PROCESSAMENTO E AVALIAO DE ESTABILIDADE DE BEBIDA ISOTNICA EM GARRAFA PLSTICA

Rodrigo Rodrigues PETRUS , Jos de Assis Fonseca FARIA RESUMO

3 ,*

Processou-se uma mistura isotnica com pH 3,4; objetivando-se a produo de uma bebida microbiologicamente estvel, prescindindo de refrigerao. A bebida isotnica foi pasteurizada a 85C/5s em trocador de calor a placas e acondicionada em garrafas de polietileno tereftalato (PET) sanificadas por asperso com soluo de cido peractico 0,3% durante 5s, a 30C. Foram processados 1 lote com 50mg/L de sorbato de potssio, 1 lote com 100mg/L e 1 lote sem sorbato. Os 3 lotes foram mantidos a 25C durante 26 semanas, sendo realizadas determinaes de pH, slidos solveis, acidez total titulvel, cido ascrbico, testes de aceitao sensorial e contagens de microrganismos mesfilos aerbios totais, bolores e leveduras durante a estocagem. Verificou-se diferena significativa (p<0,05) entre as mdias das determinaes de cido ascrbico, no incio e fim do perodo de estocagem, para os trs lotes processados. As contagens de bolores e leveduras e mesfilos aerbios totais foram <10 UFC/mL e <5,7 UFC/mL, respectivamente, para os trs lotes analisados durante as 26 semanas. As mdias das notas atribudas nos testes de aceitao sensorial no diferiram entre si (p<0,05) ao longo da estocagem. Os resultados obtidos evidenciaram a possibilidade de produo de uma bebida isotnica em garrafa de PET sem adio de conservadores qumicos; visto que, o lote processado sem sorbato apresentou resultados microbiolgicos confiveis, aliados a sua satisfatria aceitao sensorial e estabilidade fsico-qumica. Palavras-chave: bebida isotnica; estabilidade; garrafa plstica.

SUMMARY
PROCESSING AND STABILITY EVALUATION OF ISOTONIC DRINK IN PLASTIC BOTTLE. The objective of this work was to obtain an isotonic drink by using pasteurization and packing into aseptic bottles, stable at room temperature, without the addition of chemical preservatives. For the sanitation of the plastic bottles some sanitizers were tested, based on their efficiency to destroy microorganism, maintaining minimum residual hydrogen peroxide, and keeping the drink sensory quality. The isotonic drink (pH 3,40) was thermaly processed in a plate pasteurizer at 85 C/5s and packed into PET bottles sanitized by spraying peracetic acid at 0.3%/5s at 30C. The processed drink contained three different concentrations of potassium sorbate (control, 50 and 100mg/L). The stability of the products were evaluated at 25 C for 26 weeks by measuring the pH, soluble solids, titrable acidity, ascorbic acid, microbial count, and sensory tests. The sensory evaluation and the count of the total mesophilic aerobic bacteria, moulds and yeast were measured during storage. There was no difference (p<0,05) for the pH, soluble solids and acidity of the processed drinks during the storage period except for the ascorbic acid which reduced to about 30% of the initial value. At 26 weeks the total bacteria and mould and yeast count were <5.7CFU/mL and <10CFU/mL, respectively. There was no sensory evaluation diference (p<0,05) during the storage test. Such results indicated that the formulated isotonic drink can be processed at the above conditions, without the addition of chemical preservatives, and stored at room temperature for at least 6 months in good commercial quality. Keywords: sport drink; stability; plastic bottle.

1 - INTRODUO
O consumo de bebidas esportivas, denominadas repositores hidroeletrolticos ou isotnicos, tem experimentado um crescimento expressivo nos ltimos anos. Classificados como alimentos para praticantes de atividades fsicas, esta categoria de bebidas especialmente formulada para suprir as necessidades relacionadas aos exerccios fsicos; ou seja, para facilitar a reidratao aps ou durante a prtica de exerccios intensos [13].

