UFRRJ INSTITUTO DE VETERINRIA CURSO DE PS-GRADUAO EM MEDICINA VETERINRIA PATOLOGIA E CINCIAS CLNICAS

DISSERTAO

PESQUISA CLNICA E ETIOLGICA DE ANEMIA EM CES

MARCELO SOARES ANTUNES 2010

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO INSTITUTO DE VETERINRIA CURSO DE PS-GRADUAO EM MEDICINA VETERINRIA PATOLOGIA E CINCIAS CLNICAS

PESQUISA CLNICA E ETIOLGICA DE ANEMIA EM CES

MARCELO SOARES ANTUNES

Sob a orientao do Professor Gilberto Garcia Botelho

e co-orientao da Professora Rita de Cssia Campbell Machado Botteon

Dissertao submetida como requisito parcial para obteno do grau de Mestre em Cincias, no Curso de Ps-graduao em Medicina Veterinria, rea de

concentrao Cincias Clnicas.

Seropdica, RJ Janeiro de 2010

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UFRRJ / Biblioteca Central / Diviso de Processamentos Tcnicos

636.708969 Antunes, Marcelo Soares, 19726 Pesquisa clnica e etiolgica de anemia em ces A627p / Marcelo Soares Antunes 2010. T 78 f.: il. Orientador: Gilberto Garcia Botelho. Dissertao (mestrado) Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Curso de Ps-Graduao em Medicina Veterinria. Bibliografia: f. 42-56. 1. Co - Doenas - Teses. 2. Anemia - Teses. 3. Doenas crnicas Teses. 4. Hemograma Teses. I. Botelho, Gilberto Garcia, 1946-. II. Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Curso de PsGraduao em Medicina Veterinria. III. Ttulo.

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UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DO RIO DE JANEIRO INSTITUTO DE VETERINRIA CURSO DE PS-GRADUAO EM MEDICINA VETERINRIA PATOLOGIA E CINCIAS CLNICAS

MARCELO SOARES ANTUNES

Dissertao submetida com requisito parcial para obteno do grau de Mestre em Cincias, no Curso de Ps-graduao em Medicina Veterinria, rea de Concentrao Cincias Clnicas.

DISSERTAO APROVADA EM 26/01/2010

______________________________________________________ Gilberto Garcia Botelho (Prof. Dr.) UFRRJ (Orientador)

______________________________________________________ Elan Cardoso Paes de Almeida (Prof. Dr.) UFF

______________________________________________________ Carlos Henrique Machado (Prof. Dr.) UFRRJ

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DEDICATRIA

Dedico a Deus primeiramente, por permitir a minha existncia. A minha famlia, pais, irmo e sobrinhos e a todos os amigos que acreditaram em mim. A Minha av, Irene Ferreira Machado por todo seu amor. A Luciene Ferreira Rocha por tudo que tem feito em minha vida. A Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro e ao Curso de Ps Graduao em Medicina Veterinria, rea de Concentrao Cincias Clnicas, sem voc Rural eu no seria nada. In menoriam do meu irmo Marcio Soares Antunes, (Vov) Ari Gomes Machado, (Vov) Gilda Soares da Rocha, que a conquista deste sonho possa amenizar esta distncia.

AGRADECIMENTOS

Agradeo do fundo do meu corao, a todas as pessoas, que de uma forma ou outra, contriburam para esse sucesso, se por acaso esqueci de algum, peo desculpas. Ao Professor Gilberto Garcia Botelho, muitssimo obrigado por me aceitar como orientado, e proporcionar o acontecimento deste momento. A Professora Rita de Cssia Botteon muito obrigado por tudo mesmo, a palavra coorientadora muito pouco, voc foi uma verdadeira me em todas as horas, privou-se do seu tempo por inmeras vezes, para que este projeto pudesse chegar ao fim. Foram vrios momentos difceis, e mesmo assim sempre otimista, Vamos l sacode a poeira, levanta a cabea, d a volta por cima... Vai dar certo! Mais uma vez muito obrigado e no deixando tambm de agradecer pela disponibilidade do laboratrio. Ao Professor Eduardo Lima, pelo apoio, pronto atendimento e disponibilidade de seu laboratrio. A Professora Vivian Assuno Nogueira, pela amizade e contato com professora lan Cardozo. As Professoras lan Cardozo e Simone Pontes Xavier, pela confiana, e pronto atendimento em participar desta banca. Ao Professor Carlos Henrique Machado, muitssimo obrigado pela leitura das lminas, pela participao em minha banca, e pelo pronto atendimento em todas as horas. Aos Professores da rea de Anatomia Animal, Marcelo Abidu, Luciano Alonso, Paulo Roberto, Claudete Reis, Luis Alberto, Orlando Marques e Paulo Scherer, obrigado pelo apoio, dedicao, amizade e compreenso de minhas falhas e ausncias, durante todo esse processo. Ao Professor Fbio Barbour Scott, Thas Ribeiro Correia Azevedo, Francisco de Assis Ribeiro, Marcio Monteiro de Mattos e Pedro Ivan Fazio Junior, Vanessa Paulino da Cruz Vieira e Maria Clara da Silva Negreiros Botelho do Laboratrio de Quimioterapia Experimental, meu grande agradecimento pelo espao cedido, pela experincia maravilhosa de interao com os beagles, pelo apoio e ensinamentos, e por todo carinho e confiana. Ao Professor Paulo Scherer, por ter sido um enorme amigo, desde o tempo da graduao e o grande incentivador para que eu pudesse chegar at aqui. Ana Paula de Magalhes Nunes H! Pensou que eu tinha esquecido de voc? Da grande amiga de graduao e companheira do mestrado, famosa na idealizao dos churrascos da ps. Realmente ramos inseparveis, bastava mencionar a palavra organizao: Marcelito me ajuda? Amiga voc demais! Ana Paula Lopes Marques pela amizade, pelos churrascos da Ps e por dedicar seu tempo para ler e corrigir a minha dissertao as 02:00h da manh. Aos amigos, Anderson, Z Monte, Rafael, Marcos, der, Ricardo, Phillipe e ric do alojamento M2 quarto 226, obrigado pelo companheirismo. Ao Amigo Anselmo da Silva Ramos, mestrando e amigo inseparvel, ou seja, irmo gmeo de batalha, quem diria que conseguiramos chegar at aqui. Coitado dos ces, os pobrezinhos j no agentavam mais a nossa presena, sem contar a equipe bem treinada que formamos para nos ajudar neste projeto, bastava dar bobeira um minuto, e l estava de bucha nos ajudando. Momentos inesquecveis com direito a puxo de orelha e batismo. Obrigado por tudo meu amigo. Ao amigo Welser Barbosa Neto, pela amizade, e inmeras brincadeiras, por tentar sempre me ajudar a salvar um trabalho e ao final acabava apagando tudo. Ao Sr Athaide Baptista, pelo carinho e bom humor de todos os dias, quem no conhece a sua famosa frase T beleza, Ta tranqilo, Estamos a irmo!

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Regina Helena Oliveira, por me aturar muito antes de entrar na graduao e durante toda a ps-graduao. Falar desta pessoa no fcil. de uma positividade sem igual, sempre acreditando no sucesso, mesmo quando pensava em desistir. No tenho sequer palavras para expressar tamanha gratido. Ao seu Osas, pelo convvio de todos os dias na sala sete. A Camila Botelho (Camilete), por lembrar-me sempre: Marcelex meu pai ta. A Camila Rodrigues (Loura) por ter apagado as correes de bibliografia antes de salvar. A Elaine Conceio Liporage de Mendona, que nome to grande para uma pessoa to baixinha, mas se engana quem no a conhece. Essa menina grande em tudo o que faz. Foi a precursora desse trabalho. Sem ela no laboratrio nada acontecia. E quem no lembra da famosa frase Selminho concentra meu filho, vai dar certo. Agradeo por tudo. Luana Caliman Cavatti pelo extremo carinho e grande amizade, no esquecendo das horas de sono perdida para corrigir a bibliografia e processando amostras no laboratrio. A Luana Vilela Lopes por seu grande apoio e incentivo moral, para que no desesperasse quando tudo parecia difcil, e tambm pelas horas dedicadas na avaliao das amostras. A Isabela Petrillo (Capivarinha), pelo enorme apoio, amizade e no esquecendo da internet. Mal chegava no IV e a primeira coisa que fazia era perguntar Qual a boa?. Jane Paula, falar de voc aqui pouco, muito, muito obrigado, por ter aberto mo do seu precioso tempo, para realizar todas as anlises no laboratrio. Ah! V se no passa mal de novo por abstinncia alcolica. Ao Jos Miguel Farias Hernandez, por sua grande amizade e companheirismo desde o DCE e graduao, foram pocas tumultuadas, mas passamos tranqilo. Ao Manteiga e Ananias, pelo enorme incentivo e apoio. Pelas conversas durante as manhs e por me lembrar todos os dias com a aquela mesma pergunta E a Marcelinho j tudo pronto? A Maria Anglica por todas as vezes que passo pela portaria, desejava-lhe bom dia e pedia um dinheirinho, e ela prontamente respondia com uma palavra carinhosa (@#$*+@!????). A Natalia Carmo Passos pela ateno, amizade, incentivo, carinho, descontrao e apertadas. Ops A Natalia pimentinha pelo enorme incentivo. pimenta ardida! A Letcia Arajo, bem a histria com essa menina engraada, vem desde quando ainda usava lacinhos no cabelo. Ficava brincando no play do prdio ao lado com sua irm nem a pro mundo. Quem diria que aps anos, nos tornaramos grandes amigos e justamente na rural. L valeu pela amizade e por toda confiana. Amo voc amiga. A Paula Suzana Elisa Maciel Poll, bom a mais nova do grupo, quase um bebe, mas uma pessoa especial, com um enorme corao, pronta para ajudar, desde que tenha uma vodka com limo. Valeu pela formatao. A Raquel Mosna pelo carinho e amizade. Silvana e Juliana, as cajazeiras, sempre desesperadas com as ultimas provas, quem nunca ouviu a expresso Preciso formar? Amigas valeu pela fora e dedicao. muito bom ter pessoas como vocs por perto. O Zca diabo. A Sara Mota de Andrade por estar sempre comigo em todos esses momentos, com seu apoio e dedicao, pelo ingls e por me chamar de chato todos os dias. A Talita de Carvalho Fonseca. Sou suspeito para falar de voc, apesar de me aturar como amiga durante a graduao, ainda sobrou um pouquinho mais no mestrado. Te adoro! A Tia Marlene Pelo almoo maravilhoso e sempre quentinho, pela simpatia, e o desconto?

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RESUMO

ANTUNES, M.S. Pesquisa Clnica e Etiolgica da Anemia em Ces (Canis familiaris). 2009. Dissertao (Mestrado em Medicina Veterinria). Instituto de Veterinria, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropdica, RJ, 2009. Em ces diversas enfermidades que cursam com anemia a exemplo da erliquiose so exaustivamente estudadas. Contudo, no existem no Brasil estudos para estimar a incidncia de anemia em diferentes espcies e, to pouco, estudos que avaliem a dimenso e as causas relacionadas ao problema. Assim, desenvolveu-se o presente estudo visando diagnosticar e avaliar os ndices de anemia em ces machos e fmeas, de diferentes raas, idades e condies diversas de manejo nutricional e sanitrio, mas sem sinais clnicos de anemia, bem como avaliar o perfil metablico desses animais. Foram avaliados 148 ces, sendo que anemia foi identificada em 40% dos animais, a maioria do tipo normoctica normocrmica (ANN). Conclui-se pelos dados analisados que anemia tem ocorrncia significativa, mesmo em ces assintomticos. A deficincia nutricional, especialmente de cobre e ferro, as parasitoses e insuficincia heptica no estiveram relacionadas ocorrncia de anemia entre os animais estudados. Neste estudo destacam-se as infeces crnicas por Ehrlichia canis e/ou Anaplasma platys e a doena periodontal (DP), como enfermidades infecciosas /inflamatrias crnicas causadoras provveis da ANN entre os animais estudados. O tratamento da DP e a avaliao de indicadores inflamatrios seriam teis para elucidao das causas da anemia no rebanho estudado.

Palavras-chave: anemia, doena crnica, ces, hemograma, perfil metablico, minerais.

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ABSTRACT ANTUNES, M. S. Clinical and Etiologycal resarch of Anemia in Dogs (Canis familiaris). 2009. Dissertation (Master of Science in Veterinary Medicine). Instituto de Veterinria, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropdica, RJ, 2009. Several diseases in dogs causing anemia, with the example of ehrlichiosis are thoroughly investigated. But in Brazil there are no studies to estimate the incidence of anemia in different species and so little, studies that assess the extent and causes related to the problem. Thus, it was developed this study to diagnose and assess the rates of anemia in male and female dogs of different breeds, ages and various conditions of health and nutritional management, but no clinical signs of anemia, and to evaluate the metabolic profile of these animals. We evaluated 148 dogs with anemia that was identified in 40% of the animals, most of then was normochromic normocitic (NNA) in type. It was concluded from the analyzed data that anemia is a significant occurrence, even in asymptomatic dogs. The nutritional deficiency especially of copper and iron, parasites and liver failure were not related to the occurrence of anemia among the animals studied. In this study we highlight the chronic infection with Ehrlichia canis and Anaplasma platys, and periodontal disease (PD) as chronic infectious/inflammatory diseases as likely causes of the NNA between the animals studied. The treatment of PD and evaluation of inflammatory markers would be useful for elucidation of the causes of anemia in the herd studied.

Key Words: anemia, chronic disease, dogs, blood count, metabolic profile, mineral

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LISTA DE ABREVIAES E SMBOLOS

ADC ADRC ACD AF ALT ANN AST B2 B6 B12 CHCM CTFL Cu D3 DP DPV EDTA EPO ETC FA FeS FS INF g/dL GGT GLDH GOT GPT Hb HCM He LG LQEPV IL 1 IL 6 IRC IST IV g/L g/dL Mg MG Mg mg/mL mg/dL Nm

Anemia de Doena Crnica Anemia da Doena Renal Crnica Anemia Relacionada a Doena Crnicas Anemia Ferropriva Alanina Aminotransferase Anemia Normoctica Normocrmica Aspartato Aminotransferase Riboflavina Pirodoxina Cianocobalamina Concentrao de Hemoglobina Corpuscular Mdia Capacidade Total de Ferro Cobre Calcitriol Doena Periodontal Departamento de Parasitologia Veterinria cido Etilenodiamino Tetra-cetico Eritropoetina Erliquiose Tromboctica Canina Fosfatase Alcalina Dosagem de Ferro Srico Ferritina Srica Gama-Iterferon Grama por decilitro Glutamil Transferase Glutamato Transaminase Glutmica oxaloactica Glutmica Pirvica Hemoglobina Hemoglobina Corpuscular Mdia Hematimetria Leucometria Global Laboratrio de Quimioterapia Experimental em Parasitologia Veterinria Interleucina 1 Interleucina 6 Insuficincia Renal Crnica nsuficincia Renal Crnica Instituto de Veterinria Microgramas por Litro Microgramas por Decilitro Magnsio Minas Gerais Miligramas Miligramas por mililitros Miligramas por Decilitros Nanmetro x

P PCR pH PPT PTH RDW Rpm ST TBCI TFG TGP TGO TNF UFRRJ UI UI/L VCM VG C

Fsforo Protena C Reativa Potencial Hidrogeninico Protena Plasmtica Total Paratormnio ndice de Anisocitose Rotao por Minuto Saturao da Transferina Capacidade de Ligao da Transferrina ao Ferro Taxa de Filtrao Glomerular Transaminase Pirvica Transaminase Glutmico Oxaloactico Fator de Necrose Tumoral- alFa Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro Unidades Internacionais Unidades Internacionais por Litro Volume Corpuscular Mdio Volume Globular Celsius

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LISTA DE TABELAS

Tabela 01 - Mdias e amplitude de variao (mximo e mnimo) dos parmetros 24 hematolgicos de 150 ces adultos, machos e fmeas, de diferentes raas, em relao aos valores de referncia (THRALL, 2007; NELSON, COUTO 2006). Tabela 02 - Mdia dos valores hematolgicos de 105 ces sem raa definida (SRD) 25 e 45 Beagles, segundo o sexo e resultado da anlise estatstica entre raas e sexos. Tabela 03 - Porcentagem de ces da raa Beagle e sem raa definida (SRD) com 26 valores hematolgicos diminudos, aumentados ou normais em relao aos limites fisiolgicos descritos para espcie e raa. Tabela 04 - Mdia dos valores sricos de ferro, cobre e capacidade total de ligao 27 do ferro (CTLF) em 150 ces machos e fmeas, de diferentes raas, idades e sob manejos nutricional e sanitrio distintos, determinados atravs de espectrometria de absoro atmica, em relao aos valores de referncia (KANEKO et al., 1997; COELHO et al., 2006) e valores mdios individuais obtidos para os Beagles e animais sem raa definida (SRD). Tabela 05 - Valores mdios da contagem de hemcias, concentrao de hemoglobina, 30 hematcrito e leucometria global em ces da raa Beagle segundo o grau da doena periodontal de acordo com Beard e Beard (1989). Tabela 06 - Mdia dos valores hematolgicos em 43 ces da raa Beagle do Canil de 32 Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Veterinria da UFRRJ, em duas avaliaes com intervalos de cinco meses e anlise estatstica entre as coletas. Tabela 07 - Porcentagem de animais da raa Beagle, machos e fmeos, adultos no 32 castrados, com valores hematimtricos abaixo ou acima dos limites da normalidade para a espcie. Tabela 08 - Mdia e amplitude de variao (mximo e mnimo) dos valores sricos 37 de ferro e capacidade total de ligao do ferro (CTLF) em 43 ces da raa Beagle determinadas atravs de espectrofotometria, utilizando-se kits comerciais em relao aos valores de referncia (KANEKO et al., 1997; COELHO et al., 2006). Tabela 09 - Valores mdios e amplitude de variao dos minerais clcio, fsforo e 38 magnsio no soro de 43 Beagles em relao aos valores de referncia e nmero de animais com valores abaixo ou acima da normalidade, segundo Nelson e Couto (2006). Tabela 10 - Valores mdios e amplitude de variao (mximo e mnimo) de uria, 40 creatinina, AST, ALT e fosfatase alcalina (FA) de 43 ces da raa beagle sem manifestaes clnicas de enfermidades, em relao aos valores de referncia (SILVA et al., 2001; THRALL, 2007).

