REVISTA BRASILEIRA DE HEMATOLOGIA E HEMOTERAPIA

Reviso / Review

A telomerase em clulas-tronco hematopoticas

Telomerase in hematopoietic stem cells

Silvana Perini1 Lcia M. R. Silla2 Fabiana M. Andrade3

A proliferao das clulas-tronco hematopoticas sofre a perda dos telmeros a cada diviso celular. Alguns autores discordam quanto perda ou no do potencial proliferativo e capacidade de auto-renovao das clulas mais diferenciadas. Revisaremos aqui o papel da telomerase na biologia do sistema hematopotico, na diferenciao normal ou maligna, assim como no envelhecimento das clulas-tronco hematopoticas. A constante renovao celular requerida pela hematopoese confere s clulas-tronco embrionrias, assim como maioria das clulas tumorais, um aumento da capacidade proliferativa marcada pela deteco da enzima telomerase e possvel manuteno dos telmeros. Estudos clnicos se faro necessrios para esclarecer melhor a atividade da telomerase em clulas-tronco hematopoticas, seu possvel uso como marcador de diagnstico e seu uso a fim de propsitos prognsticos. Rev. bras. hematol. hemoter. 2008;30(1):47-53. Palavras-chave: Telomerase; telmeros; clulas-tronco; sistema hematopotico.

Introduo O sistema hematopotico caracterizado por um constante turnover, ou renovao de clulas, que necessita de um constante esforo de replicao para manter as populaes de leuccitos, plaquetas e eritrcitos. Estmulos apropriados como hipxia, sangramentos ou infeces geram respostas deste sistema, que aumenta substancialmente a produo de novos tipos celulares individuais.1 Esta excelente capacidade regenerativa depende de uma populao relativamente pequena de clulas-tronco hematopoticas ou HSCs (Hematopoietic Stem Cells).2 Uma nica clula-tronco capaz de produzir cerca de 1.011 a 1.012 clulas sangneas maduras por dia.3 Define-se clula-tronco, ou stem cell, como uma clula com capacidade de renovar e produzir prognie destinada a diferenciar-se. Contudo, uma das propriedades fundamentais

das clulas-tronco, a auto-renovao, parece estar influenciada por mecanismos intrnsecos, como o potencial replicativo que ocorre durante a restrio telomrica.4 Isso significa que, com a diminuio do telmero, as HSCs tm uma taxa de renovao muito baixa nos tecidos adultos, e diminuem seu potencial proliferativo a cada nova diviso e, conseqentemente, com a idade. Com notvel potencial regenerativo, as HSCs substituem a maioria das clulas sangneas maduras continuamente ao longo da vida.5 Porm, experimentos feitos em transplantes seriados de medula ssea em ratos, associados com o encurtamento de repeties telomricas, fornecem fortes evidncias que HSCs no so clulas imortais mas que tm potencial limitado de replicao.6,7 Deste modo, o objetivo deste artigo revisar o papel da telomerase e dos telmeros na biologia das clulas-tronco humanas hematopoticas normais e malignas, assim como no envelhecimento das clulas normais.

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Graduao em Biomedicina. Centro Universitrio Feevale, Novo Hamburgo, RS, Brasil. Graduao em Medicina, especializao em Medicina Interna e Hematologia, Doutorado em Gentica e Biologia Molecular. Servio de Hematologia e Transplante de Medula ssea do Hospital de Clnicas de Porto Alegre (HCPA),RS, Brasil. 3 Graduao em Cncias Biolgicas, Mestrado e Doutorado em Gentica e Biologia Molecular. Centro Universitrio Feevale, Novo Hamburgo, RS, Brasil. Correspondncia: Fabiana Michelsen de Andrade Centro Universitrio Feevale, RS-239, 2755 Proptec Prdio Lils, sala 201 E 93352-000 Novo Hamburgo-RS Brasil Tel.: (51) 3586-8800, ramal 8938 E-mail: fabiana.andrade@feevale.br

