Influncia do Uso de Sacarose na Remoo de Vermelho do Congo por Aspergillus niger AN400 em Meio Aquoso

Ivinne MELO (1), Kamylla GOMES (2), Paulo Cesar CUNHA LIMA (3) Glria MARINHO (4), Kelly RODRIGUES (5)

(1) Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Cear IFCE, Laboratrio de Tecnologia Ambiental (LATAM), Av. Treze de Maio, 2081, Benfica, Caixa Postal 60040-531 Fortaleza- CE, Fone (85) 3307-3666, Fax (85) 3307-3711, E-mail: favim_@hotmail.com (2) Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Cear IFCE, e-mail: kamylla_ga@hotmail.com (3) Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Cear IFCE, e-mail: pc@ifce.edu.br (4) Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Cear IFCE, e-mail: gloriamarinho@cefetce.br (5) Instituto Federal de Educao, Cincia e Tecnologia do Cear IFCE, e-mail: kelly@ifce.edu.br

RESUMO
Os efluentes industriais txteis so grandes fontes de poluio do meio aqutico, pois apresentam, em sua composio, compostos indesejveis, dentre eles, corantes, os quais so comumente de difcil degradao. Alm disso, os corantes so solveis e geram ainda alteraes em ciclos biolgicos, em especial no processo de fotossntese. Desta forma, faz-se necessrio o tratamento destes efluentes antes de seu descarte no ambiente. O presente trabalho estudou a remoo do corante Vermelho do Congo em meio aquoso sob a influncia de duas concentraes diferentes de sacarose (0,5 g/L e 1,0 g/L). Foram montados 30 reatores em batelada, divididos em Reator Controle (RC) continham apenas o corante e o meio aquoso; Reator com fungos e 0,5 g/L de sacarose (RFS I) e Reator com fungo e 1,0 g/L de sacarose (RFS II). Foi utilizado como inoculo fngico a espcie Aspergillus niger AN400. Os reatores foram operados durante x dias, com tempos operacionais de de 0 dia, 1 dia, 3 dias, 5 dias, 7 dias e 10 dias. Os resultados mostraram eficincias mdias de remoo da demanda qumica de oxignio de 90% (RFS I) e de 80%(RFS II) e de corante de 85% (RFSI) e 70% (RFSII). Em contrapartida, a remoo de nutrientes no se apresentou satisfatria, tendo-se registrado, apenas em ortofosfato, remoo de 1,5% ao final da batelada de RFS I e de 22,1% em RFS II. Porm, o emprego da espcie fngica citada mostrou-se vivel para remoo de corante e de matria orgnica carboncea. Palavras-chave: Aspergillus niger; reatores em batelada; sacarose; vermelho do congo.

1.

INTRODUO

As indstrias txteis constituem uma das principais atividades econmicas do Brasil. Seu processamento caracteriza-se por gerar enormes volumes de gua com elevado nvel de colorao, sendo o efluente um perigoso contaminante dos corpos hdricos receptores, quando no tratado adequadamente, alm de oferecer riscos sade pblica (SILVA, 2008). Os corantes sintticos tipo azo compem o maior grupo de corantes sintticos (60-70%) e podem ser utilizados para colorir as fibras txteis, plsticos, couro, papel, leos minerais, ceras, alimentos e cosmticos. Devido alta demanda na sua utilizao, eles tornaram-se motivo de preocupao no tratamento de guas residurias. Alm de ser altamente visvel no meio em que est presente mesmo em pequena quantidade (1050 mg.L-1), os corantes azicos, a partir de sua reduo, geram as aminas aromticas, que possuem efeito txico sobre os organismos, e ainda, juntamente a seus produtos, pode inibir os sistemas convencionais de tratamento biolgico (ISIK et al, 2007). A indstria txtil produz grandes quantidades de efluentes altamente coloridos, que possuem caractersticas txicas e comumente so resistentes destruio por mtodos biolgicos de tratamento, sendo, estes efluentes, na maioria, naturalmente no-biodegradveis (LEDAKOWICZ, 2001). A utilizao de fungos em reatores biolgicos est continuamente sendo explorada no sentido da capacidade de mineralizao de compostos de difcil degradao, como estudado nos trabalhos de RODRIGUES (2006), utilizando o fungo Aspergillus niger AN400 para remoo de fenis; ASSADI & JAHANGIRI (2001) utilizando o fungo Phanerochaete chrysosporium no tratamento de efluente txtil; VIDAL (2008), ASSADI & JAHANGIRI (2001), VIRARAGHAVAN (2002) utilizando Aspergillus niger AN400, tambm no tratamento de efluente txtil. A capacidade de produzir enzimas extracelulares caracterstica marcante nas espcies fngicas. Estas enzimas agem sobre diferentes compostos e favorecem, assim, a aplicao de fungos em reatores para o tratamento de diferentes tipos de efluentes. Contudo, para a maioria dos fungos, necessria a adio de cosubstrato para auxiliar na assimilao do composto poluente (SILVA, 2008), de modo que no presente trabalho, foi estudada a eficincia de remoo do corante vermelho do congo pela ao de Aspergillus niger AN400, em reatores em batelada, sob a presena da sacarose em duas concentraes diferentes (0,5 g/L e 1,0 g/L).

