acarreta um volume de trabalho maior, o
que ocasiona na maioria dos indivduos desmotivao, desinteresse e desnimo, pois eles no conseguem perceber que, a longo prazo, seu trabalho ser
enormemente facilitado. A integrao entre as pessoas e a alta administrao
complicada e dinmica e, para melhor resolver esta complicao e trabalhar
este dinamismo, atividades motivacionais passam a ser um excelente meio
IAL - 51
facilitador, no somente entre o indivduo e a organizao, mas entre os prprios indivduos. O grande desafio justamente despertar e desenvolver o
fator motivacional existente no interior de cada ser humano.
Qualquer que seja a forma de motivao (curso, palestra, vivncia, vdeo, etc.)
ela deve deixar nos tcnicos os seguintes principais conceitos:
O planejamento do treinamento para os recursos humanos deve ser estabelecido com muito critrio, respeitando-se o grau de escolaridade de cada funcionrio e
suas atribuies dentro da qualidade.
A capacitao deve iniciar sempre com uma sensibilizao de todos os funcionrios da instituio, a fim de garantir a assimilao dos conceitos de qualidade; deve
ficar claro o papel de cada funcionrio com relao a todo o processo, para atingir a
melhoria contnua da qualidade.
O pessoal tcnico mais envolvido com o Programa da Qualidade e que
realiza os ensaios que eventualmente sero habilitados ou acreditados, deve ser
objeto de treinamentos especficos e mais aprofundados, para capacitao em
qualidade.
O Quadro 1 sugere alguns cursos que podem ser ministrados aos funcionrios
dos laboratrios, de acordo com suas funes e grau de escolaridade.
Quadro 1 - Relao de cursos de acordo com a escolaridade e funes dos funcionrios.
CURSO/TREINAMENTO
Histrico da qualidade
Introduo qualidade
A importncia do trabalho com qualidade
Fatores motivacionais para o trabalho
Quais os benefcios da qualidade
Como obter a melhoria contnua no trabalho
Atitudes pessoais para a qualidade
Mudanas culturais nos trabalhadores
Princpios da qualidade em uma Instituio
Capacitao para o trabalho
Conceito sobre o PDCA e o aprimoramento contnuo
Atendimento ao cliente
Conceitos sobre o modelo de gesto baseada em processos
Como construir indicadores e apresentar resultados
Indicadores de desempenho de qualidade
Os desafios a serem enfrentados na implantao da qualidade
NVEL FUNO
Td
Td
Td
Td
Td
Td
Td
Td
Td
Td
EM
Td
EM
EM
EM
EM
Td
Td
Td
Td
Td
Td
Td
Td
Td
Td
ADM
Td
ADM
ADM/T
ADM/T
ADM/T
IAL - 53
CURSO/TREINAMENTO
Noes de acreditao pelo INMETRO
Noes de habilitao pela GGLAS
Vantagens da acreditao / habilitao
Biossegurana (nfase em resduos)
Interface entre qualidade e biossegurana
Construo de mapas de risco
Segurana ocupacional e biossegurana
Regras universais de biossegurana
Nveis de biossegurana laboratorial
Equipamentos de proteo individual e coletiva
Segurana qumica e emergncias qumicas
Resduos de servios de sade
Limpeza, descontaminao e esterilizao
Transporte de amostras dentro do laboratrio
Programa Cinco Esses
Norma ISO/IEC 17.025 Apresentao
Norma ISO/IEC 17.025 Requisitos gerenciais aprofundados
Norma ISO/IEC 17.025 Inteira aprofundada
Auditorias internas
Formao de auditores
Elaborao de procedimentos
Temporalidade de documentos e amostras
Comprando com qualidade
Validao de mtodos
Estudos colaborativos
Organismos internacionais envolvidos na validao de mtodos
analticos
Clculo de incerteza de medio
Interpretao dos certificados de calibrao
Boas Prticas de Laboratrio / BPL
ADM = rea administrativa
T = rea tcnica
Td = todos
EF = ensino fundamental
EM = ensino mdio
MEM = no mnimo ensino mdio
54 - IAL
NVEL
EM
MEM
MEM
MEM
MEM
MEM
MEM
MEM
MEM
MEM
MEM
MEM
EF
EF
Td
Td
MEM
MEM
MEM
MEM
Td
MEM
MEM
MEM
MEM
FUNO
ADM/T
ADM/T
ADM/T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
T
Td
Td
ADM
T
ADM/T
ADM/T
ADM/T
ADM/T
ADM/T
T
T
MEM
MEM
MEM
MEM
T
T
T
Pessoal
Alm da capacitao para a qualidade, o pessoal tcnico e administrativo tem que demonstrar sua competncia na rea em que atua. Isto demonstrado por meio de seu currculo. Em cada laboratrio ou setor administrativo, deve existir uma pasta, individual ou
coletiva, com os currculos de todos os funcionrios daquele local, com os seguintes principais
dados: nome, tempo de atuao na rea, escolaridade, ps-graduao (se for o caso), cursos,
treinamentos, simpsios e seminrios, publicaes (se for o caso), experincia profissional,
outras atividades profissionais relacionadas, assinaturas do funcionrio e de seu chefe imediato
e data. Alm disso, se possvel nesta mesma pasta, cada funcionrio deve assinar um termo
de confidencialidade, onde se compromete a manter o carter confidencial das informaes
decorrentes das atividades por ele desenvolvidas no laboratrio.
Elaborao dos Documentos da Qualidade
Uma das principais caractersticas de qualquer Sistema da Qualidade documentar todas as atividades realizadas no laboratrio ou organizao, com a finalidade de padroniz-las.
A documentao da qualidade descreve e define polticas, diretrizes, procedimentos
tcnicos e administrativos, aes preventivas e corretivas, instrues de uso de equipamentos,
planos de calibrao, especificaes tcnicas, registros de dados brutos, planos de capacitao
de pessoal, anlises crticas do sistema da qualidade, entre outros, necessrios para a implantao e implementao do Sistema da Qualidade em um laboratrio ou organizao.
Os documentos mnimos necessrios para a implantao do Sistema da Qualidade
so: o Manual da Qualidade, que contm a declarao formal da poltica da qualidade do
laboratrio e os componentes do seu Sistema da Qualidade, os procedimentos operacionais
padro POPs, especificamente referidos na norma NBR ISO/IEC 17.025 e os documentos
referentes aos ensaios realizados, como os registros dos dados brutos, os certificados de calibrao dos equipamentos, a qualidade dos materiais de referncia, entre outros.
Normalmente, costuma-se hierarquizar estes documentos na figura de um tringulo,
onde, no vrtice, estaria o Manual da Qualidade, pela sua importncia, pois nele esto contidas todas as diretrizes e as polticas da qualidade. Na parte central, encontram-se os POPs,
que so em maior nmero e descrevem todas as atividades tcnico-administrativas do Sistema
da Qualidade. Na base do tringulo, encontram-se as intenes de trabalho os dados brutos e
os registros, que so aqueles em maior nmero no sistema.
IAL - 55
Manual
da
Qualidade
Procedimentos
Registros e dados brutos
Os procedimentos escritos tm por finalidade descrever as atividades a serem realizadas,
passo a passo, com um texto claro, evitando o excesso de detalhamento, porm sem omitir
etapas.
Sempre que possvel, o funcionrio que executa a tarefa deve escrever o procedimento; um outro companheiro que tambm conhece o trabalho deve revisar o texto para
verificar possveis omisses de etapas ou falta de clareza e o gerente da qualidade ou seu
representante deve aprovar o POP, apenas quanto na forma padronizada para procedimentos da qualidade.
Podem haver casos em que o funcionrio que executa a tarefa no tenha familiaridade
com elaborao de textos. Nesta eventualidade, algum do laboratrio deve ajud-lo nesta
tarefa, no estando excludas as demais etapas de reviso e aprovao.
Cabe ao pessoal tcnico e administrativo definir quais os procedimentos que devem ser
elaborados em cada rea e que faro parte do Sistema da Qualidade.
Controle dos Documentos
Os documentos da qualidade devem possuir uma numerao unvoca para facilitar seu
controle. Estes documentos devem ter em seu rodap a inscrio cpia controlada reproduo proibida ou frase de semelhante teor, para que no sejam reproduzidos e seja mantido
um rigoroso controle das cpias distribudas pelo sistema da qualidade. Periodicamente estes
documentos devem ser objeto de uma anlise crtica para atualizao e melhoria. Caso hajam
alteraes, devem ser emitidos novos documentos com nmeros atualizados de reviso e as cpias antigas segregadas, mantendo-se uma cpia em arquivo, como histrico de documentao.
56 - IAL
O controle de toda a documentao deve ser efetivado por meio de uma lista mestra,
onde constam todos os documentos do sistema da qualidade, com seu status de reviso.
Treinamento nos documentos da qualidade
Todos os documentos elaborados pelo sistema da qualidade, inclusive o manual da
qualidade, devem ser apresentados a seus possveis usurios mediante um treinamento, antes
de serem distribudos. Este treinamento garante que todos aqueles que forem usar aqueles
documentos compreenderam os mesmos na sua totalidade e que no tero nenhuma dvida
na sua correta utilizao.
Sempre que a gerncia tcnica do laboratrio sentir necessidade, se houver alguma
alterao significativa no procedimento, ou quando um novo funcionrio ingressar no laboratrio ou ainda quando o plano de treinamento assim o exigir, dever ser iniciado um novo
treinamento naquele procedimento. Nestes casos, deve-se tambm assegurar e manter todos
os registros destes treinamentos.
A gerncia da qualidade deve ainda garantir que os usurios dos documentos, dados
e registros estejam utilizando sempre as ltimas verses das cpias controladas. Deve ainda
assegurar que uma cpia controlada de cada documento obsoleto seja armazenada como histrico, sendo as demais cpias inutilizadas.
Preparao das unidades organizacionais
Uma boa ferramenta para iniciar a preparao do laboratrio e reas administrativas
para a sua insero no sistema da qualidade o Programa Cinco S, criado inicialmente no
Japo e que consiste em cinco conceitos simples:
Senso de descarte deve-se separar, dentro do laboratrio, os objetos e equipamentos teis
dos inteis, identificando, dentro do til, o que usado com maior freqncia, mantendo-o
prximo do usurio, do que usado esporadicamente, armazenando-o em reas de menor
acesso. Quanto ao intil, deve-se verificar se pode ser til em algum outro local, se pode ser
vendido ou doado. Caso contrrio, deve-se descartar.
Senso de ordenao e organizao deve-se definir um arranjo simples, que permita obter
apenas o que se precisa, na hora certa. Isto permite um menor tempo de busca do que preciso para operar; evita a compra de matrias-primas e componentes desnecessrios e os danos
a materiais ou produtos armazenados. Aumenta a produtividade das pessoas e equipamentos
e permite uma maior racionalizao do trabalho, causando menor cansao fsico e mental,
IAL - 57
Quando a temperatura for crtica para o ensaio, deve ser elaborado um controle peridico e mantido prximo aos equipamentos (estufas, banhos-maria, muflas, geladeiras etc.). O
mesmo procedimento deve ser realizado para outros parmetros crticos para os ensaios.
Apresentao dos resultados
Os certificados de anlise devem ser descritos em documentos contendo as informaes
solicitadas pelo cliente e necessrias interpretao dos mesmos, as referncias e valores de
referncia, quando definidos e todas as informaes requeridas pelo mtodo utilizado, a partir
das quais as interpretaes do resultado podem ser realizadas. Alm disso, devem constar: a
data do recebimento da amostra, a data de realizao do ensaio e as assinaturas e funes de
pelo menos dois responsveis pelo relatrio. Para preservar os direitos do laboratrio, aconselhvel que no relatrio constem uma ou mais das seguintes observaes: O laboratrio no
se responsabiliza pela amostragem; os resultados se referem somente amostra ensaiada e
este relatrio de anlise somente deve ser reproduzido por completo.
O relatrio de anlise apresentado deve ser claro, objetivo, preciso, sem rasuras e no
pode, em sua verso final, permanecer com campos em branco, para dificultar sua falsificao.
O documento deve apresentar identificao unvoca que assegure que cada pgina seja reconhecida como parte integrante do relatrio de ensaio e tenha, em seu final, uma clara identificao de trmino. Os resultados analticos devem ser acompanhados da incerteza estimada e
de suas unidades, de acordo com o Sistema Internacional.
Cuidados especiais devem ser tomados quando da entrega do resultado para terceiros ou
quando enviados por fax ou meio eletrnico. Somente em casos de alerta sanitrio ou de extrema urgncia podero ser utilizados estes meios, pois existe o risco de quebra de confidencialidade. Um procedimento escrito deve ser elaborado para estes casos, para evitar que isso ocorra.
Auditorias internas
Definio Segundo a NBR ISO 8402, a auditoria o exame sistemtico e independente para determinar se as atividades da qualidade e seus resultados esto de acordo com
as disposies planejadas, se estas foram efetivamente implementadas e se so adequadas
consecuo dos objetivos.
A realizao de auditorias internas requisito obrigatrio para o atendimento da
norma da qualidade. Para sua execuo, necessria a formao de uma equipe de auditores, capitaneada pelo auditor-lder, que responsvel por todas as fases da auditoria e
tambm deve participar da seleo dos outros membros da equipe auditora, preparar o
IAL - 59
Os dados devem ser registrados de forma sistemtica para que tendncias sejam detectveis e sanadas. Quando possvel deve ser aplicada tcnica estatstica para a anlise crtica dos
resultados. Este controle de qualidade pode ser interno ou externo.
O controle de qualidade interno pode ser realizado por meio de ensaios em replicata,
anlises utilizando-se material de referncia, comparaes intralaboratoriais, repeties do ensaio e amostra cega. Como o controle de qualidade externo, pode-se participar de ensaios de
proficincia, que tem como principais vantagens: verificao da capacidade tcnica, verificao de desempenho de metodologias, reagentes e equipamentos, tomadas de aes corretivas,
entre outros.
Anlise crtica pela alta administrao
Pelo menos uma vez por ano, e visando a melhoria contnua do sistema da qualidade,
deve ser realizada uma anlise crtica do sistema. Os principais responsveis por essa avaliao
so: a alta administrao e a gerncia da qualidade. Nesta ocasio so avaliados os seguintes e
principais indicadores:
resultados de ensaio de proficincia
auditorias internas
auditorias externas
reclamaes de clientes
sugestes de clientes
quantidade de anlises realizadas
aes corretivas
aes preventivas
nmero de treinamentos realizados
planejamento anual
sugestes de melhoria do sistema
principais no conformidades
principais fontes de investimento
opinies dos diretores
sugestes dos funcionrios
Estas reunies devem ser registradas, normalmente em forma de ata e as concluses
devem ser divulgadas e cumpridas.
IAL - 61
Referncias Bibliogrficas
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR ISO 9.000: Sistemas de gesto da qualidade Fundamentos e vocabulrio. Rio de Janeiro, 2000.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR ISO/IEC GUIA 2 1995
Normalizao e atividades relacionadas Vocabulrio geral - Vocabulrio Internacional de Metrologia. Rio de Janeiro, VIM, 1995.
INMETRO - DOQ-DQUAL - 007 - Orientaes sobre acordos de reconhecimento mtuo.
Abr. 2001.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS - NBR 10.012-1: Requisitos de
garantia da qualidade para equipamentos de medio. Nov. 1993.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 6023: Informao e documentao - Referncias - Elaborao. Rio de Janeiro, Ago. 2000.
INMETRO Vocabulrio internacional de termos fundamentais e gerais de metrologiaVIM. 2. ed., Braslia, SENAI/DN, 2000. 75p.
INMETRO - Vocabulrio de metrologia legal. 2. ed., Braslia, SENAI/DN, 2000. 27p.
REBLAS Procedimentos operacionais da REBLAS, agosto, 2001.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS ISO GUIA 30: Termos e definies relacionados com material de referncia. 2000..
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS ISO/IEC GUIA 30: Ensaios de
proficincia por comparaes interlaboratoriais. Parte 1: Dsenvolvimento e operao de programas de ensaios de proficincia. 1999.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS ABNT/ISO/IEC GUIA 2 Normalizao e atividades relacionadas Vocabulrio geral. 1998.
VALLE, B.; BICHO, G.G. ISO/IEC 17.025: A Nova norma para Laboratrios de Ensaio e Calibrao. Laboratrios & Controle de Processos, ano. 1, n. 5, abr. 2001.
Colaboradores:
Neus Sadocco Pascuet e Galdino Guttmann Bicho
62 - IAL
CAPTULO
II
GENERALIDADES
IAL - 63
64 - IAL
II
Captulo II - Generalidades
GENERALIDADES
Unidade SI
Nome
Metro
Quilograma
Segundo
Ampre
Kelvin
Mol
Candela
Newton
Joule
Pascal
Metro quadrado
Metro cbico
Mol por metro cbico
Grau Celsius
Volt
Smbolo
m
kg
s
A
K
mol
cd
N
J
Pa
m2
m3
mol/m3
C
V
IAL - 65
Prefixo
Yotta
Zetta
Exa
Peta
Tera
Giga
Mega
Quilo
Hecto
deca
Smbolo
Y
Z
E
P
T
G
M
k
h
da
Fator
10-1
10-2
10-3
10-6
10-9
10-12
10-15
10-18
10-21
10-24
Prefixo
deci
centi
mili
micro
nano
pico
femto
atto
zepto
yocto
Smbolo
d
c
m
m
n
p
f
a
z
y
1.
Tabela 1 Tabela perodica dos elementos, seus respectivos nmeros e pesos atmicos.
Elemento
Actnio
Smbolo
n
atmico
Peso
atmico
Ac
89
227
Elemento
Neodnio
Smbolo
n
atmico
Peso
atmico
Nd
60
144
Alumnio
Al
13
27
NenIo
Ne
10
20
Amercio
Am
95
243
Neptnio
Mp
93
237
Antimnio
Sb
51
122
Nquel
Ni
28
58,5
Argnio
Ar
18
40
Nibio
Nb
41
93
Arsnio
As
33
75
Nitrognio
14
Astatnio
At
85
210
Noblio
No
102
259
Brio
Ba
56
137
smio
Os
76
190
Berqulio
Bk
97
247
Oxignio
16
Berlio
Be
Paldio
Pd
46
106
Bismujto
Bi
83
209
Fsforo
15
31
Boro
11
Platina
Pt
78
195
Bromo
Br
35
80
Plutnio
Pu
94
244
66 - IAL
Captulo II - Generalidades
Smbolo
n
atmico
Peso
atmico
Cdmio
Cd
48
112
Clcio
Ca
20
Califrnio
Cf
Carbono
Elemento
Smbolo
n
atmico
Peso
atmico
Polnio
Po
84
209
40
Potssio
19
39
98
251
Praseodnio
Pr
59
141
12
Promcio
Pm
61
145
Elemento
Crio
Ce
58
140
Protactnio
Pa
91
231
Csio
Cs
55
133
Rdio
Ra
88
226
Cloro
Cl
17
35,5
Radnio
Rn
86
222
Cromo
Cr
24
52
Rnio
Re
75
186
Cobalto
Co
27
59
Rdio
Rh
45
103
Cobre
Cu
29
63,5
Rubdio
Rb
37
85,5
Crio
Cm
96
247
Rutnio
Ru
44
101
Disprsio
Dy
66
162,5
Samrio
Sm
62
150
Einstnio
Es
99
252
Escndio
Sc
21
45
rbio
Er
68
167
Selnio
Se
34
79
Eurpio
Eu
63
152
Silcio
Si
14
28
Frmio
Fm
100
257
Prata
Ag
47
108
Flor
19
Sdio
Na
11
23
Frncio
Fr
87
223
Estrncio
Sr
38
87,5
Gadolnio
Gd
64
157
Enxofre
16
32
Glio
Ga
31
70
Tantlio
Ta
73
181
Germnio
Ge
32
73
Tecncio
Tc
43
98
Ouro
Au
79
197
Telrio
Te
52
127,5
Hfnio
Hf
72
178,5
Trbio
Tb
65
159
Hlio
He
Tlio
Tl
81
204
Holmio
Ho
67
165
Trio
Th
90
232
Hidrognio
Tlio
Tm
69
169
ndio
In
49
115
Estanho
Sn
50
119
Iodo
53
127
Titnio
Ti
22
48
Irdio
Ir
77
192
Tungstnio
74
184
Ferro
Fe
26
56
Unilqudio
Unq
104
261
Kriptnio
Kr
36
84
Unilpntio
Unp
105
262
Lantnio
La
57
139
Unilhexio
Unh
106
263
Lawrncio
Lr
103
262
Unilseptio
Uns
107
262
Chumbo
Pb
82
207
Urnio
92
238
Ltio
Li
Vandio
23
51
IAL - 67
Smbolo
n
atmico
Peso
atmico
Lutcio
Lu
71
175
Magnsio
Mg
12
Mangans
Mn
Mendelvio
Md
Elemento
Smbolo
n
atmico
Peso
atmico
Xennio
Xe
54
131
24
Itrbio
Yb
70
173
25
55
Itrio
39
89
101
258
Zinco
Zn
30
65
Zircnio
Zr
40
91
Mercrio
Hg
80
200
Molibdnio
Mo
42
96
Elemento
Captulo II - Generalidades
Densidade
(kg/L)
1,84
1,19
1,42
1,69
1,05
0,90
Porcentagem
m/m
95 98
36,5 38,0
69,0 71,0
85,0
99,7
28 30
Captulo II - Generalidades
Siglas
a absortividade
A absorbncia
AAS espectrmetro de absoro atmica
AFM1 aflatoxina M1
A.O.A.C. Association of Official Analytical Chemists
atm atmosfera
CCD cromatografia em camada delgada
CI coluna de imunoafinidade
CLAE cromatografia lquida de alta eficincia
DAD detector de aranjo de diodos
DIC detector de ionizao de chama.
absortividade referente a absorbncia de uma soluo a 1% da espcie absorvente
num solvente adequado, em cubeta de 1 cm.
EDL electrodeless discharge lamp (lmpada de descarga sem eletrodo)
ELISA enzyme-linked immunisorbent assay
ETAAS espectrmetro de absoro atmica com forno de grafite
f fator de correo
FAAS espectrmetro de absoro atmica com chama
FAO Food and Agriculture Organization of the United Nations
FDA Food and Drug Administration
FID detector de ionizao de chama
GRAS generally recognized as safe
HCL hollow cathode lamp (lmpada de catodo oco)
ICUMSA International Commission for Uniform Methods of Sugar Analysis
ICP OES espectrmetro de emisso atmica com plasma de argnio
indutivamente acoplado
ISO International Organization for Standardization
IUPAC International Union of Pure and Applied Chemistry
m milimicron (10-6 mm)
NED alfa-naftiletilenodiamina
ng nanograma (10-9 g)
NIST National Institute of Standards and Technology
OTA ocratoxina A
PI padro interno
ppb partes por bilho (1/109)
ppm partes por milho (1/106)
Rf quociente entre as distncias percorridas simultaneamente desde o ponto de partida
at o centro de maior concentrao da mancha do soluto e at a frente da fase mvel - cromatogrfia em papel ou em camada delgada.
rpm rotaes por minuto
IAL - 71
Colaboradores
Neus Sadocco Pascuet e Odair Zenebon
72 - IAL
CAPTULO
III
COLHEITA DE
AMOSTRAS
IAL - 73
74 - IAL
III
COLHEITA DE AMOSTRAS
As amostras de alimentos devem ser colhidas segundo um plano particular de procedimentos. Sempre que possvel esse plano dever proporcionar amostras representativas
do lote. Um dos problemas mais freqentes a respeito da anlise bromatolgica a determinao do tamanho da amostra a ser colhida. Quando nenhuma instruo especfica
fornecida, a regra geral colher amostras correspondentes a
, sendo x igual ao nmero
de unidades do lote. Ordinariamente, quando se refere a grandes cargas, por exemplo, existentes em indstrias e armazns, devem ser colhidas no menos que 12 unidades e no mais
que 36, sendo que cada unidade dever ser proveniente de recipientes diferentes.
Amostragem para anlise fiscal e de controle
As amostras para anlise fiscal devem ser colhidas em triplicata: uma delas deixada em poder do detentor ou depositrio do produto para eventual percia de contraprova
e as outras duas so encaminhadas ao laboratrio, respectivamente, para anlise e percia
desempatadora, se necessrio. Quando a quantidade ou a natureza do alimento no permitir a colheita das amostras em triplicata, a anlise fiscal ser realizada em amostra nica. Os procedimentos para a realizao das anlises fiscais esto previstos em legislaes
especficas.
A anlise de controle efetuada no laboratrio aps o registro do alimento no
rgo competente de Vigilncia Sanitria e tambm para aqueles dispensados da obrigatoriedade de registro no Ministrio da Sade, quando de sua entrega ao consumo e serve
para provar a conformidade do produto com o seu respectivo padro de identidade e
qualidade. Na anlise de controle sero observadas as normas estabelecidas para a anlise
fiscal. A anlise de controle tambm realizada para a liberao de alimentos importados
em postos alfandegrios.
Acondicionamento
As amostras colhidas devero ser imediata e devidamente acondicionadas. Este
acondicionamento ser considerado adequado se for capaz de impedir qualquer alterao
na amostra. A escolha do tipo de acondicionamento ou do recipiente depende do estado
fsico do produto: lquido, slido ou semi-slido. Na escolha do acondicionamento dever ser levado em conta o tipo de anlise qual vai ser submetida. Assim, se a amostra se
destina a testes microbiolgicos, tornar-se- imprescindvel acondicion-la em recipiente
ou material de embalagem estril que impea a sua eventual contaminao do produto.
Os produtos industrializados podero ser colhidos em suas embalagens originais. Recomenda-se o uso de recipientes de vidro, loua e outras embalagens semelhantes para
gordura, frituras, produtos midos ou higroscpicos (carnes e outros). As amostras de
substncias lquidas so geralmente acondicionadas em frascos plsticos ou de vidro. Para
76 - IAL
para o analista, por exemplo: a data da colheita e motivo de apreenso; origem da mercadoria e data de sua produo ou aquisio; tipo e durao da armazenagem; nome e endereo do fabricante ou detentor; quantidade em estoque da mercadoria, aps a colheita
da amostra; os nmeros dos lacres das amostras colhidas; o tipo de exame necessrio ou
uma breve descrio do motivo que originou tal colheita. aconselhvel, tambm, fazer
uma descrio sucinta do local onde foi apreendida a amostra. No caso de alimentos perecveis que necessitem de refrigerao, fundamental mencionar a temperatura em que
se encontravam no momento da colheita.
Colheita de amostras de produtos no homogneos em grandes estoques
Quando tiver que ser exarado um laudo sobre produtos que no apresentem homogeneidade ou com tendncia a apresentar separao de fases, as amostras devero ser
tomadas em vrios pontos ou de vrios recipientes da partida. Para se obter uma amostra
que permita chegar a uma concluso da qualidade mdia de toda a partida (ou da parte
adequada da partida, a ser misturada), dever ser tomada precauo para que a amostra
(em volume significante em comparao com o volume da mercadoria a ser analisada)
seja semelhante, em qualidade, que seria obtida se retirada da quantidade total da mercadoria aps ser cuidadosamente misturada.
Quanto maior for a partida de mercadorias a serem testadas, para verificao de
sua qualidade mdia, tanto maior o nmero de recipientes individuais dos quais as pores devero ser retiradas. Essas sero depois perfeitamente misturadas e a quantidade de
amostra a ser remetida para anlise dever ser tirada da mistura resultante.
Quando se tratar de amostras de alimentos armazenados em sacos, barris, engradados ou qualquer grande recipiente (inclusive produtos em grandes parcelas, tais como
batatas, frutas e outros), ser, por vezes, necessrio esvaziar os recipientes, misturar bem e
considerar o todo para obter uma amostra realmente mdia.
No caso de grandes estoques de alimentos assim armazenados, mas que, presumivelmente, apresentam homogeneidade, ser necessrio tomar a amostra mdia de 1 recipiente, se o nmero de recipientes no for superior a 5, de 10% dos recipientes com um
mnimo de 5, se no excederem a 100; de 5%, com um mnimo de 10, se no excederem
a 200; de 3% com um mnimo de 25, se excederem a 2000 , e de 1% com um mnimo
de 50, se excederem a 2000. Um nmero de 5 amostras deve ser obtido de vrios pontos
da carga de um caminho ou de uma grande pilha de mercadoria, tomando-se as devidas
precaues para que unidades de diferentes tamanhos sejam reunidas proporcionalmente
composio da partida toda. Nos recipientes com produtos granulados (por exemplo:
78 - IAL
IAL - 79
for the Examination of Water and Wastewater. 19th ed. Washington D.C.:A.P.H.A.,
Chapter 3,1995, p.5.
CETESB - Companhia de Tecnologia de Saneamento Ambiental. Guia de coleta e preservao de amostras de gua. 1. ed., So Paulo, 1987. 150 p.
FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION OF THE UNITED NATIONS.
Manuals of food quality control. 5. Food inspection. Chapter 3, Rome:FAO/WHO,
1981. p. 23-43. (FAO Food and Nutrition paper 14/5 prov.).
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos
qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 4-9.
WEISS, H. V.; SHIPMAN, W. H.; GUTTMAN, M. A. effective storage of dilute mercury solutions in polyethylene. Anal. Chim. Acta, v. 81, p. 211-217, 1976.
Colaboradores
Alice Momoyo Sakuma; Maria Anita Scorsafava; Vera Regina Rossi Lemes; Odair Zenebon e
Sabria Aued Pimentel
82 - IAL
CAPTULO
IV
PROCEDIMENTOS E
DETERMINAES
GERAIS
IAL - 83
84 - IAL
IV
Pr-tratamento da amostra
86 - IAL
Procedimento Abra o recipiente e mea, com preciso de milmetros, a distncia compreendida entre o nvel superior do produto e o nvel da altura da tampa. Retire o contedo e
mea, com preciso de milmetros, a distncia compreendida entre o fundo do recipiente e
o nvel da altura da tampa.
Clculo
IAL - 87
88 - IAL
Material
Balana semi-analtica, banho-maria, esptula, elstico para papel, frasco Erlenmeyer de
125 mL, papel de filtro de 9 cm de dimetro e pipeta graduada de 1 mL.
Reagentes
Soluo de acetato de chumbo a 5% (m/v)
cido actico glacial
Soluo saturada de acetato de chumbo (alternativa)
Soluo de hidrxido de sdio a 10% (m/v)
Soluo de acetato de chumbo Prepare 100 mL de soluo de acetato de chumbo a 5%
(m/v). Adicione 1 mL cido actico. Agite vigorosamente. Conserve a soluo em frasco
de vidro mbar fechado.
Soluo de plumbito de sdio (alternativa) Prepare uma soluo saturada de acetato
de chumbo e adicione soluo de hidrxido de sdio a 10% at dissolver o precipitado.
Conserve a soluo em frasco de vidro mbar fechado.
Procedimento Transfira 10 g da amostra homogeneizada para um frasco Erlenmeyer
de 125 mL. Feche com dois discos sobrepostos de papel de filtro com auxlio de elstico.
Com uma pipeta, embeba a superfcie do papel com soluo de acetato de chumbo (ou
plumbito de sdio). Coloque o frasco em banho-maria de modo que o fundo do frasco
fique a 3 cm acima do nvel da gua fervente. Aquea por 10 minutos. O aparecimento de
mancha preta no papel de filtro em contato com os vapores indica a presena de gs sulfdrico. Considere em bom estado de conservao reao negativa as amostras que apresentarem uma reao de gs sulfdrico inferior produzida por 0,1 mg de Na2S.9H2O em
meio cido, que corresponde a 0,014 mg de H2S, nas condies do mtodo adotado.
Notas
Em lugar da soluo de acetato de chumbo pode-se usar a soluo de plumbito de sdio.
A reao de ber no se aplica no caso de alimentos muito condimentados, temperados
com alho, cebola e de conservas de carne e pescado que foram processadas em alta temperatura e baixa presso.
Em alguns casos, somente o conjunto desta e outras provas ser decisrio para uma avaliao do estado de conservao do produto.
IAL - 89
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 14-15.
005/IV Reao para amnia Prova de ber
O estado de conservao de alimentos proticos pode ser avaliado por meio da reao de
ber para amnia. A liberao de amnia indica o incio da degradao das protenas. A amnia, ao
reagir com o cido clordrico, forma cloreto de amnio (NH4Cl) sob a forma de vapores brancos.
Material
Provetas de 50 e 150 mL, balo volumtrico de 250 mL, tubos de ensaio de 25 mL e arame
de 20 cm de comprimento com extremidade recurvada tipo anzol.
Reagentes
cido clordrico
ter
lcool
Reagente de ber Em balo volumtrico de 250 mL, misture 50 mL de cido clordrico e
150 mL de lcool. Resfrie e complete o volume com ter.
Procedimento Transfira 5 mL do reagente de ber para um tubo de ensaio de 25 mL. Fixe
um pedao da amostra na extremidade do arame tipo anzol e introduza no tubo de ensaio
de modo que no toque nem nas paredes do tubo nem na superfcie do reagente. O aparecimento de fumaas brancas e espessas indica que o produto est em incio de decomposio.
Notas
Repita a prova com diferentes pores da amostra.
Em alguns casos somente o conjunto desta e outras provas ser decisrio para uma avaliao
do estado de conservao do produto.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 15.
90 - IAL
Ponto de fuso
81 - 83C
114 - 116C
134 - 136C
164,5 - 166,5C
187 - 190C
234 - 237C
Material
O aparelho para determinao do ponto de fuso consiste essencialmente de um recipiente
de vidro de capacidade apropriada para um banho de lquido incolor; um agitador, que
poder ser um basto de vidro, convenientemente dobrado duas vezes em ngulo reto; um
termmetro cuidadosamente calibrado e controlado de (-10 a 365)C (em lugar deste termmetro nico, pode-se usar, com vantagens, uma coleo de termmetros de escala curta,
cada um abrangendo um intervalo de 50C); um tubo capilar de 9 cm de altura, (0,9 a 1,1) mm
de dimetro interno, e paredes de espessura entre 0,2 a 0,3 mm; uma lente de aumento (cerca
de dez vezes) e uma fonte de calor, eltrica ou chama direta.
Os lquidos empregados no banho so escolhidos, de acordo com a temperatura a ser determinada, pela Tabela 2.
Tabela 2 Relao de lquidos empregados em banhos para determinao do ponto de
fuso
Temperatura
at 100C
at 150C
at 250C
at 400C
Lquidos
gua
glicerol
parafina lquida
silicone
IAL - 91
O uso de silicone lquido torna mais simples esta escolha, uma vez que ele cobre todo o
intervalo da temperatura acima.
Procedimento A substncia reduzida a p fino e seco no vcuo ou em estufa abaixo do
ponto de fuso. introduzida, em pequenas pores, no tubo capilar fechado numa das
suas extremidades. Depois de colocar cada poro, insira o capilar com a ponta fechada para
baixo dentro de um tubo de vidro de 50 cm, aberto nas duas extremidades e apoiado verticalmente de encontro a uma superfcie dura. Repita esta operao vrias vezes at obter
uma coluna compacta de cerca de 2 mm da substncia. Aquea o banho com o lquido
apropriado at que sua temperatura esteja 30C abaixo do ponto de fuso da substncia
em exame. Introduza, ento, o capilar preso ao termmetro com um fio de platina ou
um anel de borracha, ou por simples adeso de ambos, no lquido do banho, ficando a
substncia no capilar na altura do bulbo do termmetro e este totalmente coberto pelo
banho e a 2 cm do fundo do recipiente. Continue o aquecimento de modo a ter um
grau de aumento de temperatura por minuto. A leitura direta. Denomina-se incio
de fuso quando o slido inicia a transformao para o estado lquido e final quando
se torna inteiramente lquido. Estas duas temperaturas do o intervalo de fuso da
substncia.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 16-17.
007/IV Ponto de fuso Substncias no facilmente reduzveis a p
Procedimento O material cuidadosamente fundido na temperatura mais baixa possvel
e introduzido numa altura de 10 mm no capilar aberto. Deixe o capilar a 0C por duas horas ou a 10C por 24 horas. Prenda o capilar ao termmetro e proceda como indicado em
006/IV, verificando se o nvel da substncia est a 10 mm abaixo do nvel do banho. Aquea
como indicado em 006/IV, at 50C abaixo do ponto esperado e, depois, numa velocidade
de meio grau por minuto.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985.
p. 17-18.
92 - IAL
IAL - 93
ndice de
refrao
Temperatura C
ndice de refrao
15
1,3334
21
1,3329
16
1,3333
22
1,3328
17
1,3332
23
1,3327
18
1,3332
24
1,3326
19
1,3331
25
1,3325
20
1,3330
94 - IAL
0,001
0,002
0,003
0,004
0,005
0,006
0,007
0,008
0,009
1,33
0,000
0,697
1,393
2,085
2,774
3,459
4,140
1,34
4,818
5,492
6,163
6,831
7,495
8,155
8,812
9,466
10,117
10,765
1,35
11,409
12,050
12,687
13,322
13,953
14,582
15,207
15,830
16,449
17,065
1,36
17,679
18,289
18,897
19,502
20,104
20,704
21,300
21,894
22,485
23,074
1,37
23,660
24,243
24,824
25,407
25,987
26,565
27,140
27,713
28,282
28,849
1,38
29,413
29,975
30,534
31,090
31,644
32,195
32,743
33,289
33,832
34,373
1,39
34,912
35,448
35,982
36,513
37,042
37,568
38,092
38,614
39,134
39,651
1,40
40,166
40,679
41,190
41,698
42,204
42,708
43,210
43,710
44,208
44,704
1,41
45,197
45,688
46,176
46,663
47,147
47,630
48,110
48,588
49,064
49,539
1,42
50,011
50,481
50,949
51,416
51,880
52,343
52,804
53,263
53,720
54,176
1,43
54,629
55,091
55,550
56,008
56,464
56,918
57,371
57,822
58,271
58,719
1,44
59,165
59,609
60,051
60,493
60,932
61,370
61,807
62,241
62,675
63,107
1,45
63,537
63,966
64,394
64,820
65,245
65,669
66,091
66,512
66,931
67,349
1,46
67,766
68,182
68,596
69,009
69,421
69,832
70,242
70,650
71,058
71,464
1,47
71,869
72,273
72,676
73,078
73,479
73,879
74,278
74,675
75,072
75,469
1,48
75,864
76,258
76,651
77,044
77,435
77,826
78,216
78,605
78,994
79,381
1,49
79,768
80,154
80,540
80,925
IAL - 95
96 - IAL
0,50
0,46
0,42
0,37
0,33
0,27
0,22
0,17
0,12
0,06
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
0,06
0,13
0,19
0,26
0,33
0,40
0,48
0,56
0,64
0,72
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
Temp.
C
0,74
0,66
0,57
0,50
0,42
0,35
0,27
0,20
0,13
0,07
0,06
0,13
0,18
0,24
0,29
0,35
0,40
0,45
0,49
0,54
0,77
0,68
0,60
0,52
0,43
0,36
0,28
0,21
0,14
0,07
0,06
0,13
0,19
0,25
0,31
0,37
0,42
0,48
0,53
0,58
10
0,78
0,69
0,61
0,53
0,44
0,37
0,29
0,22
0,14
0,07
0,07
0,14
0,20
0,26
0,33
0,39
0,44
0,50
0,55
0,61
15
0,79
0,71
0,62
0,54
0,45
0,38
0,30
0,22
0,15
0,07
0,07
0,14
0,21
0,27
0,34
0,40
0,46
0,52
0,58
0,64
20
30
35
40
0,68
0,07
0,14
0,21
0,28
0,35
0,42
0,49
0,56
0,62
0,70
0,08
0,15
0,22
0,29
0,36
0,43
0,50
0,57
0,64
0,72
0,08
0,15
0,22
0,30
0,37
0,44
0,51
0,58
0,65
0,08
0,15
0,23
0,30
0,37
0,45
0,52
0,59
0,66
0,73
45
0,80
0,72
0,63
0,55
0,46
0,38
0,30
0,23
0,15
0,08
0,80
0,72
0,63
0,55
0,47
0,39
0,31
0,23
0,15
0,08
0,81
0,73
0,64
0,56
0,48
0,40
0,31
0,23
0,15
0,08
0,81
0,73
0,64
0,56
0,48
0,40
0,31
0,23
0,15
0,08
0,81
0,73
0,64
0,56
0,48
0,40
0,31
0,24
0,16
0,08
0,07
0,14
0,21
0,28
0,34
0,41
0,48
0,54
0,60
0,66
25
0,81
0,73
0,64
0,56
0,48
0,40
0,31
0,24
0,16
0,08
0,08
0,15
0,23
0,30
0,38
0,45
0,53
0,60
0,67
0,74
50
0,81
0,73
0,64
0,56
0,48
0,40
0,32
0,24
0,16
0,08
0,08
0,16
0,23
0,31
0,39
0,46
0,54
0,61
0,68
0,75
55
0,81
0,73
0,64
0,56
0,48
0,40
0,32
0,24
0,16
0,08
0,08
0,16
0,23
0,31
0,39
0,46
0,54
0,61
0,69
0,76
60
0,81
0,73
0,64
0,56
0,48
0,40
0,32
0,24
0,16
0,08
0,08
0,16
0,24
0,32
0,40
0,47
0,55
0,63
0,70
0,78
65
0,81
0,73
0,64
0,56
0,48
0,40
0,32
0,24
0,16
0,08
0,08
0,16
0,24
0,32
0,40
0,48
0,55
0,63
0,71
0,79
70
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz.
v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP,
1985. p. 18-21.
011/IV Densidade
A determinao da densidade , geralmente, feita em anlise de alimentos
que se apresentam no estado lquido. Pode ser medida por vrios aparelhos, sendo
os seguintes os mais usados: picnmetros e densmetros convencionais e digitais.
Os picnmetros do resultados precisos e so construdos e graduados de modo a
permitir a pesagem de volumes exatamente iguais de lquidos, a uma dada temperatura. Da relao destes pesos e volumes resulta a densidade dos mesmos
temperatura da determinao. Usando gua como lquido de referncia, tem-se
a densidade relativa gua ou peso especfico. Os densmetros, quase sempre de
forma cilndrica com um bulbo central terminando em haste fina e graduada, so
construdos de modo que o ponto de afloramento indique, sobre a escala, a densidade do lquido no qual est imerso o aparelho. Existem vrios tipos, com valores
diversos, em funo da sensibilidade exigida para sua aplicao. A leitura deve ser
feita sempre abaixo do menisco.
As diferentes escalas usadas pelos densmetros podem dar a leitura direta
da densidade ou graus de uma escala arbitrria como: Brix, Gay-Lussac, Baum,
Quevenne, correspondentes aos sacarmetros, alcometros e lactodensmetros, h
tanto tempo utilizados em bromatologia. Os graus Brix referem-se porcentagem
em peso de sacarose em soluo a 20C. Os graus Gay-Lussac referem-se porcentagem em volume de lcool em gua. Os graus Baum foram obtidos de modo emprico: para lquidos mais densos que a gua, o zero da escala corresponde gua a
4C e o grau 15 a uma soluo de 15 g de cloreto de sdio em 85 g de gua. Para os
lquidos menos densos que a gua, o zero da escala foi obtido com uma soluo de
10 g de cloreto de sdio em 90 g de gua e o grau 10, com gua. Os lactodensmetros so, especialmente, calibrados de modo a abranger as variaes de densidade
de 1,025 a 1,035, mas apenas os 2 ltimos algarismos so marcados na escala e,
portanto, as leituras so de (25 a 35)Quevenne.
Procedimento Dependendo do tipo do alimento, proceda conforme descrito no
captulo correspondente deste livro.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz.
v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP,
1985. p. 21.
IAL - 97
98 - IAL
IAL - 99
Com este reagente podem ser determinadas pequenas quantidades de gua. Embora o mtodo no seja universalmente aplicvel, as limitaes de dosagens diretas podem
ser contornadas pelo tratamento preliminar adequado da amostra.
Na presena de gua, o dixido de enxofre oxidado pelo iodo e o ponto final da
reao determinado por bi-amperometria (dead stop). Quando no houver mais gua
na amostra, um excesso de iodo livre agir como despolarizador, causando aumento na
corrente.
O mtodo limita-se aos casos em que a amostra a ser analisada no reaja com os
componentes do reagente de Karl Fischer ou com o iodeto de hidrognio formado durante a reao com a gua. Os seguintes compostos interferem na titulao: oxidantes
como cromatos/dicromatos, sais de cobre (II) e de ferro (III), xidos superiores e perxidos; redutores como: tiossulfatos, sais de estanho (II) e sulfitos; compostos capazes
de formar gua com os componentes do reagente de Karl Fischer, como por exemplo,
xidos bsicos e sais de oxicidos fracos; aldedos, porque formam bissulfito; cetonas,
porque reagem com o metanol para produzir cetal.
Material
Titulador de Karl Fischer, agitador magntico, eletrodo duplo de platina e microsseringa de 25 L.
Reagentes
Reagente de Karl Fischer, isento de piridina
Metanol com no mximo 0,005% de gua
Tartarato de sdio dihidratado (padro volumtrico para padronizao do reagente de Karl Fischer,
contendo 15,66 0,05% H2O)
Procedimento O reagente de Karl Fischer deve ser padronizado no incio de uma srie de ensaios,
de duas formas, utilizando gua ou tartarato de sdio dihidratado como padres, conforme descrito
abaixo.
Padronizao do reagente de Karl Fischer com gua Coloque uma quantidade de metanol na cela de titulao suficiente para cobrir os eletrodos. Para eliminar a gua contida
no solvente, pr-titule o metanol com o reagente de Karl Fischer, sob agitao, at o ponto
final, seguindo as instrues do manual do aparelho. Em seguida, com o auxlio de uma
100 - IAL
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 23-5.
MENDHAM, J.; DENNEY, R.C.; BARNES, J.D.; THOMAS, H.J.K. VOGEL.
Anlise Qumica Quantitativa. Rio de Janeiro: Livros Tcnicos e Cientficos Editora S/A,
2002. p. 254-255.
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chemicals Codex. 4th ed.
Washington D.C.: National Academic Press, 1996. p 742-754.
015/IV Resduo seco
Nos produtos lquidos ou de alto teor de umidade, costuma-se considerar o resduo
seco (slidos totais) obtido para a avaliao dos slidos existentes no produto.
Material
Pipeta de 10 mL, cpsula de platina ou de porcelana de 8,5 cm de dimetro, estufa, dessecador com slica gel, banho-maria, esptula e pina de metal.
Procedimento Transfira, com auxlio de uma pipeta, 10 mL de amostra, se a mesma
for lquida, ou pese 10 g, se a amostra for slida, para uma cpsula previamente aquecida
a 105C por 2 horas ou a 70C por 6 horas, sob presso reduzida 100 mm de mercrio (13,3 kPa), resfriada em dessecador at a temperatura ambiente e pesada. Evapore em banho-maria.
Aquea em estufa a 105C por 2 horas ou a 70C por 6 horas, sob presso reduzida 100 mm de mercrio
(13,3 kPa). Esfrie em dessecador at a temperatura ambiente e pese. Repita as operaes de aquecimento por 30 minutos e resfriamento at peso constante.
Nota: podem ser utilizadas cpsulas de outros metais resistentes ao calor desde que as cinzas
obtidas no sejam empregadas para posterior anlise de metais.
Clculo
N = n de g de resduo seco
A = n de mL da amostra (ou n de gramas da amostra)
102 - IAL
Como alternativa, o resduo seco pode ser calculado subtraindo-se de 100 g da amostra o
nmero de g de umidade por cento. Considere a diferena como o n de g do resduo
seco por cento.
Clculo
100 - A = resduo seco por cento m/m
A = n de g de umidade por cento
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 25.
016/IV Acidez
A determinao de acidez pode fornecer um dado valioso na apreciao do estado de conservao de um produto alimentcio. Um processo de decomposio,seja por hidrlise, oxidao
ou fermentao, altera quase sempre a concentrao dos ons de hidrognio. Os mtodos de determinao da acidez podem ser os que avaliam a acidez titulvel ou fornecem a concentrao de
ons de hidrognio livres, por meio do pH. Os mtodos que avaliam a acidez titulvel resumem-se
em titular com solues de lcali padro a acidez do produto ou de solues aquosas ou alcolicas
do produto e, em certos casos, os cidos graxos obtidos dos lipdios. Pode ser expressa em mL de
soluo molar por cento ou em gramas do componente cido principal.
Material
Proveta de 50 mL, frasco Erlenmeyer de 125 mL, bureta de 25 mL, balana analtica, esptula metlica e pipetas volumtricas de 1 e 10 mL.
Reagentes
Soluo fenolftalena
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 M ou 0,01 M
Procedimento Pese de 1 a 5 g ou pipete de 1 a 10 mL da amostra, transfira para um frasco
Erlenmeyer de 125 mL com o auxlio de 50 mL de gua. Adicione de 2 a 4 gotas da soluo
fenolftalena e titule com soluo de hidrxido de sdio 0,1 ou 0,01 M, at colorao rsea.
IAL - 103
104 - IAL
N = n de g de cinzas
P = n de g da amostra
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 27-28.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 900.02). Arlington:
A.O.A.C., 1996 chapter 44. p. 3.
019/IV Cinzas sulfatizadas
A sulfatizao das cinzas reduz perdas por volatilizao, pois transforma substncias
volteis em sulfatos mais fixos. Neste caso, a composio das cinzas no depende tanto da
temperatura de calcinao.
Material
Cpsula de platina ou de porcelana de 50 mL, banho-maria, estufa e dessecador com cloreto
de clcio anidro ou slica gel e mufla.
Reagente
cido sulfrico a 10%, v/v
106 - IAL
N = n de g de cinzas sulfatizadas
P = n de g da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 28.
020/IV Cinzas insolveis em gua
Material
Proveta de 50 mL, funil de vidro de 5 cm de dimetro, estufa, mufla, basto de vidro, dessecador com cloreto de clcio anidro ou slica gel e chapa eltrica.
Procedimento Adicione 30 mL de gua cpsula contendo as cinzas obtidas segundo a
tcnica indicada em 018/IV. Agite com um basto de vidro. Aquea por 15 minutos em
banho-maria. Filtre em papel de filtro de cinzas conhecidas. Lave a cpsula, o filtro e o
basto de vidro com 100 mL de gua quente. Receba o filtrado e as guas de lavagem em
um frasco Erlenmeyer de 250 mL. Reserve para a determinao 023/IV. Transfira o resduo
com o papel de filtro para a mesma cpsula em que foi feita a incinerao. Seque em estufa a
105C. Carbonize em chapa eltrica. Incinere em mufla a 550C. Esfrie em dessecador com
cloreto de clcio anidro ou slica gel. Pese. Repita as operaes de aquecimento (30 minutos
na mufla) e resfriamento (1 hora no dessecador) at peso constante. Reserve o resduo para
a determinao de alcalinidade das cinzas insolveis em gua.
IAL - 107
Clculo
108 - IAL
IAL - 109
Agite com basto de vidro. Filtre em papel de filtro. Lave a cpsula e o filtro com gua quente at no dar mais reao cida. Transfira o papel de filtro contendo o resduo para a mesma
cpsula em que foi feita a incinerao. Seque em estufa a 105C por uma hora. Carbonize o
papel cuidadosamente, incinere em mufla a 550C. Resfrie em dessecador at a temperatura
ambiente. Pese. Repita as operaes de aquecimento e resfriamento at peso constante.
Clculo
N = n de g de cinzas insolveis em cido clordrico a 10%
P = n de g da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 31.
025/IV Cinzas solveis em cido clordrico a 10% v/v
Procedimento Subtraia do n de g de cinzas por cento (018/IV) o n de g de cinzas insolveis em cido clordrico a 10% v/v (024/IV). Considere a diferena como cinzas solveis
em cido clordrico a 10% v/v, por cento m/m
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985, p. 31
026/IV Sulfatos pelo mtodo gravimtrico
Material
Proveta de 50 mL, balo volumtrico de 100 mL, pipeta de 50 mL, bquer de 250 mL, cadinho de porcelana, mufla, dessecador com cloreto de clcio anidro ou slica gel, papel de filtro
com cinzas conhecidas, basto de vidro e bico Bnsen.
Reagentes
cido clordrico (1+1)
Soluo de cloreto de brio a 5% m/v
110 - IAL
Procedimento Dissolva as cinzas obtidas em 018/IV com cido clordrico (1+1). Adicione
20 mL de gua. Filtre. Lave a cpsula e o filtro com 50 mL de gua. Receba o filtrado e as
guas de lavagem em um balo volumtrico de 100 mL. Complete o volume com gua e
transfira, com auxlio de uma pipeta, 50 mL do filtrado para um bquer de 250 mL. Aquea
ebulio. Adicione s gotas, uma soluo aquecida de cloreto de brio a 5% at completa
precipitao. Aquea em banho-maria por 1 hora. Deixe em repouso por 12 horas. Filtre em
papel de filtro de cinzas conhecidas. Lave o filtro at que 2 mL de filtrado no dem reao
de on cloreto. Transfira o papel de filtro com o precipitado para um cadinho de porcelana
previamente aquecido em mufla a 550C por 1 hora, resfriado em dessecador com cloreto
de clcio anidro at a temperatura ambiente e pesado. Carbonize em bico de Bnsen com
chama baixa. Aquea em mufla a 550C. Resfrie e pese. Repita as operaes de aquecimento
e resfriamento at peso constante.
Clculo
N = n de g de sulfato de brio
P = n de g da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 34-35.
027/IV Sulfatos por titulao com EDTA
Material
Pipetas de 5 e 25 mL, proveta e bureta de 25 mL.
Reagentes
Acido clordrico
lcool
Cloreto de brio 0,1 M
EDTA (sal dissdico do cido etilenodiaminotetractico) 0,1 M
Hidrxido de amnio
Metanol
IAL - 111
Soluo de prpura de ftalena Pese 0,1 g prpura de ftalena, adicione gua e hidrxido
de amnio at dissoluo do sal e complete o volume at 100 mL com gua.
Procedimento Acidule fracamente a soluo contendo at 0,2 g de on sulfato, com cido
clordrico e aquea at ebulio. Adicione 25 mL de cloreto de brio 0,1 M, aquea novamente at ebulio e deixe em banho-maria cerca de 15 minutos. Esfrie a soluo e adicione
igual volume de metanol ou lcool e 5 mL de soluo de hidrxido de amnio. Junte 2-3
gotas de soluo de prpura de ftalena e titule o excesso de brio com soluo de EDTA 0,1
M at viragem do violeta ao verde-amarelado.
Clculo
IAL - 113
Soluo de molibdato de amnio Misture lentamente as solues A e B e deixe em repouso por 48 horas. Filtre antes de usar.
Procedimento Pese 5 g da amostra em uma cpsula de porcelana de 100 mL. Adicione 10
mL da soluo de acetato de magnsio. Evapore at a secagem em banho-maria. Carbonize
em bico de Bnsen. Incinere em mufla a 550C. Esfrie. Dissolva as cinzas com cido clordrico (1+2). Transfira para um bquer de 400 mL, com auxlio de 80 mL de gua. Alcalinize
com hidrxido de amnio (1+1). Adicione 10 g de nitrato de amnio. Acidule com cido
ntrico (1+1). Adicione soluo de molibdato de amnio at completa precipitao. Aquea
por uma hora em banho de gua a (40-45)C, agitando freqentemente com um basto de
vidro. Esfrie, filtre e lave o bquer, o basto de vidro e o filtro com gua at que o filtrado
no tenha reao cida. Transfira o papel de filtro com o precipitado para o mesmo bquer
em que foi feita a precipitao. Dissolva o precipitado em soluo de hidrxido de sdio 0,2
M, medido em uma bureta. Adicione duas gotas do indicador fenolftalena. Titule o excesso
de hidrxido de sdio com cido clordrico 0,2 M.
Clculo
cerca de 300 mL de gua quente e filtre, se necessrio. Misture as duas solues, adicione
140 mL de cido ntrico e dilua para um litro. Este reativo estvel por trs meses.
Soluo-estoque de fosfato Pese 0,9587 g de fosfato cido de potssio, seco a 105C e
complete o volume a 500 mL com gua.
Soluo-padro de fosfato Pipete 50 mL da soluo-estoque de fosfato e complete o volume a 250 mL com gua. Um mL desta soluo corresponde a 0,2 mg de P2O5.
Procedimento Dissolva as cinzas obtidas de 5 g da amostra em cido clordrico (1+2),
transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Pipete uma
alquota (que deve ser proporcional quantidade de fosfato presente na amostra) em um
balo volumtrico de 100 mL. Adicione 25 mL do reagente vanado-molibdato de amnio
e complete o volume com gua at 100 mL. Homogeneze e espere 10 minutos para fazer
a leitura a 420 nm. Determine a quantidade de fosfato correspondente, usando a curvapadro previamente estabelecida ou o valor da absortividade.
Curva-padro Em uma srie de bales volumtricos de 100 mL, mea volumes de soluopadro contendo valores de 5 a 6,2 mg de P2O5. Quando for usado um espectrofotmetro,
utilize volumes de soluo-padro de fosfato contendo de 0,2 a 2,0 mg de P2O5. Adicione
25 mL do reagente vanado-molibdato de amnio a cada balo. Complete o volume com
gua. A temperatura da gua mais o reagente deve ser 20C. Homogeneze e espere 10
minutos. Faa leitura a 420 nm, usando como branco 25 mL de vanado-molibdato de
amnio, completando com gua at 100 mL.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 33-34.
Lipdios
Os lipdios so compostos orgnicos altamente energticos, contm cidos graxos
essenciais ao organismo e atuam como transportadores das vitaminas lipossolveis. Os lipdios so substncias insolveis em gua, solveis em solventes orgnicos, tais como ter,
clorofrmio e acetona, dentre outros. Estes so classificados em: simples (leos e gorduras),
compostos (fosfolipdios, ceras etc.) e derivados ( cidos graxos, esteris). Os leos e gorduras diferem entre si apenas na sua aparncia fsica, sendo que temperatura ambiente os
leos apresentam aspecto lquido e as gorduras, pastoso ou slido.
116 - IAL
A determinao de lipdios em alimentos feita, na maioria dos casos, pela extrao com solventes, por exemplo, ter. Quase sempre se torna mais simples fazer uma
extrao contnua em aparelho do tipo Soxhlet, seguida da remoo por evaporao ou
destilao do solvente empregado. O resduo obtido no constitudo unicamente por
lipdios, mas por todos os compostos que, nas condies da determinao, possam ser
extrados pelo solvente. Estes conjuntos incluem os cidos graxos livres, steres de cidos
graxos, as lecitinas, as ceras, os carotenides, a clorofila e outros pigmentos, alm dos esteris, fosfatdios, vitaminas A e D, leos essenciais etc., mas em quantidades relativamente
pequenas, que no chegam a representar uma diferena significativa na determinao.
Nos produtos em que estas concentraes se tornam maiores, a determinao ter a denominao mais adequada de extrato etreo. Uma extrao completa se torna difcil em
produtos contendo alta proporo de acares, de protenas e umidade.
Em certos casos, podem ser aplicados outros mtodos na determinao dos lipdios,
tais como: a extrao com solvente a frio (mtodo de Bligh-Dyer ou Folch), hidrlise cida
(mtodo de Gerber ou Stoldt- Weibull) ou alcalina (mtodo Rose-Gotllieb-Mojonnier).
032/IV Lipdios ou extrato etreo Extrao direta em Soxhlet
Material
Aparelho extrator de Soxhlet, bateria de aquecimento com refrigerador de bolas, balana
analtica, estufa, cartucho de Soxhlet ou papel de filtro de 12 cm de dimetro, balo de
fundo chato de 250 a 300 mL com boca esmerilhada, l desengordurada, algodo, esptula
e dessecador com slica gel.
Reagente
ter
Procedimento Pese 2 a 5 g da amostra em cartucho de Soxhlet ou em papel de filtro e
amarre com fio de l previamente desengordurado. No caso de amostras lquidas, pipete o
volume desejado, esgote em uma poro de algodo sobre um papel de filtro duplo e coloque para secar em uma estufa a 105C por uma hora. Transfira o cartucho ou o papel de
filtro amarrado para o aparelho extrator tipo Soxhlet. Acople o extrator ao balo de fundo
chato previamente tarado a 105C. Adicione ter em quantidade suficiente para um Soxhlet
e meio. Adapte a um refrigerador de bolas. Mantenha, sob aquecimento em chapa eltrica,
extrao contnua por 8 (quatro a cinco gotas por segundo) ou 16 horas (duas a trs gotas
por segundo). Retire o cartucho ou o papel de filtro amarrado, destile o ter e transfira o
balo com o resduo extrado para uma estufa a 105C, mantendo por cerca de uma hora.
Resfrie em dessecador at a temperatura ambiente. Pese e repita as operaes de aquecimenIAL - 117
N = n de gramas de lipdios
P = n de gramas da amostra
Nota: no caso de produtos contendo alta proporo de carboidratos, pese a amostra sob
papel de filtro e lave com cinco pores de 20 mL de gua. Coloque em estufa a 105C por
uma hora para secagem e proceda a extrao conforme acima descrito.
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 42-43.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of
analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 920.39,C).
Arlington: A.O.A.C., 1995, chapter 33. p. 10-12
033/IV Lipdios ou extrato etreo com hidrlise cida prvia Mtodo A
Material
Aparelho extrator de Soxhlet, bateria de aquecimento com refrigerador de bolas, esptula,
pina, balana analtica, estufa, cartucho de Soxhlet ou papel de filtro de 12 cm de dimetro, balo de fundo chato de (250-300) mL com boca esmerilhada, frasco Erlenmeyer de
250 mL com boca esmerilhada, condensador longo, vidro de relgio e papel indicador de
pH.
Reagentes
ter de petrleo
cido clordrico 3 M
Areia diatomcea
Procedimento Pese 10 g da amostra homogeneizada. Transfira para um frasco Erlenmeyer de 250 mL com boca esmerilhada. Adicione 100 mL de cido clordrico 3 M. Acople
118 - IAL
N = n de gramas de lipdios
P = n de gramas da amostra
Referncia bibliogrfica
U.K. FEEDING STUFFS (SAMPLING AND ANALYSIS) REGULATIONS. The
determination of oil in feeding stuffs n 1119. 1982, appendix I. p. 9-11.
034/IV Lipdios ou extrato etreo com hidrlise cida prvia Mtodo B
Material
Balana analtica, aparelho extrator de Soxhlet, bateria de aquecimento com refrigerador de
bolas, chapa eltrica, estufa, esptula, bqueres de 100, 250 e 500 mL, proveta de 100 mL,
prolas de vidro ou cacos de porcelana, vidro de relgio, frasco Erlenmeyer de 500 mL, funil
de vidro, papel de filtro, cartucho de Soxhlet, papel indicador de pH, balo de fundo chato
com boca esmerilhada de 300 mL, pina e dessecador com slica gel.
IAL - 119
Reagentes
cido clordrico
ter petrleo
Soluo de nitrato de prata 0,1 M
Soluo de HCl 4 M (1:2) Dilua 100 mL do cido clordrico com 200 mL de gua e
misture.
Procedimento Pese 5 a 10 g da amostra em um bquer de 100 mL. Transfira para um
bquer de 500 mL, usando 100 mL de gua quente. Adicione, com cuidado 60 mL de
cido clordrico e algumas prolas de vidro ou cacos de porcelana. Cubra o bquer com
um vidro de relgio, coloque em uma chapa eltrica e aquea at a ebulio, mantendo
durante 30 minutos. Adicione 160 mL de gua quente sobre a soluo da amostra, lavando o vidro de relgio. Filtre a soluo em papel de filtro previamente umedecido. Lave
vrias vezes o bquer e o resduo do papel de filtro, cuidadosamente com gua quente,
at que o filtrado exiba reao neutra (teste com papel indicador de pH) ou ausncia de
cloreto (utilize soluo de nitrato de prata 0,1 M). Coloque o papel de filtro contendo
o resduo sobre um outro papel de filtro seco em um vidro de relgio e leve estufa a
105C para a secagem. Aps a secagem, faa um cartucho com os papis, usando o externo para envolver o que contm a amostra. Transfira o cartucho para o aparelho extrator
tipo Soxhlet. Acople o extrator ao balo de fundo chato, previamente tarado a 105C.
Adicione ter de petrleo em quantidade suficiente para um Soxhlet e meio. Acople em
um refrigerador de bolas. Mantenha, sob aquecimento em chapa eltrica, a extrao por
4 horas. Retire o cartucho e destile o ter. Transfira o balo com o resduo extrado para
uma estufa a 105C, mantendo por cerca de uma hora. Resfrie em dessecador at a temperatura ambiente. Pese. Repita as operaes de aquecimento por 30 minutos na estufa e
resfriamento at peso constante.
Nota: no caso da hidrlise cida pode-se optar, alternativamente, pelo seguinte procedimento: pese diretamente a amostra em um bquer de 250 mL, adicione 50 mL de soluo
de cido clordrico 4 M e continue como descrito acima a partir de algumas prolas de
vidro.
Clculo
N = n de g de lipdios
P = n de g da amostra
120 - IAL
Referncia bibliogrfica
INTERNATIONAL STARDARD ORGANIZATION. ISO 1443: Meat and meat
products - determination of total fat content. 1973.
035/IV Extrato alcolico
um tipo de extrao em que o solvente empregado o lcool. O resduo obtido
chamado de extrato alcolico o qual, nos produtos ricos em leos volteis, essncias etc.,
representa um dado precioso na avaliao destes ltimos. Como toda extrao com solventes, ela poder ser feita diretamente por simples percolao ou em aparelhos de extrao
contnua.
Material
Bqueres de 50 e 100 mL, balo volumtrico de 100 mL, proveta de 100 mL, funil de 5
cm de dimetro, papel de filtro, frasco Erlenmeyer de 125 mL, pipeta de 50 mL, estufa,
dessecador com slica gel, balana analtica, banho-maria, esptula e pina.
Reagente
lcool
Procedimento Pese 2 g da amostra em um bquer de 50 mL. Transfira para um balo
volumtrico de 100 mL, com auxlio de 80 mL de lcool. Agite, com intervalos de 30 minutos, por 4 horas. Deixe em repouso por 16 horas. Complete o volume com lcool. Filtre
em papel de filtro seco. Receba o filtrado em um frasco Erlenmeyer. Transfira, com auxlio
de uma pipeta, 50 mL do filtrado para um bquer de 100 mL, previamente tarado. Coloque
o bquer em banho-maria at completa evaporao do solvente. Aquea em estufa a 105C
por 1 hora, resfrie em dessecador temperatura ambiente e pese. Repita a operao at peso
constante.
Clculo
IAL - 121
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 43-44.
Protdios
A determinao de protdios baseia-se na determinao de nitrognio, geralmente
feita pelo processo de digesto Kjeldahl. Este mtodo, idealizado em 1883, tem sofrido
numerosas modificaes e adaptaes, porm sempre se baseia em trs etapas: digesto,
destilao e titulao. A matria orgnica decomposta e o nitrognio existente finalmente
transformado em amnia. Sendo o contedo de nitrognio das diferentes protenas aproximadamente 16%, introduz-se o fator emprico 6,25 para transformar o nmero de g de
nitrognio encontrado em nmero de g de protdios. Em alguns casos, emprega-se um fator
diferenciado de 6,25, conforme descrito na Tabela 6. Amostras contendo nitratos podem
perd-los durante a digesto. Nestes casos, deve-se adicionar cido saliclico ou fenol (cerca
de 1 g), os quais retm os nitratos, como nitro-derivados. Procede-se ento digesto.
Digesto A matria orgnica existente na amostra decomposta com cido sulfrico e um
catalisador, onde o nitrognio transformado em sal amoniacal.
Destilao A amnia liberada do sal amoniacal pela reao com hidrxido e recebida
numa soluo cida de volume e concentrao conhecidos.
Titulao Determina-se a quantidade de nitrognio presente na amostra titulando-se o
excesso do cido utilizado na destilao com hidrxido.
Tabela 6 Fatores de converso de nitrognio total em protena
Alimento
Farinha de centeio
Farinha de trigo
Macarro
Cevada
Aveia
Amendoim
Soja
Arroz
Amndoas
122 - IAL
Fator
5,83
5,83
5,70
5,83
5,83
5,46
6,25
5,95
5,18
Alimento
Castanha do Par
Avel
Coco
Outras nozes
Leite e derivados
Margarina
Gelatina
Outros alimentos
-
Fator
5,46
5,30
5,30
5,30
6,38
6,38
5,55
6,25
-
IAL - 123
Clculo
A = n de mL da soluo de P g da amostra
a = n de g de glicose correspondente a 10 mL das solues de Fehling
P = massa da amostra em g
V = n de mL da soluo da amostra gasto na titulao .
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 4950.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 958.06). Arlington:
A.O.A.C.. 1995, chapter 39. p. 21.
039/IV Glicdios no-redutores em sacarose
Material
Balana analtica, esptula de metal, banho-maria, bquer de 100 mL, proveta de 50 mL,
balo volumtrico de 100 mL, frasco Erlenmeyer de 250 mL, funil de vidro, balo de fundo
chato de 250 mL, pipetas volumtricas de 10 e 20 mL, bureta automtica de 10 mL, buretas
de 10 e 25 mL e chapa eltrica.
IAL - 127
Reagentes
cido clordrico
Soluo de hidrxido de sdio a 40% m/v
Carbonato de sdio anidro
Ferrocianeto de potssio a 6% m/v
Acetato de zinco a 12% m/v
Solues de Fehling A e B tituladas (Apndice I)
Procedimento Transfira, com auxlio de uma pipeta, 20 mL de filtrado obtido em glicdios redutores em glicose (038/IV), para um balo volumtrico de 100 mL
ou pese de 2 a 5 g da amostra e transfira para um balo volumtrico de 100 mL com
auxlio de gua. Caso a amostra contenha alto teor de lipdios, proceda como em
038/IV, no item c. Acidule fortemente com cido clordrico (cerca de 1 mL). Coloque em
banho-maria a (100 2)C por 30 a 45 minutos. Esfrie e neutralize com carbonato de sdio
anidro ou soluo de hidrxido de sdio a 40%, com auxlio de papel indicador. Caso a
amostra contenha alto teor de protena, proceda como em 038/IV, item a. Complete o volume com gua e agite. Filtre se necessrio em papel de filtro seco e receba o filtrado em frasco Erlenmeyer de 250 mL. Transfira o filtrado para a bureta. Coloque num balo de fundo
chato de 250 mL, com auxlio de pipetas de 10 mL, cada uma das solues de Fehling A e
B, adicionando 40 mL de gua. Aquea at ebulio. Adicione, s gotas, a soluo da bureta
sobre a soluo do balo em ebulio, agitando sempre, at que esta soluo passe de azul a
incolor (no fundo do balo dever ficar um resduo vermelho de Cu2O).
Clculo
A = n de mL da soluo de P g da amostra
a = n de g de glicose correspondente a 10 mL das solues de Fehling
P = massa da amostra em g ou n de g da amostra usado na inverso
V = n de mL da soluo da amostra gasto na titulao
B = n de g de glicose por cento obtido em glicdios redutores, em glicose
Nota: na titulao, quando se tornar difcil observar o desaparecimento da cor azul, adicione ao balo, prximo ao ponto final, 1 mL da soluo de azul de metileno a 0,02%, como
indicador interno. Continue a titulao at completo descoramento da soluo.
128 - IAL
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos
qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 50-51.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 958.06). Arlington:
A.O.A.C.. 1995, chapter 39. p. 21.
040/IV Glicdios totais em glicose
Material
Balana analtica, chapa de aquecimento com refrigerador de refluxo, chapa eltrica, bquer
de 100 mL, esptula de metal, frasco Erlenmeyer de 500 mL com junta esmerilhada, frasco
Erlenmeyer de 300 mL, balo volumtrico de 250 mL, balo de fundo chato de 250 mL,
funil de vidro, bureta de 25 mL, pipeta graduada de 5 mL e pipeta volumtrica de 10 mL.
Reagentes
cido clordrico
Hidrxido de sdio 40% m/v
Carbonato de sdio anidro
Ferrocianeto de potssio a 6% m/v
Acetato de zinco a 12% m/v
Solues de Fehling A e B tituladas (Apndice I)
Procedimento Pese 2 a 5 g da amostra e desengordure conforme 032/IV, no caso de produtos com teor de lipdios inferior a 5%, no h necessidade de extrao prvia da gordura
da amostra. Transfira, quantitativamente, a amostra para um frasco Erlenmeyer de 500 mL
com junta esmerilhada, com o auxlio de gua. Adicione 5 mL de cido clordrico. Coloque
em chapa de aquecimento e adapte o refrigerador de refluxo ao frasco. Deixe em ebulio
por 3 horas a contar a partir do incio da ebulio. Espere esfriar a soluo e neutralize com
hidrxido de sdio a 40%, com auxlio de papel indicador. Transfira, quantitativamente,
para um balo volumtrico de 250 mL, com auxlio de gua. Caso a amostra contenha alto
teor de protena, proceda como em 038/IV, item a. Complete o volume com gua e agite.
Filtre, se necessrio, em papel de filtro seco para um frasco Erlenmeyer de 300 mL. Transfira
o filtrado para uma bureta de 25 mL. Coloque num balo de fundo chato de 250 mL, com
pipetas de 10 mL, cada uma das solues de Fehling A e B, adicionando 40 mL de gua.
IAL - 129
A= n de mL da soluo de P g da amostra
a= n de g de glicose correspondente a 10 mL das solues de Fehling
P= massa da amostra em g
V= n de mL da soluo da amostra gasto na titulao
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 49-50.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 958.06). Arlington:
A.O.A.C.. 1995, chapter 39. p. 21.
041/IV Glicdios por cromatografia descendente em papel Prova qualitativa
Os mtodos cromatogrficos, aplicveis a pequenas quantidades de amostra, so os
mais teis para identificao de glicdios. A cromatografia em papel, usando solventes e
reveladores apropriados, permite no s a identificao como a determinao quantitativa,
eluindo-se as manchas do papel e determinando colorimetricamente a concentrao dos
glicdios correspondentes. Pode-se correr um cromatograma com solvente apropriado e,
uma vez revelado, identificar os glicdios, comparando os valores de Rf com os dos padres
usados paralelamente amostra.
Material
Balana analtica, estufa, papel para cromatografia Whatman n 1, pipetas de 1 e 5 mL,
capilares de vidro, cuba cromatogrfica com cnula, atomizador, bquer de 250 mL, funil
de vidro e frasco Erlenmeyer de 100 mL.
130 - IAL
Reagentes
Solues-padro a 2% dos acares a serem identificados
n-Propanol
Acetato de etila
Soluo de anilina a 4% em lcool
Soluo de difenilamina a 4% em metanol
cido fosfrico
Fase mvel n-propanol - acetato de etila - gua (65:10:25).
Soluo reveladora Em um frasco Erlenmeyer, prepare a mistura de soluo de anilina a
4% em lcool (5 mL), soluo de difenilamina a 4% em metanol (5 mL) e cido fosfrico
(1 mL).
Procedimento Pese cerca de 10 g da amostra em um bquer de 250 mL e dissolva com
aproximadamente 100 mL de gua, mantendo em contato por no mnimo duas horas.
Filtre em papel de filtro, recolhendo o filtrado em bquer de 250 mL. Reserve o filtrado
para aplicar no papel para cromatografia. Corte o papel Whatman n 1 com largura de 15
cm e comprimento de 57 cm. Faa uma linha com grafite ao longo da largura do papel, a 6
cm da base. Marque seis pontos com a distncia mnima de 3 cm uns dos outros. Aplique,
utilizando capilar de vidro, duas gotas das solues-padro de acares e quatro gotas do
filtrado da amostra nos pontos marcados do papel cromatogrfico. Coloque a fase mvel
numa cnula de vidro, tampe a cuba e mantenha no mnimo uma hora para saturao da
mesma. Coloque o papel, adequadamente, com a extremidade em que foram aplicados os
padres e a amostra na cnula. Fixe o papel na cnula, usando um basto de vidro como
apoio. Corra o cromatograma descendentemente por cerca de 12 horas, retire o papel e
deixe secar ao ar em uma capela. Aplique o revelador sobre toda a superfcie do papel, com
auxlio de atomizador. Seque o papel em estufa a (100 - 105)C, at o aparecimento de
manchas caractersticas quanto cor e respectivos Rf. Compare os valores dos Rf dos padres
com os Rf dos componentes da amostra.
Clculo
IAL - 131
Referncia bibliogrfica
MORAES, R.M. Carboidratos em alimentos - Manual Tcnico, Campinas, SP: Ed.
ITAL. 1987.
042/IV Glicdios por cromatografia circular em papel Prova qualitativa
Aplica-se na anlise qualitativa dos acares presentes nos alimentos (glicose, frutose,
maltose, sacarose, alm de outros acares) utilizando-se a tcnica de cromatografia circular
em papel em comparao com solues-padro de acares. A cromatografia em papel
uma tcnica de separao baseada no deslocamento diferencial de solutos, arrastados por
uma fase mvel e retidos seletivamente por uma fase estacionria lquida (gua), contida no
papel.
Material
Balana analtica, estufa, capela para substncias volteis, papel para cromatografia Whatman
n 1, pipetas de 1 e 5 mL, capilares de vidro, cuba cromatogrfica de (52 x 52) cm,
atomizador, bquer de 250 mL, papel de filtro, funil de vidro, frasco Erlenmeyer de 100
mL, proveta com tampa de 100 mL e placas de Petri.
Reagentes
Solues-padro a 2% dos acares a serem identificados
n-Propanol
Acetato de etila
Soluo de anilina a 4% em lcool
Soluo de difenilamina a 4% em metanol
cido fosfrico
Fase mvel Prepare em uma proveta de 100 mL uma mistura de n-propanol - acetato de
etila - gua (65:10:25).
Soluo reveladora Em um frasco Erlenmeyer de 20 mL prepare a mistura de 5 mL da
soluo de anilina, 5 mL de difenilamina e 1 mL de cido fosfrico.
Procedimento Pese (10 - 20) g da amostra em bquer de 250 mL, dissolva com cerca
de 100 mL de gua, mantendo em contato por no mnimo 2 horas. Filtre, recolhendo o
filtrado em bquer de 250 mL e reserve, para aplicar no papel para cromatografia. Corte o
papel para cromatografia Whatman n 1, em quadrado de 50 cm de cada lado. Trace com
grafite duas diagonais entre os vrtices do quadrado e duas entre os lados (todas cruzando
132 - IAL
pelo centro do papel). Marque com lpis um ponto em cada diagonal a 2 cm do centro do
papel. Aplique, utilizando capilar de vidro, duas gotas das solues-padro e 4-6 gotas do
filtrado da amostra. Coloque a fase mvel nas placas de Petri posicionadas no centro e nos
quatro vrtices da cuba cromatogrfica, tampe com uma placa de vidro e deixe saturar por
cerca de uma hora. Coloque o papel sobre as placas de Petri, conectando o centro do papel
com o solvente da placa central por meio de uma vassourinha de papel. Corra o cromatograma circular por cerca de 12 horas (at o solvente atingir as laterais do papel) e retire
o papel, marque a frente do solvente e deixe secar ao ar numa capela. Aplique o revelador
sobre toda a superfcie do papel, com auxlio de atomizador, mantendo-o pendurado em
um varal na capela e enrole em um grande cartucho (cerca de 10 cm de dimetro). Leve a
estufa a 105C at o aparecimento de manchas caractersticas quanto a cor e respectivos Rf.
Compare os valores dos Rf dos padres com os Rf do componente da amostra que permite
a sua identificao.
Clculo
mtodos
043/IV Amido
Material
Cpsulas de porcelana, provetas de 20 e de 100 mL, bales volumtricos de 100 e de 500
mL, bquer de 400 mL, balo de titulao, bureta de 25 mL, pipetas de 10 mL, frasco
Erlenmeyer de 500 mL, autoclave, banho-maria e funil de vidro.
IAL - 133
Reagentes
ter
lcool a 70% e a 95%
Carbonato de clcio
Soluo de acetato neutro de chumbo saturada
Solues de Fehling tituladas (Apndice I)
Acido clordrico
Soluo de hidrxido de sdio a 10%
Carvo ativo
Procedimento Pese 5 g da amostra em uma cpsula de porcelana. Trate, sucessivamente, com trs pores de 20 mL de ter. Agite e decante. Transfira o material desengordurado para um frasco Erlenmeyer de 500 mL, com o auxlio de 100 mL de lcool a 70%. Agite e aquea em banho-maria a (83-87)C, por
1 hora, usando um pequeno funil no gargalo do frasco para condensar os vapores. Esfrie, adicione 50 mL de lcool e filtre em filtro seco ou centrifugue durante 15 minutos, a 1500 rpm.
Lave o resduo com 500 mL de lcool a 70%, reunindo as solues de lavagem ao filtrado
(o filtrado ou o sobrenadante pode ser usado para a determinao de glicdios redutores em
glicose e em glicdios no redutores em sacarose, evaporando o lcool, dissolvendo o resduo
com gua, transferindo para um balo volumtrico de 100 mL e titulando com solues de
Fehling conforme 038/IV e 039/IV). Transfira o resduo juntamente com o papel de filtro
para um frasco Erlenmeyer de 500 mL com auxlio de 150 mL de gua. Adicione 5 gotas
de soluo de hidrxido de sdio a 10%. Aquea em autoclave a uma atmosfera por 1 hora.
Esfrie e adicione 5 mL de cido clordrico (a soluo dever ficar fortemente cida). Aquea
em autoclave por mais 30 minutos e neutralize com soluo de hidrxido de sdio a 10%.
Transfira para um balo volumtrico de 500 mL e complete o volume com gua. Adicione,
se necessrio, 0,5 g de carvo ativo. Agite e filtre em filtro seco. Nesta soluo determine
glicdios redutores por titulao pelo mtodo 038/IV.
Clculo
A = n de mL da soluo de P g da amostra
P = n de g da amostra
V = n de mL da soluo gasto na titulao
a = n de g de glicose correspondente a 10 mL das solues de Fehling
134 - IAL
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 53-54.
Fibras
Ao resduo orgnico obtido em certas condies de extrao, d-se o nome de
fibra. Os mtodos de tratamento de extrao da amostra variam e de grande importncia, para a comparao de resultados, seguir exatamente as condies especficas em
cada um. O termo fibra alimentar foi proposto por Hipsely e definido por Trowell
como sendo os componentes das paredes celulares vegetais includas na dieta humana
que resistem ao das secrees do trato gastrointestinal. Para a anlise de alimentos
de consumo humano, o conhecimento do teor fibra alimentar mais adequado do que
o de fibra bruta. Hoje a definio mais aceita, para fins analticos, a de Asp que define
as fibras, considerando os aspectos fisiolgicos, como polissacardios (exceto amido)
e lignina que no so digeridos pelo intestino delgado humano. As fibras podem ser
classificadas de acordo com a sua solubilidade. As fibras solveis so responsveis pelo
aumento da viscosidade do contedo gastrointestinal, retardando o esvaziamento e a difuso de nutrientes; incluem as gomas, mucilagens, a maioria das pectinas e algumas hemiceluloses. As fibras insolveis diminuem o tempo de trnsito intestinal, aumentam o
peso das fezes, tornam mais lenta a absoro da glicose e retardam a digesto do amido;
incluem a celulose, lignina, hemicelulose e algumas pectinas. Embora em concentraes
diferentes, a maioria dos alimentos contm uma combinao dos dois tipos de fibras: as
solveis, tendo como principais fontes alimentares as leguminosas e as frutas e as insolveis que esto presentes nos gros de cereais, no farelo de trigo, nas hortalias e nas cascas
de frutas. Durante muitos anos foi utilizada a determinao do teor de fibra ou o resduo
vegetal resultante de um tratamento no fisiolgico, obtido pelo mtodo de Henneberg,
que consiste numa digesto cida e outra alcalina num material previamente dessecado
e desengordurado. Posteriormente, o procedimento foi simplificado utilizando-se apenas uma etapa de digesto. Estes mtodos fornecem valores baixos devido utilizao
de digesto muito drstica, levando perda de alguns componentes, no sendo mais
adequados para a anlise de alimentos, podendo ser aplicados apenas para de raes animais. Hellenboon et al. (1975) desenvolveram o mtodo enzimtico-gravimtrico, que
consiste em tratar o alimento com diversas enzimas fisiolgicas, simulando as condies
do intestino humano, permitindo separar e quantificar gravimetricamente o contedo
total da frao fibra e/ou as fraes solveis e insolveis. Este mtodo foi posteriormente
modificado por Asp et al (1983) e Prosky et al. (1984).
IAL - 135
N = n de g de fibra
P = n de g da amostra
136 - IAL
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985. p. 56.
045/IV Fibra alimentar total Mtodo enzimtico-gravimtrico
Material
Estufa, mufla, banho-maria, banho-maria com bandeja agitadora, dessecador com slica
indicadora de umidade, cadinho de vidro com placa de vidro sinterizado (ASTM 40-60
m), l de vidro de fibra mdia, bquer de 250 mL, proveta de 250 mL, kitassato de 500 ou
1000 mL, trompa dgua e tamis de 32 mesh.
Reagentes
Extran a 2%
cido clordrico 0,561 M
cido clordrico 1 M
Hidrxido de sdio 1 M
lcool a 95%
lcool a 78%
Acetona
-amilase termorresistente
Protease
Amiloglicosidase
MES cido 2-(N-morfolino)etanossulfnico
TRIS Tris(hidroximetil)aminometano
Soluo-tampo MES-TRIS 0,05 M Pese 19,52 g de MES e 12,2 g de TRIS. Dissolva em
1,7 L de gua. Ajuste o pH para 8,2, a 24C, com NaOH 6 M e dilua para 2 L com gua.
Procedimentos
Preparao da amostra Dependendo das caractersticas da amostra com relao ao teor de
umidade, gordura e acar, adota-se um procedimento diferente, visando facilitar a eficincia do tratamento enzimtico. Alimentos com alto teor de umidade devem ser inicialmente
secos em estufa a vcuo a 70C, durante a noite, quantificando-se o teor de umidade para
efeito do clculo final da fibra alimentar. Alimentos com alto teor de acar devem ser
tratados previamente com 100 mL de lcool a 85% por 30 min em banho-maria a 70C
com posterior filtrao. O resduo lavado com lcool a 70% at atingir o volume de 500 mL.
IAL - 137
Aps a evaporao do solvente, o teor de acar quantificado conforme 038/IV e 039/IV. Alimentos
com teores de lipdios acima de 5%, quando secos, devem ser desengordurados com ter, em
aparelho de Soxhlet, quantificando-se o teor de gordura pelo mesmo motivo da determinao
de umidade. Aps o tratamento adequado, a amostra deve se moda ou triturada e passada por
tamis de 32 mesh. Conserve-a em recipiente fechado at ser analisada. No momento da tomada
da amostra para a anlise da fibra, determine novamente o teor de umidade.
Preparao dos cadinhos Lave os cadinhos de vidro com placa de vidro sinterizado com porosidade n 2 (Pyrex n 32940, ASTM 40-60 m) com extran a 2%, mantendo em banho por
24 horas, enxge com 6 pores de gua utilizando vcuo, passe mais 3 pores de gua no
sentindo oposto ao da filtrao, com a finalidade de remover qualquer resduo retido na placa de
vidro. Seque em estufa a 105C. Transfira os cadinhos para dessecador mantendo-os temperatura ambiente. Pese. Revista internamente os cadinhos com uma camada de cerca de 1 g de l de
vidro, tendo o cuidado de distribuir uniformemente no fundo e nas paredes (forma de concha).
Lave a l com uma poro de 50 mL de cido clordrico 0,5 M com auxlio de vcuo, lave com
gua at a neutralizao. Seque em estufa a 105C. Incinere em mufla a 525C, no mnimo por
cinco horas. Resfrie em dessecador e pese (P1 para a amostra e B1 para branco).
Tratamento enzimtico Pese em bquer de 250 mL, em triplicata, cerca de 1 g da amostra
tratada e que tenha passado por tamis de 32 mesh. O peso entre as triplicatas no deve diferir de
20 mg. Adicione 40 mL de soluo-tampo MES-TRIS, pH 8,2, dispersando completamente a
amostra. Adicione 50 g de -amilase termorresistente, agitando levemente. Tampe com papel
alumnio e leve ao banho-maria a (95 - 100)C, por 35 min com agitao contnua. Remova os
bqueres do banho e resfrie at (60 1)C. Adicione 100 L de soluo de protease preparada
no momento do uso (50 mg/mL em tampo MES-TRIS), cubra com papel alumnio e leve ao
banho-maria a (60 1)C com agitao por 30 minutos. Remova o papel alumnio dos bqueres e adicione 5 mL de cido clordrico 0,561 M, com agitao. Mantenha a temperatura a
(60 1)C e ajuste o pH entre 4,0 - 4,7, com adio de soluo de hidrxido de sdio
1 M e/ou cido clordrico 1 M. Adicione 300 L de soluo de amiloglicosidase. Cubra
com papel alumnio e leve ao banho-maria a (60 1)C, por 30 minutos, com agitao
contnua.
Notas
Paralelo ao procedimento da amostra, processe pelo menos dois cadinhos em branco (sem
amostra).
fundamental, para fins de clculo, conhecer a massa de l de vidro utilizada no revestimento do cadinho.
O vcuo utilizado nas filtraes deve ser moderado, sendo suficiente o produzido pela trompa dgua.
138 - IAL
o filtrado aps a hidrlise. Mea o volume. Adicione lcool 95% a 60C (medido aps
aquecimento) na proporo de 4:1 do volume do filtrado. Cubra o bquer com papel
alumnio e mantenha a mistura em repouso por 1 hora temperatura ambiente, para a
precipitao da frao fibra solvel. Filtre a soluo alcolica em cadinhos previamente tarados. Proceda lavagem, secagem e pesagem, como na frao fibra insolvel. Determine os
teores de protena e cinza da mesma forma que na frao fibra solvel. Calcule a frao fibra
solvel procedendo da mesma forma que para fibra total.
Referncia bibliogrfica
LEE, S.C.; PROSKY, L.; DEVRIES, J.W. Determination of total, soluble and
insoluble dietary fiber in foods. Enzymatic-gravimetric method, MES-TRIS
buffer: collaborative study. J. Assoc. Off. Chem. Int., v. 75, p. 395-416, 1992.
047/IV Pectinas Prova qualitativa
Um certo nmero de substncias relacionadas ao cido pctico (C17H24O16) recebe
esta designao. Pectinas so componentes de muitas frutas; na presena de acares e cidos, apresentam tendncia a formar um gel, de onde a sua grande importncia nos produtos
feitos de frutas. Os mtodos de determinao de pectinas se baseiam na sua extrao por
gua quente seguida por precipitao com lcool e, aps purificao, pesagem na forma de
pectato de clcio ou cido livre.
Procedimento Adicione a 30 g da amostra, em um bquer, 200 mL de gua e misture
bem. Aquea, ligeiramente, em banho-maria. Filtre se necessrio. Adicione a uma alquota do filtrado uma soluo de permanganato de potssio a 0,25%. Aquea at ebulio.
Uma cor intensa com fluorescncia esverdeada indicao da presena de pectinas.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985. p. 59.
048/IV Pectinas Determinao por gravimetria
Material
Balo volumtrico de 200 mL, bquer de 400 mL, pipeta graduada de 5 mL, proveta de
200 mL e cadinho de Gooch.
140 - IAL
Reagentes
Sacarose
cido sulfrico 0,5 M
lcool a 95%
Soluo de hidrxido de sdio a 10%
cido clordrico (1+9)
Preparo da soluo da amostra
a) Gelias e xaropes Pese 30 g da amostra em um bquer de 200 mL. Adicione 100 mL
de gua e aquea ligeiramente. Esfrie. Transfira para um balo volumtrico de 200 mL e
complete o volume com gua. Se necessrio, filtre em filtro seco.
b) Frutas frescas, doces de massa e conservas Homogeneze a amostra em um liqidificador, se necessrio, o mais rapidamente possvel. Pese 30 g da amostra em um bquer de 200 mL. Adicione 80 mL de gua e aquea at ebulio por
1 hora, recolocando, de tempo em tempo, o volume de gua evaporado. Esfrie e transfira para um balo volumtrico de 200 mL e complete o volume com gua.
Procedimento Transfira 200 mL da soluo da amostra, preparada segundo
(a ou b), para um bquer de 400 mL. Adicione de 8 a 12 g de sacarose, se a amostra no
contiver acar. Evapore em banho-maria at cerca de 25 mL. Esfrie. Adicione 3 mL de
cido sulfrico 0,5 M e adicione, lentamente, agitando sempre, 200 mL de lcool. Deixe em
repouso por 10 horas e filtre. Lave o filtro com 50 mL de lcool a 95%. Transfira o precipitado para o mesmo bquer em que foi feita a evaporao, com o auxlio de um jato de gua
quente. Evapore at reduzir a 40 mL. Esfrie. Adicione 5 mL de soluo de hidrxido de sdio a 10% e 5 mL de gua. (Se depois da adio da soluo de hidrxido de sdio a soluo
contiver substncias insolveis, repita a anlise, usando uma quantidade menor da soluo
da amostra). Deixe em repouso por 15 minutos. Adicione 40 mL de cido clordrico (1+9).
Ferva por 15 minutos. Filtre rapidamente. Lave o bquer e o filtro com gua quente. Transfira o precipitado para um bquer de 200 mL, com auxlio de um jato de gua quente. Lave
bem o papel de filtro com gua quente. Complete com gua o volume de 40 mL. Esfrie.
Adicione 5 mL de soluo de hidrxido de sdio a 10% e 5 mL de gua. Deixe em repouso
por 15 minutos. Adicione 49 mL de gua e 10 mL de cido clordrico (1+9). Ferva por 5 minutos. Filtre em cadinho de Gooch que foi previamente aquecido por 30 minutos em mufla
a 550C e resfriado at a temperatura ambiente em dessecador com cloreto de clcio anidro,
pesado. Lave o cadinho de Gooch com gua quente e depois com lcool a 95%. Aquea por
1 hora em estufa a 100C. Resfrie at temperatura ambiente em dessecador e pese. Repita
as operaes de aquecimento I (30 minutos na estufa) e resfriamento at peso constante.
IAL - 141
Aquea por 30 minutos em mufla a 550C. Resfrie e pese. Repita as operaes de aquecimento (30 minutos na mufla) e resfriamento at peso constante. A perda de peso dar a
quantidade de cido pctico.
Clculo
N = n de g de cido pctico
P = n de g da amostra usado na precipitao
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985. p. 5961.
049/IV Dixido de enxofre Prova qualitativa
O dixido de enxofre pode ser usado nos alimentos como conservador isolado ou na
forma de seus sais de sdio, potssio ou clcio, mas nas anlises sempre calculado na forma
de SO2 livre. Tem ao inibidora no crescimento de fungos, fermentos e bactrias aerbias e
previne o escurecimento enzimtico de frutas e vegetais. Mantm a vitamina C, mas inativa
a vitamina B1.
Material
Frasco Erlenmeyer de 125 mL, tubo em U, tubo de ensaio, proveta de 10 mL e pipeta
graduada de 1 mL.
Reagentes
Acetato de cobre
cido clordrico
Pedra de mrmore
Soluo de iodo com cloreto de brio Dissolva 3 g de iodo em uma soluo de 3 g de iodeto de potssio em 50 mL de gua. Adicione 2 g de cloreto de brio e complete com gua
o volume at 100 mL.
142 - IAL
Reagentes
gua oxigenada a 3%, recm-preparada com gua destilada e deionizada
cido clordrico
Hidrxido de sdio 0,05 M
Vermelho de metila a 0,2% m/v ou azul de bromofenol a 0,4% m/v
IAL - 143
Procedimento Pese 50 g da amostra e transfira para o balo de reao do aparelho. Adicione 350 mL de gua e 20 mL de cido clordrico. Transfira 15 mL e 5 mL de gua oxigenada a 3%, respectivamente, para os frascos A e B, que devem estar mergulhados em banho
de gua gelada. Abra o torpedo de nitrognio e faa passar corrente de nitrognio a razo de
10 bolhas por minuto no balo de reao e aquea-o de modo a manter a ebulio durante
120 minutos e no aumentar o nmero de bolhas por minuto. Desligue. Transfira a soluo
do frasco B para o frasco A, lavando com 10 mL de gua bidestilada e deionizada. Adicione
trs gotas do indicador e titule com a soluo de hidrxido de sdio 0,05 M. Titule um
branco de 20 mL de gua oxigenada nas mesmas condies.
Notas
Alternativamente, pode-se usar, em substituio ao cido clordrico, uma soluo aquosa de
cido fosfrico 1:1, v/v.
Para amostras com baixa concentrao de sulfito, recomenda-se a titulao por via potenciomtrica.
Clculo
144 - IAL
Material
Banho-maria, capela para solventes, l natural branca de 20 cm, rgua de 20 cm, papel
Whatman n 1 (20 x 20 cm), bquer de 25 e 200 mL, basto de vidro, capilar de vidro e
cuba de vidro (21 x 21 x 10) cm.
Reagentes
cido clordrico
Hidrxido de amnio
Padres de corantes orgnicos artificiais a 0,1% m/v
Procedimento Para a extrao dos corantes, coloque em um bquer de 200
mL aproximadamente 30 a 50 g da amostra, 100 mL de gua e cerca de 20 cm
de um fio de l natural branca e misture bem. Acrescente algumas gotas de HCl
( 0,5 mL) e coloque em banho-maria fervente at que o corante fique impregnado
na l. Lave a l com gua corrente. Coloque em um bquer de 25 mL e adicione
algumas gotas de hidrxido de amnio ( 0,5 mL). Em seguida, adicione 10 mL de
gua e coloque em banho-maria at que a soluo adquira uma colorao igual da l.
Retire a l e reduza o volume do lquido metade, por evaporao. Para a identificao
dos corantes extrados, aplique a amostra e as solues dos padres de corantes, com
auxilio de capilar, no papel de cromatografia Whatman n. 1 e escolha o solvente mais
adequado seguindo o procedimento descrito no mtodo 086/IV. Compare o aparecimento das manchas da amostra quanto cor e aos fatores de resoluo (Rf), com os
respectivos padres de corantes orgnicos artificiais.
Notas
Para se obter um produto mais puro, caso seja necessrio, faa dupla extrao dos corantes
com o fio de l.
Corantes naturais podero tingir o fio no primeiro tratamento, mas a colorao no removida pela soluo de hidrxido de amnio.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985. p. 106-108.
IAL - 145
Xarope de groselha
Procedimento Pese com preciso cerca de 5 g de amostra e dilua a 100 mL em balo
volumtrico com soluo de acetato de amnio 0,02 M. Leia a absorbncia em espectrofotmetro no(s) comprimentos de onda do(s) corante(s) identificado(s) usando como branco
a soluo de acetato de amnio.
Clculos
a) Amostra com um s corante: calcule o teor usando o valor de
te, segundo a Tabela 7.
do respectivo coran-
(nm)
481
630
610
519
524
426
505
505
507
564,1
1840,0
449,3
436,0
1130,0
536,0
447,9
536,0
442,5
b) Amostra com dois corantes cujas absores mximas so bem distantes entre si: faa as
leituras das absorbncias nos dois comprimentos de onda respectivos na mesma soluo.
Como os corantes absorvem em regies distintas, a absoro de um no interfere na absoro do outro. Calcule o teor de corante usando o valor de
de cada corante.
c) Amostra com dois corantes cujas absores mximas so bem prximas uma da outra: faa as
leituras das absorbncias nos comprimentos de onda de cada corante na mesma soluo. Como as
regies de absores mximas so bem prximas, a absoro de um dos corantes interfere na absoro do outro. Em amostras contendo tartrazina e amarelo crepsculo, como por exemplo ao fazer
a leitura a 426 nm, na realidade, estamos considerando a absoro da tartrazina mais a do amarelocrepsculo; a 481 nm, estamos considerando a absoro do amarelo-crepsculo mais a da tartrazina. O que ocorre a aditividade das absorbncias. Para a devida correo, estabelecemos valores
de
a 426 nm e
a 481 nm com o padro do corante tartrazina com 96,36% de pureza
IAL - 147
(no mnimo) e com o padro do corante amarelo-crepsculo com 90,29 % de pureza (no mnimo), conforme Tabela 8.
Tabela 8 Caractersticas espectrofotomtricas dos corantes artificiais
Corante
Tartrazina
Tartrazina
Amarelo-crepsculo
Amarelo-crepsculo
(nm)
426
481
426
481
535
170
221
592
MAGi = porcentagem do cido graxo na mistura de padres de steres metlicos de cidos graxos
AC13:0 = mdia das reas do pico do ster metlico do C13:0
MC13:0 = porcentagem do ster metlico do C13:0 na mistura de padres
AAGi = mdia das reas do cido graxo na mistura de padres
Clculo terico:
150 - IAL
0,863
0,892
0,911
0,925
0,930
0,935
0,939
0,942
0,942
0,945
0,945
IAL - 151
cido graxo
C16:1 (cido palmitoleico)
C17:0 (cido margrico)
C17:1 (cido heptadecenico)
C18:0 (cido esterico)
C18:1 cis (cido olico)
C18:1 trans (cido eladico)
C18:2 cis (cido linoleico)
C18:2 trans (cido linoleladico)
C18:3 cis (cido linolnico)
C18:3 trans (cido linolnico trans)
C20:0 (cido araqudico)
C20:1 (cido gadoleico)
C20:2 cis (cido eicosadienico)
C20:3 n3 (cido eicosatrienico n3)
C20:3 n6 (cido eicosatrienico n6)
C20:4 (cido araquidnico)
C20:5 (cido eicosapentaenico)
C21:0 (cido heneicosanico)
C22:0 (cido behnico)
C22:1 (cido ercico)
C22:2 (cido docosadienico)
C22:6 (cido docosahexaenico)
C23:0 (cido tricosanico)
C24:0 (cido lignocrico)
C24:1 (cido nervnico)
Referncias bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods
of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 996.06).
Arlington: A.O.A.C. 16th ed. Chapter 41, p. 18 -18 B. (Supplement March, 1997).
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods
of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 996.01).
Arlington: A.O.A.C. 17th ed., 2000.
AMERICAN
OIL
CHEMISTS
SOCIETY.
Official
Methods
and
th.
Recommended Practices of the American Oil Chemits Society. 4 ed.
Champaign, USA, A.O.C.S., 1995 (A.O.C.S. Official Method Ce 2-66).
IAL - 153
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official methods and recommended practices of the American Oil Chemists Society. 4th. ed. Champaign, USA,
A.O.C.S., 1995 (A.O.C.S. Official Method Ce 1-62: Fatty acid composition by gas
chromatography).
INTERNATIONAL STANDARD ORGANIZATION. IS0 5508: animal and vegetable fats and oils Analysis by gas chromatography of methyl esters of fatty acids.
ISO 5508-1990E - 09-15.
HOLLAND, B. et al. in: The composition of foods. Mc cance and Widdowsons 16th
ed., Cambridge, UK, 2002. p. 7-10.
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official Methods and Recommended
Practices of the American Oil Chemits Society. 5th. ed. Champaign, USA, A.O.C.S.,
1999 (A.O.C.S. Official Method Ce-1f 96).
054/IV Preparao de steres metlicos de cidos graxos Mtodo 1
Este mtodo refere-se preparao de steres metlicos de cidos graxos a partir
dos steres de cidos graxos e glicerol de leos e gorduras por reao de transesterificao. Os steres metlicos obtidos sero posteriormente analisados por cromatografia em
fase gasosa. Aplica-se preparao de steres metlicos de cidos graxos com 8 ou mais
tomos de carbono a partir de leos e gorduras de origem animal ou vegetal (inclusive
os lipdios extrados dos alimentos). O material insaponificvel no extrado e, se presente em grandes quantidades, poder interferir na anlise. Amostras que apresentem
cidos contendo os seguintes grupos na molcula: epoxi, hidroperxidos, ciclopropenil
e ciclopropil, no podero ser preparadas por este mtodo, pois poder ocorrer destruio parcial ou completa de tais grupos.
Material
Bateria de Sebelin, balana analtica, frasco de transesterificao de 200 mL com junta
esmerilhada 24/40, prolas de vidro e pipetas volumtricas de 2 a 5 mL.
Reagentes
Soluo saturada de cloreto de sdio
n-Hexano grau cromatogrfico
154 - IAL
15304:2002 (E): animal and vegetables fats and oils Determination of the content
of trans fatty acid isomers of vegetables fats and oils Gas chromatographic method.
2nd. ed. Switzerland, 2002.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 266.
BADOLATO, E.S.G.; ALMEIDA, M.E.W. Pesquisa por cromatografia em fase gasosa
da adulterao do chocolate. Rev. Inst. Adolfo Lutz. v. 37, p. 47-56, 1977.
055/IV Preparao de steres metlicos de cidos graxos Mtodo 2
Este mtodo refere-se a preparao de steres metlicos de cidos graxos a partir dos
steres de cidos graxos e glicerol de leos e gorduras, por reao de transesterificao, em
meio bsico e a frio. Os steres metlicos obtidos sero posteriormente analisados por cromatografia em fase gasosa. Este um mtodo apropriado para a preparao de steres metlicos de cidos graxos com 4 ou mais tomos de carbono, a partir de leos e gorduras de
origem vegetal ou animal (inclusive os lipdios extrados dos alimentos), que apresentem
ndice de acidez em cido olico inferior a 4,0. A metodologia rpida e adequada preparao de steres metlicos de cidos graxos mais volteis, pois a reao ocorre a frio.
Material
Centrfuga ou agitador de tubos tipo vortex, pipeta automtica de 20 a 200 L, balana
analtica, tubos de centrfuga de 20 mL com tampa, balo volumtrico de 100 mL e
pipetas volumtricas de 2 a 5 mL.
Reagentes
Soluo de hidrxido de potssio 2 M em metanol (grau cromatogrfico).
Soluo saturada de cloreto de sdio.
n-Hexano grau cromatogrfico.
Procedimento Pese cerca de 100 mg da amostra em tubo de centrfuga de 20 mL com
tampa. Adicione 2 mL de n-hexano (ou de 2 a 5 mL da soluo do padro interno) e em
seguida 0,2 mL de soluo metanlica de KOH 2 M. Feche o tubo e agite no vortex (ou
centrfuga) por 30 segundos. Adicione 3 mL de soluo saturada de cloreto de sdio. Deixe
separar as fases e utilize a fase superior para a anlise por cromatografia em fase gasosa. Analise os steres metlicos o mais rpido possvel, para evitar a perda dos steres mais volteis.
Nota: veja a nota do procedimento 054/IV
156 - IAL
Referncias bibliogrficas
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official Methods and Recommended
Practices of the American Oil Chemits Society. 4th. ed. Champaign, USA, A.O.C.S.,
1995 (A.O.C.S. Official Method Ch 1-91).
THE INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. ISO
15304:2002(E): animal and vegetables fats and oils Determination of the
content of trans fatty acid isomers of vegetables fats and oils Gas chromatographic
method. 2. ed. Switzerland, 2002.
IUPAC Standard Methods for Analysis of Oils, Fats and Derivates. Blackwell Scientific Publications 7th Edition (1987); IUPAC Methodot 2:301; Report of IUPAC
Working Group WG 2/87.
fuga de 30 mL com tampa. Adicione 3 mL de n-hexano para solubilizar a amostra (ou de 2 a 5 mL da soluo de padro-interno). Adicione 4 mL de soluo 0,5
M de NaOH. Feche bem o tubo e aquea em banho de gua com temperatura entre
(65 - 70)C at dissolver os glbulos de gordura e a soluo ficar transparente
(3 - 5) min. Esfrie o tubo sob gua corrente. Adicione 5 mL da soluo esterificante,
feche e agite o tubo por 30 segundos. Aquea em banho de gua com temperatura
entre 65 e 70C por 5 min. Esfrie o tubo sob gua corrente o mais rpido possvel.
Adicione 4 mL de soluo saturada de NaCl. Agite vigorosamente por 30 segundos
em agitador tipo vortex. Adicione 3 mL de n-hexano. Agite vigorosamente por 30
segundos no vortex. Deixe separar as fases e utilize a fase superior para a anlise por
cromatografia em fase gasosa. Analise os steres metlicos o mais rpido possvel, para
evitar a perda dos mais volteis.
Nota: veja a nota do procedimento 054/IV
Referncias bibliogrficas
THE INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. ISO
15304:2002(E): animal and vegetables fats and oils Determination of the content of trans fatty acid isomers of vegetables fats and oils Gas chromatographic
method. 2. ed., Switzerland, 2002.
HARTMAN. L.; LAGO, R.C.A. Rapid preparation of fatty acid methyl esters from
lipids. Lab. Prac., v. 22, p. 475-476, 1973.
MAIA, E.L.; RODRIGUES-AMAYA, D.B.R. Avaliao de um mtodo simples
e econmico para metilao de cidos graxos com lipdios de diversas espcies de peixes. Rev. Inst. Adolfo Lutz, v. 53(1/2), p. 27-35, 1993.
057/IV Pesquisa de compostos volteis por cromatografia em fase gasosa com detector de massas e tcnica de headspace
Este mtodo aplica-se a amostras de alimentos, bebidas e guas, que apresentem caractersticas sensoriais alteradas (odor). Os compostos volteis das amostras,
extrados pela tcnica de headspace, so injetados no cromatgrafo gasoso e seus componentes so separados de acordo com a afinidade destes com a fase estacionria da
coluna cromatogrfica; posteriormente, os compostos separados so fragmentados
por impacto de eltrons, no detector de massas, e os respectivos espectros de massas
gerados so comparados com aqueles presentes nas bibliotecas de espectros de massas
dos aparelhos ou disponveis na literatura. As identificaes so feitas por similaridade, e, quando disponveis, padres de substncias puras so analisados em paralelo
para confirmao dos resultados.
158 - IAL
Material
Cromatgrafo gasoso com detector de massas e auto-amostrador de headspace acoplado, recravador de tubos, estufa com temperatura controlada (at 150C) e flaconetes
ou vials de 20 mL com septo de material inerte (teflon).
Procedimento
Preparao da amostra Transfira uma quantidade da amostra, previamente homogeneizada, para um vial de 20 mL, de modo a ocupar aproximadamente 1/3 do seu
volume. Lacre o vial e adapte ao auto-injetor.
Programao das condies do auto-amostrador Auto-injetor de headspace, temperatura do vial: (90-110)C, temperatura da seringa: (90-10)C, tempo de aquecimento
do vial: 15 min, volume injetado: 0,8 mL.
Nota: o volume injetado pode ser diminudo ou aumentado, dependendo da concentrao da amostra.
Programao das condies do cromatgrafo Temperatura da coluna 30C
por 5 min, rampa de aquecimento 5C at 160C por 5 min, tempo de equilbrio para
estabilizao das condies do aparelho 1 min, temperatura do injetor 230C, temperatura do detector 240C, coluna Carbowax 20 M (ou outra fase prpria para anlise dos
componentes da amostra problema), comprimento da coluna: 30, 50 ou 60 m, dimetro
interno 0,25 mm, espessura do filme 0,25 m, presso da coluna 40 kPa, fluxo 0,8 mL/
min, velocidade linear: 33,2 m/s, razo de diviso da amostra varivel de acordo com a
concentrao da amostra.
Nota: pode-se utilizar outros tipos de coluna, com diferentes fases estacionrias; porm,
as condies analticas devem ser alteradas de acordo com as especificaes das mesmas.
Programao das condies do detector de massas Intervalo de massa: Razo massa/
carga 35 a 350, corte do solvente 0,50 min, incio da aquisio 0,60 min, ganho do detector (1,3 - 1,5) kV, energia do filamento 70 eV, forma de aquisio varredura (SCAN)
ou monitoramento de um on (SIM). Este ltimo modo aumenta a sensibilidade da
anlise.
Anlise da Amostra Injete a amostra de acordo com as condies programadas. O monitor exibir o cromatograma e os respectivos espectros de massas de
cada pico eludo. Aps o trmino da corrida, analise cada pico separadamente e
correlacione com o seu espectro de massas. A partir da obteno de cada espectro de massas, realize a pesquisa individual nas bibliotecas NIST 62 e NIST 12
IAL - 159
Colaboradores
Alice Momoyo Sakuma; Carmen Slvia Kira; Cludio de Flora; Cristiane Bonaldi Cano;
Deise Aparecida Pinatti Marsiglia; Maria de Ftima Henriques Carvalho; Mrcia Regina
Pennacino do Amaral Mello; Maria Lima Garbelotti; Miriam Solange Fernandes Caruso;
Neus Sadocco Pascuet; Odair Zenebon; Regina Sorrentino Minazzi Rodrigues e
Sabria Aued Pimentel
160 - IAL
CAPTULO
ADITIVOS
IAL - 161
162 - IAL
V
Captulo V - Aditivos
ADITIVOS
Captulo V - Aditivos
Corantes
Substncias que conferem, intensificam ou restauram a cor de um alimento. Os corantes artificiais so substncias orgnicas de sntese cuja estrutura molecular difere dos
corantes encontrados na natureza. So produtos cuja capacidade de conferir grande intensidade de cor e estabilidade supera a dos corantes naturais. Em 1999, foram introduzidos na
legislao brasileira os seguintes corantes artificiais: azul patente, verde slido e azorrubina,
que passam a fazer parte deste captulo. Apesar das dificuldades encontradas na aplicao
dos corantes naturais nos alimentos, devido ao seu baixo poder tintorial, alto custo e instabilidade, atualmente seu emprego vem crescendo de forma significativa no ramo alimentcio,
pela preocupao dos consumidores com o uso de substncias artificiais em alimentos.
Edulcorantes
Substncias diferentes dos acares que conferem sabor doce aos alimentos. Seu
emprego justifica-se nos produtos destinados a consumidores que necessitam de restrio
calrica em suas dietas, bem como para aqueles portadores de diabetes. Atualmente, a tcnica mais utilizada para separao, identificao e quantificao dos edulcorantes a cromatografia lquida de alta eficincia. Os edulcorantes mais empregados hoje em dia so: sacarina,
ciclamato, aspartame, acesulfame-K e esteviosdio.
Gomas: so polissacardios de alto peso molecular e, desde que atendam aos padres de identidade e pureza exigidos para uso em alimentos, so consideradas GRAS pelo
FDA. Devido sua afinidade pela gua, desempenham papel importante na maioria dos
alimentos, sendo de amplo uso na indstria, como espessantes, geleificantes, estabilizantes
e emulsificantes.
Espessantes
Substncias que aumentam a viscosidade dos alimentos. Eles so usados para controlar a consistncia de alimentos lquidos e semilquidos.
Geleificantes
Substncias que conferem textura pela formao de um gel.
IAL - 165
Estabilizantes
Substncias que tornam possvel a manuteno de uma disperso uniforme de duas
ou mais substncias imiscveis em um alimento.
Emulsificantes
Substncias que propiciam a formao ou manuteno de uma mistura uniforme de
duas ou mais fases imiscveis no alimento. Estes podem ser naturais ou sintticos.