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LISTA DE FIGURAS

Figura 01 - Viso geral do Canil de Quimioterapia Experimental (CQE) do 19 Departamento de Parasitologia Veterinria / Instituto de Veterinria (IV) da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ). Figura 02 Baia coletiva e animais em rea gramada com acesso livre e irrestrito gua 19 e rao durante o dia, fornecidos em comedouros automticos no Canil de Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Veterinria. IV/UFRRJ. Figura 03 Co da raa Beagle em experimentao alojado em gaiola individual no 20 Canil de Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Veterinria. IV/UFRRJ. Figura 04 - Enfermaria em rea de experimentao do Canil de Quimioterapia 20 Experimental do Departamento de Parasitologia Veterinria. IV/UFRRJ. Figura 05 - Rao seca industrializada para ces adultos e filhotes, sacos de 15 kg, 21 fornecida aos animais do Canil de Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Veterinria. IV/UFRRJ. Figura 06 - Aparelhos eletrnicos para realizao dos hemogramas (01) e Bioqumica do 21 Laboratrio de Quimioterapia Experimental em Parasitologia Veterinria do Canil de Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Veterinria. IV/UFRRJ. Figura 06 - Co da raa Beagle com presena de clculo dentrio, edema e bolsas 31 gengivais, dentes sem mobilidade e retrao gengival, alteraes correspondentes a uma gengivite grave segundo Beard e Beard (1989). Figura 07: Ces da raa Beagle com inflamao grave da gengiva, bolsas com presena 31 de pus e dentes com ligeira mobilidade correspondentes a uma periodontite moderada segundo Beard e Beard (1989).

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SUMRIO
1. INTRODUO 2. REVISO DA LITERATURA 2.1. Sangue 2.2. Sistema Hematopotico Hematopoese 2.3. Anemia 2.3.1. Definio 2.3.2. Classificao 2.3.3. Sintomas 2.3.4. Diagnstico 2.4. Hemograma 2.4.1. Hematimetria 2.4.2. Volume Globular 2.4.3. Concentrao de hemoglobina 2.4.4. ndices hematimtricos 2.4.5. Exame microscpico do esfregao corado 2.4.6. Leucometrias global e especfica 2.4.7. Plaquetometria 2.5. Perfil Metablico 2.5.1. Protena plasmtica 2.5.2. Indicadores sanguneos minerais 2.5.3. Indicadores enzimticos 2.6. Investigao Etiolgica 2.6.1. Deficincias nutricionais A) Anemia Ferropriva B) Deficincia de cobre C) cido flico e Vitamina B12 (Cianocobalamina) 2.6.2. Doena renal crnica 2.6.3. Doena heptica 2.6.4. Anemia de doena crnica 3.0 MATERIAS E MTODOS 3.1. Local e Animais 3.2. Etapa 1: Valores Sricos de Ferro e Cobre e Perfil Hematolgico em Diferentes Condies Clnicas e de Manejo 3.2.1. Animais e amostragem 1 2 2 2 3 3 4 4 5 5 6 6 6 6 6 7 7 7 8 8 9 9 9 10 11 11 11 13 15 17 17 17 17 xiv

3.2.2 Amostras de sangue 3.2.3 Avaliao dos resultados 3.3. Etapa 2: Pesquisa clnica e etiolgica da anemia em ces da raa Beagle 3.3.1. Amostras de sangue para hemograma e soro 3.3.2. Provas complementares ao hemograma 3.3.3. Perfis mineral, heptico e renal 3.3.4. Metabolismo do ferro 3.3.5. Perfil renal 3.3.6. Perfil heptico 3.3.7. Perfil mineral 3.3.8. Avaliao dos resultados 4. RESULTADOS E DISCUSSO 4.1. Etapa 1: Valores sricos de ferro e cobre e perfil hematolgico de ces em diferentes condies clnicas e de manejo 4.1.1. Hematologia 4.1.2. Freqncia e formas de anemia 4.1.3. Leucometria global e especfica 4.1.4. Ferro e cobre sricos 4.1.5. Provveis fatores etiolgicos da anemia 4.1.6. Pesquisa de hematozorios 4.2. Pesquisa Clnica e Etiolgica da Anemia em Ces da Raa Beagle 4.2.1. Avaliao clnica 4.2.2. Hemograma A) Eritrograma B) Leucograma C) Protenas Plasmticas Totais (PPT) D) Contagem de Reticulcitos 4.2.3. Perfil mineral A) Ferro, cobre e fatores nutricionais B) Clcio, fsforo e magnsio C) Funo renal D) Funo heptica 5. CONCLUSES 6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 7. APNDICE

18 22 22 22 22 22 23 23 23 23 23 24 24 24 25 26 27 28 28 29 29 30 30 34 35 35 36 36 37 38 39 41 42 57 xv

1 INTRODUO Atualmente em medicina veterinria, os exames laboratoriais so to importantes para o clnico quanto a histria e o exame fsico. A confirmao de um diagnstico suspeito depende da avaliao correta dos resultados laboratoriais, dos achados ao exame fsico e da histria clnica do paciente, que devem ser avaliados em conjunto para compreender melhor a doena. A diversidade de informaes que o hemograma pode fornecer, embora em geral bastante inespecficas, torna esse exame subsidirio um dos mais solicitados nas prticas clnica e cirrgica. Nas ltimas dcadas observou-se uma grande evoluo tecnolgica na realizao do hemograma, e as tcnicas manuais tm sido substitudas por sistemas automatizados que apresentam maior preciso nos resultados e em menor tempo (GROTTO, 2009). Novos parmetros laboratoriais obtidos nos sistemas automatizados podem ser bons auxiliares, mas devem ser utilizados com cautela, e a microscopia ainda fundamental para a identificao de vrias anormalidades no identificveis pelos exames automatizados. Anemia uma das entidades nosolgicas de descrio mais antiga e, provavelmente, uma das mais difundidas. Anemia um achado freqente em doenas no hematolgicas, tais como neoplasias, infeces, doenas inflamatrias, distrbios gastrintestinais, insuficincia renal crnica e hepatopatia crnica; sempre que possvel deve ser diagnosticada quanto a sua etiologia, o que nem sempre fcil, visto a variedade de circunstncias em que pode ocorrer. O impacto das anemias sobre a sade e produtividade varivel e em medicina veterinria ainda pouco compreendida. Todavia, a anemia deve sempre ser apreciada no somente pela magnitude numrica em termos epidemiolgicos, mas tambm por suas conseqncias clnicas na sade dos indivduos. Em ces e gatos diversas enfermidades que cursam com anemia a exemplo de erliquiose so exaustivamente estudadas. Contudo, no existem no Brasil estudos para estimar a incidncia de anemia em diferentes espcies e, to pouco, estudos que avaliem a dimenso e as causas mais comumente relacionadas ao problema. Acredita-se que os ndices sejam elevados especialmente considerando-se o manejo a que a maioria dos animais so submetidos. Assim, desenvolveu-se o presente estudo visando diagnosticar e avaliar a ocorrncia de anemia em um grupo de 150 ces machos e fmeas, de diferentes raas, idades e condies diversas de manejo nutricional e sanitrio, bem como avaliar os perfil hematolgico e metablico de ces com anemia.

2 REVISO BIBLIOGRFICA 2.1. Sangue O sangue uma massa lquida contida num compartimento fechado, o aparelho circulatrio que a mantm em movimento regular e unidirecional, devido essencialmente s contraes rtmicas do corao (GARCIA-NAVARRO; PACHALY, 1994). No sangue so encontrados trs tipos celulares principais: glbulos vermelhos (hemcias ou eritrcitos), glbulos brancos (leuccitos), e plaquetas (trombcitos), suspensas em uma fase lquida denominada plasma, que contm alm das clulas um amplo espectro de protenas, substncias orgnicas e inorgnicas, hormnios e outros componentes (SWENSON; REECE, 2006). O sangue transporta os gases respiratrios, os nutrientes, os resduos metablicos, as clulas e substncias do sistema de defesa do organismo, participando tambm da regulao trmica e do equilbrio hdrico e eletroltico (CINGOLANI; HOUSSAY, 2003). O volume total de sangue, constitudo por clulas sangneas e plasma corresponde volemia, que em um indivduo normal, representa aproximadamente 8% do peso corporal (CONSTANZO, 2004). O plasma composto por gua (91,5%), slidos orgnicos (7,5%) e inorgnicos (1,0%). Protenas como albumina, globulina, fibrinognio e fatores de coagulao representam 7% dos slidos orgnicos e os outros 0,5% so um conjunto de substncias nitrogenadas, gorduras neutras, colesterol, fosfolipdeos, glicose, enzimas e hormnios. O 1% de slidos inorgnicos formado pelos minerais sdio, clcio, potssio, fsforo, cobre e por bicarbonato (SWENSON; REECE, 2006). Quando a volemia encontra-se abaixo ou acima dos valores normais (normovolemia), fala-se de hipovolemia ou hipervolemia, respectivamente. Normovolemia, hipovolemia ou hipervolemia podem, por sua vez, ser normocitmicas, oligocitmicas ou policitmicas, de acordo com a massa de clulas vermelhas circulantes, que corresponde ao volume globular (CINGOLANI; HOUSSAY, 2003). O volume de eritrcitos em geral estimado a partir da concentrao de hemoglobina ou do hematcrito. Alteraes do volume de eritrcitros ocorrem na forma de policitemia ou anemia, respectivamente, quando o hematcrito ou o nmero absoluto de eritrcitos no sangue encontram-se aumentados ou diminudos (PRACHAL, 2005; BERKOW, 2006). 2.2. Sistema Hematopotico - Hematopoese A limitada vida mdia das clulas sangneas maduras e sua incapacidade de realizar mitose tornam necessria a existncia de populaes celulares denominadas geradoras ou poiticas, cuja funo gerar clulas maduras de cada tipo celular especfico (CINGOLANI; HOUSSAY, 2003). Todo o sistema, constitudo de populaes celulares rgos e tecidos, que geram clulas sangneas, recebe o nome de sistema hematopoitico (SWERSON; REECE, 2006). A hematopoese ou hemopoiese (hemato ou hemo significa sangue; poiesis significa fazer) realizada no sistema hematopotico, o qual constitudo por clulas-tronco hematopoticas (CTH), clulas precursoras, clulas sangneas morfofuncionalmente maduras e tecido de sustentao da hematopoese (microambiente hematopotico) localizado nas cavidades medulares de ossos chatos e longos, bao, fgado, linfonodos e timo (GASPER, 2000). As CTH so pluripotentes e do origem a todas as clulas heterogneas funcionais do sangue e do sistema imune (GASPER, 2000) e tambm a clulas no hematopoticas de vrios tecidos (HERZOG; CHAI; KRAUSE, 2003). Morfologicamente, as CTH assemelham-se a

pequenos linfcitos, tendo alta razo ncleo-citoplasma, nuclolo proeminente e citoplasma basoflico destitudo de grnulos (GASPER, 2000). Clulas precursoras (blastos) das linhagens eritroctica, leucoctica e megacarioctica ao multiplicarem-se, diferenciam-se e amadurecem, dando origem, respectivamente, a eritrcitos, leuccitos e plaquetas, que passam para o sangue circulante (CINGOLANI; HOUSSAY, 2003). Os eritrcitos, hemcias ou glbulos vermelhos (do grego erythos, vermelhos) so as clulas mais numerosas do sangue. O eritrcito desenvolve-se a partir do rubroblasto, que est geneticamente programado para efetuar no mnimo quatro divises mitticas e para sintetizar hemoglobina (JAIN, 1993). Nos mamferos os eritrcitos tm uma forma discide ou esferide, sem ncleo, algumas com depresso central, tendo vida mdia de 60 a 130 dias na maioria das espcies. Em condies normais os eritrcitos ocupam aproximadamente 40% do volume do sangue. Esse ndice, chamado hematcrito ou volume globular, mais ou menos constante para as espcies. Assim, as espcies que tm eritrcitos menores, como a cabra e a ovelha, possuem mais eritrcitos circulantes que outros animais como o co cujos eritrcitos medem entre 60 e 70 m3 (JUNQUEIRA; CARNEIRO, 1999). Os eritrcitos maduros circulantes e todos os seus precursores nucleados (clulas eritropoiticas) existentes na medula ssea e outros rgos formam, em conjunto o ritron com funo diferenciada para o transporte de oxignio dos pulmes para os tecidos e de dixido de carbono no sentido inverso, devido ao desenvolvimento de duas importantes protenas, a hemoglobina e a anidrase carbnica (CINGOLANI; HOUSSAY, 2003). O nvel da atividade eritropoitica na medula ssea depende do nmero de precursores eritrides envolvidos na diferenciao e proliferao celular. Os estgios finais da eritropoiese so dependentes principalmente da ao do hormnio glicoprotico eritropoetina (EPO), o qual induz a proliferao e a diferenciao final das clulas progenitoras comprometidas da linhagem eritroctica. A eritropoetina primariamente produzida nos rins e em menor extenso no fgado, em resposta a baixa tenso de oxignio no sangue (LANGSTON; NYSSA; KITTRELL, 2003). Bonagura (1992) refere que o principal estmulo para a sntese de eritropoietina a hipoxemia renal que culmina em aumento no hematcrito pela liberao de reticulcitos na circulao em aproximadamente cinco dias. O nmero de eritrcitos recrutados pela eritropoietina est diretamente relacionado com o grau de hipxia (STRAIT; LATIMER; TARPLEY, 2005). Por outro lado, alta oxigenao celular resulta em decrscimo da produo de eritropoietina (LANGSTON; NYSSA; KITTRELL, 2003), uma vez que a sua produo regulada pelo clssico sistema de feedback negativo (NITSCHE, 2004). 2.3. Anemia 2.3.1. Definio Etimologicamente, anemia (do grego, an = privao, haima = sangue) significa ausncia ou falta de sangue. O termo, portanto para um significado mais adequado deveria ser substitudo pela expresso oligocitemia. O conceito de anemia compreende alteraes quantitativas e/ou qualitativas dos eritrcitos, devendo ser entendida como sintoma e no enfermidade no sentido estrito da palavra (SPORRI; STUNZI, 1977). Anemia caracterizada por quantidade reduzida de hemoglobina, baixa concentrao de hemcias por unidade de volume e/ou nmero de hemcias abaixo dos valores definidos como normais para indivduos saudveis da mesma espcie, raa, sexo, idade e condies ambientais similares (NELSON; COUTO, 2006).

Do ponto de vista clnico anemia corresponde a uma sndrome clnica de etiologia multifatorial, caracterizada ao exame laboratorial por reduo do nmero de eritrcitos e/ou concentrao de hemoglobina, devendo ser encarada sempre como secundria a mltiplas e distintas causas (COLES, 1993). 2.3.2. Classificao H vrios tipos de anemia, produzidos por uma variedade de causas ou fatores: nutricionais, genticos, imunolgicos, perdas de sangue, trauma fsico, uso de medicamentos e doenas crnicas (BATISTA-FILHO, 2008). A produo deficiente, a destruio excessiva e a perda sangunea, so os trs mecanismos bsicos responsveis pelo aparecimento das anemias (LORENZI, 2003). A anemia pode ser classificada segundo critrios morfolgicos (aspecto dos eritrcitos), grau ou intensidade e aspectos etiopatolgicos (base fisiopatolgica) (SPORRI; STUNZI, 1977). O conceito mais atual considera especialmente a atividade da medula ssea em resposta ao estado anmico, classificando as anemias em regenerativas e no regenerativas (BATISTAFILHO, 2008). Quanto ao grau ou intensidade, o processo anmico pode ser classificado em leve, moderado ou grave, geralmente relacionado aos nveis de hemoglobina, valores do hematcrito e sintomas decorrentes. Contudo, a multiplicidade de causas e a amplitude do conceito constituem limitantes para a classificao adequada das anemias. Considerando-se simultaneamente o tipo e as causas de anemia pode-se estabelecer uma classificao mais adequada do ponto de vista didtico, cientfico e prtico (SPORRI; STUNZI, 1977). A classificao morfolgica leva em considerao o dimetro das hemcias (macroctica, microctica e normoctica) e sua concentrao em hemoglobina das clulas (hipocrmica e normocrmica). O tamanho das clulas refletido no volume corpuscular mdio (VCM): se as clulas forem menores que o normal, dito que a anemia microctica; se elas tm tamanho normal, normoctica; se so maiores que o tamanho normal, macroctica. Quanto aos mecanismos etiopatolgicos (etiopatognicos), a anemia est relacionada perda de sangue (hemorrgica aguda ou crnica), ao excesso de destruio de eritrcitos (hemoltica) e s deficincias de produo de eritrcitos na medula ssea (hipoproliferativa) primria (carencial e aplstica) ou secundria (CARVALHO; BARACAT; SGARBIERI, 2006). A classificao funcional de anemia concebida a partir da contagem dos reticulcitos e a morfologia dos glbulos vermelhos pode ser usada como um guia de leitura dos resultados de determinaes clnicas. A presena de reticulcitos em quantidades reduzidas ou normais indica anemia hipoproliferativa ou alterao na maturao dos glbulos vermelhos. Se a produo de reticulcitos estiver elevada, o mais provvel hemlise (BATISTA-FILHO, 2008). 2.3.3. Sintomas A funo principal dos glbulos vermelhos transportar oxignio. Assim, as anemias provocam uma srie de manifestaes relacionadas reduo da capacidade de transporte de oxignio e ajustes metablicos estabelecidos para aumentar a eficincia do ritron, e reduzir a sobrecarga cardaca, sendo a maioria, determinados pela causa, intensidade e durao do processo. Anemia sem sinais clnicos evidentes ocorre freqentemente em diferentes espcies animais (SMITH, 1991). Os sinais clnicos so influenciados pelo tempo de adaptao anemia, idade e grau de compensao do sistema cardio-pulmonar. O dficit de ferro pode levar palidez da pele e das membranas mucosas, glossite, alteraes gastrintestinais e repercusses no sistema imune com maior susceptibilidade a infeces. Os seguintes sintomas resultam do insuficiente abastecimento de oxignio: fadiga, astenia, diminuio na vitalidade, apatia, anorexia ou 4

alterao do apetite, taquicardia durante o exerccio e repouso, dispnia de esforo, tonturas, palpitaes e outras condies mdicas, segundo a origem da anemia (VANNUCCHI; FREITAS; SZARFARC, 1992). Os processos anemiantes com freqncia esto relacionados perda crnica de sangue, causada por parasitismo gastrintestinal, por ecto e hemoparasitoses. Ocorre tambm em associao com doenas gastrointestinais e debilitantes (RADOSTITS et al., 2002). Para essas enfermidades mtodos diagnsticos adicionais especficos em geral so necessrios. 2.3.4. Diagnstico A avaliao diagnstica inicial do paciente com anemia inclui uma histria e exame fsico detalhados, e um mnimo de exames laboratoriais. Com os dados de anamnese e exame fsico pode-se definir se a anemia aguda ou crnica, suspeitar de uma origem hemoltica ou no, e questionar a provvel etiologia (BATISTA-FILHO, 2008). 2.4. Hemograma Na investigao laboratorial, o primeiro exame a ser solicitado o hemograma, o qual deve ser sempre acompanhado da contagem de reticulcitos, para definir se a anemia secundria diminuio de produo ou aumento de destruio dos glbulos vermelhos. Durante as ltimas dcadas observou-se uma grande evoluo tecnolgica na realizao do hemograma, e as tcnicas manuais tm sido substitudas por sistemas automatizados que apresentam maior preciso nos resultados e em um menor tempo. Essas inovaes mudaram a rotina dos laboratrios, tornando-os mais eficientes e geis, alm de apresentarem uma melhor qualidade nos resultados (GROTTO, 2009). O hemograma contempla a determinao de diversos parmetros, com a finalidade de avaliar quantitativa e qualitativamente os componentes celulares do sangue (REBAR; FELDMAN, 2003). Os itens avaliados incluem: contagem de hemcias, hematcrito, determinao da concentrao de hemoglobina, ndices hematimtricos, leuccitos totais, contagem diferencial de leuccitos, contagem de plaquetas e exame microscpico de esfregao de sangue corado (MILLER; GONALVES, 1995). Na interpretao do hemograma, ateno especial deve ser dada ao nmero de eritrcitos, concentrao de hemoglobina e hematcrito, assim como aos ndices hematimtricos (VCM, HCM, CHCM) para classificar a anemia e identificar as possibilidades diagnsticas (SMITH, 1991). Aps classificar a anemia de acordo com os aspectos fisiolgicos e morfolgicos, na maioria das vezes, so necessrios exames complementares para estabelecer a causa. Os resultados auxiliam a identificao de doenas de origem primria ou secundria de caractersticas agudas ou crnicas (REBAR; FELDMAN, 2003). Grotto (2009) chama a ateno para o fato de que, embora o hemograma tenha um poder diagnstico limitado, nas mos de um clnico que conhea as funes celulares e as bases fisiopatolgicas das doenas, pode ser uma ferramenta importante para a avaliao de diversas situaes, como no diagnstico e evoluo de doenas hematolgicas, deteco de quadros infecciosos e no monitoramento teraputico.

