Universidade de Aveiro Departamento de Biologia 2006

JOANA ISABEL EFEITO DE XENOBITICOS EM MEIOS AQUTICOS BRANCO DE OLIVEIRA APLICAO AO 3 CICLO

Universidade de Aveiro Departamento de Biologia 2006

JOANA ISABEL EFEITO DE XENOBITICOS EM MEIOS AQUTICOS BRANCO DE OLIVEIRA APLICAO AO 3 CICLO

Dissertao apresentada Universidade de Aveiro para cumprimento dos requisitos necessrios obteno do grau de Mestre em Ensino de Geologia e Biologia, realizada sob a orientao cientfica do Prof. Doutor Mrio Jorge Pereira, Professor Auxiliar do Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro e pelo Professor Doutor Fernando Jos Mendes Gonalves, Professor Associado do Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro.

o jri
presidente Doutor Fernando Gonalves, Professor Associado com Agregao, Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro (co-orientador) vogais Doutor Ulisses Manuel Miranda Azeiteiro, Professor Auxiliar com Agregao, Universidade da Aberta Doutor Mrio Jorge Verde Pereira, Professor Auxiliar, Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro (orientador) Doutora Ruth Maria de Oliveira Pereira, Professora Auxiliar Convidada, Departamento de Biologia da Universidade de Aveiro

agradecimentos

Estas palavras tm por objectivo expressar a minha enorme gratido a todos aqueles que, de alguma forma, contriburam para a concretizao deste trabalho.

Ao Professor Doutor Mrio Pereira e ao professor Doutor Fernando Gonalves agradeo pela orientao cientfica deste trabalho. A anlise crtica, colaborao e sugestes oportunas revestiram-se de inestimvel valor para que este trabalho tenha chegado a bom termo. Um agradecimento especial ao professor Doutor Fernando Gonalves pela compreenso, pacincia e amizade, que se revelaram fundamentais ao longo deste trabalho.

Agradeo aos meus colegas de laboratrio pelo companheirismo, simpatia e apoio ao longo deste trabalho. Quero tambm agradecer Ana Marta pela disponibilidade e colaborao na realizao da primeira parte deste trabalho.

Agradeo aos meus pais o apoio, compreenso e incentivo que desde o incio, e em todas as etapas da minha vida, sempre me transmitiram. Agradeo tambm a confiana e credibilidade que depositaram em mim.

Agradeo ao Pedro pela pacincia, compreenso e apoio que me dispensou perante as exigncias deste trabalho.

A todos aqueles que no tenha referido e que de alguma forma contriburam para a realizao deste trabalho, o meu muito obrigado.

palavras-chave

testes ecotoxicolgicos, paraquato, microalgas verdes, actividade prtica, ensino bsico, educao ambiental

resumo

A contaminao de sistemas aquticos deve-se no s a causas naturais mas sobretudo a actividades humanas, como sejam, as descargas de efluentes domsticos ou industriais, a lixiviao e escorrncia de pesticidas em terrenos agrcolas, entre outras. A avaliao dos efeitos txicos de diferentes agentes em populaes ou comunidades de organismos vivos, que pertencem a ecossistemas aquticos, pode ser efectuada atravs da realizao de ensaios ecotoxicolgicos. Assim, o trabalho que se apresenta foi desenvolvido em duas fases. Na primeira fase do trabalho, pretendeu-se avaliar o impacto do aumento da concentrao do herbicida Paraquato em trs espcies de microalgas verdes Pseudokirchneriella subcapitata (Korshikov) Hindak, Chlorella vulgaris Beijerinck e Pandorina morum (Mller) Bory. Para isso, aplicou-se a metodologia dos testes de toxicidade, tendo-se definido previamente a gama de concentraes utilizada para cada espcie. De um modo geral, a anlise estatstica (ANOVA) permitiu verificar diferenas significativas com o incremento da concentrao de Paraquato. Assim, conclui-se que P. morum a alga mais sensvel e P. subcapitata a mais tolerante presena do referido herbicida. Na segunda fase do trabalho, desenvolveu-se uma metodologia de teste de inibio de crescimento algal aplicvel ao 3 ciclo do Ensino Bsico, utilizando substncias que no constituem um risco de manipulao por parte dos alunos. Para isso, adaptou-se a metodologia dos testes de toxicidade utilizando o conhecido sal de cozinha como agente txico a testar. Este trabalho permitiu a comparao dos seus resultados com os

dos testes toxicolgicos vulgarmente utilizados na investigao. Assim, desenvolveu-se uma metodologia simples e perfeitamente aplicvel na realidade material e oramental das nossas escolas pelo que, se sugere que os Professores do Ensino Bsico a incluam como estratgia didctica no ensino das Cincias Naturais.

keywords

ecotoxicological assays, paraquat, green microalgae, practical activity, basic education, environmental education

abstract

The contamination of aquatic systems is due not only to natural causes but above all to anthropogenic activity such as discharges of domestic or industrial effluents, leaching and runoff of pesticides in agricultural lands, among others. The evaluation of the toxic effects of different agents in populations or communities of living organisms, belonging to aquatic ecosystems, can be accomplished by carrying out

ecotoxicological assays. Thus, the present study was developed in two phases. In the first phase of the study, it was intended to evaluate the impact of the increase of Paraquat concentration in three microalgae species Pseudokirchneriella subcapitata (Korshikov) Hindak, Chlorella vulgaris Beijerinck and Pandorina morum (Mller) Bory. For this, the methodology of inhibition tests was applied, after previously defining the concentration range used for each species. In general, the statistic analysis (ANOVA) allowed verifying significant differences with the increment of Paraquat concentration. Thus, one concludes that P. morum is the most sensitive species and P. subcapitata the most tolerant. In the second phase of the study, a methodology of inhibition test appliable to the 3rd cycle of basic education was developed by using substances that do not constitute a risk of manipulation for the pupils. For this, the test methodology was adapted using the ordinary salt of kitchen as the toxic agent to test. This work allowed the comparison of

its results with the ones obtained by the toxicological assays used in research. Thus, a simple and perfectly appliable methodology, in the material and budget reality of our schools, was developed. For that, it suggests that basic education teachers include it as a didactic strategy in the education of Natural Sciences.

ndice

CAPTULO I Introduo Geral ............................................................................................................ 3 1.1. A Importncia do Conhecimento Cientfico na Sociedade Actual...................... 5 1.2. Perspectivas Actuais do Ensino das Cincias........................................................ 6 1.3. A Educao Ambiental e o Ensino das Cincias................................................... 8 1.4. Insero Curricular da Actividade de Pesquisa ................................................. 11 1.5. O Problema em Pesquisa ...................................................................................... 14 1.6. Questes Investigativas ......................................................................................... 15 1.7. Objectivos Gerais da Investigao ....................................................................... 15 1.8. Resultados Esperados............................................................................................ 16 1.9. Estrutura da Tese .................................................................................................. 16

CAPTULO II Avaliao do Efeito do Paraquato no Crescimento de Microalgas........................ 19

CAPTULO III Actividade Proposta para o 3 Ciclo do Ensino Bsico ............................................. 31

CAPTULO IV Consideraes Gerais ................................................................................................... 57

Referncias Bibliogrficas ........................................................................................... 61

CAPTULO I

Introduo Geral

1.1. A Importncia do Conhecimento Cientfico na Sociedade Actual A Cincia 1 deve estar ao servio da Humanidade e contribuir para que todos os cidados adquiram uma compreenso mais profunda da Natureza e da Sociedade, uma melhor qualidade de vida e um Ambiente sustentvel para as geraes presentes e futuras (Unesco, 2000). A Cincia tem vindo a assumir um papel cada vez mais relevante na Sociedade, sendo frequentemente solicitada para fundamentar decises a nvel poltico, econmico e social, necessrias resoluo de problemas, alguns dos quais gerados pela prpria Cincia. A gesto dos recursos naturais, a preservao da biodiversidade, a eliminao de resduos e a poluio, so algumas das reas que demonstram a importncia do conhecimento cientfico na sociedade actual (Ferreira, 2003). Deste modo, cada vez mais o ensino das cincias deve ser orientado socialmente, no sentido de contribuir para a formao de cidados activos e informados que possam intervir em decises cientficas e tecnolgicas, de modo a que as aplicaes dos avanos cientficos e tecnolgicos no contribuam para o desequilbrio e degradao do Ambiente. Para alguns autores (e.g., Millar et al., 1998), os cidados necessitam de ter um nvel de conhecimento cientfico e tecnolgico que permita compreender o papel da investigao cientfica de modo a poderem apreciar as suas potencialidades e limitaes, efectuar uma avaliao consciente dos riscos da investigao e identificar as implicaes ticas e morais da aco da Cincia. Segundo Santos (2002), a formao dos indivduos no deve preocupar-se somente com a transmisso e aquisio de conhecimentos, mas com a necessidade de que o aluno aprenda a pensar (desenvolvendo competncias do pensar) e aprenda a aprender (desenvolvendo a capacidade de adaptao e de resoluo de problemas). assim necessrio promover a literacia cientifica, isto , o nvel de conhecimento cientfico conceptual, processual e atitudinal necessrio para actuar como cidado capaz de compreender, discutir e tomar decises sensatas acerca dos problemas relacionados com os benefcios e riscos da Cincia e da Tecnologia. Na opinio de Solomon (1995), a literacia cientfica deve ser considerada como um pr-requisito para uma cidadania responsvel, para que a Sociedade integre pessoas capazes de pensar e agir de forma consciente. A valorizao da literacia cientfica no ensino contribui para a formao integral dos
1

Nesta dissertao usamos diferentemente os termos Cincia e cincias, consoante nos dirigimos unidade do conhecimento cientfico ou s disciplinas de cincias naturais (Biologia, Geologia, Qumica e Fsica) que na idade moderna se diferenciaram das cincias exactas e das cincias humanas.

cidados, para que estes apreciem a Cincia, as suas potencialidades e limitaes, permitindo um uso mais eficaz e consciente da Cincia na resoluo dos problemas sociais e ambientais que surgem na sociedade actual. Assim, o ensino das cincias deve permitir o desenvolvimento de um conjunto de competncias, ao nvel do conhecimento, do raciocnio, da comunicao e das atitudes, de modo a que os alunos se tornem cidados activos e reflexivos na Sociedade em que se encontram integrados.

1.2. Perspectivas Actuais do Ensino das Cincias As actuais linhas de investigao em Didctica das Cincias recomendam uma orientao para o ensino das cincias cujo principal objectivo passa pela compreenso da Cincia, da Tecnologia, do Ambiente, das suas inter-relaes e das respectivas implicaes na Sociedade (Cachapuz et al., 2000). Para isso necessrio ter em conta os conhecimentos e as experincias prvias dos alunos e implementar actividades baseadas na resoluo de problemas, as quais permitem desenvolver o conhecimento conceptual e processual e as competncias que os cidados necessitam de mobilizar quando enfrentam problemas no seu quotidiano e que facilitam a explorao das interaces CTS (Cincia Tecnologia - Sociedade). Neste sentido, a abordagem de situaes problemticas do quotidiano que permitam reflectir acerca dos processos da Cincia e da Tecnologia, bem como das suas interrelaes com a Sociedade e o Ambiente, concorrem para aprendizagens significativas. Hodson (1993) considera que o ensino das cincias deve estar orientado para situaes do quotidiano, relacionar a Cincia com questes sociais e tecnolgicas, desenvolver a literacia cientfica no contexto de uma cidadania activa e responsvel e promover a Cincia como um fenmeno cultural. O mesmo autor (1992, 1994, 1996, 1998) reconhece trs elementos para o ensino em Cincia:
Aprender Cincia: adquirir e desenvolver conhecimentos e conceitos cientficos; Aprender sobre a Cincia: compreender a natureza e os mtodos da Cincia assim

como a complexa relao entre Cincia Tecnologia Sociedade;

Fazer Cincia: desenvolver competncias no domnio dos processos de investigao

cientfica e de resoluo de problemas.