Neste captulo, so destacados alguns acidulantes, reguladores de acidez, antioxidantes, aromatizantes, conservadores, corantes naturais e artificiais, edulcorantes, espessantes,
geleificantes, estabilizantes, emulsionantes; alm dos bromatos, cujo uso no permitido
na legislao brasileira, da determinao de teobromina e cafena em produtos a base de
cacau e dos contaminantes arsnio, fluoreto e benzo(a)pireno, um hidrocarboneto policclico aromtico (HPA), formado principalmente em processos de combusto incompleta
de matrias orgnicas, que se encontra na natureza como contaminante de solo, ar, gua e
alimentos.
Como atualmente so permitidos, no Brasil, mais de 300 aditivos, descrita, a seguir, a anlise apenas dos aditivos, puros ou presentes em uma formulao, mais utilizados
nos alimentos. Os mtodos podem sofrer algumas alteraes em funo da formulao do
produto.
livro.
A determinao dos aditivos nos alimentos tratada nos respectivos captulos deste
058/IV Acidulantes Identificao de cido ctrico, lctico e tartrico por cromatografia em papel.
Os cidos orgnicos podem ser identificados por cromatografia em papel. Na anlise
dos cidos orgnicos, este mtodo permite identificar, simultaneamente, a presena dos
cidos ctrico, tartrico e lctico em amostras de aditivos alimentares.
Material
Balana analtica, papel Whatman n 1 (20 x 20) cm, balo volumtrico de 100 mL, bquer de 100 mL, cuba cromatogrfica com tampa, frasco Erlenmeyer de 300 mL, provetas
de 50 e 100 mL e seringas de 5 L.
166 - IAL
Captulo V - Aditivos
Reagentes
Hidrxido de amnio
lcool
Azul de timol
cido clordrico
Solues-padro Pese 1 g de cido ctrico, transfira para um balo volumtrico de 100
mL e complete o volume com gua. Repita o mesmo procedimento para os cidos tartrico
e lctico.
Solvente para a fase mvel com revelador Misture 35 mL de lcool, 13 mL de gua e
2 mL de hidrxido de amnio e adicione 50 mg de azul de timol. Se necessrio, prepare
um volume maior mantendo as mesmas propores. Guarde em frasco de vidro com tampa.
Procedimento Em um bquer de 100 mL, dissolva a amostra com pouca gua. Aplique,
em pontos eqidistantes e a 2 cm da borda inferior no papel de cromatografia, 5 L da
soluo-teste e 5 L de cada uma das solues-padro. Desenvolva o cromatograma, em
cuba saturada com a fase mvel contendo revelador, at a frente do solvente atingir dois
centmetros antes da borda superior do papel. As manchas amarelas sob o fundo azul do
papel indicam a presena dos cidos. Colocando o papel em atmosfera de vapores de cido
clordrico, o fundo azul do papel torna-se vermelho. Marque, imediatamente, o contorno
das manchas com lpis. A identificao deve ser feita por comparao dos Rf das manchas
obtidas com os das solues-padro.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos
qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 78-79.
059/IV Acidulantes Identificao de cido ctrico
Este ensaio permite a identificao do cido ctrico puro e baseia-se numa reao
colorida com piridina e anidrido actico.
Material
Bqueres de 5 e 25 mL, pipetas graduadas de 1, 5 e 20 mL e basto de vidro.
IAL - 167
Reagentes
Piridina
Anidrido actico
Procedimento Dissolva alguns mg de cido ctrico em 1 mL de gua, transfira para um
bquer contendo 15 mL de piridina e agite. Acrescente 5 mL de anidrido actico e agite
novamente. A soluo deve ficar avermelhada.
Referncia bibliogrfica
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX.Food Chemicals Codex. 4. ed.
Washington D. C.: National Academic Press, 1996. p. 753.
060/IV Acidulantes Quantificao de cido ctrico
Material
Balana analtica, frascos Erlenmeyer de 125 mL, proveta graduada de 50 mL e bureta de
50 mL.
Reagentes
Soluo aquosa de hidrxido de sdio 1 M
Soluo de fenolftalena 1% m/v Pese 1 g de fenolftalena, transfira para um balo
volumtrico de 100 mL e complete o volume com lcool.
Procedimento Pese, com preciso, cerca de 3 g da amostra e dissolva em 40 mL de gua.
Adicione algumas gotas de soluo de fenolftalena e titule com NaOH 1 M.
Clculo
Cada mL de NaOH 1M equivalente a 64,04 mg de C6H8O7.
Referncia bibliogrfica
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chemicals Codex. 4. ed.
Washington D. C.: National Academic Press, 1996. p. 102 e 753.
168 - IAL
Captulo V - Aditivos
cido ascrbico
cido dehidroascrbico
Material
Balana analtica, bquer de 100 mL, balo volumtrico de 100 mL, proveta de 25 mL,
bureta de 25 mL e frasco Erlenmeyer de 250 mL.
Reagentes
Soluo de cido sulfrico M
Soluo de iodo 0,05 M
Soluo de amido a 1% m/v
Procedimento Pese uma quantidade de amostra que contenha aproximadamente 0,2 g
de cido ascrbico e dissolva em uma soluo de 100 mL de gua, recentemente fervida e
resfriada, e adicione 25 mL de cido sulfrico M. Titule a soluo imediatamente com iodo
0,05 M, adicionando amido a 1% prximo ao ponto final da titulao.
IAL - 169
Clculo
170 - IAL
Captulo V - Aditivos
IAL - 171
Clculos
Captulo V - Aditivos
IAL - 173
Captulo V - Aditivos
Material
Balana analtica, balana semi-analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bqueres de (25 e
100) mL, basto de vidro, funil de separao tipo pra de 250 mL, provetas graduadas de
25, 50, 100 e 500 mL, bales volumtricos de 100, 200 e 500 mL, pipeta graduada de 2
mL e pipetas volumtricas de (1 a 12) mL.
Reagentes
ter de petrleo (60-100)C
lcool absoluto
Brax
2,6-Dicloroquinonacloroimida
Padro analtico de 3-BHA ou uma mistura conhecida dos dois ismeros 3-BHA e 2-BHA
Soluo de lcool a 72% v/v Adicione 360 mL de lcool em um balo volumtrico de
500 mL e complete o volume com gua.
Soluo de brax a 2% m/v Pese 2 g de brax Na2B4O7.10H2O, transfira para um balo
volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua.
Soluo de 2,6-dicloroquinonacloroimida (reagente de Gibbs) Pese 0,01 g de 2,6dicloro-quinonacloroimida (C6H2ONCl3), transfira para um balo volumtrico de 100 mL
e complete o volume com lcool absoluto. Prepare a soluo no dia do uso.
Procedimento Dissolva 10 g da amostra em 50 mL de ter de petrleo e transfira
quantitativamente para um funil de separao. Adicione 25 mL de lcool a 72% e agite.
Separe a camada alcolica e extraia mais duas vezes com 60 mL de lcool. Rena os
extratos alcolicos e complete o volume at 200 mL com lcool a 72%. Adicione a uma
IAL - 175
Captulo V - Aditivos
2,6-Dicloroquinonacloroimida
lcool a 72% v/v
Soluo de brax a 2% m/v
Procedimento Dissolva 20 g da amostra em 50 mL de ter de petrleo. Extraia em funil
de separao com trs pores de 30 mL de lcool a 72%. Rena os extratos alcolicos em
balo volumtrico de 100 mL e complete com lcool a 72%. Adicione 1 mL de soluo de
brax a 2% e alguns cristais de 2,6-dicloroquinonacloroimida a 5 mL de extrato alcolico
obtido no item anterior. Uma colorao azul indicar a presena de BHA.
Referncia bibliogrfica
JOSEPHY, P.D.; VAN DAMME, A. Reaction of Gibbs reagent with para-substituted
phenols. Anal. Chem. v. 56, p. 813-814, 1984.
069/IV Antioxidantes Determinao de butil hidroxitolueno (BHT)
O princpio deste mtodo baseia-se na reao do BHT, aps extrao da amostra,
com o-dianisidina e nitrito de sdio e na medida espectrofotomtrica do composto vermelho-alaranjado formado. O BHT melhor extrado por destilao com arraste de vapor e o
destilado utilizado na reao colorimtrica.
Material
Balana analtica, balana semi-analtica, espectrofotmetro UV/VIS, manta aquecedora eltrica,
regulador de temperatura, suporte, garra, mufa, tubo de ltex para condensador, basto de vidro,
funil de separao tipo pra de 250 mL, provetas graduadas de 50 e 100 mL, condensador tipo
reto, com junta esmerilhada 24/40, bales volumtricos de 100 e 250 mL, bqueres de 50, 100
e 250 mL, pipetas graduadas de 2 e 5 mL e pipeta volumtrica de 25 mL.
Reagentes
Clorofrmio
Nitrito de sdio
o-Dianisidina (C14H16N2O2)
Metanol
Carvo
cido clordrico 1 M
Cloreto de magnsio (MgCl2.6H2O)
Padro analtico de BHT
IAL - 177
Soluo-padro de BHT a 0,05% m/v Pese 0,05 g de BHT, transfira para um balo
volumtrico de 100 mL e complete o volume com metanol.
Soluo de nitrito de sdio a 0,3% m/v Pese 0,3 g de nitrito de sdio, transfira para um
balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Esta soluo estvel, pelo
menos, por duas semanas a 4C
Soluo de o-dianisidina Pese 250 mg de o-dianisidina (C14H16N2O2) e dissolva com
50 mL de metanol. Adicione 100 mg de carvo. Agite por cinco minutos e filtre.
Adicione a 40 mL do filtrado, 60 mL de cido clordrico 1 M. Prepare diariamente, e
guarde ao abrigo da luz.
Soluo de cloreto de magnsio Pese 100 g de cloreto de magnsio e dissolva em 50 mL
de gua.
Procedimento Monte o aparelho para destilao por arraste de vapor. Pese exatamente
5 g da amostra e transfira para o frasco Erlenmeyer junto com 15 mL da soluo de cloreto
de magnsio. Adapte as juntas conectoras e destile com arraste de vapor razo de 4 mL
por minuto. Recolha de 100 a 125 mL do destilado em um balo volumtrico de 250 mL,
completando o volume com metanol. A uma alquota de 25 mL, adicione 2 mL da soluo
de nitrito de sdio e 5 mL da soluo de o-dianisidina Aps 10 minutos, extraia a frao
colorida com 10 mL de clorofrmio. Mea espectrofotometricamente a 520 nm e determine
a concentrao de BHT, utilizando uma curva de calibrao previamente construda.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos
Qumicos e Fsicos para Anlises de Alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP 1985. p. 85-86.
070/IV Antioxidantes Identificao de butil hidroxitolueno (BHT)
Material
Balana semi-analtica, manta aquecedora, regulador de temperatura, suporte, garra e mufa,
tubo de ltex para condensador, balo de fundo redondo com junta esmerilhada 45/50 e
capacidade para 5 L, tubo de vidro de 1,4 m de comprimento e 1,2 cm de dimetro, juntas
conectoras para frasco Erlenmeyer com presilha, frasco Erlenmeyer com junta esmerilhada
29/32 e capacidade 500 mL, condensador tipo reto, com junta esmerilhada 24/40, balo
volumtrico de 100 mL, provetas graduadas de (50 e 100) mL, bqueres de (50, 100 e 250) mL
e pipetas graduadas de (2 e 5) mL.
178 - IAL
Captulo V - Aditivos
Reagentes
Clorofrmio
Nitrito de sdio
o-Dianisidina (C14H16N2O2)
Metanol
Carvo
cido clordrico
Cloreto de magnsio (MgCl2.6H2O)
Padro analtico de BHT
Soluo de nitrito de sdio a 0,3% m/v, conforme 069/IV
Soluo de o-dianisidina, conforme 069/IV
Soluo de cloreto de magnsio, conforme 069/IV
Procedimento Monte o aparelho para destilao por arraste de vapor. Pese 5 g da amostra,
transfira para o frasco Erlenmeyer junto com 15 mL da soluo de cloreto de magnsio.
Adapte as juntas conectoras e destile com arraste de vapor razo de 4 mL por minuto.
Recolha de 100 a 125 mL do destilado em um bquer de 250 mL. Concentre, em banhomaria, o destilado at 50 mL. A uma alquota de 25 mL, adicione 5 mL de soluo de
o-dianisidina e 2 mL de soluo de nitrito de sdio. Na presena de BHT, dever formar
uma colorao vermelho-alaranjada em at 10 minutos.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos
qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 85-86.
071/IV Antioxidantes Identificao de galatos
Este ensaio permite a identificao dos galatos em misturas de aditivos e baseia-se na
extrao dos galatos (propila, octila ou duodecila) com lcool a 72% e reao com hidrxido
de amnio .
Material
Balana semi-analtica, bqueres de 10 e 100 mL, proveta graduada de 50 mL, funil
de separao de 125 mL, bales volumtricos de 100 e 500 mL e pipetas graduadas
de 1 e 5 mL.
Reagentes
ter de petrleo
IAL - 179
lcool
Hidrxido de amnio
Soluo de lcool a 72% v/v Misture 360 mL de lcool e 140 mL de gua.
Procedimento Dissolva 20 g de amostra em 50 mL de ter de petrleo. Extraia em
funil de separao com lcool a 72% (30 mL por trs vezes). Rena os extratos em balo
volumtrico de 100 mL e complete o volume com lcool a 72%. Adicione 0,5 mL de
hidrxido de amnio a 5 mL do extrato alcolico. Uma colorao rsea indicar a presena
de galatos.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 82.
072/IV Aromatizantes Identificao e quantificao
A identificao e a quantificao dos componentes do aroma (aldedos, steres, cetonas, etc.) so efetuadas por cromatografia em fase gasosa, usando detector de ionizao de
chama (FID).
Material
Balana analtica, cromatgrafo a gs, coluna Carbowax 20 M ou equivalente, detector de
ionizao de chama (FID), bales volumtricos de 10 mL, pipetas graduadas de 2 mL e
microsseringa de 10 L.
Reagentes
lcool
Padres analticos de aldedos, steres, cetonas, etc.
Soluo-padro Com auxlio de uma pipeta, pese cerca de 100 mg dos padres diretamente
em bales volumtricos de 10 mL e complete o volume com lcool.
Condies cromatogrficas Temperatura do injetor: 230C, temperatura do detector:
250C, programao de aquecimento da coluna: de (70 - 210)C, 8C/min, razo de splitter
1:100.
Procedimento Para aromas lquidos, pese diretamente em balo volumtrico de 10 mL,
com auxlio de uma pipeta, uma quantidade da amostra de modo que a concentrao do
180 - IAL
Captulo V - Aditivos
analito estudado seja prxima a do padro e em torno de 1%. Complete o volume com
lcool. Para aromas em p, pese uma quantidade da amostra cuja concentrao do analito
estudado seja prxima a do padro. Transfira, com lcool, para um balo volumtrico de
10 mL e complete o volume. Filtre, se necessrio. Injete 1 L da amostra e dos padres no
cromatgrafo e calcule a porcentagem dos analitos estudados por meio das reas obtidas nos
cromatogramas.
Clculo
Cp = concentrao do padro
Ca = concentrao da amostra
Ap = rea do padro
Aa = rea da amostra
Referncias bibliogrficas
ARCTANDER, S. Perfum and flavor chemicals (aroma chemicals) v. 1-2. New Jersey,
U.S.A.: publicado pelo autor, 1969.
Flavor and Fragrance Materials. Wheaton, USA: Allured Publishing Corporation, 1993.
073/IV Aromatizantes Teor alcolico a 20C
A quantificao do teor alcolico, quando presente, em aromas lquidos determinado conforme o mtodo 0217/IV.
074/IV Aromatizantes Identificao de leos essenciais
Os leos essenciais, quando presentes nos aromas, podem ser identificados por cromatografia em camada delgada ou quantificados com o uso do balo volumtrico tipo Cssia. Quando puros, devem ser feitas as seguintes determinaes fsico-qumicas: ndice de
refrao a 20C, densidade relativa a (20/20)C e rotao ptica a 20C. Os valores obtidos
so comparados com os da literatura. Os aromas lquidos podem ser analisados diretamente
ou aps a separao dos leos essenciais com soluo saturada de cloreto de sdio, enquanto
que os em p devem ser previamente extrados. Para amostras em p, extraia com uma pequena quantidade de lcool ou ter.
IAL - 181
Material
Placas de slica gel 60 G (20 x 20)cm, estufa, cmara ultravioleta, cuba cromatogrfica com
tampa, frasco Erlenmeyer de 250 mL e provetas de 10 e 100 mL.
Reagentes
Ciclohexano
Acetato de etila
cido actico
cido sulfrico
Padres analticos de leos essenciais
Fase mvel Ciclohexano-acetato de etila-cido actico (90:10:1).
Revelador Soluo aquosa de cido sulfrico a 10% (v/v).
Procedimento Sature a cuba de vidro com a mistura de solventes da fase
mvel. Coloque, com auxlio de um capilar, a amostra e os padres em pontos
diferentes da placa de slica gel, preparada para cromatografia ascendente. Deixe
secar. Coloque na cuba cromatogrfica com o solvente e deixe correr at uns
2 cm da extremidade superior da placa. Retire e deixe secar ao ar. Vaporize
com o revelador. Seque em estufa a 105C por alguns minutos tomando o
cuidado de no deixar carbonizar a placa. Compare o cromatograma da amostra
com o dos padres. Antes de revelar a placa, observe o cromatograma sob luz
ultravioleta.
075/IV Aromatizantes Quantificao dos leos essenciais
Material
Pipeta volumtrica de 10 mLe balo volumtrico tipo Cssia (110 mL de capacidade e
gargalo graduado de 10 mL, subdividido em 0,1 mL).
Reagentes
Cloreto de sdio
Soluo saturada de cloreto de sdio Adicione cloreto de sdio em 1000 mL de gua at
saturar a soluo.
Procedimento Pipete 10 mL da amostra, transfira para um balo volumtrico
tipo Cssia e complete o volume com soluo saturada de cloreto de sdio.
182 - IAL
Captulo V - Aditivos
L = leitura no polarmetro
C = comprimento do tubo em dm
D = densidade da amostra
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP. 1985. p. 419.
FENAROLI, G. Sostanze Aromatiche Naturali. Milano, Italy: Editore Ulrico Hopepli, v.
1:, 1963. 1004 p.
077/IV Aromatizantes ndice de refrao a 20C
Material
Refratmetro
Procedimento Faa circular uma corrente de gua atravs do refratmetro de modo a
manter a temperatura constante. Esta temperatura no dever diferir da referncia de + 2C.
IAL - 183
Antes de colocar o leo essencial no instrumento, o mesmo deve estar temperatura na qual
a medida ser efetuada. Coloque 2 gotas da amostra entre os prismas. Feche os prismas,
focalize e corrija o ndice de refrao obtido pela leitura da escala, conforme o clculo a
seguir.
Clculo
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP. 3. ed., 1985. p. 420.
FENAROLI, G. Sostanze Aromatiche Naturali. Milano, Italy: Editore Ulrico Hopepli,
v. 1, 1963. 1004 p.
078/IV Aromatizantes Densidade relativa a (20/20)C
Material
Termmetro, picnmetro (ou densmetro digital) e dessecador.
Procedimento Tare um picnmetro, previamente seco em estufa a 100C. Encha-o com
gua, a 20C e pese. Seque o picnmetro em estufa e coloque nele a amostra, a 20C e
pese.
Clculo
Captulo V - Aditivos
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP. 3. ed., 1985. p. 421.
FENAROLI, G. Sostanze Aromatiche Naturali. Milano, Italy: Editore Ulrico Hopepli,
v. 1, 1963. 1004 p.
079/IV Aromatizantes Vanilina e correlatos
Pesquisa em aromas contendo: vanilina, etil vanilina, maltol, etil maltol, heliotropina, cumarina, dihidrocumarina, etc.
Material
Papel Whatman n 1, (20x20) cm, cmara ultravioleta, cuba cromatogrfica com tampa,
funil de separao de 250 mL, bqueres de 50 mL, bales volumtricos de 100 mL e
microsseringa.
Reagentes
Isobutanol
Hidrxido de amnio
Padres analticos de vanilina, etil vanilina, maltol, etil maltol, heliotropina, cumarina, dihidrocumarina
Soluo-padro Prepare solues a 1% de vanilina, etil vanilina, maltol, etil maltol, heliotropina, cumarina, dihidrocumarina, em lcool.
Fase mvel Isobutanol (100 mL) e hidrxido de amnio a 2% (60 mL). Agite em funil de
separao. Decante. A camada alcolica (superior) utilizada para correr o cromatograma.
A camada aquosa (inferior) utilizada para saturar a cmara.
Procedimento Coloque a camada alcolica da fase mvel na cuba cromatogrfica. Distribua a camada aquosa da fase mvel em dois bqueres pequenos e coloque-os dentro da cuba,
um em cada extremidade. Para amostras em p, extraia com uma pequena quantidade de
lcool ou ter e filtre. As amostras lquidas no necessitam de preparao. Aplique, com auxlio
de um capilar, a amostra e os padres em pontos diferentes do papel Whatman n 1, preparado para cromatografia ascendente. Deixe secar. Coloque-o na cuba cromatogrfica contendo a
fase mvel e deixe correr at 2 cm da extremidade superior do papel. Retire e deixe secar ao ar.
Observe sob luz ultravioleta e marque as manchas obtidas. Compare com as dos padres.
IAL - 185
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos
qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP. 3. ed., 1985. p. 427-428.
080/IV Conservadores Determinao espectrofotomtrica simultnea de nitrito e
nitrato
Esse mtodo aplica-se s formulaes simples de aditivos contendo nitritos, nitratos
e cloreto de sdio. A razo das absorbncias de uma soluo aquosa de nitrito a 355 nm
e a 302 nm 2,5. O nitrato no absorve a 355 nm mas tem uma banda caracterstica
a 302 nm. A absorbncia do nitrato pode ser calculada dividindo-se a absorbncia do
nitrito a 355 nm por 2,5 e subtraindo-se o quociente do total da absorbncia a 302 nm.
Em cubeta de 1 cm, o limite de deteco para nitrito 0,02 mg/mL e 0,09 mg/mL para
nitrato. O pH da soluo no deve estar abaixo de 5 (o nitrito forma cido nitroso, com
uma absorbncia mxima a 357 nm).
Material
Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bqueres de 25 mL e bales volumtricos de
100 mL.
Reagente
Padres analticos de nitrato de sdio e nitrito de sdio
Procedimento Pese 20 g da amostra, com preciso at mg. Transfira para um balo
volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Ajuste o zero do espectrofotmetro,
em unidades de absorbncia a 302 ou 355 nm, utilizando gua como branco e cubetas de
1 cm. Mea a absorbncia da amostra a 302 e 355 nm e calcule como descrito a seguir.
Determine o teor de nitrito na amostra utilizando o valor da absorbncia a 355 nm e a
curva-padro do nitrito. Para o nitrato, divida o valor desta absorbncia por 2,5 e subtraia
do valor da absorbncia a 302 nm. Calcule a concentrao de nitrato na amostra utilizando
o valor de absorbncia resultante desta subtrao e a curva-padro do nitrato.
Curva-padro do nitrito Prepare, em uma srie de bales volumtricos de 100 mL,
diferentes concentraes de nitrito (0,025 - 0,2)g/100 mL e mea a absorbncia destas
solues a 355 nm.
186 - IAL
Captulo V - Aditivos
Captulo V - Aditivos
IAL - 189
Material
Balana analtica, balana semi-analtica, banho-maria, espectrofotmetro UV/VIS, estufa,
manta aquecedora, regulador de temperatura, suporte, garra, mufa, tubo de ltex para
condensador, bqueres de 100 e 400 mL, balo de fundo redondo com junta esmerilhada 45/50
e com capacidade para 5 L, tubo de vidro de 1,40 m de comprimento e 1,2 cm de dimetro, juntas
conectoras para frasco Erlenmeyer com presilha, frasco Erlenmeyer com junta esmerilhada
29/32 com capacidade para 500 mL, condensador tipo reto com junta esmerilhada 24/40,
funil de separao tipo pra de 250 mL, pipeta graduada de 2 mL, provetas graduadas de 25 e
200 mL, bales volumtricos de 1000, 500 e 100 mL e tubo capilar de vidro.
Reagentes
Cloreto de sdio
cido fosfrico
Sulfato de magnsio
Hidrxido de sdio
ter
cido sulfrico
cido srbico
Propanol
Acetato de etila
Hidrxido de amnio
Soluo de cido srbico 0,001% m/v Pese 0,001 g de cido srbico (C6H8O2) e dissolva
em gua suficiente para 100 mL em balo volumtrico.
Soluo de hidrxido de sdio 1 M Dissolva 4 g de hidrxido de sdio com gua em um bquer
de 100 mL, esfrie, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume.
Soluo de cido sulfrico 0,005 M Dissolva 0,3 mL de cido sulfrico em gua, esfrie,
transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume.
Soluo saturada de cloreto de sdio Adicione cloreto de sdio em 1000 mL de gua at
saturar a soluo.
Procedimento Monte o aparelho para destilao por arraste de vapor. Pese 5 g da amostra
ou mea 5 mL, se a amostra for lquida. Transfira para o frasco Erlenmeyer de 500 mL com
200 mL de soluo saturada de cloreto de sdio. Acidule com 2 mL de cido fosfrico.
Adicione 7,5 g de sulfato de magnsio. Destile cerca de 350 mL, com arraste de vapor
dgua para um bquer de 400 mL contendo 10 mL de hidrxido de sdio 1 M, inclinando
o bquer de modo a manter a extremidade do condensador imersa na soluo alcalina.
Evapore o destilado em banho-maria at reduzir o volume a 100 mL. Esfrie. Transfira para
um funil de separao, acidule e extraia com 4 pores de ter. Rena os extratos e evapore
190 - IAL
Captulo V - Aditivos
o ter sem levar secura. Dissolva o resduo em 0,5 mL de gua. Acidule a soluo aquosa
com cido sulfrico 0,005 M e aplique com capilar em papel cromatogrfico Whatman
n 4 ou equivalente, paralelamente com o padro de cido srbico a 0,001%. Coloque
em cuba cromatogrfica previamente saturada com o solvente propanol-acetato de etilahidrxido de amnio-gua (3:1:1:1) e deixe correr at 2 cm da extremidade superior do
papel. Retire e seque a 60C. Observe o cromatograma em cmara com luz ultravioleta (
255 nm). Compare as manchas da amostra e do padro.
A identificao do cido srbico, aps a extrao por arraste de vapor, tambm pode
ser realizada como descrito no mtodo colorimtrico 085/IV, utilizando o cido
tiobarbitrico.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP. 3. ed., 1985. p. 103.
084/IV Conservadores Determinao de cido srbico e sorbatos por espectrofotometria no UV
O cido srbico e seus sais podem ser quantificados em alimentos ou formulaes
de aditivos aps sua extrao. Este mtodo baseia-se na extrao do cido srbico ou de seus
sais, convertidos em cido srbico aps acidificao, por destilao com arraste de vapor e
posterior leitura espectrofotomtrica a 254 nm.
Material
Balana analtica, balana semi-analtica, banho-maria, espectrofotmetro UV/VIS, estufa,
manta aquecedora, regulador de temperatura, suporte, garra, mufa, tubo de ltex para
condensador, pHmetro, pipetador automtico de 100 a 1000 L e de 1 a 5 mL com as
respectivas ponteiras, papel de filtro qualitativo, bqueres de 25, 100 e 400 mL, balo de
fundo redondo com junta esmerilhada 45/50 e com capacidade para 5 L, tubo de vidro de
1,4 m de comprimento e 1,2 cm de dimetro, juntas conectoras para frasco Erlenmeyer
com presilha, frasco Erlenmeyer com junta esmerilhada 29/32 e com capacidade para
500 mL, condensador tipo reto com junta esmerilhada 24/40, pipeta graduada de 2 mL e
bales volumtricos de 500 e 1000 mL.
Reagentes
Cloreto de sdio
cido fosfrico
IAL - 191
Captulo V - Aditivos
Reagentes
Clorofrmio
Sulfato de sdio anidro
cido srbico
cido clordrico
Dicromato de potssio
Bicarbonato de sdio
cido sulfrico
Soluo-padro Pese, com preciso, cerca de 100 mg de cido srbico, transfira para um
balo volumtrico de 1000 mL completando o volume com gua . Esta soluo tem concentrao de 100 g/mL. Retire 1 mL desta soluo e leve para um balo volumtrico de 50 mL,
completando o volume. Esta soluo tem concentrao de 2 g/mL. Retire 5 mL da soluo
a 100 g/mL e leve para um balo volumtrico de 100 mL, completando o volume. Esta
soluo tem concentrao de 5 g/mL.
Soluo de cido clordrico (1:1) Dissolva 25 mL de cido clordrico em 25 mL de
gua.
Soluo de bicarbonato de sdio 0,5 M Dissolva 4,2 g de bicarbonato de sdio em gua,
transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua.
Soluo de dicromato de potssio Pese 0,49 g de dicromato de potssio e dissolva em
balo volumtrico de 1000 mL, com aproximadamente 500 mL de gua. Adicione 8 mL
de cido sulfrico e complete o volume com gua.
Soluo de cido tiobarbitrico a 0,5% m/v Dissolva 0,5 g de cido tiobarbitrico em
gua, aquecendo em banho-maria para dissolver, esfrie, transfira para um balo volumtrico
de 100 mL e complete o volume. Prepare na hora de usar.
Procedimento Pese , com preciso, 5 g da amostra (triture no liqidificador, se necessrio),
transfira para um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com gua. Filtre se
necessrio, e pipete 10 mL do filtrado para um funil de separao de 250 mL e extraia, por
agitao durante 1 minuto, com duas pores de 40 mL de clorofrmio (pode-se aumentar
para 4 extraes de 25 mL, se necessrio). Recolha a fase clorofrmica em balo volumtrico
de 100 mL ou outro de volume adequado, passando por um funil com sulfato de sdio anidro.
Complete o volume com clorofrmio. Pipete 25 mL desta soluo para um funil de separao de
250 mL e extraia com 15 mL de soluo de bicarbonato de sdio 0,5 M, agitando durante
1 minuto, despreze a fase clorofrmica e transfira quantitativamente a fase aquosa para um
balo volumtrico de 25 mL (pode-se aumentar para 4 extraes de 20 mL, se necessrio;
IAL - 193
nesse caso, receba o extratos em um balo volumtrico de 100 mL). Adicione cido clordrico
1:1 cuidadosamente at que a soluo fique cida e complete o volume com gua. Pipete 2
mL para um tubo de ensaio contendo 2 mL de soluo sulfrica de dicromato de potssio.
Cubra os tubos com parafilme e coloque-os em um banho de gua fervente, por 5 minutos.
Retire-os e, imediatamente, adicione 2 mL de soluo de cido tiobarbitrico, cobrindo-os
novamente com parafilme. Coloque os tubos de ensaio novamente em um banho de gua
fervente, durante 10 minutos. Retire os tubos e deixe esfriar. Faa um branco usando 2 mL
de gua em lugar da amostra. Leia a absorbncia a 530 nm e compare com uma curvapadro obtida nas mesmas condies da anlise.
Curva-padro Retire com pipetador automtico, pores de 0,5; 1; 1,5 e 2 mL da soluopadro a 2 g/mL para 4 tubos de ensaio e adicione 1,5; 1; 0,5 e 0 mL de gua, respectivamente. Estas solues contm 1, 2, 3 e 4 g de cido srbico, pela ordem. Retire, com
pipetador automtico, pores de 1; 1,2; 1,4; 1,6; 1,8 e 2 mL da soluo a 5 g/mL para
6 tubos de ensaio e adicione 1; 0,8; 0,6; 0,4; 0,2 e 0 mL de gua respectivamente. Estas
solues contm 5, 6, 7, 8, 9 e 10 g de cido srbico, pela ordem. Proceda a determinao
como descrito acima. Construa o grfico absorbncia x g cido srbico/6 mL soluo.
Nota: aps a extrao do analito, pode-se tambm fazer a quantificao por meio de
leitura direta a 254 nm da soluo aquosa final, utilizando como branco uma soluo de
bicarbonato de sdio. Outro modo de determinar o cido srbico seria a extrao deste por
arraste de vapor (como descrito no mtodo 083/IV), recolhendo o destilado e levando este
a um volume definido, se necessrio e proceda a determinao como descrito acima.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985. p. 103.
086/IV Corantes artificiais Identificao por cromatografia em papel
Material
Balana analtica, papel Whatman n 1, cuba cromatogrfica, balo volumtrico de 100
mL e capilares de vidro.
Reagentes
Citrato de sdio
Hidrxido de amnio
194 - IAL
Captulo V - Aditivos
n-Butanol
lcool
Solues-padro Prepare as solues aquosas de padres dos corantes a 1% m/v.
Fase mvel (Solvente A) Pese 2 g de citrato de sdio, transfira para um balo volumtrico
de 100 mL, adicione 20 mL de hidrxido de amnio e complete o volume com gua.
Fase mvel (Solvente B) n-butanol-lcool-gua-hidrxido de amnio (50:25:25:10).
Procedimento Prepare solues aquosas das amostras a 1%. Sobre uma folha de papel
Whatman n 1, a 2 cm da extremidade, em pontos distantes 2 cm uns dos outros, aplique
com um tubo capilar as solues das amostras e dos respectivos padres dos corantes.
Desenvolva o cromatograma com o solvente A ou B. O valor de Rf e a colorao da mancha
devem ser idnticos aos do padro. A visualizao da mancha tambm pode ser feita
luz ultravioleta, onde tem-se melhor nitidez dos contornos e, em certos casos, de algumas
manchas que no foram vistas no exame direto.
Nota: os cromatogramas feitos com os solventes A e B no levam sempre ao mesmo resultado.
Alguns corantes mudam inteiramente os valores de Rf de um para outro solvente e outros
se mostram mais puros em solvente A que em solvente B. O cromatograma com solvente
A o mais usado por ser mais rpido, apesar dos contornos das manchas no serem muito
precisos. Outros solventes tambm podem ser usados como mostra a Tabela 1.
Tabela 1 Rf e absorbncia mxima de alguns corantes artificiais permitidos em
alimentos
Corante
Classe
Bordeaux S ou
Amaranto
Azo
Eritrosina
Xanteno
Amarelo
crepsculo
Rf no solvente
B
C
D
E
Abs. Mx.(nm)
0,62
0,27
0,29
0,14
0,19
0,11
520
(em meio cido)
0,21
0,52
0,61
1,00
0,58
0,47
525
(em meio cido)
Azo
0,73
0,72
0,46
0,28
0,45
0,40
480
(em meio cido)
Tartrazina
Pirazolona
0,91
0,41
0,28
0,12
0,17
0,09
430
(em meio cido)
Indigotina
Indigide
0,52
0,27
0,25
0,14
0,20
0,30
285 e 615
(em meio cido)
IAL - 195
C = Isobutanol-lcool-gua (1:2:1)
D = n-Butanol-gua-cido actico glacial (20:12:5)
E = Isobutanol-lcool-gua (3:2:2) e 1 mL de hidrxido de amnio para 99 mL da mistura
anterior
F = Soluo de 80 g de fenol em 20 mL de gua
Referncia bibliogrfica
GAUTIER, J.A.; MALANGEAU, P. Mises au Point de Chimie Analytique Organique
Pharmaceutique et Bromatologique. 13. ed., Paris: Masson & Cie., 1964. p. 70, 71, 91.
087/IV Corantes artificiais Identificao por espectrofotometria
Material
Balana analtica, pHmetro, espectrofotmetro UV/VIS, balo volumtrico de 100 mL ,
pipeta de 1 mL e balo de 2 L.
Reagentes
cido actico
Acetato de amnio 0,02 M (pH 5,6) Pese 3,08 g de acetato de amnio e transfira para
balo volumtrico de 2 L, dilua com gua, acerte o pH da soluo para 5,6 com cido
actico e complete o volume com gua.
Procedimento Pese 0,1 g da amostra e dilua a 100 mL com uma soluo de acetato de
amnio 0,02 M (pH 5,6). Pipete 1 mL desta soluo e dilua a 100 mL com a soluo de
acetato de amnio 0,02 M. Controle o pH da soluo para 5,6. Trace o espectro do corante
no intervalo de 200 a 600 nm. Os mximos e mnimos de absoro so bem definidos, podendo variar de 2 a 3 nm. Compare com os espectros obtidos nas mesmas condies para
os corantes-padro.
Referncia bibliogrfica
JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to
specifications for general notices, general analytical techniques, identification tests,
test solutions and other reference materials. Rome, 1991. p. 114 ( FNP5/rev.2).
088/IV Corantes artificiais Quantificao por espectrofotometria
Material
Balana analtica, pHmetro, espectrofotmetro UV/VIS, bales volumtricos de 100, 200
196 - IAL
Captulo V - Aditivos
Corantes
Amarelo-crepsculo
Tartrazina
Azul-brilhante
Indigotina
Azul-patente V
Verde-slido FCF
Bordeaux S ou amaranto
Eritrosina
Ponceau 4R ou N cocina
Vermelho 40
Azorrubina ou carmoisina
INS *
Colour
Index
no
mximo do
visvel
Absoro
mxima no
visvel (nm)
110
102
133
132
131
143
123
127
124
129
122
15985
19140
42900
73015
42051
42053
16185
45430
16255
16035
14720
564,1
536,6
1640,0
449,3
2089
**
436,0
1130,0
442,5
536,0
518,6
481
426
630
610
640
625
519
524
507
505
515
Captulo V - Aditivos
Reagentes
Soluo de tricloreto de titnio 0,1 M Misture 200 mL de soluo de tricloreto de titnio
comercial a 15% com 150 mL de cido clordrico. Ferva a mistura durante 2 minutos e
resfrie em gua fria. Adicione gua at completar 2000 mL. Misture bem e borbulhe CO2
ou N2 na soluo por uma hora. Antes de padronizar, mantenha a soluo sob atmosfera de
hidrognio por pelo menos 16 horas usando um aparelho gerador Kipp.
Padronizao da soluo de tricloreto de titnio Transfira 3 g de sulfato duplo de ferro e
amnio para um frasco Erlenmeyer de 500 mL. Introduza uma corrente de gs carbnico.
Adicione 50 mL de gua recentemente fervida e 25 mL de cido sulfrico 5 M. Adicione,
rapidamente, com auxlio de uma bureta, 30 mL de soluo de dicromato de potssio 0,0167
M (no interrompa a corrente de CO2). Transfira a soluo de tricloreto de titnio para uma
bureta e coloque rapidamente no frasco Erlenmeyer at pouco acima do ponto de viragem.
Adicione rapidamente 5 mL de tiocianato de amnio a 20% e complete a titulao at que
desaparea a colorao vermelha e a soluo permanea verde. Efetue uma determinao
em branco com 3 g de sulfato duplo de ferro e amnio, utilizando as mesmas quantidades
de gua, cido e soluo de tiocianato de amnio e passe uma corrente contnua de gs
carbnico na soluo.
Clculo
IAL - 199
Figura 1 Aparelho para determinao do teor de corante por titulao com TiCl3
Clculo
200 - IAL
Captulo V - Aditivos
n de g do corante
Massa em g da
Adicionar equivalente a 1 mL
amostra a ser
15 - 10 g * da soluo-padro
usada na titulao
de TiCl3 0,1 M
0,5 0,6
0,6 0,7
0,7 0,8
0,7 0,8
0,5 0,6
0,5 0,6
1,8 1,9
1,0 1,1
1,3 1,4
1,9 2,0
Citrato
Bitartarato
Citrato
Citrato
Bitartarato
Bitartarato
Bitartarato
Bitartarato
Bitartarato
Bitartarato
0,01131
0,01356
0,01511
0,01578
0,01241
0,01256
0,03965
0,02332
0,02898
0,04045
IAL - 201
Material
Balana analtica, estufa, bquer de 400 mL, pipeta de 5 mL, placa filtrante. provetas de 10
e 50 mL, dessecador com slica gel ou cloreto de clcio anidro e basto de vidro.
Reagentes
cido ntrico (1+19)
cido ntrico (1+179)
Procedimento Estabilize a temperatura da estufa para 135C. Pese 0,25 g da amostra e
transfira com auxlio de 100 mL de gua para um bquer de 400 mL. Adicione 5 mL de
cido ntrico (1 + 19), agite com um basto de vidro, filtre em placa filtrante previamente
aquecida em estufa a 135C, resfriada em dessecador e pesada. Lave o bquer e a placa com
50 mL de cido ntrico (1 + 179) e depois com 10 mL de gua, evitando que o precipitado
seque. Seque, aquea em estufa a 135C, resfrie em dessecador e pese. Repita as operaes
de aquecimento e resfriamento at peso constante.
Clculo
N = g da substncia precipitada
P = g da amostra
Referncia Bibliogrfica
JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES.
Compendium of Food Additive Specifications. Rome , 1992. p. 573.
091/IV Corantes artificiais Determinao de substncias insolveis em gua
Material
Estufa, balana analtica, bquer de 250 mL, proveta de 200 mL, placa filtrante e dessecador
com slica gel ou cloreto de clcio anidro.
Procedimento Estabilize a temperatura da estufa para 135C. Pese 5 g da amostra, transfira para um bquer de 250 mL, com auxlio de 200 mL de gua quente (80-90)C. Agite para
dissolver o corante e deixe esfriar a soluo temperatura ambiente. Filtre a soluo atravs
202 - IAL
Captulo V - Aditivos
de uma placa filtrante (porosidade 4), previamente aquecida a 135C, por 1 hora, resfriada
em dessecador e pesada. Lave com gua fria at as guas de lavagem se tornarem incolores.
Seque o filtro com o resduo, aquea em estufa a 135C, resfrie em dessecador e pese.
Clculo
N = perda de peso em g
P = n g da amostra
Referncia bibliogrfica
JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to
specifications for general notices, general analytical techniques, identifications tests,
IAL - 203
204 - IAL
Captulo V - Aditivos
N = n de g de sulfato de brio
S = n de g da amostra usado na precipitao
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985. p.
410.
094/IV Corantes artificiais Determinao de cloretos
Material
Potencimetro, eletrodo Ag+/AgCl, balana analtica, bquer de 400 mL, proveta de
200 mL, pipeta graduada de 1 mL e bureta de 25 mL.
Reagentes
Nitrato de prata 0,1 M
cido ntrico
Procedimento Pese 0,5 g da amostra. Transfira para um bquer de 400 mL, com auxlio de
200 mL de gua. Adicione 1 mL de cido ntrico. Titule com soluo de nitrato de prata 0,1 M.
Clculo
Captulo V - Aditivos
Altura ou tempo
Vermelho 40
17 cm
Bordeaux S (Amaranto)
17 cm
Azul-brilhante
20 h
Eritrosina
17 cm
Verde-slido
Azul-indigotina
17 cm
Amarelo-tartrazina
12 cm
Amarelo-crepsculo
17 cm
Azorrubina (carmoisina)
17 cm
Azul-patente
17 cm
Ponceau 4R
17 cm
Corante
A mancha do corante subsidirio da soluo a 1% deve ser menor do que a mancha principal da soluo diluda.
Referncias bibliogrficas
JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to
specifications for general notices, general analytical techniques, identification tests,
test solutions and other reference materials. Rome, 1991. p.122.
JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITTIVES. Guide to
specifications for general notices, general analytical techniques, identification tests,
test solutions and other reference materials . Rome , 1992. p. 37, 71, 176, 219, 641,
785, 1051, 1141, 1463, 1482.
096/IV Corantes artificiais Determinao quantitativa de misturas de amarelo-crepsculo e bordeaux S
Este mtodo espectrofotomtrico aplicado para determinao das misturas dos
corantes artificiais: amarelo-crepsculo e bordeaux S e baseia-se na aditividade das absorbncias dos corantes.
IAL - 207
Material
Balana analtica, pHmetro, espectrofotmetro UV/VIS, balo volumtrico de 100 mL,
balo volumtrico de 2000 mL e pipetas volumtricas.
Reagentes
cido actico
Acetato de amnio 0,02 M Pese 3,08 g de acetato de amnio e transfira para balo
volumtrico de 2000 mL, dilua com gua, acerte o pH da soluo para 5,6 com cido
actico e complete o volume com gua.
Procedimento Pese uma quantidade adequada da amostra e faa as diluies necessrias
em acetato de amnio 0,02 M, de forma a obter leitura nos comprimentos de onda desejados. A soluo final dever estar em balo volumtrico de 100 mL. Para amostras contendo
amarelo crepsculo e bordeaux S, faa a leitura em 481 nm e 519 nm (As leituras nestes
comprimentos de onda correspondem absoro do amarelo crepsculo mais a absoro
do bordeaux S).
Tabela 5 Valores de
de onda 481 e 519 nm
Corante
Amarelo-crepsculo
Amarelo-crepsculo
Bordeaux S
Bordeaux S
533,3
325,0
291,3
438,2
Clculo
Utilize o valor de
obtidos para estes corantes nos comprimentos de onda de 481 nm
e 519 nm na equao de Lambert-Beer (Tabela 5).
208 - IAL
Captulo V - Aditivos
Referncia bibliogrfica
YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S.; BRUM, A. M. S. Determinao quantitativa
de misturas de corantes artificiais. Boletim do Instituto Adolfo Lutz, ano 6, n. 1,
p. 14-19, 1996.
097/IV Corantes artificiais Determinao quantitativa de misturas de indigotina e
bordeaux S
Procedimento Para amostras contendo indigotina e bordeaux S, faa as leituras das absorbncias em 519 nm e 610 nm. (A leitura a 519 nm, corresponder absoro do corante
indigotina mais a do bordeaux S e a 610 nm somente a do corante indigotina).
Tabela 6 Valores de
onda 519 e 610 nm
Corante
Bordeaux S
Bordeaux S
Indigotina
Indigotina
(nm)
519
610
519
610
438,2
-----060,0
447,4
Clculo
Utilize os valores de
obtidos para estes corantes nos comprimentos de onda de 519 nm
e 610 nm na equao de Lambert Beer.
IAL - 209
Referncia bibliogrfica
YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S.; BRUM, A .M. S. Determinao quantitativa de
misturas de corantes artificiais. Boletim do Instituto Adolfo Lutz, ano 6, n. 1,
p. 14-19, 1996.
098/IV Corantes artificiais Determinao quantitativa de misturas de tartrazina,
bordeaux S e indigotina
Procedimento Para amostras contendo tartrazina, bordeaux S e indigotina, faa a leitura em
426, 519 e 610 nm. Em 426 nm, ocorre a absoro da tartrazina mais bordeaux S, em 519 nm
a absoro do bordeaux mais indigotina e em 610 nm somente a absoro da indigotina.
Tabela 7 Valores de
dos corantes tartrazina, bordeaux S e indigotina, nos
comprimentos de onda 426, 510 e 519 nm
Corante
(nm)
Tartrazina
Tartrazina
Tartrazina
Bordeaux S
Bordeaux S
Bordeaux S
Indigotina
Indigotina
Indigotina
426
519
610
426
519
610
426
519
610
534,1
------100,0
438,2
------060,0
447,4
Clculo
Utilize os valores de
obtidos para estes corantes nos comprimentos de onda de 426,
519 e 610 nm na equao de Lambert Beer (Tabela 7).
210 - IAL
Captulo V - Aditivos
Referncia bibliogrfica
YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S.; BRUM, A. M. S. Determinao quantitativa
de misturas de corantes artificiais. Boletim do Instituto Adolfo Lutz, ano 6, n. 1,
p. 14-19, 1996.
099/IV Corantes artificiais Determinao quantitativa de misturas de tartrazina,
indigotina e azul brilhante
Procedimento Para misturas contendo tartrazina, indigotina e azul-brilhante, faa as
leituras da absorbncia em 426, 610 e 630 nm. No comprimento de onda 426 nm, ocorre
a absoro dos corantes tartrazina e azul-brilhante, em 610 nm a absoro da indigotina e
azul-brilhante e em 630, a da indigotina e do azul-brilhante.
dos corantes tartrazina, indigotina e azul brilhante, nos
Tabela 8 Valores de
comprimentos de onda 426, 610 e 630 nm.
Corante
(nm)
Tartrazina
Tartrazina
Tartrazina
Indigotina
Indigotina
Indigotina
Azul-brilhante
Azul-brilhante
Azul-brilhante
426
610
630
426
610
630
426
610
630
534,1
-----------447,4
357,3
062,9
1016,8
1652,0
Clculo
Utilize o valor de
obtido para estes corantes nos comprimentos de onda de 426, 610
e 630 nm na equao de Lambert-Beer.
IAL - 211
Referncia bibliogrfica
YABIKU, H. Y.; MARTINS, M. S.; BRUM, A .M. S. Determinao quantitativa de
misturas de corantes artificiais. Boletim do Instituto Adolfo Lutz, ano 6, n. 1,
p. 14-19, 1996.
100/IV Corantes artificiais Determinao quantitativa de misturas de tartrazina e
amarelo crepsculo
Procedimento Para amostras contendo tatrazina e amarelo-crepsculo, faa a leitura em
426 e 481 nm, pois nestes comprimentos de onda ocorre a absoro dos dois corantes.
Tabela 9 Valores de
de onda 426 e 481 nm.
Corante
Tartrazina
Tartrazina
Amarelo-crepsculo
Amarelo-crepsculo
535
170
221
592
Clculo
Utilize os valores de
obtidos para estes corantes nos comprimentos de onda de 426 e
481 nm na equao de Lambert-Beer.
Referncia bibliogrfica
TAKAHASHI, M. Y.; YABIKU, H.Y.; MARSIGLIA, D.A.P. Determinao quantitativa
de corantes artificiais em alimentos. So Paulo, Rev. Inst. Adolfo Lutz, v. 48,
p. 7-15, 1988.
212 - IAL
Captulo V - Aditivos
IAL - 213
214 - IAL
Captulo V - Aditivos
Captulo V - Aditivos
Clculo
A = absorbncia a 525 nm
P= massa da amostra em g
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.613: Coletnea de
normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
104/IV Corantes naturais Identificao de carmim de cochonilha
O corante carmim de cochonilha a laca de alumnio ou clcio-alumnio obtido
a partir do extrato aquoso dos corpos dessecados das fmeas de insetos Dactylopius coccus
costa (Coccus cacti L). Seu principal constituinte o cido carmnico (cido 7-beta-d-gluco
piranosil-3,5,6,8-tetra-hidroxi-1-metil-9,10-dioxo-antraceno-2-carboxlico), o qual pode
ser comercializado na forma de soluo (corante natural cido carmnico) ou na forma de
laca de alumnio ou clcio-alumnio (corante natural carmim de cochonilha). O corante carmim de cochonilha apresenta-se na forma de p frivel, de colorao vermelha ou
vermelha-escura ou soluo de colorao vermelha-violcea. O carmim deve apresentar no
mnimo 42% de cido carmnico, calculado em base seca.
Material
Chapa eltrica, bqueres de 25 mL, bales volumtricos de 100 e 1000 mL, pipeta graduada de 1 mL, funil de separao, pipeta graduada de 5 mL e proveta graduada de 500 mL.
Reagentes
Hidrxido de sdio ou hidrxido de potssio
Cristais de ditionito de sdio - Na2S2O4
cido sulfrico
cido clordrico
lcool amlico
ter de petrleo
IAL - 217
Acetato de uranila
Soluo aquosa de hidrxido de sdio ou hidrxido de potssio a 10%
Soluo aquosa de cido clordrico a 10% v/v Dilua 266 mL de HCl com gua em um
balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume.
Soluo aquosa de acetato de uranila a 5% m/v Pese 5 g de acetato de uranila, transfira
para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua.
Procedimentos
1. Alcalinize levemente uma disperso aquosa da amostra pela adio de uma gota
de soluo de hidrxido de sdio ou hidrxido de potssio a 10%. Forma-se uma
colorao violeta.
2. A adio de pequena quantidade de cristais de ditionito de sdio s solues da amostra,
em meio cido, neutro ou alcalino, no descora a soluo.
3. Leve secura, em banho-maria, uma pequena quantidade da amostra em cpsula de
porcelana. Esfrie totalmente e trate o resduo seco com uma ou duas gotas de cido sulfrico
concentrado. No se observa alterao da cor.
4.Transfira uma disperso aquosa da amostra para um funil de separao, cuja capacidade
seja trs vezes o volume da disperso. Adicione 1/3 do volume (correspondente ao da disperso) de soluo de cido clordrico a 10% v/v e agite. Adicione lcool amlico de maneira a
dobrar o volume do contedo do funil de separao e agite. Deixe separar e despreze a fase
aquosa (inferior). Lave a fase amlica 2 a 4 vezes com gua para eliminar resduos de cido
clordrico. Dilua a fase amlica com igual volume de ter de petrleo e agite. Adicione uma
pequena quantidade de gua (cerca de 1/6 do volume total). Adicione gota a gota soluo
de acetato de uranila a 5%, agitando aps cada adio. Forma-se uma colorao verdeesmeralda caracterstica, na fase inferior.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.616: Coletnea de
normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
218 - IAL
Captulo V - Aditivos
princpio ativo principal a curcumina (um corante amarelo-alaranjado) cujo teor geralmente varia de 1 a 5% nos produtos vendidos comercialmente.
Material
Placa de toque, pipeta graduada de 5 mL, bquer de 25 mL., banho-maria, papel de filtro,
funil de vidro, tubo de ensaio, bquer de 125 mL, proveta graduada de 50 mL e basto de
vidro.
Reagentes
cido sulfrico
lcool
cido brico
cidos oxlico
cido actico
Procedimentos
1. Acidifique levemente a amostra em p, com cido sulfrico: aparece uma colorao
vermelha-intensa.
2. A adio de lcool na amostra em p, extrai o corante amarelo.
3. Extraia algumas gramas da amostra com 20 mL de cido actico em um bquer de 125
mL. Agite com um basto de vidro. Filtre para um tubo de ensaio e coloque em banho
fervente, por alguns minutos. Uma colorao vermelha indica a presena de crcuma.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
TAKAHASHI, M. Y.; INOMATA, E.I.; YABIKU, H. Y.; GIANNATTASIO, C.M.P.
Beta-caroteno, urucum e crcuma em massas alimentcias vitaminadas com ovos. Rev. do
Inst. Adolfo Lutz, 50(1/2), p. 257-260, 1990.
107/IV Corantes naturais Determinao do teor de curcumina na crcuma
Material
Balana analtica, chapa eltrica, espectrofotmetro UV/VIS, balo de extrao com fundo
chato de 100 mL e junta esmerilhada, condensador de bolas de 30 a 40 cm com junta esmerilhada, bquer de 25 mL, bales volumtricos de 100 e 250 mL, pipeta volumtrica de
220 - IAL
Captulo V - Aditivos
= 1607.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.624: Coletnea de
normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
108/IV Corantes naturais Identificao de curcumina
A curcumina em p obtida por extrao dos rizomas da Crcuma longa L. com
solventes e posterior purificao do extrato por cristalizao. Possui colorao de alaranjada
amarela e deve conter no mnimo 90% de pureza. insolvel em gua e em ter e solvel
em lcool e cido actico glacial.
Material
Pipetas graduadas de 10 mL, bquer de 25 mL e basto de vidro.
Reagentes
lcool
IAL - 221
cido sulfrico
Procedimento
Dissolva a amostra em lcool e observe a cor amarela e a fluorescncia esverdeada. Adicione
cido sulfrico e verifique a formao de intensa colorao carmesim.
Referncia bibliogrfica
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
109/IV Corantes naturais Identificao de curcumina por cromatografia em camada
delgada
Material
Balana analtica, placas de celulose microcristalina de 0,1 mm, cmara ultravioleta, cuba de
vidro para cromatografia, provetas graduadas de 100 mL, pipeta graduada de 1 mL e bquer de
5 mL.
Reagentes
lcool a 95%
3-Metil-1-butanol
Hidrxido de amnio
Fase mvel: 3-metil-1-butanol:lcool:gua:hidrxido de amnio (4:4:2:1).
Procedimento Sature a cuba de vidro com a fase mvel. Pese 0,01 g da amostra e adicione 1 mL de lcool a 95%. Aplique 5 L da soluo da amostra na placa de celulose
microcristalina de 0,1 mm. Coloque a placa na cuba de vidro e deixe correr cerca de 15 cm.
Examine luz do dia e sob luz ultravioleta: trs manchas amarelas aparecem entre Rf 0,2 e
0,4, luz do dia e manchas com Rf cerca de 0,6 e 0,8 aparecem sob luz ultravioleta; todas as
manchas apresentam distintas fluorescncias amarelas sob luz ultravioleta.
222 - IAL
Captulo V - Aditivos
Referncia bibliogrfica
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
110/IV Corantes naturais Determinao do teor de curcumina
Material
Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bales volumtricos de 100 e 200 mL, pipeta volumtrica de 1 mL, bquer de 10 mL.
Reagente
lcool
Procedimento Pese, com preciso, cerca de 0,08 g da amostra, transfira para um balo volumtrico de 200 mL, com auxlio de lcool, agite para dissolver e complete o volume com o mesmo solvente. Pipete 1 mL para um balo volumtrico de
100 mL e complete o volume com lcool. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em
unidades de absorbncia a 425 nm, utilizando lcool como branco e cubetas de
1 cm. Mea a absorbncia da amostra a 425 nm.
Clculo
Calcule o teor de matria corante total na amostra, usando o valor de absortividade
= 1607.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.624: Coletnea de
normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
111/IV Corantes naturais Identificao de urucum lipossolvel
Extratos de urucum so os produtos oleosos (urucum lipossolvel) ou alcalinos (urucum hidrossolvel) obtidos por remoo da camada externa das sementes da rvore de
urucum (Bixa orellana L). Tambm pode-se encontrar o pigmento bruto na forma de p, de
IAL - 223
colorao vermelha-escura, obtido pela extrao mecnica das sementes. O extrato de urucum lipossolvel, de cor vermelha a castanho-avermelhada, contm diversos componentes
coloridos, sendo o principal a bixina.
Material
Coluna de vidro de 1 cm de dimetro e 8 a 10 cm de altura, bqueres de 150 mL, provetas
de 10 mL, pipetas de 5 mLe espectrofotmetro UV/VIS.
Reagentes
cido sulfrico
Ciclohexano
Clorofrmio, desidratado com carbonato de potssio anidro
Alumina para coluna cromatogrfica
Tricloreto de antimnio
Sulfato de sdio anidro
L de vidro
Reativo de Carr-Price Pese 25 g de tricloreto de antimnio, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com clorofrmio. Deixe em repouso por um
dia, em frasco bem fechado e em geladeira. O frasco no deve ser aberto enquanto a soluo
estiver gelada.
Procedimento Dissolva uma quantidade da amostra em ciclohexano de modo a se obter
uma colorao semelhante de uma soluo de dicromato de potssio a 0,1%. Prepare uma
coluna de 1 cm de dimetro e 8 a 10 cm de altura com emulso de alumina em ciclohexano e tampo de l de vidro na extremidade afilada da coluna de vidro. Escoe lentamente o
solvente. Passe pela coluna a soluo da amostra obtida anteriormente. Lave 3 vezes com 10
mL de ciclohexano sem deixar secar a coluna. A bixina fortemente adsorvida pela alumina
na parte superior da coluna e forma uma zona vermelho-alaranjada brilhante (o que a diferencia da crocetina). Uma zona de cor amarela-plida migra atravs da coluna e eliminada
na lavagem com ciclohexano. Elua a coluna trs vezes com 5 mL de clorofrmio. A zona da
bixina adsorvida no eluda em ciclohexano, ter de petrleo, clorofrmio, acetona, lcool
e metanol (com os dois ltimos solventes, a cor passa laranja). Quando a ltima poro for
eluda, adicione 1 mL do reativo de Carr-Price. A bixina adsorvida torna-se imediatamente
azul-esverdeada, diferente da crocetina que ficaria vermelha.
Notas
O extrato de urucum lipossolvel insolvel em gua e pouco solvel em lcool.
Os extratos de urucum reagem em cido sulfrico dando colorao azulada devida bixina.
224 - IAL
Captulo V - Aditivos
Captulo V - Aditivos
Notas
O extrato de urucum hidrossolvel pouco solvel em lcool.
Os extratos de urucum reagem com cido sulfrico dando colorao azul-esverdeada devido
norbixina.
O extrato de urucum hidrossolvel diludo com gua apresenta absorbncia mxima a 453
e 483 nm.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.634: Coletnea de
normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
114/IV Corantes naturais Determinao do teor de norbixina
Material
Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bqueres de 25 mL, bales volumtricos de
100, 500 e 1000 mL e pipeta volumtrica de 1 mL.
Reagentes
Hidrxido de potssio
Soluo aquosa de hidrxido de potssio a 0,5% Pese 5 g de hidrxido de potssio e
transfira para um balo volumtrico de 1000 mL.
Procedimento Pese, com preciso, cerca de 0,1 g do corante em p, transfira para um balo volumtrico de 500 mL com Hidrxido de potssio 0,5% e complete o volume. Pipete
1 mL desta soluo para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume comHidrxido de potssio 0,5%. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia a
453 nm, utilizando a soluo de Hidrxido de potssio 0,5% como branco e cubetas de
1 cm. Leia em espectrofotmetro a 453 nm.
Clculo
Calcule o teor de carotenides totais expresso em norbixina usando o valor de absortividade
= 3473.
IAL - 227
Nota: para expressar o resultado em bixina, deve-se multiplicar o teor de norbixina encontrado
pelo fator 1,037.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
YABIKU, H. Y.; TAKAHASHI, M. Y. Determinao de bixina em sementes de urucum:
estudo colaborativo. Rev. do Inst. Adolfo Lutz, 52(1/2), p. 31-36, 1992.
115/IV Corantes naturais Identificao de corante caramelo
Este mtodo se aplica misturas de aditivos e bebidas.
Material
Balana analtica, bquer de 100 mL, funil, papel de filtro, proveta graduada de 10 mL,
proveta graduada de 50 mL com tampa de vidro esmerilhada, tubo de ensaio e pipetas
graduadas de 2 e 5 mL.
Reagentes
xido de magnsio
Acetato neutro de chumbo
Mistura de lcool butlico-ter de petrleo (1:5)
Resorcina a 5% em cido clordrico, preparada no dia do uso
Procedimento Adicione 1 g de acetato neutro de chumbo e 0,5 g de xido de magnsio a 50 mL da amostra, evaporando antes o lcool quando for o caso. Agite bem.
Filtre, recolha de 30 a 35 mL do filtrado em uma proveta com tampa de vidro esmerilhada. Adicione 10 mL da mistura lcool-ter. Agite com cuidado (abrindo vez por
outra o frasco) durante 5 minutos. Deixe em repouso. Retire, com uma pipeta, 5 mL
da camada etrea para um tubo de ensaio. Adicione 2 mL de soluo de resorcina, de
tal modo que escorra pelas paredes do tubo at o fundo. Na presena de caramelo, na
zona de contato das duas camadas forma-se um anel vermelho.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
228 - IAL
Captulo V - Aditivos
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985.
p. 114.
116/IV Corante caramelo processo amnio Determinao da intensidade de cor
O corante caramelo obtido pelo processo amnio composto por substncias resultantes do tratamento trmico de carboidratos, em presena de hidrxido de amnio,
por tecnologia adequada. Apresenta-se na forma de lquido denso de cor marrom-escura a
preta, tendo odor caracterstico de acar queimado e sabor amargo. So solveis em gua,
solues diludas de lcool, cidos minerais, solues de hidrxido de sdio e insolveis em
lcool absoluto, acetona, ter de petrleo e clorofrmio. A intensidade de cor definida
como a absorbncia de uma soluo a 0,1% m/v, a 610 nm em cubeta de 1 cm, calculada
sobre o contedo de slidos. Para o corante caramelo processo amnio, esta intensidade de
cor deve estar entre 0,08 e 0,36.
Material
Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, centrfuga, bquer de 50 mL e bales volumtricos de 100 mL.
Procedimento Pese 100 mg a amostra em bquer de 50 mL, dissolva em gua e transfira
para um balo volumtrico de 100 mL. Complete o volume e homogeneze. Se a soluo
ficar turva, centrifugue. A soluo no pode ser filtrada. Ajuste o zero do espectrofotmetro,
em unidades de absorbncia, a 610 nm, utilizando gua como branco e cubetas de 1 cm.
Mea a absorbncia da soluo a 610 nm.
Clculo
230 - IAL
Captulo V - Aditivos
cido sulfanlico a 0,5% em cido clordrico a 2% m/v Pese 0,5 g de cido sulfanlico,
transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com soluo aquosa
de cido clordrico a 2% v/v.
Soluo de carbonato de sdio a 20% m/v Pese 20 g de carbonato de sdio, transfira para
um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua.
Preparao das placas Prepare placas de vidro com uma mistura de slica gel GF 254 e
duas partes de soluo aquosa de bicarbonato de sdio a 8%. Seque as placas ao ar livre e
coloque-as em estufa a 120C, durante 2 horas. Deixe saturando na cuba de vidro com o
solvente: ter-clorofrmio-metanol (80:20:20).
Revelador Misture, imediatamente antes de usar, uma parte da soluo de nitrito de sdio
a 0,5% e uma parte de soluo de cido sulfanlico a 0,5% em cido clordrico a 2%.
Extrao em coluna de Celite 545 Coloque um tampo de l de vidro no fundo de uma
coluna cromatogrfica de (25 x 250)mm, com torneira de teflon. Sobre a mesma, coloque
uma mistura de 3 g de Celite e 2 mL de hidrxido de sdio 2 M. A coluna deve ficar firme
e uniformemente compactada. Pese 10 g de corante caramelo num bquer e adicione 6 mL
de soluo aquosa de carbonato de sdio a 20%, misturando bem. Adicione 10 g de Celite,
homogeneizando bem. Coloque todo o contedo sobre o empacotamento da coluna. Limpe o bquer com um grama de Celite e transfira para a coluna. Coloque um tampo de l
de vidro no topo da mesma. A coluna deve estar firmemente compactada, sem rachaduras.
Elua a coluna com uma mistura de clorofrmio-lcool (80:20) v/v, com uma vazo de aproximadamente 5 mL/min at obter 125 mL do eludo. Se necessrio, use vcuo nesta operao. Transfira o eludo para um funil de separao de 125 mL e extraia com 25 mL de cido
sulfurico 0,025 M e depois com mais 5 mL. Transfira os extratos obtidos para o frasco de
um rotavapor e concentre at 5 mL aproximadamente. Controle a temperatura do banho
para que no exceda 55C. A parte final da concentrao deve ser cuidadosamente controlada a fim de que no haja carbonizao. Transfira o concentrado para um balo volumtrico
de 10 mL, lavando o frasco com vrias pores de 1 mL de gua e complete o volume. Na
hora de aplicar sobre a placa, trate a soluo obtida com pequenas pores de carbonato de
sdio slido at que no d mais efervescncia e a soluo esteja alcalina (pH 9).
Procedimento Aplique, sobre a placa, 2 L das solues-padro de 4-metilimidazol contendo 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700 e 800 mg/kg. Desenvolva o cromatograma com
a mistura ter-clorofrmio-metanol (80:20:20) at que o solvente tenha atingido aproximadamente 15 cm. Retire a placa, seque temperatura ambiente e borrife com o revelador.
Compare a intensidade da cor da mancha amarela-alaranjada obtida com as manchas dos
padres de concentrao conhecida. As manchas permanecem estveis por 30 min, clareando
em seguida.
232 - IAL
Captulo V - Aditivos
Clculo
Quando o limite de 4-metilimidazol expresso baseando-se na equivalncia de cor,
a concentrao primeiramente calculada sobre o contedo de slidos Cs, usando-se a
frmula:
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.66013.661: Coletnea de normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
120/IV Corante caramelo processo sulfito/amnio Determinao de slidos
Procedimento Siga o mesmo procedimento descrito em 117/IV.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.660: Coletnea de
normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
121/IV Corante caramelo processo sulfito/amnio Determinao do 4-metilimidazol (MEI)
Procedimento Siga o mesmo procedimento descrito em 0118/IV.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
JOINT FAO/WHO EXPERT COMMITTEE ON FOOD ADDITIVES. Compendium of Food Additive Specifications. Rome, 1992. p. 346, 349.
122/IV Corantes naturais Identificao de beta-caroteno
Beta-caroteno idntico ao natural um carotenide obtido por sntese qumica. 0,6
g de beta-caroteno correspondem a uma unidade internacional de vitamina A. Apresentase na forma de ps (cristais vermelhos ou p cristalino) ou suspenso. Pode ser adicionado
de antioxidantes permitidos. Os cristais so insolveis em gua, praticamente insolveis em
lcool e metanol, mas pouco solveis em leo vegetal.
234 - IAL
Captulo V - Aditivos
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, aparelho medidor de ponto de fuso, bqueres de 25 mL
Reagentes
ter de petrleo
lcool
Procedimentos
1. O espectro de absoro da soluo da amostra, em ter de petrleo, apresenta picos de
absoro mximo em 475, 448 e 450 nm. Em lcool, apresenta absores em 475, 449 e
427 nm.
2. O intervalo de fuso da amostra varia entre (178-184)oC, com decomposio.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.669: Coletnea de
normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
123/IV Carotenides lipossolveis (preparaes a 30%) Determinao do teor de
beta-caroteno
Material
Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bquer de 25 mL, bales volumtricos de
100 mL e pipeta volumtrica de 20 mL.
Reagente
ter de petrleo
Procedimento Pese, com preciso, cerca de 50 mg da amostra, dissolva em ter de
petrleo, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com o
mesmo solvente. Transfira uma alquota de 20 mL para outro balo volumtrico de 100 mL
e complete o volume. Ajuste o zero do espectrofotmetro, em unidades de absorbncia, a
IAL - 235
448 nm, utilizando ter de petrleo como branco e cubetas de 1 cm. Mea a absorbncia
da amostra a 448 nm.
Nota: Os ensaios devem ser feitos com a maior rapidez possvel, evitando exposio demasiada ao ar e luz. Utilize vidraria de baixa permeabilidade aos raios actnicos.
Clculo
Calcule a porcentagem de beta-caroteno usando
= 2592.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.670: Coletnea de
normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
124/IV Carotenides hidromiscveis (preparaes com 10%) Determinao do teor
de beta-caroteno
Material
Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, bquer de 50 mL, funil de separao de
250 mL, pipeta volumtrica de 20 mL, bales volumtricos de 100 e 500 mL, provetas
de 100 e 200 mL e frasco Erlenmeyer de 250 mL.
Reagentes
ter de petrleo
Acetona
Sulfato de sdio anidro
Procedimento Pese, com preciso, cerca de 70 mg de amostra, transfira para um balo
volumtrico de 500 mL com auxlio de gua, disperse totalmente e complete o volume.
Transfira uma alquota de 20 mL para um funil de separao, adicione 80 mL de acetona e
agite por 5 min. Adicione 60 mL de ter de petrleo, seguido de gua para auxiliar a transferncia do pigmento para a fase de ter. Aps a separao das fases, descarte a fase inferior.
Lave 3 vezes com aproximadamente 150 mL de gua. Recolha em frasco Erlenmeyer contendo sulfato de sdio anidro para retirar gotas de gua. Transfira para um balo volumtrico
236 - IAL
Captulo V - Aditivos
= 2592.
Referncias bibliogrficas
TAKAHASHI, M. Y. (coord.). Monografias de corantes naturais para fins alimentcios:
padres de identidade e qualidade. 2. ed., So Paulo, 1987. 114 p.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13.671: Coletnea de
normas de corantes naturais para fins alimentcios. So Paulo, 1996.
125/IV Edulcorantes Determinao de acesulfame-K por cromatografia lquida de
alta eficincia
Este mtodo aplicado para a determinao de acesulfame-K em adoantes.
Material
Balana analtica, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector de ultravioleta, coluna analtica Lichrospher 100 RP-18 (5m) ou equivalente, integrador, bales volumtricos
de 100, 200 e 1000 mL, pipeta de 5 mL, membranas filtrantes descartveis de 0,45 m,
bomba de vcuo, sistema de filtrao da fase mvel e seringa de vidro de 5 mL.
Reagentes
Metanol grau CLAE
Hidrogenosulfato de tetrabutil amnio - C16H37NO4S
gua ultra-pura
Soluopadro estoque de acesulfame-K Pese, com preciso, 100 mg de acesulfame-K e
transfira para balo volumtrico de 200 mL. Dissolva o acesulfame-K em gua e complete
o volume.
Soluo-padro de trabalho do acesulfame-K Pipete 5 mL da soluo-estoque para balo
IAL - 237
volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Filtre atravs de membranas filtrantes de 0,45 m, antes de injetar no cromatgrafo.
Fase mvel: metanol-soluo aquosa de hidrognio sulfato de tetrabutilamnio 0,01M
(35:65) Pese 3,3954 g de hidrognio sulfato de tetrabutil amnio e transfira para um
balo volumtrico de 1000 mL. Misture 650 mL da soluo com 350 mL de metanol,
homogeneze, filtre atravs de membranas de 0,45 m e degaseifique.
Procedimento Pese uma quantidade de amostra que contenha aproximadamente
2,5 mg de acesulfame-K. Dissolva em gua e transfira para balo volumtrico de
100 mL, completando o volume com gua. Filtre atravs de membranas filtrantes de
0,45 m, antes de injetar no cromatgrafo. Ajuste o comprimento de onda do detector
para 227 nm e o fluxo da fase mvel para 0,6 mL/min. Injete 5 L da soluo-padro
de trabalho no cromatgrafo, ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a
operao em triplicata para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser superior a
2%. Injete 5 L da amostra em triplicata.
Clculo
Calcule o teor de acesulfame-K na amostra analisada por meio das reas dos picos obtidos
nos cromatogramas.
238 - IAL
Captulo V - Aditivos
Material
Balana analtica, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector ultravioleta, coluna
analtica Lichrospher 100 RP-18 (5 m) ou equivalente, integrador, bales volumtricos
de 100 e 200 mL, pipeta volumtrica de 10 mL, bquer de 10 mL, provetas de 50 e 100
mL, membranas filtrantes descartveis de 0,45 m, bomba de vcuo, pHmetro, sistema de
filtrao da fase movel e seringa de vidro de 5 mL.
Reagentes
Acetonitrila grau CLAE
gua ultra-pura
Fosfato de potssio monobsico
cido fosfrico
Metanol
Soluo-estoque de aspartame Pese, com preciso, aproximadamente 140 mg de aspartame, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e dissolva em metanol ou gua com
auxlio do ultra-som, e complete o volume com metanol ou gua. O padro deve ser preparado mensalmente.
Soluo-padro de trabalho de aspartame Pipete 10 mL da soluo-estoque e dilua com
gua para um balo volumtrico de 100 mL. Prepare no dia de uso. Filtre atravs de membranas filtrantes de 0,45 m, antes injetar no cromatgrafo.
Fase mvel: tampo fosfato pH 3,5-acetonitrila (9:1) Pese 3,3913 g de fosfato de potssio
monobsico e transfira para balo volumtrico de 2000 mL, dilua em gua e acerte o pH
para 3,5 com cido fosfrico, homogeneze e complete o volume. Misture 1800 mL desta
soluo-tampo com 200 mL de acetonitrila. Homogeneze, filtre atravs de membranas de
0,45 m e degaseifique.
Procedimento Ajuste o comprimento de onda do detector para 214 nm e o fluxo da fase
mvel para 1,5 mL/min.
Refrigerantes Degaseifique em ultra-som e passe em membranas filtrantes de 0,45 m.
Dilua, em gua se necessrio.
Adoante lquido e em p Pese uma quantidade de amostra que contenha aproximadamente 14 mg de aspartame, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Filtre em membranas filtrantes de 0,45 m. Injete 5 L da soluopadro
de trabalho no cromatgrafo ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a
IAL - 239
operao em triplicata para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser maior que
2%. Injete 5 L da amostra em triplicata.
Clculo
Calcule o teor de edulcorante na amostra analisada por meio das reas dos picos obtidas nos
cromatogramas.
Captulo V - Aditivos
Material
Balana analtica, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector de ultravioleta, coluna analtica Lichrospher 100 RP 18 (5 m) ou equivalente, integrador, ultra-som, bales
volumtricos de 100 e 1000 mL, pipeta de 10 mL, membranas filtrantes descartveis de
0,45 m, bomba de vcuo, seringa de vidro de 5 mL e sistema de filtrao de fase mvel.
Reagentes
Metanol grau CLAE
Hidrxido de sdio
gua ultra-pura
Soluo-padro estoque de esteviosdio Pese, com preciso, 200 mg de esteviosdeo e
transfira para balo volumtrico de 100 mL. Dissolva em gua no ultra-som e complete o
volume. Prepare o padro todo ms.
Soluo-padro de trabalho de esteviosdeo Pipete 10 mL da soluo-estoque para balo
volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. Prepare no dia do uso.
Fase mvel: metanol-soluo aquosa de hidrxido de sdio 5 mM (65:35) Pese 0,1125 g
de hidrxido de sdio e transfira para balo volumtrico de 500 mL e complete o volume
com gua. Misture 350 mL desta soluo com 650 mL de metanol, homogeneze, filtre
atravs de membranas de 0,45 m e degaseifique.
Procedimento Pese uma quantidade de amostra que contenha, aproximadamente, 20
mg de esteviosdeo. Dissolva em gua, transfira para balo volumtrico de 100 mL e complete o volume. Ajuste o comprimento de onda do detector para 210 nm e o fluxo para
1,0 mL/min.Filtre em membranas filtrantes descartveis de 0,45 m. Injete 10 L da
soluo-padro de trabalho no cromatgrafo ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a operao em triplicata para verificar a repetitividade. A diferena no deve
ser maior que 2%. Injete 10 L da amostra em triplicata.
Clculo
Calcule o teor de esteviosdeo na amostra analisada por intermdio das reas dos picos
obtidos nos cromatogramas.
IAL - 241
Captulo V - Aditivos
mL/min, estabilize o detector de ndice de refrao. Pese uma quantidade de amostra que
contenha aproximadamente 0,24 g de sorbitol ou de manitol. Dissolva em gua e transfira
para balo volumtrico de 50 mL, completando o volume. Filtre atravs de membranas
filtrantes de 0,45 m, antes de injetar no cromatgrafo. Injete 5 L da soluo-padro de
trabalho no cromatgrafo ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a operao em triplicata para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser maior que 2%.
Injete 5 L da amostra em triplicata.
Clculo
Calcule o teor de poliol na amostra analisada por meio das reas dos picos obtidos nos
cromatogramas.
IAL - 243
Reagentes
Acetonitrila grau CLAE
gua ultra-pura
Fosfato de potssio monobsico
cido fosfrico
Soluo-padro estoque de sacarina Pese, com preciso, 100 mg de sacarina transfira para
balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com gua.
Soluo-padro de trabalho de sacarina Pipete 4 mL da soluo-estoque e dilua com gua
para balo volumtrico de 200 mL. Filtre atravs de membranas filtrantes de 0,45 m, antes
de injetar no cromatgrafo.
Fase mvel: tampo fosfato pH 3,5-acetonitrila (9:1) Pese 3,3913 g de fosfato de potssio
monobsico e transfira para balo volumtrico de 2000 mL, dilua em gua e acerte o pH
para 3,5 com cido fosfrico, homogeneze e complete o volume. Misture 1800 mL da
soluo-tampo com 200 mL de acetonitrila, homogeneze, filtre atravs de membranas de
0,45 m e degaseifique.
Procedimento Ajuste o comprimento de onda do detector para 214 nm e o fluxo da fase
mvel para 0,4 mL/min. Pese uma quantidade de amostra que contenha aproximadamente 1,6 mg de sacarina. Dissolva em gua e transfira para balo volumtrico de 200 mL.
Filtre em membranas filtrantes de 0,45 m. Injete 5 L da soluo-padro de trabalho
no cromatgrafo ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a operao em
triplicata para verificar a repetitividade. A diferena no deve ser maior que 2%. Injete 5 L
da amostra em triplicata.
Clculo
244 - IAL
Captulo V - Aditivos
Referncia bibliogrfica
ABREU, R.W., OLIVEIRA, I.R.; ZENEBON, O. Quantificao de aspartame por cromatografia lquida de alta resoluo (CLAR) em ps para o preparo de sobremesas. Rev. Inst.
Adolfo Lutz, 53 (1/2), p. 77-80, 1993.
131/IV Edulcorantes Determinao de sucralose por cromatografia lquida de alta
eficincia
Este mtodo aplicado para a determinao da sucralose pura e em adoantes.
Material
Balana analtica, cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector de ndice de refrao, coluna analtica (Lichrospher 100 RP-18 ou equivalente), integrador, membranas
filtrantes descartveis de 0,45 m de dimetro de poro ou equivalente, filtros descartveis
de 0,45 m de dimetro de poro ou equivalente, bomba de vcuo para filtrao da fase mvel, bales volumtricos de 25 e 1000 mL, proveta de 200 mL, seringas de vidro de 5 mL,
sistema de filtrao de fase mvel (Millipore ou equivalente).
Reagentes
Acetonitrila grau CLAE
gua ultra pura
Padro analtico de sucralose
Fase mvel Adicione 150 mL de acetonitrila a 850 mL de gua. Homogeneze, filtre
atravs de membranas de 0,45 m e degaseifique.
Soluo-padro Pese, com preciso, 100 mg de sucralose em um balo volumtrico de
100 mL. Dissolva e complete o volume com a fase mvel. Filtre com filtros de 0,45 m.
Procedimento Pese uma quantidade da amostra que contenha aproximadamente
100 mg de sucralose. Transfira para balo volumtrico de 100 mL, dissolva e complete
o volume com a fase mvel. Filtre com filtros de 0,45 m. Ajuste o fluxo da fase mvel
para que o tempo de reteno da sucralose esteja em torno de 9 minutos (geralmente 1,5
mL/min). Trabalhe em temperatura ambiente. Injete 20 L do padro no cromatgrafo
ajustado s condies experimentais estabelecidas. Efetue a operao em triplicada para
verificar a repetitividade. A diferena no deve ser maior que 2%. Injete 20 L da amostra
em triplicata.
IAL - 245
Clculo
Calcule o teor de edulcorante na amostra analisada por meio das reas dos picos obtidos
nos cromatogramas.
Captulo V - Aditivos
Procedimento Pese 50 g da amostra. Adicione 150 mL de dioxano, coloque em tubo de centrifuga e extraia usando centrifugao a 1800 rpm para separar o solvente. Extraia novamente o resduo
com 30 mL de ter, agitando vigorosamente. Decante o ter. Seque o resduo em banho-maria. Adicione 50 mL de gua a 80C. Agite vigorosamente a fim de dispersar o resduo. Adicione 20 mL de
cido tricloroactico a 50%. Agite. Centrifugue a 1200 rpm, durante 10 minutos. Decante a soluo
atravs de papel de filtro para outro tubo de centrifugao. Adicione 100 mL de lcool e 1 mL da
soluo saturada de cloreto de sdio. Deixe em repouso durante a noite. Havendo formao de precipitado, h presena de goma. Decante. Purifique o precipitado dissolvendo novamente em 30 mL de
gua a 80C e reprecipite com lcool e soluo saturada de cloreto de sdio. Decante, despreze o lcool
e redissolva o precipitado em gua a 80C, resfrie, e use esta soluo para as reaes de identificao.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 121.
133/IV Espessantes Extrao de gomas em formulaes de aditivos
Material
Balana semi-analtica, banho-maria, provetas graduadas de 50, 100 e 200 mL, pipeta
graduada de 1 mL, bquer de 500 mL e vidro de relgio.
Reagentes
lcool
Cloreto de sdio
Soluo aquosa saturada de cloreto de sdio Utilize o sobrenadante.
Procedimento Pese 10 g da amostra, aumentando ou diminuindo essa quantidade se
o teor de goma for menor ou maior que 1% e dissolva em 100 mL de gua a 80C em um
bquer de 500 mL. Adicione, com agitao, 1 mL de soluo saturada de cloreto de sdio
e 300 mL de lcool. Se houver precipitao, indica a presena de gomas. Deixe em repouso
durante a noite, cobrindo o bquer com vidro de relgio. Decante. Purifique o precipitado
redissolvendo em 100 mL de gua a 80C, e reprecipitando com lcool e soluo saturada
de cloreto de sdio como anteriormente. Decante, despreze a fase alcolica, redissolva o
precipitado em gua a 80C, resfrie, e use esta soluo para as reaes de identificao.
IAL - 247
Captulo V - Aditivos
Procedimentos
1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 0132/IV
ou 0133/IV ou a 5 mL de uma soluo a 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo
saturada de cloreto de brio. H a formao de um precipitado branco gelatinoso.
2. Adicione algumas gotas de azul de metileno a 0,5%.m/v. A precipitao de fibras coloridas
de prpura indica a presena de goma carragena.
Referncias bibliogrficas
COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS. Food Chemicals Codex. 3. ed;
Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 74.
GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press.
1969. 590 p.
KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R.
Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24,
2003.
136/IV Espessantes Identificao de goma arbica (accia)
Material
Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL.
Reagentes
Sub-acetato de chumbo
Indicador vermelho congo
Soluo aquosa de sub-acetato de chumbo Triture 14 g de monxido de chumbo com
10 mL de gua, transfira para um frasco lavando com mais 10 mL de gua. Dissolva
22 g de acetato de chumbo em 70 mL de gua e adicione esta soluo na mistura
de monxido de chumbo. Agite vigorosamente por cinco minutos. Guarde esta mistura
durante sete dias, agitando freqentemente. Filtre para um balo volumtrico de 100 mL,
lave o filtrado com gua, esfrie e complete o volume com gua recentemente fervida. Dilua
3,25 mL desta soluo em 100 mL de gua recentemente fervida.
Soluo aquosa de indicador vermelho congo a 0,5% m/v.
IAL - 249
Procedimentos
1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 132/IV
ou 133/IV ou a 5 mL de uma soluo a 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de
sub-acetato de chumbo. Forma-se um precipitado branco floculento.
2. Adicione algumas gotas de soluo de vermelho congo. Forma-se um precipitado fino
azul-escuro.
Referncias bibliogrficas
COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chemicals Codex. 3. ed.,
Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 7, 561.
GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press,
1969. 590 p.
KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24, 2003.
137/IV Espessantes Identificao de alginato de sdio
Material
Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL.
Reagentes
cido sulfrico
Cloreto de clcio
Soluo de acido sulfrico 4 M
Soluo de cloreto de clcio (CaCl2.2H2O) a 7,5% m/v
Procedimentos
1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 132/IV
ou 133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL da soluo de
cloreto de clcio. Forma-se um gel levemente branco.
2. Adicione 2 mL de soluo de cido sulfrico. Forma-se um gel.
250 - IAL
Captulo V - Aditivos
Referncias bibliogrficas
COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chemicals Codex. 3. ed.,
Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 274.
GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press,
1969. 590 p.
KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R. Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13 ,n. 1, p. 21-24,
2003.
138/IV Espessantes Identificao de goma Konjak
Material
Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL.
Reagentes
Soluo de brax a 4% m/v
Soluo de hidrxido de potssio a 10% m/v
Procedimentos
1. Em um tubo de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 132/
IV ou 133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de
brax a 4% m/v. Forma-se um precipitado.
2. Adicione 2 mL de soluo de hidrxido de potssio. Forma-se um gel rgido.
Referncias bibliogrficas
GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press,
1969. 590 p.
KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R.
Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24,
2003.
IAL - 251
Captulo V - Aditivos
Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24,
2003.
140/IV Espessantes Identificao de goma jata
Material
Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio, pipetas graduadas de 1 e 5 mL.
Reagentes
Soluo de brax a 4% m/v
Soluo de acetato de chumbo a 20% m/v Dissolva o sal em gua, aquea at a ebulio,
esfrie e utilize a soluo sobrenadante.
Procedimentos
1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 0132/IV
ou 0133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de
soluo de brax. Forma-se um gel.
2. Adicione 2 mL de soluo de acetato de chumbo. Forma-se um precipitado floculento
branco.
Referncias bibliogrficas
GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press,
1969. 590 p.
KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R.
Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24,
2003.
141/IV Espessantes Identificao de carboximetilcelulose
Material
Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL.
IAL - 253
Reagentes
Soluo aquosa de sulfato cprico a 12,5% m/v
Soluo aquosa de acetato de chumbo a 20% m/v Dissolva o sal em gua, aquea at a
ebulio, esfrie e utilize a soluo sobrenadante.
Procedimentos
1. Em tubos de ensaio contendo aproximadamente 10 mL do extrato obtido em 132/IV
ou 133/IV ou a 5 mL de uma soluo 0,5% m/v da goma, adicione 2 mL de soluo de
sulfato cprico. Forma-se um precipitado branco-azulado.
2. Adicione 2 mL de soluo de acetato de chumbo. Forma-se um gel floculento.
Referncias bibliogrficas
COMMITEE ON CODEX SPECIFICATIONS Food Chemicals Codex. 3. ed.,
Washington D.C.: National Academic Press, 1981. p. 280.
GLICKSMAN, M. Gum Technology in the Food Industry. New York: Academic Press,
1969. 590 p.
KIMURA, I.A.; ALABURDA, J.; MARTINS, M.S.; DIAS, N.A.; MICHELATO, S.R.
Anlise de gomas em aditivos alimentares. Bol. Inst. Adolfo Lutz, ano 13, n. 1, p. 21-24,
2003.
142/IV Espessantes Identificao de pectina
Material
Estante para tubos de ensaio, tubos de ensaio e pipetas graduadas de 1 e 5 mL.
Reagentes
Soluo de cloreto de clcio a 7,5% m/v
Soluo de acetato de chumbo a 20% m/v Dissolva o sal em gua, aquea at a ebulio,
esfrie e utilize a soluo sobrenadante.
254 - IAL
Captulo V - Aditivos
Captulo V - Aditivos
258 - IAL
Captulo V - Aditivos
Captulo V - Aditivos
H
\
+
C=O + 2 HIO3 + 6 H2O
|
C=O
H
Captulo V - Aditivos
Material
Balana analtica, balana semi-analtica, banho-maria, papel de filtro (se necessrio), bquer
de 50 mL, basto de vidro, proveta de 50 mL, funil de separao tipo pra de 250 mL, pipetas
graduadas de 5, 10 e 20 mL, pipetas volumtricas de 25 ou 50 mL, frasco Erlenmeyer de
250 mL com tampa, bureta de 25 ou 50 mL e funil de vidro, se necessrio.
Reagentes
Tiossulfato de sdio
Acetato de etila
Sulfato de sdio
cido actico glacial
cido peridico H5IO6
Iodeto de potssio
Amido
Soluo de Na2S2O3 0,4 M
Soluo de amido 0,5% m/v
Soluo de sulfato de sdio a 10% m/v Dissolva 100 g de Na2SO4 em gua suficiente
para 1000 mL.
Soluo de cido actico e peridico Dissolva 11 g de cido peridico em 200 mL de gua
e complete o volume para 1000 mL com cido actico.
Soluo de iodeto de potssio a 25% m/v Dissolva 25 g de KI em gua suficiente para
100 mL.
Procedimento -- Pese, com preciso, em um bquer de 50 mL, certa quantidade de amostra calculada de acordo com a seguinte frmula: massa de amostra = 30/% de monoster
esperado na amostra.
Dissolva a amostra com pequenos volumes de acetato de etila, triturando-a aps cada
adio com basto de vidro. Transfira cada um dos volumes do sobrenadante para um
funil de separao, filtrando se necessrio, at a dissoluo total dos monoglicerdios
em 50 mL do solvente. Extraia com trs pores de 15 mL de Na2SO4 a 10% agitando
vigorosamente aps cada adio e colete o extrato aquoso, da camada inferior do funil
de separao, em um frasco Erlenmeyer de 250 mL com tampa. Receba o extrato em
acetato de etila da camada superior, em outro frasco Erlenmeyer. Lave o funil de separao
IAL - 263
Captulo V - Aditivos
Reagentes
Ninidrina (tricetohidrindeno hidratado) Dissolva 200 mg de tricetohidrindeno hidratado
(C9H4O3 H2O) em gua at 100 mL. Prepare a soluo no dia do uso.
Acetato de sdio
Procedimento A 1 mL da soluo aquosa da amostra diluda em 1:30 (em glutamato de
sdio), adicione 1 mL de ninidrina e 100 mg de acetato de sdio e aquea em banho-maria
por 10 min. Uma intensa cor violeta azulada formada.
Referncia bibliogrfica
COMMITTEE ON FOOD CHEMICALS CODEX. Food Chemicals Codex. 4. ed.,
Washington D.C.: National Academic Press, 1996. p. 260.
149/IV Identificao de bromatos pelo mtodo direto
O bromato identificado direta ou indiretamente em preparados para produtos de
panificao, melhoradores de farinha ou outras formulaes de aditivos para panificao.
Material
Balana semi-analtica, agitador magntico, barra magntica, rotavapor, placas para cromatografia em camada delgada de slica gel 60G, papel de filtro qualitativo, bqueres de 100,
250 e 1000 mL, basto de vidro, funil de vidro, provetas de 25, 50 e 200 mL, tubo capilar
de vidro para cromatografia, cuba de vidro para cromatografia e pulverizador.
Reagentes
Butanol
Propanol
lcool
Orto-tolidina
Sulfato de zinco
cido clordrico
Hidrxido de sdio
Bromato de potssio
Soluo de bromato de potssio a 1% m/v.
IAL - 265
Captulo V - Aditivos
Captulo V - Aditivos
IAL - 269
Captulo V - Aditivos
em um balo mbar de 100 mL. Adicione piridina para dissolver e complete o volume.
Conserve esta soluo at um ms, em frasco mbar.
Soluo de cido sulfrico a 10% m/v Dilua, com as precaues habituais, 57 mL de
cido sulfrico a 1000 mL com gua.
Soluo de cloreto estanoso em cido clordrico - Dissolva 40 g de SnCl2.2H2O em 100
mL de cido clordrico concentrado. Conserve esta soluo at trs meses, em frasco de
vidro.
Soluo de iodeto de potssio a 15% m/v - Dissolva 15 g de iodeto de potssio em 100 mL de
gua.
Algodo contendo acetato de chumbo Embeba o algodo hidrfilo em uma soluo saturada de acetato de chumbo. Extraia o excesso de soluo e seque sobre vidro temperatura
ambiente.
Procedimento Instale o aparelho conforme a Figura 2. Introduza no tubo de absoro,
com auxlio de pina, trs tampes de algodo nesta ordem: um hidrfilo, um embebido
em soluo saturada de acetato de chumbo e outro hidrfilo. Dependendo da natureza
da amostra, siga um dos seguintes procedimentos: no caso de substncias orgnicas que,
em meio clordrico turvam, existe a necessidade da mineralizao por via mida; em caso
contrrio (por ex. cido ctrico, cido lctico, cido actico, citrato de clcio, etc), a mineralizao no necessria. Em presena de sais de ferro (por ex. pirofosfato de ferro, citrato
frrico amoniacal, sacarato de ferro, etc) adicione 1 g de cido ascrbico soluo de dosagem. O cido ascrbico reduz e complexa o ferro que interfere na liberao da arsina. Para
matrias-primas solveis em meio clordrico, calcule a massa necessria para comparao
com um padro conhecido de arsnio e dissolva de maneira a se obter sempre um volume
final de (35 + 2) mL.
Mineralizao por via mida Numa proveta com tampa, adicione 30 mL de gua oxigenada e 7 mL de cido sulfrico. Homogeneze e deixe em repouso uma noite. Pese a massa
de amostra necessria (Nota 3) e transfira para o frasco Kjeldahl com auxlio da mistura: gua
oxigenada/cido sulfrico. Aquea at que toda a gua oxigenada seja consumida (agite, de
vez em quando). Esfrie. Caso a soluo ainda esteja escura, adicione mais gua oxigenada
e aquea novamente. Quando houver forte desprendimento de fumaas brancas (SO3) e a
soluo no mais escurecer, a mineralizao est terminada. Lave 3 vezes o frasco Kjeldahl
com gua, aquecendo at reduzir o volume a mais ou menos 5 mL aps cada adio (caso a
soluo escurea novamente, adicione mais gua oxigenada, aquea e lave novamente com
gua (trs vezes). Esfrie o frasco e transfira a soluo para um frasco Erlenmeyer de 500 mL
IAL - 271
de boca esmerilhada. Lave as paredes do frasco Kjedahl e transfira para o frasco Erlenmeyer
com auxlio de gua suficiente para completar o volume para 35 mL. Adicione, nesta ordem, nos frascos Erlenmeyer: 10 mL de cido clordrico, 2 mL da soluo de KI e 0,5 mL
da soluo de cloreto estanoso. Conecte os tubos de absoro, agite e deixe repousar por 30
minutos temperatura ambiente. Pipete 3 mL da soluo de dietilditiocarbamato de prata
em piridina nos tubos de absoro (parte superior). Aps os 30 minutos, introduza 4 g de
zinco granulado nos frascos Erlenmeyer, conecte rapidamente os tubos de absoro nestes
frascos, agite e deixe a reao ocorrer durante 45 minutos temperatura ambiente, compreendida entre 25C e 35C, com agitaes casuais de 10 minutos. A liberao de hidrognio
deve ser regular e suficiente sem ser excessiva (a adio de uma pequena quantidade de
isopropanol no frasco Enlermeyer pode melhorar e uniformizar a liberao do gs). Aps os
45 minutos, compare a intensidade de colorao nos tubos de absoro da amostra, branco
e padro. A reao segue a Lei de Beer de 0 a 10 g de arsnio. possvel estabelecer uma
curva-padro para um comprimento de onda mximo determinado entre 535 e 540 nm,
com um espectrofotmetro ou colormetro, usando a soluo de dietiliditiocarbamato de
prata em piridina como branco. Como a intensidade de colorao muito instvel, importante que se faa a medida em temperatura constante, no inferior a (25 + 2)C e logo
aps os 45 minutos, tanto para as amostras como para os padres.
Repetitividade: para comparao visual com os padres desenvolvidos conjuntamente com
os testes, o limite visual de deteco de 0,2 mg/kg. Em trabalhos com espectrofotmetro,
a diferena entre os resultados de duas determinaes executadas simultaneamente, pelo
mesmo analista, no deve ser maior que 0,2 g.
Nota 1 : necessrio fazer, conjuntamente com as determinaes, uma prova em branco
(com os reagentes) e um padro de concentrao conhecida: prepare, simultaneamente,
padres de 1, 2, 3, etc, g de arsnio por pipetagem de 1, 2, 3, etc., mL da soluo padro
de 1 g/mL e dilua a aproximadamente 35 mL de gua.
Nota 2: em presena de on frricos, o KI oxidado com liberao de iodo. Adicione um
excesso de cloreto estanoso para uma reduo completa. A liberao de hidrognio da reao
neste caso catalisada e acelerada.
Nota 3: exemplo de clculo da massa de amostra a ser pesada: sabe-se por norma que o
corante artificial pode conter no mximo 1 g de As por g de corante. Na dosagem comparativa usa-se um padro de 3 g de Arsnio. Desta maneira, a frmula que fornece a massa
de amostra a ser pesada ser:
272 - IAL
Captulo V - Aditivos
274 - IAL
Captulo V - Aditivos
Clculo
% Solvente A
(acetonitrila-metanol 1:1)
80
100
100
80
80
% Solvente B
(gua)
20
0
0
20
20
Captulo V - Aditivos
guns segundos para escape. Feche a torneira e extraia agitando o funil por 2 minutos. Deixe as
camadas separarem e ento escoe a camada de TCTFE atravs da coluna cromatogrfica (como
preparada anteriormente). Repita as extraes com 2 pores de 40 mL de TCTFE. Deixe cada
extrato percolar a coluna e colete aproximadamente 300 mL em um frasco tipo pra. Quando
o terceiro extrato atingir o topo da camada de sulfato de sdio, adicione 50 mL de TCTFE
para lavagem da coluna e colete este eludo no frasco. Adicione 10 mL de DMSO soluo no
frasco e evapore o TCTFE em um rotavapor com banho a 30C, deixando o DMSO. Transfira quantitativamente o concentrado de DMSO para um funil de separao de 125 mL,
usando 5 mL de DMSO em pequenas pores. Lave o frasco com 50 mL e adicione as
lavagens ao funil. Agite o funil para extrao por 2 minutos. Depois que as fases se separarem,
descarte a camada inferior para um funil de separao de 250 mL contendo 25 mL de ciclohexano e 90 mL de gua saturada com ciclohexano. Repita a extrao de ciclohexano no funil
de 125 mL com duas alquotas de 15 mL de DMSO. Adicione os extratos de DMSO ao funil
de 250 mL, agite vigorosamente por 2 minutos para extrao. Depois da separao das fases,
transfira a camada inferior para outro funil de 250 mL contendo 25 mL de ciclohexano e agite
por 2 minutos para extrao. Depois da separao das fases, descarte a camada inferior, aquosa.
Combine os dois extratos de ciclohexano no primeiro funil de 250 mL. Lave o segundo funil
de 250 mL com duas alquotas de 10 mL de ciclohexano e adicione as lavagens ao primeiro
funil de 250 mL. Lave a soluo, duas vezes, com suave agitao por 15 segundos com 100 mL
de gua saturada com ciclohexano. Descarte a camada aquosa depois de cada lavagem. Coloque 10 g de alumina desativada (10% de gua) seguida por 50 g de Na2SO4 em um funil de
Bchner de 60 mL. Lave com 50 mL de ciclohexano e descarte. Passe os extratos combinados
de ciclohexano do funil de separao, atravs do funil de Bchner para um frasco tipo pra de
400 mL. Lave o funil de separao com duas alquotas de 25 mL de ciclohexano, e passe cada
uma atravs do funil de Bchner para o frasco. Use um rotavapor com banho-maria a 40C,
at reduzir o volume para cerca de (2-5) mL. Transfira o contedo quantitativamente para o
frasco concentrador usando um pipetador automtico ou pipeta tipo Pasteur, utilizando 5 mL
ou menos de ciclohexano para lavagem. Leve o contedo do tubo secura em banho-maria a
30C sob uma suave corrente de nitrognio. Leve para 2 mL com acetonitrila-metanol (1:1) e
deixe no ultra-som por 3 minutos. Filtre o extrato para um flaconete de 2 mL. Injete 20 L
do extrato de amostra ou da soluo-padro na coluna Lichrosphere 100 RP-18 (5 m) ou
equivalente e inicie a programao de gradiente de fase mvel. Entre as injees, lave o loop de
amostra. Compare os tempos de reteno do pico observado com o padro de benzo(a)pireno
cromatografado sob as mesmas condies. Injete o padro a cada 3 amostras. Calcule a quantidade de benzo(a)pireno no extrato de amostra pelo procedimento de padro externo.
Clculo
IAL - 277
Colaboradores:
Iracema de A. Tamura; Maristela Satou Martins e Nelson Aranha Dias.
278 - IAL
CAPTULO
VI
ANLISE
SENSORIAL
IAL - 279
280 - IAL
VI
Captulo VI - Anlise sensorial
ANLISE SENSORIAL
bro. A sensibilidade no se limita apenas lngua, pois outras regies tambm respondem
aos estmulos, como o palato duro, amdalas, epiglote, mucosa dos lbios, as bochechas e
superfcie inferior da boca. A percepo mais conhecida envolve quatro gostos primrios:
doce, salgado, cido e amargo, sendo citado tambm o umami. Algumas solues qumicas
em concentraes diferentes so utilizadas para avaliar o poder de discriminao pelo
reconhecimento, como por exemplo: a sacarose, 5,76 g/L (doce); o cloreto de sdio,
1,19 g/L (salgado); a cafena, 0,195 g/L (amargo); o cido ctrico, 0,43 g/L (cido); o
glutamato monossdico, 0,595 g/L (umami) e o sulfato heptahidratado de ferro II, 0,00475
g/L (metlico) (ISO/DIS 3972/1979). O espectro de gostos tambm pode incluir a presena de gostos secundrios (alcalino e metlico) e os elementos sensveis qumica comum
(adstringente, refrescante, ardente, quente e frio). As sensaes denominadas picantes
tambm definidas como ardentes ou pungentes, no so consideradas estmulos puros,
pois se percebe em toda a lngua e garganta.
Preparo e apresentao de amostras
Os procedimentos de preparo e apresentao de amostras so etapas crticas e devem ser padronizados segundo o tipo, a espcie ou a variedade de produto. Basicamente,
recomendam-se os seguintes procedimentos:
Amostra representativa e, se necessrio, acompanhada da amostra de referncia ou padro, similar, de mesma procedncia, marca e/ou fabricante, que possa servir como
comparao. Sempre na quantidade suficiente para anlise e, se for o caso, com medidas
de massa ou peso e volumes bem definidos.
Modo de preparo adequado da amostra e, de preferncia, conforme a orientao do
fabricante nos rtulos. Durante o preparo, determinadas variaes fsicas devem ser
controladas com utilizao de cronmetros, termmetros ou termopares. Prepare todas
as amostras de forma idntica, estimando tempos mnimos e mximos de espera at a
apresentao. Para todas as unidades de amostras, a poro, a quantidade, o formato e
o tamanho (espessura) devem ser controlados segundo as caractersticas do produto.
Amostras servidas em recipientes prprios ou os comumente utilizados nas refeies
de indivduos, como, por exemplo, recipientes de vidro, porcelana ou plsticos descartveis. Se necessrio, sirva em bandejas de cor branca ou neutra. Utilize talheres
compatveis, descartveis ou no, guardanapos, toalhas absorventes e vasilhames para
o descarte de resduos. Todos os recipientes devem estar bem limpos, secos e livres de
odores estranhos.
IAL - 283
Antes da apresentao da amostra verifique e controle a temperatura, sendo um importante fator de variao na percepo do odor e do sabor. Melhor avaliar a amostra
na temperatura em que normalmente consumida. Um grande nmero de produtos
pode ser avaliado em sua temperatura ambiente. O Quadro 1 indica algumas faixas de
temperaturas usualmente empregadas na avaliao sensorial de alimentos.
As condies ambientais devem ser controladas antes da anlise sensorial levando em
considerao a utilizao de cabines individuais, o grau de luminosidade, temperatura
climatizada adequada, ausncia de rudos e odores estranhos.
Quadro 1 Faixas de temperaturas indicadas para avaliao do odor e sabor em alguns
produtos alimentcios
Produto
gua
Alimentos preparados quentes
Bebida carbonatada
Caf
Cerveja
Ch
Leite
Licores destilados
Manteiga e margarina
Maionese
leos comestveis
Po
Sopa
Sorvete
Vinho
Temperatura (C)
20 22
35 45
06 10
68 71
04 05
68 71
07 10
20 22
20 22
20 22
40 43
20 22
68 71
10 12
20 22 ou gelado
O indivduo deve estar ciente de que a participao nos testes espontnea e voluntria. Verifique se cada membro da equipe tem interesse, disponibilidade, pontualidade,
tranqilidade e vontade de avaliar grande parte das categorias de produtos nos dias
marcados para teste, seleo e treinamento previamente agendados.
Verifique se o candidato revela boa forma de expresso, habilidade verbal e vocabulrio
prprio que possa definir e descrever adequadamente os atributos sensoriais. Deve-se
evitar qualquer tipo de comunicao com os colegas durante os testes, pois a resposta de
cada um prpria, independente e de responsabilidade exclusiva.
O candidato deve apresentar boas condies de sade, ausncia de gripes e alergias,
comunicando quando houver doenas como diabetes, hipercolesterolemia ou qualquer
outra. Evite o indivduo que use aparelho dentrio corretivo, pois os dentes tm papel
importante na avaliao sensorial. Evite os fumantes, caso contrrio, alerte a no fumar
pelo menos uma hora antes dos testes.
Avalie a acuidade sensorial e o poder de discriminao para cores, textura, odores e gostos primrios. Fique atento nos casos de ocorrncia de anomalias nos rgos da viso,
olfato, audio e paladar. A faixa etria recomendvel situa-se entre 18 a 50 anos, pois,
aps esta idade o indivduo pode revelar certa dessensibilizao dos rgos sensores.
Oriente o julgador a no fazer uso de cosmticos e perfumes fortes e a no consumir
alimentos muito picantes nos dias marcados para os testes. Os medicamentos tambm
podem influenciar na sensibilidade do gosto do indivduo.
Caractersticas sensoriais
Mtodo subjetivo utilizado para avaliar as caractersticas sensoriais de alimentos,
bebidas e gua. Este mtodo considera as opinies de indivduos na interpretao de efeitos
do estmulo sensorial, simples ou mltiplos, segundo as impresses percebidas pelos rgos
sensrios (viso, olfato, gosto, tato e audio) que iro gerar as interpretaes e descries
das propriedades intrnsecas aos produtos. A forma de definir atributos sensoriais descrever os componentes relativos s propriedades dos produtos, como os seguintes:
Aparncia Refere-se s propriedades visveis como o aspecto, cor, transparncia, brilho,
opacidade, forma, tamanho, consistncia, espessura, grau de efervescncia ou carbonatao e as caractersticas de superfcie. A cor, propriedade capaz de provocar estimulao da
retina por raios luminosos de comprimentos de onda variveis, tem sua percepo limitada
fonte de luz, devendo ser avaliada com iluminao adequada como, por exemplo, a luz
IAL - 285
286 - IAL
Derretida
Dessecada
Desintegrada
Depositada
Dura
Efervescente
Elstica
Embolorada
Entremeada
Esfarelenta
Esfrica
Esmigalhada
Espessa
Espumante
Exsudato
Fatiada
Fermentada
Fibrosa
Filete
Fina
Firme
Floco
Floculosa
Fluido
Fresca
Frivel
Fundida
Gasosa
Gaseificada
Gelatinosa
Gomosa
Gordurosa
Gro
Granulada
Granulosa
Grossa
Grumosa
Grudenta
Heterognea
Homognea
ntegra
Irregular
Lmina
Limo
Limosa
Lquida
Lmpida
Macia
Cor*
Manchada
Massa
Maturada
Mofada
Moda
Mole
Oleosa
Ondulada
Pasta
Pastilha
Pastosa
Pegajosa
Pelcula
P
Porosa
Polpa
Precipitada
Prensada
Pulverulenta
Quebradia
Rachada
Rala
Recheada
Recheio
Repicada
Resduo
Ressecada
Resistente
Retalhada
Rija
Rodela
Seca
Sedimentada
Semidura
Semente
Slida
Solta
Suculenta
Tenra
Translcida
Transparente
Tolete
Turva
Uniforme
mida
Untuosa
Viscosa
Xarope
Acromtica
Alaranjada
Alaranjado-claro
Alaranjado-escuro
Amarela
Amarelo-alaranjado
Amarelo-mbar
Amarelo-claro
Amarelo-cinzento
Amarelo-escuro
Amarelo-esverdeado
Amarelo-fosco
Amarelo-ouro
Amarelo-plido
Amarelo-palha
Amarelo-pardacento
Amarelo-torrado
mbar
mbar-escuro
Argentada
Azul
Azul-celeste
Azul-claro
Azul-escuro
Azul-esverdeada
Azul-marinho
Azul-piscina
Azul-turquesa
Bege
Branca
Branco-de-giz
Branco-amarelado
Branco-marfim
Branco-prola
Branco-sujo
Brilhante
Brilho-metlico
Castanha
Cinza
Cinzenta
Cor opaca
Cor uniforme
Cor plida
Creme
Dourada
Incolor
Marrom
Marrom-amarelado
Marrom-avermelhado
Marrom-acinzentado
Marrom-claro
Marrom-escuro
Marrom-esverdeado
Rosada
Rsea
Rseo-avermelhado
Rseo-claro
Rseo-escuro
Rseo-purpreo
Rseo-violceo
Ocre
Parda
Pardacenta
Perolada
Prateada
Preta
Roxa
Verde
Verde-abacate
Verde-acinzentado
Verde-amarelado
Verde-azulado
Verde-bandeira
Verde-claro
Verde-escuro
Verde-esmeralda
Verde-folha
Verde-garrafa
Verde-mar
Verde-musgo
Verde-oliva
Verde-piscina
Vermelha
Vermelho-alaranjado
Vermelho-arroxeado
Vermelho-cereja
Vermelho-pardacento
Vermelho-rosado
Vermelho-rubro
Vermelho-violceo
Vinho
Violeta
Violeta-avermelhado
Violeta-azulado
Violeta-claro
Violeta-escuro
IAL - 287
288 - IAL
Amanteigado
Amendoado
Amilceo
Amoniacal
Anormal
Ardente
Ardido
Apimentado
Aromtico
Atpico
Artificial
Azedo
Azeitonado
Balsmico
Benznico
Bouquet
Butrico
Cacau
Caf-com-leite
Cafeinado
Caramelado
Caracterstico
Odor e Sabor
Custico
Carbonatado
Condimentado
Cprico
Defumado
Desagradvel
Desodorante
Diludo
Doce
Enfumaado
Enjoativo
Envelhecido
Estragado
Estranho
Etreo
Fermentado
Ferruginoso
Ftido
Floral
Frutado
Frutoso
Gorduroso
Graxo
Imprprio
Impuro
Inadequado
Inodoro
Irritante
Inspido
Insosso
Insuportvel
Horrvel
Lctico
Leve
Licoroso
Maresia
Maturado
Medicinal
Melado
Mentolado
Metlico
Mofado
Natural
Normal
Nauseante
Odorfico
Picante
Penetrante
Perfumado
Prprio
Pungente
Putrefato
Ptrido
Ranoso
Refrescante
Remanescente
Repulsivo
Salgado
Salino
Spido
Saponceo
Suave
Sulfuroso
Oxidado
Queimado
Velho
Nota: as definies dos atributos citados podem ser encontradas na literatura, por meio de
um glossrio de termos empregados em anlise sensorial. Exemplos: acre = odor e sabor picante,
irritante e spero, como o do alho, fsforo e soluo de cido frmico a 90% (p/v); agre = qualifica
a sensao gustativa com predomnio cido, onde alguns fatores que contribuem para esta sensao
se relacionam a um processo de fermentao (actico ou lctico); adstringente = sensao
produzida pela contrao da mucosa da boca, como por uma soluo aquosa diluda de
alguns taninos, como do caqui ou banana verde; alcalino = sensao escorregadia devido
alcalinidade, como soluo de bicarbonato de sdio; azedo = sensao complexa olfativa e/
ou gustativa, geralmente devido presena de cidos orgnicos. Entretanto no pode ser
usado como sinnimo de gosto primrio cido e pode ter algumas vezes, uma conotao
hednica negativa. Bouquet = conjunto de caracteres olfativos especficos de um produto,
como vinho, licores; cprico = com sabor de cobre, spero e penetrante; estranho = aquele
odor ou sabor no caracterstico do produto; inodoro = qualifica um produto que no tem
odor; insosso = ou flat, produto que no atinge nvel sensorial adequado, como sem sal,
IAL - 289
sem tempero; metlico = sensao de metal na mucosa da boca; pungente = sensao de dor
causada, por exemplo, ao cheirar uma soluo de cido actico (2-5%); spido = qualifica
um produto que produz sabor. O contrrio inspido = falta de sabor, ou que possui aroma
e sabor tpicos, mas em nveis inferiores ao que poderia conter o produto (sinnimo de
insosso).
154/IV Anlise das caractersticas sensoriais
Procedimento Para anlise das caractersticas sensoriais, o julgador deve expressar suas
impresses em relao aos atributos sensoriais e descrev-los utilizando vocabulrio prprio,
conforme modelo na Ficha 1. A reunio de julgadores se d em torno de uma mesa redonda
confortvel, com as condies ambientais controladas, tais como: iluminao, temperatura,
ausncia de sons ou rudos e livre de odores estranhos. Durante o teste, o julgador deve
omitir-se de conversas paralelas. Depois, inicia-se uma conversao, na qual, por consenso,
so definidos os termos ou componentes perceptveis que melhor definem cada um dos atributos sensoriais e, conseqentemente, a concluso do resultado de anlise. Recomenda-se
que o nmero de julgadores selecionados seja no mnimo 3, de preferncia nmero mpar,
para que, se houver divergncia de opinies, possa haver desempate, prevalecendo o resultado consensual da maioria.