2.4.1. Hematimetria A contagem de hemcias (milhes/l) ou hematimetria um mtodo simples para determinao do estado funcional do ritron. A avaliao eritrocitria pode identificar processos anmicos, policitmicos, alteraes de forma e tamanho das hemcias (REBAR; FELDMAN, 2003). Determinaes que caracterizam a hemcia madura circulante ou dados referentes aos reticulcitos tm sido incrementadas pelos equipamentos eletrnicos. O RDW (red cell distribution width) um indicativo do grau de anisocitose das hemcias expresso em porcentagem (BESSMAN; JOHNSON, 1975) e pode representar um auxlio importante no diagnstico de diversas condies clnicas (GROTTO, 2008). A diversidade de informaes que o hemograma pode fornecer, embora em geral bastante inespecficas, torna esse exame subsidirio um dos mais solicitados nas prticas clnica e cirrgica (GROTTO, 2009). 2.4.2. Volume globular O volume relativo das hemcias dentro do volume de sangue fornecido pelo volume globular (VG) ou hematcrito, que expresso percentualmente. Indiretamente permite avaliao do ndice ictrico, estimativa do nmero de leuccitos e concentrao de hemoglobina. O VG o indicador mais rpido, preciso e barato de anemia e um dos mais importantes exames entre os parmetros da srie vermelha do sangue, mas deve ser interpretado mediante conhecimento prvio do estado de hidratao e estresse (JAIN, 1993; SMITH, 1991). A tcnica de microhematcrito desenvolvida em tubos capilares o mtodo mais difundido, pela sua preciso e praticidade para determinao do VG (GROTTO, 2009). 2.4.3. Concentrao de hemoglobina A avaliao da concentrao de hemoglobina (g/dL) importante pelo seu papel no transporte de oxignio e por estar diretamente relacionada anemia. o teste laboratorial mais til na triagem de anemia, pois reflete diretamente o status do ferro no organismo (ANDREWS; BRIDGES, 1998). Entretanto, quando utilizada como nico marcador bioqumico, pode subestimar a prevalncia da deficincia de ferro (CAMILLO et al., 2008). 2.4.4. ndices hematimtricos Os principais ndices eritrocticos so o volume corpuscular mdio (VCM), a hemoglobina corpuscular mdia (HCM) e a concentrao de hemoglobina corpuscular mdia (CHCM) (CARVALHO, 1999). Dentre esses, o VCM ainda o mais amplamente utilizado na avaliao das anemias, associado anlise das alteraes morfolgicas das hemcias, que tambm pode fornecer subsdios interessantes no reconhecimento de diversos tipos de anemia (GROTTO, 2009). O nmero de eritrcitos, a concentrao de hemoglobina e o hematcrito podem ser usados para o clculo de certos ndices que fornecem informaes adicionais sobre variaes de volume e concentrao da hemoglobina do eritrcito (COLES, 1993). 2.4.5. Exame microscpio do esfregao corado A colorao das hemcias dependente de sua concentrao em hemoglobina, podendo ocorrer diminuio da concentrao e conseqente reduo da cor (hipocromia); ou presena de clulas com diferentes concentraes de hemoglobina (anisocromia); ou ainda, um grande

nmero de reticulcitos que caracteristicamente tm uma cor azulada, que produz a policromasia (DUNCAN; PRASSE, 1986). Os achados morfolgicos do esfregao corado fornecem informaes adicionais sobre o contedo de hemoglobina, a forma e o tamanho das hemcias, bem como evidenciam a presena de incluses eritrocitrias e so importantes para o diagnstico de hemoparasitoses (COLES, 1993). 2.4.6. Leucometrias global e especfica O leucograma composto pelas contagens total e diferencial de leuccitos, expressa percentualmente (relativa) ou em unidades por litro (absoluta) e pela avaliao morfolgica dos mesmos no esfregao sanguneo. Indica o nmero de neutrfilos, linfcitos, moncitos, eosinfilos e basfilos presentes na amostra de sangue. Quando analisado em conjunto com a histria clnica e dados do exame fsico, a avaliao leucocitria pode evidenciar processos inflamatrios, infecciosos, alrgicos, parasitrios e leucmicos (COLES, 1993). Os leuccitos realizam suas funes, predominantemente, nos tecidos (SWENSON; REECE, 2006). O nmero circulante, portanto, reflete o equilbrio entre o fornecimento e a demanda, variando entre as espcies (KERR, 2003). Apesar da discreta variao com a idade, a contagem total de leuccitos mantm-se dentro da faixa de normalidade. Na enfermidade, entretanto, tanto o nmero quanto a morfologia dos leuccitos podem se alterar dramaticamente. O leucograma, contudo raramente patognomnico em determinada molstia, entretanto as informaes obtidas podem ser teis na elaborao de diagnstico diferencial, na avaliao da gravidade da doena e no fornecimento do prognstico (LATIMER; MEYER, 1992). Nos ces jovens, os valores se elevam de acordo com o aumento da atividade, isto , durante o dia (BUSH, 2004). 2.4.7. Plaquetometria As plaquetas so produzidas na medula ssea por fragmentao do citoplasma dos megacaricitos (HOFFBRAND; PETTIT; MOSS, 2004). Tendo como principal funo das plaquetas a formao de um tampo mecnico durante a resposta hemosttica normal leso vascular (BUSH, 2004). Atualmente considera-se que a maneira mais satisfatria de contar plaquetas atravs de contadores automatizados, os quais procedem contagem de plaquetas por tecnologia de impedncia, de disperso de luz, ou com ambas. Preferencialmente, as contagens de plaquetas so feitas em sangue venoso anticoagulado com cido etilenodiamino tetra-actico (EDTA). A formao de cogulos e agregao plaquetria so fontes de erros na contagem de plaquetas. Quando se constata uma diminuio na quantidade de plaquetas diz-se que ocorre uma plaquetopenia ou trombocitopenia e no caso de aumento, diz-se que ocorre plaquetose ou trombocitose (FAILACE, 2003). 2.5. Perfil Metablico Os valores bioqumicos do plasma fornecem importantes informaes em relao ao estado clnico de um animal ou populao de animais (PAYNE; PAYNE, 1987). A composio bioqumica do plasma sanguneo reflete a situao metablica dos tecidos, de forma a poder avaliar leses teciduais, transtornos no funcionamento de rgos, adaptao do animal diante de desafios nutricionais e fisiolgicos e desequilbrios metablicos especficos ou de origem nutricional (COTE; HOFF, 1991). Os valores bioqumicos do sangue 7

sofrem variaes em funo de fatores como raa, idade, estresse, dieta, condies ambientais, manejo, clima e estados fisiolgicos como lactao e gestao (LINDSTROM, 1982). O termo perfil metablico foi proposto por Payne, na Inglaterra, em 1970. Inicialmente eram anlises sanguneas individuais, principalmente de rebanhos leiteiros. Esta ferramenta surgiu como mtodo auxiliar no diagnstico das doenas de animais de produo, e atualmente, sua utilizao foi ampliada e estendida a outras espcies animais. O perfil metablico composto por anlises de alguns componentes hematolgicos e/ou bioqumicos especficos que servem no somente para monitorar a adaptao metablica e diagnosticar desequilbrios da homeostase de nutrientes, mas tambm para revelar as causas de enfermidades que alteram o funcionamento de diferentes rgos e sistemas (PAYNE; PAYNE, 1987). 2.5.1. Protenas plasmticas As protenas sanguneas so sintetizadas principalmente pelo fgado, sendo que a taxa de sntese est diretamente relacionada com o estado nutricional, especialmente com os nveis de protenas e com a funcionalidade heptica. A hipoproteinemia pode indicar estados de subnutrio, bem como de insuficincia ou de leso heptica e hemorragias. Hiperproteinemia pode ser observada em casos de desidratao, infeces, tumores, e artificialmente, em amostras hemolisadas (SUTTON; HOBMAN, 1975; SUTTON; JOHNSTONE, 1977). O fibrinognio uma protena de fase aguda sintetizada no fgado, cuja concentrao plasmtica eleva-se sob a ao de interleucinas (IL-1 e 6) e do fator de necrose tecidual liberado pelo processo inflamatrio (ANDREWS et al., 1994). No sofre alterao perceptvel em virtude de fatores como a idade, sexo, exerccio ou hemorragia (THOMAS, 2000). Embora comumente utilizado para avaliao de processos inflamatrios, a sensibilidade e a especificidade do fibrinognio para detectar e distinguir as inflamaes nas diferentes espcies varivel (McSHERRY et al., 1970). Para ces, valores superiores a 500 mg/dL podem indicar processo inflamatrio desde que no haja hemoconcentrao (SCHALM et al., 1970; SUTTON; JOHNSTONE, 1977; VECINA; PATRCIO; CIARLINI, 2006). 2.5.2. Indicadores sanguneos minerais O clcio presente no sangue formado por trs fraes: ionizado, ligado a protenas sricas, principalmente albumina e associado a molculas orgnicas. Estas esto em equilbrio e a concentrao final do clcio ionizado depende do pH (Potencial Hidrogeninico), da concentrao de albumina e da relao cido-base do sangue (SENA; BOWERS, 1988). O clcio ionizado a frao mais importante do ponto de vista biolgico, representando cerca de 50% do clcio total, pois desempenha a funo de on regulador em deferentes processos metablicos (BUSH, 2004). Rotineiramente, o metabolismo do clcio avaliado por meio da determinao do clcio srico total. Os valores de referncia situam-se entre 8 a 12 mg/dL (WITTWER et al., 1993). O sistema endcrino envolvendo a vitamina D3 (calcitriol), o paratormnio (PTH) e a calcitonina, responsveis pela manuteno dos nveis sangneos de clcio, fazem com que os nveis sricos variem pouco (17%) comparado com o fsforo (40%) e o magnsio (57%). Portanto, o nvel sanguneo de clcio no um bom indicador do estado nutricional (RIELLA, 1988). O fsforo (P) existe em combinaes orgnicas dentro das clulas, mas o interesse principal no perfil metablico reside no fsforo inorgnico presente no plasma. O metabolismo de fsforo controlado em grande parte, pela sua interao com o clcio e pela ao do PTH, da calcitonina e do calcitriol (RIELLA, 1988).

A hiperfosfatemia ocorre com regularidade em ces com um taxa de filtrao glomerular diminuda. Na nefropatia crnica h reduo na capacidade de filtrao e perda da capacidade de excreo de fsforo levando hiperfosfatemia (ROCHA et al., 2009). Em geral, as concentraes sricas de uria acompanham paralelamente as do fsforo. Normalmente no h alteraes no clcio srico em doenas renais agudas, mas a hipocalcemia pode ser observada na insuficincia renal crnica IRC (POLZIN et al., 2000). No existe um controle homeosttico rigoroso para o magnsio (Mg) e, portanto, sua concentrao sangunea reflete diretamente o nvel da dieta. O controle renal do magnsio est mais direcionado para prevenir a hipermagnesemia, mediante a excreo do excesso pela urina. A hipomagnesemia pode ser conseqncia de uma excessiva liplise em decorrncia de uma deficincia de energia. O nvel de magnsio no perfil metablico (normal entre 2,0 e 3,0 mg/dL) pode indicar estados subclnicos antes de surgir o problema. comum observar-se nveis sanguneos aumentados de magnsio em casos em que o clcio est baixo, devido ao aumento da reabsoro renal de magnsio em resposta ao PTH secretado (KANEKO; HARVEY; BRUSS, 1997). 2.5.3. Indicadores enzimticos O sistema de medida da atividade enzimtica mais usado o de Unidades Internacionais (UI), equivalente quantidade de enzima que catalisa a converso de 1 mol de substrato por minuto. A avaliao da atividade enzimtica no plasma fundamentada nos seguintes conceitos: (a) No plasma podem ser encontradas enzimas cuja sntese e funo, so exercidas em nvel intracelular, mas que podem sair para a corrente circulatria, aps leso celular. (b) Como a concentrao intracelular das enzimas maior que no plasma, danos celulares relativamente pequenos podem elevar sua atividade no plasma. (c) Aumento da atividade enzimtica no plasma permite fazer inferncia sobre o lugar e o grau do dano celular, uma vez que muitas enzimas so especficas de rgos. O grau de alterao pode ser determinado pela atividade de enzimas associadas a diferentes compartimentos celulares. Assim, em danos tissulares severos, aparece maior atividade de enzimas mitocondriais como glutamato dehydrogenase (GLDH) e em danos menores aparece atividade de enzimas citoplasmticas, como alanina aminotransferase (ALT) ou de membrana, como fosfatase alcalina (FA). (d) Os nveis enzimticos no plasma so influenciados pela velocidade com que entram na corrente circulatria, o que por sua vez depende do dano celular da taxa de inativao enzimtica ou meia-vida da enzima (THRALL, 2007). 2.6. Investigao Etiolgica 2.6.1. Deficincias nutricionais A partir da definio de carncia nutricional, como a falta, relativa ou absoluta, de um nutriente que, se persistente, pode provocar uma enfermidade, pode-se conceituar anemia carencial como um estado patolgico no qual ocorre anemia como resultado da carncia de um ou mais nutrientes essenciais para a sntese da hemoglobina (CAMPOS et al., 2001). Em animais domsticos as principais deficincias nutricionais que acarretam anemia so: ferro cuja carncia determina a anemia ferropriva, cobre, cobalto e selnio, alm das vitaminas B6, B12 e do cido flico (DUNCAN; PRASSE, 1986).

A) Anemia ferropriva Em humanos estima-se que 90% das anemias sejam causadas por deficincia de ferro (World Health Organization, 2001). Em animais, a anemia por deficincia de ferro raramente ocorre de forma primria uma vez que a disponibilidade de ferro na maioria dos alimentos suficiente e at alta para atender demanda dos animais (McDOWELL, 1999). O ferro um elemento essencial na maioria dos processos fisiolgicos. Em adultos normais, a quantidade de ferro absorvida diariamente equivale quantidade excretada e o ferro continuamente reciclado atravs de um eficiente sistema de reutilizao, principalmente do ferro proveniente da hemoglobina das hemcias, aps hemlise intra e extravascular. A maior parte do ferro plasmtico destina-se medula ssea, sendo que 80% do ferro liga-se ao heme e passa a fazer parte da hemoglobina, e os 20% restantes permanecem ligados transferrina como ferro de transporte (ANDREWS, 1999). Aproximadamente 25% do ferro do organismo fica armazenado, principalmente no fgado e bao. Quando necessrio esse ferro retorna ao plasma e dirige-se medula ssea para a formao de novas hemcias (JURADO, 1997). A anemia ferropriva ocorre quando as reservas de ferro do organismo tornam-se insuficientes para manter a eritropoiese e, conseqentemente, a concentrao normal de hemoglobina no sangue (MIRANDA et al., 2003). A deficincia de ferro se instala por mecanismos diversos. Nos jovens a principal causa o aumento da demanda de ferro e ingesto insuficiente, que ocorre em animais alimentados exclusivamente com leite. J nos adultos a causa mais comum de anemia ferropriva a perda crnica de sangue, mais freqentemente, pelo trato gastrintestinal associada m-absoro por gastrite, lceras ou parasitoses (CARVALHO, 1999), e nas ectoparasitoses (SMITH, 1991). A deficincia de ferro resulta do desequilbrio entre a absoro e o consumo e/ou perda, e deve-se a fatores fisiolgicos (necessidade aumentada no crescimento, gestao, parto e puerprio), nutricionais (baixa disponibilidade ou excesso de elementos que diminuem a absoro de ferro), patolgicos (perda de sangue, comum em parasitoses, lceras e neoplasias do intestino ou m absoro intestinal) (RADOSTITS et al., 2002). A carncia de ferro desenvolve-se de forma gradual e progressiva, considerando-se trs estgios. Inicialmente h diminuio da ferritina srica (depleo de ferro): o segundo estgio (deficincia de ferro) referido como uma eritropoiese ferro-deficiente e caracteriza-se por insuficincia de ferro para a produo de hemoglobina e outros compostos frricos, ainda que a concentrao de hemoglobina no esteja reduzida; h um declnio da concentrao de ferro e aumento da capacidade de ligao do ferro srico; o terceiro estgio (anemia ferropnica) caracteriza-se pela diminuio da oferta de ferro medula ssea, com reduo da sntese e do contedo de hemoglobina nos precursores eritrocitrios, com prejuzos funcionais ao organismo, tanto mais graves quanto maior for essa reduo (DALLMAN; REEVES 1984). Neste estgio, observa-se, alm da reduo da concentrao da hemoglobina, hipocromia, microcitose, anisocitose e poiquilocitose; ferro srico, saturao da transferrina e ferritina baixos (BAYNES, 1994; COOK, 2003; TEFFERI, 2003; CANADO et al., 2007). Os sinais e sintomas da carncia de ferro so inespecficos, necessitando-se de exames laboratoriais para que seja confirmado o diagnstico. Na avaliao da deficincia de ferro, vrios testes podem ser usados: concentrao de hemoglobina, hematcrito, ferro srico, ferritina, capacidade de ligao do ferro, saturao da transferrina, protoporfirina eritroctica e os ndices hematimtricos (VCM, HCM e CHCM) (OSKI, 1993; CANADO et al., 2007). Mais recentemente o receptor da transferrina srica circulante e o contedo de hemoglobina no reticulcito tm sido utilizados em medicina humana, com perspectiva de utilizao tambm em medicina veterinria (GROTTO, 2008).