Apesar de separados, estes trs elementos esto relacionados uma vez que cada um contribui para a compreenso dos restantes. No entanto, o domnio do Fazer Cincia que permite ao aluno reconhecer e compreender a relao existente entre os trs elementos. Segundo Giordan e De Vecchi (1994) as finalidades da educao em cincias so: A construo de uma atitude cientfica nos alunos aproveitando a curiosidade e a vontade de aprender dos jovens, desenvolver o esprito crtico, a criatividade, a comunicao, entre outras; O domnio dos processos da investigao privilegiando o processo experimental, o domnio da informao e a importncia da clarificao das situaes, permitir que os alunos formulem questes adequadas e desenvolvam os mtodos de comunicao e de argumentao necessrios para resolverem os problemas que surgem no quotidiano; O desenvolvimento de uma experincia actual proporcionando aos alunos contedos que permitam uma interaco constante entre os objectos e o meio; A organizao do saber em torno de conceitos estruturantes permitindo que a organizao efectuada proporcione aos alunos, ao longo da escolaridade, o enriquecimento dos saberes e a sua reformulao sucessiva; A permanncia de um saber sobre o saber tornando o saber funcional para os alunos, que passe pelo acompanhamento de uma reflexo epistemolgica acerca do modo como se elaboram os diversos conhecimentos, sobre as diferenas entre saberes tcnicos e cientficos e tambm sobre as relaes entre a Cincia, a Tecnologia, a Sociedade e o Ambiente (CTSA). Devido influncia crescente da Cincia e da Tecnologia no nosso quotidiano, a educao em cincias, em particular ao nvel da escolaridade bsica, tem que ser equacionada como uma forma de contribuir para uma melhoria da qualidade de vida (Martins e Veiga, 1999). O ensino das cincias no Ensino Bsico tem o papel de promover a literacia cientifica. Assim, as suas orientaes privilegiam:

A abordagem de situaes-problema do quotidiano, a qual possibilita a reflexo

acerca dos processos da Cincia e da Tecnologia e das suas inter-relaes com a

Sociedade, permitindo uma tomada de decises informada e o desenvolvimento de atitudes e valores (Vaz e Valente, 1995; Serrano, 1996);

A interdisciplinaridade, que decorre da necessidade de compreender o mundo na

sua globalidade e complexidade (Pombo, 1993). As abordagens de ensino das cincias que privilegiem a perspectiva CTS tm como principal objectivo contribuir para a aprendizagem cientfica e tecnolgica dos alunos, suscitando uma maior conscincia na tomada de decises e permitindo o desenvolvimento de atitudes e de valores numa tica de responsabilidade. Assim, a educao em cincias tem o papel de preparar os alunos para enfrentar o mundo scio-tecnolgico em mudana, no qual os valores sociais e ticos so factores relevantes.

1.3. A Educao Ambiental e o Ensino das Cincias O desenvolvimento de competncias na educao para a cidadania fundamental. A escola ensina o cidado a utilizar o conhecimento e a informao na compreenso da realidade, sendo que o conhecimento ajuda a promover cidados mais participativos. Assim, a educao para a cidadania assume-se como uma rea transversal, podendo a sua abordagem reflectir um conjunto de temticas que constituem preocupaes da sociedade actual (Gomes, 2001). Entre estas temticas destacamos a Educao Ambiental (E.A.). Do colquio sobre Educao Ambiental, organizado pela UNESCO e pelo Programa das Naes Unidas para o Ambiente (PNUA), em Belgrado (1975), resultou a Carta de Belgrado onde se encontra definida a finalidade da E.A.: Formar uma populao mundial consciente e preocupada com o Ambiente e com os seus problemas, uma populao que tenha os conhecimentos, as competncias, o estado de esprito, as motivaes e o sentido de compromisso que lhe permitam trabalhar individual e colectivamente na resoluo das dificuldades actuais, e impedir que elas se apresentem de novo (Annimo, 1990). Segundo o Instituto Nacional do Ambiente (INAMB) em colaborao com a Direco Geral do Ensino Bsico e Secundrio (DGEBS), a Educao Ambiental : um processo de formao contnua onde os conhecimentos, competncias e motivaes conduzem a um sentido de participao e empenhamento capazes de contribuir para a

resoluo dos graves e complexos problemas de um mundo em rpida transformao, no sentido de defender, preservar e melhorar a qualidade ambiental (Almeida, 2002). Os objectivos especficos da E.A. foram definidos pela UNESCO, logo aps a conferncia de Belgrado (1975), e incluem:
a Consciencializao dos indivduos e dos grupos sociais para as questes do

Ambiente e da utilizao e gesto dos recursos;

a Aquisio de conhecimentos necessrios para a compreenso do Ambiente,

dos seus problemas e da responsabilidade da Humanidade no aparecimento desses mesmos problemas;

a Mudana de Atitudes no sentido da aquisio de valores sociais e de

sentimentos de interesse pelo Ambiente que conduzam participao activa na proteco e melhoria do Ambiente;
a Aquisio de competncias necessrias para a resoluo de problemas

ambientais;
a Capacidade de avaliao de medidas e de programas educativos em matria de

Ambiente;
a Participao, isto , o desenvolvimento do sentido de responsabilidade perante

o Ambiente a fim dos indivduos participarem na execuo de medidas apropriadas para a resoluo de questes ambientais (Almeida, 2002). A E.A. aborda temas relacionados com os problemas do Ambiente e da utilizao e gesto dos recursos, visando a modificao de atitudes e de comportamentos. Esta fundamental no processo de educar para a Sustentabilidade, atravs da sensibilizao dos indivduos para os problemas ambientais existentes para que, no presente e no futuro, estes possam assumir uma participao informada, esclarecida e mais activa na resoluo desses mesmos problemas, para uma vivncia em harmonia com o Ambiente. Assim, a Educao a escola desempenha um papel fundamental na sensibilizao dos cidados, na tomada de conscincia dos problemas ambientais de forma a modificar a sua relao, como pessoa e como consumidor, com o Ambiente. A E.A. no surge como uma nova disciplina mas como um conjunto de prticas educacionais, que devem surgir em todas as disciplinas, que visam, no apenas o conhecimento sobre o Ambiente, mas tambm a mudana de atitudes e de comportamento

dos indivduos, proporcionando a sua formao crtica e consciente. Esta deve ser abordada em qualquer rea curricular, sempre que se articule com os contedos programticos. Apresenta, assim, um carcter interdisciplinar. O ensino das cincias contribui para a E.A., mas o seu desenvolvimento real necessita de outras disciplinas do currculo. Apesar disto, os professores de cincias, assim como os de outras reas, hesitam em abordar questes de natureza ambiental pois ou no esto familiarizados com as questes, ou no se sentem vontade com novas estratgias e metodologias, ou no gostam da ideia de interdisplinaridade ou, ainda, no apreciam a viso holstica caracterstica da E.A. (Fernandes et al., em publicao). A interdisciplinaridade facilita a aquisio de atitudes e conceitos e permite uma clarificao de valores (Giordan e Souchon, 1996). Uma das formas de incorporar a E.A. no ensino das cincias consiste na anlise de alguns problemas ambientais (Aleixandre et al., 1995). Sendo a escola o lugar privilegiado das aprendizagens, onde se devem adquirir valores e promover atitudes e comportamentos pr-ambiente, torna-se urgente uma interveno eficaz que inverta a tendncia actual que compromete a nossa prpria existncia, para uma perspectiva de desenvolvimento sustentvel (Gomes, 2001). , ento, necessrio que a E.A. propicie a aco atravs da tomada de decises, de maneira a que cada indivduo tenha um comportamento coerente com atitudes de respeito para com o Ambiente. neste contexto que a E.A. surge integrada na educao para a cidadania. O ensino-aprendizagem da Biologia pode tambm contribuir para reforar as capacidades consideradas fundamentais na educao para a cidadania e, assim, contribuir para a formao de cidados esclarecidos e activos:
abstraco: a abstraco e o raciocnio lgico e crtico permitem o

desenvolvimento das competncias necessrias para simplificar, ordenar, interpretar e reestruturar a informao;
experimentao: estabelecer relaes causa-efeito, compreender articulaes

estrutura-funo e explorar diferentes interpretaes so competncias que promovem o desenvolvimento da curiosidade, da criatividade, da humildade, do cepticismo e da anlise crtica;
trabalho em equipa: atravs da constante negociao de estratgias e procura de

consensos, o trabalho em equipa refora a expresso verbal, a capacidade de fundamentao, a compreenso, a cooperao e a solidariedade;

10

 ponderao e sentido de responsabilidade: so capacidades que, mobilizadas

com outras e com um conjunto slido de conhecimentos, facultam competncias para interpretar, criticar, julgar, decidir e intervir responsavelmente na realidade envolvente (Verssimo e Ribeiro, 2001). A literacia biolgica contribui para uma melhor literacia cientfica, indispensvel na formao de cidados responsveis e solidrios com o futuro. O ensino da Biologia adquire um valor insubstituvel na educao dos alunos, contribuindo para a formao de uma conscincia que permita encontrar solues construtivas e funcionais relativamente aos problemas actuais.

1.4. Insero Curricular da Actividade de Pesquisa A Actividade de Pesquisa, desenvolvida no Captulo III desta dissertao, insere-se no Tema organizador Sustentabilidade na Terra, nas unidades programticas Ecossistemas e Gesto sustentvel dos recursos, do programa da disciplina de Cincias Naturais, do 3 ciclo do Ensino Bsico. Atravs da anlise do programa da disciplina, proposto pelo Ministrio da Educao (Galvo, 2001), possvel conhecer os contedos propostos para cada unidade programtica, assim como os objectivos gerais e os conceitos mais importantes (Tabela I.1.). Tabela I.1. Objectivos e conceitos a desenvolver na abordagem dos contedos das unidades programticas Ecossistemas e Gesto sustentvel dos recursos (adaptado de Galvo, 2001) Contedos Ecossistemas Compreender por que esto os ecossistemas dinmico em equilbrio Objectivos Conceitos

11

- Interaces seres vivos- ambiente

Compreender como interagem - Factores abiticos os seres vivos com o ambiente - Factores biticos - Espcie Compreender a influncia de - Populao factores fsicos e qumicos do - Comunidade meio sobre cada indivduo e - Ecossistema populao - Habitat - Biodiversidade Compreender as interaces -Interaces existentes entre os seres vivos (predao, parasitismo, competio, mutualismo)

- Fluxos de energia e ciclo de matria

Compreender

intensa - Produtor - Consumidor - Decompositor

actividade dos ecossistemas

Compreender a existncia nas - Nvel trfico comunidades de grupos de seres - Cadeias alimentares vivos com actividades complementares Perturbaes no dos Compreender que as - Catstrofes naturais

equilbrio ecossistemas

catstrofes podem comprometer e antropognicas o equilbrio dos ecossistemas e a sobrevivncia das populaes humanas Identificar causas e efeitos de catstrofes

12

Gesto

sustentvel

dos ecossistemas Proteco e da Compreender a influncia da aco humana na proteco e conservao da Natureza

conservao Natureza

Com a actividade de pesquisa desenvolvida pretende-se, de acordo com as Competncias Essenciais do Currculo Nacional do Ensino Bsico (Annimo, 2001), que os alunos compreendam a importncia que a utilizao regrada dos recursos naturais existentes tem para um desenvolvimento sustentvel. As actividades experimentais de tipo investigativo so uma das estratgias propostas pelas Orientaes Curriculares para o 3 ciclo do Ensino Bsico (Galvo, 2001), com vista ao desenvolvimento das seguintes competncias: - Reconhecimento de que a interveno humana na Terra, ao nvel da explorao, transformao e gesto sustentvel dos recursos, exige conhecimento cientfico e tecnolgico em diferentes reas; - Discusso sobre as implicaes do progresso cientfico e tecnolgico na rentabilizao dos recursos; - Compreenso de que a dinmica dos ecossistemas resulta de uma interdependncia entre seres vivos, materiais e processos; - Compreenso de que o funcionamento dos ecossistemas depende de fenmenos envolvidos, de ciclos de matria, de fluxos de energia e de actividade de seres vivos, em equilbrio dinmico; - Reconhecimento da necessidade de tratamento de materiais residuais, para evitar a sua acumulao, considerando as dimenses econmicas, ambientais, polticas e ticas; - Pesquisa sobre custos, benefcios e riscos das inovaes cientficas e tecnolgicas para os indivduos, para a sociedade e para o ambiente; - Reconhecimento da importncia da criao de parques naturais e proteco das paisagens e da conservao da variabilidade de espcies para a manuteno da qualidade ambiental;

13

- Tomada de deciso face a assuntos que preocupam as sociedades, tendo em conta factores ambientais, econmicos e sociais; - Divulgao de medidas que contribuam para a sustentabilidade na Terra (Annimo, 2001) Atravs da anlise das sugestes metodolgicas, propostas pelo Ministrio da Educao (Galvo, 2001), possvel constatar a importncia dada ao contacto directo dos alunos com os diversos aspectos da natureza do local onde se insere a escola, atravs da realizao de actividades de carcter distinto. Assim, prope-se uma actividade de trabalho prtico que visa a promoo do desenvolvimento de atitudes investigativas que contribuam para uma melhoria da aprendizagem dos alunos.