Ficha 1 Modelo para teste de caractersticas sensoriais
Amostra:
Julgador:
Data:
Aparncia
Odor e aroma
Textura
Sensao bucal
Sabor e gosto
Comentrios
Testes discriminativos
Os testes sensoriais discriminativos ou de diferena so considerados mtodos objetivos utilizados em anlise sensorial de alimentos, bebidas e gua, com os efeitos das opinies
dos indivduos minimizados. Medem atributos especficos pela discriminao simples, in290 - IAL
dicando por comparaes, se existem ou no diferenas estatsticas entre amostras. Exigem cuidados na padronizao do preparo e apresentao das amostras e na formao da
equipe sensorial. Todas as amostras devem ser codificadas com nmeros aleatrios de trs
dgitos, casualizadas e apresentadas equipe pr-selecionada e treinada. Os testes devem
ser conduzidos em cabines individualizadas com controle das condies ambientais, tais
como: iluminao, temperatura, ausncia de sons ou rudos e livre de odores estranhos.
Os testes discriminativos ou de diferena mais empregados em anlise sensorial so o
triangular, duo-trio, ordenao, comparao pareada e comparao mltipla ou diferena
do controle.
155/IV Testes discriminativos Teste triangular
Procedimento O teste triangular detecta pequenas diferenas entre amostras. So apresentadas simultaneamente trs amostras codificadas, sendo duas iguais e uma diferente.
Cabe ao julgador identificar a amostra diferente (Ficha 2). A escolha forada. A probabilidade de acertos p = 1/3. A interpretao do resultado se baseia no nmero total de
julgamentos versus o nmero de julgamentos corretos (Quadro 4). Se o nmero de julgamentos corretos for maior ou igual ao valor tabelado (Tabela 1), conclui-se que existe diferena significativa entre as amostras no nvel de probabilidade correspondente. O nmero
de julgadores selecionados deve ser de 20 a 40, embora apenas 12 possam ser utilizados
quando as diferenas entre amostras so razoavelmente grandes. As amostras devem ser
apresentadas casualizadas em igual nmero de vezes nas permutaes distintas: AAB, BAA,
ABA, ABB, BBA e BAB.
Ficha 2 Modelo para teste triangular
Amostra:
Julgador:
Data:
Voc est recebendo trs amostras codificadas, sendo duas iguais e uma diferente.
Identifique com um crculo a amostra diferente.
__________
__________
__________
Comentrios:
Fonte: ABNT, NBR 12995, 1993.
IAL - 291
Amostra:
N de codificao:
(A) _______/_______
* Correta (C)
Errada (E).
p = n de julgadores
292 - IAL
Ordem de
apresentao
Nome do julgador
1
2
3
4
5
6
7
p
n de julgamentos totais
n de julgamentos corretos
Valor tabelado (nvel de
probabilidade)
(B) _______/_______
A
B
A
A
B
B
A
A
A
B
B
B
A
A
B
A
A
B
A
B
B
Resposta
do
Comentrios
julgador*
(C) ou (E)
5%
4%
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
60
70
80
90
100
4
5
5
6
6
7
7
8
8
9
9
9
10
10
11
11
12
12
12
13
13
14
14
15
15
15
16
16
17
17
17
18
18
19
19
19
20
20
20
21
21
22
22
22
23
23
27
31
35
38
42
5
5
6
6
7
7
7
8
8
9
9
10
10
11
11
11
12
12
13
13
14
14
14
15
15
16
16
16
17
17
18
18
18
19
19
20
20
20
21
21
22
22
22
23
23
24
27
31
35
39
43
Nveis de probabilidade ( )
3%
2%
1%
0,5%
5
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
10
10
11
11
12
12
13
13
13
14
14
15
15
16
16
16
17
17
18
18
18
19
19
20
20
20
21
21
22
22
22
23
23
24
24
28
32
36
40
43
5
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
10
11
11
12
12
13
13
13
14
14
15
15
16
16
16
17
17
18
18
19
19
19
20
20
21
21
21
22
22
23
23
23
24
24
25
29
33
36
40
44
5
6
6
7
7
8
8
9
9
10
10
11
11
12
12
13
13
14
14
15
15
15
16
16
17
17
18
18
18
19
19
20
20
21
21
21
22
22
23
23
24
24
24
25
25
26
30
34
38
42
45
5
6
7
7
8
8
9
9
10
10
11
11
12
12
13
13
14
14
15
15
16
16
17
17
17
18
18
19
19
20
20
20
21
21
22
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23
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24
24
24
25
25
26
26
26
31
35
39
43
47
0,1%
7
8
8
9
10
10
11
11
12
12
13
13
14
14
15
15
16
16
17
17
18
18
19
19
20
20
21
21
22
22
22
23
23
24
24
25
25
26
26
27
27
27
28
28
33
37
41
45
49
Julgador:
Data:
Voc est recebendo uma amostra padro (P) e duas amostras codificadas. Uma das amostras
codificadas igual ao padro, faa um crculo nesta amostra.
__________
__________
Comentrios:
Fonte: ABNT, NBR 13169, 1994.
Nome do julgador
Ordem de apresentao
1
2
3
4
5
6
p
n de julgamentos totais
n de julgamentos corretos
Valor tabelado (nvel de probabilidade)
* Correta (C)
294 - IAL
Errada (E)
p = n de julgadores
A
B
A
B
A
B
B
A
B
A
B
A
P = padro
Resposta do
julgador*
(C) ou (E)
Comentrios
5%
4%
Nveis de probabilidade ()
3%
2%
1%
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
50
60
70
80
90
100
7
7
8
9
9
10
10
11
12
12
13
13
14
15
15
16
16
17
18
18
19
19
20
20
21
22
22
23
23
24
24
25
26
26
27
27
28
28
29
30
30
31
32
37
43
48
54
59
7
7
8
9
9
10
11
11
12
12
13
14
14
15
15
16
17
17
18
18
19
20
20
21
21
22
23
23
24
24
25
25
26
27
27
28
28
29
29
30
30
31
32
38
43
49
54
60
7
8
8
9
10
10
11
11
12
13
13
14
15
15
16
16
17
18
18
19
19
20
21
21
22
22
23
23
24
25
25
26
26
27
27
28
29
29
30
30
31
31
33
38
44
49
55
60
7
8
8
9
10
10
11
12
12
13
14
14
15
16
16
17
17
18
19
19
20
20
21
22
22
23
23
24
25
25
26
26
27
27
28
29
29
30
30
31
31
32
34
39
45
50
56
61
7
8
9
10
10
11
12
12
13
14
14
15
15
16
17
17
18
19
19
20
20
21
22
22
23
24
24
25
25
26
26
27
28
28
29
29
30
31
31
32
32
33
34
40
46
51
57
63
0,5%
0,1%
8
9
10
11
11
12
13
13
14
15
15
16
17
17
18
19
19
20
20
21
22
22
23
24
24
25
25
26
27
27
28
28
29
30
30
31
31
32
33
33
34
35
41
47
52
58
64
10
11
12
13
13
14
15
16
16
17
18
18
19
20
20
21
22
22
23
24
24
25
26
26
27
27
28
29
29
30
30
31
32
32
33
34
34
35
36
37
43
49
55
61
66
Julgador:
Data:
Voc est recebendo quatro amostras codificadas. Avalie cada uma, colocando-as em
ordem crescente da intensidade do atributo especfico.
________
primeira
Comentrios:
Fonte: ABNT, NBR 13170 / 1994.
296 - IAL
________
segunda
________
terceira
________
quarta
n
Nome do julgador
1
2
3
4
5
4
5
6
7
p
Tipos de amostras ou tratamentos
Soma das ordens
n de julgamentos (p)
n de amostras ou tratamentos (t)
Valor tabelado (nvel de significncia)
Ordem de apresentao
A
B
C
D
A
C
B
D
B
A
D
C
B
C
A
D
C
D
B
A
C
A
D
B
D
B
A
C
D
C
B
A
A
B
C
D
(A)
(A)
(B)
(B)
(C)
(C)
Comentrios
(D)
(D)
Teste de Friedman Com o nmero de amostras ou tratamentos avaliados (t) e o nmero de julgamentos (p) obtidos, utiliza-se a tabela de Newel e MacFarlane (Tabelas 3 ou
4, respectivamente, para os nveis de significncia de 5% e 1%), para obter a diferena
crtica entre os totais de ordenao. Se as diferenas entre as soma das ordens de duas
amostras (Quadro 7) diferirem por um valor maior ou igual ao valor tabelado (crtico),
existe diferena significativa entre elas ao nvel testado.
Quadro 7 Mdulos de diferenas entre somas das ordens de amostras
Amostras
Somatria total
Diferenas versus A
Diferenas versus B
Diferenas versus C
(A)
(A)
-
(B)
(B)
(A) - (B)
-
(C)
(C)
(A) - (C)
(B) - (C)
-
(D)
(D)
(A) - (D)
(B) - (D)
(C) - (D)
Nota: para saber quais amostras diferem entre si, primeiro coloque-as em ordem crescente da somatria total e, depois, d letras diferentes para as que diferirem por um
nmero maior ou igual ao valor tabelado e letras iguais para as que no diferirem
entre si.
IAL - 297
Tabela 3 Valores crticos para comparao com os mdulos das diferenas entre as somas das ordens do teste de ordenao, a 5% de significncia
N de
julgamentos
3
4
5
8
11
6
9
12
7
10
13
8
10
14
9
10
15
10
11
15
11
11
16
12
12
17
13
12
18
14
13
18
15
13
19
16
14
19
17
14
20
18
15
20
19
15
21
20
15
21
21
16
22
22
16
22
23
16
23
24
17
23
25
17
24
26
17
24
27
18
25
28
18
25
29
18
26
30
19
26
31
19
27
32
19
27
33
20
27
34
20
28
35
20
28
36
20
29
37
21
29
38
21
29
39
21
30
40
21
30
41
22
31
42
22
31
43
22
31
44
22
32
45
23
32
46
23
32
47
23
33
48
23
33
49
24
33
50
24
34
55
25
35
60
26
37
65
27
38
70
28
40
75
29
41
80
30
42
85
31
44
90
32
45
100
34
47
Fonte: ABNT NBR 13170, 1994.
298 - IAL
n de amostras ou tratamentos
5
14
15
17
18
19
20
21
22
23
24
24
25
26
26
27
28
28
29
30
30
31
32
32
33
33
34
34
35
36
36
37
37
38
38
39
39
40
40
41
41
41
42
42
43
43
44
46
48
50
52
53
55
57
58
61
6
17
19
20
22
23
24
25
27
28
29
30
31
32
32
33
34
35
36
37
37
38
39
40
40
41
42
42
43
44
44
45
46
46
47
48
48
49
49
50
51
51
52
52
53
53
54
56
59
61
64
66
68
70
72
76
7
21
22
24
26
27
29
30
32
33
34
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
46
47
48
49
50
51
51
52
53
54
55
55
56
57
57
58
59
60
60
61
62
62
63
64
64
67
70
73
76
79
81
84
86
91
8
24
26
28
30
32
34
35
37
39
40
42
42
44
45
46
47
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
63
64
65
66
67
68
69
69
70
71
72
72
73
74
75
78
82
85
88
91
94
97
100
105
9
27
30
32
34
36
38
40
42
44
46
47
49
50
51
53
54
56
57
58
59
61
62
63
64
65
66
67
68
70
71
72
73
74
75
76
76
77
78
79
80
81
82
83
84
85
85
90
94
97
101
105
108
111
114
121
10
30
34
36
38
41
43
45
48
50
52
53
55
56
59
60
61
63
64
65
67
68
70
71
72
73
75
76
77
78
79
81
82
83
84
85
86
87
89
89
90
91
92
93
94
95
95
101
105
110
114
118
122
125
129
136
11
34
37
40
43
46
48
51
53
55
57
59
61
63
65
66
68
70
71
73
74
76
77
79
80
82
83
85
85
87
89
90
91
92
94
95
96
97
98
99
101
102
103
104
105
106
107
112
117
122
127
131
136
140
144
151
12
37
42
44
47
50
53
56
58
61
63
66
67
69
71
73
75
77
79
80
82
84
85
87
89
90
92
93
95
96
98
99
100
102
103
105
106
107
109
110
111
112
114
115
116
117
118
124
130
135
140
145
150
154
159
167
Tabela 4 Valores crticos para comparao com os mdulos das diferenas entre as
somas das ordens do teste de ordenao, a 1% de significncia
N de
julgamentos
n de amostras ou tratamentos
4
10
11
12
5
9
13
6
10
14
7
11
15
8
12
16
9
13
17
10
13
18
11
14
19
12
15
20
13
15
21
14
16
22
15
16
22
16
17
23
17
17
24
18
18
25
19
18
25
20
19
26
21
19
27
22
20
27
23
20
28
24
21
28
25
21
29
26
22
29
27
22
30
28
22
31
29
23
31
30
23
32
31
23
32
32
24
33
33
24
33
34
25
34
35
25
34
36
25
35
37
26
35
38
26
36
39
26
36
40
27
36
41
27
37
42
27
37
43
28
38
44
28
38
45
28
39
46
28
39
48
29
40
50
30
41
60
32
45
70
35
48
80
37
51
100
42
57
Fonte: ABNT, NBR 13170, 1994
16
18
19
21
22
23
24
26
27
28
28
30
31
31
32
33
34
35
35
36
37
38
38
39
40
40
41
42
42
43
44
44
45
45
46
47
47
48
48
49
49
50
51
52
57
61
66
73
19
21
23
25
27
28
30
31
32
34
35
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
48
49
50
51
52
52
53
54
55
55
56
57
57
58
59
60
60
61
62
63
60
75
80
89
23
25
28
30
32
33
35
37
38
40
41
43
44
45
46
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63
64
65
66
66
67
68
69
70
70
71
72
74
75
82
89
95
106
26
29
32
34
36
38
40
42
44
46
48
49
51
52
54
55
56
58
59
60
62
63
64
65
66
67
69
70
71
72
73
74
75
76
77
78
79
80
81
82
82
83
85
87
95
103
110
123
30
33
36
39
41
44
46
48
50
52
54
56
58
60
61
63
64
66
67
69
70
71
73
74
75
77
78
79
80
82
83
84
85
86
87
88
90
91
92
93
94
95
97
99
108
117
125
140
33
37
40
43
46
49
51
54
56
58
60
63
65
67
69
70
72
74
75
77
79
80
82
83
85
86
87
89
90
92
93
94
95
97
98
99
100
102
103
104
105
106
109
111
121
131
140
157
37
41
45
48
51
54
57
60
62
65
67
70
72
74
76
78
80
82
84
85
87
89
91
92
94
95
97
99
100
102
103
105
106
107
109
110
112
113
114
115
117
118
121
123
135
146
156
174
41
45
49
53
56
59
63
66
68
71
74
77
79
81
84
86
88
90
92
94
96
98
100
101
103
105
107
108
110
112
113
115
117
118
120
121
123
124
126
127
128
130
133
135
148
160
171
191
IAL - 299
Julgador:
Data:
Voc est recebendo duas amostras codificadas. Uma amostra codificada mais intensa no
atributo (especificar). Identifique-a com um crculo.
__________
Comentrios:
Fonte: ABNT, NBR 13088, 1994.
300 - IAL
__________
(A) _______
Nome do julgador
(B) _______
Ordem de
apresentao
A
Resposta do
julgador*
(C) ou (E)
Comentrios
p
n de julgamentos totais (p)
n de julgamentos corretos
Valor tabelado (nvel de probabilidade)
* Correta (C)
Errada (E)
p = n de julgadores ou julgamentos
Nveis de probabilidade ()
Bilateral (p=1/2), preferncia
Unilateral (p=1/2), diferena
5%
1%
0,1%
5%
1%
0,1%
5
6
6
7
7
7
8
8
7
8
8
9
8
9
9
10
9
10
10
10
11
11
9
10
11
10
11
12
10
11
12
11
12
13
10
12
13
12
13
14
11
12
13
12
13
14
12
13
14
13
14
15
12
14
15
13
15
16
13
14
16
14
15
17
13
15
16
15
16
17
14
15
17
15
17
18
15
16
18
16
17
19
15
17
18
17
18
19
16
17
19
17
19
20
16
18
20
18
19
21
17
19
20
18
20
21
18
19
21
19
20
22
18
20
22
20
21
23
19
20
22
20
22
23
19
21
23
21
22
24
20
22
24
21
23
25
20
22
24
IAL - 301
Nveis de probabilidade ()
n total de
Bilateral (p=1/2), preferncia
Unilateral (p=1/2), diferena
julgamentos
5%
1%
0,1%
5%
1%
0,1%
31
22
24
25
21
23
25
32
23
24
26
22
24
26
33
23
25
27
22
24
26
34
24
25
27
23
25
27
35
24
26
28
23
25
27
36
25
27
29
24
26
28
37
25
27
29
24
26
29
38
26
28
30
25
27
29
39
27
28
31
26
28
30
40
27
29
31
26
28
30
41
28
30
32
27
29
31
42
28
30
32
27
29
32
43
29
31
33
28
30
32
44
29
31
34
28
31
33
45
30
32
34
29
31
34
46
31
33
35
30
32
34
47
31
33
36
30
32
35
48
32
34
36
31
33
36
49
32
34
37
31
34
36
50
33
35
37
32
34
37
60
39
41
44
37
40
43
70
44
47
50
43
46
49
80
50
52
56
48
51
55
90
55
58
61
54
57
61
100
61
64
67
59
63
66
Fonte: ABNT, NBR 13088, 1994
302 - IAL
Julgador:
Data:
Voc est recebendo uma amostra controle (C) e trs amostras codificadas. Compare cada
uma com o controle quanto ao atributo (especificar). Expresse o valor da diferena utilizando
a escala abaixo:
1
nenhuma
valor
2
ligeira
3
moderada
_______
_______
_______
4
muita
5
extrema
_______
_______
_______
Comentrios:
Fonte: ABNT, NBR 13526, 1995.
(B) _____
(C) _____
n
Nome do julgador
1
2
3
4
5
6
p
Soma de valores por amostra
Ordem de apresentao
A
B
C
A
C
B
B
C
A
B
A
C
C
A
B
C
B
A
Comentrios
am (A)
am (B)
am (C)
total am
julg (1)
julg (2)
julg (3)
total julg
IAL - 303
GL
(n 1)
(p 1)
(N 1) (n 1) (p 1)
SQ
SQ am
SQ julg
SQ res
(N 1)
SQ tot
QM
SQ am / n 1
SQ julg / p 1
SQ res / N n p + 1
Fc
QMam / QMres
QMjulg / QMres
-
FV = fontes de variao; GL = graus de liberdade; SQ = soma dos quadrados; QM = quadrado mdio; Fo = valor observado de estatstica F de Snedecor (Tabela 6); Fc = valor
calculado.
Nota: se Fcam for maior que Fo, existe diferena significativa (p<0,05) entre pelo menos
duas amostras codificadas.
Diferena mnima significativa (DMS) pelo teste de Dunnett Para verificar qual amostrateste difere da amostra-controle (C) ao nvel de significncia de 5%, utilize a frmula:
que existe diferena entre amostras, ou bilateral (Tabela 8) quando no se sabe se existe
diferena entre amostras.
Tabela 6 Valores de F para o nvel de erro = 5%, segundo nmero de graus de liberdade
de n1 e n2
n2
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
40
60
120
1
6,61
5,99
5,59
5,32
5,12
4,96
4,84
4,75
4,67
4,60
4,54
4,49
4,45
4,41
4,38
4,35
4,32
4,30
4,28
4,26
4,24
4,23
4,21
4,20
4,18
4,17
4,08
4,00
3,92
2
5,79
5,14
4,74
4,46
4,26
4,10
3,98
3,89
3,81
3,74
3,68
3,63
3,59
3,55
3,52
3,49
3,47
3,44
3,42
3,40
3,39
3,37
3,35
3,34
3,33
3,32
3,23
3,15
3,07
3
5,41
4,76
4,35
4,07
3,86
3,71
3,59
3,49
3,41
3,34
3,29
3,24
3,20
3,16
3,13
3,10
3,07
3,05
3,03
3,01
2,99
2,98
2,96
2,95
2,93
2,92
2,84
2,76
2,68
4
5,19
4,53
4,12
3,84
3,63
3,48
3,36
3,26
3,18
3,11
3,06
3,01
2,96
2,93
2,90
2,87
2,84
2,82
2,80
2,78
2,76
2,74
2,73
2,71
2,70
2,69
2,61
2,53
2,45
5
5,05
4,39
3,97
3,69
3,48
3,33
3,20
3,11
3,03
2,96
2,90
2,85
2,81
2,77
2,74
2,71
2,68
2,66
2,64
2,62
2,60
2,59
2,57
2,56
2,55
2,53
2,45
2,37
2,29
n1
6
4,95
4,28
3,87
3,58
3,37
3,22
3,09
3,00
2,92
2,85
2,79
2,74
2,70
2,66
2,63
2,60
2,57
2,55
2,53
2,51
2,49
2,47
2,46
2,45
2,43
2,42
2,34
2,25
2,17
7
4,88
4,21
3,79
3,50
3,29
3,14
3,01
2,91
2,83
2,76
2,71
2,66
2,61
2,58
2,54
2,51
2,49
2,46
2,44
2,42
2,40
2,39
2,37
2,36
2,35
2,33
2,25
2,17
2,09
8
4,82
4,15
3,73
3,44
3,23
3,07
2,95
2,85
2,77
2,70
2,64
2,59
2,55
2,51
2,48
2,45
2,42
2,40
2,37
2,36
2,34
2,32
2,31
2,29
2,28
2,27
2,18
2,10
2,02
9
4,77
4,10
3,68
3,39
3,18
3,02
2,90
2,80
2,71
2,65
2,59
2,54
2,49
2,46
2,42
2,39
2,37
2,34
2,32
2,30
2,28
2,27
2,25
2,24
2,22
2,21
2,12
2,04
1,96
10
4,74
4,06
3,64
3,35
3,14
2,98
2,85
2,75
2,67
2,60
2,54
2,49
2,45
2,41
2,38
2,35
2,32
2,30
2,27
2,25
2,24
2,22
2,20
2,19
2,18
2,16
2,08
1,99
1,91
11
4,70
4,03
3,60
3,31
3,10
2,94
2,82
2,72
2,63
2,56
2,51
2,45
2,41
2,37
2,34
2,31
2,28
2,26
2,24
2,22
2,20
2,18
2,16
2,15
2,14
2,12
2,04
1,95
1,86
IAL - 305
Tabela 7 Valores de d para teste de Dunnett, unilateral, nvel de erro = 5%, segundo o nmero de tratamentos P excluindo o controle, e o nmero de graus de liberdade
do resduo n1
n1
1
2
5
2,02
2,44
6
1,94
2,34
7
1,89
2,27
8
1,86
2,22
9
1,83
2,18
10
1,81
2,15
11
1,80
2,13
12
1,78
2,11
13
1,77
2,09
14
1,76
2,08
15
1,75
2,07
16
1,75
2,06
17
1,74
2,05
18
1,73
2,04
19
1,73
2,03
20
1,72
2,03
24
1,71
2,01
30
1,70
1,99
40
1,68
1,97
60
1,67
1,95
120
1,66
1,93
Fonte: ABNT, NBR 13526, 1995.
3
2,68
2,56
2,48
2,42
2,37
2,34
2,31
2,29
2,27
2,25
2,24
2,23
2,22
2,21
2,20
2,19
2,17
2,15
2,13
2,10
2,08
4
2,85
2,71
2,62
2,55
2,50
2,47
2,44
2,41
2,39
2,37
2,36
2,34
2,33
2,32
2,31
2,30
2,28
2,25
2,23
2,21
2,18
P
5
2,98
2,83
2,73
2,66
2,60
2,56
2,53
2,50
2,48
2,46
2,44
2,43
2,42
2,41
2,40
2,39
2,36
2,33
2,31
2,28
2,26
6
3,08
2,92
2,82
2,74
2,68
2,64
2,60
2,58
2,55
2,53
2,51
2,50
2,49
2,48
2,47
2,46
2,43
2,40
2,37
2,35
2,32
7
3,16
3,00
2,89
2,81
2,75
2,70
2,67
2,64
2,61
2,59
2,57
2,56
2,54
2,53
2,52
2,51
2,48
2,45
2,42
2,39
2,37
8
3,24
3,07
2,95
2,87
2,81
2,76
2,72
2,69
2,66
2,64
2,62
2,61
2,59
2,58
2,57
2,56
2,53
2,50
2,47
2,44
2,41
9
3,30
3,12
3,01
2,92
2,86
2,81
2,77
2,74
2,71
2,69
2,67
2,65
2,64
2,62
2,61
2,60
2,57
2,54
2,51
2,48
2,45
Tabela 8 Valores de d para teste de Dunnett, bilateral, nvel de erro = 5%, segundo
o nmero de tratamentos P excluindo o controle, e o nmero de graus de liberdade do
resduo n1
n1
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
306 - IAL
1
2,57
2,45
2,36
2,31
2,26
2,23
2,20
2,18
2,16
2,14
2,13
2
3,03
2,86
2,75
2,67
2,61
2,57
2,53
2,50
2,48
2,46
2,44
3
3,29
3,10
2,97
2,88
2,81
2,76
2,72
2,68
2,65
2,63
2,61
4
3,48
3,26
3,12
3,02
2,95
2,89
2,84
2,81
2,78
2,75
2,73
P
5
3,62
3,39
3,24
3,13
3,05
2,99
2,94
2,90
2,87
2,84
2,82
6
3,73
3,49
3,33
3,22
3,14
3,07
3,02
2,98
2,94
2,91
2,89
7
3,82
3,57
3,41
3,29
3,20
3,14
3,08
3,04
3,00
2,97
2,95
8
3,90
3,64
3,47
3,35
3,26
3,19
3,14
3,09
3,06
3,02
3,00
9
3,97
3,71
3,53
3,41
3,32
3,24
3,19
3,14
3,10
3,07
3,04
16
2,12
2,42
n1
1
2
17
2,11
2,41
18
2,10
2,40
19
2,09
2,39
20
2,09
2,38
24
2,06
2,35
30
2,04
2,32
40
2,02
2,29
60
2,00
2,27
120
1,98
2,24
Fonte: ABNT, NBR 13526, 1995.
2,59
2,71
3
2,58
2,56
2,55
2,54
2,51
2,47
2,44
2,41
2,38
4
2,69
2,68
2,66
2,65
2,61
2,58
2,54
2,51
2,47
2,80
P
5
2,78
2,76
2,75
2,73
2,70
2,66
2,62
2,58
2,55
2,87
2,92
2,97
3,02
6
2,85
2,83
2,81
2,80
2,76
2,72
2,68
2,64
2,60
7
2,90
2,89
2,87
2,86
2,81
2,77
2,73
2,69
2,65
8
2,95
2,94
2,92
2,90
2,86
2,82
2,77
2,73
2,69
9
3,00
2,98
2,96
2,95
2,90
2,86
2,81
2,77
2,73
Procedimento Os testes usando escalas indicam o tipo ou a intensidade de uma resposta sensorial. As escalas so classificadas em quatro classes: nominal, ordinal, intervalo e de proporo. A escala nominal especifica somente classes ou categorias, as quais
no possuem nenhuma relao quantitativa entre si como, por exemplo, a escala de
classificao da bebida de caf. A escala ordinal especifica as categorias como uma srie ordenada, porm sem expressar o tamanho da diferena entre elas, sendo utilizada
nos testes de ordenao. A escala de intervalo assume igualdade de distncia (intervalos) entre pontos (categorias) da escala e origem arbitrria. Estas escalas so ancoradas
em vrios pontos, geralmente nas extremidades e s vezes no meio da escala, com termos que indicam a magnitude da resposta. Costumam variar de 5 a 15 pontos (5-15)
cm nas escalas no estruturadas). So utilizadas nas avaliaes de atributos especficos,
nos testes de perfil de textura, na anlise descritiva quantitativa (ADQ) e nos testes de
preferncia e aceitao (escala hednica e de atitude). A escala hednica uma escala de intervalo que expressa o grau de gostar ou desgostar de uma amostra pelo consumidor. As escalas de intervalo se classificam em estruturada e no estruturada e em
unipolar e bipolar. Na escala estruturada (numrica e/ou verbal) os intervalos so associados a nmeros e/ou termos descritivos. Na escala no estruturada, linear ou grfica,
a linha demarcada por expresses quantitativas nas extremidades ou distantes destas
(0,5-1,25) cm. A escala unipolar apresenta extremidade zero enquanto que a bipolar
revela descries opostas nas duas extremidades. A escala de proporo envolve a livre
atribuio de nmeros pelos julgadores para indicar as propores das intensidades sensoriais em relao a uma amostra de referncia, fornecendo a relao de proporo entre
o estmulo e a resposta. utilizada no teste de estimativa da magnitude. Nos testes de
escala, as amostras codificadas e aleatorizadas so apresentadas simultaneamente ou no
ao julgador para que avalie o atributo especfico utilizando uma escala pr-definida (Ficha
7). Os resultados obtidos so avaliados estatisticamente segundo o objetivo proposto. GeIAL - 307
Julgador:
Data:
Voc est recebendo trs amostras codificadas. Avalie cada uma segundo a intensidade de dureza
(atributo de textura), utilizando a escala abaixo:
(1)
(2)
(3)
(4)
(5)
(6)
(7)
Muito duro
Duro
Levemente duro
Nem duro nem mole
Levemente mole
Mole
Muito mole
________
( )
________
( )
________
( )
Comentrios:
308 - IAL
P
2
17,97
6,08
4,50
3,93
3,64
3,46
3,34
3,26
3,20
3
26,98
8,33
5,91
5,04
4,60
4,34
4,16
4,04
3,95
4
32,82
9,80
6,82
5,76
5,22
4,90
4,68
4,53
4,41
5
37,08
10,88
7,50
6,29
5,67
5,30
5,06
4,89
4,76
6
40,41
11,74
8,04
6,71
6,03
5,63
5,35
5,17
5,02
7
43,12
12,44
8,48
7,05
6,33
5,90
5,61
5,40
5,24
8
45,40
13,03
8,85
7,35
6,58
6,12
5,82
5,60
5,43
9
47,36
13,54
9,18
7,60
6,80
6,32
6,00
5,77
5,59
10
49,07
13,99
9,45
7,83
6,99
6,49
6,16
5,92
5,74
15
55,36
15,65
10,53
8,66
7,72
7,14
6,76
6,48
6,28
n1
2
3
10
3,15
3,88
11
3,11
3,82
12
3,08
3,77
13
3,06
3,73
14
3,03
3,70
15
3,01
3,67
16
3,00
3,65
17
2,98
3,63
18
2,97
3,61
19
2,96
3,59
20
2,95
3,58
24
2,92
3,53
30
2,89
3,49
40
2,80
3,44
60
2,83
3,40
120
2,80
3,36
2,77
3,31
Fonte: DA SILVA (1998).
P
4
4,33
4,26
4,20
4,15
4,11
4,08
4,05
4,02
4,00
3,98
3,96
3,90
3,85
3,79
3,74
3,68
3,63
5
4,65
4,57
4,51
4,45
4,41
4,37
4,33
4,30
4,28
4,25
4,23
4,17
4,10
4,04
3,98
3,92
3,86
6
4,91
4,82
4,75
4,69
4,64
4,59
4,56
4,52
4,49
4,47
4,45
4,37
4,30
4,23
4,16
4,10
4,03
7
5,12
5,03
4,95
4,88
4,83
4,78
4,74
4,70
4,67
4,65
4,62
4,54
4,46
4,39
4,31
4,24
4,17
8
5,30
5,20
5,12
5,05
4,99
4,94
4,90
4,86
4,82
4,79
4,77
4,68
4,60
4,52
4,44
4,36
4,29
9
5,46
5,35
5,27
5,19
5,13
5,08
5,03
4,99
4,96
4,92
4,90
4,81
4,72
4,63
4,55
4,47
4,39
10
5,60
5,49
5,39
5,32
5,25
5,20
5,15
5,11
5,07
5,04
5,01
4,92
4,82
4,73
4,65
4,56
4,47
15
6,11
5,98
5,88
5,79
5,71
5,65
5,59
5,54
5,50
5,46
5,43
5,32
5,21
5,11
5,00
4,90
4,80
Aparncia
Odor e aroma
Textura manual
Textura oral
Sensaes tteis e
superficiais
Sabor e gosto
Julgador:
Data:
Voc est recebendo duas amostras codificadas. Avalie cada uma quanto aos atributos abaixo apontando
suas similaridades e diferenas.
Cdigos das amostras: ________ / ________
Similaridades
Aparncia:
Odor:
Textura:
Sabor:
312 - IAL
Diferenas
Ficha 9 Modelo para listagem consensual de atributos e nmero de vezes em que foram
citados pelo mtodo de rede
Termos descritivos ou descritores - Atributos
Aparncia:
Odor:
Textura:
Sabor:
Nmero de vezes
1:
2:
n:
1:
2:
n:
1:
2:
n:
1:
2:
n:
Julgador:
Data:
Voc est recebendo trs amostras codificadas. Avalie cada uma segundo a intensidade do atributo
especfico, assinalando com um trao vertical as escalas abaixo:
Aparncia:
Atributo 1
_|______________________________________|_
Fraco
Forte
Atributo 2
_|______________________________________|_
Fraco
Forte
Odor:
Atributo 3
_ |______________________________________|_
Fraco
Forte
Atributo 4
_|______________________________________|_
Fraco
Forte
Textura:
Atributo 5
_|______________________________________|_
Pouca
Muita
Atributo 6
_|______________________________________|_
Fraco
Forte
Sabor:
Atributo 7
_ |______________________________________|_
Fraco
Forte
Atributo 8
_|______________________________________|_
Ausente
Forte
Comentrio:
Fonte: ABNT, NBR 14140, 1998.
IAL - 313
Testes afetivos
Mtodo utilizado em anlise sensorial de alimentos, bebidas e gua. O julgador expressa seu estado emocional ou reao afetiva ao escolher um produto pelo outro. a forma
usual de se medir a opinio de um grande nmero de consumidores com respeito as suas
preferncias, gostos e opinies. As escalas mais empregadas so: de intensidade, a hednica,
do ideal e de atitude ou de inteno. Os julgadores no precisam ser treinados bastando ser
consumidores freqentes do produto em avaliao. Os testes afetivos em funo do local
de aplicao podem ser de laboratrio, localizao central e uso domstico. Basicamente,
os testes afetivos podem ser classificados em duas categorias: de preferncia (escolha) e de
aceitao (categoria).
164/IV Testes afetivos Testes de preferncia
Procedimento O indivduo manifesta sua preferncia em relao ao produto que lhe
oferecido. As escalas mais utilizadas so de ordenao-preferncia e comparao pareada.
No teste de ordenao-preferncia (Ficha 11) uma srie de amostras apresentada para que
seja ordenada de acordo com a preferncia do julgador. Na comparao pareada (Ficha 12)
so apresentados pares de amostras para serem comparadas pelo julgador em relao a sua
preferncia.
Ficha 11 Modelo para teste ordenao-preferncia
Amostra:
Julgador:
Data:
Voc est recebendo trs amostras codificadas, avalie cada uma na ordem crescente de
sua preferncia.
________
(1)
(menos preferida)
Comentrios:
314 - IAL
________
(2)
________
(3)
(mais preferida)
Julgador:
Data:
Voc est recebendo duas amostras codificadas, identifique com um crculo a sua amostra
preferida.
__________
__________
Comentrios:
IAL - 315
Ficha 13 Modelo de escala hednica (estruturada verbal, numrica, bipolar, nove pontos).
Amostra:
Julgador:
Data:
Voc est recebendo quatro amostras codificadas. Avalie globalmente cada uma segundo o
grau de gostar ou desgostar, utilizando a escala abaixo.
( 9 ) gostei extremamente
( 8 ) gostei moderadamente
( 7 ) gostei regularmente
( 6 ) gostei ligeiramente
( 5 ) no gostei, nem desgostei
( 4 ) desgostei ligeiramente
( 3 ) desgostei regularmente
( 2 ) desgostei moderadamente
( 1 ) desgostei extremamente
_______
( )
_______
( )
_______
( )
_______
( )
Comentrios:
316 - IAL
Julgador:
Data:
Voc est recebendo trs amostras codificadas. Indique o quo ideal est cada amostra
em relao ....., utilizando a escala abaixo.
( 1 ) muito fraca ( 2 ) fraca
( 3 ) ideal
_______ ( )
( 4 ) forte
_______ ( )
( 5 ) muito forte
_______ ( )
Comentrios:
Fonte: ABNT, NBR 14141, 1998.
167/IV Testes afetivos Testes de escala de atitude ou de inteno
Procedimento Por meio das escalas de atitude ou de inteno, o indivduo expressa sua
vontade em consumir, adquirir ou comprar, um produto que lhe oferecido. As escalas mais
utilizadas so as verbais de 5 a 7 pontos. As amostras codificadas e aleatorizadas podem ser
apresentadas seqencialmente ao julgador para serem avaliadas atravs da escala pr-definida (Ficha 15). Os termos definidos podem se situar, por exemplo, entre provavelmente
compraria a provavelmente no compraria e, no ponto intermedirio talvez compraria,
talvez no compraria. importante que a escala possua nmero balanceado de categorias
entre o ponto intermedirio e os extremos. Os dados so avaliados pelas freqncias atravs
dos grficos de histogramas. Recomenda-se que o nmero de julgadores esteja entre 50
a 100. O delineamento experimental dever ser previamente definido, podendo-se optar
pelo de blocos completos balanceados ou casualizados ou blocos incompletos casualizados,
conforme a situao.
IAL - 317
Ficha 15 Modelo de escala de atitude ou de inteno (estruturada verbal, numrica, bipolar, sete pontos)
Amostra:
Julgador:
Data:
Voc est recebendo trs amostras codificadas. Avalie cada uma segundo a sua inteno de
consumo, utilizando a escala abaixo.
(7) Comeria sempre
(6) Comeria muito freqentemente
(5) Comeria freqentemente
(4) Comeria ocasionalmente
(3) Comeria raramente
(2) Comeria muito raramente
(1) Nunca comeria
_______
( )
_______
( )
_______
( )
Comentrios:
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 13526: Teste de comparao mltipla em anlise sensorial de alimentos e bebidas. Rio de Janeiro, 1995.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 14140: Alimentos e
bebidas. Anlise Sensorial. Teste de anlise descritiva quantitativa (ADQ). Rio de Janeiro,
1998.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 14141: Escalas utilizadas em anlise sensorial de alimentos e bebidas. Rio de Janeiro, 1998.
BRANDT, M.A.; SKINNER, E.Z.; COLEMAN, J.A. Texture profile method. J. Food.
Sci. v. 28, p. 404-409, 1963.
BODYFELT, F.W.; TOBIAS, J.; TROUT, G.M. The sensory evaluation of dairy
products. 1st ed., New York/USA: AVI Book, 1988, 598 p.
CAUL, J.F. The profile method of flavour analysis. Advances in food research.
v. 7, p. 1-40, 1957.
DA SILVA, M. A. A. P. Anlise sensorial e instrumental de alimentos. Apostila de Disciplina. FEA/UNICAMP, Campinas, SP, 1998.
ELLIS, B. H. A guide book for sensory testing. Continental Can Co., Chicago, III.,
1961, 55 p.
FARIA, E.V.; MORI, E.E.M.; YOTSUYANAGI, K. Tcnicas de anlise sensorial. Apostila de Curso. LAFISE/ITAL, Campinas, SP, 2000, 103 p.
GRETAGMACBETH (USA). FM Test: Quick Guide to Operation Munsell Color.
New York /USA, 1997. 31 p.
INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATION. ISO/DIS
3972/1979. Sensory analysis: method of investigating sensitivity of taste. Geneva: ISO
1990, 5 p.
LARMOND, E. Laboratory methods for sensory evaluation of food. Agriculture Canad, 1987, 73 p.
MEILGAARD, M.; CIVILLE, G. V.; CARR, B. T. Sensory Evaluation Techniques.
1 ed., Flrida: CRC Press, 1987.
IAL - 319
Colaboradores
Maria Auxiliadora de Brito Rodas e Jussara Carvalho de Moura Della Torre
320 - IAL
CAPTULO
VII
ACARES E
PRODUTOS
CORRELATOS
IAL - 321
322 - IAL
VII
Captulo VII - Acares e produtos correlatos
este captulo so abordados os mtodos de anlise para produtos com alto teor de
acar, tais como: acares refinado, cristal e mascavo, rapadura, melao, xaropes
de diversos tipos e mel.
Com relao ao poder adoante dos diferentes acares, no existem aparelhos especficos
para a sua determinao. Para a comparao desta propriedade, recorre-se a provas sensoriais.
O poder adoante relativo de alguns acares e a sua rotao especfica esto descritos na Tabela 1.
Tabela 1 Poder adoante de alguns acares e sua rotao especfica
Acar
Poder adoante
relativo
Rotao especfica
[ ]D
Lactose
16
+ 52,5
Rafinose
22
+ 104,0
Galactose
32
+ 80,2
Raminose
32
+ 8,3
Maltose
32
+ 137,0
Xilose
40
+ 18,8
Dextrose
74
+ 52,5
Sacarose
100
+ 66,5
Acar invertido
130
Frutose
173
- 92,3
IAL - 323
O acar, sem outra designao especfica, a sacarose obtida da cana-de-acar (Saccharum officinarum) ou da beterraba (Beta vulgaris). De acordo com a tecnologia empregada, o acar obtido em diferentes tipos e graus de pureza. As determinaes para acar
compreendem: sacarose por desvio polarimtrico direto, umidade, cor ICUMSA, cinzas
(018/IV) e, eventualmente, minerais e metais pesados (cap. XXIII) e dixido de enxofre
(050/IV).
As anlises de glicose anidra e outros acares em p mais usuais so as de glicdios
redutores, glicdios no redutores, cinzas (018/IV) e, eventualmente minerais e metais pesados (cap. XXIII).
A determinao quantitativa dos acares redutores pode ser efetuada por diferentes
procedimentos, sendo o mtodo de reduo das solues de Fehling o mais empregado.
Xarope, sem outra especificao, consiste de uma soluo de acar em gua, contendo aproximadamente dois teros de seu peso em sacarose ou de outros tipos de acares tais
como: maltose, frutose ou glicose.
Melao o lquido que se obtm como resduo de fabricao do acar cristalizado,
do melado ou da refinao do acar bruto.
A anlise de xaropes de diversos tipos de acares e melao inclui as seguintes determinaes: glicdios redutores, glicdios no redutores, graus Brix, umidade, cinzas (018/IV)
e, eventualmente, minerais e metais pesados (cap. XXIII).
Rapadura o produto slido obtido pela concentrao a quente do caldo de cana
(Saccharum officinarum).
Na anlise de rapadura, as determinaes incluem: glicdios redutores em glicose,
glicdios no redutores em sacarose, umidade (012/IV), cinzas (018/IV) e, eventualmente,
minerais e metais pesados (cap. XXIII).
O mel consiste basicamente de diferentes acares, predominantemente de frutose
e glicose. Contm em menor proporo uma mistura complexa de outros carboidratos,
enzimas, cidos orgnicos, aminocidos, minerais e plen.
As determinaes usuais em mel incluem, entre outras, umidade, acidez total, acares redutores, sacarose aparente, cinzas (018/IV), slidos insolveis em gua, hidroximetilfurfural (HMF), atividade diastsica e as diferentes reaes que podem fornecer indicaes
324 - IAL
IAL - 325
Reagentes
Creme de alumina
Acetato bsico de chumbo
Procedimento Pese, com preciso, (26,0000,002)g da amostra totalmente homogeneizada em um bquer de 50 mL. Transfira para um balo volumtrico de 100 mL, com
o auxlio de 50 mL de gua. Complete o volume com gua a 20C. Enxugue a haste do
balo volumtrico com papel de filtro e agite. Filtre e cubra o funil com vidro de relgio ao
iniciar a filtrao. Despreze os primeiros 25 mL do filtrado. Ajuste o polarmetro, conforme
o manual do equipamento. Lave o tubo polarimtrico com o prprio filtrado e preencha
com a mesma soluo, evitando formao de bolhas no seu interior. Proceda a leitura com
a luz monocromtica de sdio (= 589,2 nm) em % de sacarose ou desvio polarimtrico,
temperatura constante de (20 0,5)C.
Nota: para solues mais escuras, emprega-se creme de alumina ou acetato de chumbo seco.
No caso deste ltimo, adicione pequena quantidade do sal seco soluo de acar aps
ter completado o volume e misture. Repita, se necessrio, as adies do sal at completar
a precipitao e observe se a soluo est sendo clarificada, tomando o cuidado de no se
adicionar excesso do referido sal.
Clculo
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, 16th ed. Arlington: A.O.A.C.,
(method 925.46) 1995. chapter 44. p. 4.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 8869: Acar
refinado - determinao de polarizao. Rio de Janeiro, 1985.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 157.
170/IV Acares Determinao da cor ICUMSA
Este mtodo usado para a determinao da cor em acares, podendo ser aplicado
em todos os acares brancos cristalizados ou em p. Baseia-se na determinao da absorbncia da soluo aucarada, no comprimento de onda de 420 nm. A soluo preparada e
filtrada para eliminar a turbidez. A cor ICUMSA expressa em unidades ICUMSA.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, suporte para a cubeta de 5 a 10 cm de caminho ptico,
refratmetro com escala em graus Brix, balana analtica, pHmetro, agitador magntico
e barra magntica, banho de ultra-som, conjunto de filtrao para membranas de
47 mm de polissulfona, bomba de vcuo, membranas filtrantes de fibra de vidro
tipo AP25 e membrana hidroflica (HA) tipo triton-free de (0,45 m) e ambas com
dimetro de 47 mm, esptula metlica, frasco Erlenmeyer de 250 mL, cubetas de
quartzo de 5 cm e 10 cm de percurso ptico, proveta graduada de 100 mL, basto de
vidro e bqueres de 100 e 250 mL.
Reagentes
Soluo de trietanolamina 0,1 M Pese, com preciso, 7,460 g de trietanolamina e transfira
com gua para um balo volumtrico de 500 mL. Complete o volume com gua.
Soluo de cido clordrico 0,1 M Pipete, cuidadosamente, 8,9 mL de cido clordrico
para um balo volumtrico de 1000 mL, contendo cerca de 750 mL de gua. Complete o
volume com gua.
Soluo-tampo trietanolamina/cido clordrico (tampo TEA/HCl ) Transfira 500 mL
da soluo de trietanolamina para um bquer de 1000 mL. Ajuste o pH para 7, colocando
cerca de 420 mL da soluo de cido clordrico para um volume final de 920 mL de soluoIAL - 327
328 - IAL
Concentrao em g/mL
,0
,1
,2
,3
,4
,5
,6
,7
,8
,9
0,4845 0,4855 0,4872 0,4886 0,4900 0,4914 0,4928 0,4942 0,4956 0,4970
42
0,4985 0,4999 0,5013 0,5027 0,5041 0,5055 0,5069 0,5083 0,5097 0,5111
43
0,5126 0,5140 0,5154 0,5168 0,5182 0,5197 0,5211 0,5225 0,5239 0,5254
44
0,5268 0,5282 0,5297 0,5311 0,5325 0,5340 0,5354 0,5368 0,5383 0,5397
45
0,5411 0,5426 0,5440 0,5455 0,5469 0,5484 0,5498 0,5513 0,5527 0,5542
46
0,5556 0,5571 0,5585 0,5600 0,5615 0,5629 0,5644 0,5658 0,5673 0,5688
47
0,5702 0,5717 0,5732 0,5746 0,5761 0,5776 0,5790 0,5805 0,5820 0,5835
48
0,5850 0,5864 0,5879 0,5894 0,5909 0,5924 0,5939 0,5953 0,5968 0,5983
49
0,5998 0,6013 0,6028 0,6043 0,6058 0,6073 0,6088 0,6103 0,6118 0,6133
50
0,6148 0,6163 0,6178 0,6193 0,6208 0,6223 0,6238 0,6254 0,6269 0,6284
51
0,6299 0,6314 0,6329 0,6345 0,6360 0,6375 0,6390 0,6406 0,6421 0,6436
52
0,6451 0,6467 0,6482 0,6497 0,6513 0,6528 0,6543 0,6559 0,6574 0,6590
53
0,6603 0,6621 0,6638 0,6651 0,6667 0,6682 0,6698 0,6713 0,6729 0,6745
54
0,6760 0,6776 0,6791 0,6807 0,6823 0,6838 0,6854 0,6869 0,6885 0,6901
55
0,6916 0,6932 0,6948 0,6954 0,6979 0,6995 0,7011 0,7027 0,7043 0,7058
56
0,7074 0,7090 0,7106 0,7122 0,7138 0,7154 0,7169 0,7185 0,7211 0,7217
57
0,7233 0,7249 0,7265 0,7281 0,7297 0,7313 0,7329 0,7345 0,7362 0,7378
58
0,7394 0,7410 0,7426 0,7442 0,7458 0,7474 0,7491 0,7507 0,7523 0,7539
59
0,7556 0,7572 0,7588 0,7604 0,7621 0,7637 0,7653 0,7670 0,7686 0,7702
60
0,7719 0,7735 0,7752 0,7768 0,7784 0,7801 0,7817 0,7834 0,7850 0,7867
Referncias bibliogrficas
ICUMSA. Methods Book Method GS2/3-9. The determination of white sugar solution
colour Official, 1994.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 9724: Acar Determinao da cor ICUMSA. Rio de Janeiro, 1987.
171/IV Acares Determinao da umidade por secagem presso atmosfrica
Este mtodo aplicvel para os diversos tipos de acares, inclusive rapadura. Baseiase na determinao da perda de massa por secagem em condies especificadas de temperatura e tempo.
IAL - 329
Material
Balana analtica, estufa, termmetro, esptula de metal, dessecador com slica gel e cpsula
de nquel, platina ou de alumnio com fundo chato e tampa.
Procedimento Pese de 5 a 10 g da amostra totalmente homogeneizada em uma cpsula de fundo
chato com tampa, previamente tarada. Seque em estufa durante 2 horas a (1052)C. Remova a
cpsula da estufa, cubra, resfrie em dessecador e pese. Repita as operaes de secagem por 30
minutos e de resfriamento at que o peso entre duas secagens tenha uma diferena 2 mg.
Clculo
N = perda de massa em g
P = massa da amostra em g
Referncias bibliogrficas
ICUMSA. Methods Book Method GS2/1/3-15. Determination of sugar moisture by loss
on drying official. 1994.
ASSOCIAO BRASILEIRA DE NORMAS TCNICAS. NBR 8870: Acar
Cristal e refinado, perda por secagem. Rio de Janeiro, 1985.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, 16th. ed. Arlington: A.O.A.C.,
(method 925.45 B) 1995. chapter 44. p.2.
172/IV Acares Determinao de anidrido sulfuroso pelo mtodo modificado de
Monier-Williams
Procedimento Pese (50 1) g de acar homogeneizado e transfira para o balo de
destilao e proceda conforme descrito no mtodo 050/IV.
173/IV Mis Determinao da umidade por refratometria
Aplicvel na determinao de umidade em mel e tambm em xaropes e baseia-se no
mtodo refratomtrico de Chataway, revisado por Wedmore, onde utiliza a medida de ndice
de refrao da amostra para ser convertida em porcentagem de umidade.
330 - IAL
Material
Refratmetro de Abb ou digital, com escala que permita estimar pelo menos 0,0005 n,
banho-maria, esptula metlica, algodo hidroflico e frasco de vidro de capacidade de 10
mL com tampa.
Procedimento Circule gua temperatura constante pelo aparelho, preferivelmente a
20C, por tempo suficiente para equilibrar a temperatura do prisma e da amostra e mantenha a gua circulando durante a leitura, observando se a temperatura permanece constante.
Amostras lquidas Transfira 3 a 4 gotas da amostra para o prisma do refratmetro. Faa a
leitura do ndice de refrao a 20C. Se a determinao tiver sido feita a uma temperatura
diferente de 20C, corrija a leitura do ndice de refrao para a temperatura padro de 20C,
de acordo com a nota de rodap da tabela. Obtenha a porcentagem de umidade segundo a
Tabela 3.
Amostras cristalizadas Transfira uma pequena poro para um frasco com tampa, feche
bem o frasco e coloque no banho-maria temperatura de (50 0,2)C para que todos os
cristais sejam dissolvidos. Esfrie temperatura ambiente. Em seguida proceda conforme as
amostras lquidas.
Tabela 3 Relao entre o ndice de refrao e a porcentagem de gua dos mis
ndice de
refrao a
20C
Umidade
%
ndice de
refrao a
20C
Umidade
%
ndice de
refrao a
20C
Umidade
%
ndice de
refrao a
20C
Umidade
%
1,5044
13,0
1,4961
16,2
1,4880
19,4
1,4800
22,6
1,5038
13,2
1,4956
16,4
1,4875
19,6
1,4795
22,8
1,5033
13,4
1,4951
16,6
1,4870
19,8
1,4790
23,0
1,5028
13,6
1,4946
16,8
1,4865
20,0
1,4785
23,2
1,5023
13,8
1,4940
17,0
1,4860
20,2
1,4780
23,4
1,5018
14,0
1,4935
17,2
1,4855
20,4
1,4775
23,6
1,5012
14,2
1,4930
17,4
1,4850
20,6
1,4770
23,8
1,5007
14,4
1,4925
17,6
1,4845
20,8
1,4765
24,0
1,5002
14,6
1,4920
17,8
1,4840
21,0
1,4760
24,2
1,4997
14,8
1,4915
18,0
1,4835
21,2
1,4755
24,4
1,4992
15,0
1,4910
18,2
1,4830
21,4
1,4750
24,6
1,4987
15,2
1,4905
18,4
1,4825
21,6
1,4745
24,8
1,4982
15,4
1,4900
18,6
1,4820
21,8
1,4740
25,0
1,4976
15,6
1,4895
18,8
1,4815
22,0
1,4971
15,8
1,4890
19,0
1,4810
22,2
1,4966
16,0
1,4885
19,2
1,4805
22,4
IAL - 331
com 75 mL de gua. Agite com agitador magntico. Mergulhe o eletrodo na soluo e anote
o pH. Titule com soluo de hidrxido de sdio 0,05 N at pH 8,5 e anote o volume (V).
Imediatamente, adicione nesta soluo 10 mL de soluo de hidrxido de sdio 0,05 N e,
sem demora, titule com soluo de cido clordrico 0,05 N at o pH 8,30 (Va). Titule 75
mL de gua com hidrxido de sdio 0,05 N (Vb) at pH 8,5.
Clculos
Acidez livre
som, esptula metlica, papel de filtro qualitativo, bqueres de 25 e 50 mL, balo volumtrico de 50 mL, pipetas volumtricas de 0,5 e 5 mL, tubos de ensaio de tamanho mdio,
proveta de 25 mL, funil de vidro de tamanho mdio e basto de vidro.
Reagentes
Soluo de Carrez I Dissolva 15 g de ferrocianeto de potssio - K4 [ Fe (CN)6 ] . 3H2O
em gua e complete para 100 mL.
Soluo de Carrez II Dissolva 30 g de acetato de zinco Zn (CH3COO)2 . 2H2O em
gua e complete para 100 mL.
Soluo de bissulfito de sdio - NaHSO3 a 0,2% m/v Dissolva 0,20 g de bissulfito de
sdio em gua e dilua a 100 mL. Se necessrio, dilua 1+1 com a soluo de referncia.
Procedimento Ligue e ajuste o espectrofotmetro conforme as instrues do fabricante,
para leituras das absorbncias a 284 e 336 nm. Pese, com preciso, cerca de 5 g do mel em
um bquer de 50 mL e transfira, no mximo, com 25 mL de gua para um balo volumtrico de 50 mL. Adicione 0,5 mL de soluo de Carrez I e misture. Adicione 0,5 mL de
soluo de Carrez II e misture. Se necessrio, adicione uma gota de lcool para suprimir a
espuma. Complete o volume com gua. Filtre, descartando os primeiros 10 mL do filtrado.
Pipete 5 mL para cada um dos dois tubos de ensaio. Adicione 5 mL de gua em um dos tubos (amostra) e 5 mL de soluo de bissulfito de sdio 0,2% no outro (referncia). Misture
bem em banho de ultra-som por 3 minutos e determine a absorbncia da amostra a 284 e
336 nm em cubeta de 1 cm. Se a absorbncia for maior que 0,6, dilua a soluo de amostra
com gua e a soluo de referncia com soluo de bissulfito de sdio 0,10%, na mesma
proporo e corrija a absorbncia para a diluio.
Nota: no aquea o mel antes desta determinao.
Clculos
invertido a 1% permanece estvel por vrios meses. Pipete 50 mL da soluo cida para um
balo volumtrico de 250 mL. Imediatamente antes de usar e diluir, neutralize com soluo de
hidrxido de sdio 1 M. Complete o volume com gua, para obter a concentrao de 2 g/L.
Solues de Fehling modificadas por Soxhlet - Soluo A Dissolva 69,28 g de sulfato
de cobre - CuSO4 . 5H2O - com gua em um balo volumtrico de 1 L. Complete o
volume com gua. Soluo B - Dissolva 346 g de tartarato duplo de sdio e potssio K Na (C4 H4 O6). 4 H2O e 100 g de hidrxido de sdio com gua em um balo volumtrico
de 1L. Complete o volume e filtre em papel de filtro qualitativo.
Padronizao Pipete 5 mL da soluo A e 5 mL da soluo B para um balo de fundo chato de 250 mL. Adicione, com uma bureta de 25 mL, soluo-padro de acar invertido,
cerca de 0,5 a 1 mL a menos do volume total necessrio para reduzir todo o cobre. Aquea
a soluo at a ebulio. Mantenha em ebulio moderada por 2 minutos. Sem remover da
chapa eltrica, adicione 1 mL da soluo de azul de metileno. Complete a titulao, dentro
de um tempo total de ebulio de 3 minutos, adicionando gota a gota a soluo de acar
invertido, at a descolorao do indicador. Aps a reduo completa do cobre, o azul de
metileno reduzido a um composto incolor e a soluo retorna colorao que tinha antes
da adio do indicador. Na padronizao, as solues de Fehling devero reagir completamente com 0,05 g de acar invertido, que corresponde a 25 mL da soluo-padro de
acar invertido (2 g/L).
Procedimento Pese cerca de 2 g da amostra homogeneizada de mel em um bquer de
25 mL. Dissolva com gua e transfira para um balo volumtrico de 200 mL. Complete
o volume com gua. Pipete 50 mL da soluo para um balo volumtrico de 100 mL e
complete o volume. Pipete 5 mL da soluo A e 5 mL da soluo B para um balo de
fundo chato de 250 mL. Adicione 7 mL de gua. Na bureta de 25 mL, coloque a soluo
de mel diluda e adicione 15 mL no balo de fundo chato. Aquea a soluo e mantenha
em ebulio moderada por 2 minutos. Adicione 1 mL de soluo de azul de metileno
enquanto ainda em ebulio e complete a titulao, dentro de um tempo total de ebulio
de 3 minutos, adicionando gota a gota a soluo diluda de mel at a descolorao do
indicador. O volume total para completar a titulao deve ser de 35 mL (soma da soluo
de Fehling A e B, amostra diluda de mel e gua). Anote o volume gasto da soluo de mel
(V mL). Repita a titulao, usando 5 mL de cada soluo de Fehling, (25 - V mL) de gua e
adicione com uma bureta o volume da soluo diluda de mel gasto na titulao preliminar
menos 1,5 mL. Aquea a soluo at a ebulio. Adicione 1 mL de soluo de azul de
metileno e complete a titulao, dentro de 3 minutos, adicionando gota a gota a soluo
diluda de mel at a descolorao do indicador. As titulaes em duplicata devem concordar
dentro de 0,1 mL.
336 - IAL
Clculo
P = massa de amostra em g
V = n de mL da soluo diluda da amostra gasto na titulao
Referncias bibliogrficas
CODEX ALIMENTARIUS COMMISSION. CAC/VOL III, Suppl. 2. ed. 1. Rome:
FAO/WHO, 1989. p. 7-13.
BOGDANOV, S.; MARTIN, P.; LULLMAN, C. HARMONISED METHODS OF
THE EUROPEAN HONEY COMMISSION. Apidologie, Paris: Issue Spec., 1997. p.
38-41.
177/IV Mis Determinao de acares redutores pelo mtodo B
Procedimento -- Pese 2 g de amostra de mel homogeneizada e proceda conforme a tcnica
descrita nos glicdios redutores em glicose (038/IV).
178/IV Mis Determinao de sacarose aparente pelo mtodo A
Baseia-se na determinao dos acares, aps a inverso por hidrlise cida, pelo
mtodo modificado de Lane & Eyon.
Material
Balana analtica, banho-maria, chapa eltrica, esptula metlica, papel indicador universal
de pH, balo de fundo chato de 250 mL, balo volumtrico de 100 mL, pipetas volumtricas de 2, 10 e 50 mL, pipeta graduada de 1 mL, buretas de 10 e 25 mL e funil pequeno.
Reagentes
Soluo-padro de acar invertido (10 g/L)
Solues de Fehling, modificadas por Soxhlet
Soluo de azul de metileno 0,2 % m/v
Soluo de cido clordrico 5 M
Soluo de hidrxido de sdio 5 M
IAL - 337
Procedimento Pipete 50 mL da soluo de mel obtida na determinao de acares redutores 176/IV para um balo volumtrico de 100 mL. Adicione 25 mL de gua. Aquea
a 65 C em banho-maria. Remova o frasco do banho e adicione 10 mL de soluo de cido
clordrico. Deixe a soluo resfriar naturalmente at a temperatura ambiente. Neutralize
com soluo de hidrxido de sdio, usando papel indicador de pH. Complete o volume
com gua. Proceda como em 176/IV.
Clculo
P = massa da amostra em g
V1 = n. de mL da soluo diluda da amostra gasto na titulao
C = n. de g de acar invertido por cento, obtido antes da inverso, acares redutores
Referncias bibliogrficas
CODEX ALIMENTARIUS COMMISSION. CAC/VOL III, Suppl. 2. ed. 1. Rome:
FAO/WHO, 1989, p. 9-13.
BOGDANOV, S.; MARTIN, P.; LULLMAN, C. HARMONISED METHODS OF
THE EUROPEAN HONEY COMMISSION. Apidologie, Paris: Issue Spec., 1997.
p. 38-41.
179/IV Mis Determinao de sacarose aparente pelo mtodo B
Procedimento - Pese 2 g de amostra de mel homogeneizado e proceda conforme a tcnica
descrita no mtodo 039/IV.
180/IV Mis Determinao de slidos insolveis em gua por gravimetria
Material
Balana analtica, estufa, bomba de vcuo, chapa eltrica, termmetro, dessecador com
slica gel, esptula metlica, bquer de 150 mL, cadinho de vidro (15-40 m), kitassato de
1000 mL e alonga de filtrao.
338 - IAL
Reagentes
Soluo alcolica de floroglucina a 1% m/v
cido sulfrico
Procedimento Pese cerca de 20 g da amostra homogeneizada de mel. Dissolva em quantidade adequada de gua a 80 C e misture bem. Filtre sob vcuo atravs de um cadinho de
vidro previamente tarado a (135 2)C e lave com gua a 80C. Recolha parte do filtrado
em um tubo de ensaio e adicione algumas gotas da soluo de floroglucina e de cido sulfrico (se houver a formao de nvoa esbranquiada existe ainda acar). Continue a lavagem com gua a 80C at que o filtrado esteja livre de acares. Seque o cadinho a 135C
por 1 hora, resfrie e pese. Retorne para a estufa a 135C em um intervalo de 30 min at que
o peso constante seja atingido.
Clculo
IAL - 339
Reagentes
Acetato de sdio
cido actico
Soluo de amido Pese, com preciso, 2 g de amido solvel anidro (prprio para a
determinao de poder diastsico) e misture com 90 mL de gua em um frasco Erlenmeyer
de 250 mL. Rapidamente, leve ebulio, agitando a soluo tanto quanto possvel. Reduza
o aquecimento e mantenha em ebulio moderada por 3 minutos, cubra, e deixe resfriar
at a temperatura ambiente. Transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o
volume com gua.
Soluo-estoque de iodo Dissolva 8,8 g de iodo ressublimado em (30 - 40) mL de gua
contendo 22 g de iodeto de potssio e dilua para 1000 mL com gua.
Soluo de iodo a 0,00035 M Dissolva 20 g de iodeto de potssio e 5 mL da soluoestoque de iodo em gua e dilua para 500 mL. Prepare uma nova soluo a cada dois dias.
Soluo-tampo de acetato pH 5,3 (1,59 M) Dissolva 87 g de acetato de sdio em 400
mL de gua, adicione cerca de 10,5 mL de cido actico, transfira para um balo volumtrico de 500 mL e complete o volume com gua. Ajuste o pH para 5,3, usando o pHmetro,
com acetato de sdio ou cido actico, se necessrio.
Soluo de cloreto de sdio 0,5 M Dissolva 14,5 g de cloreto de sdio em gua, transfira
para um balo volumtrico de 500 mL e complete o volume com gua.
Padronizao da soluo de amido Pipete 5 mL da soluo de amido para um bquer contendo 10 mL de gua e misture bem. Pipete 1 mL desta soluo para vrias provetas de 50
mL, contendo 10 mL da soluo de iodo 0,00035 M. Misture bem e determine o volume
de gua necessrio para a diluio da soluo de amido, para se obter uma leitura de absorbncia de 0,760 0,02, a 660 nm, utilizando um branco com gua. Repita a padronizao
a cada nova preparao da soluo de amido.
Procedimento Ligue e ajuste o espectrofotmetro conforme as instrues do fabricante,
para leituras da absorbncia a 660 nm. Ligue para estabilizar o pHmetro e faa os ajustes
para a operao. Calibre o pHmetro com as solues tampo 7 e 4. Pese cerca de 10 g de
amostra de mel em um bquer de 50 mL e dissolva com 15 mL de gua, adicione 5 mL
da soluo-tampo e transfira para um balo volumtrico de 50 mL, contendo 3 mL da
soluo de cloreto de sdio 0,5 M e complete o volume com gua. importante que o mel
seja tamponado antes da adio da soluo de cloreto de sdio. Pipete 5 mL da soluo de
amido num tubo contendo 10 mL desta soluo de mel tamponada e coloque em banho
de gua a (40 1)C por 15 minutos, agite essa soluo periodicamente. Em intervalos
340 - IAL
IAL - 341
Reagentes
Soluo de cido tnico a 0,5% m/v -- Dissolva 0,5 g de cido tnico em 100 mL de gua.
Procedimento Pese, com preciso, cerca de 2 g da amostra. Transfira para uma proveta de 50
mL, com tampa, com o auxlio de 20 mL de gua. Adicione 5 mL de soluo de cido tnico
0,5%. Adicione gua at completar o volume de 40 mL. Agite para misturar totalmente.
Deixe em repouso por 24 horas. Na presena de mel puro, ser formado um precipitado no
fundo da proveta no intervalo de 0,6 a 3,0 mL. Na presena de mel adulterado, no haver
formao de precipitado ou exceder o volume mximo do referido intervalo.
Referncias bibliogrficas
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Portaria n 001, de 24 de maro de 1980, Secretaria de Inspeo
de Produto Animal. Dirio Oficial, Braslia, 28 de mar. de 1980. Seo I, p. 5561-5572.
Aprova as Normas Higinico-sanitrias e Tcnicas para Mel, Cera de Abelhas e Derivados...
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 163.
183/IV Mis Reao de Fiehe
A reao de Fiehe com resorcina em meio cido pode indicar a presena de substncias produzidas durante o superaquecimento de mel ou a adio de xaropes de acares.
Material
Balana analtica, esptula metlica, provetas de 10 e 50 mL, bquer de 50 mL, pipeta
graduada de 1 mL, basto de vidro e tubo de ensaio pequeno.
Reagentes
ter
Soluo clordrica de resorcina - Dissolva 0,5 g de resorcina em 50 mL de cido clordrico.
Esta soluo dever ser recm-preparada.
Procedimento - Pese 5 g de amostra em um bquer de 50 mL. Adicione 5 mL de ter e
agite vigorosamente. Transfira a camada etrea para um tubo de ensaio e adicione 0,5 mL de
soluo clordrica de resorcina e deixe em repouso por 10 minutos. Na presena de glicose
comercial ou de mel superaquecido, aparecer uma colorao vermelha intensa, indicando
a fraude.
342 - IAL
Referncias Bibliogrficas
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Portaria n 001, de 24 de maro de 1980, Secretaria de Inspeo
de Produto Animal. Dirio Oficial, Braslia, 28 de mar. de 1980. Seo I, p. 5561-72. Aprova
as Normas Higinico-sanitrias e Tcnicas para Mel, Cera de Abelhas e Derivados...
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3 ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 164.
0184/IV Mis Reao de Lugol
A reao com soluo de Lugol pesquisa a presena de amido e dextrinas no mel.
Material
Balana analtica, banho-maria, esptula metlica, proveta de 50 mL, bquer de 50 mL,
pipeta graduada de 1 mL e basto de vidro.
Reagentes
Soluo de Lugol - Dissolva 1 g de iodo ressublimado em 10 mL de gua contendo 3 g de
iodeto de potssio e dilua para 50 mL com gua e armazene a soluo em frasco mbar.
Procedimento Pese 10 g da amostra em um bquer de 50 mL. Adicione 20 mL de
gua e agite. Deixe no banho-maria fervente por 1 hora e em seguida resfrie temperatura
ambiente. Adicione 0,5 mL da soluo de Lugol. Na presena de glicose comercial ou
xaropes de acar, a soluo ficar colorida de marrom-avermelhada a azul. A intensidade
da cor depende da qualidade e da quantidade das dextrinas ou amido, presentes na amostra
fraudada. Faa a mesma prova para um mel puro para comparao.
Referncias bibliogrficas
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Portaria n 001, de 24 de maro de 1980, Secretaria de Inspeo
de Produto Animal. Dirio Oficial, Braslia, 28 de mar. de 1980. Seo I, p. 5561-72. Aprova as
Normas Higinico-sanitrias e Tcnicas para Mel, Cera de Abelhas e Derivados...
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3 ed. So Paulo: IMESP, 1985, p. 165.
Colaboradores
Cristiane Bonaldi Cano; Letcia Arajo Farah Nagato e Maria Cristina Duran
IAL - 343
CAPTULO
VIII
GUAS
IAL - 345
346 - IAL
VIII
Captulo VIII - guas
GUAS
Reagentes
Soluo-padro de clcio Transfira, para um frasco Erlenmeyer de 500 mL, 1 g de carbonato de clcio previamente aquecido a 105C por 15 horas. Adicione, por meio de um funil,
cido clordrico diludo a 50%, aos poucos, at dissolver todo o carbonato. Adicione 200
mL de gua. Aquea at ebulio para eliminar todo gs carbnico. Esfrie, adicione duas
gotas do indicador vermelho de metila e ajuste para cor alaranjada, adicionando hidrxido
de amnio 3 M ou cido clordrico 50%.Transfira a soluo para um balo volumtrico de
1000 mL e complete o volume com gua. Um mL desta soluo equivale a 1 mg de carbonato de clcio.
Soluo-tampo Dissolva 16,9 g de cloreto de amnio em 143 mL de hidrxido de amnio. Adicione 1,25 g do sal Mg-EDTA e dilua para 250 mL com gua destilada.
Nota: Se o sal Mg-EDTA no for disponvel, alternativamente, dissolva 1,179 g de EDTA
dissdico e 780 mg de sulfato de magnsio (MgSO4.7H2O) ou 644 mg de cloreto de magnsio (MgCl2.6H2O) em 50 mL de gua destilada. Adicione esta soluo 16,9 g de cloreto
de amnio e 143 mL de hidrxido de amnio concentrado com agitao e dilua para 250
mL com gua destilada.
Soluo indicadora Misture, em almofariz, 0,5 g de negro de eriocromo T - sal sdico do
cido 1-(1-hidroxi-2-naftilazo)-5-nitro-2-naftol-4-sulfnico) - com 100 g de cloreto de sdio. Conserve em frasco com rolha esmerilhada.
Soluo de EDTA 0,01 M Dissolva 3,72 g do sal dissdico do cido etilenodiaminotetractico dihidratado em gua bidestilada e deionizada e complete a 1000 mL.
Padronizao Transfira 50 mL de gua destilada e deionizada para um frasco Erlenmeyer
de 250 mL. Adicione 2 mL da soluo-tampo e 0,05 g do indicador negro de eriocromo T.
Adicione 20 mL da soluo-padro de clcio. Titule com a soluo de EDTA at viragem da
cor prpura para azul. Calcule a massa de CaCO3 eqivalente a 1 mL da soluo de EDTA.
Procedimento Transfira 50 mL da amostra para um frasco Erlenmeyer de 250 mL. Adicione 1 mL da soluo-tampo e pequena poro (0,05 g) do indicador negro de eriocromo
T. Titule com a soluo de EDTA 0,01 M at que a colorao prpura passe a azul.
Clculo
v = n de mL de soluo de EDTA gasto na titulao
A= mg de CaCO3 eqivalente a 1 mL da soluo de EDTA 0,01 M
348 - IAL
V = n de mL da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 307-308.
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS ASSOCIATION, WATER ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater. 19th ed. Washington, DC: American Public Health Association,1995. chapter 2, p. 2-37.
186/IV Determinao de dureza de carbonatos e de no-carbonatos
Quando a dureza numericamente maior que a soma da alcalinidade de carbonato e
de bicarbonato, a quantidade de dureza equivalente alcalinidade total denominada dureza de carbonatos; a quantidade de dureza em excesso anterior denominada dureza de
no-carbonatos.
D A - Dureza de carbonatos = D
D > A - Dureza de carbonatos = A
A = alcalinidade de carbonatos + alcalinidade de bicarbonatos
D = dureza total
Calcule a dureza de no-carbonatos subtraindo a dureza de carbonato da dureza total.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 309.
187/IV Determinao da alcalinidade total por mtodo volumtrico com indicador
visual
A alcalinidade total de uma soluo , geralmente, devida aos ons hidroxila, carbonato e bicarbonato dissolvidos na gua e a soma das concentraes desses ons expressa em
carbonato de clcio. O contedo de cloro residual no deve ser superior a 1,8 mg/L, pois
pode destruir o indicador colorimtrico; esse excesso de cloro pode ser eliminado pela adio
de soluo de tiossulfato de sdio (1 litro de gua com concentrao de cloro de 1,8 mg/L
IAL - 349
Resultado da
titulao
Hidrxidos
Carbonatos
Bicarbonatos
F=0
AT
IAL - 351
F < AT
2F
AT 2 F
F = AT
2F
F > AT
2 F AT
2 (AT F)
F = AT
AT
352 - IAL
Reagentes
Cloreto de amnio
Hidrxido de sdio
Tiossulfato de sdio
Tetraborato de sdio
Soluo-estoque de cloreto de amnio Pese 3,819 g de cloreto de amnio, seco a 105C
por duas horas. Transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com
gua bidestilada e deionizada, livre de amnia. Transfira 10 mL desta soluo para balo volumtrico de 1000 mL. Complete o volume (cada mL desta soluo contm 1 mg de N ou
1,22 mg de NH3).
Solues-padro de cloreto de amnio Prepare, a partir de diluies de uma soluoestoque de cloreto de amnio com gua, uma srie de solues de concentraes 0,1; 1, 10
e 100 mg/L de NH3.
Curva-padro Transfira 100 mL de cada soluo-padro para bqueres de 150 mL. Mergulhe o eletrodo no padro de mais baixa concentrao e agite lentamente (para minimizar
as perdas de NH3) com um agitador magntico. Mantenha a agitao temperatura de 25C
e adicione aproximadamente 1 mL de NaOH 10 M para elevar o pH at 11. O eletrodo
deve permanecer na soluo at que a leitura, em milivolts, permanea estvel. No adicione
NaOH antes de imergir o eletrodo na soluo. Repita o procedimento para todas as soluespadro, aguardando estabilizao das leituras. Construa a curva: concentrao de amnia, em
mg/L versus potencial, em milivolts, utilizando papel semi-logartimico.
Procedimento Transfira 100 mL da amostra de gua para um bquer de 150 mL e proceda como na curva-padro. A partir da leitura obtida para amostra, interpole a concentrao
de NH3, na curva-padro previamente construda.
Referncia bibliogrfica
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKSASSOCIATION, WATER ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater. 19th ed. Washington, DC: American Public Health Association, 1995. chapter 4, p. 78-79.
189/IV Determinao de amnia por mtodo espectrofotomtrico
Este mtodo utiliza o reagente de Nessler que reage, quando adicionado a uma soluo diluda de amnia, formando um composto de cor amarelada, o qual pode flocular aps
IAL - 353
certo tempo. A determinao espectrofotomtrica deve ser efetuada antes que isto ocorra.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, sistema de destilao, balana analtica, bales volumtricos de
50 e 1000 mL e pipetas volumtricas de 1, 2 e 10 mL.
Reagentes
Cloreto de amnio
Carbonato de sdio
Hidrxido de sdio
Iodeto de mercrio II
Iodeto de potssio
Dihidrogenofosfato de potssio (KH2PO4)
Monohidrogenofosfato de potssio (K2HPO4.3H2O)
gua bidestilada e deionizada, livre de amnia para preparo de reagentes
Reagente de Nessler: soluo A Pese 100 g de iodeto de mercrio II e 70 g de iodeto de
potssio, transfira para um balo volumtrico de 200 mL, dissolva e complete o volume com
gua destilada e deionizada; soluo B Pese 160 g de hidrxido de sdio e dissolva com 500
mL de gua destilada e deionizada. Resfrie temperatura ambiente. Adicione vagarosamente
e sob agitao, a soluo A soluo B e dilua para 1000 mL com gua bidestilada e deionizada. Manuseie a soluo na penumbra e armazene-a em frasco plstico rgido ao abrigo da
luz.
Soluo-tampo de fosfato de potssio Pese 14,3 g de dihidrogenofosfatode potssio e
90,15 g de monohidrogenofosfato de potssio. Transfira para um balo volumtrico de 1000
mL e complete o volume com gua destilada e deionizada. Esta soluo dever apresentar
pH (7,4 0,2). Confira com medida potenciomtrica. Caso no coincida o valor com o
mencionado, acerte, via potenciomtrica, pela adio de um dos sais slidos mencionados,
sob agitao.
Soluo-padro de cloreto de amnio Pese 0,0785 g de cloreto de amnio e transfira para
um balo volumtrico de 1000 mL, completando o volume com gua bidestilada e deionizada. Esta soluo tem concentrao equivalente a 25 mg de NH3/L.
354 - IAL
Procedimento
Teste qualitativo Transfira 50 mL da amostra de gua para uma cpsula de porcelana e
adicione 1 mL do reagente de Nessler, sem agitao. Aguarde 10 minutos e observe o desenvolvimento de colorao amarela, comparando-a com um branco com gua bidestilada e
deionizada. Se houver aparecimento de cor amarela, proceda a destilao da amostra.
Destilao da amostra Transfira, para o sistema de destilao, 50 mL de soluo saturada
de carbonato de sdio e 500 mL de gua destilada. Destile aproximadamente 300 mL e
despreze. Continue a destilao, recolha 50 mL de destilado e adicione 1 mL de reagente de
Nessler. A colorao amarela indica resultado positivo. Continue a destilao at que o teste
seja negativo. Esfrie o sistema e substitua o volume restante do balo por 500 mL da amostra.
Adicione 10 mL da soluo-tampo de fosfato de potssio. Proceda a destilao de modo que
o tubo de sada do destilado fique imerso na soluo coletora (50 mL de cido sulfrico 0,02
M) contida em um Erlenmeyer de 250 mL. A velocidade de destilaao dever ser de 6 a 10
mL/min. Colete aproximadamente 180 mL do destilado, transfira para um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume. Transfira 50 mL do destilado para balo volumtrico,
adicione 1 mL de reagente de Nessler e homogeneze. Deixe em repouso por 10 minutos e
mea a colorao desenvolvida, em espectrofotmetro a 425 nm e determine a quantidade de
amnia correspondente, usando a curva-padro previamente estabelecida.
Curva-padro A partir de diluies da soluo-padro de cloreto de amnio, prepare uma
srie de solues de concentraes de 0,5; 1,0; 1,5 e 2,0 mg de NH3/L, transferindo, respectivamente, 1, 2, 3, e 4 mL da soluo-me para bales volumtricos de 50 mL e completando
o volume com gua destilada e deionizada. Adicione a cada balo 1 mL de reagente de Nessler e homogeneze. Deixe em repouso por 10 minutos e mea a colorao desenvolvida, em
espectrofotmetro, a 425 nm. Construa a curva-padro.
Clculo
Determine a concentrao de amnia utilizando a curva-padro estabelecida com soluespadro de cloreto de amnio. Multiplique o resultado por 0,5, pois foi tomada uma alquota
de 50 mL de um volume de 250 mL contendo 200 mL de distilado de 500 mL da amostra.
Nota: para expressar o resultado em nitrognio amoniacal, o procedimento ser o mesmo,
bastando multiplicar o resultado obtido para amnia por 14/17 (ou 0,824).
IAL - 355
Referncias bibliogrficas
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKSASSOCIATION WATER ,ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, 19th ed. Washington, DC: American Public Health Association, 1995. chapter 4, p. 75-76.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo:IMESP, 1985. p. 313-315.
190/IV Determinao de cloreto
ons cloreto podem ser encontrados em guas provenientes de depsitos minerais e
de fontes poludas, tais como esgotos e resduos industriais. Em soluo com pH entre 6,0 e
7,5, ons cromato so usados para indicar o ponto final da titulao de ons cloreto com ons
prata. O cloreto de prata precipitado quantitativamente antes do cromato de prata, de cor
vermelha.
Material
Banho-maria, estufa, dessecador, balana analtica, cpsula de porcelana de 150 mL, buretas
de 10 e 25 mL, basto de vidro, bales volumtricos de 50 e 1000 mL, pipetas volumtricas
de 25 e 50 mL e bureta de 25 mL.
Reagentes
Cromato de potssio
Cloreto de sdio
Nitrato de prata
Soluo-padro de nitrato de prata 0,0282 M Pese 4,7909 g de nitrato de prata, transfira
para um balo volumtrico de 1000 mL, dissolva e complete o volume com gua destilada
e deionizada.
Indicador cromato de potssio 10% m/v Pese 5 g de cromato de potssio, transfira para
um balo volumtrico de 50 mL, dissolva e complete o volume com gua destilada e deionizada.
Soluo-padro de cloreto de sdio Aquea o cloreto de sdio em estufa a 200C, por trs
356 - IAL
horas. Resfrie em dessecador, pese 1,6484 g do sal e dilua a 1000 mL, em balo volumtrico,
com gua destilada e deionizada. Um mL desta soluo corresponde a 1 mg de on cloreto.
Transfira 25 mL de soluo de cloreto de sdio para o interior da cpsula de porcelana de
150 mL. Adicione 4 gotas de indicador de cromato de potssio. Adicione o nitrato de prata
pela bureta de 25 mL, lentamente, sob agitao at o aparecimento de um precipitado levemente avermelhado. Anote o volume gasto e calcule a molaridade da soluo de nitrato de
prata, usando a frmula:
191/V Determinao da cor pelo mtodo de comparao ptica por via instrumental
A presena de cor na gua pode ser devida ao seu contedo de ons metlicos (geralmente ferro e mangans), plncton, resduo industrial, hmus e outros materiais orgnicos e poder ser expressa como aparente ou como verdadeira. A aparente originria dos materiais
dissolvidos e em suspenso. Por sedimentao ou centrifugao dos materiais em suspenso,
pode-se determinar a cor verdadeira. Se a cor aparente a dos materiais em suspenso, pode-se
determinar a cor verdadeira. Se a cor aparente a que se quer determinar, proceda anlise da
amostra sem submet-la separao de materiais em suspenso (no filtrada). A cor determinada por comparao visual entre a amostra e solues coloridas de concentraes conhecidas.
A comparao poder ser feita por via instrumental, com discos coloridos especiais.
Material
Aparelho comparador visual munido de disco padro de cor; tubos de cristal prprios para a
leitura ou tubos de Nessler de 50 mL, peas de cristal homogneo e plunger.
Reagentes
Soluo-padro de cor Pese 1,246 g de hexacloroplatinato de potssio (K2PtCI6), 1 g de
cloreto cobaltoso CoCI2.6H2O e mea 100 mL de cido clordrico. Transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua bidestilada e deionizada. Esta
soluo-estoque apresenta cor equivalente a 500 unidades internacionais. Prepare padres
contendo cores de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, e 70 unidades, diluindo 0,5;
1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5; 5,0; 6,0 e 7,0 mL da soluo-padro estoque em bales
volumtricos de 50 mL. Proteja estes padres contra a evaporao e a contaminao quando
no estiverem sendo usados.
Procedimento Encha um dos tubos com gua bidestilada e deionizada, de modo a no
formar bolhas. Mergulhe o plunger no interior do tubo de gua de modo a homogeneizar o
contedo da coluna. Proceda analogamente com o segundo tubo, utilizando agora a amostra
cuja cor se quer determinar. Leve os tubos ao comparador visual, colocando-os corretamente
em cada presilha do aparelho. Gire o disco at que a cor da amostra coincida com a cor apresentada no disco padro. Faa a leitura da escala. O resultado expresso em uH (unidade de
Hazen).
Nota: Caso deseje medir a cor verdadeira, faa a decantao e, se necessrio, centrifugue
previamente uma poro da amostra (como opo, pode-se efetuar filtrao com papel quantitativo para precipitados finos).
358 - IAL
Referncias Bibliogrficas
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKSASSOCIATION WATER, ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, 19th ed. Washington, DC: American Public Health Association, 1995. chapter 2, p. 1-3.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo:IMESP, 1985. p. 322-323.
192/IV Determinao de ferro
Os compostos de ferro, muito abundantes na natureza, so integrantes da composio
qumica do solo, das rochas e da matria vegetal. Em condies redutoras, o ferro existe no
estado ferroso. Em guas expostas ao ar ou em condies oxidantes, os ons ferrosos so oxidados ao estado frrico, o qual se hidrolisa formando hidrxido de ferro III insolvel. O ferro
ocorre em soluo aquosa, em estado coloidal que pode ser peptizado por matria orgnica,
em complexos inorgnicos ou orgnicos ou em partculas em suspenso.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, chapa eltrica, pHmetro, balana analtica, bqueres de 100,
250, 500, 1000 e 2000 mL, bales volumtricos de 50, 100 e 1000 mL, barra magntica,
buretas de 10 mL e 25 mL, frascos Erlenmeyer de 125 e 250 mL, funil de haste longa, l de
vidro, pipetas volumtricas de 5, 25 e 50 mL, pipetas graduadas de 5 mL, proveta de 100
mL e vidro de relgio.
Nota: recomenda-se no usar esptula metlica
Reagentes
Acetato de sdio
cido actico glacial
cido clordrico
cido fosfrico
cido sulfrico
1,10-Fenantrolina
Cloreto de hidroxilamina
Oxalato de sdio
Permanganato de potssio
Sulfato ferroso amoniacal
IAL - 359
Zinco em p
cido sulfrico 0,4 M
Soluo de permanganato de potssio 0,02 M
cido clordrico a 50%
cido sulfrico a 50% (para padronizao do KMnO4).
Soluo-padro de ferro II Pese 7 g de sulfato de amnio e ferro Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O,
dissolva em 50 mL de gua bidestilada e deionizada, transfira para um balo volumtrico de
1000 mL e adicione 5 mL de cido sulfrico. Complete o volume com gua destilada e deionizada e homogeneze. Esta soluo contm cerca de 1 g de ferro. Pipete 25 mL da soluoestoque em frasco Erlenmeyer de 250 mL. Adicione 70 mL de gua bidestilada e deionizada,
0,1 g de zinco em p. Ferva lentamente, at dissolver todo o zinco, agitando o frasco Erlenmeyer, de tempos em tempos, com movimentos circulares. Se a soluo ficar turva, adicione,
lentamente, soluo de cido sulfrico 1 M at a turvao desaparecer. Esfrie, cobrindo o
frasco Erlenmeyer com vidro de relgio. Adicione 1 mL de cido fosfrico e titule imediatamente com soluo-padro de permanganato de potssio 0,02 M at cor levemente rosada.
A soluo original deve estar com concentrao ao redor de 0,0178 M em ons de Fe II.
Nota: quando disponvel, poder ser usada a soluo-padro 1000 mg/kg (em Fe) para espectrometria de absoro atmica.
Reagente cloreto de hidroxilamnio (cloridrato de hidroxilamina) Pese 10 g de cloreto de
hidroxilamnio NH2OH.HCl, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete
o volume com gua destilada e deionizada.
Soluo-tampo de acetato de sdio Dissolva 250 g de acetato de sdio em 150 mL de
gua destilada e deionizada em bquer de 1000 mL. Mergulhe um eletrodo de vidro combinado previamente calibrado, conectado a pHmetro, uma barra magntica e, sob agitao,
adicione lentamente 500 mL de cido actico glacial. Aps homogeneizao, sob agitao
constante, continue adicionando o cido actico at o pH ficar entre 4,4 e 5,0. Complete o
volume a 1000 mL com gua bidestilada e deionizada. Transfira para frasco de vidro e guarde
em geladeira, para se evitar a formao de fungos. Retire da geladeira, uma hora antes do uso,
quantidades suficientes recolhidas em bqueres ou frascos pequenos de polietileno e mantidas temperatura ambiente.
Soluo-reagente Pese 1 g de 1,10-fenantrolina monoidratada C12H8N2.H2O, transfira
para um balo volumtrico de 1000 mL com 100 mL de gua bidestilada e deionizada,
adicione duas gotas de HCl, dissolva sob agitao e complete o volume com gua bidestilada
e deionizada.
360 - IAL
IAL - 361
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 319-320.
193/IV Determinao de fluoreto pelo mtodo colorimtrico
O on fluoreto em guas pode ocorrer naturalmente ou proveniente do processo de
fluoretao, o qual consiste na adio controlada de compostos de flor na gua de abastecimento pblico. Quando presente em concentraes adequadas, o flor produz efeitos benficos, promovendo a reduo da incidncia de cries dentais, porm pode originar a fluorose
quando em concentraes acima das recomendadas.
Entre os mtodos analticos sugeridos para a determinao do on fluoreto em
guas, o mtodo potenciomtrico com eletrodo on seletivo o mais indicado, mas podese tambm usar o colorimtrico com o reagente de SPADNS. Ambos esto sujeitos a erros
devido interferncia de outros ons presentes. A fim de eliminar estas interferncias,
pode ser necessria a destilao prvia da amostra; no caso de guas potveis, onde a concentrao destes ons interferentes pequena, a destilao da amostra, normalmente, no
necessria.
Tabela 2 Concentrao limite das substncias que causam interferncia na determinao
do on fluoreto
Substncia
ou parmetro
alcalinidade
(CaCO3)
alumnio
cloreto
cloro
cor e turbidez
ferro
hexametafosfato
fosfato
sulfato
Mtodo potenciomtrico
mg/L
tipo de erro
7000
+
3
20000
5000
200
50000
50000
50000
Mtodo colorimtrico
mg/L
tipo de erro
5000
0,1*
7000
+
remoo com arsenito de sdio
remoo por destilao
10
1,0
+
16
+
200
-
(*) para leitura imediata, a tolerncia aumenta com o tempo: aps 2 h, 3 mg/L; depois de 4
h, 30 mg/L
O mtodo colorimtrico utilizando como reagente o SPADNS tem uma faixa analtica de
0 a 1,40 mg/L com desenvolvimento de cor virtualmente instantnea. A determinao da
concentrao do on fluoreto feita por meio da medida de absorbncia da amostra. Este
mtodo
baseia-se na reao entre o fluoreto e o composto colorido formado entre o zircnio
.
362 - IAL
e o SPADNS. O fluoreto reage com este composto resultando em um complexo sem cor
(ZrF6-2) e liberando o ligante orgnico. Com o aumento da concentrao de fluoreto, ocorre
um decrscimo na intensidade da cor da soluo. Algumas interferncias podem ser eliminadas pelo uso de reagentes especficos, como o arsenito de sdio para eliminao de cloro ou o
aumento do tempo de repouso da amostra aps a adio do reagente analtico, no caso especfico do alumnio. Para as demais interferncias, tais como: hexametafosfato (1 mg/L), fosfato
(16 mg/L) e sulfato (200 mg/L), necessria a destilao prvia da amostra.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, bales volumtricos de 50, 100, 500 e 1000 mL, bureta de
10 mL, pipetas volumtricas de 5, 10 e 50 mL e proveta de 10 mL.
Reagentes
Fluoreto de sdio anidro
Sal trissdico do cido 4,5-di-hidrxido-3-(para-sulfo-fenil-azo)- 2,7-naftileno-dissulfnico
SPADNS
Oxicloreto de zircnio octahidratado
cido clordrico
Arsenito de sdio
Soluo-padro de fluoreto 100 mg/L Pese 221 mg de fluoreto de sdio anidro, transfira
para um balo volumtrico de 1000 mL e complete com gua bidestilada e deionizada. Armazene esta soluo (1 mL = 0,1 mg F-) em frasco plstico (polipropileno). Dilua 100 mL da
soluo-estoque de fluoreto a 1000 mL com gua destilada e deionizada, (1 mL = 0,01 mg
F-). A partir desta soluo, prepare uma srie de padres de fluoreto com concentraes no
intervalo de 0,05 a 1,4 mg F-/L, com volume final de 100 mL.
Soluo de SPADNS Pese 958 mg de SPADNS, transfira para um balo volumtrico de
500 mL e complete com gua destilada e deionizada. Esta soluo estvel por um ano, se
protegida da luz direta.
Soluo de oxicloreto de zircnio Pese 133 mg de oxicloreto de zircnio, ZrOCl2. 8H2O
e transfira para um balo volumtrico de 500 mL, aproximadamente 25 mL de gua bidestilada e deionizada e 350 mL de cido clordrico. Complete o volume com gua destilada e
deionizada.
Soluo mistura SPADNS-oxicloreto de zircnio Misture volumes iguais das solues de
SPADNS e de oxicloreto de zircnio. Armazene em frasco mbar, protegido da luz. A soluo estvel por 2 anos.
IAL - 363
Soluo de referncia Misture 10 mL da soluo de SPADNS e 100 mL de gua bidestilada e deionizada. Adicione 10 mL cido clordrico diludo (7 mL de cido clordrico mais
3 mL de gua bidestilada e deionizada). A soluo resultante utilizada para estabelecer o
ponto de referncia (zero) de absorbncia do instrumento. Esta soluo estvel por um ano.
Soluo de arsenito de sdio 0,5% (m/v) Pese 5 g de arsenito de sdio, transfira para um
balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua destilada e deionizada.
Procedimento Ajuste o equipamento para comprimento de onda igual a 570 nm. Determine o ponto de referncia (zero) do espectrofotmetro a partir da soluo de referncia. Se a
amostra contiver cloro residual, o mesmo deve ser eliminado pela adio de soluo de arsenito de sdio. Mea 50 mL da amostra de gua a ser analisada. Adicione 1 mL de arsenito de
sdio a 0,5% (se a amostra contiver cloro residual), agite e espere 1 minuto. Adicione 5 mL
da soluo SPADNS e 5 mL da soluo de oxicloreto de zircnio, ou 10 mL do reagente
SPADNS-oxicloreto de zircnio, e misture bem. Leia as absorbncias das amostras a 570 nm.
Se o valor de absorbncia da amostra no estiver dentro do intervalo da curva-padro, repita
o procedimento usando uma amostra diluda.
Curva-padro Mea pores de 50 mL de solues-padro de concentraes no intervalo
de 0,05 a 1,4 mg F-/L. Adicione a cada uma, 5 mL de soluo SPADNS e 5 mL de oxicloreto
de zircnio, ou 10 mL do reagente SPADNS-oxicloreto de zircnio e misture. Faa as leituras de absorbncia de cada uma das solues-padro na mesma temperatura em que sero
lidas as amostras. Construa o grfico de absorbncia em funo da concentrao de fluoreto.
Deve-se obter uma reta com coeficiente angular negativo.
Nota: prepare uma nova curva-padro sempre que alguma das solues reagentes seja
refeita.
Clculo
Determine a concentrao de fluoreto diretamente da curva-padro.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 325326.
364 - IAL
dissoluo dos sais, transfira para um balo volumtrico de 1000 mL, acerte o pH em torno
de 6,0 ( 0,2) e complete o volume com gua destilada e deionizada. Confirme, novamente,
o pH. Armazene em frasco plstico, sob refrigerao.
Procedimento Mea 50 mL da amostra e transfira para um bquer de plstico de 100 mL.
Adicione, com pipeta volumtrica, 5 mL da soluo-tampo T3. Coloque uma barra magntica no bquer e homogeneze sob agitao magntica. Com o potencimetro e os eletrodos
calibrados, proceda leitura das amostras. Faa as leituras das amostras utilizando agitao
magntica constante e velocidade similar que foi utilizada para a leitura dos padres.
Curva-padro Nos casos em que o equipamento permite a calibrao em leituras automticas em concentrao direta, construa a curva interna de calibrao, seguindo as instrues expressas no manual do aparelho. Quando o equipamento no permite a calibrao em
leituras automticas em concentrao, proceda s leituras em milivolts, utilizando solues
padro de 0,2 a 2 mg/L de fluoreto. Construa uma curva milivolts x [F-] em papel monolog.
O coeficiente angular da reta (slope), deve estar entre -54 a -60 mV/[F-].
Referncia bibliogrfica
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS
ASSOCIATION WATER, ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods fort he
Examination of Water and Wastewater, 19th Ed. Washington, DC: American Public
Health Association,1995. chapter 4, p. 61-62.
195/IV Determinao de nitrato pelo mtodo espectrofotomtrico na regio do ultravioleta
O on nitrato geralmente ocorre em pequenas quantidades nas guas superficiais, mas
atinge elevadas concentraes em algumas guas subterrneas. Este mtodo baseia-se na leitura direta da absorbncia da amostra de gua, com adio de cido clordrico 1,0 M, para
guas de abastecimento e mineral.
A regio do espectro eletrnico em que so feitas as medidas de absorbncia muito
sujeita a interferncias espectrais. Assim, este ensaio somente aplicvel em guas com baixo
contedo em matria orgnica (guas naturais no contaminadas e guas de abastecimento
pblico). O uso do cido clordrico para previnir a interferncia de concentraes de hidrxido ou carbonato acima de 1000 mg CaCO3/L. Interferentes: mteria orgnica dissolvida,
surfactantes, NO-2 e Cr 6+ , ons inorgnicos no encontrados em guas naturais, tais como
cloreto e clorato.
366 - IAL
IAL - 367
Referncia bibliogrfica
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS ASSOCIATION WATER, ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, 19th ed. Washington, DC: American Public Health Association, 1995. chapter 4, p. 85-86.
Mtodo II - Determinao de nitrato na regio do ultravioleta a 220 nm e 275 nm
Este mtodo baseia-se na leitura direta da absorbncia da amostra de gua, com
adio de cido clordrico 1 M, em espectrofotmetro a 220 e 275 nm
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, bales volumtricos de 50 e 1000 mL, pipetas volumtricas de
5,10,15,20 e 25 mL
Reagentes
Nitrato de potssio ou nitrato de sdio, com pureza mnima de 99%
Soluo de cido clordrico 1 M - veja mtodo I
Soluo-estoque de nitrato 100 mg/L - veja mtodo I
Soluo-padro intermediria de nitrato 10 mg/L
Procedimento - Transfira, quantativamente, a amostra de gua para um balo volumtrico de
50 mL. Adicione 1 mL de cido clordrico 1 M e homogeneze. Leia a absorbncia a 220 nm
e 275 nm. Determine a quantidade de nitrognio ntrico correspondente, usando a curvapadro previamente estabelecida.
Curva-padro - A partir da soluo-padro intermediria, prepare a curva-padro transferindo alquotas de 5, 10, 15, 20 e 25 mL da soluo-padro de nitrato 10 mg/L para bales
volumtricos de 50 mL, completando o volume com gua destilada e deionizada. Adicione
a cada balo volumtrico 1 mL de HCl 1 M e homogeneze. As solues preparadas apresentaro concentraes de 1, 2, 3, 4 e 5 mg NO-3 /L, respectivamente,
Medidas espectrofotomtricas - Leia a absorbncia no comprimento de onda 220 nm para
relacionar com a concentrao de nitrato e a 275 nm para determinar a interferncia devida
matria orgnica dissolvida.
368 - IAL
Clculo
Para amostras e padres, multiplique por 2 a leitura de absorbncia em 275 nm e subtraia
pela absorbncia obtida em 220 nm. Usando tambm as absorbncias corrigidas (Acorrigida
= A220 - 2xA275), obtenha as concentraes das amostras diretamente a partir da curva-padro
(A x concentrao). Se a concentrao de nitrato da amostra for maior que 5 mg/L, proceda
a diluio da amostra original com gua destilada e deionizada, adicione 1 mL de HCl a 50
mL da amostra diluda e repita a leitura. Neste caso, o resultado dever ser multiplicado pelo
fator da diluio.
Nota: se o valor da correo ( 2xA275) for maior que 10% do valor da leitura da absorbncia
em 220 nm, este mtodo no poder ser utilizado.
Referncia bibliogrfica
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS ASSOCIATION WATER, ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, 19th ed. Washington, DC: American Public Health Association, 1995. chapter 4, p. 85-86.
196/IV Determinao de nitrato pelo mtodo espectrofotomtrico com desenvolvimento de cor
O mtodo baseia-se na reao de ons nitrato com cido fenol dissulfnico e posterior
alcalinizao com hidrxido de sdio, obtendo-se um composto amarelo. Este composto
o sal sdico do cido pcrico formado pela nitrao do fenol, cuja colorao medida em
espectrofotmetro.
C6 H3 (OH)(SO3 H)2 + 3 HNO3 C6H2 (OH)(NO2 )3 + 2 H2 SO4 + H2O
C6H2 (OH)(NO2 )3 + NaOH C6H2(NO2 )3ONa + H2O
Os ons cloreto interferem no processo porque formam HCl com o excesso de H2SO4 contido na mistura cido fenol dissulfnico/cido sulfrico e o HCl reage com o HNO3 formado:
6 HCl + 2HNO3 2 NO + 4 H2O + 3 Cl2
IAL - 369
IAL - 371
Clculo
Determine a quantidade de nitrognio ntrico (NO3-) correspondente, usando a curva-padro pr-estabelecida.
Referncias bibliogrficas
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS,
ASSOCIATION WATER ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for
the Examination of Water and Wastewater, 11th ed. Washington, DC: American Public
Health Association,1960, p. 175.
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS,
ASSOCIATION WATER ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for
the Examination of Water and Wastewater, 19th ed. Washington, DC: American Public
Health Association,1995. chapter 4, p. 85-86.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 317-319.
197/IV Determinao de nitrito pelo mtodo espectrofotomtrico com desenvolvimento de cor
O on nitrito corresponde a um estgio intermedirio de oxidao do nitrognio.
Forma-se tanto pela oxidao da amnia como pela reduo do nitrato. Tais oxidaes
e redues podem ocorrer em estaes de tratamento de esgotos, em sistemas de distribuio de gua e em guas naturais. O nitrito pode ainda ser proveniente de aditivos
inibidores da corroso em instalaes industriais. O on nitrito (NO2-) determinado
por meio da formao de uma cor vermelho-prpura produzida em pH (2,0 - 2,5) pela
reao de diazotao da sulfanilamida com dihidrocloreto de N-(1-naftil)etilenodiamina.
Na estocagem da amostra de gua para a determinao de ons nitrito, nunca use cido
para a sua preservao. A determinao deve ser efetuada na amostra recm-coletada, de
modo a prevenir a converso bacteriana de NO2- para NO3- ou NH3. Para tempos de
espera de 1 a 2 dias, conserve a 4C.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, balana analtica, estufa, pesa-filtro, bales volumtricos de 50,
250 e 1000 mL, bureta de 10 mL, bastes de vidro, bquer de 100 mL, dessecador, pipetas
volumtricas de 2 e 50 mL e pipetas graduadas de 10 mL.
372 - IAL
Reagentes
Nitrito de sdio com pureza mnima de 99%, armazenado em dessecador
Nitrito de potssio com pureza mnima de 99%, armazenado em dessecador
cido fosfrico
Sulfanilamida
Dihidrocloreto de N-(1-naftil)etilenodiamina
Oxalato de sdio anidro, grau padro primrio
cido sulfrico
Permanganato de potssio
Soluo-padro de ons nitrito (100 mg/L) Em um bquer de 100 mL, pese exatamente
0,15 g de nitrito de sdio ou 0,1848 g de nitrito de potssio puros, previamente secos por 2
horas em estufa a 105C e resfriados em dessecador por uma hora. Transfira, cuidadosamente, para um balo volumtrico de 1000 mL com gua bidestilada e deionizada e complete o
volume. Homogeneze.
Nota: utilize sempre soluo recm-preparada. Esta soluo tem validade de 30 dias, desde
que mantida sob refrigerao.
Soluo de oxalato de sdio 0,025 M Dissolva 3,350 g de oxalato de sdio em gua destilada e deonizada, transfira para balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume.
Soluo de permanganato de potssio 0,01 M Dissolva 1,6 g de permanganato de potssio
em 1 litro de gua destilada e deionizada. Armazene a soluo em um frasco mbar (rolha
de vidro), por uma semana. Cuidadosamente, de modo a no ressuspender o sedimento,
decante ou pipete o sobrenadante para outro frasco mbar (rolha de vidro). Padronize esta
soluo, freqentemente, pelo seguinte procedimento (em triplicata): em Erlenmeyer de 250
mL, pese 0,200 g de oxalato de sdio anidro, adicione 100 mL de gua destilada e deionizada
e agite at dissolver o sal. Adicione 10 mL de soluo aquosa de cido sulfrico 1:1 e aquea
a 90-95 C. Titule, sob agitao e rapidamente, com a soluo de permanganto de potssio
preparada at que uma leve colarao rsea persista por, no mnimo, 1 minuto. Durante a
titulao, no permita que a temperatura fique abaixo de 85 C (se necessrio, aquea o Erlenmeyer durante a titulaao). Faa um branco com gua destilada e cido sulfrico (1:1). A
molaridade da soluo de KMnO4 calculada por meio da mdia de trs titulaes a partir
da seguinte equao:
IAL - 373
Reagentes
Permanganato de potssio
Hidrxido de sdio
Soluo-padro estoque de cloreto de amnio Pese, com preciso, 3,141 g de cloreto de
amnio, previamente seco a 105C. Transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e
complete o volume com gua bidestilada e deionizada. Cada mL desta soluo contm
1 mg de NH3.
Solues-padro de cloreto de amnio Prepare, a partir de diluies de uma soluoestoque de cloreto de amnio com gua, uma srie de solues de concentraes 0,5; 1,0; 1,5
e 2,0 mg/L de NH3.
Soluo alcalina de permanganato de potssio Pese 16 g de permanganato de potssio,
transfira para um bquer de 3000 mL, acrescente 1200 mL de gua bidestilada e deionizada (fervida por 10 minutos). Adicione 800 mL de soluo de NaOH a 36%, clarificada por decantao. Adicione gua destilada e deionizada at completar 2500 mL. Aquea
at reduzir o volume a 2000 mL. Guarde a soluo em frasco plstico rgido e ao abrigo
da luz. Determine, numa prova em branco, o nitrognio amoniacal correspondente a
50 mL da soluo e use este resultado para as correes nas determinaes.
Reagente de Nessler: Soluo A Pese 100 g de iodeto de mercrio II, 70 g de iodeto de
potssio, transfira para um balo volumtrico de 200 mL e complete o volume com gua
destilada e deionizada. Soluo B Pese 160 g de hidrxido de sdio, transfira para um balo volumtrico de 500 mL e complete o volume com gua destilada e deionizada. Resfrie
temperatura ambiente. Adicione vagarosamente e sob agitao, a soluo A soluo B e
dilua para 1000 mL com gua destilada e deionizada. Manuseie a soluo na penumbra e
armazene em frasco plstico rgido ao abrigo da luz.
Procedimento Ao resduo da destilao resultante da determinao de amnia (ou nitrognio amoniacal) conforme mtodo 189/IV, adicione 50 mL da soluo alcalina de permanganato de potssio. Adapte novamente o balo ao sistema refrigerante e destile. Receba
100 mL do destilado em um balo volumtrico. Transfira 50 mL para um balo volumtrico,
adicione 1 mL do reagente de Nessler, homogeneze, mea a colorao amarela desenvolvida,
segundo procedimento descrito em 189/IV e determine a quantidade correspondente de
nitrognio albuminide.
Clculo
Determine a concentrao de nitrognio albuminide utilizando a curva-padro pr-esta376 - IAL
belecida com solues-padro de cloreto de amnio. Multiplique o resultado pelo fator 0,2,
correspondente alquota de 50 mL tomada de um balo volumtrico de 100 mL contendo
o destilado de 500 mL da amostra.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 315-316.
199/IV Determinao do oxignio consumido em meio cido
A determinao de oxignio consumido indica a quantidade de substncias oxidveis
presentes na gua. No mtodo analtico proposto, a amostra oxidada com ons permanganato em meio cido. Aps a adio de excesso de ons oxalato, titula-se novamente com
soluo de permanganato.
Material
Banho-maria, balana analtica, pipeta volumtrica de 100 mL, frasco Erlenmeyer
de 300 mL, pipeta volumtrica de 5 mL, buretas de 10 e 25 mL, balo volumtrico de
1000 mL e bquer de 200 mL.
Reagentes
Permanganato de potssio
cido sulfrico
Oxalato de sdio
Soluo de permanganato de potssio a 0,0025 M Pese 4 g de permanganato de potssio
e dilua com aproximadamente 1100 mL de gua destilada e deionizada. Aquea a soluo
at reduzir o volume a aproximadamente 1000 mL. Esfrie temperatura ambiente. Filtre,
a vcuo, em placa de porcelana porosa, previamente purificada com cido sulfrico e exaustivamente lavada com gua destilada e deionizada. Recolha o filtrado em balo volumtrico
de 1000 mL, complete cuidadosamente o volume com gua destilada e deionizada. Deixe a
soluo em repouso por uma semana, em frasco mbar e dilua 100 mL desta soluo com
gua destilada e deionizada, completando o volume at 1000 mL em balo volumtrico.
Padronizao Pese quantitativamente massas de oxalato de sdio, em torno de 0,01 g, secas
em estufa a 100C por duas horas. Transfira para um frasco Erlenmeyer de 250 mL. Adicione 200 mL de gua destilada e deionizada e 5 mL de cido sulfrico a 25% v/v. Leve ao
banho-maria e aquea entre (6070)C. Titule com a soluo de permanganato de potssio
IAL - 377
the Examination of Water and Wastewater. 19th ed. Washington, DC: American Public
Health Association, 1995. chapter 4, p.100 -101.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 311-313.
200/IV Determinao de sdio e potssio
Os ons de sdio esto presentes nas guas naturais, em concentraes que podem
variar de menos de 1 mg/L a mais de 500 mg/L. Os ons de potssio tambm podem ocorrer
naturalmente nas guas, sendo que sua concentrao raramente excede 20 mg/L.
Quantidades traos de ons sdio e potssio podem ser determinadas por fotometria
de emisso de chama sendo que o sdio emite luz no comprimento de onda de 589 nm e o
potssio no comprimento de onda de 766,5 nm. A amostra aspirada e dispersa numa chama de gs na forma de spray e a excitao conduzida sob condies controladas e reprodutveis. A linha espectral de interesse isolada com o uso de filtros ou sistema ptico adequado.
A intensidade da luz a 589 nm e a 766,5 nm proporcional concentrao de ons sdio ou
de potssio na amostra.
Material
Fotmetro de chama com filtros para sdio e potssio ou sistema ptico equivalente, bomba
de vcuo, dessecador, estufa, balana analtica, bales volumtricos de 100 e 1000 mL, bquer de 50 mL e pipeta volumtrica de 10 mL.
Reagentes
Soluo-padro estoque de ons sdio Pese 2,5421 g de cloreto de sdio, seco em estufa
a 200C por 3 horas e resfriado temperatura ambiente, em dessecador. Transfira para um
balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua destilada e deionizada.
Nota: 1 mL desta soluo corresponde a 1 mg de ons sdio.
Soluo-padro estoque de ons potssio Pese 1,9067 g de cloreto de potssio, seco em
estufa a 200C por 3 horas e resfriado temperatura ambiente, em dessecador, transfira para
um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua destilada e deionizada.
IAL - 379
Biftalato de
potssioo
3,999
4,002
4,008
4,015
4,024
Borato de
sdio
9,276
9,225
9,180
9,139
9,102
38
40
4,030
4,035
6,840
6,838
9,081
9,068
Fonte: MIDGLEY, D.; TORRANCE, K. Potenciometric water analysis. 2nd ed. New York:
Hohb Wiley & Sons, 1991. p. 168.
382 - IAL
Referncias bibliogrficas
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKSASSOCIATION WATER, ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater. 19th ed. Washington, DC: American Public Health
Association, 1995. chapter 4, p. 65-69.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 310.
202/IV Determinao de slidos totais secos a (103-105)C
Os termos slidos, slidos suspensos e slidos dissolvidos vm substituir os antigos
termos resduo no filtrvel e resduo filtrvel. O termo slido se refere matria suspensa ou
dissolvida na gua. A designao de slidos totais aplicada para o resduo material deixado
no recipiente aps a evaporao de uma amostra de gua e a subseqente secagem completa
a uma temperatura definida, normalmente 105C. Os slidos totais incluem: slidos totais
suspensos, que a poro dos slidos totais retidos por um filtro de porosidade igual a 2,0 m,
e slidos totais dissolvidos, que a poro que passa atravs do filtro.
Os slidos dissolvidos ou em suspenso, diferenciam-se em fixos e volteis. Slidos
fixos o termo aplicado ao produto da calcinao do resduo total, da matria suspensa ou
dissolvida, por um tempo especifico a uma determinada temperatura, por exemplo: 2 horas
e 500C. A perda de peso durante a calcinao denominada slidos volteis. As determinaes de slidos fixos e volteis no distinguem precisamente entre a matria orgnica e a
inorgnica, pois a perda por calcinao no exclusiva de material orgnico, podendo ocorrer
a decomposio ou volatilizao de alguns sais minerais.
Slidos totais so matrias suspensas ou dissolvidas presentes numa amostra de gua.
Este termo aplicado ao resduo de material deixado no recipiente aps a evaporao de uma
amostra e sua subseqente secagem completa a uma temperatura definida.
Os slidos totais so determinados pela verificao da massa do resduo de uma amostra de gua, aps evaporao e secagem at peso constante, a (103-105)C.