2. 2.1

MATERIAL E MTODOS
Cultivo e produo e contagem dos esporos de Aspergillus niger AN 400

Os procedimentos utilizados para o cultivo e produo da soluo de esporos da espcie fngica foram realizados de acordo com SILVA (2008). Posteriormente, a partir da soluo me de esporos, que possua 4,33 x 1010 esporos/mL, foram calculados os volumes a serem adicionados a cada reator em batelada para se obter a concentrao de 2,0 x 106 esporos/mL, inoculada nos reatores.

2.1

Meio Aquoso

O meio aquoso utilizado neste experimento foi preparado com gua de torneira e possua corante Vermelho do Congo na concentrao de 30 mg/L e foi produzida em laboratrio a partir da mistura de macronutrientes apresentados na Tabela 1 e soluo de micronutrientes composta por (mg/L): H3BO3 (50); FeCl2.4H2O (2000); ZnCl2 (50); MnCl2.4H2O (500); CuCl2.2H2O (38); AlCl3H2O (90); CoCl26H2O (2000). Antes de ser acrescida de sais, a gua utilizada foi esterilizada em autoclave durante 20 minutos sob presso de 1 atm e temperatura de 121C.

Tabela 1: Concentraes dos macronutrientes utilizados nesta pesquisa Nome do Constituinte Cloreto de Amnio Fosfato monobsico de potssio Sulfato de magnsio heptahidratado Cloreto de clcio dihidratado Frmula NH4Cl K2HPO4 MgSO4.7H2O CaCl.2H2O Concentrao (mg/L) 280 250 100 10

2.3

Reatores em Batelada

Foram usados 30 reatores em vidro, de forma cilndrica, vedados com tampa rosquevel, de volume total de 1 L e volume reacional de 0,5 L. Os reatores possuam entrada de ar, o qual era fornecido por meio de minicompressores e difundido para o meio sinttico por pedras porosas. Os reatores foram divididos em Reatores de Controle (RC) continha apenas o meio aquoso; Reatores com Fungos e Sacarose na concentrao de 0,5 g/L (RFSI) e Reatores com Fungos e Sacarose na concentrao 1 g/L (RFSII). Os reatores com fungos continham o meio aquoso, inoculo fngico, na concentrao de 2 x 106 esporos/L, e sacarose como co-substrato. Os reatores foram operados, em duplicata, durante 10 dias, com tempos de operao de 1 dia, 3 dias, 5 dias, 7 dias e 10 dias. Todos os reatores foram cobertos com sacos pretos de polietileno e colocados em capela de radiao UV, seguindo o cronograma apresentado na Tabela 2. Tabela 2: Cronograma de operao dos reatores em batelada. TEMPO DE OPERAO (DIAS) REATORES RC RFSI RFSII 1 RC1 RFSI1 RFSII1 3 RC3 RFSI3 RFSII3 5 RC5 RFSI5 RFSII5 7 RC7 RFSI7 RFSII7 10 RC10 RFSI10 RFSII10

2.4

Variveis analisadas

As variveis analisadas foram corante, de acordo com SILVA FILHO (2006), DQO, pH e SSV, segundo APHA (1998). Nos tempos de reao 0 dia e 10 dias, foram realizadas, alm das anlises j citadas, nitrato, nitrito, amnia, ortofosfato e fsforo, tambm de acordo com APHA (1998).