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Hematopoese As HSCs mantm a hematopoese atravs da regulao de perodos de auto-renovao, diferenciao e morte celular durante todo o perodo de vida dos vertebrados.2 A hematopoese iniciada em uma clula-tronco multipotente, com marcadores imunolgicos CD34+,8 principalmente, que pode dar origem s distintas linhagens celulares. Contudo, a diferenciao nas diferentes linhagens ocorre a partir de clulas-tronco progenitoras hematopoticas, que passam por uma etapa de clulas comprometidas com o desenvolvimento restrito a somente uma das linhagens. Com grande capacidade de auto-renovao, a HSC garante que a hematopoese permanea constante em condies normais de sade e possa gerar todas as linhagens celulares que constituem o compartimento hematopotico. As clulas precursoras, por sua vez, so capazes de responder a fatores de crescimento hematopotico com aumento de produo de uma ou outra linhagem celular restrita quando h necessidade; porm, estas clulas parecem perder a capacidade de auto-renovao.3 Os fatores que conferem uma capacidade replicativa to aumentada para HSCs ainda no so completamente entendidos, mas uma diferena importante entre este tipo celular e a maior parte das clulas a atividade detectvel da enzima telomerase, e, portanto, uma possvel manuteno dos telmeros. Telmeros Nas extremidades dos cromossomos,denominadas telmeros, existem seqncias repetitivas de DNA. Estas estruturas esto envolvidas em diversas funes biolgicas essenciais, entre elas proteger os cromossomos de recombinaes e fuses das seqncias finais com outros cromossomos; reconhecer danificaes no DNA; estabelecer mecanismos para replicaes dos cromossomos; contribuir na organizao funcional cromossmica no interior do ncleo; participar na regulao da expresso gentica, e servir maquinaria molecular como um "relgio" que controla a capacidade replicativa de clulas humanas e a entrada destas em senescncia celular.9 Os telmeros consistem de longas sries de seqncias curtas e repetidas, em tandem, formadas por bases TTAGGG e por protenas associadas.2,10 Durante a replicao, no entanto, ocorre a perda progressiva de DNA das extremidades dos cromossomos, pois a DNA polimerase convencional no pode reproduzir a extremidade 3' da molcula linear (problema da replicao final).11 Este fato leva ao encurtamento progressivo do cromossomo ao longo das divises de uma linhagem celular, levando perda de capacidade replicativa e ao aumento do envelhecimento. Com a eliminao do ltimo primer na ponta do telmero, a DNA polimerase no pode sintetizar o segmento de DNA que o substitui 48

porque carece de uma extremidade 3' a partir da qual esse segmento possa crescer, levando descontinuidade dos telmeros.9 Como conseqncia, nas divises celulares subseqentes, com cada retirada do primer, perde-se um segmento da DNA, o que provoca o encurtamento progressivo do telmero. No entanto, em alguns momentos do desenvolvimento, e em algumas linhagens celulares, a presena de uma enzima denominada telomerase protege a clula do encurtamento dos telmeros. Estudos tm demonstrado que a eficincia do reparo de DNA e da manuteno do tamanho dos telmeros varia entre os diferentes tipos de clulas-tronco. Clulas-tronco embrionrias so bastante resistentes ao dano de DNA e mantm o comprimento das repeties do telmero ao longo de mitoses consecutivas, mas clulas-tronco hematopoticas so bastante sensveis ao dano de DNA e menos capazes de manter o comprimento do telmero.12 O comprimento do telmero em clulas sangneas humanas mostra um declnio notvel com a idade e, alm disso, a deficincia parcial da telomerase em clulas-tronco hematopoticas de humanos pode resultar falha da medula ssea.7 Telmeros em clulas-tronco progenitoras do sangue do fgado fetal humano e do cordo umbilical so aproximadamente 4 kb (quatro kilobases) mais longos do que aqueles da medula ssea adulta e do sangue perifrico, o que sugere que clulas-tronco, embora auto-regenerativas durante toda a vida, tenham um finito e limitado potencial replicativo.3 A perda do DNA telomrico induz a mesma maquinaria celular de que cromossomos quebrados fazem uso, ou seja, o retardo do ciclo celular e reparo do DNA, e, ainda, que os telmeros intactos tm funes importantes, permitindo a progresso do ciclo da clula e evitando a perda do cromossomo.4 As clulas B parecem ser uma exceo particularmente interessante em se tratando de clulas sangneas, pois o comprimento do telmero nestes tipos celulares cada vez mais heterogneo com a idade. Aparentemente, entre outros fatores, algumas clulas B expressam enzima telomerase suficiente para adicionar, de forma eficaz, repeties aos telmeros, o que pode ser explicado pelas mltiplas divises celulares que requerem para uma efetiva seleo e "afinidade maturativa".7 Ao induzir quebras nos cromossomos, a diminuio dos telmeros induz indiretamente a interrupo do ciclo celular e o reparo do cromossomo antes que a clula possa prosseguir sua diviso celular e dar continuidade ao ciclo de replicao. Alm disso, os telmeros parecem estabilizar extremidades cromossomais de clulas intactas, por eles protegidos da degradao nuclear e da fuso com outros cromossomos quebrados, mantendo a estabilidade gentica.4 Portanto, ambas as funes desta estrutura esto relacionadas capacidade de proliferao celular, o que especialmente importante em linhagens com alta taxa de duplicao.