Material
Banho-maria, estufa, balana analtica, pina metlica, cpsula de porcelana ou platina, balo volumtrico ou pipeta volumtrica de 100 mL e dessecador com slica-gel.
Procedimento Aquea, em uma estufa, uma cpsula limpa de platina ou porcelana a (103105)C, por no mnimo 3 horas. Retire da estufa, transferindo para um dessecador, at a
IAL - 383
vcuo. Lave com trs volumes de 10 mL de gua destilada e deionizada, esperando a completa drenagem entre as lavagens e continue a suco por cerca de 3 minutos aps a filtrao.
A amostra filtrada mais os trs volumes de 10 mL de gua destilada e deionizada compem
a amostra para a anlise. Aquea, em estufa, uma cpsula limpa de platina ou porcelana a
(180 2)C, por 3 horas. Retire da estufa e coloque em um dessecador para esfriar, deixando atingir o equilbrio trmico com o ambiente. Pese e coloque a amostra de gua filtrada
juntamente com as trs pores de 10 mL de gua destilada e deionizada utilizadas na lavagem do filtro, em uma cpsula de porcelana ou platina, previamente pesada. Evapore at
secagem em banho-maria ou em uma chapa aquecedora evitando que a amostra entre em
ebulio. Coloque a cpsula em uma estufa a (180 2)C por 3 horas. Transfira a cpsula
para um dessecador, deixando atingir o equilbrio trmico com o ambiente onde se encontra a balana e pese. Repita as operaes dos itens anteriores at obter peso constante ou at
que a diferena de peso seja menor do que 4% da medida anterior. As determinaes devem
ser feitas em duplicata e os resultados devem concordar dentro de 5% entre suas medidas.
Clculo
IAL - 385
Reagentes
Soluo-padro de NaCl 1000 mg/L Pese 1000 mg de cloreto de sdio seco a 200C por 3
horas e resfriado em dessecador, transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e complete
o volume com gua destilada e deionizada.
Procedimento Calibre o equipamento com soluo-padro de cloreto de sdio. Em um
bquer de 150 mL, coloque cerca de 100 mL de amostra de gua homogeneizada. Insira a
cela de condutividade na amostra, agite-a verticalmente para eliminar as bolhas de ar que
possam estar presentes. Deixe a cela imersa e em repouso at o aparelho estabilizar-se. Faa a
leitura, lave a cela com gua deionizada antes e depois de cada leitura.
Referncias bibliogrficas
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKSASSOCIATION WATER, ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, 19th ed. Washington, DC: American Public Health
Association,1995. chapter 2, p. 53,55.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 304-305.
205/IV Determinao da turbidez pelo mtodo nefelomtrico
A turbidez a expresso usada para descrever a propriedade ptica referente ao espalhamento e a absoro da luz quando esta passa atravs de uma amostra. Esta propriedade uma
caracterstica decorrente da presena de materiais suspensos, tais como areia, poeira, matria
orgnica e inorgnica, plncton e organismos microscpicos. A presena destes slidos suspensos, finamente divididos e geralmente em estado coloidal, impede a passagem da luz atravs
da amostra de gua. A correlao da turbidez com a concentrao de matria suspensa difcil
porque o tamanho, a forma e o ndice de refrao das partculas tambm afetam a propriedade
de espalhamento da luz. A turbidez pode ser determinada para qualquer amostra livre de detritos e sedimentos, usando-se uma escala arbitrria em unidades de turbidez. O mtodo compara
a intensidade de luz espalhada pela amostra com a de uma amostra-padro de referncia, sob
condies definidas. A nefelometria envolve a medida da luz espalhada numa direo especfica,
normalmente a 90 da trajetria do raio incidente. O polmero de formazina usado como suspenso-padro de referncia de turbidez. As paredes da cubeta contendo a amostra, assim como
as janelas sujas do equipamento, a presena de bolhas de ar na amostra e vibraes que possam
perturbar a superfcie da amostra, fornecem resultados falsos. A cor verdadeira, que a cor da
gua devido s substncias dissolvidas que absorvem luz, causa medidas menores de turbidez.
386 - IAL
Material
Turbidmetro, balana analtica, cubetas de vidro, bales volumtricos de 100 e 1000 mL,
pipetas volumtricas de 5 e 10 mL, sistema de filtrao completo e filtro de membrana com
porosidade 0,2 m.
Reagentes
gua livre de turbidez Passe gua atravs de uma membrana de filtro de porosidade igual a
0,2 m. O filtro de membrana convencional usado para exames bacteriolgicos no satisfatrio. Lave o frasco coletor duas vezes com a gua filtrada e descarte os prximos 200 mL.
O mtodo satisfatrio para se medir turbidez at 0,02 UT.
Suspenso-estoque de turbidez: Soluo I Pese 1000 mg de sulfato de hidrazina, transfira
para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua destilada e deionizada. Soluo II Pese 10 g de hexametilenotetramina, transfira para um balo volumtrico de
100 mL e complete o volume com gua bidestilada e deionizada. Em um balo volumtrico
de 100 mL, misture 5 mL da soluo I e 5 mL da soluo II. Deixe em repouso por 24 horas
a (25 3)C. Complete o volume com gua destilada e deionizada e misture. A turbidez
desta soluo de 400 UT (unidades de turbidez).
Nota: prepare as solues e suspenso, mensalmente.
Suspenso-padro de turbidez 40 UT Com uma pipeta volumtrica, transfira 10 mL da
suspenso-padro de polmero de formazina (400 UT) para um balo volumtrico de 100
mL. Complete o volume com gua destilada e deionizada livre de turbidez e misture. Prepare
esta suspenso semanalmente.
Suspenso-padro de turbidez menor que 40 UT A partir da suspenso-padro de turbidez
de 40 UT, utilizando-se pipeta e balo volumtrico de 100 mL, prepare diariamente solues
diludas de acordo com a necessidade (Tabela 4).
Nota: alternativamente, use padres disponveis no comrcio, tais como estireno-divinilbenzeno ou outros que sejam equivalentes suspenso de polmero de formazina, recentemente
preparada.
IAL - 387
Tabela 4 Dados referentes ao preparo de suspenses diludas de turbidez (em bales volumtricos de 100 mL)
Padro de turbidez
UT requerido
0,05
0,1
0,5
1,0
1,5
2,0
4,0
6,0
10
20
30
40
10
15
25
50
75
100
Volume de gua
livre de turbidez
(mL)
97,5
95
75
50
25
0
90
85
75
50
25
0
Referncia bibliogrfica
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKSASSOCIATION WATER, ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater. 19th ed. Washington, DC: American Public Health
Association,1995. chapter 2, p. 8,11.
206/IV Determinao da turbidez pelo mtodo turbidimtrico
Material
Turbidmetro Hellige
Procedimento Escolha a faixa de turbidez apropriada e selecione o filtro adequado a esta
posio. Limpe e seque cuidadosamente a cela do turbidmetro de altura prpria para a faixa
de turbidez escolhida. Encha a cela at a marca com a amostra. Limpe o plunger e mergulhe
no lquido que preenche a cela, cuidadosamente para evitar bolhas. Limpe o exterior da cela e
coloque na plataforma espelhada. Feche a porta do aparelho e ligue a luz. Balanceie imediatamente a intensidade da luz do feixe central com a intensidade do fundo. Leia a escala graduada sobre o disco do boto quando o brilho dos dois campos estiver balanceado. Determine a
turbidez da amostra, por meio do grfico apropriado faixa de operao utilizada.
Nota: estes grficos acompanham o aparelho e variam segundo a turbidez da amostra, o filtro
utilizado e a altura da cela.
Curva-padro Ao se trocar a lmpada do aparelho, necessria uma nova calibrao e a
elaborao de um novo grfico para cada faixa de turbidez. A soluo-padro para a construo da curva consiste de um kit de calibrao de turbidez, contendo 500 mL de uma
suspenso-padro estoque de slica (SiO2) equivalente a 200 mg/L e papis de grfico em
branco impressos especialmente para trabalhar com as cinco faixas de turbidez.
Referncias bibliogrficas
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS
ASSOCIATION WATER, ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for
the Examination of Water and Wastewater. 19th ed. Washington, DC: American Public
Health Association,1995. chapter 2, p. 8, 11.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Modos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 303-304.
IAL - 389
(b)
Pesticidas
Azinfs etlico
Azinfs metlico
Carbofenotiona
Clorfenvinfs
Clorpirifs-etlico
Clorpirifs-metlico
Diazinona
Diclorvos
(b)
Dimetoato
Dissulfotona
Etiona
Etoprofs
Etrinfs
Fenamifs
Fentiona
Fentoato
Folpete
Forato
Malationa
PCB138
PCB153
PCB180
-
Metamidofs
Metidationa
Mevinfs
Ometoato
Parationa-etlica
Parationa-metlica
Pirimifs-etlico
Pirimifs-metlico
Profenofs
Pirazofs
Terbufs
Triazofs
392 - IAL
Procedimento
Extrao Transfira 1000 mL da amostra homogeneizada para um funil de separao de
2000 mL. Extraia com 60 mL da mistura diclorometano:n-hexano (1:4) para anlise dos
pesticidas do item (a) da Tabela 5, exceto lambda-cialotrina, cipermetrina, deltametrina,
sulfato de endosulfam e/ou com 60 mL da mistura diclorometano:n-hexano (1:1) para
anlise dos pesticidas: lambda-cialotrina, cipermetrina, deltametrina, sulfato de endosulfam e
todos os pesticidas do item (b) da Tabela 5. Quando analisar todos os pesticidas da Tabela 5,
extraia com 60 mL da mistura diclorometano:n-hexano (1:1). Adicione, aproximadamente,
10 mL de soluo saturada de cloreto de sdio. Tampe o funil. Inverta e abra a torneira para
o escape de vapores de solventes. Agite. Deixe em repouso para separao das fases. Recolha
a fase aquosa em bquer de 2000 mL. Passe a fase orgnica sobre sulfato de sdio anidro
granulado atravs de um funil com algodo tratado e recolha em balo de fundo chato de
300 mL. Transfira a fase aquosa para funil de separao e extraia, como descrito, mais duas
vezes. Os extratos recolhidos so evaporados em rotavapor at quase secura. Adicione, aproximadamente, 5 mL de n-hexano e concentre novamente para eliminar o diclorometano.
Transfira, quantitativamente, para tubo de vidro graduado com uma pipeta Pasteur. Complete o volume a 5 mL com n-hexano, lavando as paredes do balo. Injete nos respectivos
cromatgrafos.
Purificao Quando o extrato no estiver limpo, isto , com muitos interferentes, purifique-o em coluna cromatogrfica com 15 g de slica gel desativada a 10% com gua, elundo com 200 mL da mistura de diclorometano:n-hexano (1:4) e com 200 mL da mistura
diclorometano:n-hexano (1:1). Recolha o eludo em balo de fundo chato de boca esmerilhada de 300 mL e concentre em rotavapor. Adicione, aproximadamente, 5 mL de n-hexano
e concentre novamente para eliminar o diclorometano. Transfira, quantitativamente, para
tubo de vidro graduado com uma pipeta Pasteur. Complete o volume a 5 mL com n-hexano, lavando as paredes do balo.Transfira uma alquota para um vial e injete nos respectivos
cromatgrafos.
Anlise da amostra-testemunha e estudos de recuperao Realize anlise da testemunha e
estudos de recuperao com cinco repeties em pelo menos dois nveis: 1LQ e 10 LQ.
Condies cromatogrficas para a anlise dos princpios ativos dos pesticidas do item (a) da
Tabela 5:
Cromatgrafo a gs, com detector de captura de eletrons (ECD), equipado com workstation.
Coluna capilar fase estacionria 5% de fenilmetil siloxano (30 m x 0,32 mm x 0,25 m
de filme)
Temperatura do detector 320C
Temperatura do forno: 60C (1 min), (60-220)C (10C/min), (220-280)C
IAL - 393
polychlorinated biphenyls (PCBs) from milk and dairy products. Fresenius Z. Anal. Chem.,
v. 312, p. 342-345, 1982.
208/IV Determinao de arsnio total por espectrometria de absoro atmica com
gerador de hidretos
Este mtodo aplicvel determinao de arsnio total em gua para o consumo
humano. O arsnio est na forma de arsenato (As5+) e, no caso de poo profundo, algum
arsenito (As3+) pode estar presente. Espcies metiladas (cidos monometilarsnico e dimetilarsnico) raramente esto presentes em guas de consumo. O arsnio orgnico oxidado
a arsnio inorgnico com K2S2O8/HCl sob aquecimento e este pr-reduzido a As3+ com
KI/HCl. O As3+ transformado em AsH3 com NaBH4, no gerador de hidretos e depois
reduzido ao estado elementar em cela de quartzo aquecida a 900oC e determinado por espectrometria de absoro atmica.
Material
Espectrmetro de absoro atmica acoplado a sistema de gerao de hidretos com injeo
em fluxo, chapa aquecedora, lmpada de catodo oco ou de descarga sem eletrodo de arsnio,
bales volumtricos, pipetadores automticos com volumes ajustveis, pipetas volumtricas
e bqueres
Reagentes
cido clordrico para anlise de traos de metais
Nota: antes de usar o cido, borbulhe um gs inerte (por exemplo, argnio ou nitrognio)
ao frasco do reagente por aproximadamente trs horas, para eliminar o Cl2 dissolvido, pois
interfere na reao, oxidando o hidreto formado.
cido ntrico para anlise de traos de metais.
Soluo de iodeto de potssio a 10% m/v .
Soluo de cido L(+)-cido ascrbico a 10% m/v.
Soluo de perssulfato de potssio a 4%.
Soluo-padro estoque de arsnio para absoro atmica - 1 000 mg/L, com certificado de
anlise e incerteza associada.
IAL - 395
Soluo de boridreto de sdio a 0,5% m/v em NaOH a 0,5% m/v Pese 0,5 g de NaHB4 e
dissolva em 100 mL de soluo a 0,5% de NaOH.
Soluo-padro estoque intermediria de arsnio 10 mg/L Pipete 1 mL da soluo-padro
estoque (1000 mg/L) em um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com soluo de cido ntrico a 2%.
Soluo-padro intermediria de arsnio 50 g/L Pipete 0,5 mL da soluo-padro estoque intermediria de arsnio 10 mg/L em um balo volumtrico de 100 mL e complete o
volume com gua destilada e deionizada. Prepare no dia do ensaio.
Notas
Conserve todas as solues-padro estoque em frascos de polietileno.
Utilize gua destilada e deionizada para preparar todos os reagentes.
Procedimento
Otimize os parmetros instrumentais segundo o manual de instrues do fabricante.
Colete as amostras de gua em frasco de polietileno contendo cido ntrico, de forma
que a concentrao final do cido seja 0,2% e estoque sob refrigerao at a anlise.
Se a amostra estiver lmpida, faa a pr-reduo e a determinao. Se amostra contiver
particulados ou matria orgnica necessrio que ela seja previamente digerida antes
da pr-reduo.
Curva-padro Prepare as solues-padro de trabalho a partir da soluo-padro intermediria de 50 g/L com 5 pontos, compreendendo a faixa linear de trabalho para o elemento.
recomendvel que um dos pontos da curva-padro seja o limite mximo estabelecido pela
legislao. Faa o branco da curva-padro. Em seguida, proceda pr-reduo.
Pr-reduo das solues-padro de trabalho Aos bales contendo os padres, adicione
alquotas de HCl, da soluo de KI e da soluo de cido ascrbico, de tal maneira que as
concentraes desses reagentes na soluo final sejam: 10%, 0,5% e 0,5%, respectivamente.
Aguarde uma hora, complete o volume dos bales com gua destilada e deionizada e efetue
a determinao. Prepare as solues-padro no dia do ensaio.
Digesto da amostra Pipete uma alquota de 25 mL da amostra previamente acidificada
(pH<2) com HNO3 em bquer de 150 mL, adicione 8 mL de K2S2O8 e aquea a 95C, em
banho-maria, at que o volume seja reduzido a aproximadamente 10 mL. Adicione 12,5 mL
de HCl, tampe o bquer com vidro de relgio e continue o aquecimento a 95C por cerca
de uma hora. Descubra o bquer e faa a reduo do volume at aproximadamente 10 mL.
Transfira para um balo volumtrico de 25 mL com gua destilada e deionizada e proceda
pr-reduo.
396 - IAL
IAL - 397
Material
Espectrmetro de emisso atmica com plasma de argnio indutivamente acoplado (ICP
OES), bales volumtricos, pipetadores automticos com volumes ajustveis, pipetas volumtricas, bquer, frascos de polietileno.
Reagentes
cido ntrico para anlise de traos de metais
Solues-padro estoque monoelementares de 1000 mg/L de: alumnio, prata, brio, cromo,
cobre e mangans para anlise espectromtrica, com certificado de anlise e incerteza associada.
Solues-padro estoque monoelementares de 10000 mg/L de: clcio, ferro, fsforo, magnsio, potssio, sdio e zinco para anlise espectromtrica, com certificado de anlise e incerteza
associada.
Nota: a soluo-padro de prata deve ser preparada separadamente da soluo-padro multielementar, pois este metal forma precipitado com haletos. Recomenda-se que as solues
para a construo da curva-padro da prata sejam preparadas no dia do ensaio.
Procedimento
Otimize os parmetros instrumentais segundo o manual de instrues do fabricante.
Curva-padro Prepare as solues-padro multi-elementares de trabalho para a construo
da curva-padro com seis pontos, incluindo o branco, a partir de uma soluo-padro intermediria, levando em considerao a sensibilidade do equipamento e a faixa linear de trabalho para cada elemento. As solues so preparadas em cido ntrico a 0,2% v/v e conservadas
em frascos de polietileno. recomendvel que o ponto intermedirio da curva-padro compreenda o limite estabelecido pela legislao, para cada elemento.
Determinao Zere o equipamento com soluo de cido ntrico a 0,2% v/v. Estabelea as
curvas-padro para cada elemento a ser determinado usando regresso no linear. Verifique
a calibrao aps analisar um nmero de amostras, utilizando uma das solues-padro da
curva. Se a leitura apresentar uma variao maior que a estabelecida pelo laboratrio, deve-se
recalibrar. Se necessrio, dilua a amostra para que a leitura fique inserida na faixa linear da
curva-padro. A diluio tambm deve ser feita com cido ntrico a 0,2% v/v.
398 - IAL
Clculo
Como o metal determinado diretamente na amostra de gua, o valor lido no equipamento
o prprio valor da concentrao, a no ser que alguma diluio ou pr-concentrao tenha
sido necessria. Nesse caso, deve-se dividir ou multiplicar o valor da leitura obtida pelo fator
de diluio ou da pr-concentrao.
Referncia bibliogrfica
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS
ASSOCIATION WATER ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for the
Examination of Water and Wastewater, 19th ed. Washington, DC: A.P.H.A., 1995. chapter
3, p. 5, 34-39.
210/IV Determinao de metais totais por espectrometria de absoro atmica com
chama
O mtodo aplicvel determinao de brio, clcio, cdmio, chumbo, cromo, cobre, ferro, magnsio, mangans, sdio, potssio e zinco em guas, com exceo de gua de
efluentes e gua do mar. ons de metais em gua podem ser determinados diretamente por
espectrometria de absoro atmica com chama, dependendo da concentrao do elemento
na amostra. Para a determinao de alguns elementos necessria a pr-concentrao da
amostra.
Material
Espectrmetro de absoro atmica com chama equipado com corretor de background e
lmpada de catodo oco do elemento a ser determinado, chapa aquecedora, bales volumtricos, pipetador automtico com volume ajustvel e bqueres.
Reagentes
cido ntrico para anlise de traos de metais
Solues-padro estoque de 1000 mg/L dos seguintes elementos: brio, clcio, cdmio, chumbo, cromo, cobre, ferro, magnsio, mangans, sdio, potssio e zinco para
uso em absoro atmica, com certificado de anlise e incerteza associada.
Procedimento
Opere o equipamento de acordo com o manual de instrues do fabricante. Ajuste o
queimador, a chama e a nebulizao para obteno de mxima absorbncia, utilizando
IAL - 399
uma soluo-padro da curva. Para a determinao de elementos tais como: brio, cdmio, chumbo, cromo e mangans, devido baixa sensibilidade da tcnica, necessrio
pr-concentrar a amostra. Os outros elementos tambm podem ser lidos nessa soluo
da amostra pr-concentrada. As amostras de gua que apresentam resduo devem ser digeridas conforme o procedimento da digesto/pr-concentrao. Os elementos: cobre,
ferro e zinco podem ser lidos diretamente na soluo original da amostra ou, ento, na
soluo da amostra pr-concentrada.
Digesto/pr-concentrao da amostra Colete a amostra conforme procedimento recomendado no cap. III e transfira 250 mL da amostra homogeneizada para um bquer
ou outro volume dependendo da concentrao esperada do analito e do limite de deteco do mtodo. Adicione 5 mL de cido ntrico. Leve ebulio lenta e evapore sobre chapa aquecedora at o volume aproximado de 10 mL ou antes que a precipitao
ocorra. Adicione 2 mL de cido ntrico e cubra com vidro de relgio para refluxar sobre
as paredes do bquer. Continue aquecendo at que a soluo fique clara e lmpida. Se
necessrio, repita a adio de cido ntrico. Reduza o volume ao mnimo, sem deixar
secar a amostra durante o tratamento. Transfira, quantitativamente, para um balo volumtrico de 25 mL com gua destilada e deionizada. Faa a determinao dos metais
nessa soluo. Prepare a amostra em triplicata e o branco dos reagentes, submetido s
mesmas condies de anlise.
Para a determinao de ons sdio e potssio, adicione um outro metal alcalino para
evitar a interferncia de ionizao na chama. No caso da determinao de ons de potssio, adicione soluo de cloreto de sdio amostra, ao branco e s solues-padro
de tal forma que a concentrao final seja 0,1% em on sdio. Na determinao de ons
sdio, adicione soluo de cloreto de potssio para que a concentrao final seja 0,1%
em on potssio. As solues de cloretos de sdio e de potssio podem ser substitudas
por soluo de csio de tal forma que a concentrao final em csio seja 0,1%.
Para a determinao de ons clcio e magnsio, adicione amostra, ao branco e s
solues-padro uma soluo de ons lantnio, de tal forma que a concentrao final
seja 1% em lantnio.
Curva-padro Prepare as solues-padro da curva a partir da soluo-padro estoque, levando em considerao a sensibilidade do equipamento e a faixa linear de trabalho para cada elemento. As solues-padro de trabalho devem ser preparadas em cido
ntrico a 0,2% e conservadas em frascos de polietileno.
Zere o equipamento com o branco e faa a leitura das absorbncias das solues-padro.
Estabelea as curvas-padro para cada elemento a ser determinado usando regresso linear. Em seguida, faa a leitura das amostras. Se necessrio, dilua a soluo da amostra
400 - IAL
Aa = absorbncia da amostra
Ab = absorbncia do branco da amostra
A = absortividade, obtida a partir da curva-padro
v = volume do balo no qual a amostra foi transferida aps dissoluo, em mL
d = fator de diluio da amostra, quando necessria
v1 = volume da amostra original, em mL
m = massa da amostra original, em g
Referncias bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods Association Of Official Analytical Chemists. Arlington: AOAC, (method 973.53),
16th ed., chapter 11, 1995 p. 19.
PERKIN ELMER. Analytical methods for atomic absorption spectroscopy.
Norwalk, U.S.A, 1996.
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS,
ASSOCIATION WATER ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods for
the Examination of Water and Wastewater, 19th ed. Washington, DC: APHA, 1995,
chapter 3, p. 3-9, 13-15.
211/IV Determinao de mercrio total por espectrometria de absoro atmica
com gerador de vapor frio
Este mtodo aplicvel determinao de mercrio total em gua. O mercrio
orgnico oxidado a mercrio inorgnico com a mistura de KMnO4 /K2S2O8 com
aquecimento e reduzido ao estado elementar com cloreto estanoso. O mercrio determinado por espectrometria de absoro atmica com gerador de vapor frio, utilizandose sistema de injeo em fluxo e amalgamador.
IAL - 401
Material
Espectrmetro de absoro atmica acoplado ao gerador de vapor frio com sistema
de injeo em fluxo e amalgamador, chapa aquecedora, lmpada de catodo oco ou de
descarga sem eletrodo de mercrio, bales volumtricos, pipetadores automticos com
volumes ajustveis, pipetas volumtricas e bqueres.
Reagentes
cido ntrico isento de mercrio
cido sulfrico isento de mercrio
cido clordrico isento de mercrio
cido clordrico 5% v/v
Permanganato de potssio isento de mercrio
Soluo-padro estoque de mercrio 1000 mg/L com certificado de anlise e incerteza
associada.
Soluo-padro estoque intermediria 10 mg/L de mercrio Pipete 1 mL da soluopadro estoque 1000 mg/L em um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume
com soluo contendo os cidos cido sulfrico a 2% e ntrico a 2%.
Soluo-padro intermediria de trabalho de mercrio 50 g/L Pipete 0,5 mL da soluo-padro intermediria (10 mg/L) em um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com soluo de cido sulfrico e ntrico a 2%. Prepare no dia do ensaio.
Soluo de cloreto estanoso a 5% em HCl 5% Pese 5 g de SnCl2 em bquer, adicione 5 mL de HCl e aquea para dissolver o cloreto estanoso. Adicione gua destilada e
deionizada at completar 100 mL, com agitao constante.
Soluo de permanganato de potssio a 5% m/v Pese 5 g de KMnO4 em bquer, dissolva em 100 mL de gua destilada e deionizada. Guarde em frasco protegido da luz.
Soluo de persulfato de potssio a 5% m/v Pese 5 g de K2S2O8 em bquer e dissolva
em 100 mL de gua destilada e deionizada.
Soluo de cloridrato de hidroxilamina a 5% m/v Pese 5 g de NH2OHCl e dissolva
em 100 mL de gua destilada e deionizada.
Nota: Armazene todas as solues-padro estoque em frascos de polietileno.
402 - IAL
Procedimento
Os parmetros instrumentais devem ser otimizados segundo o manual de instrues
do fabricante. As amostras de gua devem ser coletadas em frasco de polietileno contendo cido ntrico e cloreto de sdio, de forma que a concentrao final, tanto de NaCl
quanto de HNO3, sejam 2% e estocadas sob refrigerao at a anlise. Se a amostra
apresentar particulados ou matria orgnica necessrio que seja digerida.
Digesto da amostra Pipete uma alquota de 25 mL da amostra em bquer de 150
mL. Lentamente, adicione 1,3 mL de H2SO4 e 0,6 mL de HNO3 e misture. Adicione
3,5 mL de KMnO4 a 5% e aguarde por cerca de 15 minutos. Adicione 2 mL de K2S2O8
e aquea a 95C em banho-maria por 2 horas e resfrie. Se necessrio, elimine o excesso
de permanganato com algumas gotas de soluo de hidroxilamina a 5%. Transfira para
um balo volumtrico de 25 mL com gua destilada e deionizada. Se a amostra estiver
lmpida, faa a leitura diretamente sem digesto prvia.
Curva-padro
A partir da soluo-padro intermediria de trabalho de mercrio (50 g/L), prepare 6
concentraes para a curva compreendendo a faixa linear de trabalho, de acordo com a
sensibilidade do equipamento. As solues-padro so preparadas em meio cido sulfrico a 2% e ntrico a 2%. Estas solues-padro devem ser preparadas no dia do ensaio.
Nota: recomendvel que um dos pontos da curva-padro seja o limite estabelecido
pela legislao.
Determinao Zere o equipamento com soluo de H2SO4/HNO3 a 2% e faa a
leitura das solues-padro. Depois de completar a calibrao, as amostras podem ser
analisadas. Se necessrio, dilua as amostras para que as leituras fiquem compreendidas
na faixa linear da curva-padro. Verifique a calibrao, analisando um ponto intermedirio da curva-padro. Se a leitura tiver uma variao maior que a estabelecida pelo
laboratrio, recalibre.
IAL - 403
Clculo
Como o metal determinado diretamente na gua coletada, o valor lido no equipamento
o prprio valor da concentrao, a no ser que alguma diluio tenha sido necessria.
Nesse caso, deve-se multiplicar o valor da leitura obtida pela diluio efetuada.
Referncia bibliogrfica
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS
ASSOCIATION, WATER ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods
for the Examination of Water and Wastewater, 19th ed. Washington, DC: APHA, 1995,
chapter 3, p. 18-19.
212/IV Determinao de metais totais por espectrometria de absoro atmica
com forno de grafite
Este mtodo aplicvel determinao de metais totais (antimnio, cdmio,
chumbo, cromo e alumnio), em nveis de traos (g/L) em guas para consumo. Os
metais so determinados usando a tcnica de espectrometria de absoro atmica com
forno de grafite (ETAAS).
Material
Espectrmetro de absoro atmica com forno de grafite e corretor de fundo (Background), lmpadas de catodo oco ou de descarga sem eletrodo do elemento a ser analisado, bales volumtricos, pipetadores automticos com volumes ajustveis, pipetas volumtricas, bqueres e bales volumtricos de polimetilpenteno ou polipropileno para
a determinao de ons alumnio.
Reagentes
cido ntrico para a anlise de traos de metais
Solues-padro estoque de 1000 mg/L de: alumnio, antimnio, cdmio, chumbo e
cromo para uso em absoro atmica com certificado de anlise e incerteza associada.
Solues de modificadores qumicos:
a) Mistura de dihidrogenofosfato de amnio a 0,5% m/v e nitrato de magnsio a 0,03%
m/v, para as determinaes de chumbo e cdmio Pese cerca de 0,5 g de NH4H2PO4 e
404 - IAL
0,052 g de Mg(NO3)2.6H2O em bqueres. Dissolva os sais com gua destilada e deionizada e transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume.
b) Soluo de nitrato de magnsio a 0,15% m/v, para as determinaes de antimnio,
alumnio e cromo Pese cerca de 0,259 g de Mg(NO3)2.6H2O em um bquer. Dissolva com gua destilada e deionizada e transfira para um balo volumtrico de 100 mL
e complete o volume.
Procedimento - Os parmetros instrumentais devem ser otimizados segundo o manual de instrues do fabricante. Zere o equipamento com soluo de cido ntrico 0,2%
v/v. Estabelea a curva-padro para cada elemento a ser determinado usando regresso
linear. Recalibre aps o nmero de leituras definido pelo laboratrio. Caso necessrio,
dilua a amostra para que a leitura fique inserida na faixa linear da curva-padro.
Curva-padro Prepare as solues-padro de trabalho para a curva com seis pontos a
partir da uma soluo-padro intermediria, levando em considerao a sensibilidade
do equipamento e a faixa linear de trabalho para o elemento. As solues so preparadas em cido ntrico a 0,2% v/v, no dia do ensaio.
Nota: recomendvel que a curva-padro compreenda o limite estabelecido pela legislao
Clculo
Como o metal determinado diretamente na gua coletada, o valor lido no equipamento
o prprio valor da concentrao, a no ser que alguma diluio tenha sido necessria.
Neste caso, deve-se multiplicar o valor da leitura obtida pelo fator da diluio.
Referncias bibliogrficas
AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION, AMERICAN WATER WORKS
ASSOCIATION, WATER ENVIRONMENT FEDERATION. Standard Methods
for the Examination of Water and Wastewater. 19th ed. Washington, DC: APHA,
1995, chapter 3, p. 22-27.
PERKIN ELMER. The THGA Graphite Furnace: Techniques and Recommended
Conditions for Atomic Spectroscopy. Norwalk, U.S.A., 1991.
213/IV Identificao de cianeto Prova de Pertusi-Gastaldi
IAL - 405
Material
Pipetas graduadas de 1 mL e placa de toque.
Reagentes
Soluo de acetato de cobre 30% m/v
Soluo saturada de acetato de benzidina em cido actico a 10% m/v
Procedimento Em uma placa de toque, coloque uma gota de acetato de cobre a
30% m/v, cinco gotas da soluo saturada de acetato de benzidina em cido actico a
10% e 0,5 mL da amostra. Em presena de ons cianeto, aparecer uma colorao azul
caracterstica.
Nota: os oxidantes e os nions que complexam com o cobre (I) tambm reagem nesta
prova. So interferentes: iodetos, sulfetos, etc
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3.ed. So Paulo: IMESP, 1985, p.
327-328.
214/IV Determinao de sulfatos
Material
Bquer de 400 mL, bales volumtricos de 500 e 1000 mL, pipetas volujmtricas de
1, 2 e 5 mL, proveta de 10 mL, filtro, filtro de papel Whatman n 40, cpsula de porcelana de 250 mL, bico de Bnsen, banho-maria e mufla.
Reagentes
Soluo de cido clordrico (1+1)
Indicador metilorange
Soluo de cloreto de brio Dissolva 100 g de cloreto de brio em gua bidestilada e
deionizada. Complete o volume at 1000 mL com gua bidestilada e deionizada. Filtre
a soluo antes de usar.
Nota: 1 mL desta soluo precipita aproximadamente 40 mg de on sulfato.
406 - IAL
Soluo de nitrato de prata Pese 8,5 g de nitrato de prata, transfira para um balo de
500 mL, adicione 0,5 mL de cido ntrico e complete o volume com gua bidestilada
e deionizada.
Procedimento
Preparao da amostra Se a amostra contiver slica em concentrao superior a
25 mg/L, remova-a evaporando a amostra em banho-maria, at prximo da secura.
Junte 1 mL de soluo de cido clordrico (1+1), gire a cpsula para que o cido
entre em contato com o resduo contido nos lados internos da cpsula e continue
a evaporao at a secura. Adicione 20 mL de gua bidestilada e deionizada e reserve. Se a amostra contiver matria orgnica, evapore e leve diretamente ao bico
de Bnsen, junte 2 mL de gua bidestilada e deionizada e 1 mL de soluo de
cido clordrico (1+1). Evapore novamente at secura, em banho-maria, junte 2
mL de gua quente e filtre. Lave a slica insolubilizada com vrias pores de gua
bidestilada e deionizada quente e reserve. Se a amostra for turva, clarifique-a por
decantao ou filtrao. Em se tratando de guas contendo ons sulfato em concentrao menor que 200 mg/L, o volume da amostra usado para esta determinao
no deve exceder 150 mL.
Determinao de ons sulfato Transfira, 200 mL da amostra para um bquer de
400 mL. Evapore at aproximadamente 20 mL. Ajuste o pH para 4,4, com adio
de cido clordrico (1+1), usando metilorange como indicador. Adicione mais 1
mL de soluo cido clordrico (1+1). Aquea a soluo at a ebulio, agitando
suavemente. Adicione soluo de cloreto de brio, quente, at que a precipitao
esteja completa. Junte mais 2 mL da soluo de cloreto de brio. Deixe o precipitado digerir em banho-maria a (8090)C, preferivelmente durante a noite, porm
nunca menos que 2 horas. Junte pedaos de papel de filtro Whatman n 40 ao
precipitado contido no bquer. Filtre em papel Whatman n 40, lave o precipitado
no filtro com pores de gua bidestilada e deionizada quente at que as guas de
lavagem estejam livres de on cloreto. Faa o teste com soluo de nitrato de prata.
Seque o papel de filtro em estufa 105C e transfira para uma cpsula de porcelana
de 250 mL tarada, previamente aquecida em mufla a 550C, durante uma hora.
Esfrie em dessecador e pese.
Clculo
N x 5 x 1000 = mg de sulfato de brio por 1000 mL da amostra
N = massa, em gramas, do resduo.
IAL - 407
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3.ed. So Paulo: IMESP, 1985,
p.329-330.
Colaboradores
Maria Anita Scorsafava; Jaim Lichtig; Berenice Mandel Brgido; Cristina Eico Yokosawa; Francisco
Lopes Dias Jr.; Isaura Akemi Okada; Joel Batista da Silva; Liliana Brancacio Bacetti; Maria Cristina
Duran; Maria de Lourdes Burini Arine; Maria do Rosrio Vigeta Lopes; Roberto Carlos Fernandes
Barsotti; Rute Dal Col; Tereza Atsuko Kussumi; Valria Pereira da Silva Freitas; Paulo Tiglea; Alice
Momoyo Ata Sakuma; Carmen Silvia Kira; Franca Durante de Maio; Helosa Helena Barretto de
Toledo; Janete Alaburda; Ktia Regina Marton de Freitas Martins; Linda Nishihara; Maria de Ftima
Henriques Carvalho; Maria de Lourdes Paixo da Silva; Marina Miyuki Okada; Rosngela Aguilar da
Silva; Snia Otero Bio Rocha; Teresa Marilene Bronharo e Vera Regina Rossi Lemes
408 - IAL
CAPTULO
IX
BEBIDAS
ALCOLICAS
IAL - 409
410 - IAL
IX
Captulo IX - Bebidas Alcolicas
BEBIDAS ALCOLICAS
Material
Balana analtica, termmetro, dessecador e picnmetros de 25, 50 ou 100 mL
Reagentes
lcool
ter
Procedimento Lave o picnmetro, enxge com lcool e, posteriormente, com ter.
Deixe secar naturalmente e pese. Encha o picnmetro com gua a 20C e pese. Lave e seque
o picnmetro e proceda da mesma forma com a amostra.
Clculo
Nota: a densidade relativa a 20C expressa no mnimo com quatro casas decimais.
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of
analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 945.06) Gaithersburg:
A.O.A.C., 2005, Revision 1, 2006, chapter 26. p. 2.
216/IV Bebidas fermento-destiladas Densidade relativa a 20C/20C com densmetro de leitura direta
A densidade a 20C determinada pela medida da freqncia da oscilao do tubo
em U do densmetro preenchido com a amostra, comparada com as freqncias de oscilao quando preenchido com gua pura ou com padres determinados.
Material
Densmetro automtico digital de leitura direta com injetor automtico, opcional, e seringas
de 10 a 15 mL.
412 - IAL
Procedimento Proceda a calibrao do equipamento conforme as instrues do fabricante, utilizando gua como referncia, fixando a temperatura a
(20 + 0,01)C. Certifique-se que o tubo em U esteja completamente cheio com gua, sem a
presena de bolhas. Retire a gua, seque o tubo e injete a amostra livre de qualquer partcula
no densmetro (filtre, se necessrio). Verifique se no h formao de bolhas e faa a leitura
direta da densidade.
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods
of analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 982.10)
Gaithersburg: A.O.A.C., 2005, Revision 1, 2006, chapter 26. p. 4-5.
217/IV Bebidas fermento-destiladas lcool em volume a 20C ou grau alcolico real
Este mtodo aplicvel para a determinao da porcentagem de lcool em volume a
20C em bebidas alcolicas. A graduao alcolica (% em volume) obtida pela tabela de
converso da densidade relativa a 20C/20C determinada no destilado alcolico da amostra. Algumas amostras no requerem destilao, como, por exemplo, bebidas destiladas,
destilo-retificadas e misturas gua-lcool.
Material
Conjunto de destilao (ou equipamento destilador por arraste de vapor), chapa de
aquecimento, termmetro, balo volumtrico de 100 ou 250 mL, frasco Erlenmeyer de
500 mL com junta esmerilhada, condensador de serpentina ou de Liebig (maior ou igual
a 40 cm de comprimento), conexo com bola de segurana e junta esmerilhada, funil e
prolas de vidro.
Procedimento Ajuste a temperatura da amostra a 20C e mea 100 ou 250 mL em um
balo volumtrico. Transfira a amostra para um frasco Erlenmeyer de 500 mL, lave o balo
volumtrico com gua, aproximadamente 4 vezes e junte ao contedo do frasco Erlenmeyer. Conecte o frasco de destilao ao condensador, intercalando uma conexo intermediria com bola de segurana, aquea e destile. Alternativamente, transfira a amostra para o
conjunto de destilao e proceda conforme as instrues de uso do equipamento. Amostras
que contenham acar, como aguardente de cana adoada e aguardente composta, precisam
ser destiladas. Bebidas fermento-destiladas e retificadas como aguardentes, usques, vodca
e gim no tm necessidade de serem destiladas para a determinao de graduao alcolica. Recolha o destilado no balo volumtrico de 100 ou 250 mL, anteriormente usado, j
contendo 10 mL de gua e imerso em banho de gua e gelo. Destile cerca de do volume
IAL - 413
inicial. Adicione gua at quase completar o volume. Ajuste a temperatura a 20C, mergulhando o balo volumtrico em banho de gua e gelo. Complete o volume com gua a
20C e agite. Determine a densidade relativa do destilado a 20C, com o uso de picnmetro
ou densmetro digital automtico ou outro aparelho como hidrmetro ou densmetro calibrado. Obtenha a graduao alcolica do destilado alcolico a 20C utilizando a Tabela 1,
referente converso de densidade em porcentagem de lcool em volume. O resultado ser
expresso em % de lcool em volume.
TABELA 1 Porcentagem de lcool em volume a 20C (% v/v) correspondente densidade
relativa
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
1,00000
0,0
0,99632
2,5
0,99281
5,0
0,98956
7,5
0,99985
0,1
0,99618
2,6
0,99268
5,1
0,98944
7,6
0,99970
0,2
0,99603
2,7
0,99255
5,2
0,98931
7,7
0,99955
0,3
0,99589
2,8
0,99241
5,3
0,98919
7,8
0,99939
0,4
0,99574
2,9
0,99228
5,4
0,98906
7,9
0,99924
0,5
0,99560
3,0
0,99215
5,5
0,98893
8,0
0,99910
0,6
0,99546
3,1
0,99201
5,6
0,98881
8,1
0,99895
0,7
0,99531
3,2
0,99188
5,7
0,98869
8,2
0,99880
0,8
0,99517
3,3
0,99174
5,8
0,98857
8,3
0,99866
0,9
0,99503
3,4
0,99161
5,9
0,98845
8,4
0,99851
1,0
0,99489
3,5
0,99148
6,0
0,98833
8,5
0,99836
1,1
0,99475
3,6
0,99135
6,1
0,98820
8,6
0,99821
1,2
0,99461
3,7
0,99122
6,2
0,98807
8,7
0,99807
1,3
0,99447
3,8
0,99109
6,3
0,98794
8,8
0,99792
1,4
0,99433
3,9
0,99096
6,4
0,98782
8,9
0,99777
1,5
0,99419
4,0
0,99083
6,5
0,98770
9,0
0,99763
1,6
0,99405
4,1
0,99070
6,6
0,98758
9,1
0,99748
1,7
0,99391
4,2
0,99057
6,7
0,98746
9,2
0,99733
1,8
0,99377
4,3
0,99045
6,8
0,98734
9,3
0,99719
1,9
0,99363
4,4
0,99032
6,9
0,98722
9,4
0,99704
2,0
0,99349
4,5
0,99020
7,0
0,98710
9,5
0,99689
2,1
0,99336
4,6
0,99007
7,1
0,98698
9,6
0,99675
2,2
0,99322
4,7
0,98994
7,2
0,98686
9,7
0,99661
2,3
0,99308
4,8
0,98981
7,3
0,98674
9,8
0,99646
2,4
0,99295
4,9
0,98969
7,4
0,98662
9,9
414 - IAL
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
0,98650
10,0
0,98239
13,5
0,97851
17,0
0,97478
20,5
0,98637
10,1
0,98227
13,6
0,97840
17,1
0,97467
20,6
0,98626
10,2
0,98216
13,7
0,97829
17,2
0,97456
20,7
0,98614
10,3
0,98204
13,8
0,97818
17,3
0,97445
20,8
0,98602
10,4
0,98193
13,9
0,97807
17,4
0,97435
20,9
0,98590
10,5
0,98182
14,0
0,97797
17,5
0,97424
21,0
0,98578
10,6
0,98171
14,1
0,97786
17,6
0,97414
21,1
0,98566
10,7
0,98159
14,2
0,97775
17,7
0,97404
21,2
0,98554
10,8
0,98148
14,3
0,97764
17,8
0,97393
21,3
0,98542
10,9
0,98137
14,4
0,97754
17,9
0,97382
21,4
0,98530
11,0
0,98126
14,5
0,97743
18,0
0,97371
21,5
0,98518
11,1
0,98115
14,6
0,97732
18,1
0,97360
21,6
0,98506
11,2
0,98103
14,7
0,97721
18,2
0,97350
21,7
0,98494
11,3
0,98092
14,8
0,97711
18,3
0,97339
21,8
0,98482
11,4
0,98081
14,9
0,97700
18,4
0,97328
21,9
0,98470
11,5
0,98070
15,0
0,97690
18,5
0,97317
22,0
0,98459
11,6
0,98058
15,1
0,97679
18,6
0,97306
22,1
0,98447
11,7
0,98047
15,2
0,97668
18,7
0,97295
22,2
0,98435
11,8
0,98036
15,3
0,97657
18,8
0,97285
22,3
0,98424
11,9
0,98025
15,4
0,97646
18,9
0,97274
22,4
0,98412
12,0
0,98014
15,5
0,97636
19,0
0,97263
22,5
0,98400
12,1
0,98003
15,6
0,97626
19,1
0,97252
22,6
0,98388
12,2
0,97992
15,7
0,97616
19,2
0,97241
22,7
0,98377
12,3
0,97981
15,8
0,97605
19,3
0,97230
22,8
0,98365
12,4
0,97970
15,9
0,97595
19,4
0,97219
22,9
0,98354
12,5
0,97959
16,0
0,97584
19,5
0,97208
23,0
0,98342
12,6
0,97948
16,1
0,97574
19,6
0,97197
23,1
0,98330
12,7
0,97937
16,2
0,97563
19,7
0,97185
23,2
0,98318
12,8
0,97926
16,3
0,97553
19,8
0,97174
23,3
0,98307
12,9
0,97915
16,4
0,97542
19,9
0,97163
23,4
0,98296
13,0
0,97905
16,5
0,97531
20,0
0,97152
23,5
0,98285
13,1
0,97894
16,6
0,97521
20,1
0,97141
23,6
0,98274
13,2
0,97883
16,7
0,97511
20,2
0,97130
23,7
0,98263
13,3
0,97872
16,8
0,97500
20,3
0,97118
23,8
0,98251
13,4
0,97862
16,9
0,97489
20,4
0,97107
23,9
IAL - 415
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
0,97096
24,0
0,96695
27,5
0,96270
31,0
0,95802
34,5
0,97084
24,1
0,96683
27,6
0,96257
31,1
0,95788
34,6
0,97073
24,2
0,96671
27,7
0,96244
31,2
0,95774
34,7
0,97062
24,3
0,96660
27,8
0,96231
31,3
0,95759
34,8
0,97051
24,4
0,96648
27,9
0,96218
31,4
0,95745
34,9
0,97040
24,5
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416 - IAL
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
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48,4
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51,9
IAL - 417
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
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65,9
418 - IAL
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
% v/v
D
20C/20C
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67,8
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90,0
0,89473
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0,89183
68,1
0,88889
69,3
0,81288
95,0
0,89449
67,0
0,89158
68,2
0,88864
69,4
0,79074
100,0
0,89425
67,1
0,89134
68,3
0,88839
69,5
Referncias bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of
analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 942.06) Gaithersburg:
A.O.A.C., 2005, Revision 1, 2006, chapter 26. p. 2-3.
BRASIL, Leis, Decretos, etc - Portaria n 76 de 27 de nov de 1986, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 3 de dez 1986. Seo I, p. 18152-18173.
218/IV Bebidas fermento-destiladas Extrato seco ou resduo seco
Este mtodo aplicado amostras de bebidas alcolicas e baseia-se na pesagem do
resduo aps a evaporao da gua e lcool por aquecimento.
Material
Banho-maria, estufa, cpsula metlica de fundo chato de 25 ou 50 mL ou cpsula de
porcelana, dessecador, pipeta volumtrica de 20 ou 25 mL.
Procedimento Pipete 20 ou 25 mL da amostra para uma cpsula, previamente seca em
estufa, resfriada em dessecador at a temperatura ambiente e pesada. Evapore lentamente em
banho-maria at a secura. Seque em estufa (100 5)C por 30 min. Resfrie em dessecador
por 30 min e pese.
IAL - 419
Clculo
N = massa de resduo seco em g (massa da cpsula com o extrato menos a tara da cpsula)
V = volume da amostra em mL
Referncias bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of
analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 920.47) Gaithersburg:
A.O.A.C., 2005, Revision 1, 2006, chapter 26. p. 6.
BRASIL, Leis, Decretos, etc. - Portaria n 76 de 27 de nov de 1986, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 3 de dez 1986. Seo I, p. 18152-18173.
219IV Bebidas fermento-destiladas Glicdios totais, em sacarose
aplicado em bebidas alcolicas destiladas que contenham acar adicionado, por
exemplo, aguardente de cana adoada.
Material
Chapa de aquecimento, banho-maria, balana analtica, balo volumtrico de 100 mL, cpsula de porcelana de 100 ou 200 mL, funil, pipeta volumtrica de 50 mL, balo de fundo
chato de 250 mL e bureta de 25 mL.
Reagentes
cido clordrico
Carbonato de sdio anidro
Solues de Fehling A e B tituladas (Apndice I)
Procedimento Transfira com o auxlio de uma pipeta, 50 mL da amostra para uma
cpsula de porcelana de 200 mL. Evapore em banho-maria at eliminar todo o lcool.
Esfrie. Transfira para um balo volumtrico de 100 mL, lavando a cpsula com 40 mL de
gua. Adicione 0,5 mL de HCI. Aquea em banho-maria por 20 minutos. Esfrie. Neutralize
com carbonato de sdio. Complete o volume com gua. Nesta soluo, determine glicdios
totais, conforme a tcnica descrita em 040/IV.
420 - IAL
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. V. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3 ed. So Paulo. 1985. p. 344.
220/IV Bebidas fermento-destiladas Componentes secundrios
O destilado alcolico pode ser considerado como uma soluo de lcool e gua, contendo pequenas quantidades de componentes secundrios menores que 1% e que variam
conforme a composio de cada tipo de bebida alcolica. Os componentes secundrios
no-lcool, ou substncias volteis no-lcool ou coeficiente de congneres, constituem
a soma de acidez voltil, aldedos, steres, lcoois superiores expressos pela somatria dos
mesmos, e furfural; todos expressos em mg/100 mL de lcool anidro. A anlise por cromatografia a gs empregada para a determinao dos congneres volteis no-lcool. Mtodos alternativos que utilizam tcnicas de espectrofotometria e titulao ainda so citados
na literatura.
221/IV Bebidas fermento-destiladas Determinao de acidez total
Este mtodo baseia-se na titulao de neutralizao dos cidos com soluo padronizada de lcali, com o uso de indicador fenolftalena ou com o pHmetro at o ponto de
eqivalncia. A acidez total expressa em g de cido actico por 100 mL de amostra.
Material
pHmetro, agitador magntico, barra magntica, bquer de 250 ou 500 mL, frasco
Erlenmeyer de 500 mL, pipeta volumtrica de 50 ou 100 mL, bureta de 10 mL e pipeta
graduada de 1 mL.
Reagentes
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 M (ou 0,05 M) padronizada
Soluo de fenolftalena
Procedimento Transfira 50 ou 100 mL da amostra, para um frasco Erlenmeyer de
500 mL. Adicione 0,5 mL do indicador fenolftalena. Titule com soluo de hidrxido
de sdio at colorao rsea ou transfira a amostra para um bquer e titule com soluo de
hidrxido de sdio at ponto de viragem pH 8,2 - 8,4, utilizando o pHmetro.
IAL - 421
Clculo
422 - IAL
Clculo
Av = cidos volteis
G = graduao alcolica
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP 1985. p.
349-350.
BRASIL, Leis, Decretos, etc. Portaria n 76, de 27 de nov 86, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 03-12-86. Seo l, p. 18152-18173.
IAL - 423
426 - IAL
nas abscissas mg de furfural por 100 mL e nas ordenadas as leituras obtidas em absorbncia.
Procedimento Corrija a graduao do destilado da amostra de modo a obter uma graduao alcolica de 50% (v/v), conforme a tabela 2 (volume de lcool etlico a 90% v/v a adicionar para obteno de uma soluo com graduao alcolica de 50% v/v), ou conforme a
Tabela 3 (volume de gua a ser adicionado para obteno de uma soluo com graduao
alcolica de 50% v/v). Pipete 10 mL da soluo da amostra cuja graduao alcolica j
tenha sido corrigida a 50% para um tubo de ensaio, como na preparao da curva-padro.
Prepare o branco, utilizando lcool a 50%. Faa a leitura da absorbncia da amostra a 520
mm.
Nota: para obteno da soluo de lcool a 90% v/v, utilize a Tabela 4.
Clculo
Furfural expresso em mg por 100 mL de lcool anidro pela frmula:
428 - IAL
mL de
lcool 90 a
adicionar
Volume da
mistura
Graduao
alcolica
mL de
lcool 90 a
adicionar
Volume da
mistura
30,0
47,7
145,9
33,1
40,5
139,1
30,1
47,5
145,7
33,2
40,2
138,8
30,2
47,3
145,5
33,3
40,0
138,6
30,3
47,1
145,3
33,1
40,5
139,1
30,4
46,8
145,0
33,2
40,2
138,8
30,5
46,6
144,8
33,3
40,0
138,6
30,6
46,4
144,6
33,1
40,5
139,1
30,7
46,2
144,4
33,2
40,2
138,8
30,8
45,9
144,2
33,3
40,0
138,6
30,9
45,6
143,9
33,4
39,8
138,4
31,0
45,4
143,7
33,5
39,6
138,1
31,1
45,2
143,5
33,6
39,3
137,9
31,2
45,0
143,3
33,7
39,1
137,7
31,3
44,7
143,0
33,8
38,9
137,5
31,4
44,5
142,8
33,9
38,7
137,3
31,5
44,3
142,6
34,0
38,4
137,0
31,6
44,0
142,3
34,1
38,1
136,8
31,7
43,8
142,1
34,2
37,9
136,6
31,8
43,6
141,9
34,3
37,7
136,4
31,9
43,4
141,7
34,4
37,5
136,2
32,0
43,1
141,5
34,5
37,2
135,9
32,1
42,9
141,2
34,6
37,0
135,7
32,2
42,7
141,0
34,7
36,7
135,5
32,3
42,5
140,8
34,8
36,5
135,3
32,4
42,2
140,6
34,9
36,3
135,1
32,5
42,0
140,4
35,0
36,0
134,7
32,6
41,7
140,2
35,1
35,7
134,5
32,7
41,5
140,0
35,2
35,5
134,3
32,8
41,2
139,8
35,3
35,3
134,1
32,9
40,9
139,5
35,4
35,0
133,8
33,0
40,7
139,3
35,5
34,8
133,6
IAL - 429
Graduao
alcolica
mL de
lcool 90 a
adicionar
Volume da
mistura
Graduao
alcolica
mL de
lcool 90 a
adicionar
Volume da
mistura
35,6
34,6
133,4
39,0
26,5
125,6
35,7
34,3
133,2
39,1
26,3
125,4
35,8
34,0
132,9
39,2
26,1
125,2
35,9
33,8
132,7
39,3
25,8
124,9
36,0
33,6
132,5
39,4
25,6
124,7
36,1
33,4
132,3
39,5
25,3
124,5
36,2
33,1
132,0
39,6
25,1
124,3
36,3
32,9
131,8
39,7
24,8
124,0
36,4
32,7
131,6
39,8
24,6
123,0
36,5
32,4
131,4
39,9
24,3
123,5
36,6
32,2
131,2
40,0
24,1
123,4
36,7
32,0
131,0
40,1
23,9
123,1
36,8
31,7
130,7
40,2
23,7
122,9
36,9
31,5
130,5
40,3
23,5
122,7
37,0
31,3
130,3
40,4
23,3
122,5
37,1
31,0
130,0
40,5
23,0
122,3
37,2
30,7
129,8
40,6
22,8
122,1
37,3
30,5
129,6
40,7
22,5
121,8
37,4
30,3
129,4
40,8
22,2
121,5
37,5
30,0
129,1
40,9
22,0
121,3
37,6
29,8
128,9
41,0
21,8
121,1
37,7
29,5
128,6
41,1
21,5
120,8
37,8
29,3
128,4
41,2
21,3
120,6
37,9
29,1
128,2
41,3
21,0
120,3
38,0
28,9
128,0
41,4
20,7
120,1
38,1
28,7
127,8
41,5
20,5
119,9
38,2
28,5
127,6
41,6
20,3
119,7
38,3
28,3
127,4
41,7
20,0
119,4
38,4
28,0
127,1
41,8
19,8
119,2
38,5
27,8
126,9
41,9
19,5
118,9
38,6
27,5
126,6
42,0
19,3
118,7
38,7
27,2
126,3
42,1
19,0
118,4
38,8
27,0
126,1
42,2
18,7
118,2
38,9
26,8
125,9
42,3
18,5
118,0
430 - IAL
Graduao
alcolica
mL de
lcool 90 a
adicionar
Volume da
mistura
Graduao
alcolica
mL de
lcool 90 a
adicionar
Volume da
mistura
42,4
18,3
117,8
45,8
10,1
109,8
42,5
18,1
117,6
45,9
9,9
109,6
42,6
17,9
117,4
46,0
9,7
109,4
42,7
17,7
117,2
46,1
9,4
109,1
42,8
17,4
116,9
46,2
9,1
108,8
42,9
17,2
116,7
46,3
8,9
108,6
43,0
16,9
116,4
46,4
8,7
108,4
43,1
16,7
116,2
46,5
8,5
108,2
43,2
16,5
116,0
46,6
8,2
107,9
43,3
16,2
115,7
46,7
7,9
107,7
43,4
15,9
115,5
46,8
7,7
107,5
43,5
15,7
115,2
46,9
7,5
107,3
43,6
15,5
115,0
47,0
7,3
107,1
43,7
15,2
114,7
47,1
7,1
106,9
43,8
14,9
114,5
47,2
6,8
106,6
43,9
14,7
114,3
47,3
6,6
106,4
44,0
14,5
114,1
47,4
6,4
106,2
44,1
14,2
113,8
47,5
6,1
105,9
44,2
13,9
113,5
47,6
5,9
105,7
44,3
13,7
113,3
47,7
5,7
105,5
44,4
13,5
113,1
47,8
5,4
105,2
44,5
13,3
112,9
47,9
5,1
104,9
44,6
13,1
112,7
48,0
4,9
104,7
44,7
12,8
112,4
48,1
4,6
104,4
44,8
12,6
112,2
48,2
4,4
104,2
44,9
12,4
112,0
48,3
4,1
103,9
45,0
12,1
111,8
48,4
3,9
103,7
45,1
11,9
111,6
48,5
3,6
103,5
45,2
11,7
111,4
48,6
3,3
103,2
45,3
11,4
111,1
48,7
3,1
103,0
45,4
11,1
110,8
48,8
2,8
102,7
45,5
10,9
110,6
48,9
2,6
102,5
45,6
10,7
110,4
49,0
2,4
102,3
45,7
10,4
110,1
49,1
2,1
102,0
IAL - 431
Graduao
alcolica
mL de
lcool 90 a
adicionar
Volume da
mistura
Graduao
alcolica
mL de
lcool 90 a
adicionar
Volume da
mistura
49,2
1,9
101,8
49,6
0,9
100,9
49,3
1,7
101,6
49,7
0,7
100,7
49,4
1,5
101,4
49,8
0,4
100,4
49,5
1,2
101,2
49,9
0,2
100,2
TABELA 3 Volume de gua a ser adicionado a 100 mL de uma soluo alcolica para
obteno de uma graduao alcolica de 50 % v/v
Graduao
alcolica
mL de gua
a adicionar
Volume da
mistura
Graduao
alcolica
mL de gua
a adicionar
Volume da
mistura
50,1
0,21
100,2
52,4
4,96
104,7
50,2
0,41
100,4
52,5
5,16
104,9
50,3
0,62
100,6
52,6
5,37
105,1
50,4
0,82
100,8
52,7
5,58
105,3
50,5
1,03
101,0
52,8
5,79
105,5
50,6
1,24
101,1
52,9
5,99
105,7
50,7
1,44
101,3
53,0
6,20
105,9
50,8
1,65
101,5
53,1
6,41
106,1
50,9
1,85
101,7
53,2
6,62
106,3
51,0
2,06
101,9
53,3
6,82
106,5
51,1
2,27
102,1
53,4
7,03
106,7
51,2
2,47
102,3
53,5
7,24
106,9
51,3
2,68
102,5
53,6
7,45
107,1
51,4
2,89
102,7
53,7
7,66
107,3
51,5
3,09
102,9
53,8
7,86
107,5
51,6
3,30
103,1
53,9
8,07
107,7
51,7
3,51
103,3
54,0
8,28
107,9
51,8
3,72
103,5
54,1
8,49
108,1
51,9
3,92
103,7
54,2
8,70
108,3
52,0
4,13
103,9
54,3
8,90
108,5
52,1
4,34
104,1
54,4
9,11
108,7
52,2
4,54
104,3
54,5
9,32
108,9
52,3
4,75
104,5
54,6
9,53
109,1
432 - IAL
Graduao
alcolica
mL de gua
a adicionar
Volume da
mistura
Graduao
alcolica
mL de gua
a adicionar
Volume da
mistura
54,7
9,74
109,3
58,1
16,81
116,1
54,8
9,94
109,5
58,2
17,02
116,3
54,9
10,13
109,7
58,3
17,22
116,5
55,0
10,37
109,9
58,4
17,43
116,7
55,1
10,78
110,1
58,5
17,64
116,9
55,2
10,86
110,3
58,6
17,85
117,1
55,3
10,98
110,5
58,7
18,06
117,3
55,4
11,19
110,7
58,8
18,26
117,5
55,5
11,40
110,9
58,9
18,47
117,7
55,6
11,61
111,1
59,0
18,68
117,9
55,7
11,81
111,3
59,1
18,89
118,1
55,8
12,02
111,5
59,2
19,10
118,3
55,9
12,23
111,7
59,3
19,30
118,5
56,0
12,44
111,9
59,4
19,51
118,7
56,1
12,65
112,1
59,5
19,72
118,9
56,2
12,85
112,3
59,6
19,93
119,1
56,3
13,06
112,5
59,7
20,14
119,3
56,4
13,27
112,7
59,8
20,34
119,5
56,5
13,48
112,9
59,9
20,55
119,7
56,6
13,69
113,1
60,0
20,76
119,9
56,7
13,90
113,3
60,1
20,97
120,1
56,8
14,10
113,5
60,2
21,18
120,3
56,9
14,31
113,7
60,3
21,39
120,5
57,0
14,52
113,9
60,4
21,60
120,7
57,1
14,73
114,1
60,5
21,80
120,9
57,2
14,94
114,3
60,6
22,01
121,1
57,3
15,14
114,5
60,7
22,22
121,3
57,4
15,35
114,7
60,8
22,43
121,5
57,5
15,56
114,9
60,9
22,64
121,7
57,6
15,77
115,1
61,0
22,85
121,9
57,7
15,98
115,3
61,1
23,06
122,1
57,8
16,18
115,5
61,2
23,27
122,3
57,9
16,39
115,7
61,3
23,48
122,5
58,0
16,60
115,9
61,4
23,69
122,7
IAL - 433
Graduao
alcolica
mL de gua
a adicionar
Volume da
mistura
Graduao
alcolica
mL de gua
a adicionar
Volume da
mistura
61,5
23,90
122,9
64,9
31,02
129,7
61,6
24,11
123,1
65,0
31,23
129,9
61,7
24,32
123,3
65,1
31,44
130,1
61,8
24,53
123,5
65,2
31,63
130,3
61,9
24,74
123,7
65,3
31,86
130,5
62,0
24,95
123,9
65,4
32,07
130,7
62,1
25,16
124,1
65,5
32,28
130,9
62,2
25,37
124,3
65,6
32,49
131,1
62,3
25,58
124,5
65,7
32,70
131,3
62,4
25,79
124,7
65,8
32,91
131,5
62,5
25,99
124,9
65,9
33,12
131,7
62,6
26,20
125,1
66,0
33,33
131,9
62,7
26,41
125,3
66,1
33,54
132,1
62,8
26,62
125,5
66,2
33,75
132,3
62,9
26,83
125,7
66,3
33,96
132,5
63,0
27,04
125,9
66,4
34,17
132,7
63,1
27,25
126,1
66,5
34,38
132,9
63,2
27,46
126,3
66,6
34,60
133,1
63,3
27,67
126,5
66,7
34,81
133,3
63,4
27,88
126,7
66,8
35,02
133,5
63,5
28,09
126,9
66,9
35,23
133,7
63,6
28,30
127,1
67,0
35,44
133,9
63,7
28,51
127,3
67,1
35,65
134,1
63,8
28,72
127,5
67,2
35,86
134,3
63,9
28,93
127,7
67,3
36,07
134,5
64,0
29,14
127,9
67,4
36,28
134,7
64,1
29,35
128,1
67,5
36,49
134,9
64,2
29,56
128,3
67,6
36,71
135,1
64,3
29,77
128,5
67,7
36,92
135,3
64,4
29,98
128,7
67,8
37,13
135,5
64,5
30,18
128,9
67,9
37,34
135,7
64,6
30,39
129,1
68,0
37,55
135,9
64,7
30,60
129,3
68,1
37,76
136,1
64,8
30,81
129,5
68,2
37,97
136,3
434 - IAL
Graduao
alcolica
mL de gua
a adicionar
Volume da
mistura
Graduao
alcolica
mL de gua
a adicionar
Volume da
mistura
68,3
38,18
136,5
71,7
45,37
143,3
68,4
38,39
136,7
71,8
45,58
143,5
68,5
38,60
136,9
71,9
45,79
143,7
68,6
38,82
137,1
72,0
46,00
143,9
68,7
39,03
137,3
72,1
46,21
144,1
68,8
39,24
137,5
72,2
46,43
144,3
68,9
39,45
137,7
72,3
46,64
144,5
69,0
39,66
137,9
72,4
46,85
144,7
69,1
39,87
138,1
72,5
47,06
144,9
69,2
40,08
138,3
72,6
47,28
145,1
69,3
40,30
138,5
72,7
47,49
145,3
69,4
40,51
138,7
72,8
47,70
145,5
69,5
40,72
138,9
72,9
47,92
145,7
69,6
40,93
139,1
73,0
48,13
145,9
69,7
41,14
139,3
73,1
48,34
146,1
69,8
41,36
139,5
73,2
48,55
146,3
69,9
41,57
139,7
73,3
48,77
146,5
70,0
41,78
139,9
73,4
48,98
146,7
70,1
41,99
140,1
73,5
49,19
146,9
70,2
42,20
140,3
73,6
49,40
147,1
70,3
42,41
140,5
73,7
49,61
147,3
70,4
42,62
140,7
73,8
49,83
147,5
70,5
42,83
140,9
73,9
50,04
147,7
70,6
43,05
141,1
74,0
50,25
147,9
70,7
43,26
141,3
74,1
50,46
148,1
70,8
43,47
141,5
74,2
50,68
148,3
70,9
43,68
141,7
74,3
50,89
148,5
71,0
43,89
141,9
74,4
51,10
148,7
71,1
44,10
142,1
74,5
51,31
148,9
71,2
44,31
142,3
74,6
51,53
149,1
71,3
44,52
142,5
74,7
51,74
149,3
71,4
44,73
142,7
74,8
51,95
149,5
71,5
44,94
142,9
74,9
52,17
149,7
71,6
45,16
143,1
75,0
52,38
149,9
IAL - 435
Volume de gua
a adicionar (mL)
100,0
13,2
99,5
12,5
99,0
11,8
98,5
11,1
98,0
10,4
97,5
9,7
97,0
9,0
96,5
8,3
96,0
7,7
95,5
7,0
95,0
6,4
94,5
5,7
94,0
5,1
93,5
4,4
93,0
3,8
92,5
3,1
92,0
2,5
91,5
1,8
91,0
1,2
90,5
0,5
Referncia bibliogrfica
BRASIL, Leis, Decretos, etc. Portaria n 76, de 27 de nov de 86, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 3-12-86. Seo I. p. 18152-18174.
227/IV Bebidas fermento-destiladas Metanol
Este mtodo aplicvel em bebidas alcolicas e se baseia numa reao de oxidao do metanol pelo permanganato de potssio, formando formaldedo, que reage com
o sal do cido cromotrpico, conferindo cor.
Material
Banho-maria, espectrofotmetro UV/VIS, termmetro, cubeta de 10 mm, pipetas volumtricas
de 1, 2, e 5 mL, pipeta graduada de 10 mL e bales volumtricos de 50 e 100 mL.
436 - IAL
Reagentes
cido sulfrico
lcool grau espectrofotomtrico
Metanol grau espectrofotomtrico
Isopropanol grau espectrofotomtrico
Sulfito de sdio ou bissulfito de sdio
Soluo de permanganato de potssio a 3% em soluo de acido fosfrico a 15% Pipete
15 mL de cido fosfrico (85%, d = 1,69) e dilua com gua, acrescente 3 g de KMnO4 e
complete o volume a 100 mL num balo volumtrico.
Soluo do sal dissdico dihidratado do cido cromotrpico (C10H6 Na2O8S2.2H2O) a 5%
Dissolva 5 g do sal em 100 mL de gua. Se a soluo no estiver clara, filtre. A soluo deve ser
preparada semanalmente. O sal ou o cido podem ser usados.
Purificao do cido cromotrpico Se a leitura da absorbn cia do branco for maior que 0,05,
purifique o reagente dissolvendo 10 g de cido cromotrpico ou seu sal sdico em 25 mL de
gua. Adicione 2 mL de cido sulfrico soluo aquosa de sal para a converso para cido
livre. Adicione 50 mL de metanol. Aquea at a ebulio, e filtre. Adicione 100 mL de isopropanol para precipitar o cido cromotrpico livre (adicione mais isopropanol para aumentar o
rendimento do cido purificado).
Preparao da amostra Utilize o destilado da amostra, o qual foi obtido para a determinao
da graduao alcolica e dilua para uma concentrao de lcool etlico de 5 a 6% em volume.
Prepare um branco de lcool etlico a 5,5%. Uma soluo padro contendo 0,025% de
metanol em soluo de lcool etlico a 5,5% deve ser preparada (v/v). Se a concentrao
de metanol (em volume) na amostra for maior ou igual a 0,05%, dilua aproximadamente
concentrao de 0,025% de metanol com lcool etlico a 5,5% (v/v). Para amostras que
contenham concentrao de metanol menor ou igual a 0,05% utilize uma quantidade maior
de amostra e destile novamente, recolhendo o destilado em um balo de menor volume do que
o inicial, de modo a realizar uma concentrao da mesma.
Procedimento Pipete 2 mL da soluo de permanganato de potssio para um balo
volumtrico de 50 mL. Resfrie em banho de gelo. Adicione 1 mL da soluo da amostra
diluda e deixe por 30 minutos em banho de gelo. Descore com um pouco de bissulfito de
sdio e adicione 1 mL da soluo de cido cromotrpico. Adicione lentamente 15 mL de
cido sulfrico com agitao e coloque em banho de gua quente (60-75C) por 15 minutos.
Resfrie e complete o volume com gua temperatura ambiente. Faa a leitura da absorbncia
IAL - 437
a 575 nm contra um branco de lcool a 5,5% tratado da mesma forma que a amostra. Trate a
soluo-padro de 0,025% de metanol (em lcool a 5,5%) da mesma maneira que a amostra e
faa a leitura da absorbncia Ap. A diferena entre as temperaturas do padro e da amostra no
deve ser maior que 1C, pois a temperatura afeta a leitura da absorbncia. Se a cor da amostra
for muito intensa, dilua com o branco preparado como acima, at no mximo trs vezes.
Clculo
A = absorbncia da amostra
f = fator de diluio da amostra
Ap = absorbncia da soluo padro
G = graduao alcolica
Referncia bibliogrfica:
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods
of analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 958.04)
Gaithersburg: A.O.A.C., 2005, Revision 1, 2006, chapter 26. p. 15.
228/IV Bebidas fermento-destiladas Determinao de metanol e componentes secundrios
Este mtodo utilizado para determinar as concentraes de metanol e componentes
secundrios em bebidas alcolicas por cromatografia em fase gasosa. As bebidas alcolicas destiladas como aguardente, whisky, conhaque, vodca, rum e tequila, no requerem destilao
prvia, entretanto, as que apresentarem resduo seco superior a 0,4 g/100 mL devem ser destiladas antes de serem analisadas.
Material
Balana analtica, cromatgrafo a gs com controle de programao de temperatura de coluna, provido de detector de ionizao de chama (FID). Colunas cromatogrficas que podem ser utilizadas nesta anlise: coluna empacotada: fase estacionria: 1) Carbowax 20M 5%
ou similar; suporte: Carbopack B, 80/120 mesh; comprimento: 2 m; dimetro interno: 2
mm; coluna capilar de slica fundida: fase estacionria Carbowax ou similar; comprimento:
60 m; dimetro interno: 0,25 mm; espessura do filme: 0,25 m.: 2) Coluna megabore: fase es438 - IAL
V (mL)
0,8
2,0
2,0
1,5
2,5
0,5
1,0
2,5
IAL - 439
IAL - 441
AcompA
APIA
FCcomp
CPIA
442 - IAL
444 - IAL
relativa, lcool em volume, pH, acidez total, voltil, acidez fixa, extrato seco, acares
redutores em glicose, acares no redutores em sacarose, sulfatos, extrato seco reduzido,
relao lcool em peso/extrato seco reduzido, cinzas (018/IV), alcalinidade das cinzas,
cloretos, dixido de enxofre, taninos, metanol, corantes artificiais (051/IV), minerais e
contaminantes inorgnicos (cap. XXIII).
Vinhos
231IV Bebidas fermentadas Exame preliminar de vinhos
O exame fsico da amostra, antes e no momento da abertura da embalagem, importante especialmente no caso dos vinhos e seus derivados, pois estes so susceptveis
modificaes provenientes de causas diversas.
Procedimento Antes da abertura da embalagem, observe: aparncia - se o produto apresenta o aspecto lmpido ou turvo, se h presena de depsito ou no; cor - se o produto apresenta tonalidade prpria ou imprpria; condies da embalagem - estado da embalagem,
vazamentos e sistema de vedao; formao de gs. No momento da abertura da embalagem, verifique: aparncia - se apresenta carbonatao conforme a caracterstica do produto
ou se h presena de gs devido a alguma anormalidade; odor - se tpico (vinoso), estranho
ou alterado (actico); sabor - caso seja necessrio por degustao, avalie se o produto seco,
doce, prprio, estranho ou alterado (actico).
Referncia Bibliogrfica
BRASIL, Leis, Decretos, etc - Portaria n 76 de 27 de nov de 1986, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 3 de dez 1986. Seo I, p. 18152-18173.
232/IV Bebidas fermentadas Preparao da amostra de vinhos
Determine imediatamente, aps a abertura da embalagem, os compostos que so
sujeitos alterao, tais como lcool e cidos volteis. Filtre, se necessrio. Nos casos de
bebidas gaseificadas, elimine o CO2, utilizando um agitador magntico ou banho de ultrasom.
233/IV Vinhos - lcool em volume ou grau alcolico
Este mtodo aplica-se a amostras de bebidas fermentadas. Baseia-se na destilao do
lcool da amostra e posterior quantificao pela medida da densidade relativa do destilado
a 20C.
446 - IAL
Material
Conjunto de destilao ou equipamento destilador por arraste de vapor, chapa aquecedora, condensador de serpentina 40 cm, conexo com bola de segurana, balo
volumtrico de 100 mL, funil, basto de vidro, prolas de vidro e termmetro.
Procedimento: Ajuste a temperatura da amostra a 20oC e mea 100 mL em um balo
volumtrico. Transfira para o recipiente do aparelho destilador (adicione prolas de
vidro) ou para o borbulhador do aparelho de arraste a vapor, com auxlio do basto
de vidro. Lave o balo volumtrico 4 vezes com gua destilada e destile a amostra.
Recolha o destilado no prprio balo volumtrico inicialmente usado, em pelo
menos do volume tomado de amostra. Complete o volume com gua destilada.
Determine a densidade relativa 20C/20C e obtenha a graduao alcolica a partir
da Tabela 1. Se necessrio, especialmente nos vinhos novos, adicione uma pequena
quantidade de material anti-espumante, para prevenir a formao de espuma durante
a destilao. No caso de vinhos que contenham uma quantidade elevada de cido
actico, neutralize exatamente com soluo de hidrxido de sdio 0,1 N (volume
calculado a partir da determinao de acidez), antes de proceder destilao. A
neutralizao desnecessria em vinhos que apresentam sabor e odor normais.
Referncias Bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods
of analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 920.57)
Gaithersburg: A.O.A.C., 2005, Revision 1, 2006, chapter 28. p. 1.
BRASIL, Leis, Decretos, etc - Portaria n 76 de 27 de nov de 1986, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 3 de dez 1986. Seo I, p. 18152-18173.
234/IV Vinhos lcool em peso
Aplicvel para se determinar a porcentagem de lcool em peso em bebidas alcolicas
fermentadas. Considera-se como lcool em peso, por 100 mL, o resultado da multiplicao
da graduao alcolica em volume, por 0,79 (densidade aproximada do lcool absoluto a
20oC).
IAL - 447
Clculo
A x 0,79 = lcool em peso por cento m/v
A = n de mL de lcool em volume por cento
Referncia Bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP 1985. p. 366.
235/IV Vinhos Acidez total
Este mtodo basea-se na titulao de neutralizao dos cidos com soluo padronizada de lcali, com uso de indicador fenoftalena para solues claras de vinho e outras
bebidas lcoolicas fermentadas ou com o pHmetro para solues escuras.
Material
pHmetro, agitador magntico, barra magntica, pipeta volumtrica de 10 mL, frasco
Erlenmeyer de 500 mL, bquer de 250 mL, bureta de 10 mL e pipeta graduada de 1 mL.
Reagentes
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 N ou 0,05 N
Soluo de fenolftalena
Procedimento - Pipete 10 mL da amostra descarbonatada em um frasco Erlenmeyer de
500 mL contendo 100 mL de gua. Adicione 0,5 mL de fenoftalena e titule com soluo
de hidrxido de sdio padronizada, at colorao rsea persistente ou transfira a amostra
para um bquer e titule at o ponto de viragem (pH 8,2-8,4), utilizando o pHmetro.
Clculo
IAL - 449
Clculo
At - Av = acidez fixa, em meq/L
At = acidez total, em meq/L
Av = acidez voltil, em meq/L
Referncias Bibliogrficas
BRASIL, Leis, Decretos, etc - Portaria n 76 de 27 de novembro de 1986, do Ministrio
da Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 03 de dez. 1986. Seo I, p. 18152-18173.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz . v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP 1985. p. 361.
238/IV Vinhos - Extrato seco
Mtodo A - aplicvel a vinhos secos e outras bebidas fermentadas com extrato seco menor
que 3 g/100 mL. O mtodo avalia o resduo seco (slidos totais) da bebida, por evaporao
e secagem em estufa.
Material
Cpsula de metal com fundo chato, com aproximadamente 8,5 cm de dimetro, estufa, banho-maria, balana analtica, pipeta volumtrica de 20 ou 25 mL, dessecador e temmetro.
Procedimento Transfira, com o auxlio de uma pipeta, 20 ou 25 mL da amostra para uma
cpsula metlica de fundo chato, previamente aquecida em estufa a (100 5)C, por uma
hora, resfriada em dessecador e pesada. Evapore em banho-maria fervente at que o resduo
esteja aparentemente seco, ou at uma consistncia xaroposa. Aquea o resduo em estufa
a (100 5)C, por 1 hora. Resfrie em dessecador e pese. Repita as operaes em estufa e
dessecador at peso constante.
Clculo
N = massa, em g de resduo
v = volume da amostra, em mL
Referncias Bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP 1985. p. 361.
450 - IAL
IAL - 451
TABELA 5 Teor do extrato seco total (g/L) a partir da densidade relativa a 20C da
mostra sem lcool (De)
Densidade
at a 2a. casa
decimal
2,6
5,1
7,7
10,3
12,9
15,4
18,0
20,6
23,2
1,01
25,8
28,4
31,0
33,6
36,2
38,8
41,3
43,9
46,5
49,1
1,02
51,7
54,3
56,9
59,5
62,1
64,7
67,3
69,9
72,5
75,1
1,03
77,7
80,3
82,9
85,5
88,1
90,7
93,3
95,9
98,5
101,1
1,04
103,7
106,3
109,9
111,6
114,2
116,8
119,4
122,0
124,6
127,2
1,05
129,8
132,4
135,0
137,6
140,3
142,9
145,5
148,1
150,7
153,3
1,06
155,9
158,6
161,2
163,8
166,4
169,0
171,6
174,3
176,9
179,5
1,07
182,1
184,8
187,4
190,0
192,6
195,2
197,8
200,5
203,1
205,8
1,08
208,4
211,0
213,6
216,2
218,9
221,5
224,1
226,8
229,4
232,0
1,09
234,7
237,3
239,9
242,5
245,2
247,8
250,4
253,1
255,7
258,4
1,10
261,0
263,6
266,3
268,9
271,5
274,2
276,8
279,5
282,1
284,8
1,11
287,4
290,0
292,7
295,3
298,0
300,6
303,3
305,9
308,6
311,2
1,12
313,9
316,5
319,2
321,8
324,5
327,1
329,8
332,4
335,1
337,8
1,13
340,4
343,0
345,7
348,3
351,0
353,7
356,3
359,0
361,6
364,3
1,14
366,9
369,6
372,3
375,0
377,6
380,3
382,9
385,6
388,3
390,9
1,15
393,6
396,2
398,9
401,6
404,3
406,9
409,6
412,3
415,0
417,6
1,16
420,3
423,0
425,7
428,3
431,0
433,7
436,4
439,0
441,7
444,4
1,17
447,1
449,8
452,4
455,2
457,8
460,5
463,2
465,9
468,6
471,3
1,18
473,9
476,6
479,3
482,0
484,4
487,4
490,1
492,8
495,5
498,2
1,19
500,9
503,5
506,2
508,9
511,6
514,3
517,0
519,7
522,4
525,1
1,20
527,8
TABELA DE AJUSTE
4 casa
decimal da
densidade
Gramas de
extrato/L
4 casa
decimal da
densidade
Gramas de
extrato/L
4 casa
decimal da
densidade
Gramas
de
extrato/L
0,3
1,0
1,8
0,5
1,3
2,1
0,8
1,6
2,3
452 - IAL
Referncia Bibliogrfica
OFFICE INTERNATIONAL DE LA VIGNE ET DU VIN. Recueil des methodes
internationales danalyse des vins et des muts, Paris: O.I.V., 1990. 85-89.
239/IV Bebidas fermentadas Acares redutores em glicose
Este mtodo volumtrico, aplicvel a bebidas fermentadas, envolve a reduo completa de um volume conhecido da soluo de cobre (Soluo de Fehling) por um volume de
soluo clarificada de acares redutores.
Material
Banho-maria, pipeta volumtrica de 50 mL, balo volumtrico de 100 mL, bquer de 150
mL, balo de fundo chato de 250 mL, chapa aquecedora, funil, papel de filtro e bureta de
10 ou 25 mL
Reagentes
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 M
Soluo saturada de acetato neutro de chumbo
Solues A e B de Fehling tituladas (Apndice I)
Oxalato de potssio ou de sdio, anidros
Carvo ativo
Procedimento Transfira, com auxlio de uma pipeta volumtrica, 50 mL da amostra para
um bquer de 150 mL (para amostras com alto teor de acares, tome alquotas menores).
Neutralize exatamente com soluo de hidrxido de sdio 0,1 M (o volume para a neutralizao calculado do resultado da acidez total). Evapore em banho-maria at eliminar todo
o lcool. Resfrie e transfira com gua para um balo volumtrico de 100 mL. Se necessrio,
adicione 1 mL da soluo de acetato neutro de chumbo o suficiente para clarificar. Pode
ser usada uma pequena quantidade de carvo ativo, para amostras escuras, suficiente para
clarear a amostra. Misture, complete o volume com gua e filtre, desprezando os primeiros
mL do filtrado. Adicione ao filtrado oxalato de potssio ou de sdio anidros para precipitar
o excesso de chumbo. Misture e filtre, descartando os primeiros mL filtrados e proceda
conforme o mtodo 038/IV.
Referncia Bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3 ed. So Paulo: IMESP 1985. p. 364.
IAL - 453
K2SO4 (g/L)
Menos de 0,7
Mais de 0,7
Menos de 1,0
Mais de 1,0
Menos de 1,5
Mais de 1,5
Referncias bibliogrficas
BRASIL, Leis,Decretos, etc - Portaria n 76 de 27 de nov de 1986, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 3 de dez 1986. Seo I, p. 18152-18173.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 364365.
IAL - 455
lcool
%
Densidade
Relativa
lcool
%
Densidade
Relativa
lcool
%
Densidade
Relativa
lcool
%
1,00000
0,00
0,99777
1,20
0,99561
2,40
0,99354
3,60
0,99991
0,05
0,99768
1,25
0,99553
2,45
0,99346
3,65
0,99981
0,10
0,99759
1,30
0,99544
2,50
0,99337
3,70
0,99972
0,15
0,99750
1,35
0,99535
2,55
0,99329
3,75
0,99963
0,20
0,99741
1,40
0,99526
2,60
0,99320
3,80
0,99953
0,25
0,99732
1,45
0,99517
2,65
0,99312
3,85
0,99944
0,30
0,99723
1,50
0,99509
2,70
0,99303
3,90
0,99935
0,35
0,99714
1,55
0,99500
2,75
0,99295
3,95
0,99925
0,40
0,99705
1,60
0,99491
2,80
0,99286
4,00
0,99916
0,45
0,99695
1,65
0,99482
2,85
0,99278
4,05
0,99907
0,50
0,99686
1,70
0,99473
2,90
0,99270
4,10
0,99897
0,55
0,99676
1,75
0,99464
2,95
0,99262
4,15
0,99888
0,60
0,99668
1,80
0,99456
3,00
0,99253
4,20
0,99879
0,65
0,99659
1,85
0,99447
3,05
0,99245
4,25
0,99869
0,70
0,99650
1,90
0,99439
3,10
0,99237
4,30
0,99860
0,75
0,99641
1,95
0,99430
3,15
0,99229
4,35
0,99851
0,80
0,99632
2,00
0,99422
3,20
0,99221
4,40
0,99841
0,85
0,99623
2,05
0,99413
3,25
0,99212
4,45
0,99832
0,90
0,99614
2,10
0,99405
3,30
0,99204
4,50
0,99823
0,95
0,99606
2,15
0,99396
3,35
0,99196
4,55
0,99813
1,00
0,99597
2,20
0,99388
3,40
0,99188
4,60
0,99804
1,05
0,99588
2,25
0,99379
3,45
0,99179
4,65
0,99795
1,10
0,99579
2,30
0,99371
3,50
0,99171
4,70
0,99786
1,15
0,99570
2,35
0,99362
3,55
0,99163
4,75
458 - IAL
Densidade
Relativa
lcool
%
Densidade
Relativa
lcool
%
Densidade
Relativa
lcool
%
Densidade
Relativa
lcool
%
0,99155
4,80
0,99018
5,65
0,98884
6,50
0,98762
7,30
0,99147
4,85
0,99010
5,70
0,98877
6,55
0,98755
7,35
0,99138
4,90
0,99002
5,75
0,98869
6,60
0,98747
7,40
0,99130
4,95
0,98994
5,80
0,98861
6,65
0,98740
7,45
0,99122
5,00
0,98986
5,85
0,98854
6,70
0,98732
7,50
0,99114
5,05
0,98978
5,90
0,98846
6,75
0,98725
7,55
0,99106
5,10
0,98970
5,95
0,98838
6,80
0,98717
7,60
0,99098
5,15
0,98962
6,00
0,98830
6,85
0,98710
7,65
0,99090
5,20
0,98954
6,05
0,98823
6,90
0,98702
7,70
0,99082
5,25
0,98946
6,10
0,98815
6,95
0,98695
7,75
0,99074
5,30
0,98938
6,15
0,98807
7,00
0,98687
7,80
0,99066
5,35
0,98931
6,20
0,98800
7,05
0,98680
7,85
0,99058
5,40
0,98923
6,25
0,98792
7,10
0,98672
7,90
0,99050
5,45
0,98915
6,30
0,98785
7,15
0,98664
7,95
0,99042
5,50
0,98908
6,35
0,98777
7,20
0,98657
8,00
0,99034
5,55
0,98900
6,40
0,98770
7,25
0,99026
5,60
0,98892
6,45
Referncias Bibliogrficas
BRASIL, Leis, Decretos, etc. - Portaria n 76 de 27 de nov de 1986, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 3 de dez 1986. Seo I, p. 18152-18173.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
368-370.
248/IV Cervejas Extrato real pelo mtodo 1
A determinao do extrato real por este mtodo est baseada na pesagem do resduo seco de um certo volume de amostra submetido evaporao.
Material
Balana analtica, banho-maria, estufa ou estufa a vcuo, cpsula de nquel de 7 cm de
dimetro e 2 cm de altura e pipeta volumtrica de 20 mL
Procedimento Transfira, com auxlio de uma pipeta, 20 mL de amostra descarbonatada, para uma cpsula de nquel previamente aquecida em estufa a (100 5)C por 1 hora,
IAL - 459
460 - IAL
g Extrato
em 100 g de
soluo
Densidade
Relativa
a
20/20C
g Extrato
em 100 g
de soluo
Densidade
Relativa
a
20C/20C
g Extrato
em 100 g de
soluo
1,00000
0,00
1,00605
1,55
1,01213
3,10
1,00020
0,05
1,00624
1,60
1,01233
3,15
1,00039
0,10
1,00644
1,65
1,01253
3,20
1,00059
0,15
1,00663
1,70
1,01273
3,25
1,00078
0,20
1,00683
1,75
1,01292
3,30
1,00098
0,25
1,00702
1,80
1,01312
3,35
1,00117
0,30
1,00722
1,85
1,01332
3,40
1,00137
0,35
1,00742
1,90
1,01352
3,45
1,00156
0,40
1,00761
1,95
1,01371
3,50
1,00176
0,45
1,00781
2,00
1,01391
3,55
1,00195
0,50
1,00799
2,05
1,01411
3,60
1,00214
0,55
1,00820
2,10
1,01431
3,65
1,00234
0,60
1,00840
2,15
1,00451
3,70
1,00254
0,65
1,00859
2,20
1,01471
3,75
1,00273
0,70
1,00879
2,25
1,01490
3,80
1,00293
0,75
1,00897
2,30
1,01510
3,85
1,00312
0,80
1,00918
2,35
1,01530
3,90
1,00332
0,85
1,00938
2,40
1,01550
3,95
1,00351
0,90
1,00957
2,45
1,01570
4,00
1,00371
0,95
1,00977
2,50
1,01590
4,05
1,00390
1,00
1,00997
2,55
1,01609
4,10
1,00410
1,05
1,01016
2,60
1,01629
4,15
1,00429
1,10
1,01036
2,65
1,01649
4,20
1,00449
1,15
1,01056
2,70
1,01669
4,25
1,00468
1,20
1,01075
2,75
1,01689
4,30
1,00488
1,25
1,01095
2,80
1,01709
4,35
1,00507
1,30
1,01115
2,85
1,01729
4,40
1,00527
1,35
1,01134
2,90
1,01749
4,45
1,00546
1,40
1,01154
2,95
1,01769
4,50
1,00566
1,45
1,01174
3,00
1,01789
4,55
1,00585
1,50
1,01194
3,05
1,01808
4,60
IAL - 461
Densidade
Relativa
a
20C/20C
g Extrato
em 100 g
de soluo
Densidade
Relativa
a
20/20C
g Extrato
em 100 g
de soluo
Densidade
Relativa
a
20C/20C
g Extrato
em 100 g de
soluo
1,01828
4,65
1,02511
6,35
1,03201
8,05
1,01848
4,70
1,02531
6,40
1,03221
8,10
1,01868
4,75
1,02551
6,45
1,03242
8,15
1,01888
4,80
1,02571
6,50
1,03262
8,20
1,01908
4,85
1,02592
6,55
1,03263
8,25
1,01928
4,90
1,02612
6,60
1,03283
8,30
1,01948
4,95
1,02632
6,65
1,03324
8,35
1,01969
5,00
1,02652
6,70
1,03344
8,40
1,01988
5,05
1,02672
6,75
1,03365
8,45
1,02008
5,10
1,02693
6,80
1,03385
8,50
1,02028
5,15
1,02713
6,85
1,03406
8,55
1,02048
5,20
1,02733
6,90
1,03426
8,60
1,02068
5,25
1,02753
6,95
1,03447
8,65
1,02088
5,30
1,02774
7,00
1,03467
8,70
1,02108
5,35
1,02794
7,05
1,03488
8,75
1,02128
5,40
1,02814
7,10
1,03503
8,80
1,02148
5,45
1,02835
7,15
1,03529
8,85
1,02169
5,50
1,02855
7,20
1,03549
8,90
1,02189
5,55
1,02875
7,25
1,03570
8,95
1,02209
5,60
1,02896
7,30
1,03591
9,00
1,02229
5,65
1,02916
7,35
1,03611
9,05
1,02249
5,70
1,02936
7,40
1,03632
9,10
1,02269
5,75
1,02956
7,45
1,03652
9,15
1,02289
5,80
1,02977
7,50
1,03673
9,20
1,02309
5,85
1,02997
7,55
1,03693
9,25
1,02329
5,90
1,03018
7,60
1,03714
9,30
1,02349
5,95
1,03038
7,65
1,03735
9,35
1,02370
6,00
1,03058
7,70
1,03755
9,40
1,02390
6,05
1,03079
7,75
1,03776
9,45
1,02410
6,10
1,03099
7,80
1,03796
9,50
1,02430
6,15
1,03119
7,85
1,03817
9,55
1,02450
6,20
1,03140
7,90
1,03838
9,60
1,02470
6,25
1,03160
7,95
1,03858
9,65
1,02490
6,30
1,03181
8,00
1,03879
9,70
462 - IAL
Densidade
Relativa
a
20C/20C
g Extrato
em 100 g
de soluo
Densidade
Relativa
a
20/20C
g Extrato
em 100 g
de soluo
Densidade
Relativa
a
20C/20C
g Extrato
em 100 g de
soluo
1,03909
9,75
1,03941
9,85
1,03982
9,95
1,03929
9,80
1,03962
9,90
1,04003
10,00
Referncias Bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of
analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 945.09) Gaithersburg:
A.O.A.C., 2005, Revision 1, 2006, chapter 27. p. 4.
BRASIL, Leis, Decretos, etc. - Portaria n 76 de 27 de nov de 1986, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 3 de dez 1986. Seo I, p. 18152-18173.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 372
250/IV Cervejas Extrato aparente
Este mtodo utilizado para determinar o extrato aparente em amostras de cerveja. Esta determinao baseia-se na converso do valor de densidade relativa diretamente da
amostra em % de extrato aparente, por intermdio da Tabela 7.
Material
Balana analtica, picnmetro, frasco Erlenmeyer de 100 mL e funil de vidro
Procedimento filtre aproximadamente 100 mL de amostra descarbonatada e determine a
densidade relativa a 20/20C do filtrado. Converta o valor da densidade relativa em extrato
aparente utilizando a Tabela 7.
Referncias Bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of
analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 945.09) Gaithersburg:
A.O.A.C., 2005, Revision 1, 2006, chapter 27. p. 4.
BRASIL, Leis, Decretos, etc. - Portaria n 76 de 27 de nov de 1986, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 03 de dez 1986. Seo I, p. 18152-18173.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 375.
IAL - 463
P =% de lcool em peso
Er =% de extrato real
Referncias Bibliogrficas
BRASIL, Leis, Decretos, etc. - Portaria n 76 de 27 de nov de 1986, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 03 de dez 1986. Seo I, p. 18152-18173.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of
analysis of the Association of Official Analytical Chemists (method 935.20) Gaithersburg:
A.O.A.C., 2005, Revision 1, 2006, chapter 27. p. 4.
Bebidas alcolicas por mistura
Esto includos neste tem: licor, bebida alcolica mista ou coquetel, batida, aperitivos
e amargos (bitter, fernet, ferroquina) e aguardente composta.
A anlise destes produtos inclui as seguintes determinaes: lcool em volume, densidade, resduo seco, glicdios totais em sacarose, acidez total, cinzas, componentes secundros,
metanol, pesquisa de corantes orgnicos artificiais, cobre e eventualmente contaminantes
inorgnicos. Essas determinaes j esto descritas nos mtodos de anlise para bebidas alcolicas destiladas e de determinaes gerais.
Colaboradores
Letcia Arajo Farah Nagato; Miriam Solange Fernandes Caruso; Maria Cristina Duran;
Maria de Ftima Henriques Carvalho e Cristiane Bonaldi Cano
464 - IAL
CAPTULO
BEBIDAS NO
ALCOLICAS
IAL - 465
466 - IAL
BEBIDAS NO ALCOLICAS
468 - IAL
Procedimento Calibre o pHmetro usando as duas solues-tampo, conforme as instrues do fabricante. Para refrigerantes e refrescos, pipete 10 mL da amostra em um bquer e
adicione 100 mL de gua. Mergulhe o eletrodo na soluo e titule com hidrxido de sdio
0,1 M at pH 8,2-8,4. Para amostras slidas, pese aproximadamente 1 g e para xaropes,
cerca de 5 g.
Clculo
IAL - 469
Reagentes
Cafena com pureza mnima de 99%
Clorofrmio, grau espectrofotomtrico
Soluo redutora Pese 5 g de sulfito de sdio e 5 g de tiocianato de potssio, dissolva em
gua e dilua a 10 mL em balo volumtrico.
Soluo de hidrxido de sdio a 25% m/v
Soluo de permanganato de potssio a 1,5% m/v
Soluo de cido fosfrico -- Dilua 15 mL de cido fosfrico (d=1,69g/cm3) em 85 mL de
gua
Sulfato de sdio anidro
Soluo-padro de cafena Pese 100 mg de cafena, dissolva e dilua em clorofrmio num
balo volumtrico de 100 mL. Pipete 10 mL da soluo-estoque de cafena e dilua a 100 mL
com clorofrmio. Esta soluo contm 0,1 mg de cafena por mL de clorofrmio.
Procedimento Pipete de 20 a 50 mL da amostra descarbonatada para um funil de separao. Junte 10 mL da soluo de permanganato de potssio a 1,5 % e agite. Aps 5 minutos,
junte 20 mL da soluo redutora com agitao contnua. Adicione 2 mL da soluo de
cido fosfrico e agite. Adicione 2 mL da soluo de hidrxido de sdio a 25 % e agite. Extraia a cafena com trs pores de 30 mL de clorofrmio. Aps a separao, retire a camada
inferior e filtre-a em sulfato de sdio anidro e algodo e recolha os filtrados em um mesmo
balo volumtrico de 100 mL. Lave a haste do funil de separao e o filtro com pores de
2 mL de clorofrmio, aps cada extrao. Complete o volume com clorofrmio. Determine
a absorbncia a 276 nm, usando clorofrmio como branco. Para amostras com alto teor de
cafena, faa uma diluio pipetando uma alquota de 10 mL para balo volumtrico de
50 mL, complete o volume com clorofrmio e faa a leitura da absorbncia a 276 nm.
Curva-padro Pipete 1, 2, 3, 4, 5 e 6 mL da soluo-padro de cafena para bales volumtricos de 50 mL e complete o volume com clorofrmio. Estas solues contm, respectivamente, 0,2; 0,4; 0,6; 0,8; 1 e 1,2 mg de cafena por 100 mL de clorofrmio. Determine
a absorbncia dessas solues a 276 nm, usando clorofrmio como branco. Trace a curvapadro, registrando os valores de absorbncia nas ordenadas e as concentraes de cafena
em mg/100 mL de clorofrmio nas abcissas.
470 - IAL
Clculo
Calcule a concentrao de cafena na amostra usando a curva-padro.
472 - IAL
IAL - 473
Referncia Bibliogrfica
BRASIL, Leis, Decretos, etc. Portaria n 76 de 27-11-1986, do Ministrio da Agricultura.
Dirio Oficial, Braslia, 03-12-1986.Seo I, p.18152-18173. Mtodos Analticos.
257/IV Determinao de acessulfame-K, sacarina e aspartame, cidos benzico e srbico e cafena por cromatografia lquida de alta eficincia
Aplicvel s amostras de refrigerante diettico ou de baixa caloria.
Material
Cromatgrafo a lquido de alta eficincia (CLAE) equipado com detector UV/VIS, coluna
ODS em fase reversa (tamanho de 15 x 4,5 cm com 5 de partculas), injetor manual com
capacidade de 20 L (ou automtico), software para controlar o equipamento e efetuar a
anlise dos dados, equipamento para obteno de gua ultra-pura (tipo Milli-Q), banho de
ultra-som, membrana de filtrao Hv com dimetro de 47 cm com porosidade de 0,45 ,
unidade filtrante do tipo Millex com poro de 0,45 , potencimetro com escala graduada
em 0,1 unidades de pH, agitador magntico, barra magntica, balana analtica, bales
volumtricos de 10, 25, 50 e 100 mL, funil, basto de vidro, conjunto de filtrao de solventes, seringa de 50 L, vials de 1 e 2 mL, pipetas volumtricas de 5 e 10 mL, frascos de
1000 mL para armazenamento e descarte de fase mvel e bqueres de 100, 500 mL e
1000 mL.
Reagentes
Sacarina com pureza minma de 95%
Acessulfame-K com pureza minma de 95%
Cafena com pureza minma de 95%
cido benzico com pureza minma de 95%
cido srbico com pureza minma de 95%
Aspartame com pureza minma de 95%
cido fosfrico
Fosfato dibsico de potssio
Acetonitrila grau cromatogrfico
Metanol grau cromatogrfico
Solues-padro estoque a 0,1 g/100 mL Para os padres de sacarina, acessulfame-K,
cafena e cido srbico, pese 0,1 g , dissolva com gua ultra-pura e complete o volume de
100 mL com o mesmo solvente. Para o aspartame e o cido benzico, pese 0,1 g, dissolva
em 40 mL de metanol e complete o volume de 100 mL com gua ultra-pura.
474 - IAL
IAL - 475
Clculo
IAL - 477
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.
1:Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
333.
261/IV Determinao de glicdios no redutores em sacarose
Procedimento Pipete 10 mL da amostra homogeneizada e descarbonatada em um balo
volumtrico de 100 mL. Para amostras de ps para refrescos e xaropes artificiais, pese de 1 a
3 g, conforme a concentrao de acares na amostra. Coloque o balo com a amostra em
banho-maria por 1 hora e proceda conforme 039/IV.
Referncia Bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.
1:Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
334.
262/IV Corantes orgnicos artificiais Anlise qualitativa
Material
Banho-maria, capela de segurana para solventes, l branca pura (20 cm), rgua de 20 cm,
papel Whatman n 1 (20 x 20) cm, bqueres de 25 e 100 mL, basto de vidro, capilar de
vidro e cuba de vidro (21 x 21 x 10) cm.
Reagentes
cido clordrico
Hidrxido de amnio
Padres de corantes orgnicos artificiais a 0,1 % m/v
Procedimento Pipete 10 mL ou pese 10 g da amostra homogeneizada em um bquer de
100 mL; no caso de amostras em p, dissolva 10 g em 20 mL de gua, adicione o pedao de
l pura e misture bem. Acrescente 0,5 mL de cido clordrico e coloque o bquer em banhomaria fervente. Quando o corante artificial da amostra ficar impregnado na l, retire e lave-a
com gua corrente. Coloque-a em um bquer de 25 mL e adicione 0,5 mL de hidrxido de
478 - IAL
Colaboradores
Cristiane Bonaldi Cano, Leticia Araujo Farah Nagato, Miriam Solange Fernandes Caruso e
Maria Cristina Duran
IAL - 479
CAPTULO
XI
CACAU E
CHOCOLATE
IAL - 481
482 - IAL
XI
CACAU E CHOCOLATE
Cacau
N = n de g de lipdios extrados
P = n de g da amostra
484 - IAL
Referncia bibliogrfica
U.K. FEEDING STUFFS (SAMPLING AND ANALYSIS) REGULATIONS. The
determination of oil in feeding stuffs n 1119. 1982, appendix I. p. 9-11.
264/IV Pesquisa de gorduras estranhas em chocolate
A composio dos lipdios do chocolate pode indicar a adio de gorduras estranhas manteiga de cacau. A alterao na composio de cidos graxos ou a presena de
determinados cidos graxos, ausentes na manteiga de cacau, pode evidenciar uma adulterao. Por exemplo, a presena de cidos graxos trans pode indicar adio de gordura
vegetal parcialmente hidrogenada ao chocolate. Por este mtodo, parte dos lipdios da
amostra extrados pelo mtodo de Soxhlet so transformados em steres metlicos de
cidos graxos, preparados conforme os mtodos 054/IV, 055/IV ou 056/IV, separados
e quantificados por cromatografia em fase gasosa.
Material
Seringa de capacidade mxima de 10 L, graduada em 0,1 L, bales volumtricos de
25 e 100 mL, flaconete (vial) de 1,5 mL, balana analtica, agitador do tipo vortex,
cromatgrafo a gs com detector de ionizao de chama, integrador ou computador,
sistema de injeo do tipo split, coluna capilar de slica fundida com fases estacionrias de ciano
propil siloxana ou equivalente (por ex: SP2340 com 60 m de comprimento, dimetro interno
de 0,25 mm e espessura do filme de 0,25 m, CP-Sil 88 com (50-100) m de comprimento,
dimetro interno de 0,25 mm e espessura do filme de 0,20 m).
Reagentes
Mistura de padres de steres metlicos de cidos graxos variando de C4 a C24 Dilua, com
n-hexano, o contedo da ampola contendo 100 mg da mistura de padres, em balo
volumtrico de 25 mL. Distribua em vials de 1,5 mL e armazene em freezer. Esta soluo ser utilizada para identificar os steres metlicos de cidos graxos. Determine os fatores de correo da resposta de cada componente no detector de ionizao de chama.
n-Hexano, grau CLAE
Gs de arraste para DIC: hidrognio (pureza 99,999%)
Gases auxiliares para DIC: nitrognio (pureza 99,999%) e ar seco (livre de
hidrocarbonetos).
IAL - 485
Procedimento Extraia os lipdios da amostra de chocolate. Prepare os steres metlicos de acordo com um dos mtodos 054/IV, 055/IV ou 056/IV. Estabelea as
seguintes condies cromatogrficas: gs de arraste hidrognio, velocidade linear entre
(15 - 25) mL/min; programao da temperatura da coluna 60C (2 minutos), 1 rampa
de 15C/min at 135C (1 minuto), 2 rampa de 3C/min at 215C (5 minutos);
temperatura do injetor 220C; temperatura do detector 220C, razo de diviso da
amostra 1:50. Analise uma mistura de padres de referncia de steres metlicos de
cidos graxos de composio conhecida nas mesmas condies empregadas na anlise
da amostra e determine o tempo de reteno (ou distncia de reteno) para cada ster
metlico. Faa a identificao por comparao dos tempos de reteno da amostra e dos
padres.
Clculo
Calcule a porcentagem de rea de cada componente, em relao soma das reas
de todos os picos. O resultado ser expresso como porcentagem de steres metlicos
(mtodo de normalizao de rea ou normalizao de rea corrigida 343/IV). Verifique
se h gorduras estranhas no chocolate comparando o perfil cromatogrfico de cidos
graxos com o da manteiga de cacau.
1995 (A.O.C.S. Official Method Ce 1d-91: Determination of fatty acids in edible oils
and fats by capillary GLC).
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official methods and recommended
practices of the American Oil Chemists Society. 4thed. Champaign, USA, A.O.C.S.,
1997 (A.O.C.S. Official Method Ce 1f-96 Determination of cis and trans fatty acids in
hydrogenated and refined oils and fats by capillary GLC).
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v1:
Mtodos Qumicos e Fsicos para Anlise de Alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985.
p. 177-178.
Colaboradores
Deise Aparecida Pinatti Marsiglia, Maria Lima Garbelotti, Cludio de Flora e Sabria Aued
Pimentel
IAL - 487
CAPTULO
XII
CAF, CH E
DERIVADOS
IAL - 489
490 - IAL
XII
Captulo XII - Caf, Ch e Derivados
CAF, CH E DERIVADOS
IAL - 491
Material
Balana analtica, chapa de aquecimento com refrigerador de refluxo, estufa, dessecador com slica gel, esptula, pina, bqueres de 50 e 100 mL, frasco
Erlenmeyer de 500 mL com junta esmerilhada, frasco Erlenmeyer de 500 mL, balo volumtrico de 500 mL, funil de vidro de 10 cm e pipeta volumtrica de 50 mL.
Procedimento Pese 2 g da amostra em bquer de 50 mL. Transfira para um frasco
Erlenmeyer de 500 mL com junta esmerilhada com auxilio de 200 mL de gua quente.
Adapte o refrigerador de refluxo ao frasco e deixe em ebulio por uma hora. Transfira a
soluo ainda quente para um balo volumtrico de 500 mL. Lave o frasco com 100 mL de
gua quente e transfira esta gua para o balo. Resfrie o balo e complete o volume com gua.
Filtre para um frasco Erlenmeyer de 500 mL. Pipete 50 mL do filtrado e transfira para um
bquer de 100 mL, previamente tarado em estufa a 105C. Evapore em banho-maria at a
secagem. Aquea em estufa a 105C por uma hora, resfrie em dessecador e pese.
Clculo
N = n de g do extrato aquoso
P= n de g da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOFLO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v 1: Mtodos Qumicos e Fsicos para Anlise de Alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed. 1985. p. 190.
266/IV Caf Determinao de cafena pelo mtodo espectrofotomtrico
A cafena pode ser determinada por vrios mtodos, sendo comum a todos eles a
necessidade de uma extrao e purificao inicial. A partir desta extrao, a dosagem poder
ser feita por espectrofotometria na regio ultravioleta ou por cromatografia lquida de alta
resoluo. Os mtodos espectrofotomtricos baseados na absoro caracterstica da cafena a
274 nm so os mais recomendveis para a rotina. A etapa precedente quantificao realizada por extrao cida, ou seja, pela carbonizao seletiva da matria orgnica da amostra
com cido sulfrico para a liberao da cafena, seguida de sua extrao com clorofrmio. A
cafena extrada quantificada por espectrofotometria na regio ultravioleta a 274 nm.
492 - IAL
Material
Balana analtica, estufa, banho-maria, rotavapor, espectrofotmetro UV/VIS, dessecador
com slica gel, esptula, pina, bquer de 100 mL, pipeta graduada de 5 mL, funil de separao de 500 mL, funis de vidro de 7 e 10 cm, balo de fundo chato de 300 mL com junta
esmerilhada, bales volumtricos de 100 e 1000 mL e bureta de 10 mL.
Reagentes
cido sulfrico
Clorofrmio
Cafena anidra
Procedimento - Pese 1 g de amostra em bquer de 100 mL. Adicione cuidadosamente, evitando a formao de grumos, com auxilio de um basto de vidro, 4 mL de cido sulfrico.
Homogeneze. Aquea em banho-maria por 15 minutos, agitando ocasionalmente. Adicione, com cuidado, 50 mL de gua quente. Aquea em banho-maria por mais 15 minutos.
Filtre a quente para um funil de separao de 500 mL atravs de papel de filtro umedecido
com gua. Lave o bquer e o filtro com 3 pores de 10 mL de gua quente acidulada com
o cido sulfrico. Receba o filtrado e as guas de lavagem no funil de separao. Deixe o
filtrado esfriar. Adicione 30 mL de clorofrmio e agite por dois minutos. Espere separar as
camadas. Decante a camada do clorofrmio (inferior) atravs de papel de filtro umedecido
com clorofrmio, para um balo de fundo chato de 300 mL. Repita a extrao com mais trs
pores de 30 mL de clorofrmio. Evapore o extrato de clorofrmio obtido, em rotavapor.
Dissolva o resduo com gua quente, filtrando para um balo volumtrico de 1000 mL.
Deixe esfriar. Complete o volume com gua e homogeneze. Mea a absorbncia a 274 nm,
em espectrofotmetro. Determine a quantidade de cafena correspondente, usando curvapadro previamente estabelecida.
Nota: no caso de caf torrado e modo descafeinado, a diluio final ser para um balo volumtrico de 200 mL.
Curva-padro Seque a cafena em estufa a 105C durante uma hora. Resfrie em dessecador. Prepare uma soluo-estoque de cafena com 10 mg/100 mL de gua. Com auxlio de
bureta de 10 mL, transfira alquotas de 2, 3, 5, 7, 8, 10 e 15 mL para bales volumtricos
de 100 mL. Complete o volume com gua e homogeneze. Mea a absorbncia a 274 nm,
usando um branco de gua para calibrao do espectrofotmetro. Com os valores obtidos,
construa a curva-padro por regresso linear dos valores de absorbncia obtidos (eixo y) e das
concentraes de cafena (eixo x) expressa em mg/100 mL. Utilize nos clculos os valores dos
coeficientes linear e angular da reta (absortividade considerando o caminho ptico da cubeta
de 1 cm).
IAL - 493
Clculo
A = absorbncia da amostra
b = coeficiente linear da reta obtida na curva-padro
a = absortividade (coeficiente angular da reta obtida na curva-padro)
v = volume em mL da diluio do resduo de cafena
P = massa da amostra em g
Referncias Bibliogrficas
CORTES, F.F. Nota sobre um novo processo de doseamento de cafena no caf. Rev.
Soc. Bras. Quim., v. 4, p. 105, 1933 (Nota prvia).
INSTITUTO ADOFLO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.
1:Mtodos Qumicos e Fsicos para Anlise de Alimentos. So Paulo: IMESP. 3.ed 1985. p. 190192.
Infuso do caf
A infuso do caf consiste na bebida preparada a partir do p de caf torrado e modo
em gua fervente seguida de filtrao, cujas propores seguem geralmente as instrues de
modo de preparo descritas na embalagem.
A anlise da infuso do caf filtrado inclui as determinaes de resduo seco, cinzas,
lipdios, protdios, descritos neste captulo, carboidratos por diferena e eventualmente minerais (cap. XXIII).
Nota: na infuso, o teor de nitrognio procedente da cafena no significativo, podendo no
ser descontado do teor de nitrognio total, para fins do clculo do teor de protena.
267/IV Infuso do caf Determinao do resduo seco
Procedimento Prepare a infuso aquosa do caf conforme modo de preparo descrito na
embalagem. Transfira, com auxlio de uma pipeta volumtrica, 20 mL da infuso para uma
cpsula de porcelana, previamente tarada em estufa e proceda como em 015/IV.
494 - IAL
A anlise do caf solvel inclui as determinaes de umidade por Karl Fischer (014/
IV) ou como avaliao preliminar, por aquecimento direto a vcuo a 70C (013/IV), cinzas
(018/IV), pH, cafena e glicdios redutores e no redutores em glicose, descritos neste captulo.
Caso seja necessrio para fins de informao nutricional, podem ser realizadas as determinaes de resduo seco, cinzas, lipdios, protdios, carboidratos por diferena e eventualmente minerais (cap. XXIII), no caf solvel preparado conforme indicaes da embalagem.
271/IV Caf solvel Determinao do pH
Procedimento Prepare uma soluo aquosa a 2% m/v da amostra de caf solvel e proceda
como em 017/IV.
272/IV Caf solvel Determinao de cafena
Procedimento Pese 0,5 g da amostra e proceda como em 266/IV para cafena em caf
torrado e modo. No caso do caf solvel descafeinado, faa a diluio do resduo do extrato
clorofrmico para um balo de 200 mL.