1.5. O Problema em Pesquisa O estudo apresentado na presente dissertao foi desenvolvido em duas fases. A primeira fase (Captulo II) visou a avaliao do efeito do agente xenobitico Paraquato no crescimento de populaes de microalgas. A segunda fase (Captulo III) desenvolveu-se em torno da adaptao da metodologia dos ensaios de toxicidade de agentes xenobiticos ao 3 Ciclo do Ensino Bsico, utilizando substncias que no constituem um risco de manipulao pelos alunos e de uso recorrente no seu dia-a-dia. Desta forma, surge uma actividade de pesquisa simples e perfeitamente aplicvel na realidade das nossas escolas. O desenvolvimento de competncias numa educao para a cidadania fundamental, pois para assumir uma cidadania plena necessrio possuir conhecimento e informao que possibilitem uma interveno consciente e responsvel na sociedade, questionando comportamentos, atitudes e valores (Gomes, 2001). Nos tempos que decorrem, imperativo que o ensino das cincias contribua para a formao de jovens capazes de exercerem uma cidadania plena, assumindo com responsabilidade as decises de cariz cientfico e tecnolgico fundamentais resoluo de problemas, nomeadamente de problemas ambientais.

14

Assim, a Educao no vista apenas como um fim em si mesma mas como um instrumento imprescindvel na promoo das alteraes necessrias para atingir o desenvolvimento sustentvel (Matsuura, 2002).

1.6. Questes Investigativas Tendo em conta os objectivos da E.A. referidos anteriormente, as investigaes baseadas na resoluo de problemas vo permitir a sensibilizao dos alunos para os problemas locais, e posteriormente globais, a construo de conhecimentos e a formao de competncias para a resoluo de problemas (Vilas-Boas et al., 2004). Assim, podero assumir-se como cidados informados, esclarecidos e participativos na resoluo de problemas ambientais. As questes-problema que orientam a metodologia desenvolvida no estudo so as seguintes: 1. Qual o efeito do agente xenobitico Paraquato nos organismos aquticos? 2. Que dificuldades podem surgir aos alunos no desenvolvimento de um protocolo para testar o efeito de agentes xenobiticos no meio aqutico? 3. Como adaptar a metodologia de pesquisa do efeito de agentes xenobiticos no meio aqutico ao 3 ciclo do Ensino Bsico?

1.7. Objectivos Gerais da Investigao Os objectivos gerais desta investigao foram definidos de acordo com as questes investigativas formuladas. Para a primeira fase (Captulo II) do estudo definiu-se o seguinte objectivo: - Contribuir para o desenvolvimento do conhecimento cientfico, na rea da Biologia, relativamente avaliao do efeito do agente xenobitico Paraquato em trs espcies de microalgas. Para a segunda fase (Captulo III) do estudo, os objectivos definidos foram:

15

- Desenvolver uma actividade de pesquisa de avaliao do efeito de agentes xenobiticos no meio aqutico, adaptada ao 3 Ciclo do Ensino Bsico, utilizando substncias que no constituem um risco de manipulao pelos alunos; - Proporcionar aos Professores do 3 Ciclo do Ensino Bsico ferramentas, essencialmente de carcter prtico, que lhes permitam abordar a temtica dos Ecossistemas numa perspectiva de E.A.; - Promover o ensino prtico das Cincias Naturais no 3 Ciclo do Ensino Bsico, facilitando a aquisio de conhecimentos e de competncias e proporcionando uma atitude de aprendizagem mais motivadora e conceptualmente mais enriquecedora; - Sensibilizar os alunos para a problemtica da contaminao dos sistemas aquticos por agentes xenobiticos, de modo a que apresentem alternativas para o tratamento dos contaminantes; - Promover a cooperao entre Universidades e Escolas Bsicas.

1.8. Resultados Esperados Com a realizao deste plano de investigao pretende-se: - Sensibilizar os Professores para a importante contribuio do Ensino das Cincias na formao de cidados informados e capazes de participar activamente em decises cientficas e tecnolgicas; - Promover o trabalho prtico, proporcionando uma atitude de aprendizagem mais motivadora e conceptualmente mais enriquecedora; - Possibilitar que os alunos tomem conscincia das situaes que representam problemas ambientais, a nvel local e global, e determinem as aces apropriadas para a sua resoluo.

1.9. Estrutura da Tese O ensino das cincias desempenha um papel importante na formao de cidados informados, esclarecidos e participativos, capazes de compreender, discutir e tomar decises sensatas acerca dos problemas relacionados com os benefcios e riscos da Cincia e da Tecnologia para a Sociedade e para o Ambiente.

16

Neste captulo (Captulo I) apresentamos o enquadramento e a problemtica em pesquisa. Iniciamos com a abordagem da importncia do conhecimento cientfico na sociedade actual e apresentamos as perspectivas actuais do ensino das cincias. Em seguida, definimos Educao Ambiental, no que diz respeito s suas finalidades e objectivos, e estabelecemos a sua relao com o ensino das cincias. Terminamos com a definio do problema em pesquisa, a apresentao das questes investigativas, dos objectivos gerais e dos resultados esperados. Dada a importncia didctica das actividades prticas na construo da cultura cientfica apresentamos, no Captulo II, uma avaliao do efeito do agente xenobitico Paraquato no crescimento de populaes de microalgas e, no Captulo III, uma possvel abordagem de um tema na rea da Biologia, integrado nos contedos programticos da rea curricular de Cincias Fsicas e Naturais do 3 ciclo do Ensino Bsico, na qual se propem materiais didcticos para a realizao de uma actividade de pesquisa. Por ltimo, no Captulo IV, so feitas algumas consideraes relativamente aos trabalhos realizados, assim como algumas propostas para futuros trabalhos.

17

18

CAPTULO II

Avaliao do Efeito do Paraquato no Crescimento de Microalgas

19

20

ALGAL GROWTH INHIBITION TO PARAQUAT EXPOSURE

Joana B. Oliveira1, Ana M. M. Gonalves1,2, Fernando Gonalves1 and Mrio J. Pereira1
1 2

CESAM Departamento de Biologia, Universidade de Aveiro, 3810-193 Aveiro, Portugal IMAR (Instituto do Mar), Departamento de Zoologia, Universidade de Coimbra, 3004-517

Coimbra, Portugal

Aceite para publicao: Fresenius Environmental Bulletin Vol.16, No.3 (2007)

21

SUMMARY Aquatic plant toxicity tests are frequently conducted in environmental risk assessment to determine the potential effect of pesticides on primary producers. This study aims to determine paraquat thresholds which inhibit the growth of the three microalgae tested (Pseudokirchneriella subcapitata (Korshikov) Hindak, Chlorella vulgaris Beijerinck and Pandorina morum (Mller) Bory). Results were reported as EC50 values and demonstrate that these microalgae have different sensitivities towards paraquat, with P. morum being the most sensitive species and P. subcapitata the most tolerant. These results demonstrated adverse effects of paraquat upon freshwater green algae, thus, the application of this herbicide for weed control in agricultural practices must be done carefully since any disturbance affecting algae with similar or higher sensitivity will have severe repercussions on higher trophic levels. KEYWORDS: Paraquat, growth inhibition tests, Pseudokirchneriella subcapitata, Chlorella vulgaris, Pandorina morum, EC50.

INTRODUCTION The anthropogenic activity, namely agricultural practices, is greatly responsible for aquatic environmental contamination by organic and inorganic compounds, including pesticides. Herbicides are chemicals commonly used in weeds control and some are continuously discharged into aquatic environments [1]. Paraquat (1,1'-dimethyl-4,4'-bipyridilium dichloride), one of the most widely used herbicide, is a non-selective contact broad-spectrum post emergent herbicide used to control a wide variety of annual and certain perennial weeds [2]. After application, paraquat can be adsorbed into the soil or transported into aquatic environments by runoff or leaching [3]. Paraquat acts on the biochemical system known as PSI as a competitive inhibitor of the photosynthetic electron transport [4, 5]. Its toxicity is due to cyclic oxidation and reduction in tissues, leading to the generation of free oxygen radicals which cause membrane damaging by lipid peroxidation, leading to cell death [6, 7]. This mode of action makes it potentially lethal to a wide variety of nontarget species of primary producers [7-15]. Changes in freshwater systems may greatly affect the survival and life history of phytoplankton and, consequently, have severe repercussions on higher trophic levels. This study aims to provide basic ecotoxicological information as well as to determine paraquat thresholds which inhibit the growth of P. subcapitata, C. vulgaris and P. morum and compare the sensitivity among all species.

22

MATERIALS AND METHODS In this study three freshwater green algae, Pseudokirchneriella subcapitata (Korshikov) Hindak usually named Selenastrum capricornutum Printz, Chlorella vulgaris Beijerinck and Pandorina morum (Mller) Bory, were used to test the effect of different concentrations of paraquat on their growth. The microalgae mostly recommended for algal growth tests is P. subcapitata [16-18]. Still, C. vulgaris presents high potential as test organism and P. morum may be more sensitive to a toxicant [19]. In this manner, their performance was assessed by comparison with the growth behaviour of the standard species under the same conditions. Tests were conducted in 100 mL Erlenmeyers flasks with 40 mL of final test volume [19] and followed the general design of OECD [17]. The nutritive culture medium used was the Marine Biological Laboratory medium (MBL Sterilized Hoods Hole Culture [20]). A stock solution of paraquat was prepared in distilled water from the commercial formulation Paraquato SAPEC 20 (containing 18.35 % of active ingredient paraquat dichloride) and then different volumes were added to the erlenmeyer flasks. Tests were performed in an incubation chamber (F10 000 EDTU model) with continuous agitation (GFL 3015) at 100 rpm, a 16hL:8hD photoperiod (43-46 mol quantum-2s-1 provided by cool white fluorescent light) and controlled temperature at 20 2C. Tests were carried out during 96 h and two biomass parameters were determined: optical density at 440 nm for P. subcapitata and C. vulgaris and chlorophyll a (chl a) for P. morum [19]. Chl a concentration was determined by filtering the culture volume through GF/C filters, which were then treated with acetone (90%) and measured at 665 and 750 nm, before and after acidification with HCL (0.1M) [21]. A variance analysis (ANOVA) was performed, in conjunction with the Dunnett test, in order to analyse significant differences in growth (p< 0.05) between the control and treatments exposed to different concentrations of paraquat [22]. The EC50 values were determined for each alga by probit analysis [23].

RESULTS In general, data obtained show that paraquat affects the growth of the three freshwater green algae (figure II.1.). The growth of P. subcapitata was significantly inhibited in all treatments when compared with the control (figure 1A). In the case of C. vulgaris there was a significant inhibition of growth between the control and treatments exposed to paraquat concentrations above 25 g.L-1 (figure 1B). P. morum growth showed a significant inhibition in treatments exposed to paraquat concentrations above 0.90 g.L-1 (figure 1C). The toxicological responses of each alga to paraquat, expressed as individual EC50, are presented in Table II.1.. The EC50 values calculated were 500.15 g.L-1 (321.15818.62), 88.44 g.L-1 (65.03-117.20) and 3.68 g.L-1 (0.37-10.84) for P. subcapitata, C. vulgaris and P. morum, respectively. According to the results obtained after 96 h of exposure to paraquat, we may infer that the sensitivity to this herbicide differs between the three species, with P. morum proving to be the most sensitive and P. subcapitata the most tolerant.