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Telomerase Para evitar o encurtamento progressivo dos telmeros a cada diviso celular e a perda da informao gentica, periodicamente os segmentos de DNA perdidos so recuperados, o que depende de um complexo enzimtico ribonucleoprotico chamado telomerase. Este complexo enzimtico nada mais do que uma DNA-polimerase RNA-dependente que sintetiza as repeties telomricas de DNA, estabelece bases moleculares para um potencial proliferativo ilimitado, e consiste de dois componentes essenciais: o componente funcional do RNA (nos seres humanos chamado hTERC), que serve como um molde para a sntese telomrica do DNA, e a protena cataltica (hTERT) com atividade de transcriptase reversa.9 Portanto, este complexo tem um pequeno componente de RNA que constitui um molde para a sntese das seqncias repetitivas que compe o telmero. As bases nucleotdicas so adicionadas individualmente e na seqncia correta, e a telomerase progride descontinuamente, ou seja, o molde de RNA posicionado sobre o DNA iniciador, vrios nucleotdeos so adicionados ao iniciador e, depois, a enzima transloca-se para comear o processo novamente.9 Em clulas maduras normais e em diferenciao, como as clulas sangneas, a atividade da telomerase est em geral baixa ou inexistente.11,13 J em clulas imortalizadas como as HSCs, na maioria das clulas-tronco formadoras de tecidos adultos, e nas clulas cancergenas, encontra-se uma atividade aumentada desta enzima.14 A maioria das clulas tumorais e clulas-tronco embrionrias evita a senescncia replicativa atravs do aumento da atividade da telomerase, que conduz estabilizao dos telmeros e poderia contribuir na aquisio de um "fentipo imortal".15 Os telmeros podem comutar entre um estado aberto atividade replicativa da telomerase, que estabelece o alongamento destes, e um estado fechado, que no permite a soma de repeties telomricas associadas enzima telomerase.16 Neste estudo foi verificado que a enzima age de forma inversa ao comprimento do telmero, ou seja, telmeros curtos esto abertos atividade da telomerase, o que pode ser observado na maioria das clulas humanas, nas quais a atividade da telomerase segue nveis limitados de replicao, permitindo o alongamento telomrico somente em clulas com telmeros relativamente curtos. A perda de repeties, relacionada ausncia de atividade da enzima telomerase sobre o telmero, est ligada senescncia replicativa e envelhecimento em clulas humanas. 5 Por outro lado, a presena de telomerase se faz comum na maioria das clulas cancergenas humanas, e sua ausncia, na maioria das clulas somticas, fazendo com que esta enzima seja um importante marcador para o diagnstico e propsitos de prognstico.14 49

