Universidade da Beira Interior Aulas Prticas de Biologia Vegetal 1 Ano do Curso de Bioqumica/Biotecnologia

Protocolo 1: Observao das estruturas de clulas vegetais ao microscpio. As clulas dividem-se em dois grandes grupos: as clulas eucariticas e as clulas procariticas. As clulas eucariticas so organismos complexos que podem ser agrupadas em clulas animais ou clulas vegetais (Fig. 1). As clulas vegetais tpicas, ao contrrio das clulas animais, possuem uma parede celular rgida, geralmente celulsica, segregada pelo citoplasma, que envolve todo o protoplasma. As paredes celulares dos tecidos parenquimatosos e dos tecidos imaturos so os principais componentes estruturais das clulas das plantas, as quais envolvem e do forma aos protoplastos. So compostas por polissacardeos, pequenas Figura 1 Representao esquemtica de uma clula vegetal. quantidades de protenas e compostos fenlicos que vo sofrendo alteraes ao longo da vida das clulas. So estruturas muito complexas que possuem uma grande diversidade de funes durante a vida da planta, entre elas destacam-se as seguintes: proporcionam s clulas robustez mecnica, mantm a sua morfologia, controlam a expanso celular e o transporte intercelular, protegem a clula contra a maioria dos organismos potencialmente patognicos e predadores, participam na comunicao intercelular e contribuem em alguns casos como reserva alimentar. - Celulose - Pectinas - Hemiceluloses - Lenhina - Suberina - Cutina

Principais componentes da Parede Celular das plantas:

As vrias camadas que compem a parede celular das clulas vegetais tpicas so basicamente constitudas por hidratos de carbono, principalmente celulose. A malha formada pelas fibras de celulose est embebida por uma matriz de molculas no celulsicas (hemiceluloses, pectinas e glicoprotenas). A lenhina fornece resistncia compresso e rigidez. Encontra-se na parede de clulas que desempenham uma funo mecnica, possuindo propriedades hidrofbicas. A suberina, cutina e as ceras so substncias gordas normalmente encontradas nas paredes de tecidos externos protectores e a sua funo reduzir as perdas de gua.

Procedimento Experimental

Parte 1: Deteco dos vrios constituintes da parede celular. Distino entre paredes celulsico-pcticas e paredes lenhificadas ou suberificadas. Tcnica de Mirande (para colorao dos cortes transversais de raiz de lrio, milho, trigo, rannculo e videira). 1 - Colocar os cortes em gua durante 5 minutos. 2 - Colocar os cortes em gua de Javel durante 5-10 minutos (este reagente dissolve todo o protoplasma e substncias de reserva). 3 - Colocar os cortes em gua actica a 1% durante 5 minutos (este reagente neutraliza o hipoclorito de sdio). 4 - Lavar os cortes em gua. 5 - Colocar os cortes numa soluo de carmim-verde-iodo durante 5-10 minutos. 6 - Lavar o excesso de corante em gua e passar o corte por lcool absoluto. 7 - Montar em gua, gua glicerinada ou glicerina entre lmina e lamela e observar.

Parte 2: Deteco dos vrios constituintes da parede celular. 1 - Obter alguns cortes transversais de raiz de cebola, milho ou lrio. 2 - Colocar uma gota de gua entre lmina e lamela e observ-los ao microscpio. 3 - Comparar com as observaes anteriores e identificar os vrios tecidos tendo em conta a forma das clulas, o seu tamanho, a natureza, a espessura das suas paredes e a sua localizao/organizao dentro da planta (p. ex. parnquima cortical, tecido de reserva que ocupa a maior rea da estrutura da raiz).

Parte 3: Deteco de lenhina em cortes transversais de folha de milho ou caule de Tradescantia (monocotiledneas). 1 - Execute um corte longitudinal na medula de sabugueiro at 1 cm. 2 - Coloque na ranhura da medula uma folha de gramnea. 3 - Com uma lmina execute cortes transversais, o mais fino possvel, da folha de gramnea, colocando-os num vidro de relgio. Repita o procedimento com fragmentos de caule de Tradescantia. 4 - Adicione umas gotas de soluo alcolica de floroglucinol a 1%, aguarde 2 a 3 minutos. 5 - De seguida transfira os cortes para um vidro de relgio com algumas gotas de HCl, e espere durante 2 a 3 minutos. 6 - Monte entre lmina e lamela. 7 - Observe e registe.

O floroglucinol permite a deteco de lenhina, a qual cora de vermelho acastanhado na presena deste reagente (teste especfico para a lenhina). Que tipo de clulas vegetais so evidenciadas pelo floroglucinol? Quais as funes destas clulas nas plantas?

Material

- gua de Javel (pode ser substituda por lixvia vulgar) - gua actica a 1% (1 parte de cido actico concentrado para 100 partes de gua) - Soluo de carmim-verde-iodo - lcool absoluto -Glicerina - Soluo alcolica de floroglucinol a 1% - Raiz de cebola, lrio, milho, trigo (monocotiledneas) - Raiz de rannculo (eudicotilednea herbcea) - Raiz de videira (eudicotilednea lenhosa