contradas nos fluidos orgnicos. O balano entre os eletrlitos (minerais) evita a desidratao durante a prtica esportiva. Um isotnico deve possuir a mesma presso osmtica que o sangue humano. Essa caracterstica permite que a bebida seja rapidamente absorvida aps o consumo [13]. Os eletrlitos esto envolvidos na maioria dos processos biolgicos e os mais importantes so: sdio, cloreto, potssio, clcio, magnsio e fsforo [14]. A isotonicidade ou osmolalidade da bebida, expressa em mOsm/L, depende de sua presso osmtica e calculada a partir da concentrao molal de cada eletrlito [14]. Os diferentes valores de osmolalidade classificam as bebidas como [8]: ! ! ! Hipotnicas: < 290 mOsm/L Isotnicas: 290 - 330 mOsm/L Hipertnicas: > 330 mOsm/L

1.1 - Definio e caractersticas

Uma bebida isotnica aquela que apresenta concentrao de substncias ou minerais semelhantes s en-

Recebido para publicao em 03/08/2004. Aceito para publicao em 11/08/2005 (001384). Departamento de Engenharia de Alimentos/Faculdade de Zootecnia e Engenharia de Alimentos - USP. E-mail: petrus@fzea.usp.br Departamento de Tecnologia de Alimentos/Faculdade de Engenharia de Alimentos UNICAMP. Caixa Postal 6121, CEP: 13083862, Campinas-SP-Brasil. E-mail: assis@fea.unicamp.br A quem a correspondncia deve ser enviada.

O valor osmtico do plasma sangneo humano varia de 285 a 295 mOsm/L [11]. A fabricao de bebidas repositoras de fluidos , primariamente, uma questo de mistura de ingredientes. O sabor bsico dos eletrlitos presentes na bebida pouco agradvel e a adio de flavorizantes base de frutas uma prtica usual. Tipicamente, isotnicos so bebidas

518

Cinc. Tecnol. Aliment., Campinas, 25(3): 518-524, jul.-set. 2005

Processamento e estabilidade de bebida isotnica, Petrus & Faria

no carbonatadas, de elevada acidez, com baixo contedo de carboidratos, variando de 6 a 8% [13]. A elevada acidez das bebidas isotnicas, com pH prximo a 3,5, favorece, principalmente, o desenvolvimento de bolores e leveduras; normalmente no oferecendo risco sade humana. Alteraes sensoriais so detectadas, na maioria das vezes, quando contagens microbianas so superiores a 10 UFC/mL, atingindo o mximo em valores na faixa de 10 a 10 UFC/mL [6].
7 8 9

1.3 - Conservao de isotnicos

Na conservao das bebidas isotnicas podem ser considerados quatro obstculos atuantes, isolada ou conjuntamente, que garantem a estabilidade e segurana microbiolgica do produto: ! ! ! ! Alta acidez (pH < 4,6 ); Tratamento trmico (pasteurizao); Adio de conservadores qumicos; Assepsia e adequao da embalagem.

1.2 - Alternativas de processamento e envase para isotnicos

As bebidas isotnicas esto disponveis na forma de ps, concentrados e prontas para beber. Nesse ltimo caso, o produto pode ser termicamente tratado e envasado a temperatura ambiente, em condies asspticas ou quando um agente conservador adicionado. Ainda existe a opo do enchimento a quente, utilizando-se garrafas de vidro ou PET termofixado, tambm conhecido como garrafas heat set [7]. A Figura 1 ilustra as alternativas tecnolgicas dos processos de acondicionamento de bebidas isotnicas.
MISTURA (gua + ingredientes)

Diante do exposto, esta pesquisa visou a elaborao e produo de uma bebida isotnica em garrafa plstica microbiologicamente estvel, prescindindo de refrigerao.

2 - MATERIAL E MTODOS 2.1 - Formulao isotnica

A bebida isotnica foi preparada por dissoluo dos ingredientes em gua deionizada, cuja formulao, com teor de slidos prximo a 7%, apresentada na Tabela 1. As concentraes do conservador qumico (sorbato de potssio) adicionadas foram 50 e 100mg/L, e 1 lote sem conservador atuando como controle. A formulao da mistura isotnica (pH=3,4), baseado em RUSIG [9], foi ajustada tendo como referncia o valor osmtico do plasma sangneo humano, que varia de 285 a 295 mOsmolal [10].