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O nvel de ferritina srica (FS), que reflete os estoques de ferro dos tecidos, s sofre depresso na deficincia de ferro. Valores elevados podem ser observados nas infeces, neoplasias, doenas hepticas, leucemias e hipertireoidismo diminuindo seu valor diagnstico (DALLMAN et al., 1996). A dosagem de ferro srico (FeS) est habitualmente reduzida na deficincia de ferro. A capacidade total de ligao do ferro (CTLF) aumenta na deficincia de ferro, mas diminui na inflamao, fornecendo assim evidncia para diferenciao das duas situaes. Porm, pode se encontrar dentro da faixa de normalidade quando ambas, inflamao e deficincia, coexistem. Em funo da reduzida especificidade e sensibilidade do ferro srico e da capacidade total de ligao do ferro, costuma-se considerar a relao entre as duas medidas, ou seja, a saturao da transferrina (ST). Esse ndice tambm possui algumas limitaes, modificando-se na presena de infeco (SILVA, 2008). B) Deficincia de cobre O cobre um microelemento essencial para animais e plantas. O cobre necessrio para respirao celular, hematopoiese, formao ssea, funo cardaca normal, desenvolvimento do tecido conjuntivo, mielinizao da medula espinhal, queratinizao e pigmentao dos tecidos. Nos animais existe uma ampla variedade de alteraes associadas com a deficincia de Cobre simples ou induzida por altos nveis de molibdnio e enxofre na dieta (CAVALHEIRO; TRINDADE 1992, RADOSTITS et al., 2002). C) cido flico e vitamina B12 (Cianocobalamina) O cido flico e a vitamina B12 so elementos essenciais para hemopoiese. A carncia nutricional ou a m absoro produz uma anemia geralmente macroctica (KUZMINSKI et al., 1998). O cobalto componente essencial da vitamina B12 que contm 4,5% deste mineral. Os microorganismos do tubo digestivo so capazes de sintetizar a B12 desde que a dieta contenha concentraes adequadas de cobalto. A deficincia de cobalto corresponde deficincia de vitamina B12 e esta ocorre de forma primria somente em ruminantes (RADOSTITS et al., 2002). Os sintomas em ruminantes no so especficos, sendo semelhantes ao quadro de subnutrio protica ou energtica (McDOWELL, 1999). Em monogstricos a deficincia de cobalto no ocorre, havendo em condies especficas a possibilidade de deficincia de B12. Este fato decorre de uma menor ingesto da vitamina pronta e reduo na sntese pelos microrganismos do intestino. possvel a deficincia de B12 em ces submetidos ao tratamento oral com altas doses de antibiticos por um perodo prolongado, o que impede a produo intestinal da vitamina (KUZMINSKI et al., 1998). 2.6.2. Doena renal crnica Os rins so fundamentais para a manuteno da homeostase do organismo. Assim, a queda progressiva do ritmo de filtrao glomerular observada na doena renal crnica (DRC) e conseqente perda das funes regulatrias, excretrias e endcrinas leva ao comprometimento de essencialmente todos os rgos (CARMO et al., 2002; HSU; CHERTOW, 2002). A insuficincia renal crnica (IRC) freqentemente diagnosticada em ces e gatos (BROWN et al., 1997; KRAWIEC; ITKIN, 1995, POLZIN et al., 2000), sendo definida como um processo de alterao da funo renal primria que persiste por um perodo extenso, geralmente por meses ou anos (BROWN et al., 1997, POLZIN et al., 2000).

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A anemia surge precocemente no curso da DRC, sendo um achado universal em pacientes em estgios avanados da doena. No corrigida, ela produz um estado hiperdinmico, caracterizado por aumento do dbito e da freqncia cardaca e diminuio da resistncia vascular perifrica (RACUSEN; NAST, 1999). A anemia da doena renal crnica (ADRC) normoctica e normocrmica e atribuda a um dficit relativo de eritropoietina (CORESH et al., 2001; LEVIN et al., 1999). Alm da deficincia de eritropoetina outras situaes podem contribuir para o advento de anemia em pacientes portadores de DRC: deficincia de ferro, deficincia de cido flico e vitamina B12; perdas sangneas (causada por perdas gastrointestinais imperceptveis, desnutrio, mltiplas intervenes cirrgicas, exames laboratoriais freqentes e perdas nas dilises), hemlise e inflamao (HUTCHINSON; JONES, 1997; ECKARDT, 2000). Na IRC, normalmente, as concentraes sricas de ferro, transferrina e ferritina encontram-se inalteradas, mas um estado inflamatrio coexistente poder resultar na diminuio dos valores sricos de ferro e de transferrina, em contraposio ao aumento da concentrao srica de ferritina. A deficincia absoluta ou funcional de ferro desempenha um papel importante na gnese e manuteno da anemia na IRC e a causa mais comum de resposta inadequada ao tratamento com eritropoetina (THOME, 2002). Os seguintes exames podero fazer parte de uma investigao sumria de causa de anemia em pacientes com DRC: ndices hematimtricos, contagem de reticulcitos, ferro srico, saturao de transferrina, ferritina srica, pesquisa de sangue oculto nas fezes. Saturao da transferrina (calculada pela razo entre ferro srico e capacidade total de ligao do ferro multiplicada por 100) deve ser dosada periodicamente para avaliao do status do metabolismo do ferro em pacientes com IRC em hemodilise ou tratamento com ferro parenteral (ABENSUR, 2004). O catabolismo de protenas e cidos nuclicos resulta na formao dos compostos nitrogenados no-proticos. O rim exerce papel fundamental na eliminao da maioria destes compostos do organismo. A dosagem destas substncias na rotina laboratorial faz parte do estudo do status renal do paciente. A uria constitui 45% do nitrognio no protico no sangue. Aps a sntese heptica, a uria transportada pelo plasma at os rins, onde filtrada pelos glomrulos (MOTTA, 2009). O aumento plasmtico da uria pode ter causas pr-renais, que diminuem o fluxo sangneo no rim, causas renais, por deficincia de filtrao ou ps-renais, como na obstruo. Em algumas situaes, como inanio, febre, queimaduras e tambm no uso de medicamentos como glicocorticides, pode ocorrer o aumento na produo de uria (POLZIN et al., 2000). Apesar destas limitaes, o nvel de uria ainda serve como um ndice preditivo da insuficincia renal sintomtica e no estabelecimento de diagnstico na distino entre vrias causas de insuficincia renal (MOTTA, 2009). A creatinina plasmtica derivada, praticamente em sua totalidade, do catabolismo da creatina presente no tecido muscular. A creatina um metablito utilizado para armazenar energia no msculo, na forma de fosfocreatina. A converso de fosfocreatina em creatinina uma reao no enzimtica irreversvel (GRAUER, 2007). A excreo de creatinina s se realiza por via renal, uma vez que ela no reabsorvida nem reaproveitada pelo organismo. A velocidade de excreo relativamente constante no estado de equilbrio; por isso, os nveis de creatinina srica so mais sensveis e especficos do que a medida da concentrao da uria plasmtica no estudo da velocidade de filtrao glomerular reduzida. A concentrao de creatinina tambm pode ser influenciada pela idade, sexo e massa muscular (CHEW; DIBARTOLA, 1992). Alteraes do metabolismo de clcio e fsforo ocorrem frequentemente nos pacientes com IRC. A hiperfosfatemia e o aumento do produto fsforo-clcio podem determinar o desenvolvimento de doena ssea, alm de favorecerem a precipitao de fosfato de clcio no 12

tecido renal, e assim influenciar na velocidade de progresso da doena renal (PARMAR, 2002; HSU; CHERTOW, 2002). Em ces com IRC pode ocorrer hipercalcemia, tendo sido observados valores de clcio srico total maiores que 12 mg/dL (CHEW; MEUTEN, 1982; KRUEGER; OSBORNE, 1996; LAZARETTI et al., 2006). O mecanismo pelo qual se desenvolve a hipercalcemia complexo e multifatorial: envolve o aumento da reabsoro ssea mediada pelo PTH, secreo autnoma de PTH e de seus metablitos pelos rins, diminuio da excreo renal de clcio devido reduo da taxa de filtrao glomerular (TFG), aumento da absoro de clcio intestinal e elevao da frao de clcio ligado a protenas ou formando complexos (citrato, bicarbonato, fosfato ou sulfato) (CHEW; MEUTEN, 1982; CHEW; CAROTHERS; 1989; KRUEGER; OSBORNE, 1996). O aumento da atividade srica da fosfatase alcalina pode ocorrer devido atividade osteoclstica associada ao hiperparatiroidismo secundrio renal, e que geralmente no excede de quatro a seis vezes o limite mximo de normalidade (CENTER, 1992). Em pacientes nefropatas ocorre hipoalbuminemia de causa multifatorial que envolve alteraes no metabolismo das protenas, diminuio espontnea da ingesto protica secundria perda do apetite, produo heptica diminuda, proteinria e o estado inflamatrio urmico (BERGSTRM; LINDHOLM, 1998). 2.6.3. Doena heptica O fgado tem um papel importante no metabolismo e armazenamento de carboidratos, protenas e lipdeos, no metabolismo das vitaminas, na produo de fatores de coagulao, alm das funes de captar, metabolizar e excretar substncias endgenas e exgenas como bilirrubina, drogas e hormnios. Possui capacidade de regenerao incomum, alm de ser importante tambm no equilbrio hidroeletroltico, na defesa imunolgica e como reservatrio de sangue (SILVA; ORTOLANI, 2006). Doena heptica qualquer distrbio que provoque leso de hepatcitos, colestase ou ambas. Devido a uma grande reserva funcional, os sinais de insuficincia heptica frequentemente no se desenvolvem at que 70% ou mais da massa funcional do fgado seja perdida ou comprometida (THRALL, 2007). Em ces e gatos, a incidncia de hepatopatia e doenas do trato biliar representa de 1% a 2% de todos os casos clnicos, mas essa taxa depende da raa (ROTHUIZEN, 2001). O co pode apresentar sinais tipicamente associados com a hepatopatia (especficos) como ictercia, ascite, encefalopatia heptica e sangramento excessivo, ou sinais inespecficos como perda de peso, anorexia e depresso (JOHNSON, 1997). O fgado o principal rgo hematopoitico e de grande importncia na vida intrauterina (ROTHUIZEN, 2001). No adulto, o fgado modula indiretamente a hematopoiese por participar da destruio de eritrcitos e pode contribuir com at 15% do total da eritropoietina circulante (BORGES-OSRIO; ROBINSON, 2001). As alteraes hematolgicas associadas doena heptica incluem a ocorrncia de anemia regenerativa leve a moderada, devido perda sangunea secundria ulcerao gastrointestinal e/ou coagulopatia, ou mais comumente uma anemia arregenerativa (normoctica normocrmica) associada anemia da doena crnica (JOHNSON, 1997; JOHNSON; SHERDING, 1998), morfologia anormal dos eritrcitos, reduo numrica ou funcional das plaquetas e deteco de plasma ictrico ou lipmico (CENTER, 1992). A deficincia de ferro geralmente no se encontra tipicamente presente em doenas hepticas (JOHNSON, 1997; JOHNSON; SHERDING, 1998; HESS; BUNCH, 2000; NELSON; TURNWALD; WILLARD, 1994).

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Na doena hepatobiliar observa-se, alm da reduo do nmero e funo das plaquetas, a deteco de ictercia ou lipemia (CENTER, 1992). Poucas alteraes so observadas no leucograma de ces com doena hepatobiliar, exceto quando um agente infeccioso est presente como evento desencadeante ou quando a infeco complicou um distrbio hepatobiliar, causando uma leucocitose por neutrofilia (NELSON; COUTO, 2006). Avaliar um paciente com suspeita de doena hepatobiliar raramente um processo simples porque no existe um nico teste diagnstico que possua sensibilidade e especificidade perfeitas (HESS; BUNCH, 2000). O diagnstico de doena heptica muitas vezes s confirmado pelo exame histopatolgico, que tambm til na diferenciao entre doena heptica aguda e crnica (JOHNSON, 1997). Os testes para diagnstico de doena heptica ou de insuficincia heptica incluem a determinao da atividade srica de enzimas que indicam leso dos hepatcitos ou colestase e a realizao de testes como bilirrubina srica total e direta, protenas totais, albumina e tempo de protrombina que avaliam a funo heptica (THRALL, 2007). As aminotransferases (transaminases) so enzimas intracelulares que se encontram praticamente em todos os tecidos. A mais importante enzima srica mensurada rotineiramente e que reflete a integridade funcional dos hepatcitos a transaminase glutmica-pirvica (GPT) ou alanina aminotransferase (ALT) que encontrada exclusivamente no citoplasma dos hepatcitos e aumenta em quase 90% dos ces com hepatopatia (ROTHUIZEN, 2001; WATSON, 2004). Hipxia, alteraes metablicas com acmulo de lipdeos nos hepatcitos, toxinas, inflamao, neoplasia heptica, vrios medicamentos e substncias qumicas podem causar leso de hepatcitos e conseqente extravasamento de ALT que tambm pode aumentar durante a regenerao ativa de hepatcitos (STOCKHAM; SCOTT, 2002). Em ces, a meia-vida da ALT no est bem definida; estimativas indicam variao de algumas horas (THRALL, 2007) a trs dias (STOCKHAM; SCOTT, 2002). A transaminase glutmica-oxaloactica (GOT) ou aspartato aminotransferase (AST) est presente no citoplasma dos hepatcitos e nas membranas das mitocndrias e no hepatoespecfica (CORBELLO-PEREIRA et al., 2004). O aumento de sua atividade no soro pode ser causado por necrose e leso sub-letal de hepatcitos e de clulas musculares (TENNANT, 1997). A isoenzima fosfatase alcalina (FA) encontrada em altas concentraes em muitos tecidos incluindo o fgado, osso (osteoblastos), intestinos, rins, leuccitos e placenta (TENNANT, 1997; ROTHUIZEN, 2001). No fgado a FA predominantemente encontrada no trato biliar e, por isso, um marcador para a disfuno biliar (CORBELO-PEREIRA et al., 2004). A atividade srica da FA pode estar elevada tanto na doena heptica aguda ou crnica, mas elevaes marcantes so indicativas de colestase, e altssima concentrao plasmtica observada em animais com colangite, cirrose biliar ou obstruo extra-heptica do ducto biliar (TENNANT, 1997). A -glutamiltransferase (GGT) se localiza no epitlio dos ductos biliares (ROTHUIZEN, 2001). Os eritrcitos e o msculo esqueltico virtualmente no possuem GGT, porm uma atividade significativa est presente no crtex renal, e em menor quantidade no pncreas e mucosa intestinal. Em determinadas espcies, a atividade srica da GGT est correlacionada diretamente com a atividade srica da FA na leso heptica colesttica. Porm, a GGT no est aumentada to notadamente quanto a FA na necrose heptica (TENNANT, 1997). Em ces, a GGT no parece ser um indicador mais sensvel de colestase do que a FA, (ENGELKING; ANWER, 1992; STEVEN; SCOTT, 2002). A GGT permite a discriminao da origem da elevao da FA; assim, se a FA estiver elevada e houver um aumento correspondente de GGT, a origem deve ser o trato biliar (ROTHUIZEN, 2001).

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O fgado o local exclusivo ou principal para a sntese da maioria das protenas plasmticas (90% de todas as protenas e 100% da albumina), sendo tambm o local de degradao ou regulao para muitas outras; por isso, uma destruio extensa do tecido heptico resulta em nvel srico baixo de protena total e albumina, que so essenciais para a avaliao da funo heptica (TENNANT, 1997).