23

DISCUSSION AND CONCLUSION Plant species are expected to be sensitive to herbicides which alter oxidative phosphorylation (in the case of the pyridine class of herbicides where paraquat is included) or other processes universally important in plants [13]. Also, this study demonstrates that paraquat affects the growth of the three freshwater green algae, with P. morum being the most sensitive species and the laboratory standard species the most tolerant. Literature concerning the use of P. morum as organism in growth inhibition tests is scarce, which limits the comparative analysis of the results obtained in this study. According to Senz et al. [7], the growth of S. capricornutum was significantly inhibited when exposed to paraquat concentrations above 200 g.L-1, a higher value than the one obtained in this study, while C. vulgaris growth was significantly inhibited at concentrations above 20 g.L-1 (Table II.2.). The same authors reported a significant inhibition in growth of Scenedesmus quadricauda (CCAP 276/21) and S. quadricauda at paraquat concentrations above 400 g.L-1 and 50 g.L-1, respectively, demonstrating that wild strains are more sensitive than standard ones [7]. Senz et al. [15] reported that S. quadricauda cultures exposed above 200 g.L-1 of paraquat were severely affected and a total growth inhibition was noticed at 3200 g.L-1. The same authors also demonstrated that paraquat exerted algistatic and no algicidal effects upon cultures, even at concentrations of 3200 g.L-1 [15]. Other studies reported that 20 and 200 g.L-1 of paraquat inhibited significantly the growth of S. quadricauda Berb 614, while concentrations above 200 g.L-1 cause death [14]. In the same study, Wong [14] also reported that concentrations of 200 g.L-1 reduced algal photosynthetic rate to about 60%. Franqueira et al. [8] proved that paraquat concentrations above 38.57 g.L-1 are toxic for the microalga Chlamydomonas eugametos. However, the same study revealed that lower concentrations of paraquat cause alterations in certain cellular components especially sensitive to the mode of action of this herbicide. According to these results we may state that this alga is one of the most sensitive towards paraquat. Senz et al. [12] reported a significant inhibition of growth of S. acutus (SAG 2763a) exposed to paraquat concentrations above 50 g.L-1, similar to results obtained with C. vulgaris. According to Rojkov-Padrtov & Marlek [24] the high variability of responses exhibited by different species to the same chemical substance can be explained by the morphology, cytology, physiology and genetics of the organisms. As an example, these authors stated that the difference in sensitivity between S. capricornutum and C. vulgaris (more tolerant) to three active ingredients (oxyfluorphene, pendimethaline, atrazine) was due to characteristics such as thick cell wall and the presence of more active enzymes in C. vulgaris [24]. However, for paraquat an exception to this statement is found: C. vulgaris was more sensitive than P. subcapitata, as also stated by Senz et al. [7]. Algal size is also a significant factor in the interaction between algae and herbicides [25]. The EC50 values calculated in our study are similar to Senz et al. [7] that reported EC50 values of 140 g.L-1 (100-190), 670 g.L-1 (550-810), 1300 g.L-1 (1010-1600) and 220 g.L-1 (180-260) for C. vulgaris, S. capricornutum, S. quadricauda (CCAP 276/21) and S. quadricauda, respectively. Values obtained for C. vulgaris and S. capricornutum are higher than the ones reported in our study.

24

Fairchild et al. [13] achieved a 96 h EC50 value of 559 (471-646) g.L-1 for S. capricornutum, very similar to the one reported in our study. Senz et al. [15] reported a 220 g.L-1 (180-260) value for S. quadricauda, similar to the obtained by Senz et al. [7]. The 96h EC50 value obtained by Franqueira et al. [8] for the microalga C. eugametos was 72 g.L-1. Ibrahim [10] obtained EC50 values of 39.8 g.L1 for Scnedesmus dimorphus and 93.3 g.L-1 for Ankistrodesmus falcatus and Senz et al. [12] reported EC50 value of 47 g.L-1 (20-70) for Scnedesmus acutus. The results of this work suggest that discharges of paraquat proceeding from agricultural practices into aquatic ecosystems damages the natural green algae populations, as well as other planktonic species.

REFERENCES [1] Fargasova A. (1994) Comparative study of plant growth hormone (herbicide) toxicity in various biological subjects. Ecotoxicol. Environ. Safety 29: 359-364. [2] Paraquat Information Center on behalf of Syngenta Crop Protection Ag (http://www.paraquat.com/) [3] Ibez M., Pic Y., Maes J. (1996) Influence of organic matter and surfactans on solidphase extraction of diquat, paraquat and difenzopuat from waters. J Chromatogr A 727: 245-252. [4] Summers L.A. (1980) The bipyridinium herbicides. Academis Press, New York, NY. [5] Devine M., Duke S.O., Fedtke C.E. (1993) Physiology of herbicide action. PTR Prentice-Hall, Englewood Cliffs, NJ. [6] Tissut M., Ravanel P., Nurit F., Deslandres C., Bourguignon J. (1987) Effects of LS82556 on thylakoid activities and photosynthesis: a comparison with paraquat and acidfluorfen. Pestic. Biochem. Physiol. 29: 209-216. [7] Senz M.E., Alberdi J.L., Di Marzio W.D., Accorinti J., Tortorelli M.C. (1997) Paraquat Toxicity to Different Green Algae. Bull. Environ. Contam. Toxicol. 58: 922928. [8] Franqueira D., Cid A., Torres E., Orosa M., Herrero C. (1999) A Comparison of the Relative Sensitivity of Structural and Functional Cellular Responses in the Alga Chlamydomonas eugametos Exposed to the Herbicide Paraquat. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 36: 264-269. [9] Rabinowitch H. D., Clare D. A., Crapo J. D., Fridovitch I. (1983) Positive correlation between superoxide dismutase and resistance to paraquat toxicity in the green alga Chlorella sorokiniana. Arch. Biochem. Biophys. 225: 640-648.

25

[10] Ibrahim E. A. (1990) The influence of the herbicide paraquat gramoxon on growth and metabolic activity of three chlorophytes. Water Air Soil Poll. 51: 89-93. [11] Bray D. F., Bagu J. R., Nakamura K. (1993) Ultrastructure of Chlamydomonas reinhardtii following exposure to paraquat: comparison of wild type and a paraquatresistant mutant. Can J Bot 71: 174-182. [12] Senz M.E., Accorinti J., Tortorelli M.D.C. (1993) Toxicity of paraquat to a green algae Scenedesmus acutus. J Environ. Sci. Health B 28 (2): 922-928. [13] Fairchild J.F., Ruessler D.S., Haverland P.S., Carlson A.R. (1997) Comparative Sensitivity of Selenastrum capricornutum and Lemna minor to Sixteen Herbicides. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 32: 353-357. [14] Wong P.K. (2000) Effects of 2,4-D, glyphosate and paraquat on growth, photosynthesis and chlorophyll-a synthesis of Scenedesmus quadricauda Berb 614. Chemosphere 41: 177-182. [15] Senz M.E., Di Marzio W.D., Alberdi J.L., Tortorelli M.C. (2001) Algal Growth Recovery Studies After Paraquat Exposure. Bull. Environ. Contam. Toxicol. 66: 263268. [16] ASTM (2002) Practice for Algal Growth Potential with Selenastrum capricornutum. D 3978-80. In: Annual Book of Standards. Volume 11 (05), American Society for Testing and Materials, PA, pp 27-32. [17] OECD (2002) OECD Guidelines for the Testing of Chemicals. Draft Revised Guideline 201 Freshwater Alga and Cyanobacteria, Growth Inhibition Test, pp 1-21. [18] USEPA (2002) Short-term Methods for Estimating the Chronic Toxicity of Effluents and Receiving Waters to Freshwater Organisms. 4th edition. EPA821/R-02/013. [19] Gonalves A.M.M., de Figueiredo D.R., Pereira M.J. (2005) A Low-cost Methodology for Algal Growth Inhibition Tests Using Three Freshwater Green Algae. Fresenius Environmental Bulletin 14(12): 1192-1195. [20] Stein, J.R. (1973) Handbook of Phycological Methods: Culture Methods and Growth Measurements. Cambridge University Press, Cambridge. [21] Norma Portuguesa da Direco Geral do Ambiente (NP4327, 1996). Doseamento da clorofila a e dos feopigmentos por espectrometria da absoro molecular. Mtodo da extraco com acetona. [22] Zar J.H. (1996) Biostatistical Analysis. 3rd edition. Prentice-Hall International, Inc., New Jersey. [23] Finney D.J. (1971) Probit Analysis. Cambridge University Press, Cambrigde, UK.

26

[24] Rojkov-Padrtov R., Marlek B. (1999) Selection and Sensitivity Comparisons of Algal Species for Toxicity Testing. Chemosphere 38(14): 3329-3338.

CORRESPONDING AUTHOR Ana Gonalves CESAM Departamento de Biologia Universidade de Aveiro 3810-193 Aveiro PORTUGAL Phone: +351 234 370 777 Fax: +351 234 426 408 e-mail: ana.goncalves@bio.ua.pt

27

Optical density of Pseudokirchneriella subcapitata (440 nm)

0.25

0.16

0.20
* * *

Optical density of Chlorella vulgaris (440 nm)

0.14 0.12
*

0.15

0.10 0.08 0.06 0.04 0.02

* * *

0.10
*

0.05
*

0.00 0 50 113 253 570 1281

-1

0.00 0 25 56 92 111
-1

190

Paraquat concentrations (g.L )

Paraquat concentrations (g.L )

1600

Chlorophyll a concentration of -1 Pandorina morum (g.L )

1400 1200 1000 800 600

* * *

400 200
*

0 0 0.90 1.46 2.38 6.29 10.22

-1

Paraquat concentrations (g.L )

Figure II.1. Growth inhibition of three freshwater green algae exposed to different concentrations of paraquat, after 96 h of incubation using (A) P. subcapitata, (B) C. vulgaris and (C) P. morum [* represents statistical differences (p<0.05) in algal growth between treatments and the control (0 g.L-1)].

Table II.1. EC50 values (g.L-1) of paraquat for P. subcapitata, C. vulgaris and P. morum with the respective 95% confidence limits (in brackets). Species P. subcapitata C. vulgaris P. morum EC50 ( g.L-1) (321.15-818.62) (65.03-117.20) (0.37-10.84)

500.15 88.44 3.68

28

Table II.2. Overview of studies carried out in order to determine paraquat effect on different green algae.

Species S. dimorphus A. falcatus C. reinhardtii S. acutus (SAG 276-3a) S. capricornutum P. subcapitata

Significant inhibition of growth 0.10 M > 50 g.L-1 > 200 g.L-1 50 g.L-1 > 50 g.L-1 > 200 g.L-1 > 400 g.L-1 20-200 g.L-1 > 20 g.L-1 > 56 g.L-1 > 38.57 g.L-1 > 1.46 g.L-1

96 h EC50 (g.L-1) 39.8 93.3 47 (20-70) 559 (471-646) 670 (550-810) 500.15 (321.15818.64) 220 (180-260) 220 (180-260) 1300 (1010-1600) 140 (100-190) 88.44 (65.03-117.20) 72 3.68 (0.37-10.84)

References

Ibrahim 1990 a Bray et al. 1993 b Senz et al. 1993 c Fairchild et al. 1997 d Senz et al. 1997 e our study f Senz et al. 1997 e Senz et al. 2001 g Senz et al. 1997 e Wong 2000 h Senz et al. 1997 e our study f Franqueira et al.1999 i our study f

S. quadricauda S. quadricauda (CCAP 276/21) S. quadricauda Berb 614 C. vulgaris C. eugametos P. morum
a, b, d c, e, g

not specified Osaquate containing 27.6% of active ingredient f Paraquato SAPEC containing 18.35% of active ingredient h 1, 1- dimethyl- 4, 4- bipyridinium ion, 20% of active ingredient i granulated herbicide paraquat Sigma, MW: 257,2

29

30

CAPTULO III

Actividade Proposta para o 3 Ciclo do Ensino Bsico

31

32

O Ensino das Cincias Naturais e a Educao Ambiental: uma proposta pedaggica para o 3 ciclo do Ensino Bsico
Joana B. Oliveira, Mrio J. Pereira e Fernando Gonalves CESAM, Departamento de Biologia, Universidade de Aveiro, 3810-193 Aveiro

Resumo As actividades humanas, atravs das mais variadas prticas (industriais, domsticas, agrcolas, entre outras), so responsveis pela contaminao de sistemas aquticos por compostos orgnicos e inorgnicos. A avaliao dos efeitos txicos de diferentes agentes em populaes ou comunidades de organismos, que pertencem a ecossistemas aquticos, pode ser efectuada atravs da realizao de ensaios ecotoxicolgicos. Neste trabalho descreve-se a adaptao duma metodologia de ensaios de toxicidade, com agentes xenobiticos, ao 3 Ciclo do Ensino Bsico, utilizando substncias que no constituem um risco de manipulao pelos alunos. Desta forma, surge uma metodologia simples e perfeitamente aplicvel na realidade das nossas escolas. Ao interligar o ensino das cincias com a Educao Ambiental pretende-se abordar os contedos programticos da rea curricular de Cincias Fsicas e Naturais, temtica Sustentabilidade na Terra, de acordo com os valores e princpios da Educao Ambiental. Desta forma, a aprendizagem dos conhecimentos cientficos ser facilitada e, simultaneamente, promover-se- o desenvolvimento de uma conscincia ecolgica sobre o impacto de contaminantes na qualidade da gua e nos organismos aquticos. A realizao de uma actividade de pesquisa deste gnero permite a aquisio de conhecimentos, competncias, atitudes e valores sociais necessrios para a consciencializao e resoluo dos problemas ambientais, numa tica de desenvolvimento sustentvel. Este trabalho demonstra ainda que possvel realizar um ensaio de toxicidade dentro das possibilidades materiais e oramentais das nossas escolas. Importa referir que as orientaes curriculares para a disciplina de Cincias Naturais no fazem referncia a qualquer actividade prtica semelhante na abordagem desta temtica.