Encurtamento do telmero, telomerase e envelhecimento celular Da mesma forma que o comprimento telomrico est relacionado maturao de HSCs, ele tambm se relaciona ao envelhecimento celular, pois, superados alguns limites de encurtamento dos telmeros, ocorre a morte celular, e clulas senescentes apresentam telmeros que no se recuperam com a mesma velocidade com que o fazem as clulas jovens.17 Portanto, o rpido encurtamento dos telmeros seria devido a uma reduo progressiva da sntese de telomerase medida que a idade avana. Os estudos sobre a biologia das HSCs focalizam principalmente sua auto-renovao e diferenciao. No entanto, o que ocorre na auto-renovao no a gerao de duas clulas filhas idnticas me, e sim clulas com diferentes capacidades de proliferao, pois ao longo das replicaes celulares ocorre a perda de seqncias telomricas que no foram totalmente consertadas pelos mecanismos de reparo de DNA.12 Assim, as clulas filhas reduzem progressivamente sua capacidade proliferativa devido perda progressiva do telmero a cada diviso celular, o que pode, por sua vez, conduzir senescncia proliferativa observada in vivo e in vitro.18 As limitaes no reparo do DNA, juntamente com as perdas do comprimento do telmero em clulas somticas, demonstram no s a maturao das HSCs mas tambm o envelhecimento destas clulas. A proliferao das clulas-tronco est associada perda do comprimento do telmero.19 Isto implica que, mesmo sendo observada em progenitores hematopoticos e em suas prognies, a atividade da enzima telomerase seria incapaz de impedir o encurtamento do telmero, seja pela expresso insuficiente, ou pelo fato de a presena da enzima estar relacionada a outras funes celulares. J as clulas-tronco embrionrias so bastante resistentes aos danos de DNA e mantm o comprimento das repeties telomricas ao longo das sucessivas replicaes celulares, ao contrrio das HSCs que, mesmo na presena de telomerase, so bastante sensveis aos danos de DNA e menos capazes de manterem o comprimento do telmero.12 Diferenas impressionantes foram constatadas no comprimento mdio das seqncias telomricas nas extremidades dos cromossomos de HSCs humanas em diferentes estgios de desenvolvimento, e a explicao mais provvel para estas observaes que as HSCs, assim como todas as clulas somticas, perdem o DNA telomrico a cada ciclo de diviso celular.4 Com isso, percebem-se peculiaridades no potencial de replicao da telomerase e na dinmica do telmero, que parecem desenvolver um papel diferente em clulas-tronco embrionrias comparadas s clulas-tronco adultas. Embora na maioria das clulas somticas a atividade do telomerase esteja ausente, tem sido demonstrado que as clulas hematopoticas primitivas podem exibir uma baixa

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atividade de telomerase. Apesar da atividade da enzima, o encurtamento do telmero observado em leuccitos maduros e no progenitor hematopotico em culturas in vitro.20 Estas observaes levaram ao estudo do regulamento do comprimento do telmero e da atividade da enzima telomerase nas diferentes clulas hematopoticas CD34+. As populaes celulares CD34+ analisadas foram os progenitores hematopoticos do fgado fetal, do sangue de cordo umbilical, do sangue perifrico e da medula ssea. Estas populaes CD34+ tiveram a expresso da telomerase ativada nos estgios iniciais da cultura, mas esta declinava rapidamente aps a terceira semana.11 Neste estudo, 1 a 1.5 kb de DNA telomrico foram perdidos durante as semanas 3 e 4, revelando uma taxa de perda bem maior do que na primeira semana e uma inativao da telomerase em relao aos primeiros dias de proliferao. Estes dados sustentam a hiptese de que a atividade da telomerase em clulas hematopoticas primitivas diminui a taxa de perda telomrica, mas no a inibe completamente e, ainda, que a enzima pode diminuir juntamente com a reduo da renovao celular e do potencial de expanso. Encurtamento do telmero, telomerase e transplantes de HSCs Uma vez que o comprimento do telmero est associado ao nmero de divises celulares permitido s clulas somticas, incluindo as HSCs, o potencial proliferativo das clulas-tronco humanas parece estar diminudo aps uma reconstituio hematopotica. Um bom exemplo a reconstituio que ocorre nos casos em que pacientes sofrem uma mielossupresso, conjuntamente com um transplante de clulas-tronco. Nestes casos ocorre uma diluio do nmero de clulas reconstituintes da hematopoese, que devero se esforar para uma satisfatria proliferao celular, para serem capazes de preencher o compartimento mielossuprimido.19 As primeiras investigaes comparando o comprimento do telmero em clulas do doador e em clulas transplantadas presentes do receptor demonstraram que este esforo de replicao leva a uma rpida diminuio telomrica. Estudos indicaram que o encurtamento progressivo do telmero estaria antecipado com a expanso in vitro, comparvel a at 20 anos de perda idade-associada, em condies normais de proliferao.11,19-22 Estes trabalhos pareciam indicar que a histria mittica celular refletida pela diminuio do comprimento telomrico com as sucessivas divises celulares observado in vitro, e o envelhecimento in vivo, poderia limitar a capacidade proliferativa destas clulas. Portanto, inicialmente, estes dados demonstraram que os transplantes no seriam efetivos por um longo perodo de tempo. No entanto, ao verificar, da mesma forma que outros autores, que a reconstruo da hematopoese aps o transplante de clulas-tronco requer uma atividade replicativa ex50