TRATAMENTO TRMICO

RESFRIAMENTO

ENVASE A QUENTE

RESFRIAMENTO

TABELA 1 - Formulao isotnica utilizada [9]

FECHAMENTO ENVASE A TEMPERATURA AMBIENTE (adio de conservadores) ENVASE E FECHAMENTO ASSPTICO

RESFRIAMENTO

FIGURA 1 - Alternativas de processos e sistemas de envase para bebidas isotnicas [7]

As bebidas isotnicas podem ser acondicionadas em embalagens flexveis auto-sustentveis do tipo cheer pack, formadas a partir de filmes laminados compostos de 4 materiais diferentes: polister na parte externa, alumnio (barreira ao oxignio), nilon (resistncia) e polietileno no interior, no canudo e na tampa [4], em latas de alumnio, copos de polipropileno, laminados cartonados e garrafas de vidro e PET. No atual estgio em que se encontram os sistemas de acondicionamento, que visam o aumento da estabilidade do produto nas prateleiras, reduo do uso de conservadores e da necessidade de refrigerao, a assepsia, que imperativa na indstria farmacutica, vem sendo cada vez mais empregada no setor alimentcio [1].

2.2 - Medida do valor osmtico da bebida isotnica

O valor osmtico da bebida foi determinado atravs da metodologia de osmometria de presso de vapor, em um osmmetro de presso de vapor, Knauer modelo A0280, atravs da medida do nmero de partculas osmoticamente ativas.

2.3 - Embalagem
Foram utilizadas garrafas transparentes de PET de 500mL e tampas de polipropileno. Tais embalagens apresentavam-se em uma unidade paletizada totalizando-se 2000 unidades das quais foram retiradas as amostras para a assepsia e acondicionamento da bebida.

Cinc. Tecnol. Aliment., Campinas, 25(3): 518-524, jul.-set. 2005

519

Processamento e estabilidade de bebida isotnica, Petrus & Faria

2.4 - Sanificante qumico

O sanificante utilizado na assepsia das embalagens foi uma mistura contendo 0,3% de cido peractico e 0,46% de perxido de hidrognio.

2.5 - Delineamento do tratamento trmico da bebida isotnica

O binmio tempo/temperatura delineado para o processamento da bebida foi baseado nas seguintes premissas: ! Foram considerados os limites superiores das faixas aproximadas de resistncia trmica de bolores e leveduras para alimentos de alta acidez que, conforme VARNAM & SUTHERLAND [12], so D = 0,5 1,0min e z = 8 - 10C. Ou seja, foram assumidos os valores D = 1,0 minuto e z = 10C;
6 5 ,6 C 6 5 ,6 C

O nmero inicial de microrganismos na bebida (N ) e de sobreviventes aps a pasteurizao (N) assumidos foram 10 e 10 UFC/mL, respectivamente.
o 6 0

Aplicando as equaes das curvas de destruio trmica F=(logN - logN)D, onde F representa o tempo de aquecimento a uma dada temperatura, e de tempo de destruio trmica D =D .10 , alguns binmios, equivalentes, foram calculados: 65,6C/6min, 78C/21s, 80C/13s, 85C/5s.
o (T 2 - T 1 )/ Z 1 2

FIGURA 2 - Diagrama de fluxo de processamento e envase da bebida isotnica

2.8 - Pasteurizao
A bebida isotnica foi pasteurizada em trocador de calor a placas a 85C/5s. O produto pasteurizado foi armazenado em um tanque de ao inoxidvel fechado durante um tempo aproximado de 30 minutos e envasado em garrafas de PET de 500mL sanificadas.

As caractersticas do trocador de calor utilizado e a busca por um tratamento trmico menos agressivo s qualidades nutricional e sensorial do produto justificaram a escolha da condio de tratamento igual a 85C/5seg.

2.9 - Assepsia das embalagens

As embalagens foram sanificadas e enxagadas por asperso. Uma soluo contendo 0,30% de cido peractico e 0,46% de H O a 30C foi aspergida no interior das garrafas durante 5 segundos. As tampas foram esterilizadas por imerso em gua fervente durante 10 segundos. O enxge final das garrafas foi feito por asperso de gua a 50C durante 7 segundos, filtrada e fervida.
2 2

2.6 - Elaborao e processamento em escala piloto

A elaborao, pasteurizao da bebida e assepsia das embalagens foram conduzidos na planta piloto do Departamento de Tecnologia da Faculdade de Engenharia de Alimentos da UNICAMP, conforme o diagrama de fluxo representado pela Figura 2.