2.5

Microscopia

Dentro de uma placa de Petri, foi colocada uma lmina esterilizada e um cubo de meio gar j endurecido. Posteriormente, o fungo a ser identificado, foi inoculado nos quatro lados deste cubo e recoberto com uma lamnula esterelizada. Foi adicionado tambm uma pequena quantidade de gua estril (1 a 2 mL) a fim de evitar a dessecao do meio durante o crescimento do fungo, sendo, a placa, tampada e deixada temperatura ambiente por 7 a 10 dias. Aps esse perodo, foi adicionado placa 1 mL de formol, sendo esta vedada com fita adesiva (no perodo de 24 h 48 h), no intuito de inativar o fungo e fixar as estruturas microscpicas. A lamnula foi cuidadosamente, removida com auxlio de pina, uma vez que nela estavam aderidas as hifas e esporos do fungo. Em seguida, pingou-se uma gota de corante azul de metileno e foi sobreposta uma lmina. Foi desprezado o cubo, a fim de utilizar tambm a lmina na visualizao dos esporos e hifas que nela tambm ficaram aderidos, sendo observada em microscpio tico com objetiva de 40 X, o tipo e cor da hifa, forma, disposio e formao de esporos.

3. RESULTADOS E DISCUSSES
Na Figura 1 mostrada a variao dos valores de pH durante a operao dos reatores em batelada RFS I e RFS II.

Figura 1: Variao dos valores de pH nos reatores RFS I e RFS II durante a batelada de estudo. Segundo Rodrigues (2006), a melhor atividade metablica da espcie fngica se reflete na produo de cidos orgnicos, sendo estes oriundos da degradao dos compostos presentes no meio. Deste modo, justificou-se o decaimento nos valores de pH pela presena de cidos orgnicos, possivelmente, gerados da degradao do corante que atingiu mdias de remoo prximas a 85%, em RFS I, e 70%, em RFS II. ASSADI e JAHANGIRI (2001) e WANDERLEY (2007) tambm relataram a diminuio do valor do pH pela produo de cidos orgnicos gerados a partir da degradao de compostos fenlicos e corante, respectivamente, o que reforou esta hiptese. Nos reatores RC foram constatadas variaes mnimas nos valores de pH entre 3,41 e 3,22 , indicando, portanto, baixa produo de cidos orgnicos e, conseqentemente, reduzida atividade metablica de microrganismos contaminantes. Em relao demanda qumica de oxignio (DQO), foram atingidas remoes de DQO bruta de 90% e de 80% nos reatores RFS I e RFS II, respectivamente.

Figura 2: Remoo de Matria Orgnica nos reatores RFS I e RFS II durante a batelada de estudo. Ao se estudar os dados referentes remoo de corante, mostrados na Figura 3, foram registrados percentuais de remoo de corante de 85% e 70% em RFS I e RFS II, respectivamente. Pode-se observar que a degradao do corante obtida nos 10 dias da batelada foram inferiores as degradao atingidas nos 7 dias, o que, provavelmete, pode ter sido causada pela contaminao da batelada em seu ltimo tempo de reao. Observou-se, nesses reatores, que a contaminao, caracterizada pela turbidez do meio e formao de biofilme, comprometeu a remoo do corante pelo fungo.

Figura 3: Remoo de Corante nos reatores RFS I e RFS II durante a batelada de estudo.