cessiva devido ao nmero limitado de clulas-tronco usadas para o transplante, props-se um estudo combinando a reconstituio do tecido hematolgico com a dinmica do comprimento telomrico no perodo de restabelecimento imediato aps transplante alognico, com imunossupresso, e com um seguimento de ao menos 12 meses.23 Neste estudo, os autores demonstraram que a reduo inicial do comprimento do telmero foi seguida pela reconstituio do comprimento do mesmo. Ao final de um ano aps o transplante, o comprimento do telmero nas clulas do receptor era semelhante ao comprimento do telmero das clulas derivadas do doador.23 Isto indica que a homeostase do comprimento do telmero aps o transplante de clulas-tronco mantida, no indicando nenhuma perda de capacidade replicativa das clulas-tronco hematopoticas. Assim, ao investigar um perodo maior aps o transplante, estes autores no forneceram nenhuma evidncia que a populao de clulas-tronco em longo prazo esteja comprometida pelo estresse replicativo induzido pelo transplante. O uso do sangue de cordo umbilical como uma fonte de HSCs para o transplante alognico tem aplicaes limitadas devido ao baixo nmero de HSCs presente numa nica coleta, o que faz com que esta fonte celular seja utilizada somente na pediatria, ou em adultos com baixa massa corprea.24,25 O crescente interesse em transplantes que sejam beneficiados por um nmero reduzido de clulas-tronco no enxerto19 despertou a utilidade da expanso ex vivo de HSCs neonatais, que podem trazer benefcios clnicos considerveis. Os resultados preliminares de estudos de fase 1 afirmam que a habilidade de manter HSCs in vitro por perodos prolongados fornece tambm um valioso sistema para transplantes.26 Por outro lado, as HSCs do sangue perifrico mobilizadas por citocinas so usadas cada vez mais para o transplante de clulas-tronco. Caracteristicamente, o transplante de clulas-tronco do sangue perifrico leva a uma reconstituio hematopotica mais rpida,23 uma vez que estas clulas possuem um comportamento biolgico diferente daquelas encontradas na medula ssea, ou no sangue de cordo umbilical. Estes dados, somados ao fato de que o esforo replicativo da colnia de clulas transplantadas no leva diminuio de sua capacidade proliferativa, trazem grandes perspectivas nesta rea da medicina e sugerem que as questes relativas ao encurtamento do telmero com a replicao celular, neste cenrio, necessitam ser melhores esclarecidas. Encurtamento do telmero, telomerase e cncer Ao longo de toda sua existncia, as clulas-tronco so expostas ao estresse e a inmeros agentes que podem desencadear o cncer.27 importante esclarecer que o tumor pode, freqentemente, originar-se da transformao de clulas-tronco normais, enquanto o envelhecimento est as-