33

Palavras-chave: Testes ecotoxicolgicos, actividade prtica, Ensino Bsico, Educao Ambiental

Introduo A Hidrosfera, um dos subsistemas do sistema terrestre, constituda por cerca de 2,5% de gua doce, a qual se encontra distribuda pelos cursos de gua, lagos e lenis freticos. Deste modo, apenas 1% da gua doce existente pode ser utilizada pelo Homem na satisfao das suas necessidades bsicas. Apesar deste valor, a m gesto e degradao deste recurso quer devido ao rpido desenvolvimento econmico e industrializao quer devido ao crescimento populacional, tem-se tornado um problema preocupante para as sociedades modernas (Mason, 1998). A contaminao traduz-se na introduo no ambiente, pelo Homem, de substncias ou energia em quantidades que no causam impactos negativos (Crompton, 1997). Quando as substncias ou energia introduzidas constituem um risco para a sade pblica, so prejudiciais para os recursos vivos e sistemas ecolgicos ou interferem com usos legtimos do ambiente, refere-se a poluio (Holdgate, 1979). A contaminao e poluio dos ecossistemas aquticos devem-se no s a causas naturais mas sobretudo a actividades antropognicas (Crompton, 1997; Connel, 1999) como sejam, as descargas de efluentes domsticos ou industriais, a lixiviao e escorrncia de pesticidas em terrenos agrcolas, entre outras (Mason, 1996; Connell, 1999; Hoffman et al. 2003). A avaliao do efeito de um composto num ecossistema aqutico pode ser efectuada atravs de ensaios ecotoxicolgicos, os quais consistem em expor um dado organismo-teste a diferentes concentraes de um txico, durante um determinado perodo de tempo, de forma a determinar os possveis efeitos nefastos desse agente. Os ensaios ecotoxicolgicos constituem assim um importante instrumento ao nvel da investigao, permitindo averiguar os efeitos txicos de diferentes agentes em populaes ou comunidades de organismos que pertencem aos ecossistemas aquticos. A partir dos resultados obtidos nestes testes, possvel inferir algumas das consequncias, por exemplo ao nvel das interaces trficas, que se traduzem no desequilbrio desse mesmo ecossistema.

34

A contaminao e/ou poluio um dos temas de incontornvel abordagem no ensino das Cincias Naturais. Considerado nas mais diversas vertentes e com maior ou menor especificidade, este tema tem forte aplicabilidade em actividades prticas. O trabalho prtico (TP) tem desempenhado um papel central no ensino das cincias. Contudo, os resultados conseguidos no correspondem ao esperado pois nem o factor de motivao faz com que os alunos alcancem uma aprendizagem significativa dos conceitos, nem a sua realizao faz com que os alunos adquiram hbitos e destrezas cientficas (Bastida de la Calle et al., 1990). Isto acontece porque as prticas implementadas no esto de acordo com as perspectivas actuais de educao (Dourado, 2001) e alguns professores sentem tambm dificuldades na sua implementao. Para inverter esta situao, necessrio que as actividades deixem de constituir meras ilustraes dos conhecimentos transmitidos e passem a constituir actividades de investigao. Assim, para uma adequada utilizao do trabalho prtico fundamental que se aposte na formao de professores, sendo este factor mais importante do que as condies materiais e organizacionais (Dourado, 2001; Oliveira, 1999). De facto, a imagem da cincia que os alunos possuem depende em larga escala do que lhes proporcionado pelos professores de cincias (Praia & Cachapuz, 1994; Mellado Jimnez, 1996; Hodson, 1993) pelo que se deve apostar na sua formao de modo a influenciar a sua prtica profissional, incluindo a planificao das actividades de aprendizagem (Praia, 1999) Hodson (1992, 1994, 1996, 1998) sugere uma reconceptualizao dos objectivos do TP de acordo com os objectivos principais da educao em Cincia: - Aprender Cincia: aquisio e desenvolvimento de conhecimentos tericos e conceptuais; - Aprender Sobre a Cincia: desenvolvimento de um entendimento sobre a natureza e os mtodos da cincia tendo em ateno as interaces complexas entre cincia e sociedade; - Aprender a Fazer Cincia: desenvolvimento dos conhecimentos tcnicos sobre a investigao cientfica e a resoluo de problemas; O nico trabalho prtico que permite uma abordagem holstica dos trs tipos de conhecimentos mencionados o trabalho experimental (Gott & Duggan, 1995), pelo que este deve ser privilegiado em detrimento dos restantes tipos de trabalho prtico. Trabalho experimental uma actividade de resoluo de problemas que para alm de permitir a

35

construo/reconstruo de conhecimento conceptual (Leite, 2001; Caamao 1992; Miguns 1991, 1994), permite ao aluno aprender a metodologia cientfica atravs do desenvolvimento de quase todas as capacidades e competncias inerentes ao trabalho dos cientistas (Leite, 2001). Os professores devem seleccionar as actividades prticas que melhor desenvolvam os contedos em questo e as mais coerentes com a viso construtivista da aprendizagem (Luffiego, 1995). Nesta perspectiva, assume-se que o trabalho prtico desempenha um papel importante na promoo da mudana conceptual dos alunos (Barber & Valds, 1996). As actividades prticas tm sido tambm consideradas fundamentais na Educao Ambiental, pois promovem o desenvolvimento integral dos participantes, facilitando a aquisio de conhecimentos e competncias, estimulando a motivao, incrementando a afectividade, cumplicidade e o desenvolvimento e/ou reformulao de atitudes (Pato et al., 2004). No basta consciencializar os alunos acerca da existncia de problemas ambientais. necessrio assegurar que os alunos se apercebam que esto em interaco com o meio envolvente, que sejam capazes de avaliar o seu prprio impacto no meio e que desenvolvam as suas capacidades para a investigao, avaliao e aco (Hungerford & Peyton, 1993; Cachapuz, 1995; Leite, 2002; Franquesa & Sureda, 2003). Assim, e com o objectivo de contribuir para a realizao de actividades prticas no ensino das cincias, desenvolveu-se uma actividade que consiste na adaptao da metodologia dos ensaios de toxicidade de agentes xenobiticos ao 3 Ciclo do Ensino Bsico, utilizando substncias que no constituem um risco de manipulao pelos alunos. A substncia escolhida para simular uma situao de contaminao/poluio foi NaCl, vulgarmente conhecido por sal de cozinha, por ser de uso recorrente no dia-a-dia dos alunos. A realizao de uma actividade prtica deste gnero permite a aquisio de conhecimentos, sustentvel. competncias, atitudes e valores sociais necessrios para a consciencializao e resoluo dos problemas ambientais, numa tica de desenvolvimento

36

Sugesto de uma Actividade de Pesquisa Nota introdutria Esta actividade prtica tem por principal objectivo a compreenso dos mecanismos fundamentais subjacentes ao funcionamento e ao equilbrio dos ecossistemas. A poluio, nas mltiplas formas que pode tomar, constitui uma das principais causas do desequilbrio dos ecossistemas. Recorrendo a um procedimento de simples execuo, pretende-se uma reflexo sobre as causas e os efeitos da poluio assim como a sensibilizao dos alunos para a necessidade de preservar os recursos naturais, visando uma perspectiva de educao para a cidadania. A realizao desta actividade permitir tambm desenvolver conhecimentos cientficos, metodolgicos e conceptuais nos alunos. Considera-se conveniente a constituio de pequenos grupos de trabalho (4-5 alunos) favorecendo-se, deste modo, o relacionamento interpessoal, a cooperao e a aprendizagem dos alunos (Galvo, 2001). Esta tambm uma forma de obter resultados diferenciados, o que ir enriquecer a sua discusso.

Contextos de aplicao da actividade Sugere-se que esta actividade seja aplicada na abordagem do terceiro tema organizador do 3 Ciclo do Ensino Bsico Sustentabilidade na Terra, nomeadamente, no estudo das unidades programticas Ecossistemas e Gesto sustentvel dos recursos. Ao nvel do estudo dos Ecossistemas podem ser exploradas as Interaces entre os seres vivos e o Ambiente, os Fluxos de energia e ciclo de matria e as Perturbaes ao equilbrio dos ecossistemas. Relativamente Gesto Sustentvel dos Recursos podem explorar-se os Recursos Naturais utilizao e consequncias e a Proteco e Conservao da Natureza (Galvo, 2001).

Objectivos da actividade: Com a aplicao da actividade prtica proposta pretende-se:

37

- promover o trabalho prtico, facilitando a aquisio de conhecimentos e de competncias e proporcionando uma atitude de aprendizagem mais motivadora e conceptualmente mais enriquecedora; - criar destreza laboratorial nos alunos aquando da execuo da parte laboratorial dos ensaios de toxicidade; - possibilitar aos alunos a tomada de conscincia relativamente a problemas ambientais, ao nvel local e global, e a determinao de aces apropriadas para a sua resoluo; - conhecer a influncia da aco humana na proteco e conservao da Natureza; - sensibilizar os alunos para a problemtica da contaminao dos sistemas aquticos por agentes xenobiticos.

Materiais e equipamentos: O material de laboratrio apresentado na Tabela III.1. refere-se ao que necessrio a cada grupo de trabalho na execuo desta actividade. Tabela III.1. Lista de materiais e equipamentos. Material de laboratrio 1 esptula 1 pina 1 filtro GF/C 1 vareta de vidro 1 kitasato de 2L 2 erlenmeyers de 1 L 2 bales volumtricos de 250 ml 3 pipetas graduada de 5 ml 1 pompete 2 provetas graduadas de 100 ml 1 lamparina de lcool 15 frascos de vidro incolor (aprox. 200 ml) estufa autoclave balana pequeno disco de rede (4 cm) c/ 50 m de poro de malha aparelho de filtrao espectrofotmetro garrafa de gua de 1,5 L vazia Equipamentos

38

papel de alumnio algodo e palitos Reagentes gua destilada K2HPO4 NaNO3 sal de cozinha (NaCl) Material biolgico 2,5 L de gua de um lago

Procedimento: 1. Lavar os 15 frascos de vidro sem utilizar detergente, passar por gua destilada e colocar numa estufa a secar. Em seguida, esterilizar os frascos utilizando um autoclave (20 minutos). 2. Tapar os frascos de vidro. As rolhas podem ser construdas pelos alunos, bastando para isso que tenham acesso a algodo e palitos. 3. Filtrar 2,5 L de gua de um lago atravs de um pequeno disco de rede com 50 m de poro de malha, para um recipiente. Para tal necessrio cortar uma garrafa de gua de 1,5 L ao meio e retirar tambm a parte superior da rolha, colocando o pequeno disco de rede no seu lugar (Figura III.1.).

Pequeno disco

4. Filtrar os 2,5 L de gua proveniente da filtrao anterior (ver ponto anterior), atravs de um filtro GF/C utilizando o aparelho de filtrao. Separar o filtrado por erlenmeyers de 1L (Em1, Em2). 5. Preparar uma soluo de K2HPO4 (8,72 g.L-1) em gua destilada. 6. Preparar uma soluo de NaNO3 (85 g.L-1) em gua destilada. 7. Adicionar 0,5 ml de soluo de K2HPO4 e 0,5 ml de soluo de NaNO3 ao Em1. A soluo contida no Em1 vai funcionar como meio de cultura para o crescimento do fitoplncton.

39

8. Pesar 12 g de sal de cozinha (NaCl) e adicionar ao Em2. Mexer bem a soluo para dissolver o sal. 9. Identificar cada frasco de vidro com a respectiva concentrao e, em seguida, adicionar-lhes o meio de cultura (Em1), a soluo de NaCl (Em2) e a amostra de fitoplncton nas propores indicadas na seguinte tabela (Tabela III.2.): Concentrao (g.L-1) 0 3 6 9 12
*

Meio de Cultura Em1 (ml) 95 71,2 42,5 23,8 0

Soluo de NaCl Em2 (ml) 0 23,8 47,5 71,2 95

Fitoplncton* (ml) 5 5 5 5 5

este inculo cedido pelo laboratrio da Universidade

O controlo (CTL) da experincia constitudo apenas por meio de cultura (3 rplicas). Para cada tratamento testam-se quatro propores diferentes de NaCl (3 rplicas). 10. O teste tem incio no final da transferncia do fitoplncton e decorre durante 4 a 8 dias, at serem observadas diferenas de cor (crescimento de algas) entre os vrios tratamentos (Anexo I). Durante a durao do teste, a temperatura deve manter-se constante (201C) e os frascos de vidro devem ser agitados manualmente vrias vezes por dia. Em situao ideal, os frascos de vidro deveriam ser colocados num agitador (100rpm) e mantidos numa cmara de temperatura controlada. 11. No final do perodo de teste proceder determinao da densidade ptica de cada frasco de vidro a 440 nm e registar os resultados numa tabela (Anexo II). 12. Representar os resultados graficamente. Sugere-se a construo de um histograma (Concentrao de NaCl testada vs. Mdia da densidade ptica para cada tratamento e controlo).