2.6.4. Anemia de doena crnica O termo anemia de doena crnica (ADC) foi proposto por Cartwrigt em 1966, aps vrios anos estudando o binmio infeco e anemia. Outras denominaes foram propostas: anemia hipoferrmica com siderose reticulo-endotelial, anemia por defeito de reutilizao do ferro, anemia da inflamao e anemia citocina-mediada. Embora esta ltima designao seja a mais correta, no costuma ser utilizada na prtica clnica (SHILLING, 1991). A ADC uma sndrome que se caracteriza pelo desenvolvimento de anemia normoctica normocrmica, leve a moderada em pacientes que apresentam doenas infecciosas crnicas, inflamatrias ou neoplsicas (HANSEN, 1983; LEE, 1983; DENZ, 1992; WEISS, 2000). Por definio, no fazem parte dessa sndrome as deficincias de ferro, folato e/ou vitamina B12 e outras causas de anemia como perda sangnea, hemlise, exposio a drogas e/ou toxinas e doena renal, endcrina e heptica, embora essas causas possam coexistir no mesmo paciente (SPIVAK, 2000). A observao de que a infeco estava associada com hipoferremia (LOCKE et al., 1932) possibilitou uma explicao parcial para a anemia presente em pacientes com infeces crnicas. Em 1952, Cartwright e Wintrobe demonstraram que a anemia associada com infeces era indistinguvel da anemia de inflamao, e sugeriram que a hipoferremia seria o resultado do seqestro de ferro pelo sistema reticulo endotelial e da interrupo da absoro do ferro intestinal. Observaes semelhantes foram encontradas em ratos submetidos exposio a endotoxinas bacterianas (CARTWRIGHT; LEE, 1971). Atualmente sabido que a ADC tem sua fisiopatognese associada a dois fatores principais: alteraes na proliferao e diferenciao da srie eritride e distrbios no metabolismo do ferro resultando em um dficit na sntese de hemoglobina. Assim, a ADC passou a ser definida como uma anemia hipoproliferativa caracterizada por hipoferremia e reduo da capacidade total de ligao do ferro, na presena de estoques adequados de ferro no organismo (MEANS, 2003). O mecanismo desta anemia dependente de citoquinas, em especial a IL-I, o fator de necrose tumoral-alfa (TNF ) e o gama-interferon (-INF). Os dois primeiros so produzidos por macrfagos ativados, enquanto que o ltimo liberado por linfcitos T. Estas citoquinas agem em conjunto, potencializando-se e levando aos principais mecanismos patolgicos envolvidos na ADC: (1) reduo da vida mdia da hemcia, provavelmente devido ao dos macrfagos esplnicos ativados na inflamao; (2) falha da medula ssea em aumentar a produo de glbulos vermelhos para compensar o aumento da sua demanda; (3) reduo da produo renal de eritropoietina e menor resposta dos precursores eritrides eritropoietina; (4) distrbio do metabolismo do ferro, no qual este metal fica retido nos depsitos do sistema mononuclear fagocitrio (WEISS, 2000). De 20 a 50% dos pacientes com ADC tm diminuio do Volume Corpuscular Mdio das hemcias (VCM), sendo freqentemente confundida com anemia ferropriva (AF). A concentrao de ferritina conhecida como o melhor indicador bioqumico do estoque de ferro medular. Porm, como uma protena de fase aguda, encontra-se alterada em processos

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inflamatrios, no sendo um bom indicador da deficincia de ferro em pacientes com cncer e doenas inflamatrias (GUPTA, 2003). A diferenciao entre anemia ferropriva (AF) e ADC e a forma combinada AF/ADC tm sido alvo de diversos estudos. Vrios indicadores bioqumicos e ndices hematolgicos tm sido propostos como teis nessa diferenciao. Alm dos dados clnicos, os parmetros laboratoriais utilizados para o diagnstico da ADC e diagnstico diferencial com outras causas de anemia so: hemograma, morfologia eritrocitria, contagem de reticulcitos, ferro srico, ndice de saturao da transferrina, ferritina srica, receptor da transferrina e anlise do ferro medular (MEANS, 1999). Os estoques de ferro na medula ssea esto adequados ou levemente aumentados, a capacidade de ligao do ferro transferrina e o ferro srico esto reduzidos e os nveis de ferritina esto normais ou elevados (BRON et al, 2001). Entretanto, como a ferritina uma protena de fase aguda, pacientes com doena inflamatria ou neoplsica podem apresentar valores normais ou elevados (BIRGEGARD, 1978). As hemcias so normocticas e normocrmicas, embora em 20 a 50% dos casos sejam microcticas e hipocrmicas. Quando h microcitose, esta no costuma ser to intensa quanto a observada no paciente com anemia ferropriva (MEANS, 1992, 1999). Na extenso do sangue perifrico, pode-se observar anisocitose e poiquilocitose discretas, alteraes estas menos evidentes do que as encontradas na anemia ferropriva. A contagem de reticulcitos normal ou pouco elevada, ou inadequadamente aumentada em relao ao grau de anemia (MEANS, 1992). Outras alteraes bioqumicas podem estar presentes no paciente com ADC. Freqentemente observa-se um aumento de protenas de fase aguda, tais como a protena C reativa (PCR), fibrinognio e alfa 1 antitripsina (LUDWIG; FRITZ, 1998). Observa-se tambm uma diminuio da haptoglobina, aumento da velocidade de hemossedimentao, aumento do cobre srico, diminuio da albumina e aumento da ceruloplasmina. A concentrao srica das citocinas: IL-1, IL-6, TNF-alfa e INF- gama encontra-se aumentada, e eritropoetina est normal ou pouco aumentada (CARTWRIGHT,1966; MORLEY; KUSHNER, 1982). Alteraes desses parmetros tm relao direta com a fase aguda da doena de base e podem ser utilizados para monitorar o curso clnico da doena e a eficcia do tratamento institudo (FUCHS, 1991).

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3 MATERIAIS E MTODOS De acordo com as diretrizes do Comit de tica da UFRRJ, um consentimento livre e esclarecido foi assinado pelos proprietrios e as coletas de sangue foram permitidas pelos mesmos, antes do incio do estudo (Apndice 01). 3.1. Local e Animais O estudo, conduzido em duas etapas, foi efetuado com ces procedentes do atendimento ambulatorial de uma Clnica Veterinria (n=105) no municpio de Queimados, Rio de Janeiro e do Canil de Quimioterapia Experimental (n=45) do Departamento de Parasitologia Animal (DPA) / Instituto de Veterinria (IV) da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ), entre fevereiro e dezembro de 2009. Os hemogramas foram realizados em contador eletrnico 1 no Laboratrio de Quimioterapia Experimental em Parasitologia Veterinria (LQEPV) do IV/ DPA da UFRRJ. Os testes bioqumicos foram realizados no Laboratrio de Pesquisas Clnicas do IV/UFRRJ, em espectrofotmetro utilizando-se kits comerciais2 segundo especificao do fabricante. As amostras foram analisadas em duplica, utilizando-se as mdias de cada parmetro avaliado. As determinaes das concentraes sricas de cobre e ferro sricos foram efetuadas por espectrometria de absoro atmica, no campus da UFRRJ em Campos dos Goitacazes, Norte do Estado do Rio de Janeiro. 3.2. Etapa 1: Valores Sricos de Ferro e Cobre e Perfil Hematolgico de Ces em Diferentes Condies Clnicas e de Manejo 3.2.1. Animais e amostragem Inicialmente foram coletadas amostras de sangue de 105 ces adultos (Grupo 1), machos e fmeas, sem raa definida (SRD) de portes mdio e grande, em diferentes condies clnicas, atendidos em uma Clnica Veterinria particular no municpio de Queimados, Estado do Rio de Janeiro. As amostras foram obtidas segundo a seqncia de atendimentos, independente da queixa clnica e sinais de enfermidades, nos meses de fevereiro e maro de 2009. Animais com indicao cirrgica, filhotes e adultos de raas pequenas no foram submetidos ao procedimento de coleta, no primeiro caso pela condio de emergncia, e no segundo pela necessidade de um volume de sangue (10 mL) no compatvel com o peso do animal. Aps consentimento dos proprietrios e assinatura de um termo de consentimento livre e esclarecido, foi efetuada a anamnese e o exame fsico, seguindo um protocolo prestabelecido. Informaes relativas ao sexo, raa, idade, manejos nutricional e sanitrio, enfermidades recentes, condio corporal, manifestaes de enfermidades parasitrias, infecciosas, metablicas e/ou nutricionais, bem como o motivo da consulta de cada animal foram anotadas em fichas individuais (Apndice 02). Paralelamente foram colhidas amostras de sangue de 45 ces adultos, machos e fmeas no castrados da raa Beagle (Grupo 2), sem evidncias de enfermidades, acautelados no Canil de Quimioterapia Experimental do DPA / IV / UFRRJ.

1 2

SYSMEX Modelo POCH 100 IV Diff Labtest Bioclin

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Estes animais foram mantidos em canil constitudo de baias coletivas de alvenaria durante a noite e com acesso livre a uma rea gramada durante o dia (Figuras 01 e 02). Animais em experimentao eram mantidos em gaiolas individuais de metal, alocadas dentro da rea de experimentao (Figuras 03 e 04). A higiene do ambiente consistiu de retirada manual das fezes diariamente na rea gramada e limpeza com gua e sabo no ambiente interno e gaiolas, tambm diariamente. Os canis foram estruturados com bebedouros e comedouros automticos (Figura 02) abastecidos com rao3 slida (Figura 05) de forma a permitir acesso irrestrito gua e rao a todos os animais, durante todo tempo. Todos os animais foram vacinados4 quando filhotes e revacinados anualmente. Segundo informaes, pela condio do canil, os animais sofriam freqentes infestaes por Ancylostoma sp , sendo vermifugados em intervalos aproximados de dois meses, e tambm sofriam altas infestaes por carrapatos, os quais foram controlados mecanicamente (escovao) e pela aplicao de produtos diversos, em intervalos variveis. Tambm foi informada a ocorrncia de sintomas de erliquiose em animais de diferentes idades, os quais eram avaliados atravs de hemograma e pesquisa de estruturas compatveis com Ehrlichia canis e/ou Anaplasma platys em esfregaos de sangue perifrico, sendo medicados assim que se confirmava a suspeita clnica. No intervalo das coletas, sete animais positivos para Ehrlichia canis ao esfregao foram tratados com Doxacilina5. Em intervalos variveis os animais foram submetidos a diferentes testes para avaliao da eficcia de drogas antiparasitrias no informadas. 3.2.2. Amostras de sangue Amostras pareadas, de 5 mL de sangue foram obtidas por puno da veia ceflica, em frascos vcuo com anticoagulante (Etilenodiaminotetracetato de sdio 1mg/mL de sangue)6 e em frascos sem anticoagulante. O sangue com EDTA foi utilizado para determinao do volume globular (VG), concentrao de hemoglobina (Hb), contagem de hemcias ou hematimetria (He) e leucometria global (LG) em contador eletrnico7 (Figuras 06 e 07). Os ndices hematimtricos (volume corpuscular mdio - VCM e concentrao de hemoglobina corpuscular mdia CHCM) foram calculados a partir do VG, da Hb e He, pelo prprio aparelho. A leucometria especfica foi obtida em contador eletrnico e reavaliada individualmente atravs de extenso do sangue total em superfcie de lmina, corada por soluo pancrmica8 e analisada em microscopia ptica com objetiva de imerso, segundo Jain (1993). Para resultados divergentes quanto leucometria especfica, considerou-se aquela obtida atravs da microscopia ptica. As amostras colhidas sem anticoagulante, aps coagulao, foram mantidas em banhomaria a 37C por 20 minutos, sendo em seguida centrifugadas a 3.000 rpm para obteno do soro, que foi armazenado em alquotas de 1,0 mL a 80 C negativos. No momento do uso, as alquotas de soro foram descongeladas em temperatura ambiente e analisadas para deteco dos valores sricos de ferro, cobre e Zinco, por espectrometria de absoro atmica segundo Urbano et al. (2002).

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Classe Premium Especial - DuBom Alimentos Duramune Max 5CvK/4L e Rai-Vac I, Fort Dodge 5 Doxitec - Syntec 6 EDTA VACUETTE 7 SYSMEX Modelo POCH 100 IV Diff 8 Panptico Rpido

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Como provas adicionais foram dosadas as protenas plasmticas totais (PPT) por refratometria e a contagem de plaquetas em equipamento eletrnico 5.

Figura 01: Viso geral do Canil de Quimioterapia Experimental (CQE) do Departamento de Parasitologia Animal do IV/UFRRJ.

Figura 02: Baia coletiva e animais em rea gramada com acesso livre e irrestrito gua e rao durante o dia, fornecidos em comedouros e bebedouros automticos no Canil de Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Animal do IV/UFRRJ.

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Figura 03: Co da raa Beagle em experimentao alojado em gaiola individual no Canil de Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Animal do IV/UFRRJ.

Figura 04: Enfermaria em rea de experimentao do Canil de Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Animal do

IV/UFRRJ.

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Figura 05: Rao seca industrializada para ces adultos e filhotes, sacos de 15 kg, fornecida aos animais do Canil de Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Animal. IV/UFRRJ.

Figura 06: Aparelhos eletrnicos para realizao dos hemogramas (01) e Bioqumica do Laboratrio de Quimioterapia Experimental em Parasitologia Veterinria do Canil de Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Animal.

IV/UFRRJ. 21

3.2.3. Avaliao dos resultados Os valores individuais de VG, He e Hb foram analisados para identificao da presena de anemia, comparados com valores de referncia para a espcie (Apndice 03) e analisados pelo Teste T, para comparao entre ces sem raa definida (SRD) e Beagles. O mesmo procedimento de comparao foi realizado para a leucometria global e a especfica. 3.3. Etapa 2: Pesquisa Clnica e Etiolgica da Anemia em Ces da Raa Beagle Na segunda etapa os estudos foram focados em 43 dos 45 Beagles avaliados inicialmente. Dois no foram avaliados: uma fmea em puerprio por ser o nico animal nessa condio e outra que havia morrido (causa no determinada) no intervalo das coletas. Todos os demais foram avaliados individualmente, atravs de exame fsico detalhado e os dados anotados em formulrios individuais (Apndice 02). Novas coletas de sangue foram efetuadas cerca de quatro meses aps a primeira e alquotas de sangue e soro foram utilizadas, respectivamente, para determinao do perfil hematolgico atravs de hemograma e avaliao de parmetros da funo heptica, renal e mineral. 3.3.1. Amostras de sangue para hemograma e soro Amostras pareadas de sangue foram obtidas por puno da veia ceflica em frascos a vcuo com anticoagulante (Etilenodiaminotetracetato de sdio 1mg/mL de sangue) e em frascos siliconizados sem anticoagulante. O sangue com EDTA foi utilizado para realizao do hemograma, conforme descrito acima, e a leucometria especfica e a determinao do nmero de plaquetas foram obtidas em contador eletrnico no LQEPV. Amostras colhidas em frascos sem EDTA, aps coagulao foram mantidas em banho-maria a 37 C por 20 minutos, e em seguida centrifugadas a 3.000 rpm para obteno do soro que foi armazenado em alquotas de 1,0 mL a 80 C negativos. 3.3.2. Provas complementares ao hemograma Como provas complementares ao hemograma foram realizadas a pesquisa de hematozorios e corpsculos de incluso de Lentz em extenso sangnea de capa leucocitria (WOODY; HOSKINS, 1991). Do plasma obtido por centrifugao foram determinadas as concentraes de protenas plasmticas totais (PPT) por refratometria (COLES, 1993). Ao ser detectada a presena de anemia, realizou-se contagem de reticulcitos atravs de esfregao sangneo em superfcie de lmina e corado com azul cresil brilhante (COLES, 1993) expressos em porcentagem e valor absoluto em funo do nmero de eritrcitos (% de reticulcitos x hematcrito do paciente / hematcrito normal). 3.3.3. Perfis mineral, heptico e renal Alquotas de soro conservadas em freezer a 80 C negativos foram descongeladas em temperatura ambiente e analisadas em espectrofotmetro digital semi-automtico 9, utilizando-

Espectrofotmetro Bioplus, Bio-2000 ILA

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se kits comerciais10, segundo especificao do fabricante. As amostras foram analisadas em duplica utilizando-se as mdias de cada parmetro para os animais individualmente. 3.3.4. Metabolismo do ferro As amostras de soro foram analisadas quanto concentrao de ferro, atravs de kit colorimtrico11 no qual o ferro liberado da transferrina em meio cido e reduzido ao seu estado ferroso por ao da hidroxilamina; posteriormente, reage com o ferrozine, levando formao de um complexo de cor violcea analisada em espectrofotmetro (leitura em 560 nm) e a concentrao final expressa em g/dL. Para determinar a capacidade total de ligao do ferro (CTLF)12 molcula da transferrina, o soro em teste foi incubado com um padro de ferro que promove a saturao dos stios disponveis da transferrina e o excesso de Ferro (no ligado) foi dosado atravs do complexo corado com ferrozine, com leitura em espectrofotmetro em 540 nm e o resultado expresso em g/dL. 3.3.5. Perfil renal Em amostras de soro armazenadas a 80C negativos, descongeladas e temperatura ambiente foram determinadas as concentraes de uria por mtodo enzimtico colorimtrico13 e creatinina atravs de kit colorimtrico14 segundo instrues do fabricante. 3.3.6. Perfil heptico Para avaliar a funo heptica determinou-se os valores sricos das enzimas ALT (UI/L), AST (UI/L) e FA (UI/L), atravs de kits comerciais, segundo instrues do fabricante. A ALT e a AST foram dosadas com kits colorimtricos15, por espectrofotometria e leitura com comprimento de onda de 505 nm. A FA foi analisada com kit colorimtrico 16 e leitura em espectrofotmetro em comprimento de onda 590 nm. 3.3.7. Perfil mineral As concentraes sricas dos minerais clcio, fsforo e magnsio foram determinadas por espectrofotometria, atravs de kits colorimtricos17 comerciais. 3.3.8. Avaliao dos resultados Os valores individuais dos parmetros do hemograma, indicadores enzimticos e minerais nessa etapa foram comparados com valores de referncia para a espcie e apresentados percentualmente por no haverem categorias distintas para avaliar estatisticamente.

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Labtest e Bioclin Ferro Srico Bioclin K070 12 Capacidade ligadora do ferro Bioclin K09 13 Uria Bioclin K047 14 Creatinina Bioclin K016 15 Transaminase TGP Bioclin colorimtrica K035; Transaminases TGO Bioclin Colorimtrica K 034 16 Fosfatase Alcalina Bioclin K 019 17 Clcio Bioclin K007 , Fsforo Bioclin K020, Magnsio Bioclin K027.

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4 RESULTADOS E DISCUSSO 4.1. Etapa 1: Valores Sricos de Ferro e Cobre e Perfil Hematolgico de Ces em Diferentes Condies Clnicas e de Manejo 4.1.1. Hematologia Os valores mdios e a amplitude de variao (mximo e mnimo) dos parmetros hematolgicos VG, He, Hb,VCM, CHCM, plaquetas e leucometria global e especfica de 150 ces, em relao aos valores de referncia, esto representados na Tabela 01. Os ces SRD apresentaram todos os parmetros hematolgicos mais elevados que os Beagles, com diferena significativa a 99% de confiana (p 0,01) para hematimetria, hemoglobinometria, VG, plaquetas e CHCM. A diferena do VG e leucometria global entre machos e fmeas da raa Beagle foi significativa a 95% de confiana (p=0,0271). Os parmetros VG, hemcias, Hb, VCM, CHCM, plaquetas e leucometria global observados para os Beagles, foram inferiores aos fisiolgicos descritos para a raa (SILVA et al., 2001; SACCARO, 2007) e espcie (THRALL, 2007; NELSON, COUTO 2006). As fmeas SRD apresentaram os constituintes do eritrograma mais elevados que os machos, exceto CHCM, plaquetometria e leucometria global, que foram mais altos nos machos. Por outro lado os machos da raa Beagle apresentaram VG, hemoglobina e contagens de hemcias e leuccitos totais mais elevados que as fmeas. Os ndices hematimtricos VCM, CHCM e as plaquetas foram mais elevados nas fmeas. Na mdia a contagem de plaquetas dos Beagles machos (178.000) foi menor entre os animais avaliados e ficou abaixo da normalidade (200.000) para a espcie (JAIN, 1993).

