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Dosagem de Protenas
Introduo
As protenas so compostos orgnicos de alto peso molecular, formadas pela sequncia de aminocidos. Representam cerca de 50 a 80% do peso seco de uma clula, sendo o composto orgnico mais encontrado na matria viva. Existem muitas espcies
de protenas diferentes, cada uma possui uma funo biolgica diversa. A maior parte da informao gentica expressa pelas protenas. A BSA a protena mais abundante no plasma sanguneo e serve como depsito, assim como transporte de protena para numerosos componentes, como cadeia longa de cidos graxos ou bilirrubina, ligados por alta afinidade protena. A estrutura secundria da albumina bovina contm muitos resduos de cistina e estes so helicoidais em grande parte da cadeia. Apresenta fcil isolamento em grandes quantidades, favorecendo sua alta estabilidade e solubilidade. a principal protena que contribui para a presso coloidal osmtica do sangue e tambm para o transporte de protenas para numerosos compostos endgenos e exgenos [2]. O reagente de Folin uma soluo de ons complexos polimricos, formados a partir de heteropolicidos fosfomolibdicos e fosfotungsticos . Esse reagente oxida os fenolatos, reduzindo os cidos a um complexo azul [3]. O mtodo de Lowry a metodologia mais utilizada para a determinao de protenas. O princpio do mtodo baseia-se numa mistura contendo molibdato, tungstato e cido fosfrico, (reagente Folin-Ciocalteau), que sofre uma reduo quando reage com protenas, na presena do catalisador cobre (II), e produz um composto com absoro mxima em 750 nm. um mtodo muito sensvel. [4]
Objetivo
Determinao da quantidade de protenas em vrias amostras com composies diferentes, com o auxlio de determinados reagentes e por meio do aparelho de espectrofotometria.
Materiais e Mtodos
Reagente 1: Composto de: Cu(SO4)2 1%
Tartarato K/Na+ 2% 2% Na2CO3 e NaOH 0,1 M Reagente Follin Soluo de Albumina (soro de boi) 1 mg/mL Para curva padro
Realizou-se para o determinado experimento duas amostras para cada tipo de soluo (duplicata). No primeiro tubo A e B adicionou-se 200L de gua nos respectivos tubos. No segundo tubo A e B adicionou-se 20 L de BSA em cada um, juntamente com 180L de gua. No terceiro tubo A e B adicionou-se 40L de BSA em cada um, juntamente com 160L de gua. No quarto tubo A e B adicionou-se 100 L de BSA e de gua em cada um destes tubos. No quinto tubo A e B adicionou-se 200 L de BSA. No sexto tubo A e B adicionou-se 100L de gua e de Leite 1% em cada um dos tubos. E no stimo tubo adicionou-se 200mL de Leite 0,1%. Em todos os tubos listados acima adicionou-se 2mL de Reagente 1 em cada um deles e incubou-se estes tubos 10 min. em temperatura ambiente. Em seguida adicionou-se em cada um destes tubos 200L de reagente Follin e colocouse os tubos dentro de um armrio escuro (que se encontrava dentro de laboratrio). E por ltimo liga-se o aparelho espectrofotmetro e zera o mesmo com o tubo branco. Fazer as leituras dos padres e das amostras com o filtro de 750nm. Anotar as leituras das absorbncias.
Resultados e discusses
Primeiramente para se calcular a concentrao de protenas presentes em cada amostra foi necessrio construir a curva padro de BSA (concentrao de BSA versus absorbncia). Tabela 2- Leitura das absorbncias encontradas no espectrofotmetro
Tubos 1 (Branco) 2 3 4 5 6 7
Tabela 3- Volume gasto de soluo de BSA e de H2O para o preparo dos tubos e mdia das absorbncia das solues:
Tubo Volume soluo Padro de BSA (2mg/mL) (L) Volume de H2O (L)
1 2 3 4 5 6 7
0 20 40 100 200
Com os dados obtidos, possvel construir a curva padro para BSA (Absorbncia versus Concentrao de BSA mg/mL):
Pelo Curva Padro acima Eixo X: Concentrao e Eixo Y: Absorbncia podemos concluir que: O grfico nos fornece uma concentrao que no caso a concentrao de BSA obtida por cada valor de absorbncia encontrado. A absorbncia varia de forma linear com a contrao da amostra, a medida que aumenta a concentrao da amostra, aumenta tambm a absorbncia encontrada. Concentrao do Leite 1%: Pela equao da reta: Y: 0,6145x 1,049: 0,6145x X:1,7mg/mL: 1,7x10-3g/mL 1,7x10-3g ____1mL X ___ 100mL X: 0,17g/mL Concentrao do Leite 0,1%: Y: 0,6145x 0,231: 0,6145x X: 0,376mg/mL: 3,76x10-4g/mL 3,76x10-4g ______1mL X: ______ 100mL X: 0,038g/mL
Referncias Bibliogrficas
[1]
http://www.enq.ufsc.br/labs/probio/disc_eng_bioq/trabalhos_pos2004/constituintes_microor g/proteinas.htm, acessado em 22/04/2012
[2]
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1516-93322006000100014 acessado em 22/04/2012
[3]
https://docs.google.com/viewer?a=v&q=cache:md2SVJMAKoJ:bjft.ital.sp.gov.br/artigos/especiais/especial_2009_2/v12ne_t0231.pdf+reagente+de+folinciocalteau&hl=ptBR&gl=br&pid=bl&srcid=ADGEEShvxuGWnjk6aSbcijvLAyfvtWqb_3SbUAIoeTlRMTj7rfeC3cR_3xr_HkjrrJVyZQOMZGG7xAkmK7jZT82bA_lJO1xu3JqFCCb8TOigOsrwCLFNoWefsa6ahCit1kahnySCCV&sig=AHIEtbQkQc4q80umJ6xpeF9Nyj A5xHMToQ
[4]
http://www.scielo.br/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0100-40421998000600020 acessado em 22/04/2012