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Fundamentos
Produo de microrganismos
fermentao
Processo a jusante
Purificao do produto
Effluente (lixo)
PRODUTO
Crescimento microbiano
Matemtica do crescimento batch
E sistema semi-continuo
Metabolitos primrios
Substrato para
crescimento
clulas
lcool
acar
Clulas
Metabolito primrio
O crescimento s ocorre com produo de energia,
a produo de etanol ocorre em paralelo
Metabolitos secundrios
Substrato para
crescimento
clulas
Penicilina
Clulas
Metabolito
secundrio
Metabolito
primrio
acar
estacionria
Crescimento microbiano
Crescimento = aumento do nmero de clulas numa
populao ou da massa
Taxa de crescimento = modificao do nmero de clulas
(ou massa) por unidade de tempo
Tempo de gerao = o tempo necessrio para uma clula
dar origem a duas (duplicar a populao)
Taxa de crescimento no tempo x = proporcional ao nmero
de clulas (ou massa) presente nesse tempo
Crescimento exponencial = quando o nmero de clulas
duplica a cada unidade de tempo esto em crescimento
balanceado
Crescimento exponencial
dX =X
dt
lnX=lnX0+ (t)
X=X0e (t)
g= ln 2 = 0.693
Tempo de gerao
k=1
g
=0.693k
Operao batch
1. produce biomass
2. produce primary
metabolites
3. produce
secondary
metabolites
Limitaes ao crescimento
Can be explored by growing the organism in the
presence of different initial substrate concentrations
and plotting the mass concentration at stationary phase
against the initial substrate concentration.
x = Y(SR-s)
(3)
x
[biomass] produced
Y
rendimento (g biomass produced g-1
substrato consumido)
SR
initial substrate concentration, and
s
residual substrate concentration
Concentrao de biomassa
na fase estacionria
= max s/(Ks + s)
s
Ks
is the substrate utilization
constant ( is a measure of the affinity
of the organism for its substrate)
S when = max/2
Cintica de Monod
max
Ks
o m taxa especifica
de crescimento
maxima
E a Ks constante de
utilizao do
substrato
Yp/x
biomass)
dp/dx = Yp/x
(6)
rendimento do produto (g product g-1
Fed-Batch Fermentation
Operao semi-continua
2.
3.
4.
Increase
Biomassa
Volume
D=F/V
D=taxa de diluio h-1,
F=fluxo(L/h)
V=volume do reactor (L)
Substrato
Produto
Homeostasia a manuteno da
integridade intracelular
pH baixo, presena de substancias
txicas e a acumulao de produtos do
metabolismo levam reduo do
rendimento em biomassa
O ATP direcionado para o transporte
activo de substancias =
desacoplamento metablico
the substrate is inhibitory and thus low substrate levels must be maintained or
the cells will be inhibited. For example:
Vinegar Production
Amylase Production
http://userpages.umbc.edu/~gferre1/outline.html
Amylase production
Amylases are produced by fungi and bacteria from a starch
based medium. High levels of starch will increase the
medium viscosity and thus decrease mass transfer rates and
increase agitation costs.
High [starch]
High medium viscosity
Low mass transfer rates
High energy consumption
Low [starch]
Lower medium viscosity
Higher mass transfer rates
Lower energy consumption
Vinegar production
The main flavouring component of vinegar is acetic acid. The acetic acid is produced from
the oxidation of ethanol:
Ethanol is more toxic to cells than the acetic and pH.
In fact the acetic acid bacteria are able to metabolize at pH values of less than 3 and can
produce up to 180 g.l-1 of acetic acid.
Under these conditions however, ethanol concentrations of less than 2%w/v will inhibit the
cells. By slowly adding the alcohol with a fed-batch reactor, low ethanol concentrations can
be maintained in the reactor.
High [ethanol]
Low [ethanol]
Inhibition of cell growth
Low acetic acid yields
High acetic acid yields
Ethanol is typically added as 96% w/w ethanol, but boutique vinegars are made from
port or rice wines. The lower alcohol concentration in the feed, then the greater will be
the dilution of the final product, due to the higher water content entering the reactor.
Thus the use of 96% w/w ethanol is preferred.
As the acetic acid accumulates and the pH falls, cell growth ceases and acetic
acid production becomes non-growth associated. The process therefore cannot
be performed in a continuous reactor as they would be washed out.
Low [glucose]
Low lactate yields
High biomass yields
High product yields
Low [sugar]
Low ethanol yields
High biomass yields
Antibiotic production
Most microbial derived antibiotics such as penicillin and cephalosporins are produced in a
two stage process. In the first stage, the cells are grown in a batch manner. After the
biomass concentration has reached a maximum, the process is switched to a fed-batch
mode.
The reason for this is that in general, antibiotic production occurs maximally when cell
growth is very slow or ceases.