Tabela 01 : Mdias e amplitude de variao (mximo e mnimo) dos parmetros hematolgicos de 150 ces adultos, machos e fmeas, de diferentes raas, em relao aos valores de referncia (THRALL, 2007; NELSON, COUTO 2006). PARMETROS Volume globular (%) Hemcias (x 106 / L) Hemoglobina (g/dL) VCM (fL) CHCM (%) Plaquetas (x 103/L) Leuccitos (x10 3 /L) Bastes (/ L) Segmentados (/L) Linfcitos (/L) Moncitos (/L) Eosinfilos (/L) Basfilos (/L) MDIA 38,29 5,96 12,60 64,26 32,89 269,4 13,87 101 8328 3423 658 873 121 MNIMO 19 3,0 6,1 56 31,4 20,0 5,5 0 1891 164 67 0 0 MXIMO 51,9 7,8 17,5 74 35,4 721,0 40,2 1170 28842 11245 2357 3324 226 REFERNCIA 37 - 55 5,5 8,5 12 18 60-77 31-36 200.000 - 500.000 6.000 17.000 0 300 3000 11.500 1.000 4.800 150 1.350 100 1250 Raros

Na mdia, incluindo animais de ambos os sexos, de todas as raas, idades e em diferentes condies clnicas, todos os parmetros hematolgicos foram normais para a espcie (THRALL, 2007; NELSON; COUTO, 2006). 24

Considerando os animais sem raa definida (SRD) e Beagles que representaram, respectivamente 70% e 30% do total de animais avaliados, houve uma grande variao nos diferentes parmetros (Tabela 02), sobretudo do eritrograma entre machos e fmeas e entre grupos de animais estudados (SRD e Beagles).

Tabela 02 : Mdia dos valores hematolgicos de 105 ces sem raa definida (SRD) e 45 Beagles, segundo o sexo e resultado da anlise estatstica entre raas e sexos. PARMETROS Volume globular ( %) Hemcias (x 106 / L) Hemoglobina (g/dL) VCM Fl CHCM (%) Plaquetas (x 10 3/L) Leuccitos (x102/L) Bastes (/ L) Sgmentados (/L) Linfcitos (/L) Moncitos (/L) Eosinfilos (/L) Basfilos (/L) SRD Machos Fmeas 39,4 * 43,13b* 6,2 6,7b 13,1 14,17b 63,52 64,75a 33,2 32,9a 328 284b 14,2a* 13,46b* 1,8 1,7a 52,2 54,5a 28 24,5a 9,6 9,4a 8,9 9,3a 0,2 a 0,1a Beagle Fmeas 30,91c 4,76d 10,10c 64,89 32,62b 234d 12,99b 4,1b 56,9b 22,2b 10,5 5,8b 0,1

Machos 31,6c 4,97c 10,30c 63,67 32,48b 178c 13,90b 5,2b 52,3 21,1b 8,6ab 9,75 0,3

Letras diferentes na mesma linha indicam diferena significativa a 99% de confiana pelo Test T. * Diferena significativa a 95% de confiana.

4.1.2. Freqncia e formas de anemia A diminuio dos parmetros do eritrograma indica anemia (LATIMER; MEYER, 1992). Assim, o nmero de animais com anemia foi surpreendentemente elevado, sobretudo entre os Beagles onde 95,5% dos animais apresentaram VG, hematimetria e/ou hemoglobina abaixo dos ndices de normalidade para a espcie (THRALL, 2007; NELSON, COUTO 2006) e raa (SILVA et al., 2001; SACCARO, 2007). Os mesmos parmetros foram normais para a maioria (88/105 83,8%) dos ces SRD. Valores baixos de VG, hematimetria e/ou hemoglobina foram observados em 17 ces SRD caracterizando um quadro de anemia em 16,2% desses animais. Todos os 43 Beagles considerados anmicos (95,5%) apresentaram anemia do tipo normoctica normocrmica (ANN), que tambm foi observada em 70,5% (12/17) dos ces SRD com anemia (Tabela 03). Anemia macroctica hipocrmica e microctica hipocrmica foram identificadas respectivamente, em um e cinco ces SRD. Embora sejam freqentes os estudos do perfil hematolgico em ces com doenas infecciosas, parasitrias e inflamatrias crnicas no foi possvel obter na literatura dados de anemia em ces assintomticos, no havendo, portanto dados para comparar. Os dados relativos aos ces SRD confirmam os achados de Mendona et al. (2000) e Albernaz et al. (2007) cujos ndices de ANN entre ces com anemia estudados foram 70,3% e 60,73%, respectivamente.

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Tabela 03: Porcentagem de ces da raa Beagle e sem raa definida (SRD) com valores hematolgicos diminudos, aumentados ou normais em relao aos limites fisiolgicos descritos para espcie e raa. PARMETROS Hematimetria Hemoglobinometria Hematcrito Plaquetas Leucometria global Bastes Segmentados Linfcitos Moncitos Eosinfilos Basfilos DIMINUDOS Beagle SRD 86,4 14,3 93,2 13,3 95,5 16,2 40,9 13,3 2,3 0 0 0 59,1 67 20,5 9,1 2,3 3,4 15,9 11,4 0 0 AUMENTADOS Beagle SRD 0 0 0 0 0 0 0 0 22,7 13,3 27,3 11,4 4,5 2,3 20,5 38,6 38,5 42 36,4 31,8 0 0 NORMAIS Beagle SRD 13,6 85,7 6,8 86,7 4,5 83,8 59,1 77,1 75 86,7 72,7 88,6 36,4 30,7 59,1 52,3 59,1 54,5 47,7 56,8 100 100

Para os Beagles os casos de anemia, e tambm os casos de ANN foram muito elevados (Tabela 03) e os valores mdios dos constituintes do eritrograma foram muito inferiores aos fisiolgicos descritos para a raa (SILVA et al., 2001; SACCARO, 2007). Vinte e dois Beagles (48,9%) apresentaram contagens de plaquetas menores que 200.000, portanto, abaixo do limite mnimo da normalidade para a espcie. Trombocitopenia foi observada em 20 animais com anemia normoctica normocrmica (ANN), e em dois no anmicos. ANN e contagens baixas de plaquetas sugerem erliquiose (HARRUS et al., 1998) e outras infeces virais como cinomose (FELDMAN; ZINKL; JAIN, 2000). Embora assintomticos a possibilidade de erliquiose crnica no pode ser descartada, visto que a principal caracterstica desta fase a hipoplasia de medula ssea resultando em anemia arregenerativa, assim como monocitose, linfocitose e leucopenia (TROY; FORRESTER, 1990; ANDEREG; PASSOS, 1999; STILES, 2000). No entanto, embora mesmo com aspectos clnicos e sorolgicos tpicos de erliquiose, aproximadamente um tero dos ces no apresentam trombocitopenia. Alm disso, a reduo do nmero de plaquetas circulantes pode decorrer de muitas causas, incluindo erros na amostragem e na colheita de sangue e no transporte das amostras (ALMOSNY, 2006). Dessa forma a trombocitopenia no pode ser considerada um achado patognomnico de Erliquiose, mas segundo Bulla et al. (2004), dever ser includa habitualmente como diagnstico diferencial em uma rea endmica. 4.1.3. Leucometria global e especfica No leucograma (leucometria global e especfica) no foram observadas diferenas marcantes entre os ces SRD e Beagles. A leucometria global, considerando a mdia da populao estudada ficou dentro dos limites estabelecidos para a espcie e no houve diferena significativa (p=0,1756) entre animais SRD (13.765) e Beagles (13.493). A contagem total de leuccitos foi mais elevada entre os machos, com mdias aproximadamente iguais para ces SRD (14.200) e Beagles (13.900) e mais baixas entre fmeas da raa Beagle (12.990), com diferena significativa entre fmeas e machos (Tabela 03). 26

4.1.4. Ferro e cobre sricos Considerando a possibilidade de uma deficincia primria ou secundria de ferro e/ou cobre como causas provveis de anemia (VAL BICALHO; CARNEIRO, 2008) determinouse os valores sricos desses minerais. Os valores mdios de ferro e cobre foram normais em animais SRD e Beagles. O cobre foi mais elevado, com diferena significativa (p=2,121E-05) entre os ces SRD (0,57) comparativamente aos Beagles (0,48) (Tabela 04), mas ambos prximos da mdia (0,50) obtida por Thornburg (2000) em ces sadios e no anmicos. Dois estudos realizados com ces evidenciaram a concentrao srica de cobre mais elevada em ces com alteraes neoplsicas comparativamente a animais normais (BRODZKI, 2007) e valores mais baixos em ces com leses dermatolgicas (KAYMAZ et al., 2002) em comparao ao grupo controle. Em ambos os estudos as variaes sricas do cobre foram prximas das obtidas nesse estudo. Valores inferiores a 0,4 mg/mL ocorreram em seis Beagles em um SRD com anemia, e cinco SRD com os parmetros eritrocitrios normais. Assim, a deficincia de cobre ou a hipocupremia no so provavelmente as causas de anemia entre os animais avaliados. As mdias do ferro ficaram dentro dos limites descritos para a espcie (KANEKO et al., 1997) e prximos aos valores obtidos por Coelho et al. (2006) em estudo com ces da raa Dobermann adultos jovens e em fase de crescimento (115,78 36,65 g/dL), sem sinais de enfermidade, procedentes de um canil de Uberlndia-MG. Assim, os valores obtidos foram considerados normais para a maioria dos animais (66,6%), porm diferentemente do que se observou para o cobre (Tabela 04), os ces SRD apresentaram concentraes mdias de ferro srico mais baixas (95,44) do que os Beagles (143,48), com diferena significativa (p=0,00713), mas dentro dos parmetros normais de referncia. A CTLF (248,89 64,85 g/dL) tambm foi normal em mdia e para a maioria dos animais de ambos os grupos, e dentro dos limites encontrados por Coelho et al. (2006) indicando estoques adequados de ferro em ces SRD e Beagles. Pela importncia do cobre e do ferro na sntese do grupamento heme (VAL BICALHO; CARNEIRO, 2008) as concentraes de hemoglobina foram baixas para os animais de ambos os grupos (SRD e Beagles), sugerindo uma ineficincia na utilizao do ferro para hematopoese. Valores normais ou ligeiramente diminudos de ferro e cobre permitem considerar a ausncia do efeito da deficincia nutricional desses elementos sobre os ndices de anemia e indicam que outras causas devem ser pesquisadas.

Tabela 04: Mdia dos valores sricos de ferro, cobre e capacidade total de ligao do ferro (CTLF) em 150 ces machos e fmeas, de diferentes raas, idades e sob manejos nutricional e sanitrio distintos, determinados atravs de espectrometria de absoro atmica, em relao aos valores de referncia (KANEKO et al., 1997; COELHO et al., 2006) e valores mdios individuais obtidos para os Beagles e animais sem raa definida (SRD). Parmetros Ferro Cobre CTLF Mdia 110 0,6 310,8 Aumentados 34 20 12 Diminudos 16 10 36 Beagle 143,48a 0,48a 308,5a SRD 95,44 b 0,57 b 306,0 a Referncia 33-147 g/dL 0,4-0,6 g/dL 282-386 g/dL

Letras diferentes na mesma linha indicam diferena significativa a 99% de confiana pelo Teste T.

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A anemia ferropriva causada pelas reservas de ferro do organismo, inadequadas s necessidades da eritropoese normal tipicamente microctica hipocrmica, mas eventualmente, no incio pode ser normoctica normocrmica (VAL BICALHO; CARNEIRO, 2008), devendo ser investigada em exames subseqentes, sobretudo entre os Beagles cujos ndices de ANN foram elevados. 4.1.5. Provveis fatores etiolgicos da anemia Anemia caracterizada por nveis reduzidos, de hemoglobina ou contagem de hemcias no sangue, abaixo dos valores definidos como normais para indivduos saudveis, da mesma espcie, raa, sexo, idade e condies ambientais similares (NELSON; COUTO, 2006). Assim, embora os animais avaliados sejam da mesma espcie, os seguintes fatores podem ter influenciado os parmetros hematolgicos: sexo, idade, gestao, lactao, nutrio e doenas intercorrentes (COLES, 1993). No foi possvel avaliar a correlao dos casos de anemia com a ocorrncia de enfermidades, uma vez que os ces SRD em sua maioria foram atendidos no consultrio para vacinao, vermifugao e tratamento de enfermidades diversas, enquanto que os Beagles foram includos neste estudo por conviverem em um ambiente aparentemente mais controlado, com dieta de melhor qualidade e sem enfermidades diagnosticadas clinicamente. Embora a diversidade de manejo e condies clnicas dos ces SRD apontasse para a possibilidade de valores hematolgicos mais baixos, os Beagles que eram assintomticos para doenas infecciosas e parasitrias apresentaram grande incidncia de valores hematolgicos subnormais, enquanto entre os ces SRD os fatores individuais, condies clnicas e manejos diversificados resultaram em valores hematolgicos mais elevados e menor nmero de animais com anemia. A histria e o exame clnico so essenciais para a interpretao dos dados hematolgicos, e outros testes laboratoriais podem ser necessrios para complementar a investigao. As causas de anemia so diversas e variam de acordo com a espcie (GRAA, 2005). Assim, alerta-se para a necessidade de estudos clnicos e laboratoriais mais detalhados para determinao das causas da anemia. Pela avaliao clnica (animais assintomticos) e achados hematolgicos no foi possvel concluir por nenhuma enfermidade como causa de anemia entre os animais avaliados. A produo deficiente de hemcias, a destruio excessiva e a perda sangunea, so os trs mecanismos bsicos responsveis pelo aparecimento das anemias (LORENZI, 2003) e devem direcionar a identificao do agente causal, sobretudo entre os Beagles. 4.1.6. Pesquisa de hematozorios Na prtica clnica os achados laboratoriais de anemia no regenerativa e trombocitopenia remetem aos quadros de eriliquiose. Embora os animais no manifestassem sinais caractersticos da doena, a infeco por Ehrlichia canis e/ou Anaplasma platys deve ser considerada, visto que em muitos casos a infeco pode perdurar por vrios anos, caracterizando-se apenas por leves alteraes hematolgicas, no havendo sintomatologia clnica evidente (DAVOUST, 1993; HARRUS et al., 1998) compatvel com a histria clnica dos animais desse estudo. A fase crnica da erliquiose tem como principal caracterstica a hipoplasia da medula ssea que resulta em anemia arregenerativa, monocitose, linfocitose e leucopenia (TROY; FORRESTER, 1990; ANDEREG; PASSOS, 1999; STILES, 2000). Em conjunto essas alteraes no foram encontradas em nenhum animal da raa Beagle e somente em seis ces

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SRD, contrariando a suspeita clnica de erliquiose crnica, sobretudo entre os Beagles, onde os casos de ANN foram numerosos. O diagnstico de Ehrlichia canis e Anaplasma platys pela demonstrao microscpica direta de incluses intracitoplasmticas (mrulas), a partir de preparaes coradas de esfregao sangneo foi evidenciado em somente um Beagle com ANN e leucocitose, e em dois ces SRD que no apresentaram valores hematolgicos indicativos de anemia e o leucograma estava normal, sendo evidenciados moncitos ativados no esfregao de ambos. A presena de um Beagle positivo indica pelo menos a circulao do agente no ambiente desses animais e sugere a ocorrncia da enfermidade na forma crnica em que a sintomatologia clnica no evidente (DAVOUST, 1993) e o diagnstico atravs do esfregao sanguneo pouco provvel. 4.2. Pesquisa Clnica e Etiolgica da Anemia em Ces da Raa Beagle 4.2.1. Avaliao clnica O exame clnico indicou uma boa condio fsica predominando o estado geral bom e a ausncia de sinais de enfermidades nos 43 Beagles avaliados nessa segunda etapa. Apesar do histrico de freqentes infestaes por carrapatos, foram registradas apenas infestaes leves, em poucos animais (08/43). Miases (2/43) e a presena de berne (11/43) foram registradas em animais em condies clnicas satisfatrias. Nenhum animal apresentou sinais de diarria e no foram evidenciadas fezes de consistncia lquida ou pastosa mole e o apetite estava presente em todos os animais. A nica condio comum maioria dos animais (28/43) foi a doena periodontal (DP). Pela avaliao clnica observou-se que 14 animais apresentaram a dentio em condies satisfatrias, sendo 11 com dentes saudveis e trs com gengivite leve. A maioria (65,1%) apresentava DP (Figuras 06 e 07) caracterizada por gengivite moderada (6) ou grave (22) ou periodontite moderada (3). A DP embora no to grave na maioria dos animais deve ser considerada na pesquisa etiolgica da anemia entre os animais estudados, especialmente considerando que todo processo inflamatrio crnico capaz de aumentar a sntese e a liberao de citocinas endgenas que, por sua vez, induzem alteraes do metabolismo do ferro e diminuio da sntese da hemoglobina (FUCHS et al., 1991). Os achados so consistentes com anemia de doena crnica (ADC) cujos principais mecanismos patolgicos envolvidos so: diminuio da sobrevida da hemcia, falha da medula ssea em aumentar a produo, e distrbio da mobilizao do ferro de depsito do sistema mononuclear fagocitrio (MEANS; KRANTZ, 1992; FUCHS et al., 1991). As contagens de hemcias, a concentrao de hemoglobina, o hematcrito e a leucometria global mais elevados foram registrados nos animais com dentes saudveis ou gengivite leve (graus 0 e 1), todos normais em mdia. Os parmetros da srie vermelha mais baixos foram registrados nos animais com DP grau 2 enquanto que aqueles com DP mais grave (graus 3 e 4) apresentaram valores intermedirios quanto srie vermelha, e a menor leucometria global. Estatisticamente a 99% de confiana a diferena foi significativa para hematimetria e concentrao de hemoglobina (Tabela 05) e os valores mais baixos nos animais com gengivite grave (grau 3) e periodontite moderada (grau 4), indicam um possvel efeito da DP sobre os valores hematolgicos concordando com os resultados de Hutter (2001) que demonstraram menor nmero de eritrcitos e nveis mais baixos de hemoglobina em pacientes portadores de periodontite, quando comparados a controles saudveis, justificando a incluso desses pacientes em um quadro sistmico de anemia de doenas crnicas (ADC). 29

A ao sistmica de citoquinas geradas nos stios de inflamao, necrose e regeneraes teciduais reconhecida por causar diminuio da eritropoese (VREUGDENHIL et al., 1992; FAILACE, 2003). Alguns autores (WAKAI et al., 1999; WORCH et al., 2001), alegam que a anemia no pode ser considerada uma conseqncia sistmica da periodontite, por no haverem encontrado correlao significativa entre ambas. O elevado nmero de leuccitos relacionado periodontite observado por diversos autores (ENSRUD; GRIM, 1992; KOWOLIK, 2001; KWEIDER, 1993; CHRISTGAU, 1998; WAKAI et al., 1999; LOOS et al., 2000; WORCH; LISTGARTEN; KOROSTOFF, 2001) no foi evidenciado neste estudo. Tabela 05: Valores mdios da contagem de hemcias, concentrao de hemoglobina, hematcrito e leucometria global em ces da raa Beagle segundo o grau da doena periodontal de acordo com Beard e Beard (1989). Doena periodontal Grau 0 e 1 Grau 2 Grau 3 e 4 Hemcias 5,576 a 5,075 b 5,354 ac Hemoglobina 12,51a 10,71b 11,6 ac Hematcrito 37,16 a 33,03 a 35,4 a Leucometria 13,26 a 12,25 a 11,34 a

Letras diferentes na mesma linha indicam diferena significativa a 99% de confiana pelo Test T.

