URI - Universidade Regional Integrada do Alto Uruguai e das Misses Campus Santo ngelo Departamento de Cincias exatas e da terra

a CURSO DE QUMICA INDUSTRIAL MICROBIOLOGIA E CONTROLE DE QUALIDADE

AULA PRTICA CONTAGEM DE COLIFORMES TOTAIS E TERMOTOLERANTES PELO NMP

Acadmicos: Daniele Perin Ariane Lara

Professora: Claudia Viegas

Santo ngelo, 22 de outubro de 2012.

Introduo A contaminao microbiana do leite interfere na sua qualidade e reflete as condies sanitrias de produo e a sade do rebanho (GUERREIRO, et. al. 2005). Por ser capaz de eliminar microrganismos patognicos e de reduzir riscos ao consumidor, a pasteurizao exigida pela Instruo Normativa n. 51 (BRASIL, 2002). Entretanto, na cidade de Bom Jesus, a cadeia produtiva do leite ainda precria e o leite , em sua maioria, transportado sem refrigerao, em baldes e vendido de forma crua e clandestina, em ruas e feiras. A presena e o nmero de micro-organismos patognicos ou bioindicadores acima dos padres estabelecidos no leite, alm de diminuir a qualidade e a durabilidade, podem representar srio risco sade do consumidor, sendo um problema de sade pblica. Dentre alguns micro-organismos importantes em alimentos, destacam-se o grupo dos coliformes totais e termotolerantes, que colonizam o trato intestinal de animais de sangue quente, incluindo o homem, sendo, portanto, empregados como indicadores da qualidade higinica, e que podem causar alteraes organolpticas, como as fermentaes e estufamento do produto. A presena destes microorganismos indica as ms condies higinico-sanitrias durante o processamento, como tambm, um tratamento trmico inadequado (FRANCO; LANDGRAF, 2004). Na perspectiva de avaliar a carga microbiana do leite in natura torna-se necessria a utilizao de micro-organismos indicadores de contaminao cuja quantidade observada no alimento possa ser comparada com os parmetros estabelecidos na legislao vigente. Para tanto, a utilizao dos coliformes tem se demonstrado representativa, especialmente no que se refere deteco de Escherichia coli (SILVA et al., 1997). Os coliformes totais compem os grupos de bactrias gram-negativas que podem ser aerbicas ou anaerbicas (isto depender do ambiente e da bactria), no originam esporos e fermentam a lactose, capazes de crescer na presena de sais biliares ou outros compostos ativos de superfcie (surfactantes), com propriedades similares de inibio de crescimento, e que fermentam a lactose com produo de aldedo, cido e gs a 35/37C em 24-48 horas. O grupo inclui os seguintes gneros: Escherichia, Citrobacter, Enterobacter e Klebisiela. O grupo de bactrias determinado coliformes totais so aquelas que no causam doenas, que habitam o meio ambiente e tambm o intestino de animais mamferos inclusive o homem (BARCELLOS, 2006). O uso da bactria coliforme termotolerantes para indicar poluio sanitria mostra-se mais significativo que o uso da bactria coliforme total, porque as bactrias fecais esto restritas ao trato intestinal de animais de sangue quente. A determinao da concentrao dos coliformes assume importncia como parmetro indicador da possibilidade da existncia de micro-organismos patognicos, responsveis pela transmisso de doenas de veiculao hdrica, tais como febre tifide, febre paratifide, desinteria bacilar e clera (BARCELLOS, 2006). J os coliformes termotolerantes so tambm conhecidos como "fecais" por suportarem uma temperatura superior a 40C, convivem em simbiose com humanos, bois, gatos, porcos e outros animais de sangue quente. So excretados em grande quantidade nas fezes e normalmente no causam doenas (quando esto no trato

digestivo). Neste grupo est presente a bactria gram-negativa Escherichia coli, e ao ingerir alimentos por ela contaminados, os resultados desagradveis (como uma gastrenterite, por exemplo) podem ser brandos ou desastrosos, dependendo do grau de contaminao. O principal componente deste grupo Escherichia coli, sendo que alguns coliformes do gnero Klebisiela tambm apresentam essa capacidade (MARTINS et al., 2006).
O teste presuntivo utilizado tanto para determinao de coliforme total como para coliforme fecal (termotolerante). Geralmente aplicado em trs sries de tubos.

Objetivos da Prtica O presente trabalho teve como objetivo verificar a qualidade atravs da ocorrncia de coliformes totais e termotolerantes em amostras de leite in natura (Amostra A) fornecida para a anlise. Materiais e Mtodos Para a atividade prtica utilizou-se: - Caldo Escherichia coli (EC). - Caldo Verde brilhante (VB) - Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST) - Tubo de ensaio - Tubo de Durham - Placa de Petri estril - Pipetas - gua peptonada 0,1%

Importante As seguintes normas devem ser seguidas nas inoculaes dos meios de cultura: A) O fio e a ala de platina devem sempre ser flambados antes e depois de qualquer inoculao, ou seja, devem ser aquecidos ao rubro no cone interno da chama do bico de Bunsen. Para a coleta de material, devem ser esfriados na parte interna do recipiente com meio de cultura: B) Os recipientes (tubos de ensaio, placas de Petri, etc.) com meio de cultura devem sempre ser abertos prximos ao bico de Bunsen: C) A boca dos tubos de ensaio deve ser aquecida aps a retirada e antes da colocao da tampa. A tampa nunca deve ser colocada sobre o balco, sendo retirada e mantida segura pelo dedo mnimo da mo direita durante a inoculao. Descries das Atividades Realizadas

1) Tcnica de Inoculao em meio liquido - Flambou-se a ala de platina - Mergulhou-se a ala esterilizada na cultura bacteriana (E. Coli) - Mergulhou-se a ala carregada no tubo contendo o meio de cultura - Agitou-se a ala no meio liquido - Retirou-se do tubo - Flambou-se a ala de platina novamente - Fechou-se o tubo e inoculou-se. 2) Tcnica de Inoculao em meio slido (inclinado) - Flambou-se a ala de platina - Mergulhou-se a ala esterilizada na cultura bacteriana (E. Coli) - Encostou-se a ala de platina levemente na parte mais baixa do plano inclinado e subiu-se fazendo estrias na superfcie. - Flambou-se a ala de platina novamente - Fechou-se o tubo e inoculou-se.
9mL H2O p 0,1%

3) Tcnica de inoculao em meio slido (coluna) - Flambou-se a agulha - Mergulhou-se a agulha esterilizada na cultura bacteriana (E. Coli) - Com a agulha fez-se uma nica perfurao na coluna do meio de cultura slido (2/3 do meio) - Flambou-se a agulha novamente - Fechou-se o tubo e inoculou-se. 4) Tcnica de inoculao em meio slido em Placa de Petri (esgotamento) - Flambou-se a ala de platina - Mergulhou-se a ala esterilizada na cultura bacteriana (E. Coli) - Encostou-se levemente a ala na superfcie do meio fazendo estrias em trs divises da placa de petri - Flambou-se a ala de platina novamente - Fechou-se a placa de petri e inoculou-se.

Resultados e discusso Obtivemos como resultados aps a encubao por 48 horas em estufa a 35C, o crescimento... Concluso