By using a fed-batch reactor, substrates and nutrients can be supplied at a slow rate in
quantities sufficient for antibiotic formation and cell maintenance but insufficient to
promote high cell growth rates. This in effect "extends the stationary phase".
No extension of stationary phase
Low antibiotic yields
Crescimento em fermentador
Matemtica do crescimento em
fermentador
Cultura continua
um sistema aberto, de volume constante
ao qual meio adicionado constantemente e
de onde continuamente removido lquido
Constantes quando em equilbrio:
Nmero de clulas
Estado do nutriente (meio)
Steady State
O fermentador
Taxa de diluio
Concentrao do nutriente limitante
Controlo independente da taxa de
crescimento e da taxa de produo
Taxa de crescimento taxa de diluio
Taxa de produo concentrao do nutriente
limitante
Urina de cavalo
Where
X is the concentration of biomass in the fermenter and effluent
S is the concentration of substrate in the fermenter and effluent
P is the concentration of product in the fermenter and effluent
Xo is the concentration of biomass in the fermenter and effluent
So is the concentration of substrate in the fermenter and effluent
Po is the concentration of product in the fermenter and effluent
F is the feed and effluent flow rate
V is the liquid volume in the fermenter
S
Ks+S
max
1/2max
Ks
Concentrao de substrato
No existe porque:
necessrio tempo para mover as
substncias
Em grandes reactores existem zonas
mortas sem mistura
So sistemas quadrados
Cultivo de clulas
No existe porque:
Existe sempre difuso
So sistemas mais
longos que largos
Produo de enzimas
Taxa de diluio D = F
V
Em equilbrio = D
rendimento
dX = X DX
dt
dX = crescimento sada
dt
dS = Sr D SD X
dt
Y
X=concentrao do organismos
S = Ks (
D )
max - D
Estas equaes tm as constantes Sr, Y, Ks e max.
Uma vez conhecidos os seus valores, os valores de X e S podem
ser calculados para qualquer taxa de diluio
Em equilibrio
Se = D
Monod model
Estas equaes aplicam-se apenas ao clculo de produtos associados ao
crescimento
Matemtica do crescimento
Tempo de residencia
Steady-state Equations
=D
Washout
X
=D
Processo de fermentao
Fermentadores
Processo de fermentao
Solid-sate fermentation (proc. Koji)
Difcil controlo de contaminao; temperatura;
arejamento; humidade
Bioreactores
Tanque com agitao (impeller)
o mais utilizado.
adequado para:
fermentaes que envolvam miclio de fungo
Bio-polimeros de elevada viscosidade
Temperatura
Destruio trmica
Refrigerao
Actividade da gua
Actividade da gua
Potencial redox
Radiao
Presso hidrosttica
Controlo de microorganismos
temperatura
Temperatura mnima
Temperatura ptima
Acima da temperatura ptima
Coeficiente de temperatura = relao entre
o aumento da velocidade de reaco e a
temperatura
1.5 a 2.5 por cada 10C
Destruio trmica
Segue uma cintica exponencial
Actividade da gua
actividad de agua a la relacin entre la
presin de vapor de agua del substrato de
cultivo (P) y la presin de vapor de agua
del agua pura (P0)
El valor de la actividad de agua nos da una
idea de la cantidad de agua disponible
metablicamente
Scale-up
Scale-up
= transferir o processo de uma escala de laboratrio
para uma escala industrial
Parmetros essenciais
Energia, O2 temperatura
Processo de scale-up
1. Experincias em batch
2. Fermentador de laboratrio (1-10L)
A extrapolao (scale-up)
SCALE-UP CONSIDERATIONS
Careers
Drug Discovery Positions - Chemistry and Biology
Produo de microrganismos
fermentao
Processo a jusante
Purificao do produto
Effluente (lixo)
PRODUTO
Eficincia
Reproducibilidade
Recuperao em segurana
Maximizao da quantidade
Minimizao dos custos do produto alvo
Bioseparaes
Recuperao e purificao de protnas e produtos de fluidos
so uma percentagem relevante do custo de produo:
10 a 80% entre alimentos/aditivos e enzimas terapeuticas
Trs categorias :
Alta produtividade - baixa resoluo
Baixa produtividade alta resoluo
Alta produtividade alta resoluo
Esquema de separao normal: RIPP
Remoo, Isolamento, Purificao e Polimento
Reduo do volume
Concentrao por enriquecimento
Remoo de impurezas especficas
Preveno da catalise
Recomendaes especficas (farmacolgicas)
Aumento da estabilidade proteica
Reduo da proteolisis
Caracteristicas da protenas
Os produtos esto presentes em baixas quantidades
Presentes com um nmero elevado de impurezas algumas
muito semelhantes
So termolabil
So senciveis a condies como pH e sal
So senciveis a substancias qumicas como solventes e
surfactantes
Normalmente os produtos tm de ter elevada qualidade
Implica condies de separao eficientes mas muito
suaves
3-sedimentao
Aula 7
Produo industrial de penicilinas e
tetraciclinas