4.2.2 Hemograma A) Eritrograma No hemograma efetuado quatro meses aps o primeiro, foram evidenciadas mdias da contagem de eritrcitos (5,3 x 106), da concentrao de hemoglobina (11,5 g/dL) e do hematcrito (34,9%) abaixo dos limites estabelecidos para a espcie e raa, enquanto que o VCM (64,8fL) e o CHCM (32,8%) foram normais. Esses dados confirmam alta incidncia de anemia entre os Beagles que, contudo, foi menos freqente e acentuada neste momento. Os valores mdios dos constituintes do hemograma efetuado em ambos os momentos, bem como a comparao do nmero de animais com parmetros alterados (acima ou abaixo da normalidade) esto representados na Tabela 06 com o respectivo resultado da avaliao estatstica (valor de p). A avaliao hematolgica indicou valores reduzidos nos constituintes do eritrograma remetendo a um quadro de anemia (NELSON; COUTO, 2006) em 66,7% dos animais, o que significa que mais de dois teros dos animais, embora tenham melhorado, mantiveram o quadro anmico. Da mesma forma que no exame anterior, foram identificados valores baixos de VG, hematimetria e/ou hemoglobinometria indicativos de anemia na maioria dos animais. Tambm os ndices hematimtricos VCM e CHCM foram normais em praticamente todos os animais avaliados. A porcentagem de animais com valores hematolgicos abaixo ou acima da normalidade no primeiro e segundo hemogramas est representada na Tabela 07.

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Figura 06: Co da raa Beagle com presena de clculo dentrio, edema e bolsas gengivais, dentes sem mobilidade e retrao gengival, alteraes correspondentes a uma gengivite grave segundo Beard e Beard (1989).

Figura 07: Ces da raa Beagle com inflamao grave da gengiva, bolsas com presena de pus e dentes com ligeira mobilidade correspondentes a uma periodontite moderada segundo Beard e Beard (1989).

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Tabela 06: Mdia dos valores hematolgicos em 43 ces da raa Beagle do Canil de Quimioterapia Experimental do Departamento de Parasitologia Veterinria da UFRRJ, em duas avaliaes com intervalos de cinco meses e anlise estatstica entre as coletas.
PARMETROS Volume globular (%) Hemcias(x 10 / L) Hemoglobina (g/dL) VCM (fL) CHCM ( %) Plaquetas (x 10 /L) Leuccitos (x10 /L) Bastes (/ L) Sgmentados (/L) Linf citos (/L) Moncitos (/L) Eosinfilos (/L) Basfilos (/L)
3 3 6

Primeira avaliao 31,3 a 4,91 a 10 a 64,2 a 32,5 a 203,3 a 13.493 a 4,7 a 54,3 a 21,5 a 9,5116 a 7,9 a 0,2045 a

Segunda avaliao 34,9b 5,30b 11,5b 64,8 a 32,8 a 156,8 a 12.111a 0,7b 64,2b 17,7 a 5,5135b 6,4 a 0,01b

Valor de p 0,0141 4 E -04 3E - 04 0,1976 0,2081 0,109 0,232 1E-06 0,004 0,065 9E-05 0,177 0,014

Letras diferentes na mesma linha indicam diferena significativa a 99% de confiana pelo Test T.

Tabela 07: Porcentagem de animais da raa Beagle, machos e fmeos, adultos no castrados, com valores hematimtricos abaixo ou acima dos limites da normalidade para a espcie. PARMETROS
Volume globular (%) Hemcias(x 10 / L) Hemoglobina (g/dL) VCM (fL) CHCM (%) Plaquetas (x 10 /L) Leuccitos (x10 /L) Bastes (/ L) Segmentados (/L) Linfcitos (/L) Moncitos (/L) Eosinfilos (/L) Basfilos (/L)
3 3 6

Primeira avaliao Aumentados

0 0 0 0 0 2,4 22,2 48,9 2,3 2,3 37,2 20,5 0

Segunda avaliao Aumentados

0 0 0 0 2,4 0 15,4 10,4 9,5 7,5 5,3 15,4 0

Diminudos
93,3 84,4 93,3 0 0 47,6 4,4 0 62,8 18,6 4,7 5,1 0

Diminudos
58 50 50 2,4 0 54,8 5,1 0 23,8 23,8 15,8 15,4 0

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Em relao ao exame anterior, a maioria dos animais (88,1%) apresentou VG, hematimetria e/ou hemoglobinometria mais elevados, caracterizando uma melhora do quadro anmico, e cinco (11,9%) ao contrrio, tiveram resultados mais baixos. Embora assintomticos esses animais apresentaram anemia em ndices semelhantes ou superiores aos relatados em estudos envolvendo ces com cinomose (GEBARA et al., 2004; SILVA et al., 2005), erlichiose (MACHADO, 2004; CASTRO et al., 2004; NAKAGHI, 2004; HASEGAWA, 2005; MENDONA et al., 2005; SOUSA, 2006; CORRA-OLIVEIRA, 2006; ALBERNAZ et al. 2007), leishmaniose (IKEDA et al., 2003; REIS et al., 2002; MEDEIROS et al., 2008) e co-infeco por diversos agentes infecciosos (MORETTI et al., 2006; SANTOS, 2008; SOUSA; ALMEIDA, 2008). No intervalo das avaliaes sete animais foram medicados com Doxacilina 18 aps visualizao de estruturas compatveis com Ehrlichia canis em esfregao de sangue perifrico. Destes apenas um no apresentava anemia inicialmente. Aps a medicao, seis animais apresentaram VG, hematimetria e hemoglobinometria mais elevados, porm continuaram com anemia. Um animal tratado apresentou parmetros eritrocitrios mais baixos. Para esses animais o nmero de hemcias e a concentrao de hemoglobina foram mais elevadas na segunda avaliao, com diferena significativa em relao primeira. Os valores obtidos para VG foram mais elevados na segunda avaliao (34,8%), comparativamente primeira (33,8%), mas sem diferena significativa e ambos abaixo do limite fisiolgico descrito para a raa (SILVA et al., 2001). Considerando os valores mdios obtidos para VCM e o CHCM pode-se afirmar que houve predominncia de anemia do tipo normoctica e normocrmica, tambm na segunda avaliao, onde foi identificado que 89,3% dos ces apresentaram ANN. Anemia macroctica hipocrmica foi registrada em um animal. Os dados sugerem que o fator etiolgico foi mantido no intervalo entre as coletas, caracterizando uma alta incidncia de anemia crnica entre os animais avaliados. No entanto, ocorreu uma significativa recuperao dos animais neste intervalo, comprovada pelo nmero de animais que apresentaram melhora nos parmetros da srie vermelha. As diferenas dos valores de VG, hematimetria e hemoglobinometria no segundo exame em relao ao primeiro, foram estatisticamente significativas a um grau de confiana de 99% (p0,01). Contudo, um grande nmero de animais permaneceu com os valores abaixo dos limites fisiolgicos, especialmente se comparados com os valores descritos por Silva et al. (2001) para ces da mesma raa. Por outro lado, os valores de VCM e CHCM variaram pouco e permaneceram dentro da normalidade e sem diferena significativa em ambos os momentos. Pela freqncia de normocitose e normocromia, pode-se sugerir a ocorrncia da sndrome clnica denominada anemia de doena crnica (ADC) que se caracteriza pelo desenvolvimento de anemia em pacientes que apresentam doenas infecciosas crnicas, inflamatrias ou neoplsicas (HANSEN, 1983; LEE, 1983; WEISS, 2000) por um perodo superior a dois meses (CANADO; CHIATONE, 2002). Quanto ao grau ou intensidade, na maioria dos casos a anemia foi considerada leve ou moderada (reduo de 1/3 em relao aos valores normais) em conformidade com o quadro de ADC (HANSEN, 1983; LEE, 1983; WEISS, 2000; CANADO; CHIATONE, 2002) que segundo Cartwright e Lee (1971) relativamente comum, mas clinicamente sem importncia porque, na maioria dos casos, caracteriza-se por anemia leve a moderada, com caractersticas clnicas, geralmente relacionadas doena de base e no anemia propriamente dita.

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Doxitec - Syntec

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ANN comum em doenas crnicas como a erliquiose canina (ETTINGER; FELDMAN, 2004), endmica na regio em que foram coletadas as amostras de sangue, sendo a infeco crnica por Ehrlichia canis uma causa provvel para a anemia dos animais avaliados. Pode-se tambm sugerir a infeco por Anaplasma platys, o agente etiolgico da trombocitopenia infecciosa cclica canina ou erliquiose tromboctica canina (ETC) que infecta as plaquetas do co e eventualmente leuccitos (HARVEY et al., 1978), de gravidade moderada, com poucos sinais clnicos evidentes (HARVEY et al., 1998; INOKUMA et al., 2002), em oposio ao quadro clnico geralmente mais severo e potencialmente fatal da infeco por Ehrlichia canis (WANER; HARRUS, 2000). Para o diagnstico clnico desses agentes, a pesquisa em esfregao corado de sangue perifrico ou de capa leucocitria, bem como os dados obtidos no leucograma so importantes, porm, os achados so variveis segundo a fase da infeco, e a baixa parasitemia dificulta o achado de estruturas do parasito em esfregaos corados (ALMONSNY; MASSARD, 2002; BULLA, 2004). B) Leucograma Segundo Latimer e Meyer (1992) isoladamente o leucograma raramente patognomnico em determinada molstia, entretanto, as informaes podem ser teis na elaborao de diagnstico diferencial, na avaliao da gravidade da doena e na elaborao do prognstico. Na presena de enfermidade, tanto o nmero quanto a morfologia dos leuccitos podem estar alterados de forma varivel, segundo a durao e gravidade da doena. O nmero de leuccitos circulantes reflete o equilbrio entre o fornecimento e a demanda tecidual, com variaes entre as espcies (KERR, 2003) e sob influncia de fatores como raa, espcie, idade, estado gestacional, nutrio, atividade muscular, excitao e estresse (BUSH, 2004). Dos fatores relacionados, apenas no possvel eliminar a excitao e o estresse, que so fatores individuais de difcil controle. Os demais foram comuns a todos os animais. Assim, provvel que as alteraes encontradas sejam decorrentes de enfermidades infecciosas, inflamatrias ou parasitrias, assintomticas, comuns a diversos animais, uma vez que todos co-habitavam o mesmo ambiente e foram submetidos s mesmas condies nutricionais e sanitrias. A contagem total de leuccitos foi em mdia (11.990) inferior aos valores obtidos anteriormente (13.493), sem diferena significativa (p=0,1902), ficando ambas as mdias na faixa de normalidade para a espcie (THRALL, 2007; NELSON; COUTO, 2006). Individualmente, com uma ampla faixa de variao (5.700 a 23.220), a maioria dos animais (73,4%) apresentou a contagem total de leuccitos na faixa da normalidade na segunda avaliao. Leucopenia e leucocitose ocorreram, respectivamente, em 5,1% e 15,4% dos animais. Apenas trs animais apresentaram a leucometria global elevada em ambos os exames, todos com ANN. Na contagem diferencial de leuccitos foram evidenciadas alteraes em eosinfilos, moncitos e linfcitos, sobretudo em relao aos nmeros reduzidos destes elementos: linfopenia (23,7%), eosinopenia (15,4%), monocitopenia (15,8%). Tambm ocorreu linfocitose (7,5%), eosinofilia (15,4%) e monocitose (5,3%). Em relao ao exame anterior a diferena foi significativa para a presena de bastes, eosinfilos e moncitos que foram mais elevados na primeira coleta e segmentados em maior nmero na segunda, comparativamente primeira. Os valores mdios dos parmetros do leucograma no primeiro e segundo exames esto representados nas Tabelas 06 e 07, bem como a porcentagem de animais com valores aumentados ou diminudos. 34

Vale ressaltar o elevado nmero de casos de anemia e a presena de alteraes como leucocitose, neutrofilia, linfopenia e monocitose em 48,5% dos animais anmicos. Como causa provvel de ANN pode-se sugerir a infeco crnica por Ehrlichia canis. Contudo, no leucograma no foram evidenciadas alteraes conclusivas, em conformidade com as consideraes de Ettinger e Feldman (2004), que no h uma caracterizao precisa na infeco por Ehrlichia canis, pois na fase aguda a contagem leucocitria varivel, na subclnica ocorre leucopenia e na fase crnica, desde leucopenia a leucocitose, dependendo da resposta individual e do grau de imunidade de cada animal. C) Protenas Plasmticas Totais (PPT) Em ces as PPT variam entre 5,4 e 7,1g/dL (KANEKO, 1997) ou entre 5,5 e 8,0 (NELSON; COUTO, 2006). Valores concomitantemente elevados para PPT e hematcrito, que indicam desidratao, ou valores baixos (hipoproteinemia) que refletem estados nutricionais deficitrios ou perdas aumentadas atravs dos tratos digestivo ou urinrio principalmente (BUSH, 2004), no foram evidenciados neste estudo. Na maioria dos animais (75%) os valores encontrados para PPT foram maiores que 8,0 g/dL, com mdia de 8,7 g/dL. Em apenas uma amostra a PPT foi menor (5,0 g/dL). Entre os animais com valores elevados, a maioria apresentava VG e hemoglobinometria reduzidos, o que indica anemia, mas no elimina a possibilidade de desidratao, embora no evidenciada ao exame fsico, o que implicaria em uma anemia ainda mais intensa (KANEKO et al., 1997). Como citaram Harrus et al. (1998) e Varela (2003), pode haver uma leve hiperproteinemia em animais com infeco por Anaplasma platys e outros agentes infecciosos em decorrncia de uma hiperglobulinemia. Os dados, portanto, no eliminam a possibilidade da infeco por esse e outros agentes infecciosos. Essa hiptese reforada pelas observaes de que na fase crnica da infeco por Ehrlichia canis, a hipoalbuminemia se contrape hipergamaglobulinemia, levando a nveis normais de protenas plasmticas totais (ALMOSNY; MASSARD, 2002). M absoro e perdas proticas entricas so caractersticas das verminoses intensas, que causam danos no epitlio intestinal, determinantes na reduo dos nveis das PPT (KANEKO et al., 1997). Com histrico de freqentes infestaes por carrapatos e animais cronicamente infectados com ancilstomos, o esperado seria um nmero maior de animais com hipoproteinemia que ocorreu em apenas um animal. Outras alteraes como anemia e eosinofilia seriam evidenciadas nas infeces por nematdeos, em particular por ancilstomos em ces (NELSON; COUTO, 2006). Contudo, eosinofilia tambm ocorreu em poucos animais e provavelmente no justificada pela verminose entre os animais estudados. D) Contagem de reticulcitos A contagem de reticulcitos realizada apenas nos animais com anemia, foi menor que 2,5% em onze animais (42,3%) com anemia permitindo classificar a anemias quanto resposta da medula ssea em arregenerativas ou sem resposta. Utilizando-se os valores absolutos de reticulcitos para avaliao da resposta medular, repetiu-se o resultado obtido quanto porcentagem indicando, neste caso, que 53,8% dos animais foram portadores de anemia sem resposta da medula ssea ou no regenerativa, caracterizada morfologicamente como normoctica normocrmica (GARCIA NAVARRO; PACHALY, 1994). Nesse clculo, o valor mdio de 45% geralmente usado como hematcrito normal para o co. Esse valor de VG baseado em dados internacionais, e o VG mdio dos animais desse estudo foi muito inferior a 45%. Assim, o nmero de casos de anemia arregenerativa pode ter sido superestimado. 35

ANN e a insuficiente resposta medular ao processo anmico, identificados na maioria dos casos podem ser decorrentes de inmeras causas como doenas medulares idiopticas, ao de toxinas ou medicamentos, deficincia de eritropoetina nos casos de insuficincia renal crnica (DAY, 1998; ROGERS, 2000), inflamaes e infeces crnicas e nas infeces virais (GARCIA NAVARRO; PACHALY, 1994). Assim, no possvel concluir ou apontar uma causa provvel sem exames complementares especficos para cada enfermidade potencial.

4.2.3. Perfil mineral A) Ferro, cobre e fatores nutricionais As deficincias de vitaminas, especialmente de riboflavina (B2), piridoxina (B6), cianocobalamina (B12), folato e tiamina, minerais (selnio, ferro, cobre e cobalto), lipdeos e protenas niacina, podem resultar em anemia (SZARFARC et al., 1995). Segundo Coles (1993) a anemia decorrente da deficincia nutricional raramente ocorre como entidade isolada, sendo mais comumente relacionada a condies patolgicas que resultam em anorexia, debilitao ou alteraes metablicas afetando a digesto ou a absoro de nutrientes. Essas condies clnicas no foram identificadas em nenhum dos Beagles. As deficincias de niacina, tiamina, vitaminas B2, B6 e B12 no constituem causas de anemia de ocorrncia natural em ces (ETTINGER; FELDMAN, 2004). A deficincia de cobalto parece restrita aos ruminantes, exceto pela sua essencialidade para a sntese de vitamina B12 que nos monogstricos suprida pela ingesto da vitamina pronta e pela sntese atravs dos microrganismos intestinais (HERBERT, 1988). Nas deficincias de folato e vitamina B12 a anemia macroctica (FRAPE, 1998; RICH; BREVER, 2002), e esta no foi observada em nenhum animal neste estudo. Portanto essas no so causas provveis de anemia entre os animais avaliados. Tratamentos prolongados com inibidores do cido flico como sulfonamidas, trimetropim, ou pirimetamina podem provocar deficincia de cido flico em humanos (COLLATOS, 1997). A ausncia de relatos de anemias induzidas por estas drogas em pacientes veterinrios sugere que esse efeito seja raro ou no ocorra em animais (WATSON; CANFIELD, 2000). Concordando com essa premissa, no foram, nesses estudos, registrados histricos de uso de medicamentos com essas bases farmacolgicas. Pelo exposto pode-se excluir a maioria das deficincias nutricionais como provveis agentes de anemia. Assim, avaliou-se os nveis sricos de ferro, bem como a capacidade total de ligao do ferro (CTLF), considerando a possvel alterao do metabolismo do ferro, por deficincia primria na dieta ou secundria a perda crnica de sangue, decorrente de parasitismo gastrintestinal ou por carrapatos. Os valores mdios do ferro srico foram normais, com 11 (25,6%) e cinco (11,6%) animais apresentando valores, respectivamente, abaixo ou acima dos limites estabelecidos para a espcie (Tabela 08). A anemia por deficincia de ferro ou ferropnica que ocorre como resultado de perda sangunea crnica, ingesto e/ou absoro deficientes e aumento do volume sanguneo (LEE JR, 1998) caracteriza-se por microcitose e hipocromia (LEE JR, 1998; KUSHNER, 1993), mas eventualmente, no incio pode ser normoctica normocrmica (VAL BICALHO; CARNEIRO, 2008). O nmero de animais com hipoferremia foi bem menor (11) que os casos de anemia (43) que foram quase exclusivamente normocticas e normocrmicas.