Foi possvel acompanhar, atravs da comparao entre as Figuras 2 e 3, a degradao do corante e da matria carboncea presente no meio. Os valores de DQO acompanharam a remoo do corante. Tanto a biomassa microbiana, quanto o corante no assimilado ficaram refletidos no aumento da DQO no 10 dia, tanto em RFS I quanto em RFS II. Em relao ao 7 dia, onde houve 98% de remoo de corante e apenas 85% de remoo de matria orgnica, acredita-se que, provavelmente, os microrganismos foram capazes de utilizar o corante, porm ainda havia no meio subprodutos e compostos de excreo produzidos pelos fungos durante a assimilao do corante (WANDERLEY, 2007). Em relao aos dados de SSV, verificou-se na Figura 4 que houve o crescimento de biomassa dentro de todos os reatores. Com base em anlises de microscopia, havia, em todos os reatores, predominncia da espcie Aspergillus niger AN400, porm, para os reatores de 10 dias de RFS I e RFS II, foi constatada a presena de uma contaminao. importante frisar que, em todos os reatores, era possvel visualizar o biofilme formado a partir do inculo do Aspergillus niger. Porm, nos reatores contaminados RFS I 10 dias e RFS II 10 dias, este crescimento no se apresentou to efetivo.

Figura 4: SSV nos reatores RFS I e RFS II durante a batelada em estudo.

O microrganismo contaminante, identificado como Penicillium sp., conseguiu se desenvolver em conjunto com o Aspergillus niger nos reatores RFS I e RFS II, desmontados no tempo de operao de 10 dias, causando o maior aumento de SSV nesse dia. Em ambos os reatores, a contaminao prejudicou a remoo do corante do meio. Em RFS II, foi possvel visualizar a biomassa contaminante bem desenvolvida (Figura 5) provavelmente justificada pela diferena de concentrao do co-substrato , diferentemente de RFS I, onde a contaminao se mostrou menor (Figura 6). Esta diferena pode ser visualizada tambm nas remoes de matria orgnica e corante, que foram sensivelmente prejudicadas.

Figura 5: Comparao da biomassa formada de 7 e 10 dias nos reatores de RFS II. O reflexo da contaminao sobre a remoo de corante foi observado ao se comparar a remoo deste parmetro corante entre os reatores RFS I e RFS II. Em RFS I, no 10 dia, onde houve menor crescimento de biomassa contaminante diferena esta que pode ser visualizada na comparao das Figuras 5 e 6 caracterizado apenas pela turbidez do meio e pequenos grnulos de biomassa, houve menor prejuzo ao inculo inicial, de modo que Aspergillus niger, provavelmente, teria conseguido melhores resultados na remoo de corante do meio do que em RFS II no mesmo perodo de tempo, onde o poder inibitrio do contaminante foi mais severo, sendo a degradao de corante mais comprometida.

Figura 6: Reator com fungo e sacarose (RFS I) 10 dias contaminado. Pode-se observar tambm que, para crescimento fngico, a concentrao de 1,0 g/L de sacarose foi mais favorvel para o Aspergillus niger AN400. Pelo fato da concentrao de co-substrato ser diferente para RFS I e RFS II, para RFS I o crescimento da biomassa foi bem mais reduzido do que em RFS II. Em termos de nutrientes, no houve remoes, de modo que apenas em ortofosfato foi obtido um percentual de remoo de 1,5% nos reatores de RFS I e 22,1% nos reatores de RFS II. Em todos os demais parmetros analisados, no foi obtida nenhuma remoo.

4.

CONCLUSO

O Aspergillus niger AN400, apesar de no ter alcanado bons percentuais de remoo de nutrientes, apresentou-se eficiente na remoo de matria orgnica 90% (RFS I) e 80% (RFS II) e de corante 85% (RFSI) e 70% (RFS II), mostrando a maior viabilidade quando da adio da sacarose na concentrao de 0,5 g/L. Apesar da microbiota contaminante, as remoes de matria orgnica e corante atingiram remoes bastante significativas, de forma a comprovar que a espcie fngica utilizada caravteriza-se por uma tecnologia bastante promissora. AGRADECIMENTOS Ao CNPq atravs do Processo no. 567552-2008 pelo financiamento concedido a esta pesquisa e ao IFCe pela concesso da bolsas de trabalho para o autor principal.

REFERNCIAS
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