2.7 - Preparao da bebida

Os lotes da bebida isotnica foram preparados em batelada por dissoluo dos ingredientes em gua deionizada e agitao em um tanque de ao inoxidvel com capacidade para 100L. Foram preparados trs lotes de 80L, sendo um controle (sem sorbato), um com 50mg/L de sorbato e um com 100mg/L. Depois de homogeneizado, o produto foi bombeado ao trocador de calor para pasteurizao. Os lotes foram identificados da seguinte maneira: ! ! ! Lote 1 - 100mg/L de sorbato; Lote 2 - 50mg/L de sorbato; Lote 3 - controle.

2.10 - Caracterizao fsico-qumica da bebida isotnica

As seguintes anlises fsico-qumicas dos 3 lotes produzidos, foram realizadas com 2, 16 e 26 semanas de estocagem a 25C: ! ! ! Potencial de hidrognio (pH); Slidos solveis totais (Brix), medido por refratometria; Acidez total titulvel (ATT) determinada por titulao com soluo de hidrxido de sdio 0,1N padronizada; cido ascrbico, titulado com diclorofenolindofenol; Osmolalidade em osmmetro de presso de vapor, realizada apenas durante o desenvolvimento da formulao isotnica.

! !

520

Cinc. Tecnol. Aliment., Campinas, 25(3): 518-524, jul.-set. 2005

Processamento e estabilidade de bebida isotnica, Petrus & Faria

2.11 - Avaliao da estabilidade microbiolgica

Os lotes da bebida produzidos foram mantidos a 25C, sendo trs unidades de cada lote retiradas, para anlises microbiolgicas realizadas no dia seguinte ao processamento, com 2, 4, 8, 16 e 26 semanas de estocagem. Como indicadores da estabilidade do produto foram feitas contagens de microrganismos aerbios mesfilos em profundidade e bolores e leveduras em superfcie. Os limites que definiram a conformidade do produto, propostos por LEITO [6], foram: ! ! Contagem padro: < 10 UFC/mL; Bolores e leveduras: < 10 UFC/mL.
3 5

3.2 - Anlises fsico-qumicas e microbiolgicas da bebida isotnica pasteurizada

3.2.1 - Anlises fsico-qumicas Os resultados, expressos como mdia das trs amostras, esto apresentados nas Tabelas 2, 3, 4 e 5. As mdias dos resultados obtidos foram comparadas, separadamente para cada lote, para verificar a existncia de diferena estatisticamente significativa entre as amostras analisadas nos trs perodos de estocagem. As determinaes de pH, slidos solveis, acidez total titulvel e cido ascrbico podem ser observadas nas Tabelas 2, 3, 4 e 5, respectivamente.
TABELA 2 - Resultados das determinaes de pH para os trs lotes de bebida isotnica pasteurizada

2.12 - Teste de aceitao sensorial

Amostras do lote sem adio de conservador qumico foram analisadas com 2, 16 e 26 semanas de estocagem a 25C, por um painel de 50 provadores no treinados, que avaliou o grau de aceitao do produto quanto aparncia e sabor. As amostras foram servidas aos provadores a uma temperatura mdia de 9C. Os testes foram realizados em cabines individuais iluminadas com luz branca utilizando-se uma escala hednica verbal de nove pontos [2].

TABELA 3 - Resultados das determinaes de slidos solveis (Brix) para os trs lotes de bebida isotnica pasteurizada

3 - RESULTADOS E DISCUSSO 3.1 - Determinao do valor osmtico da mistura isotnica

A determinao da osmolalidade da mistura foi precedida pela construo de uma curva padro, mostrada na Figura 3, utilizando solues de cloreto de sdio (NaCl).

TABELA 4 - Resultados das determinaes de acidez total titulvel (ATT) para os trs lotes de bebida isotnica pasteurizada*

TABELA 5 - Resultados das determinaes de cido ascrbico para os trs lotes de bebida isotnica pasteurizada*

FIGURA 3 - Curva padro para determinao do valor osmtico da bebida isotnica

Para a formulao mostrada na Tabela 1, a mdia das leituras do sinal eltrico (VT) detectado pelo osmmetro de presso de vapor foi igual a 63,7mV. Substituindo esse valor na equao de regresso da Figura 3, obteve-se 0,2865 Osmolal; valor esse dentro da faixa do valor osmtico do plasma sangneo humano, que varia de 0,285 a 0,295 Osmolal, conforme SREBERNICH [11].