273/IV Caf solvel Determinao de glicdios redutores e no redutores em glicose
Os mtodos de determinao de glicdios esto baseados nas propriedades fsicas das
suas solues ou no poder redutor dos glicdios mais simples. O mtodo gravimtrico resume-se em pesar uma quantidade de xido de cobre I precipitado de uma soluo de cobre II
por um volume conhecido da soluo de glicdios redutores. O peso do precipitado (Cu2O)
convertido em glicose de acordo com a Tabela 1.
Material
Balana analtica, chapa de aquecimento com refrigerador de refluxo, chapa eltrica, estufa, bomba de vcuo, dessecador com slica gel, esptula, pina, bquer
de 100 mL, frasco Erlenmeyer de 500 mL com junta esmerilhada, frasco Erlenmeyer de 300 mL, balo volumtrico de 250 mL, balo de fundo chato de 250
mL, funil de vidro de 10 cm, bureta de 25 mL, pipeta graduada de 5 mL, pipeta volumtrica de 25 mL, proveta de 100 mL, cadinho de vidro com placa porosa
n 4 e kitassato.
496 - IAL
Reagentes
cido clordrico
Hidrxido de sdio a 40% m/v
Ferrocianeto de potssio a 6% m/v
Acetato de zinco a 12% m/v
Solues de Fehling A e B (Apndice I)
Procedimento - Pese 2 g de amostra em bquer de 100 mL. Transfira para um frasco
Erlenmeyer de 500 mL com junta esmerilhada com auxlio de 100 mL de gua. Adicione
5 mL de cido clordrico. Coloque em chapa de aquecimento e adapte o refrigerador de
refluxo ao frasco e deixe em ebulio por trs horas. Espere esfriar a soluo e adicione
hidrxido de sdio a 40%, elevando o pH prximo de 6,5, acompanhando com auxlio de
papel indicador. Transfira quantativamente para balo volumtrico de 250 mL com auxilio
de gua. Adicione 5 mL de ferrocianeto de potssio a 6% e 5 mL de acetato de zinco a
12%. Complete o volume, agite, deixe 15 minutos em repouso e filtre. Verifique o pH e, se
necessrio, adicione mais algumas gotas de hidrxido de sdio a 40%, at que a soluo se
torne alcalina, com pH prximo de 9 e filtre novamente a soluo. Em um balo de fundo
chato de 250 mL, adicione 25 mL da soluo de Fehling A e 25 mL da soluo de Fehling B
e 30 mL de gua. Leve para aquecer na chapa eltrica at entrar em ebulio. Adicione 20 mL
do filtrado por intermdio de uma bureta. Deixe em ebulio por dois minutos, para formar
o precipitado de xido de cobre I. A soluo deve permanecer azul demonstrando que os
reagentes esto em excesso em relao quantidade de glicose presente na amostra. Filtre a
soluo quente atravs de cadinho de placa porosa n 4, tarado em estufa a 105C acoplado
ao kitassato, com auxlio de bomba de vcuo. Lave o balo com gua quente, at completa
remoo do precipitado. Caso o resduo de xido de cobre I (Cu2O) fique retido nas paredes
do balo, coloque algumas prolas de vidro ou cacos de porcelana e deixe ferver com um
pouco de gua, agitando vigorosamente em movimento circular. Filtre para o cadinho,
tomando cuidado para no verter as prolas de vidro ou cacos de porcelana no cadinho.
Seque o cadinho em estufa a 105C durante uma hora, esfrie em dessecador e pese.
Clculo
Verifique, na Tabela 1 de converso, a quantidade de glicose em mg correspondente massa
obtida de xido de cobre I em mg. Caso no encontre o valor exato, faa uma regra de trs.
IAL - 497
11.3
4.6
12.4
5.1
13.5
5.6
14.6
6.0
15.8
6.5
16.9
7.0
18.0
7.5
19.1
8.0
20.3
8.5
21.4
8.9
22.5
9.4
23.6
9.9
Cu2O
Glicose
24.8
10.4
25.9
10.9
27.0
11.4
28.1
11.9
29.3
12.3
30.4
12.8
31.5
13.3
32.6
13.8
33.8
14.3
34.9
14.8
36.0
15.3
37.2
15.7
Cu2O
Glicose
38.3
16.2
39.4
16.7
40.5
17.2
41.7
17.7
42.8
18.2
43.9
18.7
45.0
19.2
46.2
19.7
47.3
20.1
48.4
20.6
49.5
21.1
50.7
21.6
Cu2O
Glicose
51.8
22.1
52.9
26.6
54.0
23.1
55.2
23.6
56.3
24.1
57.4
24.6
58.5
25.1
59.7
25.6
60.8
26.1
61.9
26.5
63.0
27.0
64.2
27.5
Cu2O
Glicose
65.3
28.0
66.4
28.5
67.6
29.0
68.7
29.5
69.8
30.0
70.9
30.5
72.1
31.0
73.2
31.5
74.3
32.0
75.4
32.5
76.6
33.0
77.7
33.5
Cu2O
Glicose
78.8
34.0
79.9
34.5
81.1
35.0
82.2
35.5
83.3
36.0
84.4
36.5
85.6
37.0
86.7
37.5
87.8
38.0
88.9
38.5
90.1
39.0
91.2
39.5
Cu2O
Glicose
92.3
40.0
93.4
40.5
94.6
41.0
95.7
41.5
96.8
42.0
97.9
42.5
99.1
43.0
100.2
43.5
101.3
44.0
102.5
44.5
103.6
45.0
104.7
45.5
Cu2O
Glicose
105.8
46.0
107.0
46.5
108.1
47.0
109.2
47.5
110.3
48.0
111.5
48.5
112.6
49.0
113.7
49.5
114.8
50.0
116.0
50.6
117.1
51.1
118.2
51.6
Cu2O
Glicose
119.3
52.1
120.5
52.6
121.6
53.1
122.7
53.6
123.8
54.1
125.0
54.6
126.1
55.1
127.2
55.6
128.3
56.1
129.5
56.7
130.6
57.2
131.7
57.7
Cu2O
Glicose
132.8
58.2
134.0
58.7
135.1
59.2
136.2
59.7
137.4
60.2
138.5
60.7
139.6
61.3
140.7
61.8
141.9
62.3
143.0
62.8
144.1
63.3
145.2
63.8
Cu2O
Glicose
146.4
64.3
147.5
64.9
148.6
65.4
149.7
65.9
150.9
66.4
152.0
66.9
153.1
67.4
154.2
68.0
155.4
68.5
156.5
69.0
157.6
69.5
158.7
70.0
Cu2O
Glicose
159.9
70.5
161.0
71.1
162.1
71.6
163.2
72.1
164.4
72.6
165.5
73.1
166.6
73.7
167.8
74.2
168.9
74.7
170.0
75.2
171.1
75.7
172.3
76.3
Cu2O
Glicose
173.4
76.8
174.5
77.3
175.6
77.8
176.8
78.3
177.9
78.9
179.0
79.4
180.1
79.9
181.3
80.4
182.4
81.0
183.5
81.5
184.6
82.0
185.8
82.5
Cu2O
Glicose
186.9
83.1
188.0
83.6
189.1
84.1
190.3
84.6
191.4
85.2
192.5
85.7
193.6
86.2
194.8
86.7
195.9
87.3
197.0
87.8
198.1
88.3
199.3
88.9
Cu2O
Glicose
200.4
89.4
201.5
89.9
202.7
90.4
203.8
91.0
204.9
91.5
206.0
92.0
207.2
92.6
208.3
93.1
209.4
93.6
210.5
94.2
211.7
94.7
212.8
95.2
Cu2O
Glicose
213.9
95.7
215.0
96.3
216.2
96.8
217.3
97.3
218.4
97.9
219.5
98.4
220.7
98.9
221.8
99.5
222.9
100.0
224.0
100.5
225.2
101.1
226.3
101.6
498 - IAL
Cu2O
Glicose
227.4
102.2
228.5
102.7
229.7
103.2
230.8
103.8
231.9
104.3
233.0
1104.8
234.2
105.4
235.3
105.9
236.4
106.5
237.6
107.0
238.7
107.5
239.8
108.1
Cu2O
Glicose
240.9
108.6
242.1
109.2
243.1
109.7
244.3
110.2
245.4
110.8
246.6
111.3
247.7
111.9
248.8
112.4
249.9
112.9
251.1
113.5
252.2
114.0
253.3
114.6
Cu2O
Glicose
254.4
115.1
255.6
115.7
256.7
116.2
257.8
116.7
258.9
117.3
260.1
117.8
261.2
118.4
262.3
118.9
263.4
119.5
264.6
120.0
265.7
120.6
266.8
121.1
Cu2O
Glicose
268.0
121.7
269.1
122.2
270.2
122.7
271.3
123.3
272.5
123.8
273.6
124.4
274.7
124.9
275.8
125.5
277.0
126.0
278.1
126.6
279.2
127.1
280.3
127.7
Cu2O
Glicose
281.5
128.2
282.6
128.8
283.7
129.3
284.8
129.9
286.0
130.4
287.1
131.0
288.2
131.6
289.3
132.1
290.5
132.7
291.6
133.2
292.7
133.8
293.8
134.3
Cu2O
Glicose
295.0
134.9
296.1
135.4
297.2
136.0
298.3
136.5
299.5
137.1
300.6
137.7
301.7
138.2
302.9
138.8
304.0
139.3
305.1
139.9
306.2
140.4
307.4
141.0
Cu2O
Glicose
308.5
141.6
309.6
142.1
310.7
142.7
311.9
143.2
313.0
143.8
314.1
144.4
315.2
144.9
316.4
145.5
317.5
146.0
318.0
6146.6
319.7
147.2
320.9
147.7
Cu2O
Glicose
322.0
148.3
323.1
148.8
324.2
149.4
325.4
150.0
326.5
150.5
327.6
151.1
328.7
151.7
329.9
152.2
331.0
152.8
332.1
153.4
333.3
153.9
334.4
154.5
Cu2O
Glicose
335.5
155.1
336.6
155.6
337.8
156.2
338.9
156.8
340.0
157.3
341.1
157.9
342.3
158.5
343.4
159.0
344.5
159.6
345.6
160.2
346.8
160.7
347.9
161.3
Cu2O
Glicose
349.0
161.9
350.1
162.5
351.3
163.0
352.4
163.6
353.5
164.2
354.6
164.7
355.8
165.3
356.9
165.9
358.0
0166.5
359.1
167.0
360.3
167.6
361.4
168.2
Cu2O
Glicose
362.5
168.8
363.6
169.3
364.8
169.9
365.9
170.5
367.0
171.1
368.2
171.6
369.3
172.2
370.4
172.8
371.5
173.4
372.7
173.9
373.8
174.5
374.9
175.1
Cu2O
Glicose
376.0
175.7
377.2
176.3
378.3
176.8
379.4
177.4
380.5
178.0
381.7
178.6
382.8
179.2
383.9
179.7
385.0
180.3
386.2
180.9
387.3
181.5
388.4
182.1
Cu2O
Glicose
389.5
182.7
390.7
183.2
391.8
183.8
392.9
184.4
394.0
185.0
395.2
185.6
396.3
186.2
397.4
186.8
398.5
187.3
399.7
187.9
400.8
188.5
401.9
189.1
Cu2O
Glicose
403.1
189.7
404.2
190.3
405.3
190.9
406.4
191.5
407.6
192.0
408.7
192.6
409.8
193.2
410.9
193.8
412.0
1194.4
413.2
195.0
414.3
195.6
415.4
196.2
Cu2O
Glicose
416.6
196.8
417.7
197.4
418.8
198.0
419.9
198.5
421.1
199.1
422.2
199.7
423.3
200.3
424.4
200.9
425.6
201.5
426.7
202.1
427.8
202.7
428.9
203.3
Cu2O
Glicose
430.1
203.9
431.2
204.5
432.3
205.1
433.5
205.7
434.6
206.3
435.7
206.9
436.8
207.5
438.0
208.1
439.1
208.7
440.0
2209.3
441.0
3209.9
442.5
210.5
Cu2O
Glicose
443.6
211.1
444.7
211.7
445.8
212.3
447.0
212.9
448.1
213.5
449.2
214.1
450.3
214.7
451.5
215.3
452.6
215.9
453.7
216.5
454.8
217.1
456.0
217.8
Cu2O
Glicose
457.1
218.4
458.2
219.0
459.3
219.6
460.5
220.2
461.6
220.8
462.7
221.4
463.0
8222.0
465.0
222.6
466.1
223.3
467.2
223.9
468.4
224.5
469.5
225.1
Cu2O
Glicose
470.6
225.7
471.7
226.3
472.9
227.0
474.0
227.6
475.1
228.2
476.2
228.8
477.4
229.5
478.5
230.1
479.6
230.7
480.7
231.4
481.9
232.0
483.0
232.7
Cu2O
Glicose
484.1
233.3
485.2
234.0
486.4
234.7
487.5
235.3
488.6
236.1
489.7
236.9
Fonte: A.O.A.C. Official Methods of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists 1995 Appendix C, p. 57-65
IAL - 499
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of
analysis of the Association of Official Analytical Chemists. (method 44.115) 16 th
ed. Arlington: A.O.A.C., 1995. chapter 44. p. 8.
Caf solvel preparado
O caf solvel preparado consiste na bebida preparada a partir do caf solvel
(em p ou granulado) dissolvido em gua, cujas propores seguem geralmente as instrues de modo de preparo descritas na embalagem. A anlise do caf solvel preparado inclui as determinaes de resduo seco, cinzas, lipdios, protdios, carboidratos
por diferena e eventualmente minerais (cap. XXIII). A determinao de resduo seco
deve ser realizada na bebida preparada conforme indicaes na embalagem e as demais
determinaes no produto tal qual se apresenta (p ou granulado), sendo que os resultados devem ser convertidos para a bebida preparada, considerando a proporo entre
gua e caf solvel indicados para a poro, na rotulagem.
274/IV Caf solvel preparado Determinao do resduo seco
Procedimento Prepare a soluo aquosa de caf solvel, cujas propores seguem as
instrues de modo de preparo descrito na embalagem. Transfira, com auxlio de uma
pipeta volumtrica, 20 mL da soluo para uma cpsula de porcelana, previamente
tarada e proceda como em 015/IV.
Ch
Ch o produto constitudo de partes de vegetais, inteiras, fragmentadas ou
modas, obtido por processo tecnolgico apropriado cada espcie, utilizado exclusivamente na preparao de bebida alimentcia por infuso ou decoco em gua potvel,
no podendo ter finalidade farmacoteraputica.
A anlise do ch inclui entre as principais determinaes, umidade por aquecimento direto a 105C (012/IV), cinzas (018/IV), cinzas insolveis em cido clordrico
(024/IV), extrato aquoso (265/IV), cafena (266/IV) e leos essenciais (503/IV).
500 - IAL
Caso seja necessrio para fins de informao nutricional, podem ser realizadas na
infuso do ch as determinaes de resduo seco, cinzas, lipdios, protdios e descritos
neste captulo, carboidratos por diferena e, eventualmete, minerais (cap. XXIII).
Infuso do ch
A infuso do ch consiste na bebida preparada a partir da decoco do ch em
gua fervente, seguida de filtrao, conforme as instrues de modo de preparo descritas
na embalagem.
As determinaes realizadas na infuso do ch, seguem os mesmos procedimentos descritos para infuso de caf.
Mate
Erva mate ou simplesmente mate o produto constitudo pelas folhas e ramos
das variedades de Ilex paraguariensis, na forma inteira ou moda, obtido por tecnologia
apropriada. Quando as folhas so secas e tostadas, constituem o mate queimado ou
simplesmente mate e quando no so denominadas mate verde.
As determinaes usuais entre outras incluem: umidade por aquecimento direto a 105C (012/IV), cinzas (018/IV), cinzas insolveis em cido clordrico (024/
IV),extrato aquoso (265/IV) e cafena (266/IV). Caso seja necessrio para fins de informao nutricional, podem ser realizadas na infuso do mate as determinaes de
resduo seco, cinzas, lipdios, protdios, carboidratos por diferena e eventualmente
minerais (cap. XXIII).
275/IV Mate Determinao de cafena
Procedimento Pese 2 g da amostra e proceda como em determinao de cafena em
caf torrado e modo (266/IV).
Infuso do mate
A infuso do mate consiste na bebida preparada a partir do mate em gua fervente seguida de filtrao, conforme as instrues de modo de preparo descritas na
embalagem. As determinaes realizadas na infuso do mate seguem os mesmos procedimentos descritos para infuso do caf.
Mate solvel
IAL - 501
CAPTULO
XIII
CARNES E
PRODUTOS
CRNEOS
IAL - 503
504 - IAL
XIII
Captulo XIII - Carnes e Produtos Crneos
Carnes
como sulfitos, utilizados para mascarar processos de alterao que a carne sofre durante
a estocagem (deteriorao) e de contaminantes inorgnicos como arsnio, estanho e
chumbo (cap. XXIII).
As carnes e seus derivados esto sujeitos a alteraes por reaes qumicas, fsicas e
microbiolgicas. As alteraes fsicas e qumicas decorrem principalmente da modificao e/ou degradao de protenas e lipdios, que provocada tanto pela ao de agentes
naturais, por exemplo, o oxignio, como por enzimas hidrolticas endgenas naturalmente presentes na carne e ainda por outras substncias (enzimas, peptdios, aminas etc.)
produzidas por microrganismos. A decomposio dos aminocidos sulfurados da carne,
com desprendimento de compostos de enxofre, poder ser avaliada qualitativamente pela
reao de ber para gs sulfdrico (004/IV). A reao de ber para amnia (005/IV)
poder ser utilizada para evidenciar o incio das alteraes deteriorativas das carnes. Alm
da ao enzimtica, a deteriorao tambm pode resultar de reaes oxidativas, como,
por exemplo, a oxidao lipdica, que uma alterao dependente da disponibilidade de
oxignio, da temperatura de armazenamento e da composio do msculo, evidenciada
qualitativamente pela reao de Kreis (279/IV). As condies higinico-sanitrias dos
estabelecimentos processadores, manipuladores, distribuidores e comerciais tambm so
fatores de destaque na determinao da aceitabilidade das carnes, pois estas oferecem condies favorveis para o crescimento de bactrias, sendo importantes tanto as deteriorativas como as patognicas, que podem chegar ao produto pela inadequada manipulao.
Portanto, todos esses aspectos podero comprometer as caractersticas sensoriais, assim
como a qualidade nutricional e microbiolgica das carnes.
Preparo da Amostra
Retire pores de vrias regies da pea, sem grandes vasos, ossos, peles, tecidos
adiposos e aponevroses, tendo, entretanto, o cuidado de no descaracterizar a amostragem. Homogeneze passando o material trs vezes em moedor de carne, utilizando disco
de 3 mm de dimetro. Misture bem aps cada moagem. Alternativamente, utilize um
processador de alimentos para o preparo da amostra. Particular ateno deve ser dada a
certos tipos e/ou cortes de carne, para assegurar distribuio uniforme de gordura e tecido
conjuntivo na moagem, sempre objetivando que a amostragem represente realmente a
pea inicial ou amostra recebida. A cada intervalo, reincorpore com auxlio de esptula a
gordura aderida superfcie do equipamento e o tecido conjuntivo preso nas facas. Utilize
amostra representativa com peso de 200 g. Coloque a amostra em frasco hermeticamente fechado. De preferncia, comece imediatamente todas as determinaes. Se houver
alguma interrupo, mantenha a amostra sob refrigerao para inibir a decomposio.
Guarde a 5C por at 24 h ou congele a amostra a -18C. No momento da pesagem, ho506 - IAL
IAL - 507
IAL - 509
A prova para rano na gordura pela reao de Kreis vlida para produtos crneos e
partes gordurosas de carnes. Rancidez o nome que se d s alteraes no odor e no sabor
dos leos e gorduras. A floroglucina reage em meio cido com os produtos de oxidao dos
triglicerdios, resultando em composto de condensao de colorao rsea ou vermelha, cuja
intensidade proporcional oxidao.
Material
Rotavapor, balana semi-analtica, papel de filtro, frasco Erlenmeyer de 500 mL com boca
esmerilhada e tampa, balo de fundo chato de 300 mL com boca esmerilhada, proveta de
150 mL, proveta de 50 mL com boca esmerilhada e tampa, pipeta de 5 mL, funil e papel de
filtro qualitativo.
Reagentes
ter
cido clordrico
Soluo de floroglucina em ter a 0,1% m/v
Procedimento Separe cerca de 30 g das partes gordurosas da carne ou 100 g do produto crneo previamente triturado. Transfira para um frasco Erlenmeyer de 500 mL.
Adicione de 100 a 150 mL de ter e deixe em contato, ao abrigo da luz e calor, por uma
noite. Filtre a mistura atravs de papel de filtro para um balo de fundo chato de 300 mL.
Evapore o filtrado em rotavapor sob vcuo temperatura mxima de 40oC. Transfira, com
auxlio de uma pipeta, 5 mL da gordura fundida (resduo do balo) para uma proveta
de 50 mL. Adicione 5 mL de cido clordrico, tampe e agite por 30 segundos. Adicione
5 mL de soluo de floroglucina, tampe e agite novamente por 30 segundos. Deixe em
repouso por 10 minutos. Na presena de rano, a camada inferior apresentar uma colorao rsea ou vermelha.
Nota: se a intensidade da colorao for fraca, compare a camada inferior com uma
soluo de permanganato de potssio a 0,0012% (3,8 mL de uma soluo 0,002 M
diluda para 100 mL). Se a intensidade for a mesma, ou inferior, pode-se deixar de
levar em considerao o resultado, contanto que as caractersticas sensoriais do produto
sejam satisfatrias.
IAL - 511
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 260.
280/IV Prova para formaldedo
O formaldedo considerado uma substncia conservante de material biolgico. Sua
adio proibida em alimentos. A floroglucina reage com o formaldedo em meio alcalino
produzindo o derivado hidroximetilado, de colorao salmo fugaz.
Material
Balana semi-analtica, aquecedor eltrico, condensador de Liebig, balo de Kjeldahl de
600 mL, proveta de 100 mL, frasco Erlenmeyer de 200 mL, tubos de ensaio, pipetas graduadas de 1, 2 e 5 mL.
Reagentes
Soluo de cido fosfrico a 20% v/v
Soluo de floroglucina (C6H6O3) a 1% m/v
Soluo de hidrxido de sdio a 10% m/v
Procedimento Pese cerca de 10 g da amostra, previamente triturada e homogeneizada em
bquer. Transfira para balo de Kjeldahl com auxlio de 80 mL de soluo de cido fosfrico
a 20%. Ligue o balo ao conjunto de destilao de Liebig. Aquea at ebulio e destile
cerca de 40 mL em frasco Erlenmeyer de 200 mL. Coloque em tubo de ensaio 5 mL do
destilado, adicione 1 mL da soluo de floroglucina a 1% e 2 mL da soluo de hidrxido
de sdio a 10%. Na presena de formaldedo, aparecer a colorao salmo fugaz e na sua
ausncia, a cor violeta. Observe a cor imediatamente aps a adio dos reagentes.
Nota: esta metodologia no se aplica a produtos com caractersticas de rano e produtos
defumados.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 271272.
512 - IAL
Reagentes
lcool
ter de petrleo
cido clordrico
Soluo de hidrxido de sdio 40% m/v
cido sulfrico (D = 1,84 g/mL)
Reativo A Dissolva 25 g de carbonato de sdio, 25 g de tartarato duplo de sdio e
potssio, 20 g de bicarbonato de sdio e 200 g de sulfato de sdio anidro em 800 mL de
gua. Transfira para balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua.
Reativo B Dissolva, em gua, 15 g de sulfato de cobre penta-hidratado. Transfira para
um balo volumtrico de 100 mL. Adicione duas gotas de cido sulfrico (D = 1,84 g/mL)
e complete o volume com gua.
Reativo de Somogyi ou reativo cprico Adicione 1 mL do reativo B a 25 mL do reativo
A em proveta no momento da anlise.
Reativo de Nelson Dissolva 25 g de molibdato de amnio em 450 mL de gua. Adicione 21 mL de cido sulfrico e agite. Adicione 2 g de arseniato de sdio hepta-hidratado,
dissolvido em 25 mL de gua. Deixe em banho a 37oC, por um perodo de 24 a 48 h.
Soluo de acetato de zinco di-hidratado a 12% m/v Pese 120 g de Zn(CH3COO)2.2H2O,
dissolva em 30 mL de cido actico glacial e 600 mL de gua. Transfira para um balo
volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua.
Soluo de ferrocianeto de potssio tri-hidratado a 6% m/v Pese 60 g de K4Fe(CN)6.3H2O
e dissolva em 800 mL de gua. Transfira para balo volumtrico de 1000 mL e complete
o volume com gua.
Soluo-padro de glicose a 250 g/mL Seque uma quantidade arbitrria de glicose
anidra em estufa a 80C, por 2h. Deixe esfriar em dessecador. Pese 250 mg, transfira
quantitativamente para balo de 1000 mL com gua, complete o volume e homogeneze.
A concentrao dessa soluo-estoque 250 mg/L ou 250 g/mL.
Procedimento Pese 1 g da amostra homogeneizada, em tubo de centrfuga. Adicione
10 mL de soluo lcool-ter de petrleo (1:3), agite com a ajuda de uma fina haste
de ferro e centrifugue a 2500 rpm, por 5 minutos. Despreze o sobrenadante e repita o
514 - IAL
procedimento anterior. Adicione 10 mL de lcool a 80% v/v a 80oC ao resduo, agite com
fina haste de ferro e centrifugue a 2500 rpm por 5 minutos. Despreze o sobrenadante e
repita a extrao alcolica. Seque o resduo em estufa a 70oC, por 20 minutos. Transfira
o resduo obtido no tubo de centrfuga, com auxlio de 100 mL de gua, para um frasco
Erlenmeyer de 500 mL com boca esmerilhada. Adicione 5 mL de cido clordrico.
Hidrolise em refluxo por 90 minutos. Esfrie e neutralize o hidrolisado com soluo de
hidrxido de sdio a 40% at pH 7 (volume gasto aproximado 6 mL), verificando
com papel indicador de pH. Transfira para um balo volumtrico de 250 mL e clarifique
adicionando 5 mL de soluo de acetato de zinco e 5 mL de soluo de ferrocianeto de
potssio (reagentes Carrez). Complete o volume, tampe e agite com vigor. Deixe em
repouso por 15 minutos, agitando vigorosamente varias vezes nesse perodo. Filtre para
um frasco Erlenmeyer e reprecipite com hidrxido de sdio a 40% at pH 11 (gasto
aproximado 0, 5 mL). Filtre, transfira 1 mL do filtrado para tubo de Folin-Wu e adicione
1 mL de reativo de Somogyi ou reativo cprico, deixe imerso em banho-maria fervente
por 20 minutos. (Verifique se aps 20 minutos de fervura a tonalidade azulada permanece
nos tubos; caso contrrio, dilua a amostra e proceda novamente reao com reativo
cprico.) Esfrie, adicione 1 mL de reativo de Nelson e complete o volume com gua at
a primeira marca do tubo de Folin-Wu (12,5 mL) e homogeneze. Proceda s leituras de
absorbncia das solues contra o branco de reagentes, no comprimento de onda
500 nm.
Nota: caso as solues estejam concentradas, isto , a absorbncia obtida ultrapasse o
maior valor da curva-padro, dilua a amostra e repita a reao colorimtrica com os reativos de Somogyi-Nelson, ou repita a reao completando o volume para a segunda
marca do tubo de Folin-Wu (25 mL). Neste caso, o resultado final (% de amido) dever
ser duplicado.
Curva-padro Transfira alquotas de 0 (branco); 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 e 1 mL da soluopadro estoque de glicose para tubos de Folin-Wu. Adicione 1 mL de reativo de Somogyi
ou reativo cprico, deixe imerso em banho-maria fervente por 20 minutos. Esfrie,
adicione 1 mL de reativo de Nelson, complete o volume com gua at a primeira marca
do tubo de Folin-Wu (12,5 mL) e homogeneze. Proceda s leituras de absorbncia das
solues contra o branco, no comprimento de onda 500 nm. Proceda regresso linear
dos valores de absorbncia obtidos (eixo y) e das concentraes de glicose de 4, 8, 12, 16
e 20 g/mL (eixo x). Utilize nos clculos os valores dos coeficientes linear e angular da reta
(absortividade, considerando o caminho ptico da cubeta de 1 cm).
Clculos
IAL - 515
516 - IAL
Reagentes
cido clordrico 6 M Misture volumes iguais de HCl e gua.
Soluo-padro estoque de hidroxiprolina a 600 g/mL Dissolva 60 mg de hidroxiprolina
em gua. Transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua.
A soluo estvel cerca de 2 meses a 4oC. Opo: dissolva 120 mg em balo de 200 mL
e complete o volume com gua.
Soluo-padro intermediria de hidroxiprolina a 6 g/mL Pipete 5 mL da soluoestoque em balo volumtrico de 500 mL. Complete o volume com gua. Prepare a
soluo no dia de seu uso.
Soluo-padro de trabalho de hidroxiprolina Pipete 5, 10, 20 e 30 mL da soluo intermediria em balo volumtrico de 50 mL. Complete o volume com gua. Essas soluespadro de trabalho revelam concentraes de hidroxiprolina de 0,6; 1,2; 2,4 e 3,6 g/mL,
respectivamente. Prepare as solues no dia de seu uso.
Soluo-tampo (pH 6) Dissolva 30 g de cido ctrico mono-hidratado (C6H8O7.H2O),
15 g de hidrxido de sdio e 90 g de acetato de sdio tri-hidratado (CH3COONa3H2O)
em cerca de 500 mL de gua. Transfira a soluo para balo volumtrico de 1000 mL.
Adicione 290 mL de 1-propanol. Determine o pH e ajuste, se necessrio, com cido ou
base. Complete o volume. A soluo estvel por cerca de 2 meses a 4oC e em frasco
escuro.
Soluo oxidante Dissolva 1,41 g do reagente cloramina T em 100 mL da soluo tampo pH 6. A soluo estvel 1 semana a 4oC, em frasco escuro.
Reagente de cor Dissolva 10 g de 4-dimetilaminobenzaldedo em 35 mL de cido
perclrico a 60% m/m. Adicione vagarosamente, com agitao, 65 mL de 2-propanol.
Prepare a soluo no dia de seu uso.
Procedimento Pese, com preciso, cerca de 4 g da amostra em duplicata em frascos
Erlenmeyer de 250 ou 500 mL. A amostra no deve aderir s paredes laterais. Adicione
30 mL de HCl 6 M e algumas prolas de vidro (ou cacos de porcelana) a cada frasco.
Aquea fervura branda por 8 horas sob refluxo. Transfira quantitativamente o hidrolisado para balo volumtrico de 500 mL com gua. Complete o volume e agite. Filtre a
soluo atravs de papel de filtro, em frasco Erlenmeyer de 500 mL. O filtrado estvel ao
menos por 2 semanas a 4oC. Dilua o filtrado com gua em balo volumtrico, de modo
IAL - 517
que a concentrao de hidroxiprolina da diluio final esteja na faixa de 0,6 a 3,6 g/mL.
A diluio de 5 mL do filtrado para 50 mL usualmente satisfatria. Pipete 2 mL da diluio final de cada amostra em tubos de ensaio. A cada tubo, adicione 1 mL da soluo
oxidante. Agite os tubos e deixe por (20 2) minutos temperatura ambiente. Adicione
1 mL do reagente de cor e misture vigorosamente. Feche cada tubo com tampa ou papel
alumnio. Imediatamente, coloque os tubos em banho de gua a (60 0,5)oC por exatamente 15 minutos. Resfrie os tubos em gua corrente por 3 minutos. Mea a absorbncia
das solues contra o branco de reagentes a (558 2) nm.
Curva-padro Prepare a curva-padro para cada srie de medies. Transfira 2 mL de
gua (branco) e 2 mL de cada soluo-padro de trabalho aos tubos de ensaio e proceda
adio da soluo oxidante e do reagente de cor conforme procedimento da amostra.
Construa a curva com absorbncia no eixo y e concentraes de hidroxiprolina 0,3; 0,6;
1,2 e 1,8 g/mL no eixo x. Calcule os coeficientes linear e angular da reta (absortividade,
considerando o caminho ptico da cubeta de 1 cm).
Clculos
Referncias bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods
of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, (method 990.26).
Arlington: A.O.A.C.,1995. chapter 39. p.13-5.
DELLA TORRE, LICHTIG. J.; BERAQUET, N.J. Validao do mtodo espectrofomtrico para quantificao do aminocido hidroxiprolina em conservas de carne. Rev.
Inst. Adolfo Lutz, 63(1), 2004 (no prelo).
283/IV Determinao espectrofotomtrica de nitritos
Baseia-se nas reaes de diazotao de nitritos com cido sulfanlico e copulao
com cloridrato de alfa-naftilamina em meio cido, formando o cido alfa-naftilamino-pazobenzeno-p-sulfnico de colorao rsea. O produto resultante determinado espectrofotometricamente a 540 nm.
Material
Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, banho-maria, balo volumtrico mbar de
50 mL, bales volumtricos de 100, 200, 250 e 1000 mL, provetas de 25 e 50 mL, bqueres
de 100 e 200 mL, frasco Erlenmeyer de 250 ou de 500 mL, funil, papel de filtro qualitativo,
pipeta graduada de 5 mL, pipetas volumtricas de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 10 e 20 mL.
Reagentes
Utilize preferencialmente gua deionizada isenta de nitritos e/ou nitratos no preparo dos
reagentes e na realizao da anlise.
Soluo de tetraborato de sdio deca-hidratado a 5% m/v Dissolva 50 g de
Na2B4O7.10H2O em gua e complete o volume at 1000 mL.
Soluo de ferrocianeto de potssio tri-hidratado a 15% m/v Dissolva 150 g de
K4Fe(CN)6.3H2O em gua e complete o volume at 1000 mL.
Soluo de acetato de zinco diidratado a 30% m/v ou sulfato de zinco hepta-hidratado a 30%
m/v Dissolva 300 g de Zn(CH3COO)2.2H2O em 30 mL de cido actico glacial e 500 mL de
gua (aquea brandamente, se necessrio) e complete o volume at 1000 mL. Alternativamente,
dissolva 300 g de ZnSO4.7H2O em gua e complete o volume at 1000 mL.
IAL - 519
Reagente sulfanilamida a 0,5% m/v Dissolva 1,25 g de C6H8N2O2 em 250 mL de soluo de cido clordrico (1+1). Aquea brandamente, se necessrio. A soluo estvel
por 1 a 2 meses.
Reagente NED a 0,5% m/v Dissolva 0,5 g de cloreto de alfa-naftiletilenodiamina
(C12H16Cl2N2) em 100 mL de gua. Aquea brandamente, se necessrio. Estoque em
frasco mbar sob refrigerao. A soluo estvel por uma semana e dever ser desprezada
quando apresentar alterao da colorao.
Soluo-padro de nitrito de sdio (NaNO2) a 0,2 g/L Pese 200 mg de nitrito de sdio, previamente seco por 1 hora a 105C, dissolva em gua e dilua para 1000 mL. Essa
soluo-padro estoque estvel por 2 semanas, se mantida a 4C.
Soluo-padro de trabalho a 8 g/mL Pipete 10 mL da soluo-padro estoque de
nitrito de sdio em um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com gua.
Procedimento Pese 10 g de amostra triturada e homogeneizada em um bquer de
200 mL. Adicione 5 mL de soluo de tetraborato de sdio, misture com basto de vidro
e acrescente cerca de 50 mL de gua quente (80oC). Deixe em banho-maria por 15 minutos, agitando freqentemente com a baqueta. Proceda da mesma forma com um branco
de reagentes sem a adio da amostra. Com auxlio do basto de vidro e de um funil,
transfira o contedo quantitativamente para balo volumtrico de 200 mL. Lave bem o
bquer com aproximadamente 50 mL de gua. Deixe esfriar e adicione 5 mL de soluo
de ferrocianeto de potssio e 5 mL de soluo de acetato de zinco (ou como alternativa,
sulfato de zinco). Agite por rotao aps a adio de cada reagente e complete o volume
com gua. Agite com vigor. Deixe em repouso por 15 minutos, agitando vigorosamente
vrias vezes nesse perodo. Filtre em papel de filtro qualitativo para um frasco Erlenmeyer
de 250 mL. Pipete 10 mL do branco de reagentes e das amostras, respectivamente, para
bales volumtricos mbar de 50 mL. Adicione 5 mL de reagente sulfanilamida, deixe
reagir por 5 minutos e adicione 3 mL de reagente NED, agitando aps cada adio.
Complete o volume com gua e homogeneze. Deixe em repouso por 15 minutos e faa
a leitura da absorbncia a 540 nm contra o branco de reagentes.
Curva-padro Pipete alquotas de 1, 2, 3, 4, 5, 6 e 7 mL da soluo-padro de trabalho de nitrito de sdio (8 g/mL) para bales volumtricos de 50 mL. Adicione, a cada um, 5 mL de reagente sulfanilamida, misture por rotao e aps 5 minutos, adicione 3 mL de reagente NED. Complete o volume e homogeneze. Deixe
a cor desenvolver por 15 minutos e determine a absorbncia a 540 nm contra branco de reagentes. Construa a curva com os valores de absorbncia no eixo y e de concentrao de nitrito de sdio 0,16; 0,32; 0,48; 0,64; 0,80; 0,96 e 1,12 g/mL no
eixo x. Calcule os coeficientes linear e angular da reta (absortividade, considerando o
caminho ptico da cubeta de 1 cm).
520 - IAL
Clculo
A = absorbncia da amostra
b = coeficiente linear da reta obtida na curva-padro
a = absortividade (coeficiente angular da reta obtida na curva-padro)
p = massa da amostra em gramas
1000 = fator de diluio
Nota: o limite de quantificao do mtodo de 0,032 g/mL de NaNO2 (ou 0,021 g/
mL de NO2-) na alquota de anlise, com desvio padro relativo de 3,7% (TAKEMOTO
et al., 1999).
Referncias bibliogrficas
BRASIL. Instruo Normativa n. 20, de 21 jul. 1999. Secretaria de Defesa Agropecuria,
do Ministrio da Agricultura e do Abastecimento. Oficializa os Mtodos Analticos Fsicoqumicos para Controle de Produtos Crneos e seus Ingredientes Sal e Salmoura.
Dirio Oficial, Braslia (DF), n.173, 9 set. 1999. Seo 1, p.30-31.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos
qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 97-98.
TAKEMOTO, E.; DELLA TORRE, J. C. de M.; LICHTIG, J. Nitrato em espinafre:
validaes de mtodos colorimtricos. In: III SIMPSIO LATINO AMERICANO
DE CINCIA DE ALIMENTOS (SLACA), 1999. Resumos... Campinas: FEA-UNICAMP, 1999. p. 5.
284/IV Determinao espectrofotomtrica de nitratos
O nitrato reduzido a nitrito em coluna de cdmio metlico em meio alcalino. A
reao baseia-se na diazotao dos nitritos com cido sulfanlico e copulao com cloridrato de alfa-naftilamina em meio cido, formando o cido alfa-naftilamino-p-azobenzeno-p-sulfnico de colorao rsea. O produto resultante determinado espectrofotometricamente a 540 nm.
Material
Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, banho-maria, coluna de cdmio, bales
volumtricos mbar de 50 mL, bales volumtricos de 100, 200, 250 e 1000 mL, provetas
IAL - 521
de 25 e 50 mL, bqueres de 100 e 200 mL, frasco Erlenmeyer de 250 ou de 500 mL,
funil, papel de filtro qualitativo, pipeta graduada de 5 mL e pipetas volumtricas de 1, 2,
3, 4, 5, 6, 7, 10 e 20 mL.
Reagentes
Utilize preferencialmente gua deionizada isenta de nitritos e/ou nitratos no preparo dos
reagentes e na realizao da anlise.
Soluo de tetraborato de sdio deca-hidratado a 5% m/v Dissolva 50 g de
Na2B4O7.10H2O em gua e complete o volume at 1000 mL.
Soluo de ferrocianeto de potssio tri-hidratado a 15% m/v Dissolva 150 g de
K4Fe(CN)6.3H2O em gua e complete o volume at 1000 mL.
Soluo de acetato de zinco di-hidratado a 30% m/v ou sulfato de zinco hepta-hidratado a 30%
m/v Dissolva 300 g de Zn(CH3COO)2.2H2O em 30 mL de cido actico glacial e 500 mL de
gua (aquea brandamente se necessrio), complete o volume at 1000 mL. Alternativamente,
dissolva 300 g de ZnSO4.7H2O em gua e complete o volume at 1000 mL.
Soluo de EDTA a 5% m/v Pese 5 g de C10H14N2Na2O8.2H2O, dissolva com gua e
complete o volume de 100 mL. Guarde em frasco de polietileno.
Reagente sulfanilamida a 0,5% m/v Dissolva 1,25 g de C6H8N2O2 em 250 mL de
soluo de cido clordrico (1+1). Aquea brandamente se necessrio. A soluo estvel
por 1 a 2 meses.
Reagente NED a 0,5% m/v Dissolva 0,5 g de cloreto de alfa-naftiletilenodiamina
(C12H16Cl2N2) em 100 mL de gua. Aquea brandamente, se necessrio. Estoque em
frasco mbar sob refrigerao. A soluo deve ser desprezada quando apresentar alterao
da colorao (estvel por uma semana).
Soluo-tampo pH (9,6-9,7) Dilua 20 mL de cido clordrico em 700 mL de gua.
Adicione 50 mL de hidrxido de amnio. Verifique o pH e ajuste para (9,6-9,7) com
HCl ou NH4OH, se necessrio. Complete o volume at 1000 mL e misture.
Soluo-tampo pH (9,6-9,7) diluda (1+9) Dilua 100 mL da soluo-tampo pH
(9,6-9,7) em balo de 1000 mL e complete o volume com gua.
Soluo-padro de nitrito de sdio (NaNO2) a 200 mg/L Pese 200 mg de nitrito de
522 - IAL
sdio, previamente seco por 1 hora a 105C, dissolva em gua e dilua para 1000 mL. Essa
soluo-padro estoque estvel ao menos por 2 semanas, se mantida a 4C.
Soluo-padro de trabalho a 8 g/mL Transfira 10 mL da soluo-padro estoque para
um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com gua.
Soluo-padro de nitrato de sdio (NaNO3) Desseque o nitrato de sdio por 1 hora a
105C. Pese, com preciso, 0,1 g e dissolva em gua. Adicione 50 mL da soluo-tampo
pH (9,6-9,7) e complete para balo de 100 mL com gua. Essa soluo-padro estvel
ao menos por duas semanas, se mantida a 4C.
Soluo-padro de trabalho de nitrato de sdio a 10 g/mL Dilua 1 mL em balo de
100 mL com gua. A soluo-padro de nitrato de sdio de trabalho deve ser preparada
no momento da anlise.
Preparao da coluna de cdmio (Figura 2) Estire um tubo de vidro de 1,5 cm de dimetro e 15 cm de altura (coluna). Compacte um pequeno chumao de l de vidro na
extremidade afilada da coluna, acrescente uma camada de 1 cm de areia tratada.
Preparao do cdmio esponjoso: prepare 500 mL de soluo de sulfato de cdmio a 20%.
Adicione 5 barras de zinco metlico, deixando-as totalmente imersas na soluo. medida que o cdmio esponjoso for se depositando nas barras, retire utilizando basto de vidro
ou material plstico e transfira para um bquer contendo gua em quantidade suficiente
para cobrir todo o cdmio. Transfira aproximadamente 200 mL de gua e o cdmio para
um copo de liquidificador (de material plstico ou vidro), homogeneze e em seguida passe em peneira mesh 20 ou 40, recolhendo em outro bquer, mantendo o cdmio sempre
coberto com gua. O cdmio triturado e peneirado posto a decantar completamente.
Remova a gua sobrenadante e inicie o tratamento do resduo (cdmio esponjoso) da
seguinte maneira: cubra todo o cdmio com cido clordrico 2 M; deixe em contato
(repouso) por 2 minutos, remova o cido clordrico sobrenadante; lave o cdmio com
gua at pH neutro; adicione cido clordrico 0,1 M at cobrir todo o cdmio, deixe em
repouso por 15 minutos e remova o cido clordrico sobrenadante; lave o cdmio com
gua at pH neutro; decante e remova a gua sobrenadante, adicione soluo-tampo pH
(9,6-9,7) (1+9) deixando em contato por, no mnimo, 15 minutos.
Decorrido esse tempo, o cdmio est pronto para ser compactado na coluna de vidro
previamente preparada com l de vidro e areia na extremidade. Transfira o cdmio em
pequenas pores com o auxlio de gua, evitando sua exposio ao ar, at atingir uma
altura de 10 cm. Adapte ao topo da coluna um funil de separao de 100 mL, com haste
de 10 mm de dimetro e 25 cm de comprimento com uma rolha de silicone, prevenindo
a entrada de ar na coluna. Dessa forma, permite-se o controle do fluxo. Mantenha a coluna sempre com gua.
IAL - 523
IAL - 527
Advertncia: a azida sdica material txico. Evite contato com a pele e os olhos e impea
a aspirao do p.
Clorofrmio-metanol 2:1 (v/v).
lcool-gua (acidificado) 80+20 (v/v), acidificado com 2 gotas de HCl/L.
Tampo Tris-HCl a 0,25 M Pese 30,3 g de tris (hidroximetil) amino metano em um
litro de gua e ajuste ao pH 8,6 com HCl.
Proteina de soja padro Utilize como padro, o concentrado de protena de soja (Loders
CroKlaan B.V., Holanda) ou p de acetona de soja (equivalente Sigma S7756) ou isolado
protico de soja Supro 500E (Protein Technologies International, USA) na preparao da
soluo de sensibilizao.
Soluo de sensibilizao (50 vezes concentrada) Misture, em balo volumtrico
de 50 mL, 4,5 mL de Na2CO3 0,2 M, 8 mL de NaHCO3 0,2 M, 625 L da soluopadro de protena de soja preparada no item procedimento (b) e gua at completar o
volume. Mantenha esta soluo-padro a (2-8)C por 16 horas.
Nota: o valor 625 L da soluo-padro foi calculado para corresponder a 2,5 mg de
protena de soja no p de acetona, uma vez que a soluo-padro descrita no item (b) do
procedimento contm 100 mg/25 mL.
Soluo de sensibilizao de trabalho Misture, em um balo volumtrico de 50 mL, 4,5 mL
Na2CO3 0,2 M, 8 mL NaHCO3 0,2 M e gua para completar o volume. Homogeneze e retire
1 mL desta soluo, repondo o volume da soluo com 1 mL da soluo de sensibilizao
50 vezes concentrada.
Soluo-tampo salina de fosfato TFS pH 7,1 Misture, em um balo volumtrico de
1000 mL, 85 g de NaCl, 10,7 g de Na2HPO4, 3,9 g de NaH2PO4.2H2O, 5 g de NaN3
e gua at completar o volume para 1000 mL.
Soluo-tampo de trabalho TFST Misture 100 mL da soluo-tampo TFS, 1,5 mL de
Tween 20 e 900 mL de gua.
Solues imunorreagentes
Soluo anticorpo-positivo Dilua, em um balo volumtrico de 50 mL, B L de antissoro de coelho para protena de soja (equivalente Sigma-Aldrich S-2519), conservado a
-20C, e complete o volume com soluo-tampo TFST.
528 - IAL
Procedimentos
(a) Preparao do p de acetona Pese, separadamente, 20 g da protena de soja padro e
20g da amostra previamente triturada e macere (no Ultra-Turrax ou Diax 900) com solventes orgnicos, filtrando o resduo a cada estgio para re-extrao, na seguinte seqncia:
200 mL clorofrmio-metanol (3 vezes), 200 mL lcool acidificado (3 vezes) e 200 mL
acetona (3 vezes). Seque o resduo ao ar, de um dia para o outro, e homogeneze em almofariz; o produto final denomina-se p de acetona. Proceda a anlise da protena total pelo
mtodo Kjeldahl (N x 6,25), utilizando o resultado para calcular a massa da amostra de p
de acetona do item (b) do procedimento.
(b) Solubilizao de amostras e padro Pese, separadamente, em tubos pirex graduados
de 10 mL, o p de acetona da protena de soja padro (97-103 mg de protena) e o p de
acetona de cada amostra de produto crneo (95-105 mg de protena). Adicione a cada um
dos tubos na ordem: 2 mL de tampo Tris-HCl, 6 g de uria, 2 mL de gua, 200 L de
2-mercaptoetanol e gua para 10 mL. Tampe, misture e aquea imergindo at o nvel de
10 mL em banho de gua fervente por (60 1) min. Resfrie por (3 - 5) minutos e transfira
quantitativamente para um balo volumtrico de 25 mL com gua, assegurando a ressolubilizao da uria cristalizada. Mantenha as solues de amostras e padro por
16 h a (2 - 8)oC. A soluo-padro de protena de soja est pronta para ser utilizada no item
reagentes (soluo de sensibilizao) e no item procedimento (e). As solues de amostras
sero utilizadas no item (e) do procedimento.
(c) Sensibilizao das placas ELISA Utilizando pipeta multicanal, transfira 200 L de
soluo de sensibilizao de trabalho (item reagente) a cada cavidade na placa de ELISA.
Coloque a placa tampada em caixa plstica, feche e incube a 37oC por (16 1) hora.
(d) Lavagem e estocagem das placas ELISA Lave as placas de ELISA utilizando um procedimento padronizado. Com um sistema automtico de lavagem estabelea um ciclo de
5 vezes, em que cada fileira de cavidades sucessivamente esvaziada e enchida com TFST
por 5 vezes e finalmente as cavidades so esvaziadas. Segundo o procedimento de lavagem
manual, a primeira fileira esvaziada e enchida com TFST por 5 vezes antes de finalmente
ser esvaziada; a seqncia repetida para as fileiras sucessivas. Um ciclo de lavagem de 10
vezes inclui primeiramente uma lavagem de 5 vezes, seguida por um segundo ciclo de mais
5 lavagens. Se a placa ELISA sensibilizada no for utilizada imediatamente, remova a placa
da estufa no final das 16 horas e lave 5 vezes. Uma lavagem eficiente parte essencial do
mtodo. A placa lavada pode ser enxugada e estocada. Use tecido absorvente para secar os
lados da placa, inverta a placa para remover algum lquido remanescente nas cavidades, e
ento seque a parte de cima da placa. Idealmente, a superfcie interna das cavidades incluindo a base deve permanecer intocada durante o processo de lavagem e secagem. Coloque a
placa tampada com a parte de cima voltada para baixo em caixa plstica, feche e estoque em
freezer (-20oC).
530 - IAL
(e) Diluio serial das solues de amostras e padro Assegure a ambientao da temperatura das solues de amostras e padro solubilizadas (procedimento b), retirando da refrigerao com (45 - 60) minutos de antecedncia. Transfira alquotas de 750 L de cada uma
dessas solues a bales volumtricos de 10 mL, dilua ao volume com TFST e misture por
repetidas inverses. Encha com microtubos o suporte (8x12) e pipete 600 L das solues
de amostras e padres diludos, cada um dentro do seu tubo correspondente, como definido
na Tabela 1 (padro S1 em triplicata e amostras T1-Z1 em duplicata). A Tabela 1 ilustra o
modelo padro de tubos que corresponde s cavidades na placa de ELISA. Todos os outros
tubos devem receber 400 L de TFST; faa essa transferncia utilizando pipeta multicanal
(duas pores de 200 L). Conduza a diluio serial de cada amostra, em duplicata, pelo uso
de pipeta multicanal para misturar alquotas de 600 L (recolha 200 L e reponha 3 vezes)
e, ento, transfira 200 L ao tubo adjacente que j contm 400 L de TFST. Misture como
descrito e repita a diluio, descartando a alquota de 200 L do ltimo tubo. Desta mistura
resulta uma diluio serial 1:3; normalmente use solues de amostra no diluda, 3 vezes
diludas e 9 vezes diludas para o ensaio quando o teor de protena de soja na amostra
desconhecido ou baixo (0 - 11 g de protena/100 g de protena total). Escolha maiores
diluies se os teores so altos (3, 9, 27 vezes se 11- 33 g/100 g; 9, 27, 81 vezes para
33 -100 g/100 g), ou quando o ELISA j tenha demonstrado que as solues de amostras
so muitas concentradas. Dilua as solues-padro similarmente, preparando para o ensaio 7
diluies seriais (de soluo no diluda a diluio de 729 vezes, cada uma em triplicata).
Tabela 1 Modelo padro recomendado para os microtubos (pr-incubao) e cavidades correspondentes na placa de ELISA, no ensaio com 7 amostras*.
Linhas
Colunas
1
10
11
12
BS
S1
S1
S1
00
00
00
00
00
00
00
00
BS
S2
S2
S2
T1
U1
V1
W1
X1
Y1
Z1
00
BS
S3
S3
S3
T2
U2
V2
W2
X2
Y2
Z2
00
BC
S4
S4
S4
T3
U3
V3
W3
X3
Y3
Z3
00
BC
S5
S5
S5
T1
U1
V1
W1
X1
Y1
Z1
00
BC
S6
S6
S6
T2
U2
V2
W2
X2
Y2
Z2
00
BP
S7
S7
S7
T3
U3
V3
W3
X3
Y3
Z3
00
BP
BP
BN
BN
BN
00
00
00
00
00
00
00
IAL - 531
Clculos
Para cada placa, construa uma curva-padro (Figura 4) do log da concentrao de
protena de soja padro como p de acetona (N x 6,25) nas 7 diluies seriais versus a
correspondente absorbncia (mdia de 3 leituras). Calcule a concentrao de protena total
(N x 6,25) em cada diluio de cada soluo de amostra. De cada mdia de absorbncia,
leia na curva a concentrao de protena de soja correspondente em cada diluio da
amostra. Calcule a massa de protena de soja por 100 g de protena total para as 3 diluies
correspondentes a cada amostra de p de acetona. Se todos os 3 valores corresponderem
poro central da curva de calibrao (isto , S2 a S6), utilize a mdia como resultado
final. As absorbncias muito baixas implicam que as solues utilizadas estavam muito
concentradas e um maior nmero de diluies seriais deve ser utilizado para um segundo
procedimento de ELISA. Os resultados tambm podem ser calculados em termos de
massa de protena de soja por 100 g de amostra como recebida ou em termos de peso
do ingrediente de soja (protenas isoladas contm 88% de protena, concentradas 68%
e texturizadas 50%, base seca, teores mnimos estabelecidos pela legislao vigente) por
100 g de amostra como recebida. Note que as trs maneiras de definir os teores de soja na
amostra so diferentes e devem ser consideradas com cuidado.
IAL - 533
534 - IAL
Colaboradores
Jussara Carvalho de Moura Della Torre, Regina S. Minazzi Rodrigues, Emy Takemoto,
Snia Frana Correia Barbosa e Jaim Lichtig
IAL - 535
CAPTULO
XIV
EMBALAGENS E
EQUIPAMENTOS EM
CONTATO COM
ALIMENTOS
IAL - 537
538 - IAL
XIV
EMBALAGENS E EQUIPAMENTOS EM
CONTATO COM ALIMENTOS
qualidade dos produtos alimentcios depende diretamente de fatores de natureza qumica, fsica e biolgica, que atuam sobre o alimento durante o perodo de
tempo entre sua produo e seu consumo, que denominado vida-de-prateleira
do alimento. Neste contexto, a embalagem de importncia fundamental.
540 - IAL
Terminologia
Embalagem para alimentos Artigo que est em contato direto com alimentos,
destinado a cont-los, desde sua fabricao at sua entrega ao consumidor, com a finalidade de proteg-los de agentes externos, de alteraes e de contaminaes, assim como
de adulteraes.
Equipamento para alimentos Artigo em contato direto com alimentos, que se
utiliza durante a elaborao, fracionamento, armazenamento, comercializao e consumo
de alimentos. Esto includos nesta classificao: recipientes, mquinas, correias transportadoras, tubulaes, aparelhagens, acessrios, vlvulas, utenslios e similares.
Revestimento Substncia ou produto aplicado sobre a superfcie de embalagens
ou equipamentos para alimentos com a finalidade de proteg-los e prolongar sua vida
til.
Migrao Transferncia de componentes do material em contato com alimentos
para estes produtos, devido a fenmenos fsico-qumicos.
Migrao total ou global Quantidade de componentes transferida dos materiais
em contato com alimentos ou seus simulantes, nas condies usuais de emprego, elaborao e armazenamento ou nas condies equivalentes de ensaio.
Migrao especfica Quantidade de um componente no polimrico particular de
interesse toxicolgico transferida dos materiais em contato com alimentos para os alimentos ou seus simulantes, nas condies equivalentes de ensaio.
Limite de migrao total ou global Quantidade mxima admissvel de componentes de material em contato com alimentos transferida aos simulantes sob as condies de
ensaio.
Limite de migrao especfica Quantidade mxima admissvel de um componente
especfico do material em contato com alimentos transferida aos simulantes nas condies de ensaio.
Limite de composio Quantidade mxima permitida de um componente particular de interesse toxicolgico no material em contato com alimentos.
Simulante Produto que imita o comportamento de um grupo de alimentos que
IAL - 541
Embalagens metlicas Embalagens compostas exclusivamente de materiais metlicos ferrosos ou no ferrosos; de materiais ferrosos ou no ferrosos revestidos exclusivamente com revestimentos metlicos; de materiais ferrosos ou no ferrosos apresentando
ou no revestimentos metlicos e revestidos em uma ou em ambas as faces por revestimentos polimricos ou submetidas a uma operao de lubrificao.
Embalagens celulsicas So embalagens elaboradas ou revestidas com papel ou
carto, ou compostas por vrios tipos de materiais, desde que a face em contato com
alimento seja celulsica, inclusive aquelas que so revestidas ou tratadas superficialmente
com parafinas, resinas polimricas e outras.
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Resoluo N 91, da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Dirio Oficial, Braslia, 13 de junho de 2001. Seo 1, p.60-61.Critrios gerais
para embalagens e equipamentos em contato com alimentos.
286/IV Embalagens e equipamentos Classificao dos alimentos
Do ponto de vista de interao com as embalagens e equipamentos plsticos, os
542 - IAL
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Resoluo N 105, da Agncia Nacional de Vigilncia
Sanitria. Dirio Oficial, Braslia, 20 de maio de 1999, Seo I, p. 21-34. Disposies
gerais para embalagens e equipamentos plsticos em contato com alimentos.
287/IV Embalagens e equipamentos Seleo dos simulantes de alimentos
Com a finalidade de realizar os ensaios de migrao em embalagens e equipamentos plsticos em contato com alimentos, so definidos os seguintes simulantes de
alimentos:
Simulante A gua
Simulante B Soluo de cido actico a 3% (v/v) em gua
Simulante C Soluo de lcool em gua a 15% ou na concentrao mais prxima
da real de uso.
Simulante D leo de oliva refinado; n-heptano
Nota: o n-heptano indicado como simulante alternativo. O comportamento do n-heptano como solvente simulante de alimentos oleosos est sendo questionado. A tendncia
geral o uso de leos vegetais (azeite de oliva, leo de girassol ou soja), pois os mesmos so
excelentes simulantes de alimentos oleosos, apesar do mtodo correspondente ser mais
complexo que o anterior.
Tabela 1 Tipos de alimentos e seus respectivos simulantes
Alimento
Simulante
Tipo I
Tipo II
Tipo III a
A,D
Tipo III b
B,D
Tipo IV
Tipo V
Tipo VI
544 - IAL
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Resoluo N 105, da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Dirio Oficial, Braslia, 20 de maio de 1999, Seo I, p. 21- 34. Disposies gerais
para embalagens e equipamentos plsticos em contato com alimentos.
288/IV Embalagens e equipamentos Condies dos ensaios de migrao
a) Nos ensaios de migrao, o contato dos materiais de embalagem com os simulantes, nas condies de tempo e temperatura selecionados de acordo com a Tabela 2,
ser realizado de maneira a reproduzir as condies normais ou previsveis de elaborao, fracionamento, armazenamento, distribuio, comercializao e consumo
do alimento.
b) Se uma embalagem ou equipamento utilizado sucessivamente em vrias condies
de contato da Tabela 2, os ensaios de migrao sero realizados submetendo-se as
amostras sucessivamente a estas condies de teste, usando-se o mesmo simulante.
c) Para um determinado tempo de contato, se o material passa nos ensaios de migrao
a uma determinada temperatura, no necessrio efetuar o teste a uma temperatura
mais baixa.
d) Para uma determinada temperatura de contato, se o material passa nos ensaios de
migrao a um determinado tempo de contato, no necessrio efetuar o teste a um
tempo menor.
e) Sempre que as condies de temperatura e tempo de contato no se enquadrem nas
condies impostas na Tabela 2, devero ser seguidas as condies que se aproximem
das reais de uso.
f) Para manter as amostras s temperaturas selecionadas, podem ser utilizados, dependendo do caso, congelador, refrigerador, banho-maria, estufa, autoclave ou forno de
microondas.
g) elaborao Condies que se verificam em perodos relativamente curtos, tais como:
pasteurizao, esterilizao, acondicionamento a quente etc.
h) armazenamento Contato prolongado durante o armazenamento temperatura ambiente ou de refrigerao.
IAL - 545
i) consumo Aquecimento do alimento na prpria embalagem antes da ingesto; utilizao de utenslios domsticos de plstico em contato com alimentos.
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Resoluo N 105, da Agncia Nacional de Vigilncia
Sanitria. Dirio Oficial, Braslia, 20 de maio de 1999, Seo I, p. 21-34. Disposies
gerais para embalagens e equipamentos plsticos em contato com alimentos.
289/IV Embalagens plsticas Preparo das amostras
Procedimento Sempre que possvel, utilize uma rea fcil de calcular (retngulo, crculo, cilindro etc.). Prepare um nmero de amostras tal que a superfcie de contato esteja
em torno de 600 cm2. Lave as amostras primeiramente em jato de gua corrente e depois
com gua. Seque as amostras. Devido grande diversificao de materiais empregados
para a fabricao de embalagens, cada um deles dever ter um tratamento prvio especial,
conforme descrito abaixo:
a) Embalagem final (rgida, semi-rgida ou flexvel) Coloque o simulante temperatura selecionada. Cubra ou lacre o recipiente e deixe temperatura de teste durante o tempo indicado.
b) Material plstico genrico (filme flexvel, corpos rgidos, revestimentos polimricos etc.)
Prepare amostras com uma superfcie de contato de aproximadamente 600 cm2 (somatria de todas as superfcies postas em contato). Coloque em um bquer com um
volume de simulante de tal forma que a relao rea de material em contato/volume
fique compreendida entre (2 e 0,5) cm2/mL, na temperatura selecionada; cubra o bquer com um vidro de relgio ou similar e deixe em contato na temperatura de ensaio
pelo tempo indicado.
c) Elementos de vedao (tampas, rolhas, guarnies e outros objetos de rea pequena (por
exemplo: palitos de pirulito, colheres para sorvetes etc., de um nico uso) Coloque2 um
nmero suficiente (n) de amostras de modo que a rea seja em torno de 600 cm em
um bquer com um volume simulante de tal forma que a relao rea de amostras/
volume de simulante esteja compreendida entre (2 e 0,5) cm2/mL, temperatura selecionada. Cubra o bquer e deixe temperatura de ensaio durante o tempo indicado.
d) Filme composto semi-rgido Corte um retngulo do filme no tamanho de (15 x 20)
cm. Construa com ele uma caixa. Lave a caixa com um jato de gua corrente e, depois
com gua. Seque. Coloque o solvente simulante adequado e cubra com placa de vidro.
Na impossibilidade de construir uma caixa, corte um quadrado de (8 x 8) cm do material, lave com jato de gua corrente e, depois, com gua. Seque. Coloque o solvente
simulante em um copo de vidro com a borda recoberta por fita vedante. Cubra esse
copo com a amostra cortada na forma de um quadrado de (8 x 8) cm e adapte esse
conjunto ao dispositivo especial descrito na figura 1. Faa um branco substituindo a
546 - IAL
amostra por placa de vidro, para verificar se houve migrao dos elementos da fita de
vedao para o solvente.
IAL - 547
CONDIES DE ENSAIO
Simulante A
Simulante B
Simulante C
gua
cido actico
a 3%
lcool a 15%
Simulante D
Heptano **
Azeite de oliva
*
5C/10 dias
5C/10 dias
5C/10 dias
5C/30 min
5C/10 dias
40C/10 dias
40C/10 dias
20C/30 min
40C/10 dias
20C/15 min
40C/24 h
20C/15 min
40C/2 h
40C/15 min
80C/2 h
40C/24 h
40C/24 h
40C/24 h
40C/2 h
40C/2 h
40C/2 h
D. Elaborao
40C < T < 80C
80C/2 h
80C/2 h
80C/2h
100C/30 min
100C/30 min
50C/15 min
100C/30 min
T > 100C
120C/30 min
120C/30 min
60C/15 min
120C/30 min
* Os resultados obtidos com azeite de oliva devem ser divididos pelos fatores de reduo
especificados de acordo com a Tabela 2 (Classificao dos alimentos em funo dos simulantes), constante no anexo I da Resoluo 105 da ANVISA.
** Os resultados obtidos com n-heptano devem ser divididos por 5.
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Resoluo N 105, da Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria. Dirio Oficial, Braslia, 20 de maio de 1999, Seo I, p. 21-34. Disposies gerais
para embalagens e equipamentos plsticos em contato com alimentos.
290/IV Embalagens plsticas Determinao da migrao total com simulantes
aquosos e n-heptano
No Brasil e nos outros Estados-Parte do Mercosul, o limite mximo permitido de
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Clculos
No caso de embalagens e equipamentos com capacidade superior ou igual a 250 mL, calcule a migrao total (Q) com a frmula:
Notas
No caso de n-heptano, o volume do mesmo dever ser reduzido em destilador rotatrio, com a recuperao deste solvente. As ltimas pores so transferidas para uma
cpsula tarada e prossegue-se como descrito anteriormente.
As tolerncias analticas so as seguintes: 5 mg/kg ou 0,8 mg/dm, nos ensaios de
migrao total, dependendo da forma de expresso dos resultados.
Quando uma embalagem ou equipamento se destina a entrar em contato repetidas
vezes com alimentos, com exceo das embalagens retornveis que so objeto de uma
norma especfica, os ensaios de migrao devero ser efetuados trs vezes sobre uma
mesma amostra, usando-se a cada vez quantidades novas de simulante. A aprovao deste tipo de embalagem ou equipamento depender do nvel de migrao total
determinado no terceiro ensaio de migrao. O resultado final ser o nvel obtido
na terceira prova, porm nos trs ensaios o limite de migrao total no poder ser
excedido.
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Resoluo N 105, da Agncia Nacional de Vigilncia
Sanitria. Dirio Oficial, Braslia, 20 de maio de 1999, Seo I, p. 21-34. Disposies
gerais para embalagens e equipamentos plsticos em contato com alimentos.
291/IV Embalagens plsticas Determinao da migrao total com n-heptano
aps extrao com clorofrmio
No caso do simulante utilizado ser n-heptano, o valor do resduo seco deve ser
dividido por 5. Se o valor da migrao global correspondente for superior ao limite
estabelecido, submete-se o resduo seco a uma extrao com clorofrmio.
Procedimento Adicione ao resduo seco, na mesma cpsula, 50 mL de clorofrmio.
Aquea cuidadosamente e filtre em papel Whatman n 41. Lave o papel de filtro com
o mesmo solvente e recolha o filtrado em uma cpsula tarada. Evapore o solvente e
seque em estufa a (100 5)C. Resfrie em dessecador e pese o novo resduo seco. Este
resultado deve ser dividido por 5 para ser usado no clculo final.
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Resoluo N 105, da Agncia Nacional de
Vigilncia Sanitria. Dirio Oficial, Braslia, 20 de maio de 1999, Seo I,
p. 21- 34. Disposies gerais para embalagens e equipamentos plsticos em contato com alimentos.
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A migrao (Q) pode tambm ser expressa em mg/dm , mediante a seguinte frmula:
carto ou cartolina, sempre que se assegure que no entrem em contato com alimentos.
Este mtodo se baseia na quantificao gravimtrica do resduo total extrado do
material celulsico aps contato com simulantes de alimentos, sob condies reais de
emprego do material. O limite de migrao total para embalagens e equipamentos celulsicos em contato com alimentos, com as correes indicadas, de 8 mg/dm2.
Material
Frascos Erlenmeyer, cpsula de platina ou de vidro borosilicato, estufa, bqueres, chapa
de aquecimento, balana analtica, dessecador, congelador, refrigerador, banho-maria e
autoclave ou forno de microondas.
Reagentes
gua destilada e desmineralizada
n-Heptano
Soluo aquosa de cido actico a 3% v/v
Soluo alcolica a 15% v/v ou na concentrao mais prxima do alimento, preparada a
partir de lcool diludo com gua destilada e desmineralizada.
Clorofrmio
Notas
Verifique o descrito em 287/IV.
As anlises devem ser efetuadas em quadruplicata, acompanhadas pela anlise de um
branco.
Para os ensaios de migrao devem ser utilizados os simulantes descritos na Tabela 1,
exceto o simulante D que ser o n-heptano.
O contato dos materiais celulsicos com os simulantes, nas condies de tempo e temperatura selecionadas na Tabela 3, ser realizado de maneira a que reproduza as condies
normais e previsveis de uso na elaborao, fracionamento, armazenamento, distribuio,
comercializao e consumo dos alimentos.
Procedimento Coloque o simulante escolhido em uma relao de 0,3 mL/cm2 de
superfcie analisada, na temperatura selecionada segundo a Tabela 3, cubra ou feche o
recipiente e deixe na temperatura de ensaio pelo tempo indicado. No final do perodo de
contato, deixe atingir a temperatura ambiente, junte o solvente de cada uma das embalagens ou equipamentos utilizados em cada ensaio em um frasco Erlenmeyer ou bquer
limpo. Lave as amostras com uma pequena quantidade de solvente limpo e agregue os
lquidos de lavagem ao recipiente Evapore o solvente at aproximadamente 100 mL e
transfira para uma cpsula tarada de platina ou vidro borossilicato. Lave o frasco Erlenmeyer ou bquer trs vezes com pequenas pores do solvente utilizado, agregando os
lquidos de lavagem cpsula. Evapore o contedo da cpsula at poucos mL, evitando
IAL - 561
de fixao (Figura 1). Inverta o dispositivo para que haja contato do solvente com
a amostra. Faa um branco substituindo a amostra por placa de vidro para verificar
se houve migrao dos elementos da fita de vedao para o solvente. Deixe em contato pelo tempo e temperatura estipulados na Tabela 3. Inverta o dispositivo para a
posio normal e deixe transcorrer o tempo necessrio. Retire as amostras e junte as
alquotas de solvente em um bquer tarado. Lave os copos de vidro com no mais
de 20 mL por copo com o solvente utilizado no teste. Evapore o solvente em chapa
de aquecimento at aproximadamente 5 mL, que devem ser totalmente evaporados
em uma estufa a aproximadamente 105C. Esfrie o bquer em dessecador por 30
minutos e pese o resduo em uma balana analtica. Subtraia o peso obtido no teste
do branco obtendo um resduo total (R). O peso do branco deve ser < 1,0 mg/100
mL e < 30% do peso do resduo total.
Clculo
Calcule a migrao total em mg/cm2 de amostra, de acordo com o descrito no procedimento 290/IV.
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Portaria N 177, da Secretaria de Vigilncia Sanitria.
Dirio Oficial, Braslia, 08 de maro de 1999, Seo I, p. 9-14. Disposies gerais para
embalagens e equipamentos celulsicos em contato com alimentos.
304/IV Embalagens celulsicas Determinao do resduo solvel em clorofrmio
Quando a migrao total exceder o limite estabelecido no procedimento 290/IV,
prossiga com a extrao do resduo solvel em clorofrmio.
Material
Provetas, cpsulas de platina ou porcelana, funil de vidro, papel de filtro Whatman n 41,
bqueres, chapa de aquecimento, estufa, balana analtica e dessecador.
Reagente
Clorofrmio
Procedimento Adicione 50 mL de clorofrmio ao resduo total (R) obtido no procedimento 301/IV. Aquea cuidadosamente e filtre em papel de filtro Whatman n 41 (ou
564 - IAL
A correo para ceras, vaselinas e leos minerais necessria no caso em que estas
substncias faam parte da composio da amostra.
Material
Coluna cromatogrfica padro de 100 mm de dimetro interno por 60 cm ou bureta padro de 50 mL com dimetro interno de (10-11) mm com uma vlvula reguladora de vidro,
resina de perfluorcarbono ou equivalente. A coluna (ou bureta) pode ser opcionalmente
equipada com disco de vidro sinterizado e o topo da coluna pode ser opcionalmente ajustado com reserva de 100 mL de solvente, l de vidro fina, areia fina, proveta, bquer, estufa,
chapa de aquecimento, dessecador, balana analtica, pipetas e bales volumtricos.
Reagentes
n-Heptano
Sulfato de sdio anidro
xido de alumnio grau cromatogrfico de (80-200) mesh
Procedimento
Preparao da coluna Coloque uma pequena poro de l de vidro fina no fundo da
coluna (ou bureta), se esta no estiver equipada com disco de vidro sinterizado. Coloque
uma camada de (15-20) mm de areia fina. Mea 15 mm de xido de alumnio grau cromatogrfico de (80-200) mesh num cilindro graduado (para medir, bata cuidadosamente
o cilindro para acomodar o xido de alumnio). Transfira o xido de alumnio para a coluna cromatogrfica, batendo levemente durante e depois da transferncia. Coloque sobre
a camada de xido de alumnio uma camada de (10-15) mm de sulfato de sdio anidro e
no topo coloque uma poro de l de vidro, de (6-10) mm. Adicione 25 mL de heptano
na coluna com a vlvula reguladora aberta para permitir que o heptano passe atravs da
coluna at o nvel do lquido atingir o topo da coluna e ento feche a vlvula.
Procedimento para o resduo solvel em clorofrmio pesando 0,5 g ou menos Dissolva o
resduo solvel em clorofrmio obtido no procedimento 304/IV, adicionando 20 mL
de heptano e agitando se necessrio. Aquea cuidadosamente a t dissolver o resduo. O
heptano pode ser adicionado at 50 mL para auxiliar a dissoluo do resduo. Esfrie at
a temperatura ambiente (se a soluo se tornar turva, usar o procedimento descrito em
305/IV). Transfira o heptano para a coluna. Enxge o frasco com 10 mL de heptano e
adicione coluna. Deixe o lquido passar pela coluna, gotejando em torno de 2 mL/min
e colete a amostra eluda em bquer limpo e tarado. Quando o nvel do lquido alcanar o
topo da coluna, feche a vlvula reguladora temporariamente. Enxge o frasco que continha a amostra com (10-15) mL de heptano e adicione coluna. Elua a coluna com mais
heptano, coletando no total aproximadamente 100 mL de solvente. Evapore em chapa de
aquecimento o heptano eludo da coluna at aproximadamente 5 mL. Seque o restante
566 - IAL
em estufa a 105C por 30 minutos. Esfrie o frasco em dessecador por 30 minutos e pese o
resduo com preciso de 0,1 mg.
Clculo
Subtraia o peso obtido do peso do resduo solvel em clorofrmio (R) para obter o
resduo corrigido para cera, vaselina e leos minerais (RR). Este RR substitui o R nas
equaes apresentadas em 306/IV.
Procedimento para o resduo solvel em clorofrmio pesando mais que 0,5 g Dissolva o
resduo solvel em clorofrmio seguindo o mesmo procedimento descrito para o resduo
solvel em clorofrmio pesando 0,5 g ou menos usando uma maior quantidade de heptano. Transfira a soluo de heptano para um balo volumtrico de tamanho apropriado
e ajuste o volume com adio de heptano (exemplo: balo volumtrico de 250 mL para
2,5 g de resduo). Pipete uma alquota de 50 mL calculada para conter (0,1-0,5) g de
resduo solvel em clorofrmio e analise cromatograficamente como descrito no procedimento para o resduo solvel em clorofrmio pesando 0,5 g ou menos.
Neste caso, o resduo seco pesado de heptano deve ser multiplicado pelo fator de diluio para obter o peso do resduo de cera, vaselina e leo mineral a ser subtrado do
peso do resduo solvel em clorofrmio (R) para obter a correo de resduo solvel em
clorofrmio para cera, vaselina e leo mineral (RR). Este RR substitui R na equao
apresentada em 306/IV. No caso do extrato solvel em clorofrmio que contenha ceras
de alto ponto de fuso (ponto de fuso maior que 77C), pode ser necessria uma diluio
da soluo de heptano, em que uma alquota de 50 mL possa conter somente (0,1-0,2) g
de resduo solvel em clorofrmio.
Clculos
No caso do solvente simulante utilizado ser gua, solues de cido actico ou solues
alcolicas, a migrao total calculada de acordo com a seguinte frmula:
CONDIES DE ENSAIO
Simulante A
Simulante B
Simulante C
cido Actico
lcool a 15%
a 3% (m/v)
(v/v)
A . Contato prolongado t >24h
gua
Simulante D
n-heptano*
T< 5C
20C/48 h
20C/48 h
20C/48 h
20C/30 min
5C<T< 40C
50C/24 h
50C/24 h
50C/24 h
20C/30 min
40C/24 h
40C/24 h
20C/15 min
40C/24 h
40C/2 h
40C/2 h
40C/2 h
20C/15 min
65C/2h
40C/30 min
D. Elaborao
40C<T80C
65C/2 h
65C/2 h
80C<T100C
100C/30 min
100C/30 min
50C/30 min
T>100C
120C/2 h
120C/2 h
65C/2 h
50C/15 min
E. Envasado a quente
T>70C
T de ebulio e
esfriar a 38C
T de ebulio e
esfriar a 38C
*No caso de material celulsico revestido com parafina no necessrio o ensaio de migrao total com
o simulante n-heptano.
568 - IAL
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Portaria N 177, da Secretaria de Vigilncia Sanitria.
Dirio Oficial, Braslia, 08 de maro de 1999, Seo I, p. 9-14. Disposies gerais para
embalagens e equipamentos celulsicos em contato com alimentos.
307/IV Embalagens elastomricas Determinao de ditiocarbamatos, tiouramas e
xantogenatos
As embalagens, equipamentos e acessrios elaborados com material elastomrico devem ser analisadas da mesma forma que as embalagens plsticas, atendendo aos ensaios de
migrao total e especfica, utilizando-se os mesmos solventes simulantes e a mesma tabela de
temperatura e tempo de contato. Uma anlise adicional importante a determinao especfica de agentes de vulcanizao (ditiocarbamatos, tiouramas e xantogenatos), devido sua
toxicidade.
Material
Pipeta de 100 mL, bquer de 400 mL, trompa de vcuo, balo volumtrico de 25 mL,
manta aquecedora, proveta de 10 mL, espectrofotmetro UV/VIS e aparelhagem montada como segue: balo de 3 gargalos, ligado, em srie, a 2 retentores. Num dos gargalos
inserido um tubo de vidro para passagem de ar, no central, um funil de separao para
alimentao e, no outro, um refrigerante ligado, com um tubo em U, a um retentor
contendo, sobre esferas de vidro, 10 mL de soluo de hidrxido de sdio a 6,5% (para
reteno de eventual gs sulfdrico formado). O retentor ligado finalmente a um outro,
munido de vlvula de recolhimento, contendo, sobre esferas de vidro, 15 mL de reagente
colorimtrico. Neste ltimo retentor aplicado um pequeno vcuo que permite um fluxo
constante de ar (Figura 2).
Reagentes
Soluo de hidrxido de sdio a 6,5%
Cloreto estanoso
cido clordrico a 37%
Sulfeto de carbono
Reagente colorimtrico Pese 12 mg de acetato de cobre monoidratado e 25 g de dietanolamina,
transfira para um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com lcool.
Procedimento Coloque no balo de trs gargalos 100 mL da soluo proveniente da
prova de cesso. Adicione 2 g de cloreto estanoso e aplique o vcuo. Aquea o balo por
meio de uma manta aquecedora. Paralelamente, leve ebulio um bquer contendo
uma soluo de cido clordrico diludo (25 mL de cido clordrico a 37% em 200 mL
de gua). Coloque por meio de um funil de separao no balo. Recolha o sulfeto de
carbono desenvolvido, aps ter passado pelo retentor contendo soluo de hidrxido de
sdio a 6,5%, no segundo retentor, sobre o reagente colorimtrico. Interrompa o vcuo e
o aquecimento aps 45 minutos. Recolha o lquido amarelo, atravs da vlvula, em balo
volumtrico de 25 mL. Lave o retentor com 5 mL de lcool. Complete o volume com lcool. Faa a leitura em espectrofotmetro a 435 nm, em cela de um cm de caminho tico.
Como branco, utilize uma soluo preparada com 25 mL de reagente colorimtrico e 10
mL de lcool. Como referncia, use uma curva-padro de sulfeto de carbono. Expresse os
resultados em sulfeto de carbono.
Curva-padro de sulfeto de carbono Prepare solues contendo, em 10 mL, quantidades de sulfeto de carbono compreendidas entre (0-0,5) mg. Adicione a cada uma delas 15
mL de reagente colorimtrico e efetue, aps 15 minutos, leitura no espectrofotmetro a
435 nm, em cela de 1 cm de caminho tico. Faa um branco com 10 mL de lcool e 15
mL de reagente colorimtrico. Construa um grfico no qual figure, na abcissa, a quantidade de sulfeto de carbono e, na ordenada, os respectivos valores de absorbncia.
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Leis, Decretos etc. - Resoluo N 123, da Agncia Nacional de Vigilncia
Sanitria. Dirio Oficial, Braslia, 26 de junho de 2001. Disposies gerais para embalagens e equipamentos elastomricos em contato com alimentos.
Colaboradores
Lcia Tieco Fukushima Murata, Maria Ceclia Depieri Nunes, Maria Rosa da Silva de
Alcntara, Neus Sadocco Pascuet e Paulo Eduardo Masselli Bernardo.
570 - IAL
CaptuloCaptulo
XIV - Embalagens
e Equipamentos
em Contato
com Alimentos
XV - Conservas
Vegetais, Frutas
e Produtos
de Frutas
CAPTULO
XV
CONSERVAS
VEGETAIS, FRUTAS
E PRODUTOS DE
FRUTAS
IAL - 571
572 - IAL
XV
Conservas vegetais
Extrato de tomate o produto resultante da concentrao da polpa de frutos maduros e sos do tomateiro (Solanum lycopersicum) por processo tecnolgico adequado.
Ser classificado como pur de tomate se apresentar um teor de substncia seca menos
cloreto de sdio, de no mnimo 9% m/m e como extrato de tomate, de no mnimo
18% m/m. Nesses produtos, so determinados o resduo seco de acordo com o mtodo
015/IV, usando preferencialmente estufa a vcuo a 70C, cinzas conforme 018/IV e
pesquisados os corantes artificiais como em 051/IV. Eventualmente, determina-se a
sacarose conforme o mtodo 039/IV. Nos cogumelos em conserva efetuada a determinao de dixido de enxofre pelo mtodo 050/IV.
Picles o produto preparado com as partes comestveis de frutas e hortalias,
com ou sem casca, submetidos ou no a processo fermentativo natural. No mesmo
determinada a acidez, expressa em cido actico, eventualmente, o teor de cloretos
conforme o mtodo 028/IV ou 029/IV e slidos solveis como em 015/IV.
Preparo das amostras de conservas vegetais
Hortalias em conserva e picles Os caroos e as sementes devem ser removidos sem partilos. Homogeneze a amostra com trituradores, com qualquer equipamento mecnico
adequado ou em almofariz. As amostras enviadas em embalagens grandes devem ser
homogeneizadas e retiradas algumas pores para triturao.
Palmito, pimento e alcachofra em conserva Utilize para a determinao do pH e pesquisa do cido ctrico, o lquido de cobertura do produto separado por drenagem,
conforme descrito em 003/IV.
Extrato, pur e polpa de tomate Homogeneze totalmente a amostra por agitao.
Frutas e derivados
Tambm so abordados neste captulo os produtos de frutas, tais como: frutas
secas, cristalizadas e glaceadas, liofilizadas, doces de frutas em calda e compotas, gelias
de frutas, doces em massa, sucos de frutas, polpas, nctares e coco e seus derivados
(gua de coco, leite de coco). Algumas das definies contidas na legislao especfica
esto descritas abaixo:
Frutas secas Produtos obtidos pela perda parcial da gua das frutas, inteiras ou em
pedaos, por processos tecnolgicos adequados.
574 - IAL
Frutas liofilizadas - produtos obtidos pela desidratao quase completa das frutas, inteiras ou em pedaos, pelo processo de liofilizao.
Frutas cristalizadas e glaceadas Produtos preparados com frutas, nas quais se substitui
parte da gua de constituio por acar, com tecnologia adequada, recobrindo-as ou
no com uma camada de sacarose.
As determinaes realizadas em frutas secas, liofilizadas e cristalizadas incluem:
umidade, acidez titulvel, acidez em cidos orgnicos, glicdios redutores em glicose (038/IV), glicdios no redutores em sacarose (039/IV) cinzas (018/IV), fibra alimentar (045/IV e 046/IV) dixido de enxofre (050/IV), minerais e metais pesados
(cap. XXIII).
Gelias de frutas Produtos preparados a partir de frutas e/ou sucos, misturados com
acar, com adio de pectina, cidos e outros ingredientes permitidos, podendo apresentar frutas inteiras, partes e/ou pedaos sob variadas formas. Esta mistura ser convenientemente processada at se obter uma concentrao e consistncia semi-slida
adequadas. As determinaes usuais neste produto so: slidos totais, slidos solveis
em graus Brix, slidos insolveis em gua, pH, acidez titulvel, acidez em cidos orgnicos, glicdios redutores em glicose (038/IV), glicdios no redutores em sacarose
(039/IV), cinzas (018/IV), protdios (036/IV ou 037/IV), fibra alimentar (045/IV e
046/IV), corantes orgnicos artificiais (051/IV), alm da pesquisa de outros aditivos e,
eventualmente, minerais e metais pesados (cap. XXIII).
Doces em massa ou pasta Produtos resultantes do processamento das partes comestveis
desintegradas de vegetais, com acar e outros ingredientes e aditivos permitidos, at se
obter uma concentrao e consistncia adequadas. Na anlise destes produtos, as determinaes usuais so: slidos totais, slidos solveis em graus Brix, slidos insolveis em
gua , pH (017/IV), acidez titulvel, acidez em cidos orgnicos, glicdios redutores em
glicose (038/IV), glicdios no redutores em sacarose (039/IV), cinzas (018/IV), protdios
(036/IV ou 037/IV), lipdios (para produtos que contenham este nutriente) (032/IV,
033/IV ou 034/IV), fibra alimentar (045/IV e 046/IV), corantes orgnicos artificiais
(051/IV) e, eventualmente, minerais e metais pesados (cap. XXIII).
Frutas em conserva Produtos preparados com frutas frescas, congeladas ou previamente preservadas, inteiras ou em pedaos, envasadas praticamente cruas ou pr-cozidas,
imersas ou no em lquido de cobertura ou calda, podendo conter opcionalmente outros ingredientes e, finalmente, submetidos a tratamento adequado. Nestes produtos
as anlises usuais incluem, no lquido de cobertura: slidos solveis em graus Brix, pH
IAL - 575
576 - IAL
Material
Tamis no 8, balana semi-analtica, bquer de 800 mL, esptula metlica e basto de
vidro.
Procedimento Abra a embalagem do produto e pese. Transfira o contedo total da
amostra para tamis n 8. Inverta cuidadosamente as frutas que ficarem com suas cavidades para cima. Produtos de frutas mais macias devem ser drenados atravs de tamis
inclinado, sem outra manipulao. Drene por dois minutos. Pese o recipiente vazio.
Coloque no recipente o produto slido e pese novamente.
Clculo
N = perda de peso em g
P = massa da amostra em g
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods
of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, (method 934.06).
Arlington: A.O.A.C.,1995. chapter 37. p. 4.
310/IV Frutas e produtos de frutas Determinao da acidez titulvel por volumetria com indicador
Este mtodo aplicvel em solues claras ou levemente coloridas nos diversos
tipos de produtos de frutas. O mtodo baseia-se na titulao com hidrxido de sdio
at o ponto de viragem com o indicador fenolftalena.
Material
Balana analtica, esptula metlica, pisseta plstica, frasco Erlenmeyer de 250 mL, bureta
de 25 mL, pipetas volumtricas de 10 e 20 mL e pipeta graduada de 1 mL.
Reagentes
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 M
Soluo de fenolftalena
Procedimento Pese (5-10) g ou pipete de (10-20) mL da amostra homogeneizada em
frasco Erlenmeyer, dilua com aproximadamente 100 mL de gua e adicione 0,3 mL de
soluo de fenolftalena para cada 100 mL da soluo a ser titulada. Titule com soluo
de hidrxido de sdio 0,1 M sob agitao constante, at colorao rsea persistente por
30 segundos.
IAL - 579
Clculo
580 - IAL
Referncias bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods
of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, (method 942.15 B).
Arlington: A.O.A.C.,1995. chapter 37. p. 11.
BRASIL, Leis, Decretos, etc. Portaria n o 76 de 27-11-86, do Ministrio da
Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 03-12-86. Seo I, p. 18152-18173.
312/IV Frutas e produtos de frutas Determinao da acidez titulvel em cido
orgnico
Este mtodo aplicvel aos diversos produtos de frutas pela determinao da
acidez, expressa em g de cido orgnico por cento, considerando o respectivo cido
predominante na amostra, ou conforme determina o padro de identidade e qualidade
do produto analisado.
Clculo
PM (g)
192
150
134
90
60
n
3
2
2
1
1
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.183.
IAL - 581
582 - IAL
N = n de gramas do resduo
P = massa da amostra em g
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.184.
315/IV Frutas e produtos de frutas Determinao de slidos solveis por refratometria
Aplicvel em amostras de produtos de frutas com ou sem a presena de slidos
insolveis. A determinao de slidos solveis pode ser estimada pela medida de seu
ndice de refrao por comparao com tabelas de referncia.
IAL - 583
Material
Refratmetro de Abb, com escala graduada de Brix, em pelo menos 0,5%, banho
termostatizado com circulao de gua (20 0,2)C (opcional), algodo, esptula metlica, basto de vidro e bquer de 25 mL.
Reagente
lcool
Procedimento Ajuste o refratmetro para a leitura de n em 1,3330 com gua a 20C,
de acordo com as instrues do fabricante. Transfira de 3 a 4 gotas da amostra homogeneizada para o prisma do refratmetro. Circule gua temperatura constante pelo
equipamento, de preferncia a 20C, no tempo suficiente para equilibrar a temperatura
do prisma e da amostra e mantenha a gua circulando durante a leitura, observando
se a temperatura permanece constante. Aps um minuto, leia diretamente na escala os
graus Brix. Se a determinao for realizada temperatura ambiente, diferente de 20C,
corrija a leitura em relao temperatura segundo a Tabela 2. Se as partculas slidas
da amostra prejudicarem a nitidez da leitura, filtre em papel de filtro ou em pedao de
algodo.
Tabela 2 Correo para obter o valor real do grau Brix em relao temperatura
Temperatura
C
Temperatura
C
21
0,08
22
0,16
13
0,54
23
0,24
14
0,46
24
0,32
15
0,39
25
0,40
16
0,31
26
0,48
17
0,23
27
0,56
18
0,16
28
0,64
19
0,08
29
0,73
20
0,00
30
0,81
Nota: para sucos de frutas ctricas, corrija o Brix obtido, em relao acidez da amostra
calculada em cido ctrico, a partir da concentrao de 1%, conforme a Tabela 3.
584 - IAL
Tabela 3 Correo do valor dos graus Brix em relao ao cido ctrico contido na
amostra
cido ctrico anidro
(porcentagem em massa)
1,0
0,20
1,2
0,24
1,4
0,28
1,6
0,32
1,8
0,36
2,0
0,39
2,2
0,43
2,4
0,47
2,6
0,51
2,8
0,54
3,0
0,58
3,2
0,62
3,4
0,66
3,6
0,70
3,8
0,74
4,0
0,78
4,2
0,81
4,4
0,85
4,6
0,89
4,8
0,93
5,0
0,97
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.
1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985.
p.181-182.
BRASIL, Leis, Decretos, etc. - Portaria no 76 de 27-11-86, do Ministrio da Agricultura. Dirio Oficial, Braslia, 03-12-86. Seo I, p. 18152-18173.
IAL - 585
Referncia bibliogrfica
BRASIL, Leis, Decretos, etc. - Portaria no 76 de 27-11-86, do Ministrio da Agricultura.
Dirio Oficial, Braslia, 03-12-86. Seo I, p. 18152-18173.
317/IV Coco ralado Determinao da acidez titulvel
aplicvel para amostras de coco ralado e leite de coco.
Material
Balana analtica, esptula metlica, pisseta plstica, frasco Erlenmeyer de 125 mL, bureta de 10 mL e pipeta graduada de 1 mL.
Reagentes
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 N
Soluo de fenolftalena
Procedimento Pese 5 g de amostra homogeneizada em frasco Erlenmeyer, dilua com
aproximadamente 50 mL de gua, tampe o frasco e deixe em contato por 30 minutos.
Adicione 4 gotas de fenolftalena. Titule com soluo de hidrxido de sdio 0,1 N, sob
agitao constante, at colorao rsea persistente por 30 segundos.
586 - IAL
Clculo
de 9 e filtre novamente para outro frasco Erlenmeyer. Transfira o filtrado para a bureta.
Coloque num balo de fundo chato de 250 mL, com auxlio de pipetas de 10 mL, cada
uma das solues de Fehling A e B, adicionando 40 mL de gua. Aquea at ebulio.
Adicione, s gotas, a soluo da bureta sobre a soluo do balo em ebulio, agitando
sempre, at que esta soluo passe de azul a incolor (no fundo do balo dever ficar um
resduo vermelho de xido de cobre I - Cu2O).
Clculo
A = n de mL da soluo de P g da amostra
a = n de g de glicose correspondente a 10 mL da soluo de Fehling
P = massa da amostra em g
v = n de mL da soluo da amostra gasto na titulao
Referncias Bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods
of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, (method 958.06).
Arlington: A.O.A.C.,1995. chapter 39. p. 21.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 49-50.
319/IV Coco ralado Determinao de glicdios no redutores em sacarose
Material
Balana analtica, chapa de aquecimento, banho-maria, esptula de metal, bquer de
100 mL, pisseta plstica, funil de vidro de 7 cm, proveta de 50 mL, balo volumtrico
de 100 mL, frasco Erlenmeyer de 125 mL, balo de fundo chato de 250 mL, pipetador
automtico de 5 mL ou pipeta graduada de 5 mL, pipeta volumtrica de 10 mL, bureta
de 10 mL e papel indicador de pH.
Reagentes
cido clordrico
Soluo de acetato de zinco a 12% m/v
588 - IAL
A = n de mL da soluo de P g da amostra
a = n de g de glicose correspondente a 10 mL da soluo de Fehling
P = massa da amostra em g
v = n de mL da soluo da amostra gasto na titulao
B = n de g de glicose por cento, obtido em glicdios redutores em 323/IV
Referncias Bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods
of Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, (method 958.06).
Arlington: A.O.A.C.,1995. chapter 39. p. 21.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
50-51.
IAL - 589
sem molhar internamente o gargalo do butirmetro, se isto acontecer, limpe cuidadosamente com papel absorvente. Complete o volume do butirmetro com gua at prximo ao gargalo. Arrolhe o butirmetro, envolva-o em uma flanela e agite at completa
dissoluo. Centrifugue a (1200 100) rpm durante 15 minutos, quando for usada a
termocentrfuga. No caso de usar a centrfuga de Gerber, centrifugue por 5 minutos a
1200 rpm, leve para um banho-maria a (63 2)C por 2 a 3 minutos com a rolha para
baixo, centrifugue novamente a 1200 rpm por mais 15 minutos. Retire o butirmetro
da termocentrfuga ou da centrfuga de Gerber na posio vertical (rolha para baixo).
Maneje a rolha colocando a camada amarelo-clara transparente (lipdios) dentro da
haste graduada do butirmetro. O valor obtido na escala corresponde diretamente a
porcentagem de lipdios, sendo realizada a leitura no menisco inferior.
Referncia bibliogrfica
SILVA, P.H.F.; PEREIRA, D.B.C.; OLIVEIRA, L.L.; COSTA JUNIOR, C.G.
Fsico - Qumica do Leite e Derivados Mtodos Analticos. Juiz de Fora: Oficina de
Impresso Grfica e Editora Ltda, 1997. p. 77-79.
323/IV Leite de coco Determinao de glicdios redutores em glicose
Procedimento Pipete 5 mL de amostra homogeneizada e proceda conforme 038/IV
324/IV Leite de coco Determinao de glicdios no redutores em sacarose
Procedimento Pipete 5 mL de amostra homogeneizada e proceda conforme 039/IV.
Colaboradores
Cristiane Bonaldi Cano, Letcia Arajo Farah Nagato, Mrcia Regina Pennacino do Amaral
Mello, Maria Cristina Duran e Mrio Tavares
IAL - 591
CAPTULO
XVI
LEOS E
GORDURAS
IAL - 593
594 - IAL
XVI
Captulo XVI - leos e Gorduras
LEOS E GORDURAS
IAL - 595
Material
Balana analtica, frasco Erlenmeyer de 125 mL, proveta de 50 mL e bureta de 10 mL.
Reagentes
Soluo de ter-lcool (2:1) neutra
Soluo fenolftalena
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 M ou 0,01 M
Procedimento As amostras devem estar bem homogneas e completamente lquidas.
Pese 2 g da amostra em frasco Erlenmeyer de 125 mL. Adicione 25 mL de soluo de
ter-lcool (2:1) neutra. Adicione duas gotas do indicador fenolftalena. Titule com soluo de hidrxido de sdio 0,1 M ou 0,01 M at o aparecimento da colorao rsea, a
qual dever persistir por 30 segundos.
Clculos
596 - IAL
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1.:
Mtodos Qumicos e Fsicos para Anlise de Alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
245-246.
326/IV Determinao do ndice de perxido
Este mtodo determina todas as substncias, em termos de miliequivalentes de
perxido por 1000 g de amostra, que oxidam o iodeto de potssio nas condies do teste.
Estas substncias so geralmente consideradas como perxidos ou outros produtos similares resultantes da oxidao da gordura. aplicvel a todos os leos e gorduras normais,
incluindo margarina e creme vegetal, porm suceptvel e portanto qualquer variao no
procedimento do teste pode alterar o resultado da anlise.
Material
Balana analtica, frasco Erlenmeyer de 125 ou 250 mL com tampa esmerilhada, proveta
de 50 mL, pipeta graduada de 1 mL, bureta de 10 mL com sub-divises de 0,05 mL.
Reagentes
cido actico
Clorofrmio
Soluo de tiossulfato de sdio 0,1 N ou 0,01 N
Amido solvel
Iodeto de potssio
Soluo de cido actico-clorofrmio (3:2) v/v
Soluo saturada de iodeto de potssio Pese 30 g de iodeto de potssio e adicione 21 mL
de gua. Conserve a soluo em frasco mbar e utilize no mesmo dia da sua preparao.
Soluo de amido 1% m/v
Procedimentos
leos e gorduras normais Pese (5 0,05) g da amostra em um frasco Erlenmeyer de
250 mL (ou 125 mL) . Adicione 30 mL da soluo cido actico-clorofrmio 3:2 e agiIAL - 597
Material
Refratmetro de Abb equipado com escala-padro e algodo.
Reagente
ter de petrleo ou outro solvente.
Procedimento
Ajuste da aparelhagem Ajuste previamente o refratmetro de Abb com gua. Faa circular uma corrente de gua a 40C pelo aparelho. Deixe estabilizar a temperatura. Ajuste
a 40C para leos e a 60C para amostras com ponto de fuso mais alto. A temperatura
do refratmetro deve ser controlada a 0,1C e, para isto, prefervel usar banho de gua
controlado termostaticamente e com circulao de gua. O instrumento calibrado seguindo as instrues do fabricante, com lquido de pureza e ndice de refrao conhecidos
ou, em alguns casos, satisfatrio usar um prisma de vidro de ndice de refrao terico
de 1,333 20 C. Se o refratmetro for equipado com um compensador, uma lmpada
eltrica como a de vapor de sdio, torna-se necessria.
Tratamento da amostra Funda a amostra, caso no esteja lquida. Filtre para remover
quaisquer impurezas e traos de umidade. A amostra deve estar completamente seca.
Certifique-se que os prismas estejam limpos e completamente secos e ento coloque no
prisma inferior algumas gotas da amostra. Feche os prismas e trave firmemente. Deixe por
1 a 2 minutos at que a amostra atinja a temperatura do aparelho. Ajuste o instrumento
e a luz para obter a leitura mais distinta possvel e, ento, determine o ndice de refrao.
A leitura na escala dar diretamente o ndice de refrao absoluto a 40C, com quatro
casas decimais. Realize pelo menos trs leituras e calcule a mdia. A variao das leituras
deve ser igual a 0,0002. Limpe os prismas entre as leituras com algodo umedecido com
solvente e deixe secar.
Clculo para correo da temperatura
R+ K (T- T) = R
R = leitura temperatura T (C)
R= leitura temperatura T (C)
T = temperatura padro (C)
T = temperatura na qual a leitura de R foi feita (C)
K = 0,000365 para gorduras e 0,0003885 para leos
IAL - 599
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos Qumicos e Fsicos para Anlise de Alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 247.
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official methods and recommended
practices of the American Oil Chemists Society. 4th ed. Champaign, USA, A.O.C.S.,
1990. [A.O.C.S. Official method Cc 7-25].
328/IV Determinao do ndice de saponificao
O ndice de saponificao a quantidade de lcali necessrio para saponificar uma
quantidade definida de amostra. Este mtodo aplicvel a todos os leos e gorduras e
expressa o nmero de miligramas de hidrxido de potssio necessrio para saponificar
um grama de amostra.
Material
Frascos Erlenmeyer de 250 mL, condensador de gua e banho-maria ou chapa aquecedora com controle de temperatura.
Reagentes
Soluo de cido clordrico 0,5 M
Hidrxido de potssio
Soluo de fenolftalena
lcool
Soluo alcolica de hidrxido de potssio a 4% m/v
Procedimento Funda a amostra, se no estiver completamente lquida. Filtre em papel
de filtro para remover impurezas e traos de umidade. A amostra deve estar completamente seca. Pese uma quantidade de amostra, de tal modo que sua titulao corresponda
de 45 a 55% da titulao do branco. Esta massa normalmente de (4-5) g. Adicione
50 mL da soluo alcolica de KOH. Prepare um branco e proceda ao andamento analtico,
simultaneamente com a amostra. Conecte o condensador e deixe ferver suavemente at
a completa saponificao da amostra (aproximadamente uma hora, para amostras normais). Aps o resfriamento do frasco, lave a parte interna do condensador com um pouco
de gua. Desconecte do condensador, adicione 1 mL do indicador e titule com a soluo
600 - IAL
Referncia bibliogrfica
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official methods and recommended
practices of the American Oil Chemists Society. 4th ed. Champaign, USA, A.O.C.S.,
1995 [A.O.C.S. Recommended Practice Cd 1 25].
330/IV Determinao do ndice de iodo por clculo
O ndice de iodo determinado por clculo aplica-se anlise de triglicerdios e de
cidos graxos livres e seus produtos hidrogenados. Este mtodo determina o ndice de
iodo de leos comestveis diretamente da composio de cidos graxos insaturados obtidos a partir da anlise por cromatografia em fase gasosa.
Procedimento Determine a composio de cidos graxos da amostra a ser analisada por
cromatografia em fase gasosa (344/IV).
Clculos
(% cido palmitolico x 0,950) + (% cido olico x 0,860) + (% cido linolico x 1,732)
+ (% cido linolnico x 2,616) + (% cido gadolico x 0,785) + (% cido ercico x 0,723)
= ndice de iodo dos triglicerdios
(% cido palmitolico x 0,990) + (% cido olico x 0,8986) + (% cido linolico x 1,810)
+ ( % cido linolnico x 2,735) + (cido gadolico x 0,8175) + (% cido ercico x 0,7497)
= indice de iodo dos cidos graxos livres
Nota: para leos com contedo de matria insaponificvel superior a 0,5% (ex.: leos de
peixe), o resultado tende a ser inferior ao determinado pelo mtodo de Wijs.
Referncia bibliogrfica
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official methods and recommended
practices of the American Oil Chemists Society. 4th ed. Champaign, USA, A.O.C.S.
1995. [A.O.C.S. Recommended Practice Cd 1c-85].
331/IV Determinao do ndice de Bellier
Na anlise dos leos, a determinao do ndice de Bellier utilizada para a identiIAL - 603
p = n de g de resduo
P = n g da amostra
Referncias bibliogrficas
AMERICAN OIL CHEMISTS SOCIETY. Official methods and recommended
praticces of the American Oil Chemists`Society. 4th ed. Champaign, USA, A.O.C.S.
608 - IAL
IAL - 609
610 - IAL
Matria insaponificvel inclui aquelas substncias que freqentemente se encontram dissolvidas nas gorduras e leos e que no podem ser saponificadas por tratamento
usual com soda, mas so solveis em solventes normais para gorduras e leos. Incluem-se
neste grupo de componentes, lcoois alifticos de alto peso molecular, esteris, pigmentos
e hidrocarbonetos. O mtodo aplicvel para gorduras e leos animais e vegetais, no
sendo adequado para gorduras e leos contendo quantidade excessiva de matria insaponificvel, como os leos marinhos. Este mtodo tambm no aplicvel para alimentos
com elevado teor de gordura.
Material
Extrator de gordura de capacidade de 200 mL com tampa de vidro, frascos Erlenmeyer
ou Soxhlet de 100 a 200 mL, funil de separao de 500 mL, sifo de vidro e balana
analtica.
Reagentes
lcool a 95% v/v
lcool a 10% v/v
Soluo de hidrxido de potssio a 50% m/v
ter de petrleo
Soluo de hidrxido de sdio 0,02 M
Soluo de fenolftalena
Procedimento Pese cerca de 5 g de amostra bem misturada em um frasco Erlenmeyer
ou Soxhlet. Adicione 30 mL de lcool a 95% e 5 mL de KOH a 50%. Aquea e deixe
em refluxo por 1 hora ou at completa saponificao. Transfira para o funil de separao,
ainda quente, usando um total de 40 mL de lcool 95%. Complete a transferncia com
gua quente e depois fria at um volume total de 80 mL. Lave ainda o frasco com um
volume de 5 mL de ter de petrleo e transfira para o funil. Esfrie at temperatura ambiente e
adicione 50 mL de ter de petrleo. Insira a tampa e agite vigorosamente por um minuto at o
total clareamento das duas camadas. Use sifo de vidro para remover completamente a camada superior sem incluir qualquer poro da camada inferior. Receba as fraes de ter
de petrleo em um funil de separao de 500 mL. Repita a extrao pelo menos seis vezes,
usando pores de 50 mL de ter de petrleo, agitando vigorosamente em cada extrao.
Lave os extratos combinados no funil de separao trs vezes, usando 25 mL de lcool
a 10%, agitando vigorosamente e retirando a camada alcolica depois de cada extrao.
Evite remover qualquer parte da camada de ter de petrleo. Transfira o extrato de ter
de petrleo para um bquer tarado e evapore at a secagem em banho de gua. Depois de
IAL - 611
todo o solvente ter sido evaporado, complete a secagem em estufa a vcuo temperatura
de (75-80)C e presso interna de 200 mm de Hg. Esfrie em dessecador e pese. Depois
da pesagem, dissolva o resduo em 50 mL de lcool a 95% a 50 C previamente neutralizado contendo fenolftalena como indicador. Titule com NaOH 0,02 M at o ponto de
viragem. Corrija a massa do resduo para cidos graxos livres contidos, usando a seguinte
relao: 1 mL de 0,02 M de NaOH equivalente a 0,0056 g de cido olico. Faa um
branco sem a presena de leo ou gordura e proceda da mesma maneira que a amostra.
Clculo
IAL - 613
344/IV Anlise por cromatografia em fase gasosa dos steres metlicos de cidos
graxos
A determinao da composio de cidos graxos a partir da anlise dos steres
metlicos auxilia no estudo de fraudes e na avaliao do contedo nutricional de leos
e gorduras de origem vegetal ou animal. Por este mtodo, os steres metlicos de cidos
graxos so separados, identificados e quantificados por cromatografia em fase gasosa. O
mtodo aplicvel para a determinao de steres metlicos de cidos graxos contendo de
4 a 24 tomos de carbono, obtidos a partir de cidos graxos de leos e gorduras.
Material
Cromatgrafo a gs com sistema de injeo para coluna capilar (com capacidade de diviso da amostra) e coluna empacotada (com o menor volume morto possvel), forno com
variao mxima de 1C para colunas empacotadas, 0,1C para colunas capilares e com
temperatura programvel (fundamental para anlise de steres metlicos de cidos graxos
com menos de 16 tomos de carbono na molcula); detector de ionizao de chama
(DIC); seringa de 10 L graduada em 0,1 L e registrador ou integrador ou computador.
Coluna empacotada
A coluna deve ser construda com um material inerte s substncias que sero analisadas,
isto , vidro ou ao inox. Deve possuir comprimento de (1-3) m e dimetro interno de
(2-4) mm.
Suporte de empacotamento So empregadas, normalmente, terras diatomceas que
sofreram lavagem cida e silanizao. O tamanho das partculas deve estar compreendido na faixa de (60-120) e (125-250) mesh, sendo que a variao entre elas no deve
ser superior a 25 m.
Fase estacionria Pode ser empregado um lquido viscoso polar de polisteres, isto ,
polisuccinato de dietileno glicol (DEGS), polisuccinato de butanediol, poliadipato de
etileno glicol. A fase estacionria deve corresponder de (5-20)% do empacotamento da
coluna.
Condicionamento de uma coluna nova Desconecte a coluna do lado do detector e
gradativamente aquea o forno a aproximadamente 10C acima da temperatura de operao, sempre passando o gs de arraste. Mantenha esta temperatura, passando pela coluna o gs de arraste com fluxo de (20 - 60) mL/min por aproximadamente 16 horas e
por mais 2 horas a 20C acima da temperatura de operao. Cuidado para no exceder a
IAL - 617
tamanho da amostra para anlise. O tamanho da amostra escolhido deve situar-se dentro
da faixa linear de resposta do detector.
Para coluna capilar considere as mesmas variveis citadas para a coluna empacotada. A
eficincia (nmero de pratos tericos) obtida para cada componente separado por uma
coluna capilar deve ser ao redor de 100000 ou no mnimo 3000 pratos por metro de
coluna.
Dependendo do tipo de amostra e da coluna disponvel deve-se otimizar as condies de
anlise para se obter a melhor eficincia e resoluo dos componentes. Para a anlise de
steres metlicos de cidos graxos de leos vegetais, recomenda-se, por exemplo,as condies do mtodo Method Ce 1h-05 ou a descrita abaixo:
Coluna de fase estacionria ciano propil siloxona de 50 a 100 m, com 0,25 m de espessura do filme e 0,25 mm de dimetro interno.
Gs de arraste, hidrognio, velocidade linear entre (15 - 25)mL/min, razo de diviso da
amostra 1:50.
Exemplo: coluna de 50 m
Temperatura programada da coluna de 80 a 220C, sendo a velocidade de aquecimento
de 5C por minuto. Mantenha a 220C por 10 minutos.
Temperatura do injetor: 230C
Temperatura do detector: 240C
Determinao da eficincia e resoluo Analise uma mistura de steres metlicos dos
cidos esterico e olico com propores equivalentes dos dois compostos. Calcule o nmero de pratos tericos n (eficincia) e a resoluo pelas frmulas:
Com determinada programao de temperatura (aumento linear de temperatura) a equao simplificada para:
Clculos
Normalizao
Exceto em casos excepcionais, assuma que todos os componentes da amostra estejam representados no cromatograma. Desta forma a soma das reas de todos os picos representar 100% dos constituintes (eluio total). Se o equipamento incluir um computador ou
integrador, utilize seus recursos para o clculo. Caso contrrio, determine a rea de cada
pico multiplicando a altura pela largura na meia altura. Quando necessrio, considere
as vrias atenuaes utilizadas durante o registro dos cromatogramas. De uma maneira
geral, quando no esto presentes quantidades significativas de componentes com menos
de 12 tomos de carbono, calcule a porcentagem de rea do pico correspondente ao constituinte, em relao soma das reas de todos os picos. O resultado ser expresso como
porcentagem de rea do componente (ster metlico).
IAL - 621
Agi
Pode ser feito o clculo terico dos fatores de correo do detector de ionizao de chama
(DIC):
622 - IAL
IAL - 623
IAL - 625
626 - IAL
Preparao da amostra A amostra lquida de leo deve ser homogeneizada (no filtre).
Para amostra slida, transfira uma certa quantidade representativa (no menos que 10%
do peso total da amostra) para um bquer e homogeneze cuidadosamente. Faa a fuso
em um banho-maria onde a temperatura no exceda a 40oC. O preparo da amostra deve
ser feito na ausncia de luz. Pese com preciso, entre 0,2 e 0,5 g da amostra de leo e
transfira para um balo volumtrico de 25 mL com n-hexano. Agite para dissolver e complete o volume com o mesmo solvente. Quando utilizar um detector de fluorescncia,
podem ser necessrias algumas diluies para a obteno de um cromatograma adequado.
A amostra deve estar protegida da luz durante os procedimentos de preparo e deve ser
analisada no mesmo dia.
Determinao de tocoferis na amostra Injete 20 L da amostra e identifique os tocoferis (e tocotrienis) presentes por comparao com os tempos de reteno dos padres.
Registre as reas dos picos dos tocoferis e dos tocotrienis. Faa duas determinaes sucessivas para cada tocoferol, usando alquotas-teste preparadas recentemente. O resultado
final deve ser a mdia de duas determinaes obedecendo a exigncia da repetitividade
(vide resultados estatsticos do estudo colaborativo do mtodo IUPAC 2432).
Curva de calibrao Injete cerca de 20 L das solues de mistura dos padres de
tocoferis. Repita a injeo e verifique se os cromatogramas obtidos so reprodutveis.
Construa as curvas de calibrao pelo mtodo de padronizao externa.
Clculos
A quantificao dos tocoferis feita por padronizao externa. Os teores dos tocoferis
so calculados a partir de curvas de calibrao construdas pelos softwares dos equipamentos ou em planilhas de clculo (ex: excel). Para a construo da curva utilize no mnimo
cinco pontos, isto , no mnimo cinco nveis de concentrao de cada padro. As curvas
obtidas relacionam a concentrao dos padres e a resposta do detector (rea).