40

Resultados da Actividade e sua Discusso Tabela III.3. Valores de densidade ptica (440nm) obtidos em cada tratamento e controlo. Concentrao Densidade Mdia da Rplicas -1 (g.L ) ptica (440 nm) Densidade ptica 0 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 0.188 0.191 0.156 0.164 0.175 0.173 0.107 0.105 0.11 0.064 0.066 0.058 0.049 0.054 0.046 0.178 Desvio Padro 0.019

0.171

0.006

0.107

0.003

0.063

0.004

12

0.050

0.004

0.20

Densidade ptica de P. subcapitata (440 nm)

0.15

0.10

0.05

0.00 0

Concentrao de NaCl (g.L-1)

12

Figura III.2. Inibio do crescimento de Pseudokirchneriella subcapitata quando exposta a diferentes concentraes de NaCl (0, 3, 6, 9 e 12 g.L-1).

41

Estratgia de Implementao da Actividade de Pesquisa Sugere-se que a abordagem da actividade de pesquisa desenvolvida se inicie com o enquadramento da actividade no mbito dos conhecimentos prvios dos alunos, tendo a preocupao de os orientar para os objectivos que a actividade encerra. A contextualizao inicial da actividade deve, assim, abordar a problemtica da utilizao desenfreada e degradao dos recursos naturais, em particular dos recursos hdricos, pelo Homem, quer devido ao rpido desenvolvimento econmico e industrializao, quer devido ao crescimento populacional. O professor deve orientar esta discusso no sentido dos alunos conclurem que as actividades humanas, atravs das mais variadas prticas (industriais, domsticas, agrcolas, entre outras) so responsveis pela contaminao de sistemas aquticos. Aps a contextualizao da actividade, sugere-se que o professor suscite a curiosidade dos alunos recorrendo questo-problema Como se pode avaliar o efeito de um contaminante num ecossistema aqutico? e orientando a sua discusso no sentido da realizao de testes, utilizando seres vivos que integrem os ecossistemas aquticos. Dada a novidade da temtica dos testes ecotoxicolgicos, o professor deve explicar sumariamente a sua metodologia assim como referir os organismos usualmente utilizados. Uma vez feita esta sugesto, o professor deve colocar uma nova questo-problema aos alunos Como podemos simular o impacto dos contaminates nos organismos?. A discusso desta questo deve ser orientada para a simulao de uma situao de contaminao/poluio utilizando uma substncia de uso recorrente no dia-a-dia dos alunos e que no constitua um risco de manipulao, como o caso do sal das cozinhas (NaCl). Uma vez definido o tipo de teste a realizar e o contaminante a testar, o professor deve propor aos alunos que planeiem o teste. Nesta altura, os alunos devem estar aptos para a construo de um V de Gowin (Anexo III). Se os alunos ainda no tiverem tido contacto com este instrumento de ensino-aprendizagem, o professor deve proceder explicitao do seu modo de construo recorrendo a um exemplo previamente construdo. O incio da construo do V de Gowin deve ser acompanhado pelo professor uma vez que a definio da questo-problema de extrema importncia para um correcto desenho deste instrumento. Nesta actividade de pesquisa, a questo-problema proposta seria Como que o NaCl afecta o crescimento do fitoplncton?. Depois de definida esta questo, ou outra,

42

sugere-se que os alunos prossigam sozinhos a construo para que, numa etapa posterior, compreendam as incorreces cometidas, quando as houver. Antes da realizao da actividade prtica, os alunos devem ser familiarizados com os organismos-teste, isto , com as microalgas. Para isso sugere-se a observao de uma gota de inculo ao microscpio assim como uma pesquisa na biblioteca e na internet para procurar informao relativa biologia destes organismos. Aps a realizao da actividade prtica, chegada a altura de discutir os resultados obtidos. Dado que os alunos reorganizam e constroem os seus conceitos cientficos, em parte atravs do dilogo com os outros, deve ser concedido tempos aos alunos para que estes discutam acerca da natureza e significado dos resultados obtidos, assim como acerca das implicaes dos resultados (Lunetta, 1998). Assim, os resultados obtidos, representados graficamente, devem ser alvo de uma discusso intra- e/ou entre-grupos, mediada pelo professor. Desta discusso devem constar algumas das seguintes questes:

O contaminante (NaCl) testado afecta o crescimento do fitoplncton? Sim, o contaminante afecta o crescimento do fitoplncton.

Existe uma relao entre a concentrao de contaminante testada e a sua toxicidade? Existe. Verifica-se um aumento da inibio do crescimento e, consequentemente, da toxicidade do contaminante, medida que a sua concentrao aumenta.

Que dados suportam as respostas anteriores? Para responder s questes anteriores basemo-nos na diferena de cor dos frascos teste no incio e no final da actividade, na existncia de uma gama de tonalidades entre os frascos teste no final da actividade (quanto maior a concentrao de contaminante, menos acentuada a tonalidade) e na comparao dos resultados obtidos atravs da quantificao da clorofila inicial e final.

43

Que consequncias podem trazer os contaminantes para o equilbrio de um ecossistema aqutico? De que maneira pode o Homem ser afectado? Os contaminantes provocam desequilbrios nos ecossistemas aquticos, por exemplo, ao nvel da quebra das cadeias trficas e dos fluxos de energia. O Homem pode ser afectado na medida em que ocorre a reduo ou contaminao dos recursos disponveis, podendo tambm advir problemas para a sua sade.

D exemplos de medidas que podem ser implementadas quanto ao destino de contaminantes, de forma a evitar a sua entrada nos sistemas aquticos? Por exemplo, a separao e tratamento de lixos domsticos, dos efluentes industriais e agrcolas.

A discusso dos resultados permitir tambm a reformulao do V de Gowin inicial construdo pelos alunos.

Avaliao da Actividade Cabe ao professor o papel de avaliar o desempenho dos alunos na realizao da actividade (participao e entusiasmo demonstrado), a compreenso do tema, a aquisio de conceitos e conhecimentos e o desenvolvimento de competncias procedimentais e atitudinais. Como elementos de avaliao da actividade sugere-se que o professor tenha em conta a construo e reconstruo do V de Gowin (Anexo III) que sintetiza o percurso de pesquisa, assim como a construo de um mapa de conceitos (Anexo IV) que rena os conhecimentos adquiridos. A construo do mapa de conceitos permite aos alunos: utilizar tcnicas e recursos de expresso oral e escrita, confrontar as suas ideias com as da turma, enriquecer as ideias apresentadas, (re)estruturar as ideias em relao ao problema para o qual pretendem obter respostas e aumentar a conceptualizao dos conhecimentos adquiridos. Desta forma, ser avaliada a consolidao dos conhecimentos adquiridos.

44

Dificuldades sentidas durante o desenvolvimento da Actividade Proposta O desenvolvimento desta actividade de pesquisa de adaptao da metodologia dos ensaios de toxicidade de agentes xenobiticos ao 3 ciclo do Ensino Bsico foi um processo bastante moroso, efectuado por etapas e em vrias tentativas. Na primeira etapa tentmos substituir o meio de cultura (MBL) vulgarmente utilizado nos testes de toxicidade. Ultrapassada esta etapa procedemos substituio do inculo e, posteriormente, avaliao do efeito do incremento da concentrao de NaCl no crescimento do fitoplncton. A concretizao da primeira etapa, substituio do meio de cultura MBL, ocorreu aps vrias tentativas. Na 1 tentativa, testmos vrias concentraes (0,125; 0,25; 0,5; 1; 2; 4 ml.L-1) de um substrato comercial para plantas AlgoFlash de composio N-P-K (6-5-6) e conclumos que as algas inoculadas (P. subcapitata, C. vulgaris e P. morum) registaram um crescimento muito reduzido e apenas nas concentraes mais baixas. Verificmos tambm que a alga mais resistente foi C. vulgaris. Na 2 tentativa, repetimos o procedimento anterior utilizando uma gama de concentraes mais baixa (0,1; 0,05; 0,025; 0,0125; 0,00625; 0,003125; 0,001563 ml.L-1) e verificou-se um aumento de crescimento do inculo at concentrao 0,0125 ml.L-1 aps a qual ocorreu um decrscimo. Na 3 tentativa utilizmos um adubo comercial Foskamonio de composio NP-K (10-10-10) e testmos as concentraes 5, 10 e 20 g/L. Este ensaio foi realizado inoculando apenas P. subcapitata dado esta alga ser mais usual nos laboratrios e, assim, ser mais fcil de obter pelas escolas. O crescimento foi muito inferior ao determinado no controlo. Em seguida, 4 tentativa, optmos por adicionar diferentes quantidades (0,5; 1; 2 ml) de NaNo3 e K2HPO4 a gua da torneira, previamente agitada para libertar o cloro. No houve crescimento. Na 5 tentativa, recolhemos gua de um lago existente nas imediaes do nosso laboratrio e filtrmo-la atravs de uma rede de zooplncton com 50 m de poro de malha. Em seguida, a mesma gua foi filtrada atravs de um filtro GF/C utilizando um aparelho de filtrao e, no final, adicionmos diferentes quantidades de NaNo3 (0,1; 0,5; 1; 2 ml) conjugadas com K2HPO4 (0,5; 0,5; 1; 2 ml). Comparmos os valores de crescimento entre o controlo e os diferentes tratamentos e conclumos que o crescimento era semelhante

45

apenas nos dois primeiros tratamentos, optando-se pela concentrao em que o crescimento era superior (0,5 NaNo3; 0,5 K2HPO4). Assim, conseguimos finalmente substituir o MBL. Aps a substituio do MBL, passmos etapa seguinte de substituio do inculo. A partir deste momento, todas as tentativas foram realizadas com o meio de cultura de substituio e recorrendo a agitao manual. Na 1 tentativa, utilizmos como inculo gua do mesmo lago filtrada apenas por uma rede de zooplncton. Testmos vrias concentraes de sal (0, 3, 6, 9, 12 g.L-1), num volume final de 40 ml, e agitmos manualmente trs vezes por dia. O teste prolongou-se por 8 dias e no final, contrariamente ao que era esperado, verificou-se que o crescimento era superior nas concentraes mais elevadas de sal. Na 2 tentativa, optmos por filtrar a gua por uma rede de zooplncton e, em seguida, por uma rede de fitoplncton com 25 m de poro de malha. O contedo da rede de fitoplncton foi depois lavado para o interior de um volume de gua filtrada pela rede de zooplncton e por um filtro GF/C, constituindo o inculo. Testmos concentraes mais elevadas de sal (0, 15, 18, 21, 24 g.L-1) num volume final de 100 ml, para minimizar o efeito da sedimentao das algas. No final do teste, verificou-se uma total ausncia de crescimento. Na 3 e ltima tentativa, optmos por testar um inculo de Pseudokirchneriella subcapitata. Este foi colocado a crescer, dois ou trs dias antes do incio do teste, num agitador a 100 rpm e com temperatura controlada (20C1). Aps este perodo, adicionmos 5 mL de inculo a cada frasco teste. Testmos vrias concentraes de sal (0, 3, 6, 9, 12 g.L-1), num volume final de 100 ml, e agitmos manualmente vrias vezes por dia. O teste prolongou-se por 8 dias e, no final, verificou-se um aumento da inibio do crescimento com o incremento da concentrao de sal.