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Considerando a observao de Val Bicalho e Carneiro (2008) de que a anemia ferropriva pode ser normoctica normocrmica no incio, e o tempo decorrido entre as coletas (quatro meses), a deficincia de ferro como causa de anemia foi considerada pouco provvel, exceto em oito animais com ANN e ferro srico abaixo do limite mnimo da espcie em ambos os exames. Vale ressaltar que o ferro srico apesar de bastante utilizado na investigao etiolgica da anemia, sobretudo em medicina humana, pode estar alterado na presena de processos infecciosos, podendo diminuir em poucas horas aps o desencadeamento da infeco e pode apresentar-se normal quando co-existem a deficincia de ferro e na inflamao. A capacidade total de ligao do ferro (CTLF), utilizada para avaliar o ferro circulante, aumenta na deficincia deste mineral e diminui na inflamao (COOK, 2003), o que est de acordo com os dados obtidos neste estudo, uma vez que a CTLF ficou abaixo da normalidade.

Tabela 08: Mdia e amplitude de variao (mximo e mnimo) dos valores sricos de ferro e capacidade total de ligao do ferro (CTLF) em 43 ces da raa Beagle determinadas atravs de espectrofotometria, utilizando-se kits comerciais19 em relao aos valores de referncia (KANEKO et al., 1997; COELHO et al., 2006). Parmetro Mdia Mximo Mnimo Aumentados Diminudos Referncia Ferro 78,3 167,3 15,3 5 11 33-147 g/dL CTLF 201,4 417,3 51,1 1 34 282-386 g/dL

B) Clcio, fsforo e magnsio Os valores sricos mdios de clcio, fsforo e magnsio foram 6,4 mg/dL, 5,7 mg/dL e 1,7 mg/dL, respectivamente (Tabela 09). O clcio e o magnsio na mdia ficaram abaixo dos limites normais (9,8 a 12 mg/dL para o clcio e 1,8 a 2,4 mg/dL para o magnsio) enquanto o fsforo em mdia foi ligeiramente elevado (Tabela 09) em relao aos valores descritos como normais (3,0 a 5,5 mg/dL) (NELSON; COUTO, 2006). Individualmente as alteraes mais freqentes foram hipocalcemia (39) e hiperfosfatemia (22) caracterizadas, respectivamente, por clcio srico menor que 9,0 mg/L de fsforo acima de 5,5 mg/dL (NELSON; COUTO, 2006). Dos 39 ces com hipocalcemia 20 apresentaram concomitante hiperfosfatemia. O magnsio ficou na mdia (1,7 mg/dL) abaixo da normalidade (1,8 a 2,4 mg/dL), com valores oscilando entre 1,2 e 2,7 mg/dL, sendo dez animais com valores normais e 22 com ligeiramente baixos (entre 1,5 e 1,7 mg/dL). Em ces a calcemia pouco investigada, porm, a hipocalcemia pode ocorrer no curso de enfermidades como falncia renal aguda ou crnica, pancreatite, sndrome de baixa absoro intestinal, hipoproteinemia ou hipoalbuminemia, hipermagnesemia, sndrome de lise tumoral e no hiperparatireoidismo secundrio nutricional (ETTINGER; FELDMAN, 2004; NELSON; COUTO, 2006). Essas so, portanto causas provveis de anemia entre os animais avaliados, ainda que no evidenciadas ao exame fsico.
19

Ferro srico - Bioclin Capacidade ligadora do ferro - Bioclin

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Tabela 09: Valores mdios e amplitude de variao dos minerais clcio, fsforo e magnsio no soro de 43 Beagles em relao aos valores de referncia e nmero de animais com valores abaixo ou acima da normalidade, segundo Nelson e Couto (2006). Clcio (mg/dL) Mdia Mnimo Mximo Aumentados Diminudos Referncia 6,4 0,1 12,8 1,0 39 9 12 Fsforo (mg/dL) 5,7 2,1 11,1 23 7,0 3 3,5 Magnsio (mg/dL) 1,7 1,2 2,7 2,0 32 1,8 2,4

C) Funo renal A reduo da funo renal acompanhada por uma srie de anormalidades laboratoriais, sendo mais comuns a reduo da hemoglobina e do hematcrito e as alteraes do metabolismo do clcio, fsforo, potssio e equilbrio cido-bsico (CHANG; HAIASHI; ROMO JR, 2002). Neste estudo, os achados hematolgicos e as alteraes no metabolismo do clcio e fsforo so compatveis com alterao da funo renal. Segundo Greene (2006) a creatinina sofre menor influncia de fatores extra-renais sendo, portanto um indicador mais fidedigno da taxa de filtrao glomerular. Os valores mdios obtidos foram normais para uria (25,8mg/dL) e elevados para creatinina (2,0 mg/dL), comparando-se com os valores descritos para a raa (SILVA et al., 2001). Individualmente, 16 e 20 animais apresentaram valores elevados, respectivamente para uria e creatinina, sendo nove com ambos os parmetros aumentados (Tabela 10). Em estudos para avaliar os nveis sricos de clcio e fsforo em ces com IRC e sadios Rocha et al. (2009) registraram mdias de clcio aproximadamente iguais aos do presente estudo (6,4 mg/dL), tanto em ces com IRC (6,381,71mg/dL), quanto nos animais do grupo controle (6,512,86mg/dL). Os valores de fsforo registrados nos animais com IRC (10,133,73mg/dL), foram superiores mdia obtida neste estudo (5,5mg/dL). Considerando-se a diferena estatisticamente significativa entre os valores elevados dos animais com IRC e normais do grupo controle (4,031,13mg/dL), os achados de Rocha et al. (2009) validam a hiperfosfatemia em ces com IRC relatada em estudos anteriores (POLZIN; OSBORNE, 1995; BROWN et al., 1997; ELLIOT, BARBER, 1998; POLZIN et al., 2000; SLATOPOLSKY; BROWN; DUSSO, 2001; HSU; CHERTOW, 2002). Um animal apresentou clcio srico total igual a 12,8 mg/dL, concomitante com hiperfosfatemia (8,5 mg/dL) em semelhana aos relatos de Chew e Meuten (1982) e Krueger e Osborne (1996). Contudo neste estudo, os valores se uria (35,3 mg/dL) e creatinina (90,5 mg/dL) foram normais, evidenciando uma taxa de filtrao glomerular normal. Dos 39 ces com hipocalcemia a maioria apresentava nveis de uria (16/39), creatinina (20/39) ou ambos (7/39) acima dos valores de referncia. Nove animais apresentaram a calcemia baixa acompanhada dos valores sricos de fsforo, uria e creatinina elevados e dos 39 ces com hipocalcemia 20 apresentaram concomitante hiperfosfatemia. Os maiores valores de uria e creatinina foram registrados em dois animais 38

com ANN, hipocalcmicos e com hiperfosfatemia. Esses achados, juntamente com a ANN sugerem alteraes da funo renal (KING et al., 1992). De Bowes et al. (1996) demonstraram a associao entre a DP em Beagles e alteraes histolgicas no fgado, rins e miocrdio. Mais recentemente Barbudo-Selmi et al. (2004) avaliaram a DP em ces com IRC e ces com funo renal normal e concluram que a distribuio e progresso da DP podem apresentar-se de forma alterada em ces com IRC, e que a resposta inflamatria gengival difere em ces com IRC ou funo renal normal, dependendo do grau de DP presente. No presente estudo, valores elevados de uria e creatinina foram registrados em ces com diversos graus de DP, no sendo possvel comprovar a correlao da DP com a funo renal da mesma forma que no estudo de Barbudo - Selmi et al. (2004). D) Funo heptica Pelas inmeras e diversificadas funes metablicas, a avaliao do estado funcional do fgado tem como base a sua habilidade em executar uma funo metablica especfica (COLES, 1993). As anormalidades laboratoriais potenciais que podem ocorrer na doena hepatobiliar so: elevao das enzimas hepticas ALT, AST, FA e GGT, alm de anemia regenerativa, leve a moderada (JOHNSON, 1992; JOHNSON; SHERDING, 1998; HESS; BUNCH, 1995; NELSON; COUTO, 2006), ou mais comumente anemia arregenerativa (normoctica normocrmica) associada anemia da doena crnica (HALL, 1985; JOHNSON, 1992; CENTER, 1996; JOHNSON; SHERDING, 1998). A interpretao dos resultados laboratoriais se baseia na comparao dos valores obtidos com valores de referncia. Entretanto, os valores de referncia para as enzimas hepticas em ces so amplamente variveis segundo a metodologia utilizada ou mesmo segundo a fonte consultada. Por se tratar de animais da raa Beagle os dados obtidos foram comparados aos valores referenciais estabelecidos por Silva et al. (2001) para esta raa nas condies ambientais do Brasil. Os valores mdios expressos em UI/L, obtidos para ALT e AST (Tabela 10) foram mais elevados nos machos (43,1 ALT; 23 - AST), porm sem diferena significativa em relao s fmeas (40,3 ALT; 22 - AST) ambos inferiores s mdias obtidas por Silva et al. (2001). Kitamura (2008) obteve em ces com hepatopatias valores de ALT variando de 95 a 612 e para AST valores acima de 205. Esses valores foram muito superiores aos obtidos no presente estudo cujas mdias e valores individuais foram mais prximos daqueles obtidos em ces normais por diferentes autores. Os dados indicam ausncia de leso heptica ativa, exceto para um animal com ambas as enzimas elevadas (ALT = 73,3; AST = 62,3) e dois com apenas ALT elevada (125,7 e 83,8). Como os valores no foram muito elevados provavelmente esses achados no tm grande significado clnico. A fosfatase alcalina, uma enzima sintetizada no fgado, nos osteoblastos, nos epitlios intestinal e renal tem uma faixa de variao muito ampla e os resultados devem ser avaliados juntamente com outros dados laboratoriais (DUNCAN; PRASSE; MAHAFFEY, 1994). Neste estudo os valores mdios da FA foram normais (22,6) sendo apenas um animal com o valor acima do limite de normalidade para a espcie (Tabela 10). Os dados sugerem ausncia de leso ativa no parnquima heptico, renal e sseo, apesar de os valores de uria e creatinina estarem acima dos limites fisiolgicos, concomitantemente em sete animais, e elevados para uria e creatinina, respectivamente em 16 e 20 animais.

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Tabela 10: Valores mdios e amplitude de variao (mximo e mnimo) de uria, creatinina, AST, ALT e fosfatase alcalina (FA) de 43 ces da raa Beagle sem manifestaes clnicas de enfermidades em relao aos valores de referncia (SILVA et al., 2001; THRALL, 2007). Uria (mg/dL) Mdia Mnimo Mximo Referncia 25,8 6,7 148,2 7,0 28 Creatinina (mg/dL) 2,0 0,1 5,7 0,9 1,7 ALT ou TGP (UI/L) 42,3 10,4 125,7 15 - 58 AST ou TGO (UI/L) 22,1 5,0 62,0 23 66 FA (UI/L) 22,6 8,0 176 20 -156

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5 CONCLUSES A anemia tem ocorrncia significativa em ces, mesmo em animais assintomticos. A etiologia da ANN que ocorreu na maioria dos animais no pode ser confirmada com os mtodos utilizados. A deficincia de cobre e ferro, a insuficincia heptica ou a presena de leso ativa no parnquima heptico no esto relacionadas ocorrncia de anemia entre os animais estudados. Apesar do histrico de infestaes freqentes por carrapatos e ancilstomos esses no foram os agentes determinantes dos quadros de anemia registrados entre os Beagles. Como causas provveis da anemia destacam-se a infeco crnica por Ehrlichia canis e/ou Anaplasma platys. A doena periodontal como uma enfermidade inflamatria crnica pode ser uma das causas da ANN entre os Beagles. O tratamento da DP e a avaliao de indicadores inflamatrios seriam teis para elucidao das causas da anemia no plantel estudado. Estudos complementares sobre o impacto das anemias em ces devem ser conduzidos no somente por sua freqncia, mas tambm por suas conseqncias clnicas na sade dos acometidos.

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APNDICE 1 TERMO DE CONSENTIMENTO LIVRE E ESCLARECIDO

Declaro, por meio deste termo, que concordei em participar da pesquisa de campo referente ao projeto intitulado Pesquisa clnica e etiolgica de anemia em ces desenvolvido pelo Instituto de Medicina Veterinria, Curso de Ps-Graduao em Medicina Veterinria (CPGMV) da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ). Fui informado(a), ainda, de que a pesquisa ser desenvolvida pelos pesquisadores Marcelo Soares Antunes e Anselmo Silva Ramos, coordenada pelos Professores Gilberto Garcia Botelho e Rita de Cssia Campbell Machado Botteon a quem poderei contatar / consultar a qualquer momento que julgar necessrio atravs do telefone n 21.26821711 ou e-mail ggbotelho@ufrrj.br ou rbotteon@ufrrj.br. Afirmo que aceitei participar por minha prpria vontade, sem receber qualquer incentivo financeiro e com a finalidade exclusiva de colaborar para o sucesso da pesquisa. Fui informado(a) dos objetivos estritamente acadmicos do estudo, que, em linhas gerais um levantamento das condies clnicas e dos aspectos laboratoriais da anemia em ces Fui tambm esclarecido(a) de que os usos das informaes por mim oferecidas esto submetidos s normas ticas destinadas pesquisa envolvendo os animais de minha propriedade, da Comisso de tica na Pesquisa (COMEP) da Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro. Minha colaborao se far de forma annima, por meio de entrevista semi-estruturada, observao, exame e coleta de matrias biolgicos dos meus animais. O acesso e a anlise dos dados coletados se faro apenas pelos pesquisadores e/ou seus orientadorses. Estou ciente de que, caso eu tenha dvida ou me sinta prejudicado(a), poderei contatar o(a) pesquisador(a) responsvel ou seus orientadores, ou ainda o Comit de tica em Pesquisa do Decanato de Pesquisa e Ps-Graduao da UFRRJ (DPPG), situado na BR 465 KM 7 Centro, Seropdica, Rio de Janeiro (RJ), CEP 23890-000, Fax /Fone (x-21) 2682 - 1201 ramal 4707/ 4708/ 4709 e e-mail: dppg@ufrrj.br. O(a) pesquisador(a) principal do estudo me ofertou uma cpia assinada deste Termo de Consentimento Livre e Esclarecido, conforme recomendaes da Comisso de tica na Pesquisa da UFRRJ / COMEP. Fui ainda informado(a) de que posso me retirar desse(a) estudo a qualquer momento, sem prejuzo para meu acompanhamento ou sofrer quaisquer sanes ou constrangimentos

Seropdica, ____ de _________________ de _____

Assinatura do(a) participante: ______________________________

Assinatura do(a) pesquisador(a): ____________________________

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APNDICE 2

FICHA DE AVALIAO CLNICA

1. IDENTIFICAO: Proprietrio: ____________________________________ Registro: CF_________ Procedncia: ____________________________________________________ Nome do animal: __________________________ Idade: _______________ Raa: ____________ Sexo: ____ Porte: ____________ Data: ___________

2. ALIMENTAO ( ) Rao Marca: _________________ Dieta caseira: ________________

3. HISTRICO E ANAMNESE:

4. EXAME FSICO: Temperatura:________ Peso:________

Castrado: ( ) Sim ( ) No Estado geral: ( ) Bom Hidratao: ( ) Normal ( ) Regular ( ) Ruim ( ) Desidratao: _______% Peso:______Kg.

Mucosas: ( ) Normocoradas ( ) Hipocoradas ( ) Congestas ( ) Carticas ( ) Ictricas Ectoparasitas: ( ) Pulgas ( ) Piolhos ( ) Carrapatos Fezes: ( ) Normais ( ) Alterada Qual ?___________________________ Urina: ( ) Normais ( ) Alterada Qual ?___________________________

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Freqncia Cardaca:_____bpm Auscuta:___________________________ Freqncia Respiratria: _____mpm Auscuta: _______________________ Linfonodos: ( ) Normais ( ) Infartados. Quais?________________ Palpao Abdominal: ( ) Sem Alteraes ( ) Presena de Fezes( )Gases ( )Massa

4.1.Trato Urinrio: Bexiga: ( ) Vazia ( ) Repleta ( )Alterados

Rins: ( )Sem alteraes

Olhos: ( ) Sem alteraes ________________________________________ Cavidade oral: ( ) Normal ( ) Gengivite ( ) Clculo dentrio ( )Tumores Faz uso de alguma medicao? ( ) Sim ( ) No Qual?_______________

4.2. Dermatolgicos:

Presena de leses: Sim ( ) No ( ) Qual o tipo? ( ) Alopecia ( ) Ulceras ( ) Dermatite ( ) Localizada ( ) Localizada ( ) Difusa ( ) Difusas

( ) Descamativa ( ) Esfoliativa ( ) Seborrica ( ) Plos opacos ( ) Cicatriz

( ) Plos quebradios

Observaes: ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________ ___________________________________________________________________________

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APNDICE 3 Ficha de Resultados Laboratoriais Laboratrio de Patologia Clnica

Data: Nome: Proprietrio: Espcie: Mdico Veterinrio: Raa: Tel: Sexo: Idade:

Hemograma:
ERITROGRAMA (x106/L) (%) (g/dL) ( fl ) (%) (g/dL) Valores de referncia

Hemcias Hematcrito Hemoglobina VCM CHCM Protena plasmtica total

5.5 a 8.5 37 a 55 12 a 18 60 a 77 31 a 36 6,0 a 8,0

LEUCOGRAMA Leuccitos Neutrfilos Metamielcitos Bastonetes Segmentados Linfcitos Moncitos Eosinfilos Basfilos

VALORES RELATIVOS (%)

VALORES ABSOLUTOS (clulas/L) 6000 a 17000 0 0 a 300 3000 a 11500 1000 a 4800 150 a 1350 100 a 1250 Raros

0 0a3 60 a 77 12 a 30 3 a 10 2 a 10 Raros

60