O teor de -tocoferol presente em uma amostra, em g/g, dado por:
Colaboradores
Emy Takemoto, Mrio Tavares, Miriam Solange Fernandes Caruso, Regina Sorrentino Minazzi
Rodrigues e Sabria Aued Pimentel
IAL - 629
CAPTULO
XVII
OVOS E
PRODUTOS
DE OVOS
IAL - 631
632 - IAL
XVII
Captulo XVII - Ovos e Produtos de Ovos
Clculo
634 - IAL
Colaborador
Odair Zenebon
IAL - 635
CAPTULO
XVIII
PESCADO E
DERIVADOS
IAL - 637
638 - IAL
XVIII
Captulo XVIII - Pescado e Derivados
PESCADO E DERIVADOS
escado todo animal que vive normalmente em gua doce ou salgada e que
serve para alimentao. Pescado fresco aquele que no sofreu qualquer processo de conservao, exceto pelo resfriamento, e que mantm seus caracteres
sensoriais essenciais inalterados. O pescado ser designado pela espcie animal
a que pertence ou pelo seu nome comum, por exemplo: sardinha, tainha, camaro, siri,
polvo, lula, marisco. Vrias so as determinaes que podem avaliar o grau de conservao do produto, como a eletromtrica do pH, a de bases volteis totais e a de histamina
por espectrofluorimetria, alem da reao de ber para gs sulfdrico. Outras determinaes relacionam-se composio qumica do pescado, como a de lipdios totais.
349/IV Reao de ber para gs sulfdrico
A decomposio bacteriana dos aminocidos sulfurados da carne de pescado libera enxofre, o qual em meio cido transforma-se em gs sulfdrico (H2S). A reao de
ber indicada para avaliar o estado de conservao do pescado fresco e de produtos
relacionados em geral, como o pescado curado. Fundamenta-se na combinao do gs
sulfdrico com soluo de acetato de chumbo, produzindo enegrecimento do papel de
filtro previamente tratado com a referida soluo-reagente. Esta prova no se aplica no
caso de produtos condimentados e em conservas de pescado que foram processadas em
alta temperatura e baixa presso.
Para a realizao da reao de ber para gs sulfdrico, proceda como em 004/IV.
IAL - 639
350/IV Determinao do pH
A determinao de acidez pode fornecer um dado valioso na apreciao do estado de conservao de pescados e derivados. Um processo de decomposio, seja por
hidrlise, oxidao ou fermentao, altera quase sempre o pH. A medida do pH em
pescado e derivados um dado indicativo do estado de conservao, entretanto para a
avaliao mais segura torna-se tambm necessria a realizao das anlises microbiolgica, qumica e sensorial.
Para a determinao eletromtrica do pH de pescados, proceda como em 017/IV.
351/IV Determinao de bases volteis totais
A deteriorao do pescado estocado sob refrigerao devida ao enzimtica
e bacteriana e resulta na produo de vrios compostos, sendo os mais freqentes: trimetilamina, dimetilamina, amnia e cidos volteis. A porcentagem de bases volteis
pode ser uma indicao do grau de conservao do pescado, dependendo da espcie.
Normalmente, para espcies como caes, raias, siris, o valor de BVT elevado sem
que, necessariamente, estejam deterioradas.
Neste mtodo, a amnia e as aminas volteis so destiladas por arraste de vapor,
em meio levemente alcalino e quantificadas por volumetria de neutralizao.
Material
Vidro de relgio, balo de Kjeldahl de 800 mL, proveta de 300 mL, condensador de
Liebig, frasco Erlenmeyer de 500 mL e bureta de 15 mL.
Reagentes
cido sulfrico 0,05 M
Hidrxido de sdio 0,1 M
xido de magnsio
Silicone antiespumante
Soluo alcolica de vermelho de metila a 0,2% m/v
Procedimento Prepare a amostra do peixe, tirando as espinhas e vsceras. Moa a carne e homogeneze. Pese de 5 a 10 g da amostra (para camares, siris e cao, pese 5 g
e, para outras espcies de pescados pese 10 g), transfira para um balo de destilao de
Kjeldahl, junte 300 mL de gua, 1 a 2 g de xido de magnsio e umas gotas de silicone
antiespumante. Ligue o balo ao conjunto de destilao. Mergulhe a extremidade afunilada do condensador em 15 mL de cido sulfrico 0,05 M contido no frasco Erlenmeyer
de 500 mL. Adicione trs gotas do indicador vermelho de metila, aquea at ebulio
e destile por 25 minutos. Titule o excesso de cido sulfrico 0,05 M com soluo de
640 - IAL
diria de histamina a 10 g/mL, prepare solues contendo respectivamente 0,5 g/5 mL,
1 g/5 mL e 1,5 g/5 mL , diluindo respectivamente 1, 2 e 3 mL da soluo intermediria com 100 mL de cido clordrico 0,1 M. A validade destas solues de um dia.
Procedimento
Preparao da amostra Para amostras de peixes congelados, deixe temperatura ambiente e drene o lquido. Limpe, retirando escamas, espinha, cauda, cabea, nadadeiras
e vsceras. No caso de peixes pequenos (menores de 15 cm), use de cinco a dez unidades
e para os grandes, trs unidades. Corte os peixes transversalmente, subdividindo-os
em partes de aproximadamente 2,5 cm. Moa em processador e homogeneze a massa
obtida da carne do pescado.
Pese 10 g da amostra, adicione 50 mL de metanol e homogeneze em agitador
mecnico por dois minutos. Transfira para um balo volumtrico de polipropileno de 100 mL, lavando com metanol e aquea a 60C, por 15 minutos, em banho-maria. Esfrie temperatura ambiente, complete o volume com metanol e filtre atravs de papel de filtro utilizando funil de polipropileno. Esta soluo poder
ser conservada na geladeira por vrias semanas. Passe (4 5)mL de gua na coluna e descarte o eluato. Com uma pipeta volumtrica adicione 1 mL do extrato da
amostra seguido da adio de (4 - 5)mL de gua. Imediatamente ao incio do escoamento do lquido pela coluna, colete o filtrado em um balo volumtrico de
50 mL contendo 5 mL de HCl 1 M. Lave a coluna vrias vezes com gua at perfazer
35 mL do filtrado total coletado, complete o volume para 50 mL e conserve em
geladeira. Pipete 5 mL do filtrado em um frasco Erlenmeyer de 50 mL, adicione
10 mL de HCl 0,1 M e agite. Pipete 3 mL de NaOH 1 M, agite, adicione 1 mL
do reagente OPT e agite ( importante agitar ao menos uma vez durante a reao
com OPT). Aps 4 minutos, adicione 3 mL de cido fosfrico 1,78 M, homogeneze a soluo e mea a fluorescncia com excitao a 350 nm e emisso a 444 nm.
Zere, previamente, o aparelho com gua. Prepare o branco da mesma maneira, usando
5 mL de HCL 0,1 M no lugar da soluo da amostra e faa a leitura no prazo de
uma hora e meia.
Curva-padro Pipete, em duplicata, 5 mL de cada soluo-padro em um frasco
Erlenmeyer de polipropileno de 50 mL, adicione 10 mL de HCl 0,1 M, agite, 3 mL de
NaOH 1 M, agite e 1 mL do reagente OPT, agite. Acrescente, aps 4 minutos, 3 mL de
cido fosfrico 1,78 M, homogeneze cada soluo e faa as leituras das fluorescncias
obtidas. Prepare o branco usando 5 mL de HCl 0,1 M no lugar da soluo-padro.
Zere o aparelho com gua. A leitura deve ser feita no prazo de uma hora e meia, com
IAL - 643
excitao de 350 nm e emisso de 444 nm. A curva deve ser construda em g histamina
por 5 mL de alquota, corrigindo os valores do branco.
Clculo
Is = fluorecncia da amostra
b = coeficiente linear da reta obtida na curva-padro
P = massa da amostra em g
a = coeficiente angular da reta obtida da curva-padro
1000 = fator de diluio (amostra diluda em balo de 100 mL e alquota de 1 mL em
balo volumtrico de 50 mL)
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association Official of Analytical Chemists International. 17th ed.
Arlington: A.O.A.C. Int., 2000. Chapter 35 (method 977.13).
353/IV Determinao de lipdios totais pelo mtodo de Bligh-Dyer modificado
A frao gordurosa do pescado constituda de uma mistura complexa de lipdios neutros (triglicerdios), lipdios polares (fosfolipdios) e componentes menores
(esteris, cidos graxos livres, etc.). Os mtodos clssicos para a extrao de gordura
de alimentos, como o de Soxhlet, que usa hexano, ter etlico ou de petrleo, no so
adequados para o pescado. Assim sendo, foram testados outros mtodos, como os de
Bligh-Dyer e de Folch, que empregam clorofrmio, metanol e gua, e tm sido recomendados por serem exatos e reprodutveis para a determinao de lipdios totais em
alimentos com alto teor de gua, como os peixes.
Material
Capela qumica, balana analtica, bquer de 500 mL, agitador mecnico, estufa, rotavapor, dessecador, funil de vidro, funil de separao de 500 mL, balo de fundo chato
com boca esmerilhada de 300 mL e papel de filtro.
644 - IAL
Reagentes
Clorofrmio
Metanol
Sulfato de sdio anidro
Procedimento Pese 50 g da amostra homogeneizada e transfira para um bquer de
500 mL. Adicione 50 mL de clorofrmio e 100 mL de metanol. Adicione novamente
50 mL de clorofrmio e 50 mL de gua. Agite, com o auxlio de um agitador mecnico,
por 15 minutos, em capela qumica. Filtre o material homogeneizado, utilizando funil
de vidro com papel de filtro contendo sulfato de sdio anidro, para um funil de separao de 500 mL. Aps completa separao e clarificao, recolha a camada de clorofrmio (inferior) em balo de fundo chato com boca esmerilhada de 300 mL, previamente
tarado. Evapore num rotavapor at a completa remoo do solvente. Transfira o balo
para uma estufa a 105C por 1 hora. Esfrie em dessecador e pese. Repita as operaes
de aquecimento e resfriamento at peso constante.
Clculo
P = massa da amostra em g
N = (massa do balo + massa leo) - massa do balo
Notas
Teste o funil de separao com clorofrmio, antes de usar, para assegurar que no haja
vazamento.
Para a anlise dos cidos graxos na gordura extrada, no utilize a estufa para a secagem.
Aps a remoo do solvente no rotavapor, complete a secagem com nitrognio seco.
Referncia bibliogrfica
BLIGH, E.G.; DYER, W.J. A rapid method of total lipid extraction and purification.
Can. J. Biochem. Physiol, v. 37, n. 8, p. 911-917, 1959.
IAL - 645
P = n de g da amostra na alquota
p1 = massa do bquer
p2 = massa do bquer mais leo
646 - IAL
Referncia bibliogrfica
FOLCH, J.; LEES, M.; STANLEY, G.H.S. A simple method for the isolation and
purification of total lipids from animal tissues. J. Biol. Chem., v. 226, p. 497509,1957.
Conservas de pescado
Conserva de pescado o produto preparado com pescado limpo, cru, cozido ou
curado, adicionado de outras substncias alimentcias e submetido a processos fsicos
e qumicos apropriados a cada espcie. As conservas de pescado sero designadas pela
espcie de pescado a que pertencem e o modo de apresentao. Na anlise das conservas
de pescado faz-se uso de todas as anlises j descritas para pescado, alm destas, outras como umidade (012/IV), amido (043/IV), protdios (036/IV ou 037/IV), cinzas
(018/IV) e cloretos (028/IV ou 029/IV). Nas conservas de pescado em leos, podem ainda ser realizadas, a reao de Kreis (333/IV), a acidez em cido olico (325/IV) e
a identificao do leo de cobertura por cromatografia em fase gasosa (344/IV).
Colaboradores
Mrio Tavares e Rosymaura Baena Moreno
IAL - 647
CAPTULO
XIX
VITAMINAS
IAL - 649
650 - IAL
XIX
Captulo XIX - Vitaminas
VITAMINAS
IAL - 651
Reagentes
xido de magnsio para cromatografia em coluna
Celite
ter de petrleo com faixa de destilao (30-60)C
Hidrxido de potssio
Metanol
Acetona
Sulfato de sdio anidro
Soluo de hidrxido de potssio a 10% m/v Pese 10 g de hidrxido de potssio,
dissolva em metanol e complete a 100 mL.
Fase estacionria Pese o xido de magnsio e a celite na proporo (1:2). Transfira para
um frasco fechado. Agite bem para homogeneizar, antes do empacotamento da coluna
cromatogrfica.
Procedimento Adapte a coluna a um kitassato de 500 mL, coloque um pouco de l de
vidro na parte inferior da coluna e adicione aos poucos a mistura preparada com xido de
magnsio-celite (1:1), com auxlio da trompa dgua, at aproximadamente 10 a 15 cm.
O empacotamento deve ficar uniforme, sem sulcos ou falhas e no muito compactado.
Triture e homogeneze 500 g da amostra e pese aproximadamente 10 g. Extraia os pigmentos com acetona resfriada com auxlio do liqidificador ou agitador mecnico. Filtre
atravs de um funil de Bchner. Repita esta operao at o resduo ficar incolor. Junte
todos os extratos de acetona contendo os carotenides e armazene sob a proteo da luz.
Coloque 100 mL de ter de petrleo no funil de separao. Adicione, aos poucos, a soluo de acetona contendo os pigmentos extrados, acrescentando gua aps cada adio.
Agite, e aps a separao das duas fases, descarte a camada aquosa com acetona (inferior).
Repita esta operao lentamente, evitando emulses, at a eliminao da acetona. Os
pigmentos so transferidos para a fase etrea. Lave mais quatro ou cinco vezes a fase etrea
para eliminar totalmente algum resduo de acetona. Recolha a fase etrea em um frasco
Erlenmeyer com tampa de 500 mL e guarde para a saponificao, protegendo da luz.
Saponifique os pigmentos com adio de uma soluo de KOH a 10% em metanol na
proporo de 1:1 em relao ao volume do extrato de ter de petrleo. Agite e deixe esta
mistura em repouso por aproximadamente 12 horas temperatura ambiente. Elimine
os resduos de KOH com sucessivas lavagens com gua em funil de separao. Adicione
pequena poro de sulfato de sdio anidro para retirar a gua residual da amostra.
Cromatografia em coluna Evapore a soluo anterior em rotavapor, at aproximada652 - IAL
mente 20 mL temperatura de 35C ou sob corrente de nitrognio. Na coluna, previamente compactada e conectada trompa dgua, adicione ter de petrleo para umedec-la evitando ressecamento. Junte a amostra e observe as separaes das fraes de
carotenides. Continue adicionando ter de petrleo at a ntida separao das fraes,
atingindo assim o fim da coluna. A 1a frao separada o -caroteno, de cor amarela
clara, podendo tambm ser separada com o uso de uma soluo de 2% de acetona em
ter de petrleo. A 2a frao separada o -caroteno, de cor alaranjada, podendo tambm
ser separada com o uso de uma soluo a 5% de acetona em ter de petrleo Essas duas
fraes so as que possuem maior atividade de vitamina A e de maior interesse. Recolha,
separadamente, as fraes. Se na separao for utilizada acetona, ela dever ser retirada
com sucessivas lavagens com gua no funil de separao. Adicione pequena poro de
sulfato de sdio anidro. As fases etreas so evaporadas, completadas a um determinado
volume com solvente e as absorbncias lidas no espectrofotmetro UV/VIS. Na 1a fase,
o - caroteno identificado e quantificado por espectrofotometria na regio do visvel,
cujo espectro caracterstico apresenta trs picos mximos de absoro, respectivamente
em: 421, 443 e 472 nm. Na 2a fase etrea, o -caroteno identificado e quantificado por
espectrofotometria na regio do visvel, cujo espectro caracterstico apresenta trs picos
mximos de absoro em: 425, 448 e 475 nm.
Clculo
folhosas e suas alteraes com o cozimento. 1988. 140 f. Tese (Mestre em Cincia dos
Alimentos) - Faculdade de Cincias Farmacuticas, Universidade de So Paulo, So Paulo.
RODRIGUEZ-AMAYA, D.B.; RAYMUNDO, L.C.; LEE, T.C.; SIMPSON, K.L.;
CHICHESTER, C.O. Carotenoid pigment changes in ripening Momordica charantia
fruits. Ann. Bot., London, v. 40, p. 615-624. 1976.
RODRIGUEZ-AMAYA, D.B. A guide to caratenoid analysis in foods. Washington,
D.C.: ILSI Press International Life Sciences Institute, 1999. 64 p.
356/IV Determinao de -caroteno em massas alimentcias
Os carotenides so importantes do ponto de vista nutricional, porque alguns deles,
alm da funo de corante, podem converter-se em vitamina A. O -caroteno e o -apo-8carotenal so os que demonstram maior atividade provitamnica A. Nas massas alimentcias
brasileiras, tais como, o macarro, cujo contedo natural de carotenides insuficiente, tecnicamente recomendvel adicionar -caroteno. H muitos anos, os fabricantes brasileiros
de massas alimentcias vm utilizando esta prtica como alternativa para o enriquecimento
com ovos. O mtodo analtico apresentado consiste na extrao do -caroteno com solvente
orgnico, remoo dos cidos graxos e outros interferentes por saponificao, identificao e
quantificao por espectrofotometria de absoro na regio UV/VIS.
Material
Liqidificador, balana analtica, chapa eltrica com agitador, cilindro de nitrognio, espectrofotmetro UV/VIS, papel de filtro, papel de alumnio, balo de fundo chato com
junta esmerilhada 24/40 de 250 ou 300 mL, condensador de bola, funis de separao de
cor mbar com torneira de teflon de 250 e 500 mL, bqueres de 25, 250, 400 e 500 mL,
bales volumtricos de 50 e 100 mL, funil de vidro e basto de vidro.
Reagentes
lcool isento de aldedos e perxidos
Glicerina
ter de petrleo com faixa de destilao (30-60)C
Sulfato de sdio anidro
Soluo de hidrxido de potssio a 30% m/v Pese 30 g de hidrxido de potssio,
dissolva em gua destilada e complete o volume a 100 mL.
654 - IAL
etreos para um segundo funil de separao mbar de 500 mL e lave com pores de
50 mL de gua, agitando suavemente, at que a fase aquosa no apresente mais reao
alcalina pela adio de 2-3 gotas de fenolftalena. Filtre com sulfato de sdio anidro para
um balo volumtrico de 50 ou 100 mL e complete o volume com ter de petrleo (soluo A). Ajuste o colormetro ou o espectrofotmetro para 100% de transmitncia ou zero
de absorbncia a 620 nm, usando gua na cubeta ou no tubo do colormetro. Transfira
uma alquota da soluo A correspondente a 10-50 UI de vitamina A para um tubo do
colormetro e evapore sob nitrognio at secagem. Dissolva o resduo da evaporao com
3 mL de clorofrmio, adicione 4 gotas de anidrido actico e 7 mL do reagente de CarrPrice. No perodo de at 15 segundos aps a adio do reagente Carr-Price, mea a 620
nm a absorbncia da colorao desenvolvida, usando a gua como referncia.
Curva-padro Transfira, individualmente, cinco alquotas da soluo-padro, contendo
concentraes de 10 a 50 UI de vitamina A com incrementos de 10 UI para um tubo do
colormetro e siga como em procedimento da amostra. Com os dados obtidos construa
uma curva-padro.
Clculo
Determine a quantidade de vitamina A correspondente, utilizando a curva-padro previamente estabelecida. Use a tabela abaixo para a converso de UI em g de vitamina A e
derivados e de beta-caroteno.
1 UI de vitamina A
1 UI de vitamina A
1 UI de vitamina A
1,8 g de beta-caroteno
1 g de palmitato de vitamina A
1 UI de vitamina A
A = Absorbncia
L = espessura da cubeta em cm
C = quantidade da amostra em gramas contida em 1000 mL da soluo em isopropanol
5700 = fator de converso de unidades espectrofotomtricas em gravimtricas
0,3 = fator de converso de g em UI
Referncias bibliogrficas
CARR, F.H.; PRICE, E.A. Colour reactions attributed to vitamin A. Biochem. J., v.
20, p. 497-501. 1926.
IAL - 659
Clculo
La = leitura da amostra
P = nde /mL do padro
A = n de mL da soluo de M g ou mL da amostra
M = massa ou volume da amostra
ou, simplificando:
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz: v. 1: Mtodos
qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 383-385.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists.15 th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1990. p. 1045-1047 (method 924.29).
STROHECKER, R.; HENNING, H. Vitamin Assay. Tested Methods. Traduo de
D.D. Libman. 1 ed. Germany: Verlag Chemie GMBH, 1966. p. 65-90. Titulo Original:
Vitamin-Bestimmungen, Er probte Methoden.
LA ASSOCIACIN DE QUMICOS DE VITAMINAS, INC. Mtodos de Anlisis
de Vitaminas. Traduo de M. Soledad G. Chamarro y Cludio Fernndez Heredia.
3. ed. Leon, Esp.: Editorial Academia, 1969. p. 115-135. Titulo original: Methods of
Vitamin Assay.
360/IV Determinao da vitamina B12 em matria-prima
Material
Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS com registrador, termmetro, bqueres de
10, 25 e 50 mL, pipetas volumtricas de 1, 2, 3, 4, 5 e 10 mL, bales volumtricos de 25,
50, 100, 200 e 1000 mL, dessecador com slica gel e pesa-filtro com tampa de 25 mL.
662 - IAL
Reagentes
Vitamina B12 padro
Slica gel com indicador de umidade
Procedimento Dilua, em gua, uma quantidade da amostra de maneira que a concentrao de vitamina B12 esteja na faixa de concentrao de (20-40) g/mL. Faa a leitura
da absorbncia no espectrofotmetro UV/VIS nos comprimentos de onda: 361 nm (se
o princpio ativo for cianocobalamina), 351 nm (hidroxicobalamina) e 550 nm (mistura
das vitaminas: B1, B6 e B12).
Notas
A vitamina B12 (cianocobalamina) dever conter, no mnimo, 96% de pureza e no mximo
100,5%, calculado em relao matria seca.
O mtodo no aplicvel para mistura de vitamina B12 com vitamina B2, pois h
interferncia da cor amarela da vitamina B2.
Clculos
Mistura de vitaminas (leitura em 550 nm):
IAL - 663
Referncias bibliogrficas
FARMACOPIA BRASILEIRA. 3. ed. So Paulo: Organizao Andrei Editoria S.A.,
1997. p. 198-200.
STROHECKER, R.; HENNING, H.M. Vitamin Assay. Tested Methods. Traduo
de D.D.Libman. 1. ed. Germany: Verlag Chemie. GMBH, 1966. p.151-172. Ttulo
Original: Vitamin-Bestmmungen, Er probte Methoden.
THE MERCK INDEX. 8. ed. Rahway, U.S.A.: MERCK & CO., 1968. p. 97, 547, 1112-1113.
KUTSKY R.J. Handbook of Vitamins e Hormones. Paris: Van Nostrand Reinhold
Company.1973. p. 62-70.
361/IV Doseamento microbiolgico de vitamina B12
Material
Balana analtica, espectrofotmetro UV/VIS, placas de Petri estreis, pipetas de 1, 5, 10
e 25 mL, pipetas micromtricas, bastes de vidro, bqueres de 10, 20, 30, 50, 100, 200,
250 e 500 mL, termmetro, tubos de ensaio para meios de cultura, frascos Erlenmeyer
de 30, 50, 100, 250 e 500 mL, pina anatmica reta, discos de papel para dosagem de
antibitico, papel de pH, almofariz com pistilo e papel de filtro.
Reagentes
Soluo salina Pese 20 g de cloreto de amnio, 4 g de nitrato de amnio, 8 g de sulfato de
sdio, 4 g de fosfato de potssio monobsico, 12 g de fosfato de potssio dibsico e 0,823 g
de sulfato de magnsio. Adicione 1000 mL de gua. Aquea at a dissoluo dos sais. Distribua em frasco Erlenmeyer de 500 mL e esterilize a 121C, durante 20 minutos.
Soluo-tampo de fosfato (pH=3) Pese 9,7 g de fosfato de potssio monobsico e
transfira para um balo volumtrico de 1000 mL. Adicione 50 mL de soluo de cido
fosfrico a 1% e complete o volume com gua.
Soluo-padro estoque de vitamina B12 Pese 100 mg de vitamina B12, previamente dessecada. Transfira para um balo volumtrico de 100 mL. Ajuste o volume com a soluotampo de fosfato. Dilua esta soluo adequadamente de tal modo que a concentrao da
vitamina seja aproximadamente 50 g/mL. Determine a concentrao de vitamina B12
por meio da leitura da absorbncia a 361 nm, utilizando a relao: 1 g/mL de vitamina
B12 = Absorbncia 0,0207
664 - IAL
IAL - 665
Clculo
Os clculos devem ser efetuados, relacionando-se o tamanho dos halos formados nos discos para anlise de antibiticos dos padres com os halos dos discos das amostras e suas
respectivas concentraes.
666 - IAL
Material
Espectrofotmetro de fluorescncia, banho-maria, balana analtica, papel de filtro qualitativo, liqidificador ou blender, papel indicador de pH, pipetas volumtricas de 1, 2, 5
e 10 mL, pipetas graduadas de 1, 2, 5 e 10 mL, bales volumtricos de 25, 50, 100, 200,
250, 500 e 1000 mL, frascos Erlenmeyer de 125 e 250 mL, bqueres de 25, 100, 200,
250 e 500 mL, provetas de 50, 100 e 200 mL, funil de vidro e pesa-filtro de 25 mL com
tampa.
Reagentes
Riboflavina padro
Fluorescena
Ditionito de sdio
Slica gel com indicador de umidade
cido actico glacial
Soluo de hidrxido de sdio a 30% m/v
Soluo de cido sulfrico 0,05 M
Soluo de cido actico a 5% v/v
Soluo de acetato de sdio Pese 34,5 g de acetato de sdio e dissolva em gua. Transfira
para balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua.
Soluo de diastase Para a anlise de cada amostra, pese 0,3 g de diastase e complete
com 5 mL da soluo aquosa de acetato de sdio.
Soluo de Riboflavina (A) Pese 25 mg de Vitamina B2, previamente seca em estufa
110C durante 2 horas. Transfira para um balo volumtrico de 1000 mL com ajuda de
750 mL de gua, adicione 1,4 mL de cido actico glacial, agite e coloque em banho-maria a 50C at dissoluo completa. Complete o volume com gua. Guarde em geladeira.
(1 mL desta soluo contm 25 g de vitamina B2 ).
Soluo-estoque de fluorescena (B) Pese 50 mg de fluorescena, transfira para um balo
volumtrico de 1000 mL com ajuda de 250 mL de gua. Adicione 2 mL de soluo de
hidrxido de sdio a 30%, caso a fluorescena no seja solvel. Complete o volume com
gua. Guarde em geladeira. (1 mL dessa soluo contm 50 g de fluorescena).
Soluo de trabalho de fluorescena (C) Faa diluies da soluo (B) em um balo
volumtrico e complete o volume com gua, de modo a obter uma soluo aproximadamente 0,15 g de fluorescena por mL.
Fator de correo da soluo de trabalho de fluorescena Determine o fator de correo
da fluorescena, fazendo algumas diluies de vitamina B2 (soluo A), da seguinte maIAL - 667
neira: pipete 4 mL da soluo A e dilua at 100 mL com gua. Pipete 10 mL desta nova
soluo para um balo volumtrico de 100 mL e complete com gua (soluo D). Um
mL desta soluo contm 0,1 g de vitamina B2. Ajuste o zero do espectrofotmetro de
fluorescncia usando gua e o 100 do aparelho com soluo de fluorescena de trabalho
(C). Faa a leitura da soluo da vitamina B2 (soluo D), usando a luz de excitao de
440 nm e de emisso de 530 nm.
Calcule o fator de correo usando a frmula:
L = leitura da riboflavina.
Procedimento
Produtos enriquecidos Pese uma quantidade suficiente da amostra para obter, na soluo
final, no mximo 0,1 g de vitamina B2 por mL. Adicione 10 mL de soluo de cido actico
a 5%, aquea em banho-maria entre (40-50)C durante 15 minutos. Esfrie e complete o
volume com a soluo de cido actico a 5%. Determine a fluorescncia desta soluo em
espectrofotmetro de fluorescncia, usando luz de excitao de 430 nm e de emisso de
530 nm. Acerte o 100 da escala do aparelho com a soluo de trabalho de fluorescena e
o zero com gua. Aps a leitura, adicione aproximadamente 20 mg de ditionito de sdio
para a destruio da vitamina B2. Leia novamente no espectrofotmetro de fluorescncia.
Considere como leitura da amostra (La), a diferena entre estas duas leituras.
Alimentos naturais Pese uma quantidade suficiente da amostra, tal que a soluo final
tenha 0,1 g de vitamina B2 por mL. Transfira para um frasco Erlenmeyer de 250 mL,
adicione 150 mL de cido sulfrico 0,05 M (para amostra de levedura, use gua). Misture
e deixe em banho-maria temperatura de ebulio, durante 30 minutos, agitando de
vez em quando. Deixe esfriar temperatura ambiente e adicione 5 mL de suspenso
de diastase preparada recentemente. Ajuste o pH na faixa de 4,5 a 5,0, com soluo
de acetato de sdio e incube a (4050)C em banho-maria, durante duas horas. Retire
e esfrie temperatura ambiente, transfira para balo de 100 ou 200 mL e complete o
volume com cido sulfrico 0,05 M (para levedura, complete com gua). Filtre em frasco
Erlenmeyer de 125 mL. Faa diluio com soluo aquosa de cido actico a 5% de tal
modo que a soluo final tenha no mximo 0,1 g de vitamina B2 por mL. Determine a
fluorescncia desta soluo em espectrofotmetro usando a luz de excitao 440 nm e emisso
de 530 nm. Acerte o 100 da escala do aparelho com a soluo de trabalho de fluorescena e
o zero com gua. Aps a leitura, adicione aproximadamente 20 mg de ditionito de sdio,
668 - IAL
La = leitura da amostra
F = fator da fluorescena
A = diluio da amostra
M = massa ou volume da mostra
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz: v1,
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo., 1985. p. 357-385.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists.15 th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1990. p. 1053-1054 (method 924.29).
LA ASSOCIACIN DE QUMICOS DE VITAMINAS, INC. Mtodos de Anlisis
de Vitaminas. Traduo de M. Soledad G. Chamarro y Cludio Fernndez Heredia.
3. ed. Leon, Esp.: Editorial Academia, 1969. p. 137-157. Titulo original: Methods of
Vitamin Assay.
STROHECKER, R; HENNING, H.M. Vitamin Assay. Tested Methods. Traduo
de D.D.Libman. 1. ed. Germany: Verlag Chemie. GMBH, 1966. p. 68-122. Ttulo
Original: Vitamin-Bestmmungen, Er probte Methoden.
363/IV Determinao de vitamina B6 em matria-prima
A Vitamina B6 encontrada em grande nmero de alimentos de origem animal e
vegetal. Na maioria das vezes, est associada s protenas e ao amido; raras vezes na forma
livre. A vitamina B6 pode ser encontrada em trs formas: piridoxina, piridoxal e piridoxamina. Os mtodos de anlise no so especficos para nenhuma das formas e o resultado
em conjunto expresso como Vitamina B6.
IAL - 669
Material
Balana analtica, pesa-filtro, frasco Erlenmeyer de 250 mL, funil de vidro, proveta
graduada de 50 mL, pipeta volumtrica de 5 mL, banho-maria, bureta de 25 mL,
dessecador e basto de vidro.
Reagentes
cido perclrico 0,1 M
Soluo de acetato de mercrio 6% m/v
cido actico glacial
Violeta cristal
Slica gel com indicador de umidade
Procedimento Pese, com preciso, cerca de 0,4 g da amostra da matria prima e transfira quantitativamente para um frasco Erlenmeyer de 250 mL. Dissolva com 40 mL de
cido actico e 5 mL de acetato de mercrio a 6% em cido actico. Se necessrio, aquea
em banho-maria at completar a dissoluo. Resfrie e titule com cido perclrico 0,1 M,
usando como indicador violeta cristal. Faa um branco com procedimento idntico ao
exposto, mas sem a amostra.
Clculo
Calcule o teor em porcentagem de vitamina B6 na matria prima analisada, considerando
que cada mL de HClO4 gasto na titulao equivale a 20,56 mg de vitamina B6 (C8H11NO3.
HCl).
Nota: nas matrias primas, o teor de vitamina B6 dever ser no mnimo 98% e no mximo
100,5%, aps dessecao em estufa a vcuo com slica gel indicadora de umidade.
Referncia bibliogrfica
FARMACOPIA BRASILEIRA. 3. ed. So Paulo: Organizao Andrei Editora S.A., 1977. p. 323.
364/IV Determinao de vitamina C com iodato de potssio
Este mtodo aplicado para a determinao de vitamina C ou cido L-ascrbico,
em alimentos in natura ou enriquecidos, quando a quantidade da referida vitamina for
maior que 5 mg e baseia-se na oxidao do cido ascrbico pelo iodato de potssio.
670 - IAL
Tabela de Converso
1,0 g de cido ascrbico
Material
Papel de filtro qualitativo, dessecador, estufa, balana analtica, bqueres de 50 e 250 mL,
frasco Erlenmeyer de 300 mL, pipetas graduadas de 1 e 10 mL, pipeta volumtrica de 10
mL, buretas de 10 e 25 mL, bales volumtricos de 100 e 1000 mL, funil de vidro, basto
de vidro e proveta de 50 mL.
Reagentes
Soluo de cido sulfrico a 20% v/v
Soluo de iodeto de potssio a 10%, m/v
Soluo de amido a 1%, m/v
Soluo de iodato de potssio 0,02 M Seque 5 g de iodato de potssio em estufa a 110oC
e esfrie. Pese 3,5668 g, transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e complete com
gua (1 mL iodato de potssio 0,02 M = 8,806 mg de cido ascrbico).
Soluo-padro de iodato de potssio 0,002 M Pipete 10 mL da soluo de iodato de
potssio 0,02 M e dilua at 100 mL com gua em balo volumtrico (1 mL de iodato de
potssio 0,002 M equivale a 0,8806 mg de cido ascrbico).
Procedimento Homogeneze a amostra e pese uma quantidade que contenha ao redor
de 5 mg de cido ascrbico. Transfira para um frasco Erlenmeyer de 300 mL com auxilio
de aproximadamente 50 mL de gua. Adicione 10 mL de soluo de cido sulfrico a
20%. Homogeneze e, se necessrio, filtre para outro frasco Erlenmeyer, lavando o filtro
com gua e logo aps com 10 mL da soluo de cido sulfrico a 20%. Adicione 1 mL
da soluo de iodeto de potssio a 10% e 1 mL da soluo de amido a 1%. Titule com
soluo de iodato de potssio at colorao azul. Dependendo da quantidade de vitamina
C contida na amostra, utilize soluo de iodato de potssio 0,02 M ou 0,002 M. Analise
sempre a amostra em duplicata e faa uma prova em branco.
Clculo
titule com soluo de Tillmans at obter uma colorao ligeiramente rosada e estvel por
15 segundos. Faa um branco, substituindo a soluo de vitamina C por soluo cida
e desconte no clculo do fator. Calcule o fator (F) da soluo de Tillmans conforme a
relao:
Nota: armazene a soluo de Tillmans em frasco escuro e na geladeira. Toda vez que usar,
padronize com soluo recm-preparada de vitamina C.
Procedimento
Polpas e Sucos de Frutas Esprema a polpa da fruta e filtre atravs de tecido fino, limpo
e seco ou em papel de filtro. Utilize, no mnimo, 10 mL do filtrado e adicione igual volume de soluo cida. Agite, filtre e titule uma alquota de 10 mL do filtrado conforme
descrito na padronizao da soluo de Tillmans. Faa um branco constitudo de 10 mL
da soluo cida e com volume de gua igual ao da soluo do corante gasto na titulao
da amostra e titule.
Os ons Fe2+, Sn 2+ e Cu2+ presentes na amostra a ser analisada, interferem neste mtodo.
Nestes casos, previamente determinao da vitamina C verifique a presena dos
interferentes, procedendo como descrito: adicione duas gotas da soluo de azul de
metileno 0,05% a 10 mL da mistura 1:1 constituda da amostra de suco e do reagente
cido. O desaparecimento da cor do azul de metileno em 5 a 10 segundos indica a presena
das substncias interferentes. Pode-se tambm verificar a presena dos ons interferentes,
adicionando-se a 10 mL da amostra o mesmo volume da soluo de HCl (1+3) e cinco
gotas de ndigo carmim a 0,05%. O desaparecimento da cor em 5-10 segundos indica a
presena de substncias redutoras.
Clculo
IAL - 673
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz: v. 1,
Mtodos Qumicos e Fsicos para Anlises de Alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
394-395.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists.15 th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1990. p. 1058-1059 (method 967.21).
366/IV Determinao espectrofotomtrica de vitamina C por reduo de ons cpricos
Este mtodo aplicvel para a quantificao de cido ascrbico (vitamina C), em
baixas concentraes em alimentos pigmentados, naturais e industrializados.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS com cubetas de 1 cm de espessura, liqidificador, agitador
mecnico, balana analtica, bqueres de 50 e 100 mL, pipetas graduadas de 1, 2, 5
e 10 mL, pipetas volumtricas de 1, 2, 5 e 10 mL, provetas de 50 e 100 mL, bales
volumtricos de 50 e 100 mL, funil de vidro, provetas de 25 e 50 mL com tampa, frasco
Erlenmeyer de 250 mL com tampa e frasco Erlenmeyer de 25 mL.
Reagentes
Acetato de sdio
2,2-Biquinolena (cuprona)
Tolueno
lcool isoamlico
cido sulfrico
cido ascrbico padro
Uria
Clorofrmio
lcool
Acetato de cobre (II) mono-hidratado
Soluo de cido metafosfrico a 5% m/v
Soluo A (Branco) Pipete 2 mL da soluo de cido metafosfrico a 5%, transfira para
um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua.
674 - IAL
segundos e deixe as camadas se separarem. Retire 3 mL da parte superior (lcool isoamlico) e transfira para um frasco Erlenmeyer de 25 mL. Adicione 0,5 mL de lcool e agite
levemente. Prepare um branco, pipetando 5 mL da soluo A diretamente no tubo de
reao e prossiga como o tratamento da amostra. Leia as absorbncias das amostras a
545 nm, usando o branco como referncia.
Nota: todos os solventes utilizados na preparao das solues devem ser de alto grau de
pureza, pois os contaminantes de carter redutor interferem na reao.
Curva-padro Pipete, diretamente, nos tubos de reao (ou provetas de 25 mL com
tampa), alquotas de 0,5, 1,0, 1,5, 2,0 e 2,5 mL da soluo-padro II correspondente,
respectivamente, a 10, 20, 30, 40 e 50 g de cido ascrbico e complete at 5 mL com
a soluo A. Adicione 1 mL da soluo-tampo e 5 mL da soluo complexante. Agite
fortemente durante 90 segundos. Deixe as camadas se separarem. Retire 3 mL da parte
superior (lcool isoamlico) e transfira para um frasco Erlenmeyer de 25 mL. Adicione
0,5 mL de lcool. Agite suavemente. Repita o mesmo procedimento com o branco constitudo de 5 mL da soluo A e sem a adio dos padres. Faa a leitura das absorbncias
a 545 nm, usando o branco como referncia. Construa a curva-padro.
Clculo
676 - IAL
Soluo-padro de dl--tocoferol Pese 100 mg de dl--tocoferol, transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com lcool absoluto.
Retire uma alquota e dilua em lcool absoluto para se obter uma concentrao de 80 g/
mL. Conserve esta soluo sob refrigerao a 5C. Determine a absorbncia a 292 nm
(mxima absoro) e calcule a concentrao de vitamina E com a frmula:
A = Absorbncia
P = massa em gramas da amostra em 100 mL de etanol
Soluo alcolica de cloreto de ferro III 0,25% m/v
Soluo alcolica de -dipiridila 0,6% m/v. Armazene esta soluo em frasco mbar
ou opaco, a 5C.
Procedimentos
Alimentos slidos, raes e premix devem ser homogeneizados e armazenados em local
com baixa umidade e sob a proteo da luz. A amostras lquidas devem ser conservadas
sob refrigerao temperatura menor que 8C, em frasco hermtico. Antes de iniciar a
anlise, deixe estabilizar temperatura ambiente. As gorduras necessitam de aquecimento
prvio e homogeneizao, antes da retirada da amostra para anlise.
Saponificao da amostra Pese diretamente em um balo de 250 mL com boca esmerilhada, uma quantidade de amostra que contenha de 1 a 10 mg de vitamina E. Adicione
50 mL de lcool e 100 mg de cido piroglico. Aquea com refluxo em placa aquecedora,
sob agitao, por 20 minutos. Aps 1 minuto de aquecimento, adicione, pelo condensador, 1 g de pastilhas de hidrxido de potssio (uma pastilha por vez). Depois de 20
minutos de refluxo, esfrie em banho de gelo e lave o aparelho de refluxo com pequenas
quantidades de gua. Transfira a amostra saponificada quantitativamente para um funil
de separao mbar de 250 mL e extraia a vitamina E com duas pores consecutivas de
30 e 20 mL ou trs de 40, 30 e 20 mL. Transfira quantitativamente com gua, os extratos
etreos para um funil de separao de cor mbar de 500 mL. Lave os extratos etreos com
alquotas de 50 mL de gua, agitando suavemente, at que a fase aquosa no apresente
mais colorao rsea pela adio de algumas gotas de soluo alcolica de fenolftalena.
Filtre, em funil contendo sulfato de sdio anidro, para balo volumtrico de 50 ou 100 mL
e complete o volume com ter de petrleo. Evapore at a secura, sob nitrognio, o solvente
678 - IAL
L = leitura da absorbncia
P = massa em gramas da amostra
Referncias bibliogrficas
BALL, G.M.F. Fat-soluble assays in food analysis. A Comprehensive Review. London:
Elsevier Applied Science. 1988. 326 p.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists.15th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1990. p. 1071-1074 (method 971.30).
369/IV Determinao de niacina e nicotinamida
A niacina, tambm denominada de cido nicotnico, vitamina PP ou vitamina B3,
uma das vitaminas importantes do complexo B para a nutrio humana e animal. A
680 - IAL
niacina faz parte de duas coenzimas conhecidas, a coenzima I e a coenzima II, que so
essenciais para um grande nmero de sistemas enzimticos. A nicotinamida, amida do
cido nicotnico, tambm biologicamente ativa. Essas vitaminas so encontradas em
carnes, pescados, leveduras e cereais. Nos produtos naturais, a niacina est ligada a outros
compostos qumicos, havendo a necessidade de ser liberada por hidrlise qumica ou enzimtica, antes da determinao analtica. Este mtodo baseia-se na reao entre a niacina
e o bromocianognio (CNBr) , resultando um composto pirindio que em contato com
o cido sulfanlico, forma um complexo amarelo com mximo de absoro em 450 ou
470 nm.
Material
Autoclave, chapa eltrica, espectrofotmetro ou colormetro, balana analtica, frascos
Erlenmeyer de 50 e 250 mL com tampa, pipetas de 1, 2, 5, 10 e 20 mL, bales volumtricos de 50, 100 e 200 mL, bqueres de 250 e 400 mL, basto de vidro e almofariz com
pistilo.
Reagentes
cido nicotnico padro
Hidrogenofosfato de sdio (Na2HPO4. 7 H2O)
Diidrogenofosfato de potssio (KH2PO4)
Cianeto de potssio
Soluo saturada de bromo
cido sulfanlico
Hidrxido de amnio
cido clordrico
cido sulfrico
lcool
Hidrxido de sdio
Hidrxido de clcio
Sulfato de amnio
Soluo de cido sulfrico 0,05 M
Soluo de cianeto de potssio a 5% m/v
Soluo-estoque de cido nicotnico Dissolva 50 mg de cido nicotnico, padro de
referncia, previamente seco e guardado no escuro em dessecador sobre pentxido de
fsforo, em lcool a 25% e dilua at 500 mL. Guarde em geladeira. 1 mL desta soluo
contm 100 g de cido nicotnico.
IAL - 681
IAL - 683
Branco do padro
Soluo-padro
1,0 mL da soluo-padro
1,0 mL da soluo-padro
5,0 mL de gua
5,0 mL de bromocianognio
0,5 mL de gua
Branco da amostra
Soluo da amostra
5,0 mL de gua
5,0 mL de bromocianognio
0,5 mL gua
684 - IAL
Procedimento analtico para cereais Selecione um tubo adicional para o branco do padro,
para cada srie de determinaes, mas no adicione bromocianognio. Prepare os tubos
da seguinte maneira:
Branco do padro
5 mL de soluo-padro
10 mL de gua
Aguarde 30 min. em banho de gelo
1 mL de cido sulfanlico a 55%
Branco da amostra
5 mL de soluo da amostra
10 mL de gua
Aguarde 30 min. em banho de gelo
1 mL de cido sulfanlico a 55%
Soluo-padro
Soluo da amostra
5 mL de padro
10 mL de bromocianognio e vedando tubo
Aguarde 30 min. em banho de gelo
1 mL de cido sulfanlico a 55%
5 mL de soluo da amostra
10 mL de bromocianognio e vedando tubo
Aguarde 30 min. em banho de gelo
1 mL de cido sulfanlico a 55%
Com o comprimento de onda a 470 nm, fixe a 100% de transmitncia, com o branco
dos padres e leia a transmitncia dos outros tubos, de 12 a 15 minutos aps a adio
do cido sulfanlico. Lance em grfico a absoro dos padres, menos a do branco dos
reagentes, contra a concentrao do cido nicotnico, em g/mL. Neste grfico, determine
a concentrao correspondente absorbncia da amostra, tendo esta leitura sido feita
aps a fixao dos 100% de transmitncia do aparelho com o branco da amostra.
IAL - 685
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz:
v. 1, Mtodos Qumicos e Fsicos para Anlise de Alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985.
p. 397-401.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists.15 th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1990. p. 1054-1057 (method 961.14).
STROHECKER, R.; HENNING, H.M. Vitamin Assay. Tested Methods. Traduo de
D.D.Libman. 1. ed. Germany: Verlag Chemie. GMBH, 1966.
p. 189-201. Ttulo Original: Vitamin-Bestmmungen, Er probte Methoden.
Colaboradores
Myrna Sabino, Leda C. A. Lamardo, Everaldo de Cerqueira, Sandra A. Navas e
Emiko I. Inomata
686 - IAL
CAPTULO
XX
RESDUOS DE
PESTICIDAS
IAL - 687
688 - IAL
XX
Captulo XX - Resduos de Pesticidas
RESDUOS DE PESTICIDAS
Do ponto de vista toxicolgico, os pesticidas podem ser classificados em extremamente, altamente, moderadamente ou pouco txicos, de acordo com a dose letal (DL50)
oral e drmica para ratos e outros indicadores relacionados a danos na crnea, leses na pele
e concentrao letal inalatria (CL50) para ratos, segundo a Portaria n 3 do Ministrio da
Sade, de 16 de janeiro de 1992.
IAL - 689
690 - IAL
(b)
Acefato
Azinfs-etlico
Azinfs-metlico
Carbofenotiona
Clorfenvinfs
Clorpirifs
Clorpirifs-metilico
Diazinona
Diclorvos
Dimetoato
(c)
Aldicarbe
Carbaril
Carbendazim
Carbofurano
Tiabendazol
Disulfotona
Etiona
Etoprofs
Etrinfs
Fenamifs
Fenitrotiona
Fentiona
Fentoato
Folpete
Forato
Fosfamidona
IAL - 691
(a)
Heptacloro
Heptacloro epxido
Hexaclorobenzeno
Imazalil
Iprodiona
Permetrina
Procimidona
Procloraz
Propargito
Tetradifona
Trifluralina
Vinclozolina
(b)
Malationa
Metamidofs
Metidationa
Mevinfs
Ometoato
Parationa-etlica
Parationa-metlica
Pirimifs-etlico
Pirimifs-metlico
Profenofs
Pirazofs
Terbufs
Triazofs
Triclorfom
(c)
Anlise da testemunha e estudos de recuperao Para cada matriz a ser analisada, realize
a anlise em triplicata da testemunha e estudos de recuperaes com 5 repeties em
pelo menos dois nveis: 1 LQ e 10 LQ.
Condies cromatogrficas
Pesticidas do item a: cromatgrafo a gs, com ECD, equipado com workstation, coluna capilar, fase estacionria: 5% de fenil metil siloxano (30 m
x 0,32 mm x 0,25 m de filme), temperatura do detector: 320C, temperatura do forno: 60C (1 min), (60 - 220)C (10C/min), (220 - 280)C
(3C/min.), 280C (17 min) tempo total: 60 min, fluxo do gs de arraste: nitrognio:
1 mL/min, temperatura do injetor: 240oC, modo de injeo: splitless.
Pesticidas do item b: cromatgrafo a gs, com FPD, coluna megabore: fase estacionria: 5% de fenil metil siloxano (30 m x 0,53 mm x 2,65 m de filme), temperatura
do detector: 280C, temperatura do forno: (50 - 150)C (30C/min), (150 - 240)C
(10C/min), fluxo do gs de arraste: nitrognio: 18 mL/min, fluxo de hidrognio: 75
mL/min, fluxo de ar sinttico: 100 mL/min, temperatura do injetor: 240oC, modo de
injeo: splitless.
Aldicarbe, carbofurano e carbaril: cromatgrafo a lquido de alta eficincia, detector de UV ( : 195 nm-aldicarbe e carbofurano e 210 nm - carbaril), coluna: ao inox, 125 mm x 4 mm, fase estacionria; Spherisorb ODS-2,5 m, fase mvel: gua purificada para CLAE-acetonitrila
65:35 v:v, fluxo da fase mvel: 0,75 mL/min, temperatura: 30C.
Carbendazim e tiabendazol: cromatgrafo a lquido de alta eficincia, detector de
UV ( : 285 nm), coluna: ao inox, 125 mm x 4 mm, fase estacionria: Spherisorb
ODS-2,5 m, fase mvel: soluo de KH 2PO 4 a 0,1% lcool metlico 30:70 v:v,
fluxo da fase mvel: 0,60 mL/min, temperatura: 25C.
Curva-padro Injete as solues de trabalho com no mnimo cinco diferentes concentraes por duas ou trs vezes ou at que haja repetitibilidade dos cromatogramas.
Construa a curvapadro dentro da faixa de linearidade do detector.
Quantificao A quantificao dos pesticidas do item a feita por cromatografia a
gs com detector de captura de eltrons e a dos pesticidas do item b por cromatografia
a gs com detector fotomtrico de chama (FPD) ou detector de nitrognio e fsforo.
Aldicarbe, carbofurano, carbaril, carbendazim e tiabendazol so quantificados por cromatografia a lquido de alta eficincia com detector ultravioleta ou de fluorescncia. A
anlise qualitativa feita por padronizao externa, por meio da comparao do tempo
de reteno dos respectivos princpios ativos e a confirmao em coluna de diferente
polaridade ou por detector seletivo de massa.
696 - IAL
Clculo
A anlise quantitativa feita por meio da curva-padro, por comparao de rea, levando em considerao o fator de diluio e a quantidade de amostra. O resultado deve ser
expresso em miligrama do princpio ativo por quilograma da amostra (mg/Kg).
Figura1 - Esquema do mtodo multi-resduo para determinao de resduos de pesticidas em frutas e vegetais
IAL - 697
Referncias bibliogrficas
ANALYTICAL METHODS FOR PESTICIDE RESIDUES IN FOODSTUFFS, 6th
ed. Inspectorate for Health Protection, Ministry of Public Health, Welfare and Sports,
The Hague/Rijswijk, The Netherlands, 1996 (Part 1 Multiresidue methods)
HIEMSTRA, M.; JOOSTEN J.A.; KOK, A. Fully automated Automated solid-phase extraction clean-up and on-line liquid chromatographic determination of
benzimidazole fungicides in fruit and vegetables. J. A.O.A.C. Int., p. 78, 1267-1274,1995.
KOK, A. AND ; HIEMSTRA, M. Optimization, automation, and validation of the
solid-phase extraction clean-up and on-line liquid chromatographic determination of Nmethylcarbamate pesticides in fruits and vegetables. J. A.O.A.C. Int., 75, 1063-1074,
1992.
JOINT FAO/WHO FOOD STANDARDS PROGRAMME CODEX ALIMENTARIUS COMMISSION. Portion of commodities to wich Codex Maximum Residue
Limits apply and which is analyzed, v .2, Section 4, p. 391-404,1993.
371/IV Mtodo multirresduo para determinao de pesticidas e bifenilas policloradas em produtos gordurosos
Este mtodo aplica-se determinao de resduos dos pesticidas: lambdacialotrina,
cipermetrina, DDT total (opDDT, ppDDT, ppDDE, ppDDD), dieldrin, deltametrina, endosulfam total (alfa, beta e sulfato de endosulfan), endrin, HCH total (alfa,
beta e gama HCH), heptacloro, heptacloro epxido, hexaclorobenzeno, mirex, bifenilas
policloradas policloradas (PCBs congneres: 28, 52, 101, 138, 153, 180) em produtos
gordurosos como: leite, ovo, manteiga, carnes (frango, peixe), etc. Os pesticidas so extrados com uma mistura de solventes, a purificao feita em uma nica etapa em coluna
de slica gel e a determinao qualitativa e quantitativa feita por cromatografia a gs com
detector de captura de eltrons.
Material
Cromatgrafo a gs com detector de captura de eltrons, rotavapor, estufa, mufla, aparelho de Soxhlet, bales volumtricos de diferentes capacidades, pipetas volumtricas, pipetas Pasteur, coluna cromatogrfica de vidro de 15 mm de dimetro por 30 cm de altura,
com reservatrio de 300 mL e torneira de teflon, provetas de diferentes capacidades, bales
de fundo chato de 300 mL com boca esmerilhada, tubos graduados de 10 mL, dessecador,
frasco Erlenmeyer com tampa, almofariz com pistilo, vials de vidro com tampa e septos de
teflon para injetor automtico.
698 - IAL
Reagentes
n-Hexano grau resduo
Diclorometano grau residuo
Sulfato de sdio anidro granulado grau resduo
Slica Gel 60, 70-230 mesh
Nota: faa previamente um branco de cada reagente para certificar-se de que no possuem
interferentes para a anlise.
Soluo-padro Pese, com preciso, 0,010 g de cada padro analtico em bquer, transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com
isoctano. Transfira para frasco de vidro com tampa e batoque de teflon. Todo frasco deve
conter uma etiqueta com dados de procedncia, identidade, concentrao, estabilidade,
data de preparao, prazo de validade e temperatura de armazenamento. Prepare solues
intermedirias com n-hexano. Faa diluies necessrias com n-hexano em cinco nveis
(1/2 LQ, 1 LQ, 2 LQ, 5 LQ e 10 LQ) para construo da curva-padro dentro da faixa
de linearidade do detector.
Nota: Limite de quantificao (LQ) Menor concentrao do analito na amostra que
pode ser quantificada com preciso e exatido aceitveis, sob determinadas condies
experimentais adotadas.
Diclorometano-n-hexano 1:4 (v/v) Transfira 200 mL de diclorometano para um balo
volumtrico de 1000 mL. Adicione n-hexano. Misture bem e complete o volume com
n-hexano.
Diclorometano-n-hexano 1:1 (v/v) Transfira 500 mL de diclorometano para um balo
volumtrico de 1000 mL. Adicione n-hexano. Misture bem e complete o volume com
n-hexano.
Slica gel ativada Calcine quantidade suficiente de slica gel a 450C durante 4 horas.
Deixe em dessecador at temperatura ambiente. Armazene em frasco de vidro com tampa
e batoque de teflon. Ative a slica gel calcinada por 5 horas a 135C de dois em dois dias.
Armazene em dessecador.
Slica gel desativada a 10% Pese 13,5 g de slica gel ativada em frasco Erlenmeyer com
tampa. Adicione 1,5 g de gua tratada e homogeneze.
gua tratada Transfira gua para um funil de separao de 1000 mL e extraia trs vezes com 60 mL da mistura diclorometano-n-hexano 1:1 v/v. Despreze a fase orgnica e
armazene a gua.
Algodo tratado Coloque, em frasco de Soxhlet, o algodo e extraia com 200 mL de
n-hexano por pelo menos cinco horas. Coloque em bquer e seque em estufa. Armazene
em frasco de vidro com tampa.
IAL - 699
Preparao da Amostra
Leite Homogeneze a amostra, pese 10 g, transfira para um almofariz contendo 15 g de
slica gel calcinada e macere at resultar em p.
Ovos Homogeneze a amostra (claras e gemas). Pese 5 g desta mistura e 5 g de gua
tratada, transfira para um almofariz contendo 15 g de slica gel calcinada e macere at
resultar em p.
Manteiga, carnes e outros produtos gordurosos Homogeneze a amostra, extraia a gordura
por refluxo em Soxhlet com 200 mL de n-hexano. Pese 2 g de gordura e dilua com nhexano em balo volumtrico de 25 mL.
Procedimento Transfira para uma coluna cromatogrfica 15 g de slica gel desativada a 10%. Adicione aproximadamente 1 g de sulfato de sdio anidro e posteriormente a mistura com a slica de leite ou ovo ou uma alquota de 5 mL da soluo de gordura diluda, equivalente a 0,4 g. Empacote muito bem. Elua com
200 mL da mistura de n-hexano-diclorometano na proporo de 4:1 (v/v) e em
seguida, com 200 mL da mistura de n-hexano-diclorometano na proporo de
1:1 (v/v). Recolha os dois eluatos em bales de fundo chato de 350 mL e concentre em rotavapor 40C, at quase a secura. Adicione aproximadamente 5 mL de
n-hexano e concentre novamente at que todo o diclorometano seja evaporado.
Transfira quantitativamente para um tubo graduado, completando o volume para
5 mL com n-hexano. Identifique e quantifique em cromatgrafo a gs com detector de
captura de eltrons.
Condies cromatogrficas Cromatgrafo a gs com ECD equipado com workstation,
coluna capilar (30 m x 0,32 mm x 0,25 m de filme) : fase estacionria: 5% de fenil metil
siloxano, temperatura do detector: 320C, temperatura do forno: 60C (1min ); (60220)C (10C/min.), 220-280C (3C/min), 280C (17 min) tempo total: 60 min.;
fluxo do gs de arraste: nitrognio: 1 mL/min, temperatura do injetor: 240C, modo de
injeo: splitless.
Curva-padro Injete as solues de trabalho com diferentes concentraes por duas ou
trs vezes ou at que haja repetitibilidade dos cromatogramas. Construa a curva-padro
dentro da faixa de linearidade do detector.
Anlise da testemunha e estudos de recuperao Para cada matriz a ser analisada, realize
anlise da testemunha e estudos de recuperaes com 5 repeties em pelo menos dois
nveis: 1 LQ e 10 LQ.
700 - IAL
Clculo
A anlise quantitativa feita por meio da curva-padro com padronizao externa, por
comparao de rea, levando em considerao o fator de diluio e quantidade de amostra. A anlise qualitativa feita por padronizao externa, por meio da comparao do
tempo de reteno dos princpios ativos e a confirmao em coluna de diferente polaridade ou por detector seletivo de massa. O resultado deve ser expresso em miligramas do
princpio ativo por quilograma da amostra (mg/Kg).
Referncia bibliogrfica
STEIWANDTER, H. Contributions to slica gel application in pesticide residue analysis. III. An on-line method for extracting and isolating chlorinated hidrocarbon pesticides
and polychlorinated biphenyls (PCBs) from milk and dairy products. Fresenius Z. Anal.
Chem., 312: 342-345, 1982.
372/IV Mtodo para determinao de ditiocarbamatos em frutas e vegetais
Este mtodo aplica-se determinao de resduos de ditiocarbamatos em frutas e
vegetais. Consiste na decomposio de ditiocarbamatos em meio de soluo de cloreto
estanoso e cido clordrico, gerando o CS2, que, aps purificao, coletado em uma
soluo de acetato de cobre e dietanolamina. Dois complexos cpricos [cprico-N-Nbis(2-hidroxietil)] so formados e medidos em conjunto por espectrofotometria na regio
de absoro no visvel, no comprimento de onda de 435 nm, usando como referncia um
branco dos reagentes.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS com cubetas de 1 cm; balana analtica; balana semi-analtica; manta de aquecimento para balo de 1000 mL com 3 bocas; sistema de purificao de
gua; aparelho de destilao e decomposio constitudo de: um balo de 1000 mL com
3 bocas, um destilador, um funil de separao, condensador, tubos lavadores de gases e
conexes apropriadas (Figura 1); pipetas volumtricas de diferentes capacidades, bales
volumtricos de diferentes capacidades, bqueres e provetas.
Reagentes
lcool
Dissulfeto de carbono com alto teor de pureza (D = 1,266 g/mL)
Hidrxido de sdio
cido clordrico
Acetato de chumbo
Acetato de cobre
Dietanolamina
IAL - 701
Soluo-padro intermediria CL2 Dilua 5 mL da soluo CL1 em um balo volumtrico de 50 mL e complete o volume com lcool
.
Soluo-padro intermediria CL3 Transfira 5 mL da soluo CL2 para um balo volumtrico de 250 mL e complete o volume com lcool, obtendo-se assim uma concentrao de 50,64 g/mL de dissulfeto de carbono.
Solues-padro de trabalho Em um balo volumtrico de 25 mL, contendo 15 mL da
soluo R4 (reagente de cor), pipete 0,2; 0,4; 1,0; 1,5; 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 e 8,0 mL
da soluo-padro intermediria CL3 e complete o volume com lcool etlico, resultando,
respectivamente, nas concentraes de 0,4; 0,8; 2,0; 4,0; 6,0; 8,0; 10,0; 12,0; 14,0 e 16,0
g, CS2 por mL.
Soluo-branco de reagentes Transfira 15 mL da soluo R4 para um balo volumtrico
de 25 mL e complete o volume com lcool.
Procedimento Quarteie e corte a amostra em pedaos pequenos. Homogeneze e armazene em frasco de vidro com tampa, no freezer. Monte o aparelho de destilao e decomposio, conforme Figura 1. Transfira 300 g da amostra para o frasco com trs bocas
do conjunto de destilao. Conecte o condensador na boca central e nas laterais, o tubo
de nitrognio e o funil de separao contendo 240 mL da soluo R6. No condensador
(boca central do balo de 3 bocas) conecte, em seqncia, trs tubos lavadores de gases,
adicionando a cada tubo respectivamente: 10 mL da soluo R1, 10 mL da soluo R7 e
15 mL da soluo R3. Abra o fluxo de nitrognio brandamente. Aquea o frasco rapidamente at a ebulio por 60 minutos. Aps o trmino, desligue o fluxo de nitrognio e
desconecte o terceiro tubo. Transfira para um balo volumtrico de 25 mL, completando
o volume com lcool. Mea a absorbncia a 435 nm em espectrofotmetro, contra o
branco de reagentes.
Anlise da testemunha e estudos de recuperao Para cada matriz a ser analisada, realize
anlise da testemunha e estudos de recuperao com 5 repeties em pelo menos dois
nveis: 1 LQ e 10 LQ.
Nota: Limite de quantificao (LQ) Menor concentrao do analito na amostra que
pode ser quantificada com preciso e exatido aceitveis, sob determinadas condies
experimentais adotadas.
Curva-padro Mea a absorbncia de todas as solues de trabalho em espectrofotmetro, a
435 nm contra o branco de reagentes. Trace a curva absorbncia versus concentrao de CS2.
IAL - 703
Fator de converso
1,776
1,742
1,810
1,578
O resultado deve ser expresso em miligramas do princpio ativo ou de CS2 por quilograma
da amostra (mg/Kg).
704 - IAL
Referncias bibliogrficas
KEPPEL, G.E. Modification of the carbon dissulfide evolution method for dithiocarbamate residues. J. Assoc. Off. Anal. Chem. v. 52, p. 162-169, 1969.
KEPPEL, G.E. Collaborative study of the determination of dithiocarbamate residues
by a modified carbon dissulfide evolution method. J. Assoc. Off. Anal. Chem. v. 54, p.
528-532, 1971.
THEIR H.; ZEUMER, H. editors. Multiresidue method SIS. Ditiocarbamate and thiuram disulfide fungicides photometric determination. In: Manual of Pesticide Residue
Analysis. Deutsche. Forschungsgemeinschaft, Pesticides Comm. Weinhein; Verlag,
1987. v. 1 p. 353-360.
Colaboradores
Helosa Helena Barretto de Toledo, Snia Bio Rocha, Tereza Atsuko Kussumi e
Vera Regina Rossi Lemes
IAL - 705
CAPTULO
XXI
FERMENTOS
IAL - 707
708 - IAL
XXI
Captulo XXI - Fermentos
FERMENTOS
Fermentos biolgicos
A = n de mL da soluo P da amostra
a = n de g de glicose correspondente a 10 mL das solues de Fehling
P = n de g da amostra
V = n de mL gasto da soluo
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v
1:Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985.
p. 139-140.
374/IV Fermentos biolgicos Poder fermentativo
Este mtodo destina-se a medir a capacidade de produo de CO2 de fermentos
biolgicos nas CNTP e baseia-se na liberao do CO2 pela Saccharomyces cerevisae na
presena de sacarose (substrato), num sistema fechado.
Material
Banho-maria, balana analtica, aparelho de Hayduck-Nagel adaptado (Figura 1), frasco
Erlenmeyer de 1000 mL, bqueres de 10 e 50 mL e proveta de 500 mL.
710 - IAL
Clculo
condies ambientais. Feche a torneira C. Abaixe um pouco o bulbo E para que reduza a
presso dentro do aparelho e o nvel no tubo D esteja a 10 mL acima do zero. Verifique
se no h vazamento pelas conexes. Adicione, lentamente ao balo A, 10 mL de cido
sulfrico (1+5) contido na bureta F. Deixe cerca de 2 min em repouso e agite o balo A
vigorosamente. Deixe o aparelho em repouso por 5 minutos. Leia o volume de CO2 produzido no tubo D. Anote a temperatura e a presso ambiente.
Clculo
CAPTULO
XXII
SAL
IAL - 717
718 - IAL
XXII
Captulo XXII - Sal
SAL
sal para o consumo humano pode ser avaliado por meio do exame fsico-qumico que alm de determinar seu principal componente, o cloreto de sdio, inclui
a determinao de umidade, substncias insolveis em gua, sulfatos, clcio e
magnsio. A concentrao de ons clcio, magnsio e sulfatos indicativa da qualidade do sal; quanto menor seus teores, mais puro ser o sal. Um sal refinado deve conter no
mximo 0,07% de clcio, 0,5% de magnsio e 0,21% de sulfatos. O cloreto de sdio puro
no higroscpico. O que torna o sal mido a presena do cloreto de magnsio, cloreto
de clcio e sulfatos de magnsio e clcio.
No exame microscpico tolerada a presena de areia e fragmentos de conchas at o
limite dos insolveis estabelecidos em seu padro de identidade e qualidade.
O exame microbiolgico no significativo, uma vez que o sal por excelncia um
conservador natural.
Assim, na anlise de sal, as determinaes usuais so: granulometria, a perda por
dessecao (umidade), substncias insolveis em gua, cloretos, turbidez, clcio, magnsio
e sulfatos.
H muitos anos o sal utilizado como veculo para garantir o suprimento adequado
de iodo populao, que deve ser obrigatoriamente adicionado na proporo estabelecida
pelo Ministrio da Sade. No Brasil, essa adio normalmente realizada utilizando-se o
iodato de potssio. Essa prtica visa minimizar a ocorrncia de distrbios causados pela deficincia de iodo, entre eles, o bcio. Desta forma, a determinao do iodo no sal destinado
ao consumo humano prtica rotineira.
IAL - 719
720 - IAL
Preparo da amostra
Para as determinaes analticas do sal faz-se necessria a homogeneizao da amostra, passando-a por tamis n 4. Se necessrio, triture os cristais retidos pelo tamis e misture novamente amostra. Homogeneze e transfira para um frasco com rolha esmerilhada.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos Qumicos e Fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 285.
378/IV Determinao da umidade
um indicador da pureza do sal, j que este produto tem, em sua composio, sais
higroscpicos de magnsio e de clcio. Um sal refinado deve ser submetido a um processo
adequado de secagem para a sua avaliao.
Procedimento Dever ser seguida a tcnica indicada em 012/IV, usando 5 g da amostra
e estufa a 150C.
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos Qumicos e Fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 284.
AMERICAN SOCIETY for TESTING and MATERIALS. E 534-86: standard test
methods for chemical analysis of sodium chloride. Philadelphia: A.S.T.M., 1986.
RAFOLS, J.M. Development of Analytical Methods for Commercial Sodium Chloride.
In: THIRD SYMPOSIUM ON SALT. NORTHERN OHIO GEOLOGICAL SOC.,
1970. p. 186-194.
379/IV Determinao de insolveis totais em gua
Esta determinao avalia o teor de impurezas totais, como partculas de carvo, areia,
fragmentos de conchas e outras, que no tenham sido eliminadas totalmente pela refinao.
Quanto menor o seu teor, melhor a qualidade do sal.
IAL - 721
Material
Bqueres de 150 e 600 mL, proveta de 500 mL, cadinho de Gooch de 30 mL previamente
preparado com camada de fibra de xido de alumnio, bomba de vcuo, frasco Kitassato
com alonga e anel de borracha, estufa, dessecador contendo slica gel, mufla e balana analtica.
Procedimento Pese 50 g da amostra em um bquer de 150 mL e transfira para um
outro de 600 mL, com auxlio de 300 mL de gua. Agite at dissolver. Filtre em cadinho
de Gooch com camada de fibra de xido de alumnio (previamente aquecido em mufla a
550C, resfriado em dessecador at a temperatura ambiente e pesado). Lave o bquer e o
cadinho com gua, com pores de 20 mL, at que o filtrado no mostre mais opalescncia
ao adicionar-se uma gota de soluo de nitrato de prata 0,1 M. Aquea o cadinho de Gooch
com o resduo em estufa a 105C por 2 horas. Resfrie em dessecador at a temperatura ambiente. Pese. Repita as operaes de aquecimento por 30 minutos na estufa e resfriamento
at peso constante.
Clculo
722 - IAL
Clculo
Iodeto de potssio
Soluo de tiossulfato de sdio 0,005 M
Soluo de amido a 1%, recm-preparada Dissolva 1 g de amido em 100 mL de gua,
ferva e esfrie temperatura ambiente.
Procedimento Pese 10 g da amostra e transfira para um frasco Erlenmeyer de 500 mL,
com auxlio de 200 mL de gua bidestilada. Agite at a dissoluo. Adicione 5 mL de soluo de cido sulfrico 0,5 M. Adicione cerca de 0,1 g de iodeto de potssio, 2 mL de soluo
de amido a 1%, como indicador, e titule o iodo liberado com soluo de tiossulfato de sdio
0,005 M, usando uma bureta de 10 mL.
Notas
A quantidade de cido sulfrico indicada necessria para reduzir o pH da soluo a 1,5 2,0, para que ocorra a reao. Dependendo da composio do sal, alguns aditivos podem
interferir nessa reduo de pH, sendo que, nesses casos necessria a adio de maior quantidade do cido sulfrico para se atingir a faixa de pH desejada.
A presena do amido, logo no incio da titulao, pode interferir no ponto final, principalmente se o sal contiver muito iodo; nesse caso, recomenda-se iniciar a titulao com
tiossulfato de sdio sem a adio do indicador. Assim que a soluo torna-se amarelo-clara,
adicione o amido como indicador.
Clculo
Turbidez
25
50
100
Caracterstica do sal
correspondente
refinado
grosso ou modo
sal muito sujo
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos Qumicos e Fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 289.
385/IV Determinao de clcio por permanganometria
Material
Bquer de 400 mL, proveta de 50 mL, funil de 5 cm de dimetro, papel de filtro, bureta de
25 mL, pipeta de 1 mL, balana semi-analtica e balana analtica.
Reagentes
cido actico glacial
Soluo de oxalato de amnio a 5% m/v
cido sulfrico (1+4)
Soluo de permanganato de potssio 0,02 M
Procedimento Pese 5 g da amostra e transfira para um bquer de 400 mL, com auxlio
de 50 mL de gua. Adicione 1 mL de cido actico glacial. Aquea at a ebulio. Adicione
lentamente, agitando sempre, 25 mL de soluo de oxalato de amnio a 5%. Deixe em
repouso por 2 horas. Filtre. Receba o filtrado em um bquer de 400 mL. Lave at que o filtrado no contenha on oxalato. Transfira o papel de filtro com o precipitado para o bquer
onde foi feita a precipitao, reservando as guas de lavagem para a dosagem de magnsio.
IAL - 727
Dissolva o precipitado com 20 mL de cido sulfrico (1+4). Adicione 50 mL de gua. Titule a quente com soluo de permanganato de potssio 0,02 M at colorao rsea.
Clculos
Em clcio:
Em xido de clcio:
728 - IAL
Reagentes
Soluo de hidrxido de sdio a 20% m/v
Calcon a 1% com sulfato de sdio m/m
Propionato de clcio
Soluo alcolica de negro de eriocromo T a 0,4% m/v
Soluo-tampo de pH =10 Em um balo volumtrico de 1000 mL, dissolva 67,5 g de
cloreto de amnio em gua destilada, adicione 570 mL de hidrxido de amnio (D = 0,88)
e complete o volume com gua.
Soluo de sal dissdico de EDTA 0,1 M Pese 37,21 g de C10H14N2Na2O8.2H2O,
transfira para um balo volumtrico de 1000 mL e complete o volume com gua.
Soluo-padro de propionato de clcio Seque o propionato de clcio em estufa a 105C
por 6 horas. Pese exatamente 1 g, transfira para um balo volumtrico de 100 mL, com
auxlio de gua e complete o volume. Transfira com uma bureta, 10 mL desta soluo para
um frasco Erlenmeyer de 250 mL. Junte 50 mL de gua, 1 mL de soluo-tampo pH 10
e 0,5 mL de soluo alcolica de negro de eriocromo T a 0,4%. Titule a soluo de EDTA
at colorao azul.
Clculo do fator da soluo de EDTA:
Reagentes
Soluo de EDTA 0,01 M conforme 386/IV
Soluo alcolica de negro de eriocromo T a 0,4% m/v
Soluo tampo pH 10, conforme 386/IV
Procedimento Transfira 10 mL da soluo estoque A obtida conforme 386/IV para um
frasco Erlenmeyer de 250 mL. Junte 25 mL de gua e 10 mL de soluo-tampo de pH=10.
Adicione 0,5 mL de soluo alcolica de negro de eriocromo T a 0,4%. Titule com EDTA
0,01 M at viragem do indicador, de vermelho para azul ntido.
Clculo
(v - v) x f x 0,02431 = magnsio por cento m/m
v = n de mL de soluo de EDTA 0,01 M gasto na titulao correspondente ao Ca2+ +
Mg2+
f = fator da soluo de EDTA
v = n de mL de soluo de EDTA 0,01 M gasto na titulao do clcio, determinado conforme 386/IV.
Referncias bibliogrficas
AMERICAN SOCIETY for TESTING and MATERIALS. E 534-86: standard test
methods for chemical analysis of sodium chloride. Philadelphia: A.S.T.M., 1986.
RAFOLS, J.M. Development of Analytical Methods for Commercial Sodium Chloride.
In: THIRD SYMPOSIUM ON SALT. NORTHERN OHIO GEOLOGICAL SOC.,
1970. p. 186-194.
389/IV Determinao de sulfatos por precipitao
Material
Bquer de 250 mL, proveta de 50 mL, funil de 5 cm de dimetro, cadinho de Gooch com
camada de fibra de xido de alumnio, bomba de vcuo e frasco Kitassato com alonga e anel
de borracha.
732 - IAL
Reagentes
cido clordrico (D = 1,19)
Soluo de cloreto de brio a 10% m/v
Procedimento Pese 10 g da amostra e transfira para um bquer de 250mL, com auxlio
de 100 mL de gua. Aquea at a ebulio e adicione, lentamente, 1 mL de cido clordrico. Ferva. Adicione, gota a gota, 10 mL da soluo de cloreto de brio a 10%. Aquea em
banho-maria por 1 hora. Deixe em repouso por 12 horas. Decante. Lave o precipitado,
filtrando em cadinho de Gooch com camada de fibra de xido de alumnio, previamente
aquecido em estufa a 120C, por uma hora, resfriado em dessecador e pesado. Lave at que
todo on cloreto tenha sido eliminado (teste adicionando-se no filtrado uma gota de nitrato
de prata 0,1 M at no apresentar opalescncia). Aquea em estufa a 120C, por 1 hora,
resfrie no dessecador e pese. Repita as operaes de aquecimento e resfriamento at peso
constante.
Clculo
Em on sulfato:
Em sulfato de sdio
N = n de g de sulfato de brio
P = n de g da amostra usado na precipitao
A = n de g de sulfato de magnsio anidro por cento
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v.1: Mtodos Qumicos e Fsicos para anlise de alimentos. 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 293.
AMERICAN SOCIETY for TESTING and MATERIALS. E 534-86: standard test
methods for chemical analysis of sodium chloride. Philadelphia: A.S.T.M., 1986.
IAL - 733
se houver excesso de on sulfato, calcule todo on clcio como sulfato de clcio e o excesso
de on sulfato, como sulfato de magnsio; se ainda restar on sulfato, converta-o em sulfato
de sdio;
se houver excesso de on magnsio, calcule como cloreto de magnsio;
o teor de cloreto de sdio obtido por diferena.
Como resultado, podemos ter sais com pelo menos trs composies diferentes:
1caso sal com excesso de magnsio (CaSO4 , MgSO4 e MgCl2)
2caso sal com excesso de clcio (CaSO4, CaCl2 e MgCl2 )
3 caso sal com excesso de sulfato ( CaSO4, MgSO4, e Na2SO4 )
1 caso com excesso de magnsio
I Umidade
II Insolveis
III Ca2+
IV Mg2+
V SO
VI SO combinado ao Ca2+ = III x 2,3967
VII Teor de CaSO4 = III + VI
VIII SO restante = V - VI
IX Mg2+ combinado com o SO = VIII x 0,2531
X teor de MgSO4 = VIII x 1,2531
XI Mg2+ restante = IV - IX
XII Teor de MgCl2 = XI x 3,9206
2 caso excesso de clcio
I Umidade
II Insolveis
III Ca2+
IV Mg2+
V SO
VI Ca2+ combinado com o SO
VII Teor de CaSO4 = V + VI
VIII Ca2+ restante = III - VI
736 - IAL
= V x 0,4172
Colaboradores
Neusa Vitria Valrio Silveira e Regina Sorrentino Minazzi Rodrigues
738 - IAL
CAPTULO
XXIII
MINERAIS E
CONTAMINANTES
INORGNICOS
IAL - 739
740 - IAL
XXIII
Captulo XXIII - Minerais e Contaminantes Inorgnicos
aquecedora (mtodo tradicional), mas pode-se tambm utilizar, entre outras, um sistema
de microondas aberto ou fechado. A principal vantagem da via seca, em relao mida,
que permite digerir maior quantidade de amostra, o que possibilita a sua utilizao na
anlise de contaminantes inorgnicos em alimentos por tcnicas menos sensveis como
espectrometria de absoro atmica com chama - FAAS e espectrometria de emisso
atmica com plasma de argnio indutivamente acoplado - ICP OES. Suas principais desvantagens devem-se ao fato de que o aquecimento excessivo pode levar perda do analito
por volatilizao e/ou tornar certos compostos metlicos insolveis. J a via mida no
apresenta essas desvantagens, porm h limitao com relao quantidade de amostra,
por utilizar grandes quantidades de oxidantes, acarretando maior custo alm do alto risco
de contaminao da amostra pelos reagentes e de exigir maiores cuidados por parte do
analista. Quanto utilizao de microondas, sua principal vantagem deve-se ao fato de ser
um mtodo rpido, porm permite somente o tratamento de pequenas quantidades de
amostra sendo, por esse motivo, mais utilizado na anlise de contaminantes inorgnicos
em alimentos por tcnicas mais sensveis, como espectrometria de absoro atmica com
forno de grafite ET-AAS ou espectrometria de emisso atmica com plasma de argnio
indutivamente acoplado a espectrmetro de massa ICP-MS. Os critrios utilizados para
a escolha do mtodo de digesto da amostra so: tipo e quantidade de amostra, natureza
e concentrao do analito na amostra, volatilidade do analito e tipo de tcnica analtica
para deteco.
393/IV Digesto da amostra
Via Seca
Material
Balana analtica, cpsula de porcelana, mufla, estufa, bico de Bnsen, tela de amianto,
pipeta volumtrica, chapa aquecedora e bales volumtricos de 10 ou 25 mL.
Reagentes
cido ntrico para anlise de traos de metais.
Procedimento Em cpsula de porcelana, pese ou pipete uma quantidade adequada
da amostra previamente homogeneizada, de tal maneira que a leitura do elemento na
soluo da amostra digerida esteja compreendida na faixa linear da curva-padro. Caso
o alimento seja lquido, coloque a cpsula em estufa a 105C at secar completamente.
Queime a amostra em bico de Bnsen com tela de amianto at cessar o desprendimento
742 - IAL
de fumaa, tomando cuidado para evitar respingos e que a amostra se incendeie. Coloque
a cpsula na mufla e aquea gradualmente at (400-450)C. Para as determinaes de Fe,
Ca, Mg, Na, K, Mn, Cr e Cu, a temperatura da mufla poder ser at 550C, deixando
nessa temperatura por um perodo de quatro horas. Retire da mufla e deixe esfriar.
Umedea as cinzas com gua desmineralizada e adicione 1 mL de HNO3. Aquea at
a secura em chapa aquecedora. Retorne para a mufla (400-450)C quantas vezes forem
necessrias, repetindo a adio de cido, at a completa mineralizao da amostra, ou seja,
at a obteno de cinzas claras, isentas de carvo. Dissolva as cinzas utilizando o cido
indicado de acordo com a tcnica analtica usada para a determinao, de tal maneira
que a concentrao final de cido seja a mesma que a das solues-padro. Aquea, se
necessrio, e transfira quantitativamente com gua destilada e deionizada para balo
volumtrico de 10 ou 25 mL ou um outro volume de acordo com a sensibilidade da
tcnica analtica a ser usada para a determinao dos elementos. Prepare as amostras em
triplicata e um branco dos reagentes em paralelo.
Via mida (hidrlise com HCl)
Esta tcnica de digesto aplicvel em amostras de leite e produtos lcteos, arroz, feijo,
pes e biscoitos, para a posterior determinao de analitos por espectrometria de emisso
atmica com plasma de argnio indutivamente acoplado.
Material
Balana analtica, frasco Erlenmeyer de 125 mL, chapa aquecedora, pipeta volumtrica,
funis, balo volumtrico de 25 mL, papel de filtro e vidro de relgio ou filme de PVC.
Reagentes
cido clordrico para anlise de traos e metais
gua destilada e deionizada
Procedimento - Em frasco de Erlenmeyer de 125 mL, pese ou pipete uma quantidade
adequada de amostra previamente homogeneizada, de tal maneira que a leitura do elemento na soluo de amostra digerida esteja compreendida na faixa linear da curva-padro. Caso a amostra seja slida, adicione um pouco de gua para dissolver o p. Adicione
5 mL de cido clordrico 1:1 (v/v). Coloque o frasco Erlenmeyer sobre chapa aquecedora
a (100-150)C, cobrindo com vidro de relgio ou filme PVC, agitando ocasionalmente
e mantendo o refluxo por 2 horas. Filtre a soluo, ainda quente, diretamente para um
balo volumtrico de 25 mL. Complete o volume com gua aps a soluo ter atingido
IAL - 743
a temperatura ambiente. Caso a soluo no seja lida no dia, transfira-a para um frasco de
polietileno. Prepare as amostras em triplicata e um branco dos reagentes em paralelo.
Nota: para amostras de arroz e de feijo recomendvel que o contato da amostra com o
cido seja mantido em repouso durante a noite. Aquea em chapa aquecedora por 3 horas.
Referncias bibliogrficas
KIRA, C.S. Estudo da composio mineral e dos elementos-trao essenciais em
amostras de leite e produtos lcteos por espectrometria de emisso atmica com
plasma induzido e anlise por ativao com nutrons. Dissertao (mestrado) Instituto de Pesquisas Energticas e Nucleares, So Paulo, 2002.
OKADA, I.A. Determinao simultnea de nutrientes inorgnicos em alimentos:
desenvolvimento de metodologia analtica e avaliao de seus nveis em amostras de
arroz e feijo in natura. Dissertao (mestrado) Coordenao dos Instituto de Pesquisa
da Secretaria de Estado da Sade de So Paulo, So Paulo, 2003.
394/IV Determinao de minerais por espectrometria de absoro atmica com
chama
O mtodo apresentado refere-se quantificao dos minerais: ferro, cobre, clcio,
magnsio, zinco, mangans, sdio e potssio em alimentos. Baseia-se na determinao por
espectrometria de absoro atmica com chama dos referidos minerais em uma amostra
representativa do alimento, previamente digerida.
Material
Espectrmetro de absoro atmica com chama equipado com corretor de
background, lmpada do elemento a ser determinado, mufla, chapa aquecedora, balana
analtica, estufa, bales volumtricos, cpsulas de porcelana e pipetador automtico com
volume ajustvel.
Reagentes
cido ntrico para anlise de traos de metais
cido clordrico para anlise de traos de metais
Solues-padro estoque, de 1000 mg/L dos seguintes elementos: Fe, Ca, Mg, Zn, Cu,
744 - IAL
para os clculos. Alternativamente, o equipamento poder ser programado para estabelecer a curva-padro e fornecer leitura das amostras diretamente em concentrao. Faa a
leitura das amostras. Se necessrio, dilua uma nova alquota da amostra para que a leitura
de absorbncia fique compreendida na faixa linear da curva-padro e adicione soluo de
cloreto de lantnio de tal forma que a concentrao final seja 0,1% em lantnio m/v.
Determinao de Na e K O sdio interfere na anlise de potssio e vice-versa. Para evitar esse tipo de interferncia, deve-se adicionar um supressor de ionizao que, no caso da
anlise de sdio, o potssio e vice-versa para o potssio.
Para a determinao de Na e K na mesma soluo, adicione em cada soluo-padro,
branco e amostra, soluo de csio a 10% m/v, como supressor de ionizao, de tal forma
que a concentrao de Cs na amostra e nas solues-padro seja de 0,5% m/v. Zere o
equipamento com o branco e faa a leitura das absorbncias das solues-padro. Estabelea a curva-padro para cada elemento a ser determinado usando regresso linear e
utilize o coeficiente angular da reta (absortividade) para os clculos. Alternativamente, o
equipamento poder ser programado para estabelecer a curva-padro e fornecer leituras
das amostras diretamente em concentrao. Em seguida, faa a leitura das amostras. Se
necessrio, dilua uma nova alquota da soluo da amostra com adio do supressor de
ionizao para que a leitura de absorbncia fique compreendida na faixa linear da curvapadro e calcule a concentrao de acordo com a equao a seguir:
Clculo
Aa = absorbncia da amostra
Ab = absorbncia do branco da amostra
a = absortividade, calculada a partir da curva de calibrao
V1 = volume do balo no qual a amostra foi transferida aps dissoluo
d = fator de diluio da amostra
v = volume da amostra, em mL
m = massa da amostra, em g
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Anaytical Chemists. 16th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1995, Chapter 50, p. 14. (method 985.35).
746 - IAL
395/IV Determinao de minerais por espectrometria de emisso atmica por plasma de argnio indutivamente acoplado
Este mtodo aplicado para a determinao de clcio, cromo, cobre, ferro, potssio, magnsio, mangans, sdio, fsforo e zinco em alimentos por espectrometria de
emisso atmica por plasma de argnio acoplado indutivamente (ICP OES), nas amostras previamente mineralizadas por via mida conforme 393/IV.
Material
Espectrmetro de emisso atmica por plasma de argnio acoplado indutivamente (ICP
OES), mufla, balana analtica, estufa, chapa aquecedora, pipetadores automticos com
volumes ajustveis, frascos de polietileno, cpsulas de porcelana e bales volumtricos.
Reagentes
cido ntrico para anlise de traos de metais
cido clordrico para anlise de traos de metais
Soluo-padro estoque de 1000 mg/L ou 10000 mg/L dos elementos a serem analisados,
com certificado anlise e incerteza associada.
Procedimentos
Ajuste do equipamento Os parmetros instrumentais devem ser otimizados segundo o
manual de instrues do fabricante.
Preparao da amostra A digesto da amostra segue o procedimento 393/IV. Dissolva
as cinzas resultantes da digesto da amostra com cido clordrico concentrado, de tal
modo que a concentrao final de HCl seja 10% v/v. Aquea, se necessrio, para melhor
dissoluo. Transfira quantitativamente com gua destilada e deionizada para balo volumtrico. Alternativamente para alguns alimentos pode-se proceder a digesto da amostra
por via mida.
Curva-padro Prepare as solues-padro de trabalho multi-elementar, a partir da soluo-padro estoque, com no mnimo seis pontos, levando em considerao a sensibilidade do equipamento e a faixa linear de trabalho para cada elemento. As solues so
preparadas em meio de cido clordrico a 10% v/v.
Determinao Zere o equipamento com soluo de HCl 10%. Estabelea a curvaIAL - 747
padro para cada elemento a ser determinado usando regresso linear. Faa a leitura das
amostras e verifique a calibrao aps analisar 20 amostras, utilizando uma das solues
da curva-padro. Caso a leitura apresente uma variao maior que a estabelecida pelo
laboratrio, recalibre. Se necessrio, dilua a soluo da amostra para que a leitura fique
compreendida na faixa linear da curva-padro.
Clculo
L x b x d = concentrao do elemento na amostra, em mg/kg ou mg/L
m (ou v)
L = leitura da amostra, em mg/L
b = volume do balo para o qual a cinza da amostra foi transferida, em mL
d = fator de diluio da amostra (caso necessrio)
m = massa da amostra, em g
v = volume da amostra, em mL
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists, 16th ed., v. 1, Arlington:
A.O.A.C., 1995, chapter 3. p. 4. (method 985.01).
396/IV Determinao de clcio por volumetria com EDTA
O mtodo refere-se determinao de clcio em presena de magnsio. Baseia-se
na mineralizao da amostra e determinao de clcio por titulao complexomtrica
com EDTA (sal dissdico do cido etilenodiamino tetractico), usando uma mistura de
cido calconcarboxlico, alaranjado de metila e cloreto de sdio, como indicador.
Material
Mufla, estufa, balana analtica, chapa aquecedora, cpsula de porcelana, bales volumtrios, frascos Erlenmeyer de 125 mL, bureta e almofariz com pistilo.
Reagentes
Soluo-padro de EDTA 0,01 M Pese exatamente 3,722 g de EDTA
(C10H14N2Na2O8.2H2O). Dissolva e transfira quantitativamente para balo volumtrico
748 - IAL
de 1000 mL, com gua destilada e deionizada. Complete o volume com gua e agite.
Transfira para um frasco de polietileno. Determine a molaridade da soluo seguindo a
tcnica descrita no apndice I.
Indicador Pese 0,5 g de indicador cido calcon carboxlico, 0,25 g de alaranjado de
metila e 49,25 g de cloreto de sdio. Triture os trs reagentes em almofariz e guarde em
frasco mbar.
Hidrxido de sdio ou de potssio
cido clordrico para anlise de traos de metais
cido ntrico para anlise de traos de metais
Procedimento
Preparao da amostra O pr-tratamento e a digesto da amostra seguem os procedimentos de tratamento da amostra e do mtodo 393/IV, respectivamente. Dissolva as cinzas com uma alquota adequada de cido clordrico concentrado, de modo que a concentrao final de cido no balo seja 10% v/v. Aquea, se necessrio, para melhor dissoluo.
Transfira com gua destilada e deionizada para balo volumtrico e complete o volume.
Determinao - Pipete, em um frasco Erlenmeyer de 125 mL, uma alquota da soluo
da amostra previamente mineralizada que contenha cerca de 5 mg de clcio e adicione 50
mL de gua. Ajuste o pH da soluo para a faixa de pH de (12-14), adicionando pastilhas
de hidrxido de sdio ou de potssio. Adicione a mistura do indicador at que a soluo
adquira a colorao vinho. Titule com a soluo de EDTA 0,01 M, agitando vigorosamente ou utilizando agitador magntico, at que a colorao da soluo da amostra mude
para cor verde persistente. Titule um branco preparado da mesma forma, com todos os
reagentes utilizados na amostra. Calcule a concentrao de clcio, usando a frmula a
seguir.
Clculo
m = massa da amostra, em g
M = molaridade do EDTA
Referncia bibliogrfica
E. MERCK AG. Mtodos complexomtricos de valoracin con Titriplex. 3 ed. Darmstadt, Alemanha. p. 25.
397/IV Determinao espectrofotomtrica de ferro com --dipiridila
O mtodo aplicvel a alimentos naturais e enriquecidos, e baseia-se na complexao do
ferro (II) com --dipiridila e determinao por espectrofotometria na regio do visvel.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, balana analtica, mufla, estufa, chapa aquecedora, bales
volumtricos, cpsulas de porcelana, pipetas volumtricas e bqueres.
Reagentes
cido clordrico para anlise de traos de metais
cido ntrico para anlise de traos de metais
Soluo de --dipiridila 0,1% Dissolva 0,1 g de --dipiridila em gua destilada e
deionizada e dilua a 100 mL. Este reagente estvel por vrias semanas, se for mantido
em local fresco e escuro.
Soluo-tampo acetato/cido actico Dissolva em gua destilada e deionizada 8,3 g de
acetato de sdio com baixo teor de ferro, previamente seco a 100C em estufa. Adicione
12 mL de cido actico e dilua a 100 mL.
Soluo-padro estoque de ferro (1000 mg/L) Dissolva 3,512 g de sulfato de ferro II
e amnio hexahidratado [Fe(NH4)2(SO4)2.6H2O] em gua destilada e deionizada. Adicione 2 gotas de HCl concentrado. Transfira para um balo volumtrico de 500 mL e
complete o volume.
Nota: alternativamente, poder ser utilizada soluo-padro de 1000 mg/L de Fe para
espectrofotometria de absoro atmica.
Soluo-padro intermediria de ferro (0,01 mg/mL) Pipete 1 mL da soluo- estoque
750 - IAL
A = absorbncia da amostra
A0 = absorbncia do branco da amostra
V = volume do balo onde foram transferidas as cinzas, em mL
m = massa da amostra, em g
a = coeficiente angular da curva-padro
V1 = volume da alquota da amostra usada na reao, em mL
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 16th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1995, Chapter 32. p. 3-4. (method 944.02).
398/IV Determinao de fsforo por espectrofotometria na regio do visvel
O mtodo aplicvel determinao de fsforo em alimentos. Baseia-se na complexao do fsforo com vanado-molibdato de amnio e determinao por espectrofotometria na regio do visvel.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, balana analtica, mufla, estufa, chapa aquecedora, bales
volumtricos, cpsulas de porcelana, pipetas volumtricas, provetas e bqueres.
Reagentes
cido clordrico para anlise de traos de metais
cido ntrico para anlise de traos de metais
Soluo-padro estoque de fsforo (2,0 mg de P por mL) Pese exatamente 4,3937 g
de fosfato cido de potssio (KH2PO4), seco a 105C em estufa por aproximadamente 2
horas. Transfira quantitativamente para um balo volumtrico de 500 mL e complete o
volume com gua destilada e deionizada. Estoque sob refrigerao.
Soluo-padro de trabalho de fsforo (0,1 mg de P por mL) Pipete 5 mL da soluo752 - IAL
A = absorbncia da amostra
A0 = absorbncia do branco da amostra
V = volume do balo onde foram transferidas as cinzas, em mL
m = massa da amostra, em g
v = volume da amostra em mL
a = coeficiente angular da curva-padro
V1 = volume da alquota da amostra usada na reao em mL
Referncias bibliogrficas
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 16th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1995, chapter 39. p. 4. (method 969.31).
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 16th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1995, chapter 50. p. 12. (method 986.24).
399/IV Determinao de chumbo por espectrometria de absoro atmica com
chama
Aps a mineralizao da amostra por via seca, o chumbo concentrado por complexao com pirrolidina ditiocarbamato de amnio (APDC), extrado com metilisobutilcetona e quantificado por espectrometria de absoro atmica com chama.
Material
Espectrmetro de absoro atmica com chama equipado com corretor de background,
utilizando nebulizador de prola de impacto e lmpada de chumbo, mufla, chapa aquecedora, balana analtica, estufa, bales volumtricos de 10, 50 e 100 mL, cpsulas de
porcelana, pipetas automticas com volume ajustvel de 0,5 a 5 mL e pipetas automticas
com volume ajustvel de 100 a 1000 L.
Reagentes
cido ntrico para anlise de traos de metais
cido clordrico para anlise de traos de metais
MIBC (metilisobutilcetona) saturada com gua Abra o frasco contendo 1000 mL do
solvente, adicione gua destilada e deionizada at preencher o seu volume total. Agite.
754 - IAL
1,5; 2,0 e 2,5 mL da soluo-padro de trabalho de chumbo de 0,8 mg/L, correspondentes s concentraes finais de 0,1; 0,2; 0,4; 0,6; 0,8 e 1 mg/L.
Ajuste do equipamento Ajuste o espectrmetro de absoro atmica de acordo com o
manual de instrues do fabricante, usando o comprimento de onda 283,3 nm e chama
oxidante de ar/acetileno. Ajuste a chama e a nebulizao para obteno de mxima absorbncia, utilizando a soluo-padro de chumbo de 0,8 mg/L.
Complexao e extrao dos padres (curva-padro) Complexe e extraia as soluespadro seguindo o procedimento da amostra. Prepare e extraia tambm um padro de 0,8
mg/L, pipetando em balo de 50 mL, 400 L do padro de chumbo de 40 mg/L e extraia
em 20 mL de MIBC. Esse padro servir para o ajuste do equipamento.
Determinao Zere o equipamento com o MIBC e faa a leitura das absorbncias do branco
e dos padres. Estabelea a curva-padro usando regresso linear e calcule o coeficiente angular.
Faa a leitura das amostras e calcule a concentrao de chumbo usando a frmula a seguir.
Clculo
Aa = absorbncia da amostra
Ab = absorbncia do branco da calibrao
a = absortividade, obtida a partir da curva-padro
V = volume do solvente orgnico, em mL
V1 = volume do balo para o qual foi transferida a amostra, em mL
V2 = volume da alquota da amostra utilizada para a extrao, em mL
m = massa da amostra, em g
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists. 16th ed., v. 1: Arlington:
A.O.A.C., 1995, chapter 9. p. 16. (method 973.35).
400/IV Determinao de cdmio por espectrometria de absoro atmica com chama
O mtodo aplicvel na determinao de cdmio em alimentos. A matria orgnica destruda por via seca, a cinza obtida dissolvida em cido clordrico e o cdmio
determinado utilizando a tcnica da espectrometria de absoro atmica com chama.
Material
756 - IAL
Aa = absorbncia da amostra
IAL - 757
Colaboradores
Alice Momoyo Sakuma, Carmen Silvia Kira, Franca Durante de Maio, Isaura Akemi Okada,
Mrcia Liane Buzzo, Maria Cristina Duran e Maria de Ftima Henriques Carvalho
758 - IAL
CAPTULO
XXIV
MICOTOXINAS
IAL - 759
760 - IAL
XXIV
Captulo XXIV - Micotoxinas
MICOTOXINAS
Cada vez maior o nmero de pases que importam e exportam grandes quantidades de alimentos, e isto leva a novos desafios para a indstria alimentcia e para os
rgos reguladores responsveis pelo cumprimento das normas relativas inocuidade dos
alimentos comercializados e proteo dos consumidores.
Micotoxinas so metablitos txicos produzidos por alguns fungos denominados
de fungos toxignicos, sendo os principais representantes os dos gneros Aspergillus, Penicillium e Fusarium. Entre as principais micotoxinas de interesse na rea de alimentos
citamos: aflatoxinas, patulina, ocratoxina, zearalenona, tricotecenos, fumonisinas entre
outras. As aflatoxinas so as que apresentam maior importncia sob o ponto de vista
toxicolgico.
As micotoxinas so produzidas somente quando certas condies ambientais, tais
como temperatura e umidade, alm das caractersticas bioqumicas dos produtos que
servem como substrato, so propcias para a sua produo.
Outro fator muito importante na produo das micotoxinas a integridade fsica
do cereal. A contaminao poder ocorrer mesmo em material armazenado, porque leses mecnicas ou provocadas por insetos ou durante o processamento, tornam os cereais
muito susceptveis proliferao de fungos.
Em quase todas as matrias-primas destinadas a gneros alimentcios, tais como:
arroz, milho, feijo, trigo, cevada, soja, castanha-do-par, nozes, amendoim, caf, sorgo,
semente de algodo, frutas, presunto, queijo, leite e at vinho, j foram detectados um ou
mais tipos de micotoxinas.
IAL - 761
todo o volume, lave com 40 mL de gua deionizada. Elimine toda a gua residual da coluna e elua com 2,5 mL da soluo de acetonitrila-metanol (3:2), retendo a soluo por
30 segundos na coluna antes de iniciar a eluio e, em seguida, com 2,5 mL de metanol,
invertendo suavemente o fluxo por 3 vezes durante a eluio. Recolha a amostra em um
frasco mbar. Evapore o extrato eludo sob corrente de nitrognio.
Separao por cromatografia em camada delgada, quantificao e confirmao Ressuspenda a AFM1 com 150 L de tolueno-acetonitrila (90:10). Aplique, sobre a placa
cromatogrfica, 50 L do extrato da amostra e tambm 1 a 7 L da soluo-padro de
AFM1 a 0,2 g/mL. Desenvolva a placa em clorofrmio-acetona-isopropanol (87:10:3).
Remova a placa aps 12 cm de desenvolvimento do solvente e deixe secar naturalmente
ao ar. Sob luz UV (=366 nm), localize as manchas fluorescentes indicativas da presena de AFM1. Manchas fluorescentes com o mesmo Rf e mesma tonalidade do padro
indicam resultados positivos presuntivos. Efetue a quantificao por comparao visual
da intensidade de fluorescncia da mancha suspeita com a do padro. Se a intensidade
de fluorescncia da mancha da amostra for maior ou menor que a dos padres, dilua ou
concentre a amostra e recromatografe. Pulverize a placa com H2SO4 (1+3). Deixe secar
e observe sob lmpada UV longa. A fluorescncia da AFM1 muda de azul para amarelo,
indicando a presena da referida micotoxina. Para a confirmao da AFM1 utilizado o
cido trifluoroactico (TFA).
Reao com cido trifluoroactico-hexano (1+3) Divida uma placa verticalmente em
duas regies e em cada uma delas cromatografe dois pontos da amostra e dois do padro.
Em uma das regies sobreponha 1 L da soluo de TFA em um dos pontos da amostra
e em um dos padres. Aquea a placa por 10 minutos a (35 - 40)C e desenvolva o cromatograma com clorofrmio-acetona (85+15). Examine a placa sob lmpada UV longa.
A AFM1 com TFA aparecer em 1/3 do Rf da aflatoxina original.
Preparao e/ou tratamento da amostra por CLAE Centrifugue 50 mL de leite por
15 minutos a 3000 rpm. Remova o sobrenadante e aquea a (30-37)oC. Transfira o leite
centrifugado para uma seringa acoplada coluna de imunoafinidade e passe a amostra
lentamente pela coluna, fluxo de (2-3) mL/min sob presso constante. Aps passar todo
o volume, lave com 10 mL de gua. Elimine toda a gua residual da coluna e elua com
1,25 mL da soluo de acetonitrila-metanol (3:2), retendo a soluo por 30 segundos na
coluna antes de iniciar a eluio e em seguida 1,25 mL de metanol, invertendo o fluxo
suavemente por 3 vezes durante a eluio. Recolha a amostra eluda em um frasco mbar.
Evapore a amostra eluda sob corrente de nitrognio at resduo para o procedimento de
separao e quantificao.
766 - IAL
Tolueno
Acetato de etila
cido frmico
Acetona
Hhyflo-super cel, tipo celite ou equivalente
Soluo de NaCl ou KCl 4% m/v
cido sulfrico
cido trifluoroactico (TFA)
Soluo de TFA-hexano (1:3), recm-preparada
Sistema de solventes para desenvolvimento da cromatografia em camada delgada:
Tolueno-acetato de etila-cido frmico (50:40:10)
Acetona-clorofrmio (10:90)
Tolueno-acetato de etila-cido frmico (60:30:10)
Clorofrmio-acetona-isopropanol (85:12,5:2,5)
Benzeno-metanol-cido actico (90:5:5)
Soluo aquosa de cido sulfrico (1+3)
Solues-padro de aflatoxinas Dissolva os padres de B1, B2, G1 e G2 com volumes
adequados da mistura benzeno-acetonitrila (98:2), para que se obtenha concentraes
aproximadas de (1,0 a 2,5) g/mL.
Soluo de cido sulfrico 0,009 M Pipete 1 mL de cido sulfrico, transfira para um
balo de 2000 mL e complete o volume com gua .
Soluo A (K2Cr2O7 0,25 mM) Pese aproximadamente 78 mg de dicromato de potssio
previamente dessecado e dissolva em 1000 mL de cido sulfrico 0,009 M.
Soluo B (K2Cr2O7 0,125 mM) Pipete 25 mL da Soluo A, transfira para um balo
volumtrico de 50 mL e complete o volume com soluo de cido sulfrico 0,009 M.
Soluo C (K2Cr2O7 0,0625 mM) Pipete 25 mL da Soluo B, transfira para um
balo volumtrico de 50 mL e complete o volume com soluo de cido sulfrico
0,009 M.
Procedimento
Avaliao de desempenho do espectrofotmetro Leia as absorbncias das solues A, B
e C a 350 nm, usando como branco a soluo de cido sulfrico 0,009 M.
IAL - 769
CF = fator de correo
O intervalo de aceitabilidade do CF: 1,05 > CF > 0,95
Nota: se o valor de CF estiver fora dos padres, cheque novamente o mtodo; se o valor
persistir, o aparelho est descalibrado e necessita de reparo tcnico.
Verificao da concentrao dos padres de micotoxinas Aps a dissoluo dos padres
em seus respectivos solventes, leia as absorbncias nos comprimentos de onda de mxima
absoro (Tabela 1) e determine a concentrao usando a seguinte frmula:
A = absorbncia
CF = fator de correo do aparelho
PM = peso molecular da micotoxina (Tabela 1)
= absortividade molar da micotoxina (Tabela 1)
770 - IAL
Comprimento
de onda ()
nm
Absortividade
Molar ()
Aflatoxina B1
1
2
3
4
5
360
350
350
345
350
21800
19800
20600
20300
19100
Aflatoxina B2
1
2
362
350
24000
20900
314
Aflatoxina G1
1
2
362
350
17700
17100
328
Aflatoxina G2
1
2
362
350
19300
18200
330
Aflatoxina M1
350
18815
328
Micotoxinas
Solvente 1
Solvente 2
Solvente 3
Solvente 4
Solvente 5
Solvente 6
=
=
=
=
=
=
Peso
molecular
312
metanol
benzeno-acetonitrila (98:2)
clorofrmio
heptano
tolueno
benzeno-acetonitrila (9:1)
Notas
Recomenda-se a substituio do solvente contendo benzeno por um outro menos txico.
A verificao dos padres deve ser efetuada de acordo com a periodicidade do uso.
Preparao da amostra Triture ou moa, de acordo com a natureza da amostra, a fim de
que se obtenha massa homognea, podendo utilizar liqidificador, moinho ou moedor
de carne. Passe a amostra pela peneira de 20 mesh. Homogeneze novamente e retire uma
sub-amostra de 30 g.
Extrao e purificao Pese 30 g da amostra previamente homogeneizada e transfira
para um frasco Erlenmeyer. Adicione cerca de 10 mL de gua aquecida a 60oC para facilitar a penetrao do solvente orgnico nos tecidos hidroflicos. Homogeneze com basto
de vidro. Adicione 100 mL de clorofrmio, tampe o frasco com algodo e agite manualmente por 30 segundos. Prossiga esta operao com agitador mecnico por mais 30
IAL - 771
minutos. Filtre o extrato clorofrmico em funil de vidro com papel de filtro qualitativo.
No caso de amostra de amendoim ou derivados, adicione pequena quantidade de celite
ao funil para acelerar a filtrao. Colete 50 mL do extrato em outro frasco Erlenmeyer e
evapore em banho-maria a 80oC at que todo o clorofrmio tenha sido eliminado. Ressuspenda o resduo com 50 mL de metanol, transfira quantitativamente para o funil de
separao, adicione 50 mL da soluo de NaCl a 4% e agite lentamente. Extraia as gorduras e os demais interferentes com trs pores de 50 mL de hexano. Descarte a frao
com hexano (superior). Recolha o extrato metanlico em bquer ou frasco Erlenmeyer.
Transfira quantitativamente o extrato metanlico para um funil de separao limpo e extraia as aflatoxinas com 50 mL de clorofrmio, agitando o funil de separao suavemente
por trs minutos. Deixe as fases se separarem e recolha a inferior (clorofrmio) em frasco
Erlenmeyer de 250 mL. Repita a operao com mais 50 mL de clorofrmio. Recolha o
total de clorofrmio juntamente com o extrato da primeira partio e evapore em banhomaria a 80oC ou rotavapor a (50-60)C. O resduo deve ser transferido quantitativamente
com clorofrmio para um frasco Erlenmeyer de 25 ou 50 mL e evaporado sob corrente
de nitrognio. Para efetuar a cromatografia em camada delgada, dissolva o resduo em
clorofrmio em quantidade adequada, normalmente entre 200 a 500 L e utilize banho
de ultra-som por cerca de 30 segundos para assegurar total dissoluo das aflatoxinas.
Triagem das micotoxinas por cromatografia em camada delgada Aplique em placa de
slica gel, 5 a 10 L da amostra e alguns pontos de cada padro, separadamente, fazendo
sobrepor no segundo ponto do padro 5 L da amostra. Desenvolva o cromatograma em
cuba previamente preparada para garantir a saturao com tolueno-acetato de etila-cido
frmico (50:40:10). Remova a placa depois de 12 cm de desenvolvimento do solvente e
seque. Observe o cromatograma sob lmpada de luz UV de comprimento de onda longo.
Amostras suspeitas de conterem aflatoxinas devem ser quantificadas e confirmadas separadamente.
Quantificao Aplique, nas placas 1, 3, 5, 7 L dos padres e 5 e 10 L de cada amostra.
Desenvolva as placas em clorofrmio-acetona (90:10) ou em tolueno-acetato de etila-cido frmico (50:40:10). Compare a intensidade da fluorescncia da mancha da micotoxina da amostra com a dos padres e determine qual das manchas da amostra corresponde
a do padro. Se a intensidade da fluorescncia da mancha de menor volume utilizado da
soluo de amostra for maior do que a do padro, dilua a amostra e recromatografe.
Confirmao da identidade das aflatoxinas Realize a cromatografia bi-dimensional, utilizando a fase 1: clorofrmio-acetona-hexano (85:15:20) ou clorofrmio-acetona (90:10)
e a fase 2: tolueno-acetato de etila-cido frmico (50:40:10) e faa o teste qumico com
cido sulfrico (1+3) e reao com cido trifluoroactico, descrito a seguir:
772 - IAL
a) teste qumico Pulverize a placa com soluo aquosa de H2SO4 (1+3). Deixe secar e
observe sob lmpada UV (comprimento de onda longo). A fluorescncia das aflatoxinas
muda de azul (AFB) ou verde (AFG) para amarelo. Este teste somente confirma a ausncia de aflatoxinas.
b) reao com TFA (cido trifluoroactico) Divida uma placa verticalmente em duas
regies e em cada um delas cromatografe dois pontos de amostra e dois de padres. Em
uma das regies, sobreponha 1 L de soluo de TFA em um dos pontos da amostra e
em um dos pontos do padro. Aquea a placa por 10 minutos a (35-40)oC e desenvolva
o cromatograma com clorofrmio-acetona (85+15) ou clorofrmio-acetona-isopropanol
(85:12,5:2,5). Examine a placa sob lmpada UV de comprimento de onda longo. A
aflatoxina com TFA forma um hemi-acetal cujo Rf 1/3 do Rf da aflatoxina original.
Utilizando-se TFA, a aflatoxina B1 transformar-se- em aflatoxina B2a e a aflatoxina G1 em
G2a. Este teste decisivo para confirmao da identidade das aflatoxinas B1 e G1.
Clculo
transfira para o copo do liqidificador juntamente com 250 mL de uma soluo de metanol-gua deionizada (60:40). Triture por 1 minuto em alta velocidade. Ao trmino deste
tempo, adicione 250 mL de gua deionizada. Misture e filtre aproximadamente (25 a 50) mL
em papel de filtro Whatman no 4. Transfira 10 mL do filtrado para a seringa de vidro acoplada
coluna de imunoafinidade sobre o manifold. Na coluna de imunoafinidade, passe a amostra em um fluxo de 2 a 3 mL por minuto, lave com 20 mL de gua deionizada e elimine
toda a gua residual da coluna. Elua as aflatoxinas passando 2 mL de metanol e colete em
frasco mbar. Evapore at secura sob corrente de nitrognio.
Cromatografia em camada delgada Ressuspenda o resduo em clorofrmio ou toluenoacetonitrila (9:1) em quantidade adequada, normalmente 100 L e utilize banho de ultra-som por cerca de 30 segundos para assegurar total dissoluo das aflatoxinas. Aplique,
em cromatofolha ou cromatoplaca de slica gel, 10 L da amostra, duas vezes. Sobre a 2
mancha do extrato, aplique uma quantidade adequada dos padres (B1+B2+G1+G2). Na
mesma placa aplique: 1, 3, 5 e 7 L de padro de aflatoxinas. Desenvolva o cromatograma
em cuba cromatogrfica previamente saturada com tolueno-acetato de etila-cido frmico (5:4:1) ou clorofrmio-acetona (9:1). Remova a placa aps 12 cm de desenvolvimento
e deixe secar naturalmente ao ar. Sob luz UV de comprimento de onda longa, localize
as manchas fluorescentes com o mesmo Rf e mesma tonalidade do padro. As amostras
suspeitas de conterem aflatoxinas devem ser quantificadas e confirmadas.
Quantificao Para a quantificao de aflatoxinas, separe-as previamente desenvolvendo
as placas em clorofrmio-acetona (9:1) ou tolueno-acetato de etila-cido frmico (5:4:1).
Compare a intensidade da fluorescncia da mancha da amostra com a do padro e determine qual das manchas da amostra corresponde a uma dos padres. Se a intensidade da
fluorescncia da mancha de menor volume de amostra for maior que a do padro, faa a
diluio necessria e recromatografe.
Teste confirmatrio da presena de aflatoxinas Poder ser realizado pelas seguintes tcnicas:
a) reao com cido sulfrico Pulverize a placa com H2SO4 (1+3). Deixe secar e observe
sob lmpada UV. A fluorescncia da aflatoxina muda de azul (AFB1) ou verde (AFG1)
para amarelo. Este teste somente confirma a ausncia de aflatoxinas nas amostras que no
mudarem para a cor amarela.
b) reao com TFA (cido trifluoroactico) Marque uma placa verticalmente, dividindo-a em duas regies e em cada uma delas cromatografe dois pontos de amostra e dois de padro. Em uma das regies, sobreponha 1 L de TFA em um dos ponIAL - 775
tos da amostra e em um dos pontos dos padres. Aquea a placa por 10 minutos a
(35-40)C e desenvolva o cromatograma com clorofrmio-acetona (85:15). Examine a
placa sob a lmpada UV. A mancha da aflatoxina com TFA apresentar Rf igual a 1/3 do
Rf original.