Avaliao da Exequibilidade da Actividade Proposta nas Escolas Bsicas A actividade de pesquisa aqui descrita relativamente fcil de executar, sendo necessrio um investimento reduzido no que se refere aos materiais e reagentes utilizados. Deste modo, quer os reagentes quer o material de vidro utilizados fazem parte de qualquer laboratrio escolar, no acarretando grandes despesas. Contudo, sugerem-se algumas alternativas. Relativamente rede de filtrao (rede de zooplncton de 50 m de poro de

46

malha) sugere-se a sua substituio por uma membrana de filtrao de uso vulgar (caso dos filtros de caf). Quanto aos reagentes K2HPO4 e NaNO3, sugere-se a sua requisio ao Laboratrio de Qumica da escola, sendo esta uma forma de promover a interdisciplinaridade ou, no caso da inexistncia destes reagentes, a sua substituio por fsforo e azoto (na sua forma pura). Ainda relativamente ao material de vidro, sugere-se a utilizao de frascos de vidro incolor, com aproximadamente 200 ml (frascos de nctar, garrafas de gua com gs, entre outras), em substituio dos erlemeyers frequentemente utilizados nos ensaios toxicolgicos. Esta escolha prendeu-se com o facto de algumas escolas no possurem este recurso em quantidade suficiente para que a actividade seja realizada por vrios grupos de alunos em simultneo e, tambm, pelo facto de assim se reforar um importante objectivo ambiental (reutilizao de material). Para alm dos materiais a utilizar serem de fcil acesso em qualquer escola, geralmente tambm no difcil encontrar um local perto da escola que permita a recolha de amostras de gua. Desta forma, a actividade de pesquisa proposta simples e perfeitamente aplicvel na realidade das nossas escolas. A principal dificuldade que pode ser apontada realizao desta actividade prtica prende-se com a obteno do inculo. Contudo, importante referir que em qualquer laboratrio onde se faa investigao na rea da Ecotoxicologia se mantm culturas de algas, as quais podero ser cedidas s escolas que as solicitem desde que os organismos sejam devidamente eliminados (as solues dos frascos teste devem ser filtradas atravs de um filtro, o qual deve ser seco na estufa e s depois eliminado para o lixo) aps a sua utilizao. Outra dificuldade que pode ser apontada relaciona-se com os cuidados de assepsia na preparao dos frascos de vidro. No caso de no existir autoclave na escola sugere-se a utilizao de uma vulgar panela de presso, seguindo-se uma metodologia semelhante. Sugere-se tambm que os alunos participem nesta actividade de modo a adquirirem sensibilidade relativamente aos cuidados que necessrio ter numa experincia controlada. No que diz respeito existncia de estruturas escolares rgidas (programas, horrios, entre outras), sugere-se que os professores privilegiem actividades de pesquisa deste gnero, em detrimento da mera transmisso de conhecimentos tericos, dado que estas se revelam mais motivantes e proveitosas na aprendizagem significativa dos alunos.

47

Consideraes Finais O trabalho prtico, concebido como uma actividade de natureza investigativa, desempenha um papel importante no ensino das cincias, quer como um fim em si mesmo, ao desenvolver capacidades de resoluo de problemas, quer como um instrumento que pode contribuir para a melhoria da qualidade do processo de ensino-aprendizagem. Com este trabalho, demonstra-se como se podem adaptar as metodologias utilizadas pelos investigadores na avaliao dos efeitos txicos de agentes xenobiticos no meio aqutico, atravs da utilizao de substncias de uso recorrente e que no constituem um risco de manipulao pelos alunos. Sugere-se ento uma actividade de pesquisa com uma metodologia simples e perfeitamente aplicvel dentro das possibilidades materiais e oramentais das nossas escolas, a qual facilita a aprendizagem dos conceitos e, simultaneamente, promove o desenvolvimento de uma conscincia ecolgica sobre o impacto de contaminantes na qualidade da gua e nos organismos aquticos.

Agradecimentos Os autores agradecem aos colegas do laboratrio do Prof. Doutor Fernando Gonalves pelo apoio durante o desenvolvimento desta actividade.

Referncias Bibliogrficas Mason, C. F. (1998) Biology of Freshwater Pollution. 3rd Ed. Longman, UK Holdgate, M. W. (1979) A perspective of environmental pollution. Cambridge University Press, Cambridge. Crompton, T.R. (1997) Toxicants in the Aqueous Ecosystem. John Wiley & Sons, England. Connell, D. (1999) Introduction to Ecotoxicology. Blackwell Science, Oxford. Hoffman, D.J., Rattner, B.A., Burton, Jr.G.A., Cairns, Jr.J. (2003) Handbook of Ecotoxicology. 2nd Ed. Lewis Publishers, USA. Dourado, L. G. P. (2001) O Trabalho Prtico no Ensino das Cincias Naturais: situao actual e implementao de propostas inovadoras para o Trabalho Laboratorial e o Trabalho de Campo. Tese de Doutoramento em Educao. Universidade do Minho.

48

Praia, J. F. & Cachapuz, A. F. (1994) Para uma reflexo em torno das concepes epistemolgicas dos professores de Cincias, Ensinos Bsico 3ciclo e secundrio: um estudo emprico. Revista Portuguesa de Educao, 7 (1/2): 37-47. Hodson, D. (1993) Re-thinking old ways: towards a more critical approach to pratical work in school science. Studies in Science education, 22, 85-142. Oliveira, M. T. (1999) Trabalho Experimental e Formao de Professores. In Conselho Nacional de Educao (org.), Ensino Experimental e Construo de Saberes, 3553. Lisboa: Ministrio da Educao, Conselho Nacional de Educao. Praia, J. F. (1999) O Trabalho Laboratorial no Ensino das Cincias: contributos para uma reflexo de referncia epistemolgica. In Conselho Nacional de Educao (org.), Ensino Experimental e Construo de Saberes, 35-53. Lisboa: Ministrio da Educao. Conselho Nacional de Educao. Miguns, M. (1994) Actividades Prticas na Educao em Cincia: Que objectivos? Aprender, 16: 90-101. Miguns, M. (1991) Actividades Prticas na Educao em Cincia: Que modalidades? Aprender, 16: 90-101 Hodson, D. (1992) Redefining and reorienting practical work in school science. School Science Review, 73 (264): 65-78. Hodson, D. (1994) Hacia un enfoque ms crtico del trabajo de laboratorio. Enseanza de las Ciencias, 12 (3): 299-313. Hodson, D. (1996) Practical work in school science: exploring some directions for change. Int. J. Sci. Educ., 18 (7): 755-760. Hodson, D. (1998) Mini-special Issue: Taking practical work beyond the laboratory. Int. J. Sci. Educ., 20 (6): 629-632. Gott, R. & Duggan, S. (1995) Investigative work in the science curriculum. Developing science and technology education. Open University Press: Buckingham. Leite, L. (2001) Contributos para uma utilizao mais fundamentada do trabalho laboratorial no ensino das cincias. In: Departamento do Ensino Secundrio (ed.), Cadernos Didcticos das Cincias, 1, 78-97. Lisboa: Ministrio da Educao, Departamento do Ensino Secundrio. Caamao, A. (1992) Los trabajos prcticos en ciencias experimentales: una reflexin sobre sus objectivos y una propuesta para su diversificacin. Aula, 9: 61-68.

49

Luffiego, M. (1995) El trabajo prtico: una intervencin para la formacin de professores, Enseanza de las Ciencias, 13(2): 203-209. Barber, O. & Valds, P. (1996) El Trabajo Prctico en la Enseanza de las Ciencias: Una Revision. Enseanza de las Ciencias, 14 (3): 365-379. Pato, A., Azeiteiro, U. M. & Gonalves, F. (2004) Actividades de Campo em Educao Ambiental. In: U. M. Azeiteiro et al. Tendncias Actuais em Educao Ambiental. Universidade Aberta, 437-457. Hungerford, H. R. & Peyton, R. B. (1993) Cmo construir un programa de educacin ambiental documento de trabajo para los seminarios de formacin sobre educacin ambiental organizados por la UNESCO. Programa Internacional de Educacin Ambiental UNESCO-PNUMA, Serie de Educacin Ambiental 22. Cachapuz, A.F. (1995) O Ensino das Cincias para a Excelncia da Aprendizagem. Porto Editora Lda., Porto. Leite, L. (2002) As actividades laboratoriais e o desenvolvimento conceptual e metodolgico dos alunos. In: Boletn das Ciencias, XV Congreso de Enciga. Franquesa, T. & Sureda, J. (2003) Conocimientos bsicos en educacin ambiental: base de datos para la elaboracin de actividades y programas. Monografias de educacin ambiental 1. Gra Barcelona. Galvo, C. (Coord.) (2001) Ensino Bsico: Cincias Fsicas e Naturais Orientaes Curriculares para o 3ciclo do Ensino Bsico. Ministrio da Educao, Departamento da Educao Bsica. Lisboa Lunetta, V. N. (1998) The School Science Laboratory: Historical Perspectives and Contexts for Contemporary Teaching. In: B. J. Fraser & K. G. Tobin. International Handbook of Science Education, Kluwer International Handbooks of Education 2: 249-262.

50

Anexos

51

Anexo I Fotografias do Teste

Figura III.3. Primeira rplica do controlo e de cada tratamento (0 g/L, 3 g/L, 6 g/L, 9 g/L e 12g/L de NaCl).

Figura III.4. Primeira rplica do controlo e de cada tratamento (0 g/L, 3 g/L, 6 g/L, 9 g/L e 12g/L de NaCl), aps quatro dias de teste.

Figura III.5. Primeira rplica do controlo e de cada tratamento (0 g/L, 3 g/L, 6 g/L, 9 g/L e 12g/L de NaCl), aps oito dias de teste.

52

Anexo II Tabela de resultados

Concentrao Densidade Rplicas -1 (g.L ) ptica (440 nm) 0 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3 1 2 3

Mdia Densidade ptica

12

53

Anexo III V de Gowin

Como que o NaCl afecta o crescimento do fitoplncton?

LADO CONCEPTUAL (Pensamento) TEORIAS Os contaminantes afectam os organismos aquticos. PRINCPIOS Os ecossistemas podem entrar em desequilbrio devido a causas naturais ou antropognicas Em elevadas concentraes, o NaCl um contaminante dos sistemas aquticos Qualquer alterao que ocorra nas populaes de microalgas repercute-se nos nveis trficos superiores. A medio da densidade ptica a 440nm uma medida do crescimento do fitoplncton. CONCEITOS PROBLEMA Como que o NaCl afecta o crescimento do fitoplncton?

LADO METODOLGICO (Aco)

CONCLUSES O contaminante (NaCl) afecta o crescimento do fitoplncton, verificando-se um aumento da inibio do crescimento medida que a sua concentrao aumenta.

RESULTADOS Histograma (concentrao NaCl testada vs. Mdia da Concentrao de clorofila a)

Factores Biticos Factores Abiticos Ecossistema Produtor Consumidor Decompositor Cadeias alimentares PROCEDIMENTO Catstrofes naturais e antropognicas Contaminante Corresponde Anexo IV Mapa de Conceitos metodologia utilizada na actividade de pesquisa, incluindo os materiais e equipamentos.

54

Anexo IV Mapa de Conceitos

55

56

CAPTULO IV

Consideraes Gerais

57

58

De acordo com os objectivos propostos no Captulo I, esta dissertao contribuiu para um aprofundamento do conhecimento do efeito do herbicida Paraquato em trs espcies de algas verdes (Pseudokirchneriella subcapitata, Chlorella vulgaris e Pandorina morum), mostrando que o aumento da concentrao do herbicida afecta significativamente o crescimento destas microalgas. Deste modo, pode concluir-se que o aumento da concentrao de agentes txicos nos sistemas aquticos poder alterar a estrutura da comunidade de um ecossistema, no caso dos seus organismos no possurem mecanismos de adaptao a esse acrscimo de substncias txicas ou destas se manterem em nveis superiores aos tolerados pelas espcies. Esta dissertao permitiu tambm desenvolver uma adaptao da metodologia dos ensaios de toxicidade de agentes xenobiticos ao 3 Ciclo do Ensino Bsico, utilizando substncias que no constituem um risco de manipulao pelos alunos. Assim, surgiu uma actividade de pesquisa simples e perfeitamente aplicvel na realidade material e oramental das nossas escolas, que permite a interligao do ensino das cincias com os valores e princpios da Educao Ambiental. A realizao desta actividade experimental permite a aquisio de conhecimentos, competncias, atitudes e valores sociais necessrios ao desenvolvimento de uma conscincia ecolgica interventiva na resoluo de problemas ambientais. Como trabalhos futuros, sugere-se a implementao da actividade de pesquisa desenvolvida numa amostra de alunos pertencentes ao 3 Ciclo do Ensino Bsico, com vista avaliao das suas limitaes e implicaes educacionais no desenvolvimento de atitudes investigativas nos alunos e, ainda, sua possvel reformulao.