Dentre as alteraes fsico-qumicas avaliadas, a que apresentou maior intensidade foi a reduo de vitamina C, atingindo 17% (12 10mg/100mL) durante a pasteurizao e 70,7% (10 2,93mg/100mL), considerando o lote 2, durante 26 semanas de estocagem a 25C, totalizando uma reduo prxima a 76%, em relao a

Cinc. Tecnol. Aliment., Campinas, 25(3): 518-524, jul.-set. 2005

521

Processamento e estabilidade de bebida isotnica, Petrus & Faria

quantidade inicial (12mg/100mL) adicionada durante a elaborao da bebida. De acordo com FARIA [5], o cido ascrbico um forte agente redutor, cuja principal perda ocorre por degradao qumica, que, por sua vez depende da concentrao de sal e acar, atividade de gua, pH, concentrao de oxignio e temperatura. Se o ndice de qualidade considerado na vida-de-prateleira do produto for degradao de vitamina, 50% de perda nutricional bem comum na maioria dos casos reais. A vida-de-prateleira da bebida isotnica poderia ser estabelecida, eventualmente, em funo da degradao de vitamina C, que aps 16 semanas, atingiu 50% de reduo em relao ao valor inicial adicionado, conforme a Tabela 5. Entretanto, como uma bebida isotnica no tem, primariamente, a funo de atuar como fonte de vitamina C, e sim como repositor hidroeletroltico, essa perda no consistiria em fator crtico ou limitante da vidade-prateleira do produto.

ram inferiores a 10UFC/mL para os trs lotes de bebida produzidos, mantendo-se estvel durante 26 semanas de estocagem a 25C. A distribuio de microrganismos em uma amostra de alimento, ou mesmo entre amostras de um mesmo lote de produo no necessariamente uniforme. Os planos de amostragem devem considerar a possvel distribuio de microrganismos dentro do lote, fator especialmente crtico quando os nveis iniciais so inferiores a 10UFC/g ou mL, que representa o limite de sensibilidade dos procedimentos de plaqueamento usados nas anlises. Nveis inferiores podem ser detectados, mas com menores exatido e preciso [3]. A estabilidade microbiolgica da bebida isotnica produzida pde ser atribuda ausncia de microrganismos nas amostras analisadas ou ao fato de que os microrganismos contaminantes no foram capazes de se desenvolver na formulao do produto em condies normais de estocagem, independente da presena de conservador qumico no meio.

3.2.2 - Avaliao da estabilidade microbiolgica

Contagem de microrganismos mesfilos aerbios totais As mdias das contagens de microrganismos mesfilos aerbios totais em trs embalagens do lote 1 (100mg/L de sorbato), lote 2 (50mg/L de sorbato) e lote 3 (0mg/L de sorbato) foram inferiores a 6, 2 e 2UFC/mL, respectivamente, durante o perodo de 26 semanas de estocagem a 25C. Considerou-se, portanto, que as contagens para os trs lotes, praticamente, no diferiram entre si e que a adio de conservador no interferiu na estabilidade do produto, indicando a possibilidade de sua eliminao.

3.2.3 - Aceitao sensorial

As mdias das notas atribudas aparncia e sabor so apresentadas na Tabela 6. Para a aparncia, a mdia calculada classificou a bebida entre "gostei regularmente" e "gostei muito" dentro da escala hednica aplicada, para os trs perodos avaliados. A mdia para o sabor
TABELA 6 - Mdias das notas dos testes de aceitao para o lote 3 (sem conservador) estocado a 25C

Contagem de bolores e leveduras As mdias das contagens de bolores e leveduras fo-

FIGURA 4 - Histograma do teste de aceitao para aparncia e sabor do lote da bebida isotnica pasteurizada sem conservador qumico com 2 semanas de estocagem a 25C

522

Cinc. Tecnol. Aliment., Campinas, 25(3): 518-524, jul.-set. 2005

Processamento e estabilidade de bebida isotnica, Petrus & Faria

FIGURA 5 - Histograma do teste de aceitao para aparncia e sabor do lote da bebida isotnica pasteurizada sem conservador qumico com 16 semanas de estocagem a 25C