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sociado com um declnio progressivo no nmero e/ou na funcionalidade de determinadas clulas-tronco.28 Se por um lado as alteraes na dinmica do telmero suprimem a transformao maligna, por outro a facilitam, pois esto relacionadas com a estabilidade genmica e sobrevivncia celular.27 No cncer, a sntese da telomerase est aumentada, o que explicaria as divises perptuas comuns em clulas neoplsicas cultivadas.17 Muitas clulas cancergenas possuem tanto a atividade da enzima telomerase quanto o comprimento do telmero muito elevados, demonstrando com isso o potencial marcador da telomerase para diagnstico de muitos cnceres.14 Para se sustentarem como clulas transformadas, as clulas neoplsicas devero manter a fase de proliferao celular alm da fase de senescncia, reativando a atividade da telomerase, determinada pela expresso da subunidade cataltica hTERT,17 e inibindo possveis repressores da atividade desta enzima. A observao que a telomerase est ativa em 85% a 90% dos tumores humanos, porm inativa em clulas normais, levou a achados de que a funo supressora tumoral do encurtamento telomrico inibe a expresso da enzima,29 o que rende s clulas uma incapacidade de manter o DNA telomrico, resultando na estagnao ou regresso do tumor.17 Por outro lado, enquanto a checagem dos pontos de verificao nas quebras do DNA, induzida pelas disfunes no telmero, tem um importante papel na supresso tumoral,30 o encurtamento do telmero tambm pode contribuir para a iniciao do cncer, induzida pela instabilidade cromossomal,27 o que foi verificado ao ser constatada a deficincia de mTERC em ratos knockout, sugerindo a primeira evidncia experimental que a diminuio do telmero pode ser um evento pr-tumoral, por estar relacionada com a instabilidade do cromossomo.27 Estas descobertas abriram perspectivas para o desenvolvimento de uma classe de drogas que objetive a manipulao da telomerase em clulas tumorais. O duplo papel da ativao da perda de seqncias telomricas e a ativao da telomerase na grande maioria dos cnceres humanos, e especificamente neste artigo, em malignidades hematolgicas, sugere que estas patologias derivam de transformaes nas HSCs durante a carcinognese.27 A reteno da capacidade de auto-renovao em clulastronco diferenciadas o evento mais provvel que conduz formao do cncer, reativando um programa de imortalidade em clulas diferenciadas transformadas.31 Por um lado, o encurtamento telomrico pode estar envolvido no desenvolvimento da instabilidade, permitindo o aparecimento de mutaes cromossmicas das clulas-tronco. Por outro lado, as clulas-tronco tumorais podem requerer a reativao da telomerase para conseguir a capacidade imortal de auto-renovao. Portanto, luz destas constataes parece estar a grande importncia em elucidar o papel dos telmeros e da telomerase no cncer e nas HSCs. 51

Regulao da telomerase Diante do constante esforo das clulas-tronco em manter a renovao dos compartimentos celulares ao longo de toda a vida, a expresso da enzima telomerase parece cumprir um importante papel. Sua disfuno acarretaria um rpido encurtamento do telmero, exausto da clula-tronco e prematuro envelhecimento.27 Entretanto, o nvel da atividade da telomerase nas clulas-tronco aparentemente no suficiente para manter o comprimento do telmero durante seu envelhecimento. O comprimento do telmero das subpopulaes de HSCs suportam a hiptese de que as clulas com maior potencial proliferativo so aquelas com telmeros mais longos.32 E a manipulao da enzima telomerase tem se mostrado importante nas tentativas para aumentar o perodo de expectativa de vida proliferativa de clulas-tronco humanas normais.5 Portanto, de grande interesse entender de que maneira a telomerase regulada em condies normais e patolgicas, especialmente devido sua potencialidade como alvo teraputico. Um grande nmero de diferentes mecanismos tem sido demonstrado como responsveis pelo controle da expresso desta enzima. Primeiramente, a regulao da telomerase parece ocorrer principalmente em nvel de transcrio da transcriptase (hTERT), em um grau muito menor do que quando comparado transcrio do molde de RNA (hTERC).33 A regio promotora do gene hTERT possui vrios stios de ligao para fatores de transcrio conhecidos como sendo oncoprotenas e protenas supressoras de tumor, como BRCA-1, p53 e a protena E6 do papiloma vrus humano, alm da presena de stios de ligao para estrgeno.34 Estes fatores de transcrio atuam tanto como repressores como ativadores, e alguns deles possuem papis opostos em clulas normais e em clulas tumorais.35,36 Alm desta regulao gentica, mecanismos epigenticos tambm foram descritos, especialmente relacionados ao promotor do gene hTERT, que rico em ilhas CpG. Estas seqncias foram descritas como hipermetiladas em clulas senescentes normais e diferenciadas, impedindo a expresso gnica. Por outro lado, estas mesmas regies tambm foram detectadas como estando metiladas em clulas cancerosas, com alta expresso da telomerase. Este fato, aparentemente contraditrio, demonstra que a regulao gnica depende da interao entre fatores genticos e epigenticos.34 Tanto o comprimento dos telmeros quanto os nveis de telomerase possuem profundos efeitos sobre o comportamento das clulas-tronco. Contudo, os papis exatos dos telmeros e da telomerase em clulas-tronco especficas esto ainda sendo investigados. Algumas reas ainda devem ser exploradas, tais como as diferentes vias de sinalizao que conectam a atividade da telomerase e o comprimento do telmero com a funcionalidade de clulas-tronco.34