59

60

Referncias Bibliogrficas

61

62

Aleixandre, M.P.J.. Rodriguez, R.L. & Muoz, C.P. (1995) Integrando la educacin ambiental en el curriculum de cincias. In: Alambique, Didctica de las Cincias Experimentales, La Educacin Ambiental, n6, Ano II, Octubre, Barcelona: Gra, 9-17. Almeida, A. (2002) Abordar o Ambiente na Infncia. Universidade Aberta. Annimo (1990) Educao Ambiental: textos bsicos. Instituto Nacional do Ambiente. Lisboa. Annimo (2001) Currculo Nacional do Ensino Bsico Competncias Essenciais, 113132. Ministrio da Educao, Departamento da Educao Bsica Lisboa. ASTM (2002) Practice for Algal Growth Potential with Selenastrum capricornutum. D3978-80. In: Annual Book of Standards. Volume 11 (05), American Society for Testing and Materials, PA, pp 27-32. Barber, O. & Valds, P. (1996) El Trabajo Prctico en la Enseanza de las Ciencias: Una Revision. Enseanza de las Ciencias, 14 (3): 365-379. Bray D. F., Bagu J. R., Nakamura K. (1993) Ultrastructure of Chlamydomonas reinhardtii following exposure to paraquat: comparison of wild type and a paraquat-resistant mutant. Can J Bot 71: 174-182. Caamao, A. (1992) Los trabajos prcticos en ciencias experimentales: una reflexin sobre sus objectivos y una propuesta para su diversificacin. Aula, 9: 61-68. Cachapuz, A. (1995) O Ensino das Cincias para a Excelncia da Aprendizagem. Porto Editora Lda., Porto. Cachapuz, A., Praia, J. & Jorge, M. (2001) Perspectivas de Ensino: textos de apoio. Formao de Professores. Cincias: 1. Porto: CEEC. Connell, D. (1999) Introduction to Ecotoxicology. Blackwell Science, Oxford. Crompton, T.R. (1997) Toxicants in the Aqueous Ecosystem. John Wiley & Sons, England. Devine M., Duke S.O., Fedtke C.E. (1993) Physiology of herbicide action. PTR PrenticeHall, Englewood Cliffs, NJ. Dourado, L. G. P. (2001) O Trabalho Prtico no Ensino das Cincias Naturais: situao actual e implementao de propostas inovadoras para o Trabalho Laboratorial e o Trabalho de Campo. Tese de Doutoramento em Educao. Universidade do Minho.

63

Fairchild J.F., Ruessler D.S., Haverland P.S., Carlson A.R. (1997) Comparative Sensitivity of Selenastrum capricornutum and Lemna minor to Sixteen Herbicides. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 32: 353-357. Fargasova A. (1994) Comparative study of plant growth hormone (herbicide) toxicity in various biological subjects. Ecotoxicol. Environ. Safety 29: 359-364. Fernandes, A., Gonalves, F., Pereira, M.J. & Azeiteiro, U.M. (Em publicao) Educao Ambiental: caractersticas, contedos, objectivos e actividades prticas. O caso portugus. In: F. Gonalves, R. Pereira, U. Azeiteiro, M. Pereira (eds) Actividades Prticas em Cincias e Educao Ambiental. Ferreira, C. L. (2003) A Avaliao das Aprendizagens no Trabalho Laboratorial em Biologia: uma proposta para o Ensino Secundrio. Universidade de Aveiro. Finney D.J. (1971) Probit Analysis. Cambridge University Press, Cambrigde, UK. Franqueira D., Cid A., Torres E., Orosa M., Herrero C. (1999) A Comparison of the Relative Sensitivity of Structural and Functional Cellular Responses in the Alga Chlamydomonas eugametos Exposed to the Herbicide Paraquat. Arch. Environ. Contam. Toxicol. 36: 264-269. Franquesa, T. & Sureda, J. (2003) Conocimientos bsicos en educacin ambiental: base de datos para la elaboracin de actividades y programas. Monografias de educacin ambiental 1. Gra Barcelona. Galvo, C. (Coord.) (2001) Ensino Bsico: Cincias Fsicas e Naturais Orientaes Curriculares para o 3ciclo do Ensino Bsico. Ministrio da Educao, Departamento da Educao Bsica. Lisboa Giordan, A. & De Vecchi, G. (1994) Les origines du savoir. Actualits pdagogiques et psychologiques. Neuchtel : Delachaux et Niestl. Giordan, A. & Souchon, C. (1997) Uma Educao para o Ambiente. Instituto de Inovao Educacional (Ministrio da Educao) e Instituto de Promoo Ambiental (Ministrio do Ambiente). 1ed.. Lisboa. Gomes, M. (Coord.) (2001) Educao Ambiental: Guia Anotado de Recursos. Materiais de Apoio ao Currculo. CCPES, DEB, DES, IIE (ed.). 1ed. Gonalves A.M.M., de Figueiredo D.R., Pereira M.J. (2005) A Low-cost Methodology for Algal Growth Inhibition Tests Using Three Freshwater Green Algae. Fresenius Environmental Bulletin 14(12): 1192-1195.

64

Gott, R. & Duggan, S. (1995) Investigative work in the science curriculum. Developing science and technology education. Open University Press: Buckingham. Hodson, D. (1992) Redefining and reorienting practical work in school science. School Science Review, 73 (264): 65-78. Hodson, D. (1993) Re-thinking old ways: towards a more critical approach to pratical work in school science. Studies in Science education, 22: 85-142. Hodson, D. (1994) Hacia un enfoque ms crtico del trabajo de laboratorio. Enseanza de las Ciencias, 12 (3): 299-313. Hodson, D. (1996) Practical work in school science: exploring some directions for change. Int. J. Sci. Educ., 18 (7): 755-760. Hodson, D. (1998) Mini-special Issue: Taking practical work beyond the laboratory. Int. J. Sci. Educ., 20 (6): 629-632. Hoffman, D.J., Rattner, B.A., Burton, Jr.G.A., Cairns, Jr.J. (2003) Handbook of Ecotoxicology. 2nd Ed. Lewis Publishers, USA. Holdgate, M. W. (1979) A perspective of environmental pollution. Cambridge University Press, Cambridge. Hungerford, H. R. & Peyton, R. B. (1993) Cmo construir un programa de educacin ambiental documento de trabajo para los seminarios de formacin sobre educacin ambiental organizados por la UNESCO. Programa Internacional de Educacin Ambiental UNESCO-PNUMA, Serie de Educacin Ambiental 22. Ibez M., Pic Y., Maes J. (1996) Influence of organic matter and surfactans on solidphase extraction of diquat, paraquat and difenzopuat from waters. J Chromatogr A 727: 245-252. Ibrahim E. A. (1990) The influence of the herbicide paraquat gramoxon on growth and metabolic activity of three chlorophytes. Water Air Soil Poll. 51: 89-93. Leite, L. (2001) Contributos para uma utilizao mais fundamentada do trabalho laboratorial no ensino das cincias. In: Departamento do Ensino Secundrio (ed.), Cadernos Didcticos das Cincias, 1, 78-97. Lisboa: Ministrio da Educao, Departamento do Ensino Secundrio. Leite, L. (2002) As actividades laboratoriais e o desenvolvimento conceptual e metodolgico dos alunos. In: Boletn das Ciencias, XV Congreso de Enciga.

65

Luffiego, M. (1995) El trabajo prtico: una intervencin para la formacin de professores, Enseanza de las Ciencias, 13(2): 203-209. Lunetta, V. N. (1998) The School Science Laboratory: Historical Perspectives and Contexts for Contemporary Teaching. In: B. J. Fraser & K. G. Tobin. International Handbook of Science Education, Kluwer International Handbooks of Education 2: 249-262. Martins, I. P. & Veiga, M. L. (1999) Uma Anlise do Currculo da Escolaridade Bsica na Perspectiva da Educao em Cincias. Instituto de Inovao Educacional. Mason, C. F. (1998) Biology of Freshwater Pollution. 3rd Ed. Longman, UK. Matsuura, K. (2002) Why education and public awareness are indispensable for a sustainable future. UNESCO, World Summit on Sustainable Development, Johannesburg. Miguns, M. (1991) Actividades Prticas na Educao em Cincia: Que modalidades? Aprender, 16: 90-101 Miguns, M. (1994) Actividades Prticas na Educao em Cincia: Que objectivos? Aprender, 16: 90-101. Millar, R., Osborne, J. & Nott, M. (1998) National Curriculum Review: Science Education for the future. School Science Review, 80 (291): 19-24. Norma Portuguesa da Direco Geral do Ambiente (NP4327, 1996). Doseamento da clorofila a e dos feopigmentos por espectrometria da absoro molecular. Mtodo da extraco com acetona. OECD (2002) OECD Guidelines for the Testing of Chemicals. Draft Revised Guideline 201 Freshwater Alga and Cyanobacteria, Growth Inhibition Test, pp 1-21. Oliveira, M. T. (1999) Trabalho Experimental e Formao de Professores. In Conselho Nacional de Educao (org.), Ensino Experimental e Construo de Saberes, 3553. Lisboa: Ministrio da Educao, Conselho Nacional de Educao. Paraquat Information Center on behalf of Syngenta Crop Protection Ag (http://www.paraquat.com/). Pato, A., Azeiteiro, U. M. & Gonalves, F. (2004) Actividades de Campo em Educao Ambiental. In: U. M. Azeiteiro et al. Tendncias Actuais em Educao Ambiental. Universidade Aberta, 437-457.

66

Pombo, O. (1993) A interdisciplinaridade como problema Epistemolgico e Exigncia Curricular. Inovao. 6: 173-180. Praia, J. F. (1999) O Trabalho Laboratorial no Ensino das Cincias: contributos para uma reflexo de referncia epistemolgica. In Conselho Nacional de Educao (org.), Ensino Experimental e Construo de Saberes, 35-53. Lisboa: Ministrio da Educao. Conselho Nacional de Educao. Praia, J. F. & Cachapuz, A. F. (1994) Para uma reflexo em torno das concepes epistemolgicas dos professores de Cincias, Ensinos Bsico 3ciclo e secundrio: um estudo emprico. Revista Portuguesa de Educao, 7 (1/2): 37-47. Rabinowitch H. D., Clare D. A., Crapo J. D., Fridovitch I. (1983) Positive correlation between superoxide dismutase and resistance to paraquat toxicity in the green alga Chlorella sorokiniana. Arch. Biochem. Biophys. 225: 640-648. Rojkov-Padrtov R., Marlek B. (1999) Selection and Sensitivity Comparisons of Algal Species for Toxicity Testing. Chemosphere 38(14): 3329-3338. Senz M.E., Accorinti J., Tortorelli M.D.C. (1993) Toxicity of paraquat to a green algae Scenedesmus acutus. J Environ. Sci. Health B 28 (2): 922-928. Senz M.E., Alberdi J.L., Di Marzio W.D., Accorinti J., Tortorelli M.C. (1997) Paraquat Toxicity to Different Green Algae. Bull. Environ. Contam. Toxicol. 58: 922-928. Senz M.E., Di Marzio W.D., Alberdi J.L., Tortorelli M.C. (2001) Algal Growth Recovery Studies After Paraquat Exposure. Bull. Environ. Contam. Toxicol. 66: 263-268. Santos, M. C. (2002) Trabalho Experimental no Ensino das Cincias. Instituto de Inovao Educacional. Temas de Investigao, 23: 15-75. Serrano, M. C. L. R. (1996) Formao de professores de Cincias (Geologia e Qumica) e a abordagem de temas multidisciplinares. Dissertao de Mestrado, Universidade de Aveiro. Soloman, J. (1995) Science in School and the Future of Scientific Culture in Europe. The European Report on Science Education in Europe (preliminary draft). European Comission and Fundao Calouste Gulbenkian. Stein, J.R. (1973) Handbook of Phycological Methods: Culture Methods and Growth Measurements. Cambridge University Press, Cambridge. Summers L.A. (1980) The bipyridinium herbicides. Academis Press, New York, NY.

67

Tissut M., Ravanel P., Nurit F., Deslandres C., Bourguignon J. (1987) Effects of LS82556 on thylakoid activities and photosynthesis: a comparison with paraquat and acidfluorfen. Pestic. Biochem. Physiol. 29: 209-216. UNESCO (2000) La Ciencia para el siglo XXI Un nuevo compromisso. Conferencia Mundial Sobre La Ciencia en Budapest. USEPA (2002) Short-term Methods for Estimating the Chronic Toxicity of Effluents and Receiving Waters to Freshwater Organisms. 4th edition. EPA821/R-02/013. Vaz, M. E. & Valente, M. O. (1995) Atmosfera CTS nos currculos e manuais. Noesis, 34: 22-27. Verssimo, A. & Ribeiro, R. (2001) A Biologia no Contexto da Educao em Cincias. In: A. Verssimo, A. Pedrosa & R. Ribeiro (coord.), Ensino Experimental das Cincias (Re)Pensar o Ensino das Cincias, 129-138. Lisboa: Ministrio da Educao, Departamento do Ensino Secundrio. Vilas-Boas, F., Azeiteiro, U., Gonalves, F. (2004) A Eficcia dos percursos Investigativos em Educao Ambiental. In: U. M. Azeiteiro et al. Tendncias Actuais em Educao Ambiental. Universidade Aberta, 97-111. Wong P.K. (2000) Effects of 2,4-D, glyphosate and paraquat on growth, photosynthesis and chlorophyll-a synthesis of Scenedesmus quadricauda Berb 614. Chemosphere 41: 177-182. Zar J.H. (1996) Biostatistical Analysis. 3rd edition. Prentice-Hall International, Inc., New Jersey.

68