Referncias bibliogrficas
R-BIOPHARM RHNE LTD. OCHRAPREP: Quantitative Detection of Ochratoxin A. 5 p.
INTERNATIONAL AGENCY FOR RESEARCH ON CANCER. Laboratory Decontamination and Destruction of Aflatoxins B1, B2, G1, G2 in Laboratory Wastes. Lyon:
WHO, 1989. (IARC n. 37).
FOOD AND AGRICULTURE ORGANIZATION OF THE UNITED NATIONS.
Sampling plans for aflatoxins and analysis in peanuts and corn. Rome: FAO, 1993
(FAO Food and Nutrition Paper, 55).
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists.15 th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1990, Chapter 49, p. 1184-1199.
405/IV Determinao de desoxinivalenol
Os tricotecenos so micotoxinas que afetam o maior nmero das funes biolgicas dos animais contaminados: sistema nervoso, aparelho digestivo, regies produtoras de
componentes sangneos e pele. A intoxicao pela referida micotoxina caracterizada
por vmito, inflamao, hemorragia, recusa alimentar, diarria, aborto, mudanas hematolgicas, angina necrtica, desordens nervosas e destruio da medula ssea.
O princpio do mtodo baseia-se na extrao da micotoxina com mistura de solventes, purificao em uma coluna de carvo, eluio, cromatografia em cromatoplacas de
slica gel G, derivatizao com AlCl3 e visualizao do composto fluorescente formado.
Material
Frascos Erlenmeyer de 10, 25, 50 e 500 mL, provetas de 50, 100 e 200 mL, pipeta, funil
de vidro, funil de separao, coluna cromatogrfica, placa de vidro, lmpada UV, microsseringa, bomba de vcuo e kitassato de 125 mL.
776 - IAL
Reagentes
Padro de desoxinivalenol (DON)
Acetonitrila
Clorofrmio
Acetona
Isopropanol
Tricloreto de alumnio
Alumina ativada
Carvo ativo
Celite
Slica gel G 60
Hexano
Soluo de AlCl3 a 15% m/v Pese 15 g de tricloreto de alumnio. Transfira para um balo
volumtrico de 100 mL, dissolva e dilua ao volume com a mistura de etanol-gua (1:1).
Soluo-padro de DON Dissolva o padro em acetato de etila tal que a concentrao
final seja aproximadamente 100 g/mL.
Procedimento
Verificao da concentrao da soluo-padro de DON Faa a leitura da absorbncia
no espectrofotmetro UV/VIS a 260 nm e calcule a concentrao de DON conforme
frmula abaixo:
A = absorbncia
PM = peso molecular do padro
f = fator de correo do aparelho
= absortividade molar do DON em acetato de etila (1410)
Preparao da amostra Pese 50 g de amostra moda. Adicione 200 mL da mistura de
acetonitrila-gua (84:16) e deixe em contato com agitao mecnica por 30 minutos.
Filtre e transfira 20 mL do filtrado para funil de separao. Extraia a gordura com hexano
trs vezes com 50 mL (o hexano fica na parte superior). Reserve o extrato e passe pela
coluna cromatogrfica.
IAL - 777
Preparao da coluna cromatogrfica Coloque l de vidro na parte inferior da coluna, em quantidade suficiente para bloquear a fase estacionria. Pese e homogeneze em
um frasco Erlenmeyer de 25 mL, a mistura de 0,7 g de carvo ativo, 0,5 g de alumina e 0,3 g de celite. Coloque esta mistura aos poucos, na coluna cromatogrfica com
ajuda da bomba de vcuo. Lave a coluna com 10 mL da soluo de acetonitrila-gua
(84:16) e descarte o solvente de lavagem. Passe os 20 mL do filtrado na coluna e lave com
10 mL de soluo de acetonitrila-gua (84:16) e recolha o extrato em frasco Erlenmeyer de
50 mL. Evapore em banho-maria at secagem. Elua, em frasco Erlenmeyer de 10 mL, com
5 mL de acetato de etila e evapore em banho-maria sob corrente de nitrognio. Elua o
resduo com 200 L de uma mistura de clorofrmio-acetonitrila (4:1). Aplique na cromatoplaca de slica gel G sem indicador de fluorescncia, 10, 20, 30 L da amostra e 5
e 10 L do padro. Desenvolva o cromatograma com clorofrmio-acetona-isopropanol
(80:10:10). Remova a placa aps 12 cm de desenvolvimento e deixe secar naturalmente
ao ar. Pulverize com soluo de AlCl3 a 15%. Aquea em estufa a 120C durante 7 minutos e observe sob luz UV longa.
Quantificao Compare a intensidade da fluorescncia da mancha de desoxinivalenol
da amostra com as do padro e determine qual das manchas da amostra corresponde a
uma das do padro. Se a intensidade da fluorescncia da mancha correspondente ao menor volume aplicado de amostra for maior que a do padro, a amostra dever ser diluda
convenientemente e recromatografada.
Clculo
IAL - 779
IAL - 783
Procedimento
Avaliao do desempenho do espectrofotmetro - Leia as absorbncias das solues A,
B e C a 350 nm, usando como branco a soluo de cido sulfrico 0,009 M. Calcule,
separadamente, a absortividade molar de cada uma das solues e o fator de correo do
espectrofotmetro,
A = absorbncia
CF = fator de correo do aparelho
PM = peso molecular da micotoxina
= absortividade molar da micotoxina
784 - IAL
Comprimento
de onda ()
nm
Absortividade
Molar ()
Peso
Molecular
Aflatoxina B1
1
2
5
6
7
360
350
350
350
345
21800
19800
20600
19100
20300
312
Aflatoxina B2
1
2
362
350
24000
20900
314
Aflatoxina G1
1
2
362
350
17700
17100
328
Aflatoxina G2
1
2
362
350
19300
18200
330
Zearalenona
4
1
317
314
6060
6000
318
Ocratoxina A
333
5550
403
Patulina
275
14600
154
Micotoxinas
Solvente 1 = metanol
Solvente 2 = benzeno-acetonitrila (98+2)
Solvente 3 = benzeno-cido actico (99+1)
Solvente 4 = benzeno
Solvente 5 = clorofrmio
Solvente 6 = tolueno
Solvente 7 = heptano
Solvente 8 = lcool
Nota: recomenda-se a substituio do solvente contendo benzeno por um outro menos
txico.
Preparao da amostra Triture ou moa, de acordo com a natureza da amostra, a fim de
que se obtenha massa homognea, podendo utilizar liqidificador, moinho ou moedor de
carne. Passe por peneira de 20 mesh. Misture e homogeneze novamente.
Extrao e purificao Pese 50 gramas da amostra previamente moda e homogeneze
em liqidificador com 270 mL de metanol e 30 mL de KCl ou NaCl a 4%, por 5 minutos. Filtre e transfira 150 mL do filtrado para bquer de 500 mL. Adicione 150 mL
do clarificante e 50 mL de celite. Agite com basto de vidro e filtre novamente. Recolha
IAL - 785
Esta toxina pode causar danos aos rins e fgado e carcinognica para alguns ani-
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, gabinete com lmpada UV ( longo), liqdificador (blender), suporte coletor de amostra a vcuo (manifold), cromatgrafo lquido de alta eficincia com detector de fluorescncia, ultra-som, balana analtica, banho-maria, rota788 - IAL
vapor, capela para solventes orgnicos, peneira de 20 mesh, balo volumtrico, bquer de
300 mL, cuba cromatogrfica, funil, frasco mbar de 10 mL, microsseringas de (10, 25
e 100) L, provetas de (100 e 200) mL, seringa de vidro de 10 mL, frasco de amostras
para CLAE, coluna de imunoafinidade especfica para ocratoxina A, cromatoplacas ou
cromatofolhas de Slica gel G sem indicador de fluorescncia (20 x 20) cm, papel de filtro
comum e papel de filtro de fibra de vidro.
Reagentes
Padro de ocratoxina A
Acetato de etila
Acetona
cido actico
cido frmico
Bicarbonato de sdio
Cloreto de sdio
Cloreto de potssio
Clorofrmio
Fosfato monobsico de potssio (KH2PO4)
Fosfato dibsico de sdio (Na2HPO4)
Metanol
Padro de ocratoxina A
Tolueno
Nota: todos os reagentes devem ser grau p.a. ou CLAE, quando for o caso
Soluo-padro de ocratoxina A - Proceda conforme mtodo 407/IV
Soluo-tampo fosfato (PBS) Pese 0,2 g de KH2PO4 anidro, 1,1 g de Na2HPO4 anidro, 8 g de NaCl e 0,2 g de KCl, dissolva em gua e complete o volume para 1000 mL.
Procedimento
Preparao da amostra Pese 10 g da amostra, previamente moda e tamisada (20 mesh),
e homogeneze em liqidificador por 2 minutos com 200 mL de bicarbonato de sdio
a 1%. Filtre em filtro de microfibra, recolha 20 mL e adicione imediatamente 20 mL de
soluo-tampo fosfato (PBS). Transfira o filtrado para uma seringa acoplada coluna de
imunoafinidade e passe a amostra lentamente pela coluna com fluxo de (2-3) mL/min,
sob presso constante. Aps passar todo o volume, lave com 20 mL de gua. Elimine
IAL - 789
toda a gua residual da coluna e elua com 2 mL da soluo de metanol:cido actico (98:2),
retendo a soluo por 30 segundos na coluna antes de iniciar a eluio e invertendo o fluxo
suavemente por 3 vezes durante a eluio. Recolha a amostra eluda em um frasco mbar.
Evapore, sob corrente de nitrognio, at resduo e proceda a separao e a quantificao,
que pode ser por CCD ou CLAE.
Cromatografia em camada delgada Ressuspenda a OTA com 50 L de tolueno-cido
actico (99:1). Aplique sobre a placa cromatogrfica de (20 x 20) cm, 20 L deste extrato e tambm pontos de (1-5) L de padro de OTA de concentrao de 1,01 g/
mL. Desenvolva a cromatografia pelo mtodo bi-drecional utilizando como fase mvel
clorofrmio-acetona (90:10) na primeira etapa e tolueno-acetato de etila-cido frmico
(50:40:10) na segunda etapa. Caso a separao no seja satisfatria, desenvolva pelo mtodo bi-dimensional utilizando as mesmas fases mveis. Seque a placa em temperatura
ambiente e visualize sob luz UV (=366nm).
Quantificao Para a quantificao, compare a intensidade de fluorescncia da mancha
da OTA da amostra com as do padro, determinando qual mancha do padro corresponde da amostra. Se a intensidade de fluorescncia da mancha da amostra for maior
ou menor que as dos padres, dilua ou concentre amostra e recromatografe.
Clculo
metanol-sol, cido actico 29:1 (35:35:30) por 15 minutos, fluxo de 0,8 mL/min, detetor
de fluorescncia com comprimentos de onda de excitao de 332 nm e de emisso de 476
nm, temperatura da coluna 25C. Utilize a integrao do pico e compare com o valor da
curva de calibrao construda previamente ou de acordo com a seguinte formula:
Clculo
IAL - 791
Reagentes
Padro de ocratoxina A
Acetato de etila
Acetona
cido actico
cido frmico
Bicarbonato de sdio
Cloreto de sdio
Cloreto de potssio
Clorofrmio
Fosfato monobsico de potssio (KH2PO4)
Fosfato dibsico de sdio (Na2HPO4)
Metanol
Padro de ocratoxina A
Tolueno
Nota: todos os reagentes devem ser grau p.a ou CLAE, quando for o caso.
Soluo-padro de ocratoxina A - Proceda conforme o mtodo 407IV.
Soluo-tampo fosfato (PBS) Pese 0,2 g de KH2PO4 anidro, 1,1 g de Na2HPO4 anidro, 8 g de NaCl e 0,2 g de KCl, dissolva em gua e complete o volume para 1000 mL
com o mesmo solvente.
Procedimento
Preparao da amostra Pese 25 g da amostra, previamente triturada e tamisada (20 mesh),
e homogeneize no liqidificador por 5 minutos com 250 mL de soluo metanol-bicarbonato de sdio 1% (70:30). Filtre em papel de filtro comum, recolha 50 mL e adicione imediatamente 200 mL de soluo- tampo fosfato (PBS). Filtre at 50 mL em papel de fibra de
vidro. Transfira o filtrado para uma seringa acoplada coluna de imunoafinidade e passe a
amostra lentamente pela coluna com o fluxo de (2-3) mL/min, sob presso constante. Aps
passar todo o volume, lave com 10 mL de PBS e em seguida com 10 mL de gua. Elimine
toda a gua residual da coluna e elua com 2 mL da soluo de metanol, retendo a soluo
por 30 segundos na coluna antes de iniciar a eluio e invertendo o fluxo suavemente por
3 vezes durante a eluio. Recolha a amostra eluda em um frasco mbar. Evapore o eluato,
sob corrente de nitrognio, at resduo para o procedimento de separao e quantificao.
Cromatografia em camada delgada Ressuspenda a OTA com 50 L de tolueno-cido
actico (99:1). Aplique sobre cromatofolha de slica gel G (10 x 10) cm ou cromatoplaca
792 - IAL
de slica gel G (20x20) cm, 20 L deste extrato e tambm pontos de (1-5) L de padro
de OTA (1,01 g/mL). Desenvolva a placa com tolueno-acetato de etila-cido frmico
(50:40:10). Seque a placa em temperatura ambiente e visualize sob luz UV (=366 nm).
Eventualmente, pode ser utilizada cromatografia em camada delgada bi-dimensional, utilizando a fase clorofrmio-acetona (90:10) na 1 direo e tolueno-acetato de etila-cido
frmico (50:40:10) na 2 direo.
Quantificao Para quantificao, compare a intensidade de fluorescncia da mancha
da OTA da amostra com as do padro, determinando qual mancha do padro corresponde da amostra. Se a intensidade da fluorescncia da mancha da amostra for maior ou
menor que as dos padres, dilua ou concentre a amostra e recromatografe.
Clculo
NAKAJIMA, M. et al. Determination of ochratoxin A in coffee beans and coffee products by monoclonal antibody chromatography. Food Agric. Immunol., v. 2. p. 189195, 1990.
PITET, A. et al. Liquid chromatographic determination of ochratoxin A in pure and
adulterated soluble coffee using an immunoaffinity column cleanup procedure.
J. Agric. Food Chem., v. 44. p. 3564-3569, 1996.
410/IV Determinao de ocratoxina A em caf cru em gro por cromatografia em
camada delgada
O mtodo descrito refere-se a determinao simultnea de Aflatoxinas (B1, B2, G1
e G2), ocratoxina A e zearalenona em arroz, amendoim, feijo, milho, mandioca e, com
algumas pequenas modificaes, a determinao especfica de ocratoxina A (OTA) em
caf cru em gro.
A micotoxina extrada com metanol e soluo de KCl ou NaCl, seguida da remoo de interferentes pela precipitao com agente clarificante e partio com clorofrmio.
A quantificao da OTA baseia-se na comparao da intensidade da fluorescncia com
um padro, por cromatografia em camada delgada. Este mtodo permite a deteco de
10 g/kg (ppb) e quantificao de 30 g/kg (ppb) de OTA.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, gabinete para duas lmpadas ultravioletas ( = 366 nm) de
15 watt cada uma, balana analtica, balana semi-analtica, liqidificador, banho-maria
com temperatura controlada ou rotavapor, estufa, ultra-som, moinho que reduza os gros
a partculas de (10 a 20) mesh, cilindro de nitrognio comum, peneira de (10 a 20) mesh,
capela para solventes orgnicos, bqueres de (30, 100 e 400) mL, frasco Erlenmeyer 50 mL,
provetas (10, 50, 100, 200 e 300) mL, basto de vidro, funil de vidro de 12 cm de dimetro,
papel de filtro qualitativo Whatman no 4 ou equivalente, funil de separao de 500 mL tipo
pra e com torneira de teflon, microsseringas de (10, 25 e 500) L, cuba cromatogrfica de
vidro para placas de (20 x 20) cm, secador capaz de gerar ar com temperatura entre (4050)C, cromatofolhas ou cromatoplacas de slica-gel G sem indicador de fluorescncia (20 x
20) cm, bales volumtricos de (50 e 2000) mL e pipetas volumtricas de (1 e 25) mL.
Reagentes
Metanol
Clorofrmio
794 - IAL
Tolueno
Acetato de etila
Acetona
cido frmico
Benzeno
Hexano
cido actico glacial
Acetonitrila
Hyflo-super cel, celite 545 ou equivalente
Soluo de KCl a 4% ou NaCl a 4%
Agente clarificante: soluo de sulfato de amnio a 30%
Sistemas de solventes para desenvolvimento da cromatografia em camada delgada:
tolueno-acetato de etila-cido frmico (50:40:10) ou ( 60:30:10)
acetona-clorofrmio (10:90)
tolueno-acetato de etila-clorofrmio-cido frmico (35:25:25:10)
benzeno-metanol-cido actico (90:5:5)
hidrxido de amnio
triluoreto de boro em metanol 14% (v/v)
Soluo de cido sulfrico 0,009 M Pipete 1 mL de cido sulfrico e transfira para
balo de 2000 mL e complete com gua.
Soluo A Soluo de dicromato de potssio 0,25 mM Pese 78 mg de dicromato de
potssio previamente dessecado e dissolva em 1000 mL de cido sulfrico 0,009 M .
Soluo B Pipete 25 mL da soluo A , transfira para um balo volumtrico de 50 mL
e complete o volume com soluo de cido sulfrico 0,009 M .
Soluo C Pipete 25 mL da soluo B, transfira para balo volumtrico de 50 mL e
complete o volume com soluo de cido sulfrico 0,009 M.
Soluo-padro de OTA Prepare a soluo-padro de ocratoxina A de forma a obter
concentrao aproximada de 1 g/mL. Acrescente ao frasco, contendo OTA em p, a
mistura benzeno-cido actico glacial (99:1) e transfira quantitativamente para balo volumtrico de capacidade determinada, a fim de que se obtenha soluo de concentrao
cerca de 1 g/mL. Proteja da luz, utilizando frasco de vidro mbar ou envolvendo-o em
papel de alumnio e conserve sob refrigerao (temperatura < 4C).
Para a calibrao dos padres de micotoxinas necessrio que o espectrofotmetro seja
calibrado previamente, a fim de se obter o fator de calibrao do equipamento.
IAL - 795
Procedimento
Avaliao do desempenho do espectrofotmetro Leia as absorbncias das solues A,
B e C a 350 nm, usando como branco a soluo de cido sulfrico 0,009 M. Calcule a
absortividade molar de cada uma das solues (A, B e C).
Clculo do fator de correo do aparelho
= absortividade molar
A* = Absorbncias das solues A, B e C, calculadas separadamente
C = Concentrao das solues A, B e C em mM
CF = fator de correo
Intervalo de aceitabilidade: 1,05 > CF > 0,95
Nota: se o valor de CF estiver fora dos padres, cheque novamente o mtodo. Se o valor
persistir o aparelho est descalibrado e necessita de manuteno.
Verificao da concentrao do padro de ocratoxina A Aps dissolver o padro de
OTA com soluo de benzeno-cido actico (99:1), leia a absorbncia em 333 nm e calcule a concentrao.
A = absorbncia
CF = fator de correo do aparelho
PM = peso molecular da ocratoxina A = 403
= absortividade molar da ocratoxina A = 5550
796 - IAL
Notas
Recomenda-se a substituio dos solventes contendo benzeno por um outro menos txico como metanol; neste caso, a absortividade molar 6337 em 332 nm.
A calibrao do padro dever ser efetuada de acordo com a periodicidade do uso.
Procedimento
Preparao da amostra Adote o mesmo plano de amostragem usado para anlise de
aflatoxinas. No caso de amostras processadas, tome pelo menos 1 kg e triture at reduo
a partculas de (10 a 20) mesh. Conserve as amostras em sacos plsticos de polietileno
duplo sob refrigerao.
Extrao e purificao Pese 30 g da amostra previamente homogeneizada e moda, e
agite em liqidificador por 5 minutos juntamente com 180 mL de metanol e 20 mL de
KCl ou NaCl a 4%. Filtre e transfira 100 mL do filtrado para um bquer de 400 mL.
Adicione 100 mL de (NH4)2SO4 a 30% e celite em quantidade suficiente para ocupar
um bquer de 30 mL. Agite com basto de vidro. Filtre, recolha 100 mL do filtrado e
transfira para um funil de separao de 500 mL com 100 mL de gua. Adicione, ao funil
de separao, 20 mL de clorofrmio e extraia a micotoxina agitando suavemente por 3
minutos. Deixe as fases se separarem e recolha a fase inferior (clorofrmica) em frasco
Erlenmeyer de 50 mL. Repita a operao acima com mais 20 mL de clorofrmio. Recolha a fase inferior juntamente com a da extrao anterior. Deste volume total retire 20
mL de clorofrmio e evapore em banho-maria a 60oC, sob corrente de nitrognio ou em
rotavapor. Dissolva o resduo em ultra-som com 200 L de benzeno ou metanol, por 30
segundos para proceder a cromatografia em camada delgada.
Triagem das micotoxinas por cromatografia em camada delgada Cromatografe, em
placa de slica gel, 10 L da amostra e dois pontos de padro, separadamente, fazendo
sobrepor, no segundo ponto do padro, 5 L da amostra. Desenvolva o cromatograma
em cuba previamente saturada com tolueno-acetato de etila-cido frmico (50:40:10).
Remova a placa aps de 12 cm de desenvolvimento, e deixe secar muito bem. Observe
o cromatograma sob lmpada de luz UV longa (366 nm). Amostras suspeitas de conter
ocratoxina A devem ser quantificadas e confirmadas separadamente.
Determinao Cromatografe pontos de (1-5) L do padro de OTA e (5-10) L da
amostra, dissolvida em quantidade adequada de metanol. Para a quantificao de ocratoxina
A, desenvolva as placas em tolueno-acetato de etila-cido frmico (50:40:10). Compare a
intensidade de fluorescncia das manchas da amostra com as do padro. Se a intensidade de
fluorescncia da mancha de menor volume de amostra for maior que a do padro, a amostra
IAL - 797
humana. Esta micotoxina j foi detectada em frutas, hortalias, cereais e tambm na rao animal. A contaminao mais freqente por Penicillium expansum, que se encontra
em mas deterioradas; o grau de contaminao est relacionado com a deteriorao dos
frutos, ficando a patulina limitada aos tecidos deteriorados.
Este mtodo aplicvel s anlises de patulina em amostras de suco e concentrados
de ma, cujo limite de quantificao (LQ) igual a 25 g/L.
Material
Provetas, funil de separao, funil, papel de filtro qualitativo, banho-maria ou rotavapor,
microsseringas, cromatofolhas ou cromatoplacas de slica gel G com indicador de fluorescncia, estufa, balo volumtrico, balana analtica.
Reagentes
Acetato de etila
Sulfato de sdio anidro
Clorofrmio
Tolueno
cido frmico
Acetona
Metanol
lcool
Soluo-padro de patulina Dissolva o padro em clorofrmio de maneira que a soluo contenha 10 g/mL. Determine a concentrao do padro utilizando o mesmo
procedimento das outras micotoxinas conforme o mtodo 407/IV. Transfira 5 mL da
soluo-estoque para um balo volumtrico, evapore at resduo sob nitrognio e dissolva
com 5 mL de lcool. Faa a leitura no espectrofotmetro em = 275 e proceda como
para as outras micotoxinas.
MBTH (Cloridrato de 3-metil-2-benzotiazolinona hidrazona) a 0,5% Pese 125 mg de
MBHT.HCl.H2O, transfira para um balo volumtrico de 25 mL e dissolva com gua.
Esta soluo tem validade por 3 dias, quando conservada em geladeira.
Procedimento Mea 50 mL de amostra e transfira para um funil de separao. A amostra deve ser analisada imediatamente aps a abertura da embalagem. Adicione 50 mL de
acetato de etila no funil e agite por 3 minutos. Recolha o acetato de etila em um frasco
800 - IAL
Erlenmeyer. Repita esta operao trs vezes. Filtre os extratos em sulfato de sdio anidro.
Lave o sulfato de sdio com 20 mL de acetato de etila. Evapore os extratos at quase secura, sob nitrognio. Dissolva imediatamente o resduo em 500 L de clorofrmio. Aplique
em cromatofolhas ou cromatoplacas, sem indicador de fluorescncia, respectivamente, 10
L da amostra e volumes do padro correspondentes s concentraes de (1-6) g/mL.
Desenvolva o cromatograma utilizando uma das fases mveis: tolueno-acetato de etilacido frmico 90% (5:4:1), clorofrmio-metanol (95:5) ou clorofrmio-acetona (9:1).
Seque a placa e pulverize com MBTH a 0,5%. Coloque em estufa por 15 minutos a
130C. A patulina detectada na regio do visvel como uma mancha amarelada se a sua
quantidade for maior ou igual a 0,05 g e, no UV com uma fluorescncia amarelo-tijolo.
Para a quantificao, compare a intensidade de fluorescncia das manchas de patulina
na amostra com as do padro e determine qual delas corresponde uma do padro. Se a
intensidade de fluorescncia da mancha de menor volume de amostra for maior do que a
do padro, a amostra dever ser diluda e recromatografada.
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official Methods of
Analysis of the Association of Official Analytical Chemists.15 th ed., v. 2. Arlington:
A.O.A.C., 1990, chapter 49. p. 1209, (method 974.18).
Colaboradores
Myrna Sabino, Leda C. A . Lamardo, Luzia Shundo, Sandra A. Navas e Thas Valria Milanez
IAL - 801
CAPTULO
XXV
GELADOS
COMESTVEIS
IAL - 803
804 - IAL
XXV
Captulo XXV - Gelados Comestveis
GELADOS COMESTVEIS
Os gelados comestveis so produtos prontos para o consumo submetidos ao congelamento, obtidos a partir de uma emulso de gorduras e protenas, com ou sem adio
de outros ingredientes, tais como: leite, gua e acares. Incluem-se nesta classe, os sorvetes, os picols e os produtos especiais gelados mistos.
Preparados para gelados comestveis so produtos lquidos que contenham todos
os ingredientes necessrios em quantidades tais que, quando submetidos ao congelamento, resultem em gelados comestveis.
Ps para o preparo de gelados comestveis so os produtos constituidos por uma
mistura de vrios ingredientes e aditivos que, pela adio de gua e/ou leite resultem em
gelados comestveis.
Base para gelados comestveis so produtos constituidos de estabilizantes e/ou
emulsionantes e espessantes, podendo conter outros aditivos e ingredientes que, aps
adio de gua e/ou leite, resultem em gelados comestveis.
Para os gelados comestveis base de leite, as determinaes mais usuais so: slidos totais (429/IV), glicdios redutores em lactose (432/IV), glicdios no redutores em
sacarose (489/IV), protdios (036/IV ou 037/IV), gorduras totais (032/IV), resduos por
IAL - 805
806 - IAL
N = n de g de gordura
P = n de g da amostra
Nota: alternativamente, esta determinao poder ser efetuada conforme o mtodo 486/IV.
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of
analysis of Association of Official Analytical Chemists, 16th ed. (method 952.06)
Arlington: A.O.A.C., 1995. chapter 33. p. 5.
Colaboradores
Jacira Hiroko Saruwtari, Letcia Arajo Farah Nagato e Marilda Duarte
IAL - 807
CAPTULO
XXVI
CEREAIS,
AMILCEOS E
EXTRATO DE SOJA
IAL - 809
810 - IAL
XXVI
Captulo XXVI - Cereais, Amilceos e Extrato de Soja
enericamente, os cereais so designados como plantas, principalmente da famlia das gramneas, cultivadas para a produo de gros utilizados para a alimentao humana e animal. Os amilceos so os produtos derivados de cereais
e de outros vegetais (por exemplo, tubrculos) e incluem as preparaes base
de farinhas, os pes, as massas alimentcias e uma srie de produtos similares.
A anlise dos cereais inclui, entre outras, as determinaes de umidade, cinzas,
protenas, lipdios, hidratos de carbono e fibra, segundo as tcnicas descritas no cap. IV e
sua identificao pelas caractersticas microscpicas.
A anlise dos amilceos pouco difere da anlise dos cereais, incluindo algumas determinaes especficas referentes aos componentes e aditivos empregados na sua fabricao.
Farinhas e produtos similares
A composio das farinhas varia de acordo com a origem do gro e processos tecnolgicos de sua fabricao. Especificamente, as farinhas so identificadas pelo exame
microscpico.
As anlises de rotina incluem, entre outras, as determinaes de umidade, acidez,
protdios (036/IV ou 037/IV), fibra alimentar (045/IV e 046/IV), lipdios (032/IV)
IAL - 811
N = n de g de umidade
P = n de g da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos Qumicos e Fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed., 1985.
p. 125.
812 - IAL
Procedimento Pese aproximadamente 5 g da amostra em um bquer de 100 mL. Adicione 10 mL de soluo aquosa de cloreto de sdio a 5%. Misture bem com auxlio de
um basto de vidro, at formar uma massa aglomerada compacta. Deixe em repouso por
30 minutos. Adicione gua at cobri-la e deixe em repouso por mais 30 minutos. Lave
o aglomerado com gua corrente sobre um tamis de malha 100, apertando e amassando
levemente com as mos. Continue a lavar at que a gua no adquira colorao azul, ao se
adicionar uma gota da soluo de iodo saturada. Rena massa, os fragmentos que eventualmente tenham passado pelo tamis. Transfira para um vidro de relgio, previamente
aquecido em estufa a 105C, por uma hora e resfriado em dessecador at a temperatura
ambiente e pesado. Passe, se necessrio, uma fina camada de vaselina sobre o vidro de relgio antes da pesagem, para evitar que a massa compacta fique grudada na superfcie do
vidro. Leve o vidro de relgio com a massa para estufa a 105C, durante 5 horas. Resfrie
em dessecador at temperatura ambiente e pese. Repita as operaes de aquecimento e
resfriamento at peso constante.
Clculo
N = n de g de glten seco
P = n de g da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v
1:Mtodos Qumicos e Fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed.,
1985. p. 132-133.
419/IV Pesquisa de bromato em massa fresca para po (prova de triagem)
Este mtodo fundamenta-se na capacidade oxidante do bromato e tambm de
outros nions eventualmente presentes nas massas para pes, promovendo a converso do
on iodeto a iodo.
Material
Balana analtica, estufa, capela para substncias corrosivas, peneira malha 40, papel de
filtro ou papel para cromatografia Whatman n 1, suporte circular de vidro (plstico ou
acrlico), almofariz com pistilo, provetas de vidro, bales volumtricos de 100 mL, atomizador e papel alumnio.
816 - IAL
Reagentes
Soluo de iodeto de potssio Dissolva 1 g de iodeto de potssio em 100 mL de gua.
Guarde esta soluo em geladeira e use no mximo durante oito dias.
Soluo aquosa de cido clordrico (1+3)
Soluo de amido 1% m/v Esta soluo dever ser preparada no momento do uso.
Soluo de trabalho de iodeto de potssio Misture partes iguais das solues de iodeto
de potssio e de cido clordrico (1+3). Coloque algumas gotas de soluo de amido a
1%.
Procedimento Distribua partes da massa fresca de po em um pedao de papel de alumnio de (30x30) cm. Seque em estufa a 50C at completa evaporao da gua presente
na amostra e triture. Passe em peneira de malha 40 e armazene o p fino obtido. Coloque
uma folha de papel de filtro ou papel de cromatografia Whatman n 1 circular de 11 cm
de dimetro sobre o suporte de vidro. Distribua o p fino da amostra sobre o papel. Pulverize, com soluo de trabalho de iodeto, a parte inferior do papel at o lquido atingir
a amostra. A inexistncia de pontos violceos indica a ausncia de agentes oxidantes e
conseqentemente, a de bromato na amostra.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v
1:Mtodos Qumicos e Fsicos para anlise de alimentos. So Paulo: IMESP, 3. ed.,
1985. p. 137.
420/IV Prova confirmatria de bromato por cromatografia em camada delgada
pes.
Material
Balana analtica, estufa, agitador magntico, rotavapor acoplado bomba de vcuo, bquer de 800 mL, proveta de 500 mL, funil de Bchner, placa cromatogrfica com slica
gel G 60 de (20x20) cm, cuba cromatogrfica, capilar ou microseringa de (10-50) L,
frasco Erlenmeyer de 50 mL e balo volumtrico de 100 mL.
Reagentes
Soluo-padro de brometo de potssio ou de sdio a 1% m/v
Butanol
IAL - 817
Acetona
Hidrxido de amnio
gua oxigenada a 30% (peridrol)
Soluo de sulfato de zinco Dissolva 20 g de ZnSO4.7H2O em um litro de gua.
Hidrxido de sdio 0,4 M Dissolva 16 g de NaOH em um litro de gua.
Soluo-padro de bromato de potssio ou de sdio a 1% m/v Dissolva 1 g de KBrO3
(ou NaBrO3) em 100 mL de gua.
Soluo de fluorescena Dissolva 10 mg de fluorescena em 100 mL de lcool a 50%.
Fase mvel Em uma proveta de 100 mL misture butanol, acetona e hidrxido de amnio na proporo de 1:3:1.
Soluo-reveladora Prepare uma soluo de cido actico e peridrol na proporo de
10:1. Em um frasco Erlenmeyer de 50 mL, adicione quantidades iguais desta soluo e
da soluo de fluorescena. Esta mistura dever ser preparada no momento da revelao
do cromatograma.
Procedimento Transfira 200 mL da soluo de sulfato de zinco para um bquer de
800mL. Agite vigorosamente com agitador magntico. Transfira cerca de 50 g da amostra
finamente pulverizada, em pores pequenas. Continue agitando por cinco minutos ou
at que toda a farinha se disperse. Adicione 50 mL de NaOH 0,4 M, sob agitao contnua. Diminua a agitao e continue por mais cinco minutos. Filtre em funil de Bchner
com papel de filtro. Reserve o filtrado e transfira-o para um balo do rotavapor. Acople o
balo ao rotavapor e evapore o lquido at aproximadamente 50 mL do extrato concentrado, mantendo a temperatura do banho-maria no superior a 50C. Ative a placa em
estufa a 105C por uma hora. Trace colunas de 2cm de largura e marque um ponto no
centro da coluna a 2 cm de altura da parte inferior da placa. Trace uma linha horizontal
a 2 cm da parte superior da placa. Aplique, com auxlio de capilar ou microseringa, 5 L
do extrato concentrado em uma das colunas e 2 L das solues-padro de bromato e de
brometo em outras duas colunas. Coloque a fase mvel na cuba cromatogrfica, tampe
com uma placa de vidro e deixe saturar por cerca de uma hora. Coloque a placa imergindo a parte inferior no solvente e corra o cromatograma at que o solvente atinja cerca
1cm da parte superior da placa. Retire a placa, marque a frente do solvente e deixe secar
ao ar, na capela, e aplique a soluo reveladora sobre toda a superfcie da placa. Seque em
estufa a 105C at o aparecimento de manchas caractersticas de cor rsea. Determine os
818 - IAL
respectivos Rf. A comparao dos valores dos Rf dos padres com o do componente da
amostra permite a sua identificao.
Clculo
Material
Chapa aquecedora com refluxo, balana analtica, banho-maria, espectrofotmetro UV/
IS, tamis de malha 20, extrator de Soxhlet, balo de 250 mL com boca esmerilhada
24/40, bales volumtricos de 50, 100 e 200 mL, pipeta volumtrica de 5 mL e tubo de
ensaio com tampa envolto em material opaco (papel alumnio).
Reagentes
Clorofrmio
Anidrido actico glacial
cido actico
cido sulfrico
Colesterol
Soluo-reagente Misture 100 mL de cido actico glacial, 110 mL de anidrido actico
e 15 mL de cido sulfrico concentrado. Conserve em geladeira e use no perodo de uma
semana.
Procedimento Pese, com preciso, aproximadamente 4g da amostra previamente moda
e peneirada em tamis de 20 mesh. Leve a um cartucho de extrao e mantenha em extrao
contnua em aparelho de Soxhlet com clorofrmio, durante 20 horas. Retire o cartucho.
Reduza o volume do solvente do balo a cerca de 15 mL, destilando o solvente. Transfira
quantitativamente para um balo volumtrico de 50 mL com auxlio de clorofrmio.
Transfira 5 mL do extrato para um tubo de ensaio envolto em material opaco. Adicione
5 mL da mistura reagente. Tampe, agite e mantenha o tubo em banho-maria a 37C, por
20 minutos. Faa a leitura da absorbncia em espectrofotmetro a 625 nm, utilizando
cubetas de 1 cm de caminho ptico.
Curva-padro Prepare uma soluo-me utilizando 0,2 g de colesterol dissolvido em
clorofrmio. Transfira para balo volumtrico de 200 mL e complete o volume com o
mesmo solvente. A partir desta soluo-me, prepare diferentes diluies, com alquotas
de 5, 10, 15, 20, 25 e 30 mL em bales volumtricos de 100 mL e completando os volumes com clorofrmio. Transfira 5 mL de cada uma das solues para tubos de ensaio
envoltos em material opaco. Adicione 5 mL da mistura reagente. Tampe os tubos, agite e
mantenha em banho-maria a 37C por 20 minutos. Leia a absorbncia em espectrofotmetro a 625 nm. Trace a curva-padro da absorbncia versus concentrao de colesterol.
Clculo
820 - IAL
Cubra o funil com um vidro de relgio durante a filtrao. Receba o filtrado em frasco
seco, tendo voltado ao filtro os primeiros 100 mL. Agite o filtrado com um movimento
de rotao. Determine a densidade, a 20C, deste filtrado conforme (011/IV).
Clculo
Colaboradores
Cludio de Flora, Deise Aparecida Pinatti Marsiglia, Irani Rodrigues de Oliveira,
Leondio Guilherme , Marcelo Vaz Leonardo, Marilda Duarte e Rejane W. de Abreu
822 - IAL
CAPTULO
XXVII
LEITES E
DERIVADOS
IAL - 823
824 - IAL
XXVII
Captulo XXVII - Leites e Derivados
LEITES E DERIVADOS
Material
Termolactodensmetro de Quevenne ou Gerber, balana analtica, proveta de 250 mL,
mufla, dessecador com slica-gel, placa de Petri, balo volumtrico de 1000 mL, esptula,
basto de vidro e papel absorvente.
Reagente
Soluo de cloreto de sdio 44 g/L Seque, em uma placa de Petri, cerca de 45 g de cloreto
de sdio em mufla a 300C por duas horas e resfrie em dessecador. Pese exatamente 44 g e
dissolva em balo volumtrico de 1000 mL. Esta soluo ter a densidade de 1,030, a 20C.
Procedimento Transfira, para uma proveta de 250 mL, uma quantidade da amostra
previamente homogeneizada e resfriada que permita introduzir o termolactodensmetro. A temperatura dever variar de (10-20)C. Introduza o termolactodensmetro lentamente, evitando mergulh-lo alm do ponto de afloramento e tendo o cuidado de no
encostar nas paredes da proveta. Faa a leitura ao nvel do leite, no menisco superior.
Levante um pouco o termolactodensmetro e enxugue a haste com papel absorvente, de
cima para baixo. Mergulhe novamente o termolactodensmetro at prximo do trao anteriormente observado. Espere que a coluna de mercrio do termmetro e o densmetro
se estabilizem. Proceda a leitura da densidade e da temperatura. Expresse a densidade a
15C utilizando a Tabela 1. Os valores dos graus lactodensimtricos correspondem 2,
3 e 4 casas decimais do valor da densidade. Para obter o valor da densidade corrigida a
15C, basta colocar 1 esquerda do valor do grau lactodensimtrico obtido na Tabela 1.
Se os valores da densidade no estiverem contidos nesta tabela, faa a correo da leitura
acrescentando 0,0002 para cada grau acima de 15C ou diminuindo 0,0002 para cada
grau abaixo de 15C. Ex.: para leitura a 16C com densidade igual a 1,0150, some a esta
leitura 0,0002; para leitura a 12C com densidade igual a 1,0150, subtraia 0,0006 desta
leitura.
Fator de correo do termolactodensmetro Transfira a soluo de cloreto de sdio 44 g/L
para uma proveta de 250 mL e introduza lentamente o termolactodensmetro, tendo o
cuidado de no encostar nas paredes da proveta. Aps a temperatura estabilizar a 20C,
anote a densidade. Calcule o fator de correo, que corresponde diferena entre o valor
terico da densidade da soluo de cloreto de sdio, que igual a 1,030 e o da densidade
lida no termolactodensmetro.
Nota: o fator de correo deve ser sempre somado densidade obtida na amostra analisada, lida no termolactodensmetro (densidade do leite a 15C).
826 - IAL
Temperatura do leite
(leitura)
Graus
Lactodensimtricos
10C
11C
12C
13C
14C
15C
16C
17C
18C
19C
20C
195
189
190
191
192
193
195
196
198
200
202
204
200
193
194
195
196
198
200
201
203
205
207
209
205
198
199
200
201
203
205
207
209
211
213
215
210
203
204
205
206
208
210
212
214
216
218
220
215
208
209
210
211
213
215
217
219
221
223
225
220
213
214
215
216
218
220
222
224
226
228
230
225
218
219
220
221
223
225
227
229
231
233
235
230
223
224
225
226
228
230
232
234
236
238
240
235
228
229
230
231
233
235
237
239
241
243
245
240
233
234
235
236
238
240
242
244
246
248
250
245
238
239
240
241
243
245
247
249
251
253
255
250
242
243
245
246
248
250
252
254
256
258
260
255
247
248
250
251
253
255
257
259
261
264
266
260
252
253
255
256
258
260
262
264
266
269
271
265
257
258
260
261
263
265
267
269
271
274
277
270
262
263
265
266
268
270
272
274
276
279
282
275
267
268
270
271
273
275
277
279
281
284
287
280
271
272
274
276
278
280
282
284
286
289
292
285
276
277
279
281
283
285
287
289
291
294
297
290
281
282
284
286
288
290
292
294
296
299
302
295
286
287
289
291
293
295
297
299
301
304
307
300
290
292
294
296
298
300
302
304
306
309
312
305
295
297
299
301
303
305
307
309
312
315
318
310
300
302
304
306
308
310
312
314
317
320
323
315
305
307
309
311
313
315
317
319
322
325
328
320
310
312
314
316
318
320
322
324
327
330
333
325
315
317
319
321
323
325
327
329
332
335
338
330
320
322
324
326
328
330
332
334
337
340
343
335
325
327
329
331
333
335
337
339
342
345
348
340
329
331
333
335
338
340
342
344
347
350
353
IAL - 827
Referncias bibliogrficas
FONSECA DA SILVA, P. H.; PEREIRA, D. B. C.; OLIVEIRA, L. L; COSTA-JNIOR,
L. C. G. Fsico-qumica do leite e derivados Mtodos analticos. Juiz de Fora,
Minas Gerais, 1997, p.25.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985, p.
199-200.
424/IV Leites Determinao do grau refratomtrico do soro cprico a 20C
O mtodo baseia-se no princpio de que a adio de gua ao leite dilui as substncias dissolvidas em seu soro. Uma leitura abaixo de 37Zeiss do soro cprico a 20C
sugere adio de gua ao leite.
Material
Refratmetro de imerso de Zeiss, frasco Erlenmeyer de 150 mL, proveta de 50 mL,
pipeta volumtrica de 10 mL, funil de vidro e papel de filtro.
Reagente
Soluo cprica Pese 7,25 g de sulfato de cobre (CuSO4.5H2O), transfira para um balo volumtrico de 100 mL e complete o volume com gua. A leitura desta soluo, no
refratmetro de imerso de Zeiss a 20C, dever ser de 36Z.
Procedimento Transfira para um dos copos do refratmetro de imerso de Zeiss uma
quantidade correspondente a mais da metade da sua capacidade de gua, recentemente
fervida e resfriada. Mergulhe o prisma do refratmetro e prenda pelos grampos do respectivo suporte. Deixe nessa posio por 10 minutos, tendo o cuidado de manter o banho
em uma temperatura constante. Ilumine o campo e ajuste a ocular. A poro superior do
campo, de 0 a 15, aparecer clara e ntida separada da camada inferior sombria. Faa a
leitura e anote a temperatura da gua. A leitura deve estar de acordo com a Tabela 2.
Preparo e leitura da amostra Transfira, para um frasco Erlenmeyer de 150 mL, com o
auxlio de uma pipeta, 10 mL da soluo cprica e adicione 40 mL da amostra. A adio
da amostra deve ser aos poucos, com agitao. Deixe em repouso por 5 minutos. Filtre em
papel de filtro. Despreze as primeiras gotas do filtrado, que dever estar lmpido. Receba
o filtrado em um frasco Erlenmeyer de 150 mL, seco. Transfira o filtrado para o copo
do refratmetro de imerso de Zeiss, ajuste a temperatura do banho a 20C, mergulhe o
prisma do refratmetro e prenda pelos grampos do respectivo suporte. Mantenha a temperatura do banho a 20C e faa a leitura.
828 - IAL
Leitura no aparelho
10,0
16,50
11,0
16,15
12,0
16,00
13,0
15,85
14,0
15,70
15,0
15,50
16,0
15,30
17,0
15,10
17,5
15,00
18,0
14,90
19,0
14,70
20,0
14,50
21,0
14,25
22,0
14,00
23,0
13,75
24,0
13,50
25,0
13,25
26,0
13,00
27,0
12,70
28,0
12,40
29,0
12,10
30,0
11,80
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985, p.
201-202.
425/IV Leites Determinao da adio de gua por crioscopia eletrnica
A crioscopia do leite corresponde medida de seu ponto de congelamento, utilizando o crioscpio eletrnico. O valor desta medida varia em funo da poca do ano,
regio geogrfica e da raa e alimentao do gado. O grau crioscpico do leite fraudado
com gua tende a aproximar-se de 0C, ponto de congelamento da gua. A adio de
IAL - 829
gua ao leite no s reduz a qualidade do mesmo, como tambm pode ocasionar contaminao dependendo da qualidade da gua adicionada, representando um risco sade
do consumidor. Neste mtodo, a amostra rapidamente resfriada a alguns graus abaixo
do seu ponto de congelamento, sob constante agitao. A vibrao resultante ocasiona
um desequilbrio trmico no interior da amostra, fazendo com que a soluo libere calor
de fuso. A temperatura sobe at atingir o ponto de congelamento, permanecendo constante por algum tempo. Este tempo denominado plateau, durante o qual se faz a leitura
do ponto de congelamento.
Material
Crioscpio eletrnico, pipetas graduadas de 5 mL e papel absorvente.
Reagentes
Solues-padro de sacarose a 70 e 100 g/L
Solues-padro de cloreto de sdio a 6,859 e 10,155 g/L
Procedimento Cada equipamento tem sua especificao, por isto, siga as instrues
do fabricante do aparelho, tais como, o tipo de banho refrigerante e o procedimento de
calibrao. As solues para calibrao geralmente utilizadas so as de cloreto de sdio e
de sacarose, podendo ser utilizada tambm a gua. A calibrao do equipamento fornece uma referncia confivel ao circuito eletrnico do crioscpio para que os resultados,
dentro da faixa de calibrao, sejam vlidos. Adicione a soluo refrigerante e calibre o
equipamento usando duas solues-padro. Efetue trs medies para cada amostra. Os
resultados dos testes devem ser prximos, com uma tolerncia de mais ou menos 0,002C
ou 0,002H (Hortvet), conforme a especificao do aparelho. Aps cada leitura, lave cuidadosamente o sensor com gua e seque com papel absorvente. Uma vez obtidas as trs
leituras, calcule a mdia aritmtica.
Nota: as concentraes das solues-padro devem seguir a especificao do fabricante do
equipamento. As mais usadas so:
Cloreto de sdio 6,859 g/L a 20C = - 0,408C (- 0,422H)
Cloreto de sdio 10,155 g/L a 20C = - 0,600C (- 0,621H)
Sacarose 70 g/L a 20C = -0,408C (- 0,422H)
Sacarose 100 g/L a 20C = -0,600C (- 0,621H)
830 - IAL
Clculo
O clculo da estimativa de fraude por adio de gua pode ser realizado por meio da
frmula abaixo:
Clculo
P = n de g de resduo seco
A = n de mL da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985, p.
204-205.
430/IV Leites Determinao do extrato seco total por mtodos indiretos
Procedimento Para verificar o valor do extrato seco total pelo disco de Ackermann,
faa coincidir as graduaes dos crculos interno e mdio, correspondentes densidade
e gordura, respectivamente. A posio da flecha indicar, no crculo externo, o extrato
seco total por cento m/v. Alternativamente, determine o extrato seco total por cento m/v,
por meio da Tabela 3 ou pela frmula de Fleishmann.
Clculo
Calcule o resduo seco por meio da frmula de Fleishmann:
Densidade
a 15C
2,0
2,1
2,2
2,3
1,0260
1,0261
1,0262
1,0263
1,0264
1,0265
1,0266
1,0267
1,0268
1,0269
1,0270
1,0271
1,0272
1,0273
1,0274
1,0275
1,0276
1,0277
1,0278
1,0279
1,0280
1,0281
1,0282
1,0283
1,0284
1,0285
1,0286
1,0287
1,0288
1,0289
1,0290
1,0291
1,0292
1,0293
1,0294
1,0295
1,0296
1,0297
1,0298
1,0299
1,0300
1,0301
1,0302
1,0303
1,0304
1,0305
1,0306
1,0307
1,0308
1,0309
1,0310
1,0311
9,15
9,18
9,20
9,23
9,26
9,28
9,31
9,33
9,36
9,38
9,41
9,43
9,46
9,48
9,51
9,53
9,56
9,58
9,61
9,63
9,66
9,68
9,71
9,73
9,76
9,79
9,81
9,84
9,86
9,89
9,91
9,94
9,96
9,99
10,01
10,04
10,06
10,09
10,11
10,14
10,16
10,19
10,21
10,24
10,26
10,29
10,31
10,34
10,36
10,39
10,41
10,44
9,27
9,30
9,32
9,35
9,38
9,40
9,43
9,45
9,48
9,50
9,53
9,55
9,58
9,60
9,63
9,65
9,68
9,70
9,73
9,75
9,78
9,80
9,83
9,85
9,88
9,91
9,93
9,96
9,98
10,01
10,03
10,06
10,08
10,11
10,13
10,16
10,18
10,21
10,23
10,26
10,28
10,31
10,33
10,36
10,38
10,41
10,43
10,46
10,48
10,51
10,53
10,56
9,39
9,42
9,44
9,47
9,50
9,52
9,55
9,57
9,60
9,62
9,65
9,67
9,70
9,72
9,75
9,77
9,80
9,82
9,85
9,87
9,90
9,92
9,95
9,97
10,00
10,03
10,05
10,08
10,10
10,13
10,15
10,18
10,20
10,23
10,25
10,28
10,30
10,33
10,35
10,38
10,40
10,43
10,45
10,48
10,50
10,53
10,55
10,58
10,60
10,63
10,65
10,68
9,51
9,54
9,56
9,59
9,62
9,64
9,67
9,69
9,72
9,74
9,77
9,79
9,82
9,84
9,87
9,89
9,92
9,94
9,97
9,99
10,02
10,04
10,07
10,09
10,12
10,15
10,17
10,20
10,22
10,25
10,27
10,30
10,32
10,35
10,37
10,40
10,42
10,45
10,47
10,50
10,52
10,55
10,57
10,60
10,62
10,65
10,67
10,70
10,72
10,75
10,77
10,80
Porcentagem de gordura
2,4
2,5
2,6
Extrato seco total
9,63
9,75
9,87
9,66
9,78
9,90
9,68
9,80
9,92
9,71
9,83
9,95
9,74
9,86
9,98
9,76
9,88 10,00
9,79
9,91 10,03
9,81
9,93 10,05
9,84
9,96 10,08
9,86
9,98 10,10
9,89 10,01 10,13
9,91 10,03 10,15
9,94 10,06 10,18
9,96 10,08 10,20
9,99 10,11 10,23
10,01 10,13 10,25
10,04 10,16 10,28
10,06 10,18 10,30
10,09 10,21 10,33
10,11 10,23 10,35
10,14 10,26 10,38
10,16 10,28 10,40
10,19 10,31 10,43
10,21 10,33 10,45
10,24 10,36 10,48
10,27 10,39 10,51
10,29 10,41 10,53
10,32 10,44 10,56
10,34 10,46 10,58
10,37 10,49 10,61
10,39 10,51 10,63
10,42 10,54 10,66
10,44 10,56 10,68
10,47 10,59 10,71
10,49 10,61 10,73
10,52 10,64 10,76
10,54 10,66 10,78
10,57 10,69 10,81
10,59 10,71 10,83
10,62 10,74 10,86
10,64 10,76 10,88
10,67 10,79 10,91
10,69 10,81 10,93
10,72 10,84 10,96
10,74 10,86 10,98
10,77 10,89 11,01
10,79 10,91 11,03
10,82 10,94 11,06
10,84 10,96 11,08
10,87 10,99 11,11
10,89 11,01 11,13
10,92 11,04 11,16
2,7
2,8
2,9
3,0
9,99
10,02
10,04
10,07
10,10
10,12
10,15
10,17
10,20
10,22
10,25
10,27
10,30
10,32
10,35
10,37
10,40
10,42
10,45
10,47
10,50
10,52
10,55
10,57
10,60
10,63
10,65
10,68
10,70
10,73
10,75
10,78
10,80
10,83
10,85
10,88
10,90
10,93
10,95
10,98
11,00
11,03
11,05
11,08
11,10
11,13
11,15
11,18
11,20
11,23
11,25
11,28
10,11
10,14
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11,46
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11,51
11,54
11,56
11,59
11,61
11,64
IAL - 835
Densidade
a 15C
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2,1
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11,62
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11,67
11,70
11,72
11,75
11,77
836 - IAL
Porcentagem de gordura
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2,5
2,6
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2,8
2,9
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12,46
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12,59
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Densidade
a 15C
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3,1
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1,0276
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11,90
11,92
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11,97
12,00
12,02
12,05
Porcentagem de gordura
3,4
3,5
3,6
Extrato seco total
10,83 10,95 11,07
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10,88 11,00 11,12
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10,99 11,11 11,23
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11,94 12,06 12,18
11,97 12,09 12,21
11,99 12,11 12,23
12,02 12,14 12,26
12,04 12,16 12,28
12,07 12,19 12,31
12,09 12,21 12,33
12,12 12,24 12,36
12,14 12,26 12,38
12,17 12,29 12,41
3,7
3,8
3,9
4,0
11,19
11,22
11,24
11,27
11,30
11,32
11,35
11,37
11,40
11,42
11,45
11,47
11,50
11,52
11,55
11,57
11,60
11,62
11,65
11,67
11,70
11,72
11,75
11,77
11,80
11,83
11,85
11,88
11,90
11,93
11,95
11,98
12,00
12,03
12,05
12,08
12,10
12,13
12,15
12,18
12,20
12,23
12,25
12,28
12,30
12,33
12,35
12,38
12,40
12,43
12,45
12,48
12,50
12,53
11,31
11,34
11,36
11,39
11,42
11,44
11,47
11,49
11,52
11,54
11,57
11,59
11,62
11,64
11,67
11,69
11,72
11,74
11,77
11,79
11,82
11,84
11,87
11,89
11,92
11,95
11,97
12,00
12,02
12,05
12,07
12,10
12,12
12,15
12,17
12,20
12,22
12,25
12,27
12,30
12,32
12,35
12,37
12,40
12,42
12,45
12,47
12,50
12,52
12,55
12,57
12,60
12,62
12,65
11,43
11,46
11,48
11,51
11,54
11,56
11,59
11,61
11,64
11,66
11,69
11,71
11,74
11,76
11,79
11,81
11,84
11,86
11,89
11,91
11,94
11,96
11,99
12,01
12,03
12,07
12,09
12,12
12,14
12,17
12,19
12,22
12,24
12,27
12,29
12,32
12,34
12,37
12,39
12,42
12,44
12,47
12,49
12,52
12,54
12,57
12,59
12,62
12,64
12,67
12,69
12,72
12,74
12,77
11,55
11,58
11,60
11,63
11,66
11,68
11,71
11,73
11,76
11,78
11,81
11,83
11,86
11,88
11,91
11,93
11,96
11,98
12,01
12,03
12,06
12,08
12,11
12,13
12,16
12,19
12,21
12,24
12,26
12,29
12,31
12,34
12,36
12,39
12,41
12,44
12,46
12,49
12,51
12,54
12,56
12,59
12,61
12,64
12,66
12,69
12,71
12,74
12,76
12,79
12,81
12,84
12,86
12,89
IAL - 837
Densidade
a 15C
3,0
3,1
3,2
3,3
1,0314
1,0315
1,0316
1,0317
1,0318
1,0319
1,0320
1,0321
1,0322
1,0323
1,0324
1,0325
1,0326
1,0327
1,0328
1,0329
1,0330
1,0331
1,0332
1,0333
1,0334
1,0335
1,0336
1,0337
1,0338
1,0339
1,0340
1,0341
1,0342
1,0343
1,0344
1,0345
1,0346
1,0347
1,0348
1,0349
1,0350
11,71
11,74
11,76
11,79
11,81
11,84
11,86
11,89
11,91
11,94
11,96
11,99
12,01
12,04
12,06
12,09
12,11
12,14
12,16
12,19
12,21
12,24
12,26
12,29
12,31
12,34
12,36
12,39
12,41
12,44
12,46
12,49
12,41
12,54
12,56
12,59
12,61
11,83
11,86
11,88
11,91
11,93
11,96
11,98
12,01
12,03
12,06
12,08
12,11
12,13
12,16
12,18
12,21
12,23
12,26
12,28
12,31
12,33
12,36
12,38
12,41
12,43
12,46
12,48
12,51
12,53
12,56
12,58
12,61
12,63
12,66
12,68
12,71
12,73
11,95
11,98
12,00
12,03
12,05
12,08
12,10
12,13
12,15
12,18
12,20
12,23
12,25
12,28
12,30
12,33
12,35
12,38
12,40
12,43
12,45
12,48
12,50
12,53
12,55
12,58
12,60
12,63
12,65
12,68
12,70
12,73
12,75
12,78
12,80
12,83
12,85
12,07
12,10
12,12
12,15
12,17
12,20
12,22
12,25
12,27
12,30
12,32
12,35
12,37
12,40
12,42
12,45
12,47
12,50
12,52
12,55
12,57
12,60
12,62
12,65
12,67
12,70
12,72
12,75
12,77
12,80
12,82
12,85
12,87
12,90
12,92
12,95
12,97
Porcentagem de gordura
3,4
3,5
3,6
Extrato seco total
12,19 12,31 12,43
12,22 12,34 12,46
12,24 12,36 12,48
12,27 12,39 12,51
12,29 12,41 12,53
12,32 12,44 12,56
12,34 12,46 12,58
12,37 12,49 12,61
12,39 12,51 12,63
12,42 12,54 12,66
12,44 12,56 12,68
12,47 12,59 12,71
12,49 12,61 12,73
12,52 12,64 12,76
12,54 12,66 12,78
12,57 12,69 12,81
12,59 12,71 12,83
12,62 12,74 12,86
12,64 12,76 12,88
12,67 12,79 12,91
12,69 12,81 12,93
12,72 12,84 12,96
12,74 12,86 12,98
12,77 12,89 13,01
12,79 12,91 13,03
12,82 12,94 13,06
12,84 12,96 13,08
12,87 12,99 13,11
12,89 13,01 13,13
12,92 13,04 13,16
12,94 13,06 13,18
12,97 13,09 13,21
12,99 13,11 13,23
13,02 13,14 13,26
13,04 13,16 13,28
13,07 13,19 13,31
13,09 13,21 13,33
3,7
3,8
3,9
4,0
12,55
12,58
12,60
12,63
12,65
12,68
12,70
12,73
12,75
12,78
12,80
12,83
12,85
12,88
12,90
12,93
12,95
12,98
13,00
13,03
13,05
13,08
13,10
13,13
13,15
13,18
13,20
13,23
13,25
13,28
13,30
13,33
13,35
13,38
13,40
13,43
13,45
12,67
12,70
12,72
12,75
12,77
12,80
12,82
12,85
12,87
12,90
12,92
12,95
12,97
13,00
13,02
13,05
13,07
13,10
13,12
13,15
13,17
13,20
13,22
13,25
13,27
13,30
13,32
13,35
13,37
13,40
13,42
13,45
13,47
13,50
13,52
13,55
13,57
12,79
12,82
12,84
12,87
12,89
12,92
12,94
12,97
12,99
13,02
13,04
13,07
13,09
13,12
13,14
13,17
13,19
13,22
13,24
13,27
13,29
13,32
13,34
13,37
13,39
13,42
13,44
13,47
13,49
13,52
13,54
13,57
13,59
13,62
13,64
13,67
13,69
12,91
12,94
12,96
12,99
13,01
13,04
13,06
13,09
13,11
13,14
13,16
13,19
13,21
13,24
13,26
13,29
13,31
13,34
13,36
13,39
13,41
13,44
13,46
13,49
13,51
13,54
13,56
13,59
13,61
13,64
13,66
13,69
13,71
13,74
13,76
13,79
13,81
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985, p.
205.
PAOLONE, L. Tabela para a determinao do resduo seco (extrato seco) do leite. Rev.
Inst. Adolfo Lutz, v.17, n.1/2, p.59-70, 1957.
838 - IAL
IAL - 839
Clculo
Estas adies devem ser feitas sem molhar internamente o gargalo do butirmetro; se
isto acontecer, limpe cuidadosamente com um papel absorvente. Arrolhe o butirmetro,
pese, utilizando luvas, e agite at completa dissoluo. Centrifugue a (1200 100) rpm
durante 15 minutos, quando for usada a termocentrfuga. No caso de usar a centrfuga
de Gerber, centrifugue por 5 minutos, leve para um banho-maria a (63 2)C, por 2
a 3 minutos, com a rolha para baixo. Retire o lactobutirmetro da termocentrfuga ou
do banho na posio vertical (rolha para baixo). Manejando a rolha, coloque a camada
amarela-clara, transparente (gordura), dentro da escala graduada do lactobutirmetro. O
valor obtido na escala corresponde diretamente porcentagem de gordura, cuja leitura
deve ser feita no menisco inferior.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985, p.
207-208.
434/IV Leites Extrao de gordura para determinao de cidos graxos
Material
Balana semi-analtica, esptula, bqueres de 250 e 600 mL, pipeta graduada de 5 mL,
provetas de 100 e 200 mL, vidro de relgio, agitador magntico, barra magntica, capela
de exausto, papel de filtro e fita indicadora de pH (0-14).
Reagentes
cido clordrico
ter anidro
Sulfato de sdio anidro
Procedimento Transfira, na capela, 100 mL da amostra para um bquer de 600 mL,
adicione 200 mL de ter, sob agitao. Acerte o pH com cido clordrico at 2. Tampe
o bquer com vidro de relgio. Agite por 1 hora utilizando o agitador magntico. Filtre
com papel de filtro contendo sulfato de sdio anidro, receba o filtrado em um bquer de
250 mL e evapore, na capela, o solvente temperatura ambiente e ao abrigo da luz. Faa
a determinao dos cidos graxos por cromatografia gasosa (053/IV).
Referncia bibliogrfica
FOX, P.F. Cheese: chemistry, physics and microbiology. v. 1: General aspects. 2nd ed.,
London: Chapman & Hall, 1999. p. 370.
IAL - 841
nize em chapa aquecedora na capela e incinere em mufla a (550 10)C, pelo perodo
aproximado de 4 horas. O resduo dever ficar branco ou ligeiramente acinzentado, caso
contrrio, resfrie, adicione 0,5 mL de gua, seque em banho-maria e incinere novamente.
Resfrie em dessecador e pese.
Clculo
P = n de g de resduo
A = nde mL da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985, p. 211-212.
438/IV Leites Determinao da alcalinidade das cinzas em carbonato de sdio
A presena de substncias alcalinas adicionadas ao leite faz aumentar a alcalinidade das cinzas, que determinada por via indireta fazendo-se reagir as cinzas com uma
quantidade conhecida de soluo cida padronizada e titulando o excesso deste com uma
soluo alcalina de concentrao conhecida.
Material
Erlenmeyer de 500 mL, basto de vidro, proveta de 50 mL, buretas de 50 mL e chapa
aquecedora
Reagentes
Soluo de cido clordrico 0,1 M
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 M
Soluo de fenolftalena a1%
Soluo de cloreto de clcio a 40% m/v neutralizada com soluo de cido clordrico
0,1 M e filtrada
Procedimento Transfira, quantitativamente, as cinzas obtidas em 437/IV, para um
Erlenmeyer de 500 mL, usando pequenas pores de gua. Adicione, aos poucos, 50 mL
IAL - 843
de soluo de cido clordrico 0,1 M e leve ebulio moderada por 5 minutos. Resfrie e
adicione 30 mL da soluo de cloreto de clcio a 40% e 5 gotas de soluo de fenolftalena. Deixe em repouso por 5 minutos e titule o excesso de cido clordrico com soluo
de hidrxido de sdio 0,1 M. A titulao deve ser bastante rpida at se obter turvao e
colorao rsea.
Clculo
V= diferena entre o n de mL de cido sulfrico 0,1 N adicionado e o n de mL de soluo de hidrxido de sdio 0,1 N gasto na titulao
A = n de mL da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
212.
440/IV Leites Determinao de cloretos em cloreto de sdio
Os cloretos so precipitados sob a forma de cloreto de prata em pH levemente alcalino em presena de cromato de potssio como indicador. O ponto final da titulao
visualizado pela formao do precipitado vermelho-tijolo de cromato de prata.
Material
Pipetas volumtricas de 10 e 20 mL, cpsula de porcelana, banho-maria, chapa aquecedora, capela de exausto, mufla, proveta de 50 mL, balo volumtrico de 100 mL, bquer
de 200 mL, bureta de 10 mL, funil de vidro e papel de filtro.
Reagentes
cido ntrico
Carbonato de clcio
Soluo de cromato de potssio a 10% m/v
Soluo de nitrato de prata 0,1 M
Procedimento Transfira, com o auxlio de uma pipeta volumtrica, 10 mL da amostra
para uma cpsula de porcelana. Evapore em banho-maria at a secagem. Carbonize em
chapa eltrica na capela. Incinere em mufla a (550 10)C. As cinzas devero ficar brancas ou ligeiramente acinzentadas, caso contrrio esfrie, adicione 0,5 mL de gua, seque
IAL - 845
IAL - 847
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 219.
445/IV Leites Identificao de perxido de hidrognio com iodeto
Material
Pipetas de 2 mL, tubos de ensaio de 20 mL, banho-maria e suporte para tubos ensaio.
Reagentes
Soluo de cido clordrico a 1% v/v
Soluo de iodeto de potssio a 10% m/v
Soluo de amido a 1% m/v
Procedimento Em um tubo de ensaio, coloque 2 mL da amostra, 2 mL de soluo de
cido clordrico a 1% e 2 mL de soluo de iodeto de potssio a 10%. Aquea por um minuto em banho-maria, resfrie e adicione 2 mL de soluo de amido. O desenvolvimento
de uma colorao azul indica teste positivo.
Nota: existe no mercado fita reativa prpria para esta prova.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 219.
446/IV Leites Identificao de formaldedo com floroglucina
A floroglucina reage com o formaldedo, produzindo um derivado hidroximetilado
de colorao salmo.
Material
Aparelho destilador, frasco de destilao, frasco Erlenmeyer de 200 mL, tubos de ensaio
de 20 mL, proveta de 10 mL e suporte para tubos de ensaio.
Reagentes
cido fosfrico a 20% v/v
Soluo de floroglucina a 1% m/v
Soluo de hidrxido de sdio a 10% v/v
Procedimento Transfira 50 mL da amostra para um frasco de destilao e adicione 80
mL de cido fosfrico a 20%. Destile cerca de 40 mL, recolhendo em frasco Erlenmeyer
IAL - 849
Material
Tubos de ensaio de 20 mL, pipetas graduadas de 1 e 5 mL, balo volumtrico de 100 mL,
bquer de 500 mL, chapa aquecedora, capela de exausto e suporte para tubos de ensaio.
Reagente
Soluo saturada de cido cromotrpico Pese 0,5 g de cido cromotrpico e dissolva em
100 mL de cido sulfrico a 72%.
Procedimento Transfira 1 mL da amostra destilada conforme o mtodo 446/IV para um
tubo de ensaio e adicione, na capela, 5 mL da soluo de cido cromotrpico, agite e aquea em
banho-maria por 15 minutos. Na presena de formaldedo, aparecer uma colorao violeta.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 271.
449/IV Leites Determinao de cloro e hipocloritos
Este ensaio fundamenta-se na formao de iodo livre a partir da reao de iodeto
de potssio com cloro livre ou hipoclorito.
Material
Tubos de ensaio de 25 mL, pipetas graduadas de 1 e 5 mL, proveta de 10 mL, banhomaria e suporte para tubos de ensaio.
Reagentes
Soluo de iodeto de potssio a 7,5% m/v
cido clordrico (1+2) v/v
Soluo de amido a 1% m/v
Procedimento Em tubo de ensaio, transfira 5 mL da amostra, adicione 0,5 mL de soluo de iodeto de potssio a 7,5% e agite. O aparecimento da colorao amarela indica a
presena de cloro livre. Para confirmar, adicione 1 mL de soluo de amido a 1%. Dever
desenvolver colorao azul ou violeta; no havendo mudana de colorao, adicione 4 mL
de cido clordrico (1+2), coloque em banho-maria a 80C por 10 minutos. Resfrie em
gua corrente e observe a colorao do coagulado, que na presena de hipoclorito dever ser
amarela. Para confirmao, adicione 1 mL de soluo de amido a 1%. Dever desenvolver
colorao azul ou violeta. Faa uma prova em branco com cido clordrico.
IAL - 851
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Ministrio da Agricultura. Secretaria Nacional de Defesa Agropecuria. Laboratrio Nacional de Referncia Animal. Leite em p e soro de leite em p. In: _____. Mtodos analticos oficiais para controle de produtos de origem animal e seus ingredientes:
mtodos fsicos e qumicos. Braslia, DF, 1981. v.II, cap. 14, p. 10-11.
450/IV Leites Determinao de fosfatase
A fosfatase alcalina uma enzima hidroltica natural do leite cru, sendo sensvel
s temperaturas de pasteurizao. A medida da fosfatase residual uma informao da
eficincia da pasteurizao. Agindo sobre o fenil fosfato dissdico, esta fosfatase libera
fenol, proporcional atividade da enzima, que reage com 2,6-dicloroquinonacloramida,
produzindo o azul de indofenol, cuja intensidade de cor medida por espectrofotometria.
Material
Espectrofotmetro UV/VIS, pipetas volumtricas de 0,5 e 5 mL e tubos de ensaio de
(12x114) mm com dimetro interno uniforme e banho-maria.
Reagentes
n-Butanol
Soluo de carbonato de sdio a 8% m/v
Soluo-tampo de carbonato Pese 5,75 g de carbonato de sdio anidro, transfira para
um balo volumtrico de 500 mL, adicione 5,1 g de bicarbonato de sdio e 0,55 g de
fenil fosfato dissdico (isento de fenol). Misture e complete o volume com gua. Este
reagente estvel por 1 semana.
Soluo precipitante Pese 12,5 g de cido tricloroactico em um bquer de 100 mL,
adicione 25 mL de gua, 25 mL de cido clordrico e misture.
Soluo de sulfato de cobre Pese 0,25 g de sulfato de cobre penta-hidratado, transfira
para um balo volumtrico de 500 mL, adicione 25 g de hexametafosfato de sdio. Misture e complete o volume com gua.
Soluo de CQC Pese 0,1 g de 2,6-dicloroquinonacloramida em um bquer de
852 - IAL
100 mL, adicione 12,5 mL de lcool e misture. Coloque a soluo em frasco contagotas mbar. Este reagente estvel por 1 semana.
Soluo-tampo com catalisador Pese 5,1 g de bicarbonato de sdio anidro, transfira
para um balo volumtrico de 500 mL e adicione 0,05 g de sulfato de cobre penta-hidratado. Misture e complete o volume com gua.
Soluo-estoque de fenol Pese 0,5 g de fenol, transfira para um balo volumtrico de
500 mL. Misture e complete com gua.
Soluo de fenol para anlise a 4 g/mL Transfira 2 mL da soluo-estoque de fenol
para um balo volumtrico de 500 mL e complete o volume com soluo-tampo com
catalisador.
Procedimento Em um tubo de ensaio, coloque 10 mL da soluo-tampo de carbonato. Aquea a 37C por 5 minutos. Adicione 1 mL da amostra e aquea a 37C, por 1
hora. Remova do banho e adicione lentamente, pelas paredes, 1 mL da soluo precipitante. Aps alguns segundos, filtre para tubo calibrado de 5 mL, ou simplesmente colete
em tubo 5 mL do filtrado. Adicione 1 mL da soluo de sulfato de cobre. Pipete 5 mL
da soluo de carbonato de sdio a 8% aquecida e agite. Adicione duas gotas de soluo
CQC e inverta rapidamente o tubo. Espere o desenvolvimento da cor a 37C, por 5 minutos. Coloque 5 mL de n-butanol, inverta o tubo por 5 vezes, deixe em repouso por 1
minuto e compare a cor com os padres ou leia, a 650 nm, comparando posteriormente
com a curva-padro.
Curva-padro Em seis tubos de ensaio, pipete respectivamente: 10; 9,5; 9; 8; 7 e 6 mL
da soluo-tampo com catalisador e, na mesma ordem, 0; 0,5; 1; 2; 3 e 4 mL de soluo
diluda de fenol. As concentraes nos tubos sero, respectivamente: 0, 4, 8, 12 e 16 g
de fenol por 10 mL. Adicione a cada tubo duas gotas de CQC, sob agitao e inverta
uma vez os tubos. Incube a 37C, durante 5 minutos. Adicione 5 mL de lcool butlico.
Inverta 5 vezes os tubos para extrair a cor, feche com tampas de borracha e mantenha
no refrigerador at o momento da leitura. Remova 3 mL da camada alcolica e leia em
espectrofotmetro UV/VIS a 650 nm.
Notas
Prepare sempre um controle positivo, um negativo e outro de interferentes.
Controle negativo Aquea 5 mL de leite cru at temperatura interna de 85C, por 1
minuto, com agitao. Este controle no dever apresentar colorao azul.
Controle positivo Adicione 0,1 mL de leite cru a 100 mL de leite cru que tenha sido
IAL - 853
fervido temperatura interna de 85C, por um minuto. Este controle dever dar reao
positiva (serve para testar os reagentes).
Controle de interferentes Quando a reao na amostra revelar presena de fenis, deve
ser feito um novo teste sem a adio do reagente soluo-tampo de carbonato. Uma
colorao azul indica presena de interferentes fenlicos.
Existe no mercado kit para prova de fosfatase.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 221-223.
451/IV Leites Prova de peroxidase
A peroxidase uma enzima presente no leite, que destruda quando aquecido acima de 75C, por mais de 20 segundos (temperatura e tempo limites para a pasteurizao
do leite). Este teste avalia se o processo de pasteurizao foi eficiente.
Material
Tubos de ensaio de 20 mL, pipetas graduadas de 2 e 10 mL, banho-maria, capela de
exausto, termmetro e suporte para tubos de ensaio.
Reagentes
Soluo de alcolica guaiacol a 1% v/v
Perxido de hidrognio a 3%
Procedimento Transfira 10 mL da amostra para um tubo de ensaio de 20 mL, aquea
em banho-maria a (43 2)C por 5 minutos. Na capela, adicione 2 mL da soluo de
guaiacol pelas paredes do tubo e 3 gotas de perxido de hidrognio. O desenvolvimento
de uma colorao salmo indica peroxidase positiva.
854 - IAL
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 223-224.
BRASIL. Leis, Decretos, etc. Instruo Normativa n 22, de 14/04/03, do Ministrio
da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Secretaria de Defesa Agropecuria. Dirio
Oficial, Brasilia, 02/05/03, p.9.
Leite em p
Entende-se por leite em p o produto obtido pela desidratao do leite integral,
desnatado ou parcialmente desnatado, mediante processo tecnolgico adequado. Este
produto pode ser modificado com adio ou supresso de nutrientes para atender s
necessidades do consumidor, levando em conta a faixa etria e exigncias nutricionais
especficas. As principais determinaes para este tipo de alimento so: acidez em cido
lctico, substncias volteis, resduo por incinerao, alcalinidade das cinzas, gordura,
cidos graxos, protidos, glicdios redutores em lactose, cromatografia de acares, prova
de reconstituio e prova de rancidez conforme o mtodo 333/IV.
452/IV Leite em p Prova de reconstituio
Procedimento Faa a reconstituio do produto conforme especificao do fabricante
e conserve em geladeira. Observe durante 12 horas se o produto se mantm como leite
fluido, isto , estvel sem precipitao.
453/IV Leite em p Determinao da acidez em cido lctico
Material
Balana analtica, bquer de 100 mL, basto de vidro, frasco Erlenmeyer de 125 mL,
bureta de 10 mL e esptula.
Reagentes
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 M
Soluo de fenolftalena a 1%
Procedimento Pese aproximadamente 5 g da amostra em um bquer, transfira quantitativamente para um frasco Erlenmeyer usando 35 mL de gua (amostra de leite integral)
ou 50 mL de gua (amostra de leite desnatado). Adicione 5 gotas de soluo de fenolftaIAL - 855
lena. Titule com uma soluo de hidrxido de sdio 0,1 M, utilizando bureta de 10 mL,
at o aparecimento de uma colorao rsea.
Clculo
856 - IAL
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
225.
455/IV Leite em p Determinao de resduo por incinerao (cinzas)
Material
Balana analtica, cpsula de porcelana, mufla, dessecador com slica-gel, chapa aquecedora, banho-maria, esptula, capela de exausto e pina de metal.
Procedimento Pese aproximadamente 3 g da amostra em uma cpsula de porcelana,
previamente aquecida em mufla a (55010)C, por 1 hora, resfriada em dessecador e pesada. Carbonize em chapa aquecedora na capela e incinere em mufla a (550 10)C, por
aproximadamente 4 horas. O resduo dever ficar branco ou ligeiramente acinzentado,
caso contrrio, esfrie, adicione 0,5 mL de gua, seque em banho-maria e incinere novamente. Resfrie em dessecador e pese.
Clculo
N= n de g de resduo
A = n de g da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 27.
456/IV Leite em p Determinao da alcalinidade das cinzas
Procedimento Proceda conforme o mtodo 438/IV ou 439/IV utilizando o resduo
por incinerao (cinzas).
457/IV Leite em p Determinao da gordura
IAL - 857
858 - IAL
Leite evaporado
Entende-se como leite evaporado o produto obtido pela evaporao de grande parte da gua existente no leite fluido. Este produto tem sua anlise baseada em determinaes feitas na amostra diluda at reconstituio do leite. As determinaes correspondem
mesmas efetuadas para o leite fluido, com exceo das provas de peroxidase, fosfatase e
estabilidade ao etanol.
462/IV Leite evaporado - Prova de reconstituio
Procedimento Faa a reconstituio do produto conforme especificao do fabricante
e proceda conforme o mtodo 452/IV.
Queijo
Queijo o produto fresco ou maturado que se obtm por separao parcial do soro
do leite ou leite reconstitudo (integral, parcial ou totalmente desnatado) ou de soros lcteos coagulados pela ao fsica do coalho, de enzimas e de bactrias especficas, de cidos
orgnicos, isolados ou combinados, todos de qualidade apta para uso alimentar, com ou
sem agregao de substncias alimentcias, especiarias e/ou condimentos, aditivos especificamente indicados, substncias aromatizantes e matrias corantes. A anlise dos queijos
envolve, entre outras, as determinaes de substncias volteis, protdios, gordura, acidez
em cido lctico, resduo por incinerao (cinzas) (485/IV), alm da prova amido (441/
IV), corantes (051/IV), conservadores (468/IV), espessantes, principalmente em queijos
fundidos, (132/IV - 143/IV) e reao de Kreis (333/IV).
Preparo e conservao da amostra
Procedimento Remova, com uma faca, a crosta ou casca do queijo. Tome pores
de diferentes pontos da amostra. Se o queijo for mole, homogeneze em um gral e se
for duro, rale e homogeneze em um gral. Conserve a amostra em um frasco com rolha
esmerilhada, em local arejado. Quando se tratar de queijo fresco ou de certos queijos
maturados moles, perecveis, conserve em geladeira.
463/IV Queijo - Determinao da acidez em cido lctico
Material
Balana analtica, bquer de 100 mL, esptula, basto de vidro, frasco Erlenmeyer de
250 mL, balo volumtrico de 100 mL, funil de vidro, papel de filtro e bureta de 10 mL.
IAL - 859
Reagentes
lcool a 95%, neutro
Soluo de fenolftalena a 1%
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 M
Procedimento Pese aproximadamente 10 g da amostra e transfira para um balo volumtrico de 100 mL com lcool a 95%, neutro. Complete o volume. Deixe em contato
por 6 horas. Filtre e tome uma alquota. Adicione 5 gotas da soluo de fenolftalena e
titule com soluo de hidrxido de sdio 0,1 M, at colorao rsea.
Clculo
860 - IAL
Reagentes
cido sulfrico (D = 1,813 - 1,817)
lcool isoamlico (D = 0,815)
Procedimento Pese os butirmetros com suas respectivas rolhas para verificar se os
mesmos esto com os pesos equivalentes. Pese 3 g da amostra no copo do butirmetro
e adapte ao mesmo. Adicione 5 mL de gua a (30-40)C, junte, lentamente, 10 mL de
cido sulfrico, 1 mL de lcool isoamlico e gua morna at completar o volume do tubo.
Estas adies devem ser feitas sem molhar internamente o gargalo do butirmetro, se isto
acontecer, limpe cuidadosamente com papel absorvente. Arrolhe o butirmetro, pese em
temperatura ambiente e, usando luvas, agite, inverta o tubo e coloque em banho-maria a
(632)C, durante 15 minutos. Verifique se no restam partculas slidas e centrifugue a
(1200100) rpm, durante 15 minutos. Leia a porcentagem de gordura diretamente na escala do butirmetro. Repita as operaes de aquecimento e centrifugao, se necessrio.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
233.
466/IV Queijo Determinao de gordura utilizando butirmetro para leite
Material
Balana analtica, balana semi-analtica, esptula, bqueres de 25 e 1000 mL, bureta
de 25 mL, butirmetro de Gerber para leite com respectiva rolha, pipetador automtico
de 1 mL, basto de vidro, chapa eltrica, termmetro, banho maria, capela de exausto,
termocentrfuga ou centrfuga de Gerber, luvas e papel absorvente.
Reagentes
cido sulfrico (D =1,50)
lcool isoamlico (D = 0,815)
Procedimento Pese os butirmetros com suas respectivas rolhas para verificar se os
mesmos esto com os pesos equivalentes. Pese aproximadamente 1 g da amostra em um
bquer de 25 mL, adicione 5 mL de cido sulfrico (D = 1,5), contido em uma bureta.
IAL - 861
Aquea em chapa aquecedora com temperatura aproximada de 250C, agite at completa dissoluo da amostra e transfira para o butirmetro. Adicione pores de 5 mL at
completar o volume de 20 mL, sempre aquecendo em chapa aquecedora. Adicione, com
o auxlio de um pipetador automtico, 1 mL de lcool isoamlico. Estas adies devem
ser feitas sem molhar internamente o gargalho do butirmetro, se isto acontecer, limpe
cuidadosamente com um papel absorvente. Arrolhe o butirmetro, pese em temperatura
ambiente, e agite, usando luvas, at a completa homogeneizao. Leve ao banho-maria
a (63 2)C por 15 minutos, com a rolha para baixo. Centrifugue a (1200100) rpm
durante 15 minutos. Retire o butirmetro da termocentrfuga ou centrfuga de Gerber na
posio vertical (rolha para baixo). Manejando a rolha, coloque a camada amarelo-clara,
transparente (gordura), dentro da escala graduada do butirmetro. Faa leitura na escala
do butirmetro.
Clculo
Coalho
A matria-prima bsica da indstria do coalho retirada do 4 estmago de bezerros
lactentes, abatidos entre 1 e 5 semanas de vida. O coalho a renina secretada pelas glndulas gstricas em forma de pr-renina, a qual ativada pela acidez. A renina hidrolisa a casena
do leite transformando-a em pr-casena solvel que, em presena de ons clcio, se converte em para-caseinato de clcio, que insolvel e constitui o cogulo propriamente dito.
470/IV Coalho Poder coagulante
Material
Balana analtica, esptula, bquer de 200 mL, pipeta volumtrica de 1 mL, bales volumtricos de 10 e 100 mL, termmetro, cronmetro e banho-maria.
Reagente
Soluo de cloreto de sdio a 7% m/v
Leite cru
Procedimento
Preparo da amostra Para o coalho lquido, transfira 1 mL da amostra para um balo
volumtrico de 10 mL e complete o volume com soluo de cloreto de sdio a 7%. Para
o coalho em p, pese 1 g da amostra, transfira para um balo volumtrico de 100 mL e
complete o volume com soluo de cloreto de sdio a 7%.
Doseamento Transfira 100 mL do leite para um bquer de 200 mL. Aquea em banhomaria termostatizado a 35C. A temperatura do banho dever ser rigorosamente controlada. Adicione 1 mL da amostra, previamente preparada, e marque com cronmetro o
tempo exato em que o coalho foi adicionado ao leite. Mantenha o leite em constante agitao, sem retir-lo do banho-maria, at que apaream pequenos flocos de leite coagulado
na parede interna do bquer. Verifique o tempo gasto, para efeito de clculo.
Clculo
V = volume de leite usado na prova x 10 (no caso de coalho lquido) ou x 100 (no caso
de coalho em p)
t = tempo, em segundos, gasto para coagular o volume de 100 mL de leite
IAL - 863
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 229-230.
Manteiga
Manteiga o produto gorduroso obtido do creme pasteurizado derivado exclusivamente do leite de vaca, com ou sem modificao biolgica. O principal componente da
manteiga a gordura do leite, sendo a parte no gordurosa constituda de gua, traos de
protena, lactose e sais minerais. Pode ser adicionado de sal e corantes naturais. As anlises
usuais incluem as determinaes de acidez em soluo normal, substncias volteis, gordura, extrato seco desengordurado, acidez na gordura, cloretos (028/IV), corantes (051/
IV), ndice de refrao absoluto a 40C, ndice de iodo, ndice de saponificao e reao
de Kreis (333/IV).
471/IV Manteiga Determinao da acidez em soluo normal
Material
Balana analitica, bqueres de 250 mL, esptula, termmetro, banho-maria, funil de vidro, papel de filtro e frasco Erlenmyer de 125 mL.
Procedimento Retire partes representativas da amostra (superfcie, centro e lados).
Misture totalmente com uma esptula.Transfira para um bquer, aproximadamente 50 g
da amostra e aquea at fuso em banho-maria a (40-45)C. Separe a camada gordurosa e
filtre para um bquer. Pese aproximadamente 2 g da amostra filtrada e proceda conforme
o mtodo 325/IV e clculo conforme mtodo 481/IV.
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
235.
472/IV Manteiga Determinao de substncias volteis
864 - IAL
N = n g de insolveis
P = n g da amostra
Referncia Bibliogrfica
BRASIL. Ministrio da Agricultura. Secretria Nacional de Defesa Agropecuria. Laboratrio Nacional de Referncia Animal. Mtodos analticos oficiais para controle de
produtos de origem animal e seus ingredientes. II-mtodos fsicos e qumicos. Braslia
(DF), 1981, XXI p. 1-3.
474/IV Manteiga Determinao de gordura
Procedimento Determine as substncias volteis conforme o mtodo 472/IV e os insolveis em ter conforme 473/IV e calcule o valor da gordura.
Clculo
100 - (P + N) = gordura por cento m/m
P = substncias volteis por cento m/m
N = insolveis em ter por cento m/m
Referncia Bibliogrfica
BRASIL. Ministrio da Agricultura. Secretria Nacional de Defesa Agropecuria. Laboratrio Nacional de Referncia Animal. Mtodos analticos oficiais para controle de
produtos de origem animal e seus ingredientes. II-mtodos fsicos e qumicos. Braslia
(DF), 1981, XXI p. 1-3.
866 - IAL
Referncia bibliogrfica
BRASIL. Ministrio da Agricultura. Secretria Nacional de Defesa Agropecuria. Laboratrio Nacional de Referncia Animal. Mtodos analticos oficiais para controle de
produtos de origem animal e seus ingredientes. II-mtodos fsicos e qumicos. Braslia
(DF), 1981, XVI p. 5-6.
483/IV Doce de leite Determinao de substncias volteis
Material
Balana analtica, esptula, cpsula de porcelana, basto de vidro, areia purificada, banhomaria, estufa, dessecador com slica-gel e pina de metal.
Procedimento Pese, em uma cpsula de porcelana, aproximadamente 10 g de areia
purificada e dois bastes de vidro apoiados na borda do recipiente. Seque em estufa
a (103 2)C, por 2 horas, resfrie em dessecador e pese. Pese aproximadamente 3 g da
amostra, misture com auxlio dos bastes de vidro. Seque em estufa a (103 2)C, por 3
horas, resfrie em dessecador e pese. Retorne estufa por 30 minutos, resfrie em dessecador e pese. Repita as operaes de aquecimento e resfriamento at peso constante.
Clculo
N = n de g de substncias volteis
P = n de g da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985, p. 22.
484/IV Doce de leite Determinao de substncias volteis em estufa a vcuo
Material
Balana analtica, esptula, cpsula de porcelana, bastes de vidro, areia purificada, banho-maria, estufa a vcuo, dessecador com slica-gel e pina de metal.
870 - IAL
N = n de g de substncias volteis
P = n de g da amostra
Referncias bibliogrficas
BRASIL. Ministrio da Agricultura. Secretria Nacional de Defesa Agropecuria. Laboratrio Nacional de Referncia Animal. Mtodos analticos oficiais para controle de
produtos de origem animal e seus ingredientes. II-mtodos fsicos e qumicos. Braslia
(DF), 1981, XVI p. 1.
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985, p. 22.
485/IV Doce de leite - Determinao de resduo por incinerao (cinzas)
Material
Balana analtica, cpsula de porcelana, esptula, chapa eltrica, capela de exausto, mufla, dessecador com slica-gel e pina de metal.
Procedimento Pese aproximadamente 3 g da amostra em cpsula de porcelana, previamente aquecida em mufla a (520 10)C por 1 hora, resfrie em dessecador e pese. Calcine
em chapa aquecedora na capela at completa carbonizao ou eliminao de toda fumaa.
Leve para mufla na temperatura de (550 10)C pelo perodo aproximado de 4 horas. As
cinzas devero ficar brancas ou ligeiramente acinzentadas, caso contrrio, resfrie, adicione
0,5 mL de gua, seque em banho-maria e incinere novamente. Resfrie em dessecador e
pese. Repita as operaes de aquecimento e resfriamento at peso constante.
IAL - 871
Clculo
N = n de g do resduo
P = n de g da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985, p. 27.
486/IV Doce de leite Determinao de gordura
A gordura determinada gravimetricamente, aps a desnaturao das protenas e
carboidratos, utilizando cido clordrico sob aquecimento. O resduo contendo a gordura
separado por filtrao, seco e extrado com ter de petrleo.
Material
Balana analtica, esptula, bqueres de 100, 600 e 1000 mL, estufa, chapa aquecedora,
basto de vidro, prolas de vidro ou cacos de porcelana, provetas de 100 mL, vidro de
relgio, frasco Erlenmeyer de 500 mL, funil de vidro, papel de filtro, fita indicadora de
pH de (0 - 14), balo de fundo chato com boca esmerilhada de 300 mL, aparelho extrator
de Soxhlet, pina de metal, dessecador com slica-gel e capela de exausto.
Reagentes
cido clordrico
ter de petrleo (30 - 60)C
Soluo de nitrato de prata 0,1 M
Procedimento Pese de 5 a 10 g da amostra, em bquer de 100 mL. Transfira para um
bquer de 600 mL usando 100 mL de gua, se necessrio, utilize gua temperatura
entre (30 - 40)C, misture com um basto de vidro. Adicione 60 mL de cido clordrico,
algumas prolas de vidro ou cacos de porcelana e tampe o bquer com um vidro de relgio. Aquea o conjunto em chapa aquecedora at a fervura, mantenha fervura durante
872 - IAL
N = n de g de gordura
P = n de gramas da amostra
Nota: a determinao de gordura poder ser efetuada tambm conforme o mtodo 412/IV.
Referncia bibliogrfica
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS. Official methods of
analysis of the Association Official Analytical Chemists. v. 2, (method 963.15). 16th
ed. Arlington: A.O.A.C., chapter 31, 1995. p. 10.
487/IV Doce de leite - Determinao de protdios
Procedimento Pese de 1 a 2 g da amostra, usando papel de seda e proceda conforme
mtodo 036/IV ou 037/IV.
488/IV Doce de leite Determinao de glicdios redutores em lactose
Material
Balana analtica, chapa aquecedora, bquer de 200 mL, balo volumtrico de 100 mL,
IAL - 873
frasco Erlenmeyer de 300 mL, funil de vidro, papel de filtro, balo de fundo chato de
300 mL, pipetas graduadas de 2 mL, pipetas volumtricas de 10 mL, bureta de 25 mL,
esptula, basto de vidro e garra de madeira.
Reagentes
Soluo de sulfato de zinco a 30% m/v
Soluo de ferrocianeto de potssio a 15% m/v
Solues de Fehling tituladas (Apndice I)
Procedimento Pese aproximadamente 2 g da amostra em bquer de 100 mL. Transfira quantitativamente com auxlio de 50 mL de gua e um basto de vidro para um
balo volumtrico de 100 mL. Adicione 2 mL da soluo de sulfato de zinco a 30%,
misture, adicione 2 mL da soluo de ferrocianeto de potssio a 15% e misture. Deixe
sedimentar, durante 5 minutos, complete o volume do balo com gua e agite. Filtre
em papel de filtro para um frasco Erlenmeyer de 300 mL, o filtrado dever estar lmpido. Em balo de fundo chato de 300 mL, adicione 10 mL de cada uma das solues
de Fehling, 40 mL de gua e aquea at ebulio. Transfira o filtrado para uma bureta
de 25 mL e adicione, s gotas, sobre a soluo do balo em ebulio, agitando sempre,
at que esta soluo passe de azul a incolor (no fundo do balo dever ficar um resduo
vermelho-tijolo).
Clculo
A = n de mL de P g da amostra
V = n de mL da soluo da amostra gasto na titulao
P = n de g da amostra
Referncia bibliogrfica
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p.
205-206.
489/IV Doce de leite Determinao de glicdios no redutores em sacarose
Material
874 - IAL
Balana analtica, chapa aquecedora, banho-maria, bquer de 100 mL, balo volumtrico de 250 mL, frascos Erlenmeyer de 300 e 500 mL, balo de fundo chato de 300 mL,
funil de vidro, papel de filtro, fita indicadora de pH (0 -14), bureta de 25 mL, pipetas
volumtricas de 10 mL, pipetas graduadas de 2 e 5 mL, basto de vidro, esptula e garra
de madeira.
Reagentes
cido clordrico
Soluo de hidrxido de sdio a 30% m/v
Soluo de sulfato de zinco a 30% m/v
Soluo de ferrocianeto de potssio a 15% m/v
Solues de Fehling tituladas (Apndice I)
Procedimento Pese aproximadamente 5 g da amostra em bquer de 100 mL. Transfira
quantitativamente com auxlio de 100 mL de gua e um basto de vidro para um frasco
Erlenmeyer de 250 mL. Acidule com 2 mL de cido clordrico, aquea em banho-maria
fervente por 15 minutos e resfrie. Neutralize com soluo de hidrxido de sdio a 30%,
verifique utilizando fita indicadora de pH (0-14). Transfira para um balo volumtrico de
250 mL. Adicione 5 mL da soluo de sulfato de zinco a 30% e misture. Adicione 5 mL
da soluo de ferrocianeto de potssio a 15% e misture. Deixe sedimentar, durante
5 minutos, complete o volume do balo com gua, agite. Filtre em papel de filtro para
um frasco Erlenmeyer de 300 mL, o filtrado dever estar lmpido. Em balo de fundo
chato de 300 mL adicione 10 mL de cada uma das solues de Fehling, 40 mL de gua
e aquea at ebulio. Transfira o filtrado para uma bureta de 25 mL e adicione, s gotas,
sobre a soluo do balo em ebulio, agitando sempre, at que esta soluo passe de azul
a incolor (no fundo do balo dever ficar um resduo vermelho tijolo).
Clculo
A = n de mL da soluo de P g da amostra
V = n de mL da soluo da amostra gastos na titulao
P = n g da amostra
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1: MIAL - 875
todos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 50-51.
BRASIL. Leis, Decretos, etc. Instruo Normativa N 22, de 14/04/03, do Ministrio
da Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Secretaria de Defesa Agropecuria. Dirio
Oficial, Brasilia, 02/05/03, p. 15.
490/IV Doce de leite Determinao de glicdios no redutores em amido
Material
Balana analtica, chapa aquecedora, capela de exausto, banho-maria, aparelho aquecedor com acoplamento de condensador para refluxo tipo Sebelin, bquer de 600 mL, balo volumtrico de 500 mL, frasco Erlenmeyer de 500 mL, frasco Erlenmeyer com boca
esmerilhada 24/40 de 500 mL, balo de fundo chato de 300 mL, proveta de 200 mL,
funil de vidro, papel de filtro , fita indicadora de pH (0-14), bureta de 25 mL, pipetas
volumtricas de 5 mL, basto de vidro, vidro de relgio, pipetas graduadas de 10 e 20 mL,
esptula e garra de madeira.
Reagentes
ter
lcool a 70%
lcool
cido clordrico
Soluo de hidrxido de sdio a 30% m/v
Soluo de sulfato de zinco a 30% m/v
Soluo de ferrocianeto de potssio a 15% m/v
Solues de Fehling tituladas (Apndice I)
Procedimento Pese aproximadamente 20 g da amostra em um bquer de 150 mL.
Desengordure a amostra tratando sucessivamente com 5 pores de 20 mL de ter, misture
com basto de vidro, deixe decantar e despreze as camadas etreas. Transfira o material
desengordurado para um bquer de 600 mL, com auxlio de 5 pores de 40 mL de
lcool a 70%. Misture vigorosamente com movimentos rotatrios. Coloque um vidro de
relgio sobre o bquer. Aquea em banho-maria a (85-87)C por 1 hora, resfrie, adicione
150 mL de lcool e misture. Cubra com vidro de relgio e deixe decantar por 12 horas,
(caso no decante, use centrifugao por 15 minutos a 1500 rpm). Aps decantar, despreze o
sobrenadante cuidadosamente. Filtre em papel de filtro seco para um frasco Erlenmeyer de
500 mL, lavando com 5 pores de 60 mL de lcool a 70%. Retire o funil de vidro com o
papel de filtro contendo o resduo e transfira para outro frasco Erlenmeyer de 500 mL com
876 - IAL
boca esmerilhada 24/40; com um basto de vidro, fure com cuidado, o centro do papel
de filtro, lavando com gua e recolha no frasco Erlenmeyer. Acidule com 10 mL de cido
clordrico e misture. Aquea na chapa do aparelho tipo Sebelin, com acoplamento para
refluxo, durante 3 horas e meia e resfrie. Neutralize com soluo de hidrxido de sdio a 30%,
verifique utilizando fita indicadora de pH (0-14). Transfira para um balo volumtrico de 500
mL com auxlio de gua, lavando bem o frasco Erlenmeyer. Adicione 20 mL da soluo de
sulfato de zinco a 30% e misture, adicione 20 mL da soluo de ferrocianeto de potssio a
15% e misture. Deixe sedimentar, durante 5 minutos, complete o volume do balo com
gua e agite. Filtre em papel de filtro para um frasco Erlenmeyer de 500 mL; o filtrado
dever estar lmpido. Em balo de fundo chato de 300 mL, adicione 5 mL de cada uma
das solues de Fehling, 40 mL de gua e aquea at ebulio. Transfira o filtrado para
uma bureta de 25 mL e adicione, s gotas, sobre a soluo do balo em ebulio, agitando
sempre, at que esta soluo passe de azul a incolor (no fundo do balo dever ficar um
resduo vermelho-tijolo).
Clculo
A = n de mL da soluo de P g da amostra
V = n de mL da soluo da amostra gastos na titulao
P = n de g da amostra
0,90 = fator de transformao de hexoses para amido.
Referncias bibliogrficas
INSTITUTO ADOLFO LUTZ. Normas Analticas do Instituto Adolfo Lutz. v. 1:
Mtodos qumicos e fsicos para anlise de alimentos, 3. ed. So Paulo: IMESP, 1985. p. 51
e 53-54.
BRASIL. Leis, Decretos, etc. Instruo Normativa n 22, de 14/04/03, do Ministrio da
Agricultura, Pecuria e Abastecimento. Secretaria de Defesa Agropecuria. Dirio Oficial,
Brasilia, 02/05/03, p. 15.
491/IV Doce de leite Cromatografia de acares
Procedimento Proceda conforme o mtodo 461/IV.
Leite condensado
Entende-se por leite condensado ou leite condensado com acar, o produto resultante da desidratao em condies prprias do leite adicionado de acar. As principais
determinaes realizadas para estes alimentos so: acidez em soluo normal (481/IV),
IAL - 877
acidez em cido lctico (482/IV), substncias volteis (483/IV) ou (484/IV), resduo por
incinerao (485/IV), gordura (486/IV), protdios (487/IV), glicdios redutores em lactose (488/IV), glicdios no redutores em sacarose (489/IV) e cromatografia de acares
(491/IV).
Leites fermentados
So os produtos resultantes da fermentao do leite por fermentos lcticos prprios.
Os fermentos lcticos devem ser viveis, ativos e abundantes no produto final durante seu
prazo de validade. Poder ser adicionado ou no de outros produtos lcteos, bem como
de outras substncias alimentcias recomendados pela tecnologia e que no interfiram no
processo de fermentao do leite pelos fermentos lcticos empregados. So exemplos de
leites fermentados: iogurte, leite acidfilo, kefir, kumys e coalhada.
Procedimento Retire parte representativa da amostra quando for lquida. Quando for
cremosa ou pastosa, retire partes da superfcie, centro e lados. Misture totalmente com
uma esptula ou basto de vidro. No caso de produtos com adies de frutas e/ou cereais
e/ou outro ingrediente, triture em gral, moinho e/ou homogeneze em liqidificador.
Conserve em frasco bem fechado. A amostra dever ser analisada preferencialmente logo
aps o recebimento, se no for possvel, conserve-a em refrigerador. As principais determinaes fsico-qumicas realizadas so: pH, acidez em cido lctico, substncias volteis,
extrato seco total, resduo por incinerao (cinzas), gordura, protdios, glicdios redutores
em lactose, glicdios no redutores em sacarose e corantes.
492/IV Leites fermentados Determinao do pH
Procedimento Proceda conforme mtodo 017/IV.
493/IV Leites fermentados Determinao da acidez em cido lctico
Material
Balana analtica, potencimetro, agitador magntico, bquer de 50 mL, bureta de 25 mL,
pipeta graduada de 10 mL, basto de vidro e esptula.
Reagentes
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 M
Soluo de fenolftalena a 1%
878 - IAL
880 - IAL
Bebida Lctea
Entende-se por bebida lctea o produto obtido a partir de leite ou leite reconstitudo e/ou derivados de leite, reconstitudos ou no, fermentado ou no, com ou sem adio
de outros ingredientes, onde a base lctea represente pelo menos 51% m/m do total de
ingredientes do produto. As determinaes so as mesmas do leite fermentado.
Creme de Leite
Entende-se por creme de leite o produto lcteo relativamente rico em gordura retirado do leite por procedimento tecnolgico adequado, que se apresenta na forma de uma
emulso de gordura e gua. denominado creme de leite ou simplesmente creme,
podendo indicar-se o contedo de gordura apresentado. Pode passar por processo de pasteurizao, esterilizao ou ultra-alta temperatura (UAT). As principais determinaes
so: substncias volteis (483/IV ou 484/IV), resduo por incinerao (475/IV), gorduras totais (466/IV), protdios (467/IV), glicdios redutores em lactose (488/IV) e reao
de Kreis (279/IV).
501/IV Creme de leite Determinao da acidez em cido lctico
Procedimento Pese aproximadamente 10 g da amostra, adicione 50 mL de gua e proceda conforme mtodo 453/IV.
Colaborao:
Jacira Hiroko Saruwtari, Maria Auxiliadora de Brito Rodas e Marilda Duarte
IAL - 881
CAPTULO
XXVIII
CONDIMENTOS E
VINAGRES
IAL - 883
884 - IAL
XXVIII
Captulo XXVIII - Condimentos e Vinagres
CONDIMENTOS E VINAGRES
sto includos neste captulo os mtodos de anlise para especiarias ou condimentos vegetais simples, condimentos preparados e vinagres.
Condimentos vegetais
Estes produtos compreendem certas plantas ou parte delas, contendo substncias
aromticas, spidas, com ou sem valor nutritivo, empregados nos alimentos para modificar o seu sabor.
Neste tipo de produto importante a identificao da espcie e a verificao de
adulteraes. Entre os tipos de adulterao, os mais encontrados so: a adio de partes
da planta de origem que no possuem as qualidades essenciais do condimento e a adio
de condimentos e elementos estranhos modos, principalmente quando o condimento
apresentado sob a forma de p. Estes elementos adulterantes podem ser identificados
pelo exame microscpico e a sua interferncia nas caractersticas qumicas por parmetros
qumicos de qualidade, conforme estabelecidos em regulamento tcnico especfico.
A anlise qumica destes produtos consiste nas determinaes, entre outras, de substncias volteis (012/IV), cinzas (018/IV), cinzas insolveis em cido clordrico a 10%
(024/IV), extrato etreo (032/IV), extrato alcolico (035/IV) e teor de leos essenciais.
A anlise microbiolgica tambm relevante no caso desses produtos, tendo em
vista os procedimentos durante a colheita e ps-colheita a que esto sujeitos.
IAL - 885
Condimentos Preparados
Nesta categoria, incluem-se vrios produtos obtidos pela simples mistura de condimentos naturais ou elaborados, com ou sem adio de outras substncias alimentcias, e
apresentadas sob forma de ps, pastas, molhos, em emulso ou suspenso. So exemplos:
catchup, curry, mostarda preparada, maionese, molho ingls, molho shoyu, temperos
prontos base de alho e sal, entre outros.
A anlise destes produtos inclui, entre outras: as determinaes de substncias volteis (012/IV), glicdios redutores, em glicose (038/IV), glicdios no-redutores, em sacarose (039/IV), amido (043/IV), cinzas (018/IV), extrato etreo (032/IV), cloretos em
cloreto de sdio (028/IV ou 029/IV), corantes artificiais (051/IV) e acidez (016/IV),
dependendo da composio do produto.
Nota: no caso de condimentos com alto teor de cloreto de sdio, o extrato etreo dever
ser efetuado com ter anidro.
Tanto para condimentos simples como para os preparados, as determinaes de
substncias volteis, cinzas, lipdios, protdios, fibra alimentar, carboidratos por diferena
e sdio so relevantes para fins de informao nutricional. Nesse sentido, a determinao
de gorduras saturadas se faz necessria no caso de condimentos preparados contendo leo
ou gordura na sua composio, bem como acidez, para o clculo do valor calrico, principalmente quando o condimento preparado contiver vinagre.
Mostarda preparada Na anlise deste produto, alm das determinaes usuais citadas em condimentos preparados, faz-se tambm a determinao de isotiocianato de alila.
502/IV Condimentos Determinao de isotiocianato de alila em mostarda preparada
O isotiocianato de alila, composto responsvel pelo odor e sabor pungente da mostarda, o principal componente, em porcentagem, do leo essencial desta especiaria.
Material
Frasco Erlenmeyer com boca esmerilhada de 250 mL, proveta de 100 mL, bales volumtricos de (50 e 100) mL, buretas de 25 mL e aparelhagem de vidro para a destilao
simples.
Reagentes
Soluo de hidrxido de amnio a 10% m/v
Soluo de nitrato de prata 0,1 M
cido ntrico
Soluo de tiocianato de amnio 0,1 M
886 - IAL
Clculo
Material
Pipeta de 10 mL, frasco Erlenmeyer de 250 mL, bquer de 250 mL, bureta de 25 mL,
pHmetro, agitador magntico e barra magntica.
Reagentes
Soluo de fenolftalena
Soluo de hidrxido de sdio 1 M
Procedimento Pipete 10 mL de amostra num frasco Erlenmeyer de 250 mL e proceda
como no mtodo 235/IV. Titule com soluo de hidrxido de sdio 1 M, em presena
da soluo de fenolftalena ou transfira a amostra para um bquer e titule com soluo de
hidrxido de sdio, utilizando o pHmetro para atingir o ponto final de viragem, principalmente para amostras escuras.
Clculo
890 - IAL
Reagentes
Soluo de fenolftalena
Soluo de hidrxido de sdio 1 M
Procedimento Transfira 10 mL de amostra para o aparelho gerador de vapor e destile
como descrito no mtodo 236/IV. Recolha no mnimo 100 mL do destilado. Titule
rapidamente com soluo de hidrxido de sdio 1 M, at colorao rsea persistente por
30 segundos, utilizando a soluo de fenolftalena.
Clculo
A acidez voltil expressa em gramas de cido actico por 100 mL da amostra como
descrito no mtodo 236/IV.
Nota: a acidez fixa pode ser calculada como a diferena entra a acidez total e a voltil obtida por este mtodo, podendo ser obtida tambm aps a evaporao da amostra.
506/IV Acidez fixa em vinagres e fermentados acticos pelo mtodo volumtrico
A acidez fixa determinada no resduo aps a evaporao da amostra, por titulao
com hidrxido de sdio e pode ser expressa em gramas de cido actico por 100 mL.
Material
Pipetas de (10 e 20) mL, cpsula de porcelana, frasco Erlenmeyer de 250 mL, bureta de
25 mL e banho-maria.
Reagentes
Soluo de fenolftalena
Soluo de hidrxido de sdio 0,1 M
Procedimento Pipete (10 ou 20) mL da amostra em uma cpsula de porcelana e evapore o lquido lentamente em banho-maria fervente at secura. Transfira com gua para
um frasco Erlenmeyer e titule com soluo de hidrxido de sdio 0,1 M. Calcule o teor
de acidez fixa e expresse o resultado em gramas de cido actico por 100 mL.
Nota: a acidez voltil pode ser calculada como a diferena entre a acidez total e a acidez
fixa obtida por este mtodo.
IAL - 891
Colaboradores
Letcia Arajo Farah Nagato e Regina Sorrentino Minazzi Rodrigues
IAL - 893
CAPTULO
XXIX
SEGURANA EM
LABORATRIOS DE
QUMICA
IAL - 895
896 - IAL
XXIX
Captulo XXIX - Segurana em Laboratrios de Qumica
Introduo
necessrio que os analistas e auxiliares tenham conhecimentos bem fundamentados sobre a natureza dos reagentes qumicos envolvidos no trabalho, dos riscos
de manipulao e as formas seguras de lidar com eles. Da mesma forma, devem ter conhecimento dos riscos das instalaes, aparelhos e utenslios necessrios s suas funes,
bem como de sua utilizao correta e segura. Os profissionais devem ser conscientizados e capacitados a tomar providncias corretas em caso de acidentes.
Para que o trabalho em um laboratrio seja seguro, vrios fatores devem coexistir: instalaes bem planejadas,manuteno rigorosa, quantidades necessrias de equipamentos de segurana, tanto individuais como coletivos e treinamentos para situaes
de rotina e de emergncia. Ao se pensar em riscos em um laboratrio de qumica,
comum associ-los aos reagentes que podem estar presentes, mas tambm devem ser
avaliados aqueles causados por eletricidade, calor, materiais cortantes, agentes biolgicos, radiaes, poeiras, fumos, nvoas, fumaas, gases, vapores, rudos e riscos ergonmicos. Deve existir uma sinalizao alertando sobre todos os riscos existentes. Tambm
necessrio destacar que, alm da segurana interna do laboratrio, devem ser observadas as questes ambientais como um todo, evitando descartes irregulares de resduos
poluentes e txicos.
IAL - 897
No cabe, dentro dos propsitos deste livro, inserir um manual completo de segurana em laboratrios; existem publicaes, tanto em meio fsico quanto eletrnico,
que podem nortear a montagem de um sistema de segurana adequado a este campo de
trabalho e s particularidades de cada laboratrio. Mas importante lembrar sobre esta
necessidade e fornecer alguns dos elementos ou critrios que devem ser observados.
possvel fazer uma associao entre um Sistema da Qualidade e um Sistema de
Segurana. Assim, os mtodos analticos descritos neste livro podem ser transformados
em Procedimentos Operacionais Padro - POPs, em cada laboratrio em que forem
adotados. Estes procedimentos so usualmente escritos com mais detalhes, destacando cada passo do processo analtico e, de acordo com as normas da qualidade, devem
ser rigorosamente seguidos. Estes POPs podem incluir caractersticas toxicolgicas dos
reagentes envolvidos no mtodo, os cuidados para sua manipulao e outras questes
relativas segurana.
Tambm adequado que os laboratrios elaborem ou adotem manuais de segurana que incluam todas as questes no especficas de cada metodologia. Em instituies de grande porte, conveniente que exista alguma forma de organizao interna
que avalie constantemente a situao da segurana nos diversos laboratrios, como
uma CIPA (Comisso Interna para Preveno de Acidentes) ou um Ncleo, Comit ou
Comisso de Biossegurana. Esta organizao interna tambm deve executar inspees,
tendo em vista que nem sempre situaes de risco so bem detectadas pelas pessoas
que trabalham no local. O trabalho desta organizao interna deve, ainda, propor de
solues para os problemas existentes.
Algumas regras de segurana
A seguir esto enumeradas algumas regras gerais de segurana, s quais devem ser
adicionadas aquelas necessrias a cada laboratrio, de acordo com seu trabalho:
1. Ao manipular um reagente pela primeira vez, informar-se sobre a toxicidade e
outros riscos que envolvam essa manipulao, consultando tabelas que existam
na seo, rtulos, fichas de informaes sobre produtos qumicos e/ou literatura
especializada.
2. Trabalhar sempre sob cabine de segurana qumica (capela), que um sistema de
proteo coletiva, ao realizar operaes com produtos volteis, ao trabalhar com
substncias de composio desconhecida e ou quando haja a possibilidade de formao de poeiras, nvoas ou fumaa.
898 - IAL
3. Usar mscaras de proteo respiratria quando no for possvel trabalhar com equipamento de proteo coletiva; neste caso, as mscaras devem ser adaptadas ao rosto
do laboratorista e providas de filtro adequado ao risco.
4. Usar culos de proteo e luvas, bem como outros equipamentos de proteo individual (E.P.I.) sempre que necessrios. Verificar, para cada tipo de substncia, o
tipo de luva a ser usado luvas de procedimentos (ltex) so inadequadas para o
trabalho com substncias qumicas.