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Concluses e perspectivas futuras Para compreender melhor o papel dos telmeros e da telomerase no envelhecimento celular, em diversas doenas e no cncer, devem-se buscar mecanismos para caracterizar o encurtamento telomrico e a atividade da telomerase em compartimentos in vivo de clulas-tronco durante o envelhecimento e em condies patolgicas. H um consenso entre os autores que ainda no est claro se as clulastronco hematopoticas entram em senescncia ou se submetem apoptose em resposta s disfunes telomricas. Portanto, os indcios de passividade das clulas-tronco em relao s disfunes telomricas permanecem a ser confirmados. importante perceber que a atividade da telomerase e a dinmica do telmero parecem ter um papel diferente em clulas-tronco embrionrias comparadas s clulas-tronco adultas. Elucidar melhor os mecanismos que conduzem a este diferencial de comportamento poderia contribuir para o desenvolvimento de estratgias que se focalizassem no alongamento do telmero e no "rejuvenescimento" de populaes de clulas-tronco, aumentando a capacidade de repopularizao das HSCs, aps terapias mielo-ablasivas. De um ponto de vista clnico, tm-se a necessidade de confirmar alguns pontos importantes. O primeiro se a inibio da telomerase ocorre para limitar a proliferao e induzir apoptose em clulas-tronco e no cncer. Outro ponto se a estabilizao dos telmeros nas doenas pr-malignas pode inibir a evoluo da instabilidade cromossomal e a transformao das clulas-tronco em cncer. Uma grande promessa para o futuro, e outra questo a ser mais investigada, a identificao de protenas marcadoras de senescncia nas clulas-tronco que pudessem predizer o risco do cncer, a fim de otimizar a seleo de intervenes teraputicas para a preveno da proliferao maligna. A dinmica do telmero representado pela histria mittica de rgos altamente proliferativos, o comprimento do telmero, a atividade do telomerase e os perfis citogenticos da populao definida de clulas-tronco poderiam ser teis para explorar a origem das transformaes pr-malignas pelas clulas que do segmento ao desenvolvimento da formao do tumor. Contudo, mais estudos so necessrios para definir o papel da telomerase, principalmente na perda do DNA das extremidades cromossmicas e, portanto, perda de importantes informaes para a homeostase das clulas-tronco hematopoticas. Assim, apesar de todas as pesquisas sobre este assunto desenvolvidas na ltima dcada, muitas questes ainda permanecem em aberto. Atualmente, percebe-se que a relao entre telomerase e ciclo celular muito mais complexa do que aquela imaginada a princpio. Deste modo, apesar de um nmero crescente de dados na literatura, um dado continua sendo verdadeiro desde 1995: maiores informaes a respeito do papel dos telmeros no envelhecimento celular podem 52

conduzir s predies significativas da falha de um rgo com implicaes em reas diversas tais como o gerontologia e a medicina preventiva.4 Com a compreenso do mecanismo de auto-renovao das clulas-tronco, que muda a cada estgio de desenvolvimento, ser possvel manipular tais mecanismos, de uma maneira significativa e segura, utilizandose tcnicas que permitam que a extenso ou a manuteno induzida do comprimento do telmero seja aplicada prtica clnica.
Abstract Hematopoietic stem cell proliferation leads to telomere length decreases at each cellular division. Some authors disagree about the telomere influence on the reduction of the proliferative potential and capacity of self renewal. Here we review telomerase function in the biology of the hematopoietic system, in normal or differentiation and its influence on the ageing of hematopoietic stem cells. The constant cellular renewal required to maintain the hematopoietic system, provides embryonic stem cells, as well as malignant cells, an increased proliferative capacity. This is marked by the detection of telomerase enzyme activity and possible telomere maintenance. Clinical trials will be required to clarify telomerase activity in hematopoietic stem cells, its possible use as a diagnostic marker and its use for prognostic purposes. Rev. bras. hematol. hemoter. 2008;30(1):47-53. Key words: Telomerase; telomeres; stem cells; hematopoietic system.

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Avaliao: Editor e dois revisores externos Conflito de interesse: no declarado Recebido: 31/10/2006 Aceito: 16/04/2007

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