FIGURA 6 - Histograma do teste de aceitao para aparncia e sabor do lote da bebida isotnica pasteurizada sem conservador qumico com 26 semanas de estocagem a 25C

apresentou uma sensvel queda. No incio, o produto foi classificado entre "gostei regularmente" e "gostei muito", e entre "gostei ligeiramente" e "gostei regularmente", com 16 e ao final de 26 semanas de estocagem. A anlise de varincia (ANOVA) no apontou existncia de diferena entre as amostras analisadas. O teste de Tukey indicou que as mdias para ambos atributos avaliados no diferiram significativamente (p<0,05) entre o incio e fim do perodo de estocagem, demonstrando que o grau de aceitao sensorial da bebida se manteve durante 26 semanas. As Figuras 4, 5 e 6 representam os histogramas dos testes de aceitao da bebida isotnica formulada sem adio de conservador, estocada a 25C durante 2, 16 e 26 semanas.

4 - CONCLUSES !
Os testes fsico-qumicos dos lotes da bebida isotnica indicaram, para o teor de cido ascrbico, diferenas estatisticamente significativas (p<0,05) entre as mdias dos resultados obtidos no incio e fim da estocagem. As anlises microbiolgicas da bebida isotnica pasteurizada e acondicionada em garrafas plsticas evidenciaram a estabilidade dos trs lotes produzidos, indicando a possibilidade de eliminao do conservador qumico da composio do produto. A bebida apresentou uma boa aceitao sensorial, quanto aparncia e sabor, no havendo variao estatisticamente significativa (p<0,05) entre as mdias das notas atribudas ao longo de 26 semanas de estocagem a 25C.

Cinc. Tecnol. Aliment., Campinas, 25(3): 518-524, jul.-set. 2005

523

Processamento e estabilidade de bebida isotnica, Petrus & Faria

5 - REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
[1] [2] A ASSEPSIA NA EMBALAGEM. Embanews , So Paulo, v.8, n.4, p.24-26, abr.,1997. CHAVES, J. B. P; SPROESSER, R. L. Prticas de laboratrio de anlise sensorial de alimentos e bebidas. Viosa: Imprensa Universitria, 1993. 81p. CURIALE, M. S. Shelf-life evaluation analysis. Dairy, Food and Environmental Sanitation, Des Moines, v. 11, n.7, p.364-369, July, 1991. EMBALAGEM: setor aposta em tecnologia. Plstico Moderno, So Paulo, n.289, p.65, jul.,1998. FARIA, J. A. F. Estabilidade de Alimentos em Embalagens Plsticas. Apostila de aula, Campinas, UNICAMP/FEA, 1990. LEITO, M. F. F. Consulta UNICAMP/FEA, 1999. pessoal . Campinas,

[9] [10] [11]

RUSIG, O. Consulta pessoal . Campinas, 1998. SOFOS, J. N. Sorbate food preservatives. Boca Raton: CRC, 1989. 237p. SREBERNICH, S. M. Caracterizao fsica e qumica da gua de fruto de coco (cocos nucifera), variedades gigante e hbrido pb-121, visando o desenvolvimento de uma bebida com caractersticas prximas s da gua de coco . Campinas-SP, 1998. 189p. Tese (Doutora em Tecnologia de Alimentos) Faculdade de Engenharia de Alimentos, Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). STUMBO, C. R. Thermobacteriology in food processing. 2 ed. London: Academic Press, 1973. 329p.
a

[3]

[4] [5]

[12] [13]

[6] [7]

VARNAM, A. H.; SUTHERLAND, J. P. Beverages: technology, chemistry and microbiology. London: Chapman & Hall, 1994. v.2. VOIROL, F. Energy drinks, s.n.t. 32p.

[14]

PETRUS, R. R.; FARIA, J. A. F. Sistema de embalagem para bebidas isotnicas. Revista Tcnica de Bebidas e Alimentos Engarrafador Moderno, So Caetano do Sul, v.10, n.68, p.40-41, ago., 1999. QUEST INTERNATIONAL. Osmolarity. Naarden, 1996. 2p.

6 - AGRADECIMENTOS
Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior (CAPES) e Fundao de Amparo Pesquisa do Estado de So Paulo (FAPESP) pelo apoio financeiro concedido.

[8]

524

Cinc. Tecnol. Aliment., Campinas, 25(3): 518-524, jul.-set. 2005