5. Usar o avental constantemente no trabalho, mas no recomendvel permanecer
com ele fora do laboratrio, especialmente durante as refeies. O avental indicado o de algodo, grosso, com abertura frontal, preferencialmente com fecho de
velcro, mangas compridas com punhos fechados tambm com velcro, sem bolsos
na parte inferior e sem detalhes soltos que possam enroscar.
6. Evitar testar amostras por odor, mas quando isto for imprescindvel, no coloc-las
diretamente sob o nariz.
7. Nunca pipetar com a boca, nem mesmo gua; usar aparelhos apropriados.
8. Rotular, identificando e datando, todos os frascos de soluo ou reagentes que
preparar.
9. Tomar cuidados redobrados ao manipular substncias qumicas contidas em frascos sem identificao.
10. No caso de reaes das quais no se saiba totalmente o resultado, fazer uma experincia prvia, em pequena escala, na cabine de segurana qumica (capela).
11. Ao promover reaes ou aquecimentos de materiais em tubo de ensaio, nunca dirigir a abertura deste contra si ou outro colega; dirigi-la para dentro da cabine de
segurana qumica.
12. Para diluir um cido, adicionar o cido gua, nunca o contrrio.
13. Nunca deixar sem ateno qualquer operao onde haja aquecimento ou possibilidade de reao violenta (e usar a capela).
14. Informar-se sobre a localizao e maneira correta de utilizar equipamentos contra
IAL - 899
900 - IAL
conhecidas previamente. O projeto da cabine de segurana e os seus acessrios precisam ser adequados aos trabalhos que sero realizados. Existem especificidades que
diferenciam uma cabine de segurana qumica para solventes de outra para agentes
corrosivos, como cidos, por exemplo. Se no laboratrio forem realizados trabalhos
com materiais biolgicos (ou que representem risco de contaminao biolgica),
devero existir tambm cabines de segurana de fluxo laminar. A construo, instalao e manuteno das cabines de segurana devem ser confiadas a empresas competentes e idneas, que assegurem a qualidade do material adquirido e do servio
prestado. A sua manuteno deve ser peridica e rigorosa.
Um dos fatores de risco presentes em laboratrios o rudo, proporcionado
por cabines de segurana, sistemas de exausto ou ventilao, centrfugas e outros aparelhos que proporcionam uma carga (que em geral vai aumentando com o
tempo, pelo envelhecimento dos equipamentos) de rudo contnuo e fatigante. Ao
contrrio do calor, difcil isolar reas especficas para o rudo. Tanto as empresas
fornecedoras desses materiais como tcnicos em segurana do trabalho devem ser
consultados para diminuir esse fator de risco ao menor nvel possvel.
Adequar o sistema de esgotos ao tipo de laboratrio instalado, quanto ao seu
dimensionamento e ao tipo de material utilizado na sua construo. No descartar
por esse meio solventes, substncias txicas ou agressivas ao meio ambiente; neutralizar cidos e bases previamente ou, no mnimo, deix-los bem diludos antes
do descarte. Os encanamentos nas sadas de pias e cabine de segurana qumica e
ralos devem ter sifes para evitar o retorno de eventuais gases txicos presentes no
esgoto.
Colocar estrategicamente e em quantidade suficiente os equipamentos de
segurana (extintores, alarmes, chuveiro com lava-olhos). Os chuveiros com lavaolhos, por exemplo, posicionados junto s reas com maior risco, devem ser testados periodicamente, de acordo com as recomendaes do fabricante.
Planejar o sistema de combate a incndios de acordo com a estrutura e natureza de trabalho do laboratrio. Lembrar que h vrios tipos de extintores para
diferentes origens e meios de propagao para o fogo (em geral, so mais usados
em laboratrios os extintores de gs carbnico e os de p qumico seco) e diferentes
sistemas fixos de combate ao fogo, como hidrantes e esguichos de teto que disparam com a presena de calor. O uso de mangueiras requer treinamento especfico e
pode haver restries gua como forma de combate a incndios em laboratrios.
Portanto, conveniente consultar empresas especializadas e o Corpo de Bombeiros
e, a partir de seus relatrios e recomendaes, quanto ao tipo de instrumentos, suas
quantidades e o posicionamento no laboratrio e no prdio, planejar a montagem
do sistema contra fogo, efetuar os treinamentos necessrios e fazer um cronograma
de manuteno. A presena de todos os dispositivos de combate a incndio deve
ser bem sinalizada e o acesso a eles deve estar permanentemente desimpedido. Na
906 - IAL
IAL - 907
cido Crmico
cido Fluordrico
cido Ntrico
cido Oxlico
cido Perclrico
cido Sulfrico
Amnia anidra
Anilina
Bromo
Carvo ativo
Cianetos
Cloratos
Cloro
Cobre
Dixido de cloro
Fluor
Hidrocarbonetos em geral
Iodo
Lquidos inflamveis
Mercrio
Metais alcalinos e alcalinoterrosos
Nitrato de amnio
Manter
908 - IAL
Nitreto de sdio
Oxignio
Pentxido de fsforo
Permanganatos
Perxido de hidrognio
Perxido de sdio
Potssio metlico
Prata
Sdio metlico
Sulfeto de Hidrognio
Muitos produtos qumicos reagem com gua de forma violenta, gerando grande
quantidade de calor. Assim, se gua for adicionada ao cido sulfrico concentrado, o calor gerado ser muito intenso, provocando o arremesso de gua quente e cido sulfrico
ainda concentrado (e tambm quente), podendo produzir graves queimaduras pela ao
do calor e do poder corrosivo do cido. Por causa disto, h a regra segundo a qual o cido
deve ser adicionado gua e nunca o contrrio. A operao deve ser conduzida de forma
cuidadosa; a massa maior de gua absorve parte do calor gerado. Espera-se pelo resfriamento adequado para continuar a operao, vagarosamente. Em certos casos, podem ser
usados banhos de gelo para haver resfriamento mais rpido, mas tambm necessrio
cautela, para no haver rompimento do vidro pela variao rpida de temperatura.
Determinados elementos no estado metlico como sdio, potssio, clcio ou magnsio (quando aquecido) tambm reagem violentamente com a gua, provocando grande
desprendimento de calor e fascas. Os produtos dessas reaes so bases fortes, que so
corrosivas.
Outros produtos qumicos reagem com a gua produzindo compostos de toxicidade varivel, muitas vezes na forma de vapor. preciso ateno, quanto presena
de gua, para o armazenamento, uso e descarte destes produtos, entre os quais esto os
silanos (metildiclorossilano, triclorossilano etc.), fosfetos (de sdio, alumnio etc.), hipocloritos secos (de ltio, sdio, clcio etc), cianetos (de sdio, potssio etc.), brometo
de acetila, cloreto de acetila, brometo de alumnio anidro, cloreto de alumnio anidro,
pentafluoreto de alumnio, oxicloreto de cromo, cido fluorsulfnico, pentacloreto de
fsforo, tetracloreto de silcio, cloreto de tionila, iodeto de acetila, magnesiodiamida,
soluo sulfontrica (cido sulfrico + cido ntrico), pentafluoreto de iodo, nitreto
de ltio. Podem ser formados compostos como cloreto de hidrognio, cloro, fosfina,
cianeto de hidrognio, brometo de hidrognio, fluoreto de hidrognio, iodeto de hidrognio, dixido de enxofre, amnia e dixido de nitrognio.
necessrio tambm lembrar que a gua boa condutora de eletricidade. Assim,
num princpio de incndio em que estejam envolvidos aparelhos eltricos ou existam
tomadas prximas, no conveniente fazer uso da gua. Outra situao de risco no uso
da gua em caso de incndio representado pela sua utilizao para apagar fogo envolvendo um solvente orgnico, imiscvel com eles. A gua mais densa que a maioria
dos solventes orgnicos e, se usada de forma inadequada, pode espalhar o solvente e as
chamas, dificultando o combate ao incndio.
Derramamento de produtos qumicos
Em acidentes desse tipo, alm dos riscos de natureza fsica, envolvendo o peso
do recipiente, material de fabricao e estilhaos com risco de cortes, h os de natureza
qumica do produto espalhado no ambiente, ou seja, se esse produto corrosivo, inflamvel, txico, voltil, ou com outras caractersticas de risco. Existem materiais absor910 - IAL
ventes disponveis no mercado especficos para esse fim e que devem estar disponveis
no laboratrio. Na sua ausncia, cidos e compostos qumicos corrosivos podem ser
tratados com bicarbonato de sdio ou soda custica, aps prvia adio cuidadosa de
gua (diluio). Solues alcalinas podem ser diludas e neutralizadas com cidos fracos. Se o material for inflamvel, as chamas existentes (em bicos de Bnsen etc) devem
ser extintas imediatamente, deve ser fechada a vlvula de gs para a sala e desligados os
aparelhos eltricos que possam ser fonte de fascas. Caso existam vapores txicos, evacuar a sala. Providenciar a ventilao da sala. A retirada do material deve ser feita com
o uso de E.P.Is. Se necessrio, acionar os bombeiros.
Cilindros de gs
Em diversos laboratrios necessrio o uso de gases sob presso (hidrognio, acetileno, nitrognio, hlio, entre outros). O fornecimento deve ser feito por uma empresa
idnea e que oferea assistncia quanto a questes de uso e manuteno. Os cilindros
devem ser fornecidos com o nome e a cor caracterstica de cada gs, capacete de proteo do cilindro, dados de pureza, simbologia de risco e nmero da ONU.
O ideal que exista, fora do prdio, uma central de gases, qual os laboratrios
estejam ligados por meio de tubulaes apropriadas, evitando a utilizao de cilindros
no interior do prdio. Tanto para a construo da central como para condies de
armazenamento, as empresas especializadas fornecedoras devem ser consultadas, bem
como sobre a compatibilidade entre gases (e outros materiais) que possam permanecer
no mesmo local.
Construir esta central em local amplo, ventilado e de fcil acesso, tanto para
carga e descarga de cilindros como para situaes de emergncia. Os cilindros devem
ser mantidos protegidos de ocorrncias climticas como sol e chuva (mas possibilitando
plena ventilao do interior desta central com portas de tela de arame, por exemplo).
O acesso ao interior da central deve ser controlado e restrito aos laboratrios usurios
do sistema, por meio de pessoal instrudo sobre os procedimentos com cilindros e gases
sob presso e ao pessoal de manuteno.
Quando esta central no estiver disponvel, no armazenar os cilindros de gs no
laboratrio. O armazenamento deve ser feito em local razoavelmente amplo, seguro,
fora de reas de circulao, coberto, bem ventilado e, tal como no caso da central, com
acesso controlado ao seu interior.
Observar tambm as incompatibilidades para armazenamento e uso entre os gases . Alm de cilindros contendo o mesmo gs, podem ser guardados juntos aqueles
quimicamente inertes, como nitrognio ou argnio. Gases combustveis devem estar
distantes dos oxidantes; manter a uma distncia segura uns dos outros gases que possam
reagir entre si, como hidrognio e acetileno.
Tanto para uso como para armazenagem, os cilindros no devem ser colocados
IAL - 911
produto que impea seu consumo e cuja presena seja facilmente perceptvel como, por
exemplo, um detergente colorido. Alimentos lquidos, sem contaminao, podem ser
diludos e jogados na pia.
Recipientes vazios de amostras ou materiais utilizados pelo laboratrio necessitam de uma lavagem antes do descarte. Tanto os recipientes de vidro como material
de vidro quebrado ou trincado no podem ser descartados em sacos para lixo comum.
Esse tipo de material deve ser colocado em caixas de papelo especficas para esse fim,
para evitar ferimentos nas pessoas encarregadas da coleta.
necessrio diluir e neutralizar as solues cidas e bsicas antes de serem despejadas em esgoto. Solues aquosas salinas de natureza no txica e no agressiva ao
meio ambiente tambm podem ser descartadas da mesma forma. Papel de filtro com
material de baixa toxicidade pode sofrer uma lavagem estando ainda dentro do prprio
funil e depois ser descartado com o lixo comum. Resduos slidos de reagentes qumicos (tambm de baixa toxicidade) podem ser dissolvidos em quantidades relativamente
grandes de gua e a soluo diluda, escoada pela pia, com a torneira aberta por alguns
minutos.
Para solventes orgnicos o ideal tentar o seu reaproveitamento, depois de uma
recuperao procedida internamente (com normas de segurana especficas) ou por
empresas especializadas. Quando esta recuperao no for possvel ou conveniente, os
solventes podero ser coletados em recipientes adequados e ficar numa central de armazenamento, e posteriormente enviados a uma empresa que possua instalaes apropriadas para a sua destruio, de acordo com as normas ambientais (o mesmo vale para
outros resduos com potencial txico ou poluente). Se o destino for a incinerao, no
devem ser adicionados a esses recipientes, sem o conhecimento dessa empresa, solventes
no inflamveis, como o tetracloreto de carbono ou clorofrmio. A empresa responsvel
pelo transporte e destinao dos resduos dever orientar sobre os tipos de recipientes
a serem utilizados e pelos tipos de compostos que podem ser colocados juntos em um
mesmo recipiente. Deve ser dada ateno especial aos materiais para os quais existam
restries de carter ambiental, em termos de sua destinao final. Para tanto, devem
ser consultadas empresas especializadas, a legislao municipal, estadual e federal e os
rgos de defesa ambiental.
Materiais com risco de contaminao microbiolgica devem ser recolhidos em
sacos de lixo autoclavveis e enviados para descontaminao ou esterilizao por um
processo fsico como a autoclavagem, e somente depois podem ser descartados. Quando
algum motivo impedir este procedimento, o material deve ser tratado com desinfetante
base de hipoclorito de sdio ou outro conveniente pelo tempo necessrio e depois
descartado. A descontaminao qumica pela ao de desinfetantes, como soluo de
hipoclorito de sdio, iodo e outros halogenados, etanol, lcalis, fenis e sais quaternrios
de amnio, deve ser feita com o conhecimento de que tipo de microorganismos deve
ser tratado e tambm em que ambiente. Para muitos desinfetantes, o pH, a carga de
matria orgnica e a concentrao so fatores importantes para determinar a eficincia
IAL - 913
do processo.Todo material biolgico, assim como vidraria quebrada que tenha entrado
em contato com o material biolgico, deve ser descontaminado antes do descarte. Para
estes tpicos, importante ver recomendaes a respeito em um Manual de Segurana
para Laboratrios de Microbiologia ou consultar um profissional especializado.
Cuidados com relao a alguns equipamentos
Fazendo novamente a associao entre Qualidade e Segurana, assim como existem POPs de metodologias analticas, devem existir POPs para a utilizao de equipamentos, os quais podem incluir recomendaes sobre o uso de EPIs e outros requisitos
de segurana.
Muflas
Devem, preferencialmente, estar em uma sala isolada, destinada especificamente para equipamentos geradores de calor, com sinalizao adequada. O profissional
deve fazer uso de equipamentos de proteo individual adequados (luvas de proteo
trmica com cano longo e pinas longas de ao inoxidvel). Quando uma amostra de
matria orgnica necessitar de destruio por via seca, somente dever ser colocada em
mufla aps prvia carbonizao (com aquecimento gradual) em bico de Bunsen, feita
em cabine de segurana qumica. Somente quando o aquecimento mximo com o bico
no provocar mais desprendimento de fumos que a amostra pode ser transferida para
a mufla. Caso contrrio, podero ocorrer a contaminao do ar do laboratrio e a perda
de amostra.
Refrigeradores
Devem ser usados os previstos especialmente para laboratrio, eventualmente
com motor fora do ambiente de trabalho para evitar fascas que possam provocar a
ignio de solventes inflamveis e volteis possivelmente presentes na sala ou dentro
do prprio refrigerador. Mesmo que um refrigerador comum no seja utilizado para
guardar esse tipo de solventes, deve ficar razoavelmente protegido (afastado) da rea do
laboratrio em que esse tipo de solvente possa ser ocasionalmente utilizado.
Dessecadores, materiais dessecantes e uso de vcuo
Entre os materiais dessecantes normalmente utilizados esto o cido sulfrico,
o pentxido de fsforo (que oferecem riscos, pois suas reaes com gua so acompanhadas de grande desprendimento de calor e provocam queimaduras graves ao contato
914 - IAL
com a pele), cloreto de clcio e slica-gel. A slica-gel com indicador de umidade (rosa
quando hidratada, azul quando seca) segura e, quando hidratada pelo uso, fcil de
recuperar em uma estufa seca a 100 C, sendo portanto o agente dessecante mais recomendvel, tanto para dessecadores como para estufas sem ar corrente.
Ao se transferir uma amostra que tenha passado por processo de aquecimento
para um dessecador, deve-se esperar algum tempo, suficiente para um certo resfriamento do cadinho, evitando o rompimento da placa de porcelana do dessecador. Aps
a colocao do cadinho, deixar aberto por tempo suficiente o orifcio da tampa do
dessecador, caso contrrio a dilatao do ar devida ao aquecimento poder expulsar
violentamente a tampa do dessecador.
Ao se usar vcuo o dessecador deve estar colocado dentro de uma caixa de tela
metlica para evitar projees de estilhaos em caso de exploso. Esta observao vlida para outros casos em que se use vcuo, como nas filtraes com uso de kitassato.
Quando a aparelhagem for grande, como no caso de destilao, e no se dispuser de cabine de segurana qumica ou tela metlica de tamanho adequado, o laboratorista deve
usar culos de segurana e trabalhar com o mximo de prudncia, evitando fazer vcuo
(ou desfaz-lo) com rapidez. O processo deve ser lento para permitir a acomodao das
paredes de vidro nova relao de presses interna/externa; o material de vidro deve
ser de boa qualidade. No caso de estufas de vcuo com frente de vidro, embora este seja
normalmente de resistncia adequada, tambm deve ser adaptada uma tela metlica
face exterior; a retirada e a admisso de ar tambm no devem ser rpidas.
Autoclaves
Usadas para esterilizao de materiais e culturas. Dada a sua finalidade e modo
de operao, estes aparelhos devem ser constitudos de material resistente e providos de
manmetros em perfeitas condies de funcionamento. A presso interna e o calor so
os principais fatores de risco.
Antes de abrir a autoclave necessrio assegurar-se de que a mesma esteja resfriada convenientemente e o vapor tenha sido retirado; caso contrrio, a violenta expanso
do vapor, quando da retirada da tampa, poder provocar ferimentos srios ao operador
e a perda do material.
IAL - 915
Centrfugas
Verificar se o balanceamento da carga est correto, evitando o risco de quebra
de algum tubo dentro da centrfuga, o que acarretaria maior formao de aerosol e at
mesmo de gotculas maiores.
Os movimentos rpidos da superfcie do lquido durante a centrifugao formam
os aerosis; portanto no se deve abrir a centrfuga logo aps sua parada, nem enquanto
estiver girando, mesmo devagar.
Materiais de vidro
Montagem de aparelhagens
Freqentemente necessrio montar uma aparelhagem com vrias peas de vidro, como no caso de destilaes. Preferencialmente, as peas devem ter terminais (conexes) esmerilhados e as ligaes feitas diretamente. Em outros casos, as ligaes so
feitas por meio de rolhas ou tubos de borracha. Cada uma das peas, independente do
material de que seja feita, deve ser cuidadosamente examinada antes de se proceder
montagem do aparelho. No devem ser usadas peas trincadas, com qualquer tipo de
fissura, que permitam vazamentos ou que no proporcionem ajuste perfeito.
Aps a montagem, ajustar as peas de tal forma que nenhuma delas esteja sob
tenso e convenientemente presas por garras distribudas ao longo da aparelhagem, de
modo que no necessitem suportar o peso umas das outras (evitar por outro lado, um
nmero excessivo de garras). As garras devem estar firmemente presas a suportes seguros. Verificar se as peas recurvadas no apresentam estrangulamentos internos. Vedar
as conexes com parafina derretida, quando possvel, aplicada com pincel.
Quando for necessrio cortar um tubo de vidro para ser aplicado aparelhagem
(ou outra finalidade qualquer) deve-se observar o procedimento a seguir. Com uma
lima, de preferncia triangular, abre-se um sulco, no muito profundo em uma parte
pequena da volta do tubo (o sulco no deve dar a volta no tubo). Estando as mos protegidas por luvas resistentes e os olhos por culos de segurana, segura-se o tubo com a
parte limada para fora do corpo; pressiona-se o tubo com os polegares no mesmo sentido, isto , para fora do corpo. As pontas do tubo devem em seguida ser arredondadas
em uma chama. Espera-se o tubo esfriar sozinho (o resfriamento rpido com gua, por
exemplo, quebrar o vidro). Se este tubo for inserido em uma rolha, esta deve ter furo
de dimetro conveniente e a operao de insero deve ser feita com lubrificao e com
movimento giratrio lento.
916 - IAL
Para a perfurao furao de rolhas, observar alguns pontos como: fazer o furo
pela parte inferior, apoiando sobre a mesa a parte superior da rolha (de maior dimetro); no caso de rolhas de borracha, escolher um furador de dimetro ligeiramente
maior que o tubo a ser inserido (aps a retirada do furador, o furo da rolha contrai) e
o furador pode ser lubrificado com vaselina, silicone ou um pouco de leo para evitar
que a rolha se molhe; no caso de rolhas de cortia, o furador no deve ser molhado e
pode-se reforar a superfcie externa da rolha com fita adesiva, firmemente presa, para
evitar seu rompimento. Em qualquer caso, o furo deve ser feito em um nico sentido
(no furar de ambos os lados para fazer o encontro dos orifcios no meio). No tentar
aumentar o furo de uma rolha com um furador maior; melhor pegar outra rolha e
refazer a operao.
Lavagem de vidrarias
Ao trmino de um trabalho analtico, todas as peas e recipientes devem passar
por um processo rigoroso de lavagem. O profissional que tiver realizado o trabalho de
anlise deve fazer uma lavagem preliminar do material antes de entreg-lo pessoa responsvel pela limpeza final, evitando que ela se acidente pelo desconhecimento da natureza dos resduos contidos nos frascos ou pela mistura com outros reagentes incompatveis. Cada laboratrio deve usar um processo de lavagem que lhe seja conveniente.
Em geral, este processo utiliza detergente (inclusive os destinados especificamente a
laboratrios) ou sabo, tornando o material escorregadio e por isto recomenda-se usar
luvas de borracha antiderrapantes para proteger as mos de arestas cortantes e evitar
irritaes de pele pelo contato constante com produtos qumicos e agentes de limpeza.
Pode ser colocada uma placa de borracha (com abertura no centro) no fundo da pia
para atenuar eventuais quedas das peas de vidro.
Muitos laboratrios utilizam, alm de detergentes especficos para laboratrios,
solues sulfontricas, solues de cido ntrico ou clordrico, hidrxido de potssio em
lcool e outras, no processo de lavagem. Estes materiais podem ser altamente corrosivos
e reativos e seu contato com a pele pode gerar queimaduras. Dessa forma, sua preparao e uso devem ser feitos por pessoal treinado, com extremo cuidado. necessrio
o uso de luvas de borracha, culos de proteo (ou escudo facial), avental e botas de
borracha. O frasco a ser limpo com estas solues deve ser pr-lavado com detergente
e gua corrente e, se necessrio, seco previamente. Pipetas podem ser colocadas em
uma proveta de 1000 mL, apoiadas sobre uma esponja de espuma colocada no fundo
da proveta para amortecer o impacto. Sua retirada pode ser feita com uma pina cuja
ponta seja revestida com fita veda-rosca ou tubo de borracha. O uso da soluo sulfocrmica deve ser abandonado devido aos riscos a que expe o laboratorista, bem como
pelos riscos ambientais.
Para a lavagem de vidrarias que tenham entrado em contato com micotoxinas,
enxagu-las com metanol (com os cuidados necessrios tambm para a manipulao
desta substncia), retirar (armazenando para descarte posterior adequado), adicionando
em seguida soluo de hipoclorito de sdio a 1% e, aps cerca de duas horas, soluo
IAL - 917
de acetona a 5%. Aguardar trinta minutos, enxaguar e prosseguir com a lavagem usual,
como para outras vidrarias.
Nota final
Para um sistema de segurana do trabalho so necessrios muitos estudos especficos que, conforme apontado ao longo deste texto, exigem consultas a publicaes,
entidades e profissionais especializados. O gerenciamento desse sistema exige, como
no caso da qualidade, um trabalho permanente, para o qual este captulo apenas um
breve roteiro que, lembramos, no deve ter a funo de um manual de segurana.
Reviso
Arline Sydneia Abel Arcuri
Bacharel em qumica e doutora em fsico-qumica pela universidade de So Paulo USP, pesquisadora,diretora tcnica da Fundao Jorge Duprat Figueiredo de segurana
e medicina do trabalho - FUNDACENTRO
Eduardo Mello De Capitani
Mdico, mestre em medicina e doutor em sade coletiva pela universidade de Campinas UNICAMP, especialista em sade pblica e medicina do trabalho, professor
assistente do departamento de clnica mdica da faculdade de cincias mdicas da
UNICAMP, coordenador do centro de controle de intoxicaes, faculdade de cincias
mdicas do hospital das clnicas da UNICAMP.
Mary Rosa Rodrigues de Marchi
Professora assistente doutora, departamento de qumica analtica, instituto de qumica
UNESP
Referncias Bibliogrficas
ASSOCIAO BRASILEIRA DA INDSTRIA QUMICA (ABIQUIM) - Departamento tcnico, comisso de transportes: Manual para atendimento de emergncias
com produtos perigosos, 3. ed. So Paulo, 1999.
ASSOCIATION OF OFFICIAL ANALYTICAL CHEMISTS, Official Methods of
analysis of the Association of Official Analytical Chemists. Arlington: A.O.A.C.,
16th , 1997.
918 - IAL
CARVALHO, P.R. Boas prticas qumicas em biossegurana.Rio de Janeiro: Editora Intercincia Ltda., 1999.
GRIST, N.R. Manual de biossegurana para o laboratrio. 2. ed. So Paulo: Santos
Livraria Editora, 1995.
OLIVEIRA, W.P. Segurana em laboratrios qumicos. 2. ed. Coleo SESI de Segurana do Trabalho, So Paulo, Servio Social da Indstria, 1975.
TIGLEA, P, SANTOS, C.C.M. Manual de biossegurana para laboratrios de
qumica, Instituto Adolfo Lutz, Publicaes Tcnicas para Divulgao Interna, So
Paulo, 1992.
WORLD HEALTH ORGANIZATION. Laboratory biosafety manual. Geneva:
WHO, 1983.
Colaborador
Paulo Tiglea
IAL - 919
APNDICE
SOLUES TITULADAS
INDICADORES
PAPEL REATIVO
CLARIFICADORES
IAL - 921
922 - IAL
M = Molaridade da soluo
Nota: f deve estar compreendido entre os valores 0,9 e 1,1. Em caso contrrio, adicione
gua ou cido e titule novamente.
Preparo de solues de outras molaridades
Proceda como descrito no item acima, usando os valores das Tabelas 1 e 2. Para preparar
solues 0,01 M, tome 10 mL da soluo 1 M e dilua o volume para 1000 mL.
Tabela 1 Volume de HCl (D = 1,19) necessrio para a preparao de 1000 mL de
soluo
Molaridade aproximada
0,01
0,02
0,10
0,50
1,00
mL de HCl*
0,9
1,8
9,0
45,0
90,0
* mL HCl/L soluo = 90 x M
Tabela 2 Quantidade aproximada de Na2CO3 anidro, necessria para a titulao de 25
mL de cido padro
Molaridade do cido
0,1
0,5
1,0
g Na2CO3*
0,132
0,660
1,320
*g Na2CO3 = 0,053 x 25 x M
CIDO OXLICO
Preparo de soluo 0,5 M Pese 63 g de cido oxlico H2C2O4.2H2O em balana analtica (dcimo de mg) e transfira para um balo volumtrico, com rolha esmerilhada.
Adicione gua suficiente para 1000 mL de soluo. Agite at dissoluo total.
924 - IAL
Titulao
Transfira, com o auxlio de pipeta volumtrica, 25 mL desta soluo para um frasco Erlenmeyer de 500 mL. Adicione 200 mL de gua e, depois, 10 mL de H2SO4 (D = 1,84),
lentamente, pelas paredes do frasco. Agite e conserve a temperatura entre 5060C, durante a titulao. Titule com soluo de permanganato de potssio 0,2 M, at o aparecimento de colorao rsea persistente, durante 30 segundos.
Clculo do fator de correo (f)
g H2C2O4.2H2O*
0,63
6,30
63,00
Titulao
Titule com biftalato de potssio C6H4(CO2H) (CO2K), previamente seco em estufa a
105C durante uma hora e resfriado em dessecador. Pese, exatamente, cerca de 0,5106 g
de biftalato e dissolva em 50 mL de cido actico glacial. Junte 2 gotas de soluo a 1%
do indicador violeta genciana em cido actico glacial e titule com a soluo de HClO4,
at mudana da colorao azul para verde-azulada (0,5106 g de biftalato de potssio correspondem a 25 mL de soluo 0,1M de HClO4.)
Nota: faa uma titulao em branco do cido actico e desconte do volume de HClO4
gasto na titulao.
Clculo do fator de correo (f)
Proceda como descrito nos itens acima, usando os valores das Tabelas 4 e 5.
Nota: para solues 0,005 e 0,01 M, tome alquotas da soluo 0,5 M, respectivamente
(10 e 20) mL, e dilua o volume para 1000 mL.
Tabela 4 Volume de H2SO4 (D = 1,84) necessrio para preparao de 1000 mL de
soluo
Molaridade aproximada
0,005
0,01
0,05
0,25
0,50
mL H2SO4 *
0,3
0,6
3,0
15,0
30,0
* H2SO4 /L soluo = 60 x M
Tabela 5 Quantidade aproximada de Na2CO3, anidro, necessria para titulao de 25
mL de cido padro.
Molaridade do cido-padro
0,05
0,25
0,50
g Na2CO3 *
0,132
0,662
1,320
*g Na2CO3 = 0,106 x 25 x M
EDTA
Preparo da soluo Pese 37,224 g do sal dissdico do cido etilenodiaminotetractico
C10H14N2Na2O8.2H2O, transfira para um balo volumtrico, com auxlio de gua e complete o volume a 1000 mL. Agite e transfira para frasco de polietileno.
Titulao
Pese exatamente cerca de 400 mg de carbonato de clcio e transfira para um bquer de
400 mL. Adicione 50 mL de gua e soluo de cido clordrico (1+3) suficiente para
dissolver todo o carbonato de clcio. Dilua at 150 mL, com gua, adicione 15 mL de soluo de hidrxido de sdio 1 M e 30 mg de indicador azul de hidroxinaftol e titule com
soluo de EDTA, usando agitador magntico, at viragem de rosa para azul profundo.
IAL - 927
Clculo
HIDRXIDO DE BRIO
Preparo de soluo 0,5 M Pese 180 g de Ba(OH)2. 8H2O. Transfira para um balo
volumtrico e dissolva em gua, recentemente fervida (isenta de CO2) e resfriada a 25C,
suficiente para 1000 mL . Deixe a soluo em repouso durante dois dias ou at que todo
o carbonato de brio se tenha depositado. Decante a soluo e transfira para o frasco de
polietileno. Conserve protegida contra o CO2 do ar.
Titulao
Transfira, com auxlio de uma pipeta, 25 mL de HCl 1 M para frasco Erlenmeyer de 250
mL. Adicione 2 gotas de soluo de fenolftalena. Adicione, gota a gota, com auxlio de
bureta, a soluo de Ba(OH)2 a ser titulada at o aparecimento de colorao rsea persistente.
Clculo do fator de correo (f)
g Ba(OH)2.8H2O*
1,8
18,0
180,0
HIDRXIDO DE POTSSIO
Preparo de soluo 1M Pese 75 g de KOH e transfira para frasco com rolha de borracha,
com auxlio de 1000 mL de gua isenta de gs carbnico. Adicione, gota a gota, soluo
saturada de hidrxido de brio at no se formar mais precipitado. Agite. Conserve o frasco fechado em repouso durante 12 horas. Decante e transfira o lquido claro para frasco
de polietileno. Conserve protegido do gs carbnico do ar.
Titulao
Transfira, com auxlio de uma pipeta, 25 mL da soluo a ser titulada para um frasco
Erlenmeyer de 250 mL. Adicione 50 mL de gua, isenta de gs carbnico, e 2 gotas do
indicador vermelho de metila. Titule com cido clordrico da mesma molaridade, com
auxlio de bureta, at mudana da colorao amarela para rsea.
Clculo do fator de correo (f )
KOH*
0,75
7,50
75,00
*g KOH/L soluo = 75 x M
IAL - 929
HIDRXIDO DE SDIO
Preparo da soluo 1 M Pese 45 g de NaOH e transfira para o frasco com rolha de
borracha com auxlio de 1000 mL de gua isenta de gs carbnico. Adicione, gota a gota,
soluo saturada de Ba(OH)2 at no se formar mais precipitado. Agite. Conserve o frasco fechado em repouso durante 12 horas. Decante e transfira o lquido claro para o frasco
de polietileno. Conserve protegido do gs carbnico do ar.
Titulao com biftalato de potssio
Pese, em balana analtica, cerca de 5 g de biftalato de potssio C6 H4 (CO2H) (CO2K),
previamente seco em estufa a 105C, durante 1 hora resfriado em dessecador. Dissolva em
75 mL de gua isenta de gs carbnico. Junte 2 gotas de soluo de fenolftalena e titule
com a soluo de hidrxido de sdio, at o aparecimento de colorao rsea persistente.
Clculo de fator de correo (f)
g NaOH*
0,45
4,50
45,00
*g NaOH/L soluo = 45 x M
IODO
Preparo de soluo 0,5 M Pese 200 g de KI, isento de iodato de potssio. Transfira para
um balo volumtrico escuro, com rolha esmerilhada, com auxlio de cerca de 40 mL
de gua. Pese cerca de 127 g de iodo ressublimado e transfira para o frasco contendo KI.
Complete o volume de 1000 mL com gua. Agite at total dissoluo do iodo. Conserve
a soluo em lugar frio com ausncia de luz.
Titulao
Transfira, para um frasco Erlenmeyer de 250 mL, 25 mL da soluo de iodo a ser titulado. Adicione 75 mL de gua e, com auxlio de uma bureta, soluo-padro de tiossulfato
de sdio da mesma molaridade, at colorao amarelo-clara. Junte 2 mL de soluo de
amido a 1% (a soluo deve tornar-se azul) e complete a titulao lentamente at total
descoramento.
IAL - 931
g I2*
1,3
13,0
130,0
g KI**
2,0
20,0
200,0
g AgNO3 *
1,7
17,0
170,0
g AgNO3 *
0,0145
0,1450
1,4500
Titulao
Transfira 5 g de oxalato de sdio - Na2C2O4 para um cadinho de porcelana de 50 mL.
Comprima a substncia nas paredes do cadinho. Aquea em estufa a 105C, por 2 horas.
Resfrie em dessecador com cloreto de clcio. Pese em balana analtica, por diferena,
cerca de 1,67 g de oxalato de sdio e transfira para um frasco Erlenmeyer de 500 mL.
Adicione cerca de 240 mL de gua e depois, lentamente, pelas paredes do frasco, 12,5 mL
de cido sulfrico (D = 1,84). Esfrie a 25C. Agite at dissoluo total do oxalato. Adicione cerca de 90% da quantidade requerida da soluo de permanganato de potssio a ser
titulada, sob agitao. Aquea a 60C, agite e complete a titulao adicionando a soluo
de permanganato at obter colorao rsea persistente, durante 30 segundos.
Clculo do fator de correo (f)
g KMnO4 *
0,32
3,20
32,00
Molaridade KMnO4
0,005
0,050
0,50
g Na2C2O4 *
0,0167
0,1670
1,6700
g NH4SCN *
0,8
8,0
80,0
*g NH4SCN/L soluo = 80 x M
IAL - 935
TIOSSULFATO DE SDIO
Preparo da soluo 1 M Pese 260 g de Na2S2O3.5H2O e transfira para um balo volumtrico mbar, com rolha esmerilhada, com auxlio de gua previamente fervida e resfriada e complete o volume at 1000 mL, com a mesma gua. Junte 0,01 g de HgI2 para
estabilizar a soluo.
Titulao
Transfira 5 g de K2Cr2O7, finamente pulverizado, para um pesa-filtro. Aquea em estufa a
(140 - 150)C, durante 1 hora. Esfrie em dessecador. Pese, em balana analtica, 1,2 g do
dicromato e transfira para frasco Erlenmeyer de 500 mL, com rolha esmerilhada, contendo
100 mL de gua fria, previamente fervida, 30 g de iodeto de potssio (isento de iodato) e 60
mL de cido clordrico (D = 1,19). Feche o frasco e agite. Deixe em repouso, em ausncia
de luz, durante 5 minutos. Lave a rolha e as paredes do frasco com gua previamente fervida
e resfriada. Titule o iodo liberado com a soluo de tiossulfato de sdio a ser padronizada,
agitando continuamente. Quando a colorao se tornar amarela-clara, junte 2 mL de soluo de amido. A soluo deve tornar-se azul. Continue adicionando a soluo de tiossulfato,
gota a gota, at a mudana de cor azul-esverdeada para verde-plida.
Clculo do fator de correo (f)
g Na2S2O35H2O*
2,6
26,0
260,0
g K2Cr2O7**
0,012
0,120
1,200
938 - IAL
Notas
No preparo da soluo, pode-se substituir a mistura de acetato neutro de chumbo e litargrio pelo acetato bsico de chumbo.
Use a quantidade mnima exigida na clarificao, pois h erros no desvio polarimtrico de
acares causados por um excesso de soluo de acetato bsico de chumbo.
Ative o litargrio aquecendo em mufla a (650-670)C, por um perodo entre entre 2h e
30 min a 3 h.
Soluo de acetato neutro de chumbo
Preparo da soluo Prepare uma soluo saturada de Pb(C2H3O2)2.3H2O. Seu uso
especialmente indicado na polarimetria de acares redutores.
Soluo de nitrato bsico de chumbo
Preparo da soluo Misture volumes iguais de uma soluo de hidrxido de sdio a 5%
e de uma soluo de nitrato de chumbo a 50%. Agite. Lave o precipitado por decantao.
Adicione gua at formar uma pasta. Conserve em frasco com rolha esmerilhada.
AREIA PURIFICADA PARA A DETERMINAO DE SUBSTNCIAS VOLTEIS
Preparo da areia Pese 1 kg de areia, passe por peneira comum e em seguida por peneira
ABNT n 20 com abertura de 0,85 mm. Transfira a areia peneirada para um bquer de
4000 mL, lave vrias vezes com gua de torneira para retirar os resduos pequenos e leves.
Aps a retirada da maior parte do resduo, adicione 1000 mL de cido clordrico (1:1),
em capela qumica de exausto. Antes de colocar o cido, deixe uma camada de 4 cm de
gua no bquer com areia. Deixe em contato por 90 minutos, agite ocasionalmente com
basto de vidro de 1 cm de dimetro, retire a soluo cida e lave 10 vezes com gua de
torneira, em capela. Lave com gua at que no haja reao para cloreto (teste, colocando aproximadamente 20 mL de gua de lavagem em bquer de 100 mL e adicione 5
gotas de soluo de nitrato de prata). Escoe a gua. Seque a areia em cpsula de porcelana
a 105C e em seguida aquea a 900C por 6 horas, em mufla.
Colaborador
Jaim Lichtig
940 - IAL
APNDICE
II
GUIA PARA
QUALIDADE EM
QUMICA ANALTICA
UMA ASSISTNCIA ACREDITAO
942 - IAL
944 - IAL
Publicado em 2002
IAL - 945
NDICE
Seo Ttulo
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
Metas e objetivos
Introduo
Definio e Terminologia
Acreditao
Escopo
A tarefa analtica
Especificao do requisito analtico
Estratgia analtica
Anlises no rotineiras
Pessoal
Amostragem, manuseio e preparao das amostras
Ambiente
Equipamentos
Reagentes
Rastreabilidade
Incerteza de medio
Mtodos/ procedimentos para ensaios e calibrao
Validao de metodologia
Calibrao
Materiais de referncia
Controle de qualidade e ensaios de proficincia
Computadores e sistemas controlados por computador
Auditoria do laboratrio e anlise crtica
Referncias e Bibliografia
Siglas
Apndices
A
B
C
946 - IAL
1.
METAS E OBJETIVOS
1.1 A meta deste guia fornecer aos laboratrios diretrizes sobre a melhor prtica para
as operaes analticas por eles realizadas. O guia abrange anlises qualitativa e
quantitativa realizadas em bases rotineiras e no-rotineiras. Um guia em separado
abrange trabalhos de pesquisa e desenvolvimento (Guia CITAC/EURACHEM
Referncia A1 na pgina 43).
1.2 O guia objetiva auxiliar aquelas pessoas implementando a garantia da qualidade
em laboratrios. Para aqueles que trabalham com acreditao, certificao ou outra
conformidade com requisitos particulares da qualidade, ele ir ajudar a explicar o
que esses requisitos significam. O guia tambm ser til para aqueles envolvidos na
avaliao da qualidade de laboratrios analticos, por comparao com esses requisitos de qualidade. Referncias cruzadas s normas ISO/IEC 17025, ISO 9000 e
aos requisitos das Boas Prticas de Laboratrio (GLP) da OECD, so fornecidas.
1.3 Este documento foi desenvolvido a partir da anterior Guia 1 CITAC (que, por
sua vez, foi baseada no Guia EURACHEM/WELAC), e atualizado para levar em
conta novos materiais e desenvolvimentos, particularmente os novos requisitos da
norma ISO/IEC 17025.
1.4 Esse guia foi produzido por um grupo de trabalho constitudo por David Holcombe, LGC, RU; Bernard King, NARL, Austrlia; Alan Squirrell, NATA, Austrlia
e Maire Walsh, Laboratrio Estadual, Irlanda. Alm disto, ao longo dos anos de
elaborao deste guia e de suas verses anteriores, tem havido extensa contribuio
por parte de um grande nmero de indivduos e organizaes, incluindo: CITAC,
EURACHEM, EA, ILAC, A.O.A.C.I, IUPAC, CCQM, entre outros (consulte a
lista de Acrnimos na pgina 58).
1.5 Este guia se concentra nas questes tcnicas da garantia da qualidade (GQ), com
nfase naquelas reas onde h a necessidade de uma interpretao particular para
ensaios qumicos ou medies relacionadas. Existe um nmero de aspectos adicionais de GQ, onde nenhuma orientao dada, j que estes so integralmente focados em outros documentos, tal como a norma ISO/IEC 17025. Estes incluem:
registros; relatrios; sistemas da qualidade; subcontratao; reclamaes; requisitos
do fornecedor; reviso de contratos; confidencialidade e manipulao de dados.
IAL - 947
2.
INTRODUO
2.1 O valor das medies qumicas depende do nvel de confiana que pode ser estabelecido
nos resultados. De maneira crescente, a comunidade de analistas qumicos est adotando
princpios de GQ que, embora no garantindo realmente a qualidade dos dados produzidos, eleva a possibilidade deles serem bem fundamentados e se adequarem ao fim pretendido.
2.2 Uma GQ apropriada pode permitir que um laboratrio mostre que possui instalaes e
equipamentos adequados para execuo de anlises qumicas e que o trabalho foi realizado
por pessoal competente de uma maneira controlada, seguindo um mtodo validado documentado. A GQ deve focar questes centrais que determinem resultados de qualidade,
custos e oportunidades, e evitem desvio de energias para questes menos importantes.
2.3 Uma boa prtica de GQ, incluindo seu reconhecimento formal por acreditao, certificao etc., ajuda a garantir que os resultados sejam vlidos e adequados aos fins propostos.
Contudo, importante que tanto os laboratrios quanto seus clientes entendam que a GQ
no pode garantir que 100% dos resultados individuais sejam confiveis. Existem duas
razes para isto:
1.
2.
2.4.1 ISO/IEC 17025:1999: (Ref B1) Esta norma aborda a competncia tcnica
de laboratrios para a realizao de ensaios e calibraes especficos, e usada
em todo o mundo por organismos de acreditao de laboratrios, como um
requisito bsico para a acreditao;
2.4.2 ISO 9001:2000: (Ref B2) e suas equivalentes nacionais e internacionais. Esta
norma se refere principalmente gesto da qualidade para instalaes que
realizam a produo ou prestam servios, incluindo anlises qumicas;
2.4.3 Princpios de Boas Prticas de Laboratrio (GLP) da OECD: 1998 (Ref B3)
e suas equivalentes nacionais e setoriais. Estas diretrizes dizem respeito aos
processos e condies organizacionais sob os quais estudos de laboratrio,
relativos a determinado trabalho regulamentar, so realizados.
2.5 Alm disto, existem abordagens sobre Gesto da Qualidade Total (GQT) para GQ,
que do nfase melhoria contnua (a nova ISO 9001:2000 d mais nfase neste
aspecto). O fundamental neste guia o enfoque que, em nvel tcnico, a boa prtica em GQ analtica independe do sistema formal de GQ adotado.
2.6 Um laboratrio pode decidir criar seus prprios procedimentos de GQ, ou pode
adotar um dos protocolos estabelecidos. Neste ltimo caso, ele pode reivindicar
conformidade informal com o protocolo ou, em condies ideais, pode ser submetido a uma avaliao independente por parte de uma entidade especializada oficial,
com o objetivo de obter aprovao independente de seu sistema da qualidade. Tal
avaliao/aprovao independente variavelmente conhecida como acreditao,
registro ou certificao, dependendo de qual norma esteja sendo usada na avaliao. Em reas especficas de anlise, a acreditao algumas vezes obrigatria, porm, na maioria dos casos, o laboratrio livre para decidir que espcies de medidas
de GQ ele deseja adotar. O caminho pela avaliao independente tem reconhecidas
vantagens, particularmente onde os clientes do laboratrio necessitem de evidncia
objetiva da competncia tcnica do laboratrio. Para obter esclarecimentos sobre o
termo acreditao, conforme usado neste guia, veja as sees 3.2 e 4 abaixo.
3.
DEFINIES E TERMINOLOGIA
Existe uma pluralidade de termos importantes usados em gesto da qualidade e
avaliao de conformidade, cujo significado pode variar conforme o contexto em
que eles forem usados. importante compreender a distino entre os diferentes termos. Alguns deles so aqui apresentados. A referncia bsica a ISO Guia
IAL - 949
2:1996 Ref B4. Outros termos podem ser encontrados na ISO 9000:2000 Ref
B5 (Nota: ISO 8402:1994 Qualidade Vocabulrio foi retirada).
3.1 QUALIDADE: Grau em que um conjunto de caractersticas inerentes satisfaz requisitos (ISO 9000:2000).
3.2 ACREDITAO: Procedimento pelo qual uma entidade autorizada concede reconhecimento formal de que uma organizao ou pessoa competente para realizar tarefas especficas (ISO Guia 2-1996).
3.2.1 No contexto de um laboratrio realizando medies, acreditao o reconhecimento formal de que o laboratrio competente para executar calibraes
ou ensaios especficos, ou tipos especficos de calibraes ou ensaios. O mecanismo pelo qual a acreditao concedida est descrito abaixo na seo 4, e o
documento dos principais requisitos a norma ISO/IEC 17025:1999.
3.2.2 Acreditao tambm usada no contexto das atividades baseadas na norma
ISO 9000, para descrever o processo pelo qual uma organizao nacional reconhece formalmente os organismos de certificao como competentes para
avaliar e certificar organizaes, como estando em conformidade com a srie
de normas ISO 9000 (sistemas de gesto da qualidade).
3.3 CERTIFICAO: Procedimento pelo qual um organismo de terceira parte fornece garantia por escrito de que um produto, processo ou servio est em conformidade com requisitos especificados (ISO Guia 2:1996). A Certificao (algumas
vezes conhecida como registro) difere basicamente da acreditao na medida em
que a competncia tcnica no especificamente focada.
3.4 GARANTIA DA QUALIDADE (GQ): GQ descreve as medidas globais que um
laboratrio utiliza para assegurar a qualidade de suas operaes. Tipicamente estas
podem incluir:
Um sistema da qualidade
Ambiente de laboratrio adequado
Pessoal instrudo, treinado e habilitado
Procedimentos e registros de treinamento
Equipamento adequadamente conservado e calibrado
Procedimentos para controle da qualidade
Mtodos documentados e validados
950 - IAL
IAL - 951
3.7 NORMA (STANDARD): Esta palavra possui uma variedade de significados distintos na lngua inglesa. No passado, ela foi usada rotineiramente para se referir
primeiramente a normas escritas amplamente adotadas, isto , procedimentos,
especificaes, recomendaes tcnicas, etc., e em segundo lugar, a padres qumicos ou fsicos usados para fins de calibrao. Neste guia, para minimizar a confuso, norma usada somente no sentido de normas escritas. O termo padro
de medida usado para descrever padres qumicos ou fsicos, usados para fins
de calibrao ou validao, tais como: produtos qumicos de pureza estabelecida e
suas correspondentes solues de concentrao conhecida; filtros UV; pesos, etc.
Materiais de referncia so uma (importante) categoria de padres de medida.
3.8 MATERIAL DE REFERNCIA (MR): Material ou substncia, com um ou mais
valores de suas propriedades que so suficientemente homogneos e bem estabelecidos, para ser usada na calibrao de um aparelho, na avaliao de um mtodo de
medio ou na atribuio de valores a materiais. (ISO Guia 30 Ref C1).
3.9 MATERIAL DE REFERNCIA CERTIFICADO (MRC): Material de referncia, acompanhado de um certificado, com um ou mais valores de suas propriedades
certificadas por um procedimento que estabelece sua rastreabilidade obteno
exata da unidade na qual os valores da propriedade so expressos, e cada valor certificado acompanhado por uma incerteza para um nvel de confiana estabelecido.
(ISO Guia 30:1992 Ref C1).
3.10 RASTREABILIDADE: Propriedade do resultado de uma medio ou do valor
de um padro estar relacionado a referncias estabelecidas, geralmente a padres
nacionais ou internacionais, atravs de uma cadeia contnua de comparaes, todas
com incertezas estabelecidas. (VIM 1993 Ref B6).
3.11 INCERTEZA DE MEDIO: Parmetro associado ao resultado de uma medida
que caracteriza a disperso dos valores que podem ser razoavelmente atribudos ao
medidor. (VIM 1993 Ref B6).
4
ACREDITAO
Ttulo
ISO/IEC
17025:1999
ISO 9001:
2000
Escopo
Referncias normativas
Termos e definies
3 ISO
9000:2000
Seo I 2
Requisitos gerenciais
Vrias
Seo II 1.1
Organizao
4.1
Diretor de estudo
Seo I 1
Seo II - 1.2
IAL - 953
Ttulo
Gerente da Qualidade
Sistema da Qualidade
Poltica da Qualidade
Manual da Qualidade
Comprometimento da gerncia com a
qualidade
Controle de documentos
Aprovao e emisso de documentos
Alteraes em documentos
Anlise crtica dos pedidos, propostas e
contratos
Subcontratao
Aquisio de servios e suprimentos
Verificao de suprimentos
Foco no cliente
Atendimento ao cliente
Reclamaes
Controle de trabalho no-conforme
Melhoria
Anlise de causas
Ao corretiva
Ao preventiva
Controle de registros
Auditorias internas
Anlises crticas pela gerncia
Requisitos tcnicos gerais
Pessoal
Acomodaes e condies ambientais
Mtodos de ensaio e calibrao
954 - IAL
ISO/IEC
17025:1999
ISO 9001:
2000
4.1.5
4.2
4.2.2
4.2.2
5.5.2
4
5.3
4.2.2
4.2.2
5.1
4.3
4.3.2
4.3.3
4.2.3
4.2.3
4.2.3
4.4
7.2
4.5
4.6
7.4
4.6.2
4.7
4.8
4.9
4.10.2
4.10.3
4.10.4
4.11
4.12
4.13, 4.10.5
4.14
5.1
5.2
5.3
5.4
7.4.3
Seo II 7.1
Seo II 6.2.3
(somente item de
ensaio)
5.2, 8.2.1
7.2.3
7.2.3
8.3
8.5
8.5.2
8.5.2
8.5.3
4.2.4
8.2.2
5.6
Seo II 10
Seo II 2.2
6.2
6.3, 6.4
7.5.1
Seo II - 1.3
Seo II 3
Seo II 7
Ttulo
Validao de metodologias
Incerteza de medio
Verificaes de clculo e de transcries
Validao da TI
Equipamentos
Qualificao de equipamentos
Rastreabilidade da medio
Calibrao
Padres de referncia e materiais de
referncia
Amostragem
Manuseio de itens de ensaio ou calibrao
(transporte/armazenagem/identificao/
descarte)
Identificao da amostra
7.6
Seo II 6
5.7
5.8
7.5.5
5.8.2
7.5.3
7.5.1, 7.6,
8.2.3,
8.2.4
5.9
5.10
5.10.5
5.10.7
5.10.9
Seo II 8.3.1
Seo II 2
Seo II 9
8.3
Seo II 9.1.4
Nota: Consideraes esto sendo feitas para o alinhamento dos requisitos do sistema de
gesto da qualidade da Seo 4 (baseada na ISO 9001: 1994) da ISO/IEC 17025: 1999
com a ISO 9001: 2000.
4.4 A acreditao concedida a um laboratrio para um conjunto especfico de atividades (isto , ensaios ou calibraes) aps a avaliao daquele laboratrio. Tais
avaliaes iro incluir tipicamente um exame dos procedimentos analticos em uso,
o sistema da qualidade e a documentao da qualidade. Os procedimentos analticos sero examinados para garantir que eles sejam tecnicamente apropriados ao
IAL - 955
fim pretendido e que tenham sido validados. O desempenho dos ensaios pode
ser testemunhado para garantir que os procedimentos documentados estejam sendo seguidos e possam ser, de fato, acompanhados. O desempenho do laboratrio
em esquemas de ensaios de proficincia pode ser tambm examinado. A avaliao
pode, adicionalmente, incluir uma auditoria de desempenho, onde necessrio
que o laboratrio analise amostras fornecidas pela entidade acreditadora e atinja
nveis de preciso aceitveis. Essa auditoria de desempenho efetivamente uma
forma de ensaio de proficincia (ver a seo 21).
4.5 de responsabilidade do laboratrio garantir que todos os procedimentos usados
sejam apropriados ao seu fim pretendido. O processo de avaliao examina este
aspecto de adequao ao uso.
4.6 Cada entidade acreditadora possui procedimentos estabelecidos com os quais ela
opera, avalia laboratrios e concede a acreditao. Por exemplo, as entidades acreditadoras de laboratrios operam, segundo requisitos baseados na ISO/IEC Guia
58 (Ref C8). Similarmente, entidades oferecendo esquemas de certificao operam
segundo os requisitos da ISO/IEC Guia 62 (Ref 19).
4.7 Da mesma forma, avaliadores so escolhidos por critrios especificados. Por exemplo, os critrios de seleo para nomeao de avaliadores para avaliar em nome das
entidades acreditadoras de laboratrios so especificados na ISO/IEC Guia 58. Estes incluem o requisito de conhecimento tcnico nas reas especficas de operao
sendo avaliadas.
4.8 O benefcio da acreditao permitir aos clientes em potencial do laboratrio terem
confiana na qualidade do servio desempenhado. Vrios desenvolvimentos internacionais significam que a aprovao conferida por acreditao e outras avaliaes
possuem reconhecimento mundial. Muitas entidades acreditadoras de laboratrios
(que foram avaliadas e confirmadas como satisfazendo requisitos relevantes ver
4.6 acima) assinaram um acordo multilateral (o Acordo ILAC) para reconhecer a
equivalncia dos esquemas de acreditao de laboratrio. Acordos internacionais similares foram desenvolvidos para entidades associadas a esquemas de certificao.
4.9 A orientao fornecida abaixo ser til para laboratrios buscando acreditao relativa ISO/IEC 17025, certificao relativa ISO 9001, ou conformidade/registro
com os princpios das BPL (GLP).
5.
ESCOPO
956 - IAL
IAL - 957
6.1 A anlise uma investigao complexa em mltiplos estgios que podem ser sumarizados nas sub-tarefas relacionadas abaixo. Quando apropriado, a seo correspondente deste guia tambm listada. Nem todas as etapas sero necessrias a cada vez
que uma medio de rotina for realizada. Tambm, na realidade, a medio muitas
vezes um processo iterativo, que passa pela srie linear de etapas mostradas abaixo:
7.1 O laboratrio tem o dever de prestar um servio analtico que seja apropriado para
resolver os problemas de seus clientes.
7.2 A chave para uma boa anlise uma especificao clara e adequada dos requisitos.
Isto precisar ser produzido em cooperao com o cliente, que pode necessitar de
ajuda considervel para converter seus requisitos funcionais numa tarefa analtica
tcnica. O requisito analtico pode ser tambm desenvolvido durante os trabalhos
de uma comisso, mas no deve sofrer desvios. Quaisquer mudanas so possveis
de serem orientadas pelo cliente, mas devem ter o acordo de ambos: cliente e laboratrio. A especificao do pedido analtico deve abordar as seguintes questes:
958 - IAL
Contexto analtico
Informaes requeridas
Relevncia (Nvel crtico)/risco aceitvel
Restries de tempo
Restries de custos
Amostragem
Requisitos de rastreabilidade
Incerteza de medio
Requisitos do mtodo, incluindo preparao da amostra
Identificao/confirmao/caracterizao
Critrios de limites
Requisitos de GQ/CQ
Requisitos do plano de pesquisa/aprovao
7.3 O nvel da documentao deve ser proporcional escala e nvel crtico da tarefa e
inclui a produo de qualquer anlise de informaes e pensamento criativo.
8.
ESTRATGIA ANALTICA
8.1 Todo trabalho analtico deve ser adequadamente planejado. Um plano destes pode
ser, em sua forma mais bsica, simplesmente uma entrada em um caderno de anotaes. Planos mais detalhados devero ser apropriados para tarefas maiores e mais
complicadas. Para trabalho realizado segundo as BPLs, h um requisito especfico
de que o trabalho seja realizado segundo planos de estudo documentados.
8.2 Os planos, tipicamente, devero indicar o ponto de partida e de trmino pretendido da tarefa especfica em conjunto com a estratgia para alcanar as metas desejadas. Quando, durante a evoluo do trabalho, for apropriado alterar a estratgia, o
plano deve ser corrigido de acordo.
9
ANLISES FORA-DE-ROTINA
9.1 Anlises fora-de-rotina podem ser consideradas tambm como tarefas, mas que so
realizadas ocasionalmente, onde metodologia confivel j se encontra estabelecida,
ou como tarefas onde cada amostra requer uma abordagem diferente e a metodologia precisa ser estabelecida na ocasio. Orientaes so dadas na Referncia A1.
9.2 Os custos da medio qumica refletem os custos associados aos vrios estgios de desenvolvimento do mtodo, validao, instrumentao, consumveis, manuteno conIAL - 959
tnua, participao de pessoal, calibrao, controle de qualidade, etc. Muitos desses custos so independentes do nmero de amostras que sero subseqentemente analisadas
usando-se esse mtodo. Assim, quando um nico mtodo puder ser usado para um
grande quantidade de amostras, os custos analticos unitrios sero comparativamente baixos. Quando um mtodo tiver que ser especialmente desenvolvido apenas para
poucas amostras, os custos analticos unitrios podem ser muito altos. Para tal anlise
fora-de-rotina, alguns custos podem ser reduzidos pelo uso de mtodos genricos, isto ,
mtodos que so amplamente aplicveis. Em alguns casos, a subcontratao de servios
de um laboratrio especializado em um tipo particular de trabalho poderia ser a melhor
soluo custo/benefcio. Contudo, quando o trabalho for subcontratado, procedimentos de GQ apropriados devem ser empregados.
9.3 Em termos simples, uma medio pode ser convenientemente descrita em termos
de uma etapa de isolamento e um estgio de medio. Raramente um analito pode
ser medido sem primeiro separ-lo da matriz da amostra. Assim, a finalidade da
etapa de isolamento simplificar a matriz na qual o analito finalmente medido.
Freqentemente o procedimento de isolamento pode variar muito pouco para uma
ampla variedade de analitos numa faixa de matrizes de amostra. Um bom exemplo
de um procedimento de isolamento genrico a tcnica de digesto para isolar
traos de metais em alimentos.
9.4 Da mesma forma, uma vez que os analitos tenham sido isolados da matriz da
amostra e estejam presentes em um meio comparativamente limpo, tal como um
solvente, pode ser possvel ter um nico mtodo genrico para cobrir a medio de
uma ampla variedade de analitos. Por exemplo, cromatografia gasosa, ou espectrofotometria UV-Visvel.
9.5 A documentao de tais mtodos genricos deve ser elaborada de forma que possa
acomodar facilmente as pequenas mudanas relacionadas com a extrao, depurao ou medio de diferentes analitos, por exemplo pelo uso de tabelas. Os parmetros que podem ser variados so: tamanho da amostra, quantidade e tipo dos
solventes de extrao, condies de extrao, colunas cromatogrficas ou condies
de separao, ou ajustes de comprimento de onda no espectrmetro.
9.6 O valor de tais mtodos para anlises fora-de-rotina que, quando uma nova combinao de analito/matriz encontrada, freqentemente possvel incorpor-la a
um mtodo genrico existente, com validao adicional, clculos de incerteza da medio e documentao apropriados. Assim, os custos adicionais incorridos so minimizados em comparao com o desenvolvimento integral de um novo mtodo. O mtodo
960 - IAL
deve definir as verificaes que precisaro ser realizadas para os diferentes analitos ou
tipos de amostras, a fim de verificar se a anlise vlida. Informaes suficientes precisaro ser registradas, a fim de que o trabalho possa ser repetido, precisamente da mesma
maneira, numa data futura. Quando uma anlise especfica subseqentemente se torna
rotina, um mtodo especfico pode ser validado e documentado.
9.7 possvel acreditar uma anlise fora-de-rotina, e a maior parte das entidades acreditadoras ter uma poltica para avaliar tais mtodos e descrev-los no programa ou
escopo de acreditao do laboratrio. O nus caber ao laboratrio de demonstrar
aos avaliadores que ao usar estas tcnicas ele est satisfazendo todos os critrios da
norma de qualidade relevante. Particularmente, a experincia, a capacitao e o
treinamento do pessoal envolvido, sero importantes fatores na determinao se
tais anlises podem ou no ser acreditadas.
10. PESSOAL
10.1 A gerncia do laboratrio deve definir, normalmente, os nveis mnimos de qualificao e experincia necessrios aos principais cargos dentro do laboratrio. As
anlises qumicas devem ser realizadas por um analista qualificado, experiente e
competente, ou sob a superviso deste. Outra equipe de funcionrios snior do
laboratrio possuir normalmente competncias similares. Menores qualificaes
formais podem ser aceitveis quando o pessoal possuir relevante e extensa experincia e/ou o escopo das atividades for limitado. A equipe qualificada em nvel de
graduao dever ter, normalmente, pelo menos dois anos de experincia em trabalho pertinente antes de ser considera composta por analistas experientes. O pessoal
em treinamento, ou sem nenhuma qualificao relevante, pode realizar anlises,
desde que tenham comprovadamente recebido um nvel adequado de treinamento
e sejam adequadamente supervisionados.
10.2 Em determinadas circunstncias, os requisitos mnimos de qualificaes e experincia para o pessoal que realiza tipos particulares de anlises podem ser especificados em regulamentos.
10.3 O laboratrio deve assegurar que todo o pessoal receba treinamento adequado para
o desempenho competente dos ensaios e operao dos equipamentos. Quando
apropriado, isto dever incluir treinamento nos princpios e teorias por trs de
tcnicas particulares. Quando possvel, medidas objetivas devem ser tomadas para
avaliar o alcance da competncia durante o treinamento. Somente analistas que
possam demonstrar a competncia necessria, ou que sejam adequadamente superIAL - 961
11.12.5 Qualquer que seja a estratgia usada para a amostragem, de vital importncia que o amostrador mantenha um registro claro dos procedimentos
seguidos, a fim de que o processo de amostragem possa ser exatamente
repetido.
11.12.6 Quando mais de uma amostra for retirada do material original pode ser
til incluir um diagrama como parte integrante da documentao, para
indicar o padro da amostragem. Isto dever tornar mais fcil a repetio
da amostragem numa data futura, podendo tambm auxiliar na obteno
de concluses a partir dos resultados do ensaio. Uma aplicao tpica,
onde um esquema deste ser til, na amostragem de solos sobre uma
ampla rea para monitorar sedimentos das emisses de chamins.
11.12.7 Quando o laboratrio no tiver sido responsvel pela fase de amostragem,
ele deve declarar no relatrio que as amostras foram analisadas como recebidas. Se o laboratrio tiver conduzido ou dirigido a fase de amostragem,
ele deve informar sobre os procedimentos utilizados e comentar acerca de
quaisquer limitaes decorrentes impostas aos resultados.
11.13 A embalagem da amostra e os instrumentos usados para manipulao da amostra
devem ser selecionados de forma que todas as superfcies em contato com a amostra sejam essencialmente inertes. Ateno particular deve ser dedicada possvel
contaminao das amostras por metais ou plastificantes lixiviados (migrados) do
recipiente, ou de sua tampa, para a amostra. A embalagem deve tambm garantir
que a amostra possa ser manipulada sem ocasionar um risco qumico, microbiolgico, ou outro qualquer.
11.14 O fechamento da embalagem deve ser adequado, de forma a garantir que no haja
vazamento da amostra, e que a prpria amostra no seja contaminada. Em algumas circunstncias, por exemplo, quando amostras tiverem sido coletadas para fins
legais, a amostra deve ser lacrada de forma que o acesso a ela somente seja possvel
pela ruptura do lacre. A confirmao do estado satisfatrio dos lacres ir ento,
normalmente, fazer parte do relatrio analtico.
11.15 O rtulo da amostra um importante aspecto da documentao e deve identificla, sem ambigidade, a planos ou notas relacionadas. A rotulagem particularmente importante, mais adiante no processo analtico, quando a amostra possa ter sido
dividida, subamostrada, ou modificada de alguma forma. Em tais circunstncias,
informaes adicionais podem ser apropriadas, tais como referncias amostra
IAL - 967
12.4 Na seleo de reas que sero designadas para novos trabalhos, o uso anterior da
rea deve ser levado em considerao. Antes do uso, devem ser feitas verificaes
para garantir que a rea esteja livre de contaminao.
12.5 O laboratrio deve proporcionar condies ambientais apropriadas e os controles
necessrios para a realizao de ensaios especficos, ou para a operao de equipamento especfico, incluindo: temperatura, umidade, iseno de vibrao, iseno
de contaminao microbiolgica em suspenso no ar ou em poeira, iluminao
especial, proteo contra radiao, e servios especficos. Condies ambientais crticas devem ser monitoradas e mantidas dentro de limites predeterminados.
12.6 Um desvio das condies ambientais crticas pode ser indicado por sistemas de monitoramento ou pelo controle de qualidade analtico em ensaios especficos. O imIAL - 969
pacto de tais falhas pode ser avaliado como parte integrante dos ensaios de robustez
durante a validao do mtodo e, quando apropriado, estabelecidos procedimentos
de emergncia.
12.7 Procedimentos de descontaminao podem ser apropriados quando o ambiente ou
o equipamento estiver sujeito mudanas de uso, ou quando ocorrer contaminao acidental.
13. EQUIPAMENTOS (Ver tambm Apndice B)
13.1 Categorias de equipamentos
13.1.1 Todo o equipamento usado nos laboratrios deve ser de uma especificao suficiente para a finalidade pretendida, e mantido num
estado de manuteno e calibrao consistente com seu uso. Equipamentos normalmente encontrados no laboratrio qumico podem ser classificados como:
i) equipamento para servios gerais, no usado para medies ou com mnima influncia sobre medies (p. ex. chapas quentes, agitadores, vidraria no-volumtrica e vidraria
usada para medio grosseira de volume, tais como provetas)
e sistemas para aquecimento ou ventilao de laboratrio;
ii) equipamento volumtrico (p. ex. frascos, pipetas, picnmetros, buretas, etc.) e instrumentos de medio (p. ex.
hidrmetros, viscosmetros de tubo em U, termmetros,
cronmetros, espectrmetros, cromatgrafos, medidores eletroqumicos, balanas, etc.);
iii) padres de medida fsica (pesos, termmetros de referncia);
iv) computadores e processadores de dados.
13.2 Equipamento para servios gerais
13.2.1 Equipamento para servios gerais ser conservado, tipicamente,
apenas por meio de limpeza e verificaes de segurana, conforme
necessrio. Calibraes ou verificaes de desempenho sero neces970 - IAL
IAL - 971
13.3.4 A freqncia de tais verificaes de desempenho pode ser especificada em manuais ou procedimentos operacionais. Caso contrrio,
ela dever ser determinada pela experincia e baseada na necessidade, tipo e desempenho anterior do equipamento. Os intervalos
entre as verificaes devem ser mais curtos do que o tempo que
o equipamento leva, na prtica, para ultrapassar os limites aceitveis.
13.3.5 Muitas vezes possvel criar verificaes de desempenho verificaes de adequao do sistema dentro dos mtodos de ensaio
(p. ex. baseado nos nveis de resposta esperados dos detectores ou
sensores para materiais de referncia, a resoluo das misturas de
componentes por sistemas de separao, as caractersticas espectrais
de padres de medida etc.). Essas verificaes devem ser satisfatoriamente concludas, antes do equipamento ser usado.
13.4 Padres de medida fsica
13.4.1 Onde quer que os parmetros fsicos sejam decisivos para o correto
desempenho de um ensaio em particular, o laboratrio deve possuir, ou ter acesso, ao padro de medida relevante, como um meio
de calibrao.
2.2.2
Em alguns casos, um ensaio e seu desempenho so na verdade definidos em termos de uma pea especfica do equipamento, e verificaes sero necessrias para confirmar que o equipamento est
de acordo com a especificao relevante. Por exemplo, valores do
ponto de fulgor para uma amostra inflamvel especfica so dependentes das dimenses e geometria dos aparelhos utilizados no
ensaio.
13.4.3 Materiais padres de medio e quaisquer certificados anexos devem ser armazenados e utilizados de maneira consistente para a
preservao do estado de calibrao. Deve ser dada considerao
particular a qualquer recomendao de armazenagem mencionada
na documentao fornecida com o padro de medida.
13.5 Computadores e processadores de dados. Os requisitos para computadores so
apresentados na seo 20.
972 - IAL
14. REAGENTES
14.1 A qualidade dos reagentes e de outros materiais consumveis deve ser apropriada
ao uso pretendido. Devem ser feitas consideraes a respeito da seleo, compra,
recebimento e armazenamento de reagentes.
14.2 A qualidade de qualquer reagente crtico utilizado (incluindo gua) deve ser mencionada no mtodo, juntamente com o guia sobre quaisquer precaues especficas a serem observadas na sua preparao, armazenamento e uso. Essas precaues
incluem toxicidade, inflamabilidade, estabilidade trmica ao ar e a luz; reatividade
com outros produtos qumicos; reatividade com recipientes especficos; e outros
riscos. Reagentes e materiais de referncia preparados no laboratrio devem ser
rotulados para identificar a substncia, concentrao, solvente (quando diferente
da gua), quaisquer precaues ou riscos especiais, restries de uso, e data de preparao e/ou validade. A pessoa responsvel pela preparao deve ser identificvel a
partir do rtulo ou dos registros.
14.3 O correto descarte de reagentes no afeta diretamente a qualidade da anlise da
amostra, contudo ele faz parte das boas prticas de laboratrio e deve obedecer aos
regulamentos nacionais sobre sade e segurana, ou meio ambiente.
14.4 Quando a qualidade de um reagente for crtica para um ensaio, a qualidade de um
novo lote deve ser verificada em comparao com o lote anteriormente em uso
(de sada), antes de seu emprego, desde que o lote de sada seja reconhecido como
sendo ainda utilizvel.
15. RASTREABILIDADE
15.1 A definio formal de rastreabilidade apresentada em 3.10 e uma declarao de
poltica da CITAC foi preparada (Ref A6). Um guia sobre a rastreabilidade de
medies qumicas est sendo desenvolvido (Ref A7). A rastreabilidade diz respeito
ao requisito de relacionar os resultados das medies aos valores de padres ou
referncias rastreveis ao Sistema Internacional de Unidades, o SI. Isto alcanado
com o emprego de padres primrios (ou outros padres de alto nvel), que so
utilizados para estabelecer padres secundrios que, por sua vez, podem ser usados
como padres em calibraes de trabalho e sistemas de medio relacionados. A
rastreabilidade estabelecida em um nvel declarado de incerteza de medio, onde
cada etapa na cadeia da rastreabilidade acrescenta mais incerteza. A rastreabilidade
IAL - 973
contudo, impossvel de ser obtido. Isto ocorre porque os diferentes fatores variam
de experimento a experimento, e porque o efeito de cada fator sobre o resultado
nunca exatamente conhecido. A possvel faixa de desvios precisa ser, portanto,
estimada.
16.5 A principal tarefa na atribuio de um valor para a incerteza de uma medio
a identificao das fontes relevantes de incerteza e a atribuio de um valor a
cada contribuio significativa. As contribuies distintas precisam ser ento combinadas (conforme mostrado na seo 16.13), afim de fornecer um valor global.
necessrio manter registros das fontes individuais de incerteza identificadas, do
valor de cada contribuio e a origem do valor (por exemplo: medies repetidas,
referncias de literatura, dados de MRCs, etc.).
16.6 Na identificao das principais fontes de incerteza, a seqncia completa de eventos
necessrios para atingir a finalidade da anlise deve ser considerada. Tipicamente,
essa seqncia inclui amostragem e subamostragem, preparao de amostra, extrao, depurao, concentrao ou diluio, calibrao de instrumento (incluindo
preparao do material de referncia), anlise instrumental, processamento de dados brutos e transcrio do resultado produzido.
16.7 Cada um dos estgios ter fontes de incerteza associadas. As incertezas de componentes podem ser avaliadas individualmente ou em grupos apropriados. Por
exemplo, a repetitividade de uma medio pode servir como uma estimativa de
contribuio total da capacidade de variabilidade aleatria, devido a um nmero de
etapas num processo de medio. Da mesma forma, uma estimativa da tendncia
global e sua incerteza podem ser derivadas de estudos de materiais de referncia
certificados com matrizes combinadas e estudos de fortificao.
16.8 O tamanho das contribuies de incerteza pode ser estimado de diversas maneiras.
O valor de um componente de incerteza, associado a variaes aleatrias em fatores
de influncia, pode ser estimado pela medida da disperso dos resultados de um
nmero adequado de determinaes sob uma faixa de condies representativas.
(Em tais investigaes, o nmero de medies no deve ser normalmente inferior
a dez). Os componentes de incerteza originados do conhecimento imperfeito, por
exemplo, de uma tendncia ou tendncia em potencial, podem ser estimados com
base em um modelo matemtico, julgamento profissional fundamentado, comparaes interlaboratoriais internacionais, experimentos sobre sistemas modelo, etc.
Estes diferentes mtodos para estimativa dos componentes individuais de incerteza
podem ser vlidos.
IAL - 977
16.9
Quando as contribuies de incerteza forem estimadas em grupos, importante, apesar de tudo, registrar as fontes de incerteza que so consideradas como
sendo includas em cada grupo, e medir e registrar valores dos componentes
individuais de incerteza, quando disponveis, como uma verificao sobre a
contribuio do grupo.
16.10
Se forem usadas informaes provenientes de resultados de comparaes interlaboratoriais, essencial considerar incertezas originadas fora do escopo de
tais estudos. Por exemplo, valores nominais para materiais de referncia so tipicamente informados como uma faixa, e quando diversos laboratrios usam
o mesmo material de referncia num experimento colaborativo, a incerteza no
valor do material de referncia no includa na variao interlaboratorial. Da
mesma forma, experimentos interlaboratoriais utilizam tipicamente uma faixa
restrita de materiais de ensaio, normalmente homogeneizados com cuidado, de
modo que a possibilidade de falta de homogeneidade e diferenas na matriz, entre amostras reais e materiais de ensaio nos experimentos colaborativos, devem
ser tambm levadas em considerao.
16.11
Tipicamente, as contribuies da incerteza para resultados analticos podem incidir em quatro grupos principais:
i) Contribuies da variabilidade aleatria de curta durao, tipicamente estimada a partir de experimentos de repetitividade.
ii) Contribuies, tais como: efeitos do operador, incerteza de calibrao, erros
de escala graduada, efeitos do equipamento e do laboratrio, estimativas a
partir dos experimentos de reprodutibilidade entre laboratrios, intercomparaes internas, resultados de ensaios de proficincia ou por julgamento
profissional.
iii) Contribuies fora do escopo dos ensaios interlaboratoriais, tais como incerteza dos materiais de referncia.
6.12
978 - IAL
16.14
Essa expresso simplifica consideravelmente os dois casos mais comuns. Quando as quantidades de influncia ou resultados intermedirios so adicionados
ou subtrados para fornecer o resultado, a incerteza u igual raiz quadrada da
soma dos contribuintes dos componentes da incerteza ao quadrado, todos expressos como desvio-padro. Quando os resultados intermedirios forem combinados por multiplicao ou diviso, o desvio padro relativo (DPR) combinado calculado extraindo-se a raiz quadrada da soma dos DPRs ao quadrado,
para cada resultado intermedirio, e a incerteza padro u combinada calculada
a partir do DPR combinado e do resultado.
16.15
A incerteza global deve ser expressa como um mltiplo do desvio-padro calculado. O multiplicador recomendado 2, isto , a incerteza igual a 2u. Quando
as contribuies forem originadas de erros normalmente distribudos, este valor
ir corresponder aproximadamente a um intervalo de confiana de 95%.
16.16
No normalmente seguro estender este argumento a maiores nveis de confiana sem o conhecimento das distribuies envolvidas. De modo particular,
normalmente constatado que distribuies de incerteza experimentais so muito mais amplas no nvel de confiana de 99%, do que seria previsto por hipteses de normalidade.
16.17
IAL - 979
17.
17.1
17.2
Os padres de qualidade freqentemente favorecem o uso de padres ou mtodos colaborativamente testados, sempre que possvel. Embora isto possa ser
desejvel em situaes onde um mtodo tiver que ser amplamente usado, ou
definido em regulamento, algumas vezes um laboratrio pode ter um mtodo
prprio mais adequado. As consideraes mais importantes so de que o mtodo deva ser adequado ao fim pretendido, seja adequadamente validado e documentado, e fornea resultados que sejam rastreveis com relao s referncias
mencionadas em um nvel de incerteza apropriado.
17.3
17.4
Mtodos desenvolvidos internamente devem ser adequadamente validados, documentados e autorizados antes do uso. Onde eles estiverem disponveis, materiais de referncia com matrizes combinadas devem ser usados para determinar
qualquer tendncia, ou quando isto no for possvel, os resultados devem ser
comparados com outra(s) tcnica(s), de preferncia baseada(s) em diferentes
princpios de medio. A medio da recuperao de analito fortificado, gravimetricamente adicionado, medio dos brancos e o estudo de interferncias
e efeitos matriciais podem ser tambm usados para verificao da tendncia ou
recuperao imperfeita. A estimativa da incerteza deve fazer parte deste processo de validao e, alm de cobrir os fatores acima, deve abordar questes, tais
como a homogeneidade e estabilidade das amostras. Uma recomendao sobre
validao de metodologia apresentada na seo 18.
A documentao de mtodos deve incluir dados de validao, limitaes de aplicabilidade, procedimentos para controle da qualidade, calibrao e controle de
documentos. Um laboratrio documentando mtodos pode achar conveniente
adotar um formato comum, tal como a ISO 78-2: (Ref C10), que fornece um
modelo til. Alm disto, recomendaes sobre documentao de mtodos esto
17.5
980 - IAL
disponveis por outras fontes, tais como rgos de acreditao e rgos nacionais de normalizao.
17.6
Desenvolvimentos em metodologias e tcnicas iro requerer que os mtodos sejam alterados de tempos em tempos e, assim, a documentao do mtodo deve
estar sujeita a um controle adequado de documentos. Cada cpia do mtodo
deve apresentar o nmero/data da edio, autoridade da edio e nmero da
cpia. Deve ser possvel determinar a partir dos registros, qual a verso mais
atualizada de cada mtodo autorizado para uso.
17.7
Mtodos obsoletos devem ser descontinuados, mas devem ser guardados para
fins de arquivo e identificados claramente como obsoletos. A diferena de desempenho entre mtodos revisados e obsoletos deve ser estabelecida, de modo
que seja possvel comparar dados novos e antigos.
17.8
18
VALIDAO DO MTODO
18.1
Verificaes precisam ser realizadas para garantir que as caractersticas de desempenho de um mtodo sejam entendidas e para demonstrar que o mtodo seja
cientificamente coerente, sob as condies nas quais ele deve ser aplicado. Essas
verificaes so coletivamente conhecidas como validao. A validao de um
mtodo estabelece, atravs de estudos sistemticos de laboratrio, que o mtodo
adequado finalidade, isto , suas caractersticas de desempenho so capazes
de produzir resultados correspondentes s necessidades do problema analtico.
As principais caractersticas de desempenho incluem:
Robustez;
Preciso
* Em alguns campos da medio qumica, o termo recuperao usado para
descrever a tendncia total; em outros campos, recuperao usada em relao
a determinados elementos de tendncia.
As caractersticas acima so inter-relacionadas, muitas delas contribuindo para a
incerteza total de medio, e os dados gerados podem ser usados para avaliar a
incerteza de medio (ver seo 16 e ref C13) durante a validao.
A boa prtica na validao do mtodo descrita em um Guia EURACHEM
(Ref A3). Observe que no existe um acordo unnime sobre a interpretao de
alguns dos termos acima, nem sobre as convenes usadas na sua determinao.
Assim, ao mencionar dados de validao, recomendvel mencionar quaisquer
convenes adotadas.
18.2
18.3
18.4
Conforme acima indicado, existem diferentes opinies a respeito da terminologia e do processo de validao do mtodo. As explicaes a seguir complementam aquelas em outras partes deste guia e tem a inteno de servir como uma
diretriz, ao invs de um ponto de vista definitivo.
Seletividade de um mtodo se refere extenso at a qual ele pode determinar
analito(s) especfico(s) numa mistura complexa, sem interferncia dos outros
componentes na mistura. Um mtodo, que seja seletivo para um analito ou grupo de analitos, dito como sendo especfico. A aplicabilidade do mtodo deve ser
estudada usando-se vrias amostras, variando desde padres de medida pura at
18.5
982 - IAL
Faixa: Para a anlise quantitativa, a faixa de trabalho para um mtodo determinada pelo exame de amostras com diferentes concentraes de analito e determinao da faixa de concentraes para qual a incerteza admissvel possa ser
alcanada. A faixa operacional geralmente mais extensa do que a faixa linear,
que determinada pela anlise de um nmero de amostras de concentraes
de analito variveis e clculo da regresso a partir dos resultados, normalmente
usando o mtodo dos mnimos quadrados. A relao entre a resposta do analito
e a concentrao no precisa ser perfeitamente linear para que o mtodo seja
efetivo. Para mtodos apresentando boa linearidade, normalmente suficiente plotar uma curva de calibrao, usando-se padres de medida em 5 nveis
distintos de concentrao (mais o branco). Um maior nmero de padres de
medida ser necessrio quando a linearidade for baixa. Em anlise qualitativa
comum examinar amostras replicadas e padres de medida ao longo de uma
faixa de concentraes, para estabelecer em que concentrao um ponto de corte confivel pode ser traado entre deteco e no-deteco (ver tambm a seo
18.8).
18.7
Linearidade para mtodos quantitativos determinada pela medio de amostras com concentraes de analito abrangendo a faixa reivindicada do mtodo.
Os resultados so usados para obter uma reta por regresso com relao ao clculo de analito, usando-se o mtodo dos mnimos quadrados. conveniente
que um mtodo seja linear ao longo de uma faixa especfica, mas este no um
requisito absoluto. Quando a linearidade for inatingvel para um procedimento
especfico, deve ser determinado um algoritmo adequado para clculos.
18.8
Para mtodos qualitativos existe a possibilidade de haver um limite de concentrao abaixo do qual uma identificao positiva se torna no-confivel. A faixa
de respostas deve ser examinada pelo ensaio de uma srie de amostras e padres
de medida, constituda de brancos e de amostras contendo uma faixa dos nveis
do analito. Em cada nvel de concentrao, ser necessrio medir aproximadamente 10 replicatas. Uma curva de resposta de resultados de % positiva (ou
negativa) versus concentrao deve ser traada. A partir dessa curva ser possvel
determinar a concentrao limite, na qual o ensaio se torna no-confivel. No
IAL - 983
Exemplo:
Concentrao (g.g-1)
200
100
75
50
25
0
N de Replicaes
10
10
10
10
10
10
Positiva/Negativa
10/0
10/0
5/5
1/9
0/10
0/10
18.9
18.10
O limite de quantificao a menor concentrao de analito, que pode ser determinada com um nvel de incerteza aceitvel. Ele deve ser estabelecido usando-se uma amostra ou padro de medida apropriado, isto , ele normalmente
o ponto mais baixo na curva de calibrao (excluindo o branco). Ele no deve
ser determinado por extrapolao. Vrias convenes assumem o limite como
sendo de 5, 6 ou 10 desvios-padro da medio do branco.
18.11
Solidez: Algumas vezes tambm chamada de robustez. Quando diferentes laboratrios usam o mesmo mtodo, eles introduzem inevitavelmente pequenas
variaes no procedimento, que pode ter ou no uma influncia significativa
sobre o desempenho do mtodo. A solidez de um mtodo testada, pela introduo deliberada de pequenas alteraes no mtodo e exame das conseqncias.
Um grande nmero de fatores pode precisar ser considerado, mas devido ao fato
da maioria destes ter um efeito desprezvel, ser normalmente possvel variar
diversos deles de uma s vez. A solidez normalmente avaliada pelo laboratrio
de origem, antes que outros laboratrios colaborem.
18.12
A tendncia (algumas vezes chamada de recuperao) de um sistema de medio (mtodo) o erro sistemtico desse sistema de medio. As questes associadas estimativa da tendncia e recuperao so comentadas na seo 15.4.
Alm da avaliao da tendncia, importante estimar a incerteza de medio
984 - IAL
18.14
Observe que estas declaraes de preciso se aplicam anlise quantitativa. Anlises qualitativas podem ser tratadas de uma maneira ligeiramente diferente. A
anlise qualitativa efetivamente uma medio de sim/no para um determinado valor limite de analito. Para mtodos qualitativos a preciso no pode ser
expressa como um desvio padro ou um desvio padro relativo, mas pode ser
expressa como taxas de verdadeiro e falso positivo (e negativo). Essas taxas devem ser determinadas numa variedade de concentraes abaixo do nvel limite,
no nvel limite, e acima deste. Os dados obtidos por um mtodo de comparao
confirmatrio devem ser usados sempre que um mtodo apropriado para tal
fim estiver disponvel. Se um mtodo destes no estiver disponvel, amostras de
brancos, fortificadas ou no, podem ser analisadas.
% de falsos positivos = falsos positivos x 100/ total de negativos conhecidos
% de falsos negativos = falsos negativos x 100/ total de positivos conhecidos
18.15
componentes orgnicos desconhecidos por cromatografia gasosa, o uso de tcnicas confirmatrias essencial.
19.
CALIBRAO
19.1
Calibrao um conjunto de operaes que estabelece, sob condies especificadas, a relao entre valores de quantidades indicados por um instrumento
de medio ou sistema de medio, ou valores representados por um material
de referncia, e os valores correspondentes estabelecidos por padres (ver VIMB6). A maneira usual para realizar a calibrao submeter pores conhecidas
da quantidade (p. ex: usando-se um padro de medida ou material de referncia)
ao processo de medio e monitorar a resposta assim obtida. Informaes mais
detalhadas sobre materiais de referncia so apresentadas no prximo captulo.
19.2
Um programa geral para calibrao no laboratrio qumico deve ser criado para
assegurar que todas as medies que possuam um efeito significativo sobre os
resultados do ensaio ou calibrao sejam rastreveis a um padro de medida, de
preferncia um padro de medida nacional ou internacional, tal como um material de referncia. Quando apropriado e possvel, devem ser usados materiais
de referncia certificados. Quando padres de medida formalmente definidos
no estiverem disponveis, um material com propriedades e estabilidade adequadas deve ser selecionado ou preparado pelo laboratrio, e usado como um
padro de medida do laboratrio. As propriedades requeridas desse material
devem ser caracterizadas por ensaios repetidos, preferencialmente por mais de
um laboratrio e usando-se uma variedade de mtodos validados (ver ISO Guia
35: Ref C6).
19.3
amostra, tal como ponto de fulgor, o equipamento muitas vezes definido num
mtodo padro nacional ou internacional, e materiais de referncia rastreveis
devem ser usados para fins de calibrao, quando disponveis. Equipamentos
novos ou recentemente adquiridos devem ser verificados pelo laboratrio antes
do uso para garantir a conformidade com as especificaes, desempenho e dimenses requeridos.
19.3.3 Instrumentos, tais como cromatgrafos e espectrmetros, que necessitem de
calibrao como parte integrante de sua operao normal, devem ser calibrados
usando-se materiais de referncia de composio conhecida (provavelmente solues de produtos qumicos puros).
19.3.4 Em alguns casos, a calibrao de todo o processo analtico pode ser realizada
por comparao do resultado de medio de uma amostra com o resultado produzido por um material de referncia adequado, que foi submetido ao mesmo
processo analtico integral como a amostra. O material de referncia pode ser
uma mistura sinttica preparada no laboratrio a partir de materiais de pureza
conhecida (e de preferncia certificados) ou uma matriz comercial de material
de referncia certificado. Contudo, em tais casos, uma estreita combinao entre a amostra para ensaio e a matriz do material de referncia, em termos da
natureza da matriz, e a concentrao do analito precisa ser assegurada.
19.4
19.5
Procedimentos para a realizao de calibraes devem ser adequadamente documentados, quer como parte integrante de mtodos analticos especficos, quer
como um documento geral de calibrao. A documentao deve indicar como
realizar a calibrao, a freqncia de calibrao necessria, e a ao a ser tomada
no caso de falha na calibrao. Intervalos de freqncia para recalibrao de
padres de medida fsica devem ser tambm indicados.
Amostra
Material p/ CQ
|
Poro de Ensaio
|
-- |MR da Matriz
|
|
|
|Branco
Digesto
|
Extrao
|
Derivao
|Amostra Fortificada
Separao
MedioMR p/ Calibrao
Clculo do ResultadoFatores
20.
20.1
Uma srie de Guias ISO relativa aos materiais de referncia est disponibilizada
(Ref C1-C6).
20.2
20.3
20.4
Para muitos tipos de anlises, a calibrao pode ser realizada utilizando-se materiais de referncia preparados no laboratrio, a partir de produtos qumicos
de pureza e composio conhecidas. Alguns produtos qumicos podem ser adquiridos com um certificado do fabricante declarando a pureza do material. Alternativamente, produtos qumicos com pureza declarada, mas no certificada,
podem ser adquiridos de fornecedores idneos. Qualquer que seja a fonte,
responsabilidade do usurio estabelecer que a qualidade de tais materiais seja satisfatria. Algumas vezes, ensaios adicionais precisaro ser realizados pelo laboratrio. Normalmente, um novo lote de um produto qumico deve ser confronIAL - 989
tado com o lote anterior. De maneira ideal, todos os produtos qumicos a serem
usados para fins de material de referncia devem ser adquiridos de fabricantes
com sistemas comprovados de GQ. Contudo, um sistema de GQ no garante
automaticamente a qualidade dos produtos do fabricante, e os laboratrios devem tomar todas as medidas razoveis para confirmar a qualidade de materiais
crticos. O controle de impurezas importante, especialmente para a anlise de
traos (residual), onde eles podem causar interferncias. Ateno especial deve
ser dada s recomendaes dos fabricantes sobre a armazenagem e prazo de
validade. Alm disso, necessrio cautela, j que os fornecedores nem sempre
disponibilizam informaes sobre todas as impurezas.
20.5
O uso de materiais de referncia apropriados pode propiciar rastreabilidade essencial e permitir que os analistas demonstrem a preciso dos resultados, calibrem equipamentos e mtodos, monitorem o desempenho do laboratrio e
validem mtodos, permitindo, ainda, a comparao de mtodos atravs do uso
como padres de transferncia (de medida). O seu uso fortemente encorajado,
sempre que apropriado.
20.6
20.7
A composio do material de referncia certificado deve ser a mais prxima possvel da composio das amostras. Quando existirem interferncias de matriz,
um mtodo deve ser idealmente validado usando-se um material de referncia
de matriz combinada, certificado de uma maneira confivel. Se um material
deste tipo no estiver disponvel, pode ser aceito o uso de uma amostra fortificada com o material de referncia.
20.8
990 - IAL
valor certificado (ver seo 16). A Guia ISO 34 (Ref C5) e um Guia ILAC (Ref
B15) lidam com critrios para a competncia dos provedores de materiais de
referncia. Esses guias podem constituir a base para uma futura avaliao de
provedores de materiais de referncia.
20.9
Materiais de referncia e materiais de referncia certificados devem ser claramente rotulados, de forma que sejam identificados sem ambigidades e relacionados
com os respectivos certificados ou outra documentao anexa. Informaes devem ser disponibilizadas, indicando o prazo de validade, condies de armazenamento, aplicabilidade e restries de uso. Materiais de referncia preparados
dentro do laboratrio, p. ex. como solues, devem ser tratados como reagentes
para fins de rotulagem, ver seo 14.2.
20.10
21.
21.1
21.2
21.3
CQ Interno: Este pode assumir uma variedade de formas, incluindo o uso de:
brancos; padres de medida; amostras fortificadas; amostras cegas; anlises de
replicatas e amostras de CQ. O uso de grficos de controle recomendado,
particularmente para o monitoramento das amostras de controle de CQ (Ref
C20-22).
IAL - 991
992 - IAL
21.4
21.5
22.
22.1
Em laboratrios de ensaios qumicos, computadores possuem uma ampla variedade de usos, incluindo:
controle de condies ambientais crticas;
monitoramento e controle do inventrio;
programao de calibraes e manutenes;
controle de estoque de reagentes e padres de medida;
projeto e desempenho de experimentos estatsticos;
programao de amostras e monitorao da produo do trabalho;
gerao de grficos de controle;
monitoramento de procedimentos de ensaio;
controle da instrumentao automatizada;
captura, armazenagem, recuperao, processamento de dados, manual ou
automaticamente;
correspondncia das amostras com os dados em biblioteca;
gerao de relatrios de ensaio,
IAL - 993
processamento de texto;
comunicao.
22.2
Interfaces e cabos fornecem conexes fsicas entre diferentes partes do computador ou entre diferentes computadores. importante que as interfaces e cabos
sejam escolhidos para se adequarem aplicao especfica, visto que eles podem
afetar seriamente a velocidade e a qualidade da transferncia dos dados.
22.3
22.4
A validao inicial deve verificar o maior nmero possvel de aspectos da operao de um computador. Verificaes similares devem ser realizadas se o uso do
computador for alterado, ou aps manuteno, ou reviso do software. Quando
um computador for utilizado para a coleta e processamento de dados associados
a ensaios qumicos, para validao desta funo, geralmente suficiente assumir
sua correta operao se o computador produzir respostas previstas para a entrada de parmetros conhecidos. Programas de computador que efetuam clculos
podem ser validados pela comparao com resultados calculados manualmente. Deve ser notado que algumas falhas podero ocorrer somente quando um
grupo particular de parmetros for inserido. Em ensaios qumicos, verificaes
adequadas sobre as funes de coleta e manipulao de dados podem ser feitas
utilizando-se um Material de Referncia Certificado para a validao inicial,
usando-se, ento, um padro secundrio de medida como material de controle
de qualidade para verificaes repetitivas regulares. Quaisquer recomendaes
feitas pelo fabricante devem ser levadas em considerao. O procedimento de
validao usado para um sistema em particular e quaisquer dados registrados
durante a validao devem ser documentados. Pode ser difcil validar esses sistemas de forma isolada do instrumento analtico que produz o sinal original. Normalmente, todo o sistema validado de uma s vez, atravs do uso de padres
de medida qumica ou materiais de referncia. Essa validao normalmente
aceitvel. conveniente ilustrar a validao usando-se exemplos de aplicaes
tpicas:
23.1
23.2
23.3
O programa de auditoria e anlise crtica normalmente coordenado pelo gerente da qualidade do laboratrio, que responsvel por assegurar que os auditores tenham o treinamento correto, orientao e autoridade necessria para
conduo da auditoria. As auditorias so normalmente realizadas por pessoal
do laboratrio que trabalha fora da rea em exame. Isto, claro, nem sempre
possvel onde o grupo de trabalho reduzido.
23.4
As auditorias podem ser realizadas de duas maneiras bsicas. Na auditoria horizontal, o auditor ir examinar em detalhes aspectos individuais do sistema da
qualidade, por exemplo, calibrao ou relatrios. Na auditoria vertical, o auditor ir selecionar uma amostra e acompanhar seu andamento no laboratrio,
desde o recebimento at a disposio final, examinando todos os aspectos do
IAL - 997
23.6
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
A seo a seguir apresenta Referncias teis (Subsees A, B, C estas so referidas no
texto endereos de Websites (D), e a Bibliografia (E)).
A.
1.
2.
Quantifying Uncertainty in Analytical Measurement: 2000 (CITAC/EURACHEM) (ver tambm site - Ref D12)
3.
4.
Harmonised Guidelines for the Use of Recovery Information in Analytical Measurement: 1998 (EURACHEM/IUPAC/ISO/A.O.A.C.I)
Selection, Use & Interpretation of Proficiency Testing (PT) Schemes by Laboratories: 2000 (EURACHEM)
5.
6.
998 - IAL
7.
B.
REFERNCIAS BSICAS
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
The selection and use of reference materials - A basic guide for laboratories and
accreditation bodies - draft EEEE/RM 2002 - prepared by B King 2000
10. Position of third party quality assessment of reference materials and their production EEEE/RM/069 rev 1: Draft 2001
11. APLAC Policy and Guidance on the Estimation of Uncertainty of Measurement in
Testing Draft April 2002
12. ILAC P10: 2002 ILAC Policy on Traceability of Measurements Results
13.
Specification
14. ILAC G9: 1996 Guidelines for the Selection and Use of Certified Reference Materials
15. ILAC G12: 2000 Guidelines for the Requirements for the Competence of Reference Material Producers
16. ILAC G13: 2000 Guidelines for the Requirements for the Competence of Providers of Proficiency Testing Schemes
17. ILAC G15: 2001 Guidance for Accreditation to ISO/IEC 17025
18. ILAC G17: 2002 Guidance for Introducing the Concept of Uncertainty of Measurement in Testing in Association with the Application of the Standard ISO/IEC
17025
Nota: Outras Diretrizes produzidas por rgos Regionais de Acreditao so tambm
relevantes aqui (ver endereos de Websites na Seo D, ns 7, 8 e 9 abaixo). Alm disto,
a maioria dos rgos nacionais de acreditao publicam diretrizes fundamentando seus
requisitos (normalmente baseados em normas ISO).
C.
1.
ISO Guide 30:1992 Terms and definitions used in connection with reference materials
2.
3.
ISO Guide 32:1997 Calibration in analytical chemistry and use of certified reference materials
4.
5.
ISO Guide 34:2000 General requirements for the competence of reference material producers
ISO Guide 35:1989 (under revision) Certification of reference materials -- General
and statistical principles
6.
7.
1000 - IAL
ISO/IEC Guide 58: 1993 Calibration and testing laboratory accreditation systems
general requirements for operation and recognition. (To be replaced by ISO/IEC
17011 General requirements for bodies providing assessment and accreditation)
9.
10. ISO 78-2:1999 Chemistry -- Layouts for standards -- Part 2: Methods of chemical
analysis
11. ISO/DIS 10576-1:2001 Statistical Methods - Guidelines for the evaluation with
specified requirements Pt 1. General principles
12. ISO 3534 Statistics -- Vocabulary and symbols -- Parts 1, 2 and 3 (1999)
13. ISO/DTS 21748-2002 (under preparation) Guide to the use of repeatability and
reproducibility and trueness estimates in measurement uncertainty estimation.
14. ISO 5725-1:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results -- Part 1: General principles and definitions ISO 5725-1:1994/Cor 1:1998
15. ISO 5725-2:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results -- Part 2: Basic method for the determination of repeatability and reproducibility of a standard measurement method
16. ISO 5725-3:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results -- Part 3: Intermediate measures of the precision of a standard measurement
method
17. ISO 5725-4:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results -- Part 4: Basic methods for the determination of the trueness of a standard
measurement method
18. ISO 5725-5:1998 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
results -- Part 5: Alternative methods for the determination of the precision of a
standard measurement method
19. ISO 5725-6:1994 Accuracy (trueness and precision) of measurement methods and
IAL - 1001
1.
CITAC - www.citac.ws
2.
EURACHEM - www.eurachem.org
3.
ISO - www.iso.ch
4.
(ISO)REMCO - www.iso.org/remco
5.
6.
A.O.A.C. - www.A.O.A.C..org
7.
ILAC - www.ilac.org
8.
APLAC - www.ianz.govt.nz/aplac
9.
EA - www.european-accreditation.org
BIBLIOGRAFIA
1002 - IAL
1.
2.
3.
4.
Enell, J. W., Which Sampling Plan Should I Choose?, Journal of Quality Technology 1984, 16(3), 168-171
(Enell, J. W., Que Plano de Amostragem Devo Escolher?, Jornal de Tecnologia
da Qualidade 1984, 16(3), 168-171)
5.
Garfield, F. M., Sampling in the Analytical Scheme, J. Assoc. Off. Anal. Chem.
1989, 72(3), 405-411
(Garfield, F. M., Amostragem no Esquema Analtico, J. Assoc. Profissional de
Qum. Anal. 1989, 72(3), 405-411)
6.
7.
8.
9.
Horwitz, W., Design, conduct and interpretation of method performance stuIAL - 1003
1004 - IAL
17. Prichard, E., Quality in the Analytical Chemistry Laboratory, ACOL, Wiley
1997
(Prichard, E., Qualidade no Laboratrio de Qumica Analtica, ACOL, Wiley
1997)
18. Stoeppler, Marcus (Ed), Sampling and sample preparation: practical guide for
analytical chemists; Berlin: Springer Verlag, 1997
(Stoeppler, Marcus (Ed), Amostragem e preparao de amostras: guia prtico para
qumicos analticos; Berlim: Springer Verlag, 1997)
19. Taylor, B. N., Kuyatt, C. E., Guidelines for evaluating and expressing uncertainty
in NIST measurement results, NIST technical note 1297, 1994, National Institute
of Standards and Technology
(Taylor, B. N., Kuyatt, C. E., Diretrizes para avaliao e divulgao da incerteza em
resultados de medidas NIST, nota tcnica NIST 1297, 1994, Instituto Nacional de
Normas e Tecnologia)
20. Taylor, J. K., Quality Assurance of Chemical Measurements, Lewis Publishers,
Michigan, 1987
(Taylor, J. K., Garantia da Qualidade de Medies Qumicas, Lewis Publishers,
Michigan, 1987)
21. UK DTI VAM Programme General Guidelines for use with a protocol for QA
of Trace Analysis 1998
(Programa UK DTI VAM Diretrizes Gerais para uso com um protocolo para
GQ de Anlise Residual 1998)
22. Youden, W. J., and Steiner, E. H., Statistical manual of the Association of Official Analytical Chemists. Statistical techniques for collaborative tests. Planning and analysis of
results of collaborative tests. Washington DC: A.O.A.C., 1975
(Youden, W. J., e Steiner, E. H., Manual estatstico da Associao Profissional de Qumicos Analticos. Tcnicas estatsticas para ensaios cooperativos. Planejamento e anlise de
resultados dos ensaios cooperativos. Washington DC: A.O.A.C., 1975)
SIGLAS
Seguem alguns acrnimos comuns:
IAL - 1005
Pessoal
i) O pessoal possui a combinao adequada de instruo, qualificaes acadmicas
ou vocacionais, experincia e treinamento prtico para o servio desempenhado.
ii) O treinamento prtico realizado segundo critrios estabelecidos, os quais,
sempre que possvel, so objetivos. So mantidos registros atualizados dos treinamentos.
1006 - IAL
Ambiente
i) O ambiente do laboratrio adequado para o trabalho realizado.
ii) As instalaes e utilizades do laboratrio so adequados para o trabalho realizado.
iii) Existe separao adequada entre trabalhos potencialmente conflitantes.
iv) As reas do laboratrio so suficientemente limpas e organizadas, para garantir
que a qualidade do trabalho realizado no seja comprometida.
v) Existe separao adequada na recepo de amostras, preparao, depurao, e
reas de medio, para garantir que a qualidade do trabalho realizado no seja
comprometida.
vi) O cumprimento dos regulamentos de segurana consistente com os requisitos
da norma de gerenciamento da qualidade.
3.
Equipamento
i)
ii)
iii)
iv)
Equipamentos crticos, p. ex: balanas, termmetros, vidrarias, cronmetros, pipetas etc. so individualmente identificados, corretamente calibrados
(com rastreabilidade adequada), os certificados correspondentes ou outros
registros demonstrando a rastreabilidade a padres de medida nacionais de
medio esto disponveis.
v)
vi)
Verificaes de desempenho e procedimentos de calibrao dos instrumentos so documentados e disponibilizados aos usurios.
vii) Procedimentos de calibrao e verificaes de desempenho de instrumentos so realizados em intervalos apropriados e mostram que a calibrao
mantida e o desempenho dirio aceitvel. Aes corretivas apropriadas so
tomadas, quando necessrio.
viii) Registros de calibrao, verificaes de desempenho e aes corretivas so
mantidas.
4.
Mtodos e Procedimentos
i)
Mtodos desenvolvidos internamente so plenamente documentados, adequadamente validados e autorizados para uso.
ii)
iii)
iv)
v)
vi)
1008 - IAL
iv)
v)
vi)
7.
8.
Controle de Qualidade
i)
ii)
iii)
iv)
v)
vi)
Existe um sistema eficaz para vinculao do desempenho nos ensaios de proficincia com o controle de qualidade dirio.
Existe um sistema eficaz documentado para o recebimento de amostras, relacionando essas amostras s anlises requisitadas, mostrando o andamento da
anlise, emisso de relatrio, e destinao final da amostra.
ii)
Registros
IAL - 1009
9.
i)
ii)
iii)
Quando um erro for corrigido a alterao rastrevel pessoa que fez a correo.
iv)
Relatrios de Ensaio
i)
10. Diversos
i)
Procedimentos documentados esto implementados para lidar com reclamaes e dvidas, e falhas do sistema.
ii)
iii)
iv)
v)
1010 - IAL
APNDICE B
Intervalos de Calibrao e Verificaes de Desempenho.
B1.
Freqncia de Verificao
Depende do uso
Hidrmetros
(em operao)
Anualmente
(d)
Hidrmetros
(de referncia)
5 anos
(e) Barmetros *
5 anos
Um ponto
Exatido
(f )
Cronmetros
(ver nota)
2 anos ou menos,
dependendo do uso
(g)
Termmetros
(de referncia)
5 anos
(h) Termmetros
Parmetros a serem
Verificados
Linearidade, Ponto zero,
Exatido (usando pesos
calibrados)
Exatido, Preciso
(pipetas/buretas)
Calibrao de um ponto
contra
hidrmetro de referncia
Calibrao de um ponto
usando-se padro de medida
de densidade especfica
conhecida
Anualmente, dependendo do
uso
Nota: Instrumentos assinalados com * normalmente sero calibrados em um laboratrio de calibrao acreditado, mas devem, pelo menos, apresentar rastreabilidade a padres
de medida nacionais.
IAL - 1011
Os seguintes aspectos dos instrumentos abaixo listados podem precisar ser verificados, dependendo do mtodo:
B2.1
B2.2
B2.3
B2.4
1012 - IAL
i)
ii)
iii)
iv)
v)
ii)
ii)
B2.5
B2.6
i)
Calibrao peridica do sistema sensor de temperatura usando-se termmetro ou pirmetro calibrados, apropriados.
ii)
iii)
iv)
Espectrmetros e espectrofotmetros, incluindo absoro atmica, determinao fluorimtrica, plasma induzido acoplado emisso tica, infravermelho , luminescncia,
massa, ressonncia magntica nuclear, fluorescncia ultra-violeta/visvel e de raios X:
i)
ii)
Estabilidade da fonte.
iii)
iv)
Relao sinal/rudo.
v)
Calibrao do detetor (massa, ppm, comprimento de onda, freqncia, absorbncia, transmitncia, largura de banda, intensidade etc.).
vi)
Microscpios:
i)
Poder de resoluo.
ii)
iii)
B2.7
Amostradores automticos:
i)
Exatido e preciso dos sistemas sncronos.
IAL - 1013
ii)
iii)
APNDICE C
Comparao entre ISO/IEC 17025:1999 e ISO/IEC Guia: 1990 (Esta tabela reproduzida da ILAC G15:2001, Diretrizes para Acreditao de acordo com a ISO/IEC 17025)
ISO/IEC
17025
Clusula
ISO/IEC Guia 25
1.1
1.1
1.2
1.3
1.4
1.3
1.5
7.6 Nota
1.6
Introduo
Referncias normativas
Termos e definies
4.1.1
4.1
4.1.2
1.2
4.1.3
4.1
Requisitos gerenciais
Organizao
1014 - IAL
4.1.4
4.1.5 (a)
4.2 a)
4.1.5 (b)
4.2 b)
4.1.5 (c)
4.2 i)
4.1.5 (d)
4.2 c)
4.1.5 (e)
4.1.5 (f)
4.2 d)
4.1.5 (g)
4.2 e)
4.1.5 (h)
4.2 f)
ISO/IEC
17025
Clusula
ISO/IEC Guia 25
4.1.5 (i)
4.2 g)
4.1.5 (j)
4.2 h)
Sistema da qualidade
Controle de documentos
4.2.1
5.1
4.2.2
5.1, 5.2 a)
4.2.2 (a)
5.1
4.2.2 (b)
5.2 a)
4.2.2 (d)
5.2 a)
4.2.2 (e)
5.1
4.2.3
5.2
4.2.4
5.2 n)
4.3.1
5.2 e)
4.3.2.1
5.2 d)
4.3.2.2 (a)
5.1, 5.2 d)
4.3.2.2 (b)
5.2 d)
4.3.2.2 (c)
5.2 d)
4.3.2.2 (d)
5.2 d)
4.3.2.3
5.2 d)
4.3.3.1
5.2 d)
4.3.3.2
5.2 d)
4.3.3.3
5.2 d)
4.3.3.4
5.2 d)
4.4.1
5.2 i)
4.4.1 (a)
5.2 i)
4.4.1 (b)
5.2 i)
4.4.1 (c)
5.2 i)
4.4.2
5.2 i)
4.4.3
5.2 i)
4.4.4
5.2 i)
4.4.5
5.2 i)
4.5.1
14.1
4.5.2
14.1
ISO/IEC
17025
Clusula
ISO/IEC Guia 25
4.5.3
4.5.4
14.2
IAL - 1015
4.6.1
10.8, 15.2
4.6.2
15.1
4.6.3
4.6.4
15.3
Atendimento ao cliente
4.7
Reclamaes
4.8
16.1
Ao corretiva
Ao preventiva
Controle de registros
Auditorias internas
4.9.1
5.2 o)
4.9.1 (a)
5.2 o)
4.9.1 (b)
5.2 o)
4.9.1 (c)
5.2 o)
4.9.1 (d)
5.2 o) , 13.6
4.9.1 (e)
5.2 o)
4.9.2
16.2
4.10.1
16.2
4.10.2
16.2
4.10.3
16.2
4.10.4
16.2
4.10.5
16.2
4.11.1
4.11.2
4.12.1.1
12.1
4.12.1.2
12.2
4.12.1.3
12.2
4.12.1.4
10.7 e)
4.12..2.1
12.1
4.12..2.2
4.12..2.3
4.13.1
5.3
4.13.2
5.3
4.13.3
5.5
ISO/IEC
17025
Clusula
ISO/IEC Guia 25
4.13.4
4.14.1
5.4
4.14.2
5.5
5.1.1
5.1.2
5.2.1
6.1
5.2.1
6.2
5.2.3
5.2.4
5.2 e)
5.2.5
6.3
5.3.1
7.1, 7.2
5.3.2
7.3
5.3.3
7.4
5.3.4
7.5
5.3.5
7.6
5.4.1
5.4.2
10.3
5.4.3
5.4.4
10.4
5.4.5.1
5.4.5.2
10.4
5.4.5.3
5.4.6.1
10.2
5.4.6.2
10.2
5.4.6.3
5.4.7.1
10.6
5.4.7.2
10.7
5.4.7.2 (a)
10.7 b)
5.4.7.2 (b)
10.7 c)
5.4.7.2 (c)
10.7 d)
Requisitos tcnicos
Generalidades
Pessoal
ISO/IEC
17025
Clusula
5.5.1
5.5.2
ISO/IEC Guia 25
8.1
9.1
IAL - 1017
Amostragem
1018 - IAL
5.5.3
5.5.4
5.5.5 (a)
5.5.5 (b)
5.5.5 (c)
5.5.5 (d)
5.5.5 (e)
5.5.5 (f )
5.5.5 (g)
5.5.5 (h)
5.5.6
5.5.7
5.5.8
5.5.9
5.5.10
5.5.11
5.5.12
5.6.1
5.6.2.1.1
5.6.2.1.2
5.6.2.2.1
6.5.2.2.2
5.6.3.1
5.6.3.2
5.6.3.3
5.6.3.4
5.7.1
5.7.2
5.7.3
5.8.1
10.1
8.4 a)
8.4 b)
8.4 d)
8.4 f )
8.4 g)
8.4 h)
8.4 i)
8.2
8.2
8.3
9.1
9.2
9.3
9.2
9.3
9.4, 9.5
9.7
9.6
10.5
11.4
ISO/IEC
17025
Clusula
ISO/IEC Guia 25
5.8.2
11.1
5.8.3
11.2
5.8.4
11.3
5.9
5.6, 5.6 a)
5.9 (a)
5.6 c)
5.9 (b)
5.6 b)
5.9 (c)
5.6 d)
5.9 (d)
5.6 e)
5.9 (e)
5.6 f )
5.10.1
13.1
5.10.2 (a)
13.2 a)
5.10.2 (b)
13.2 b)
5.10.2 (c)
13.2 c)
5.10.2 (d)
13.2 d)
5.10.2 (e)
13.2 h)
5.10.2 (f )
5.10.2 (g)
13.2 g)
5.10.2 (h)
13.2 i)
5.10.2 (i)
13.2 k)
5.10.2 (j)
13.2 m)
5.10.2 (k)
13.2 n)
5.10.3.1
13.2 j)
5.10.3.1 (a)
5.10.3.1 (b)
13.2 l)
5.10.3.1 (c)
5.10.3.1 (d)
5.10.3.1 (e)
5.10.3.2 (a)
5.10.3.2 (b)
--
5.10.3.2 (c)
--
5.10.3.2 (d)
ISO/IEC
17025
Clusula
ISO/IEC Guia 25
5.10.3.2 (e)
--
5.10.3.2 (f)
IAL - 1019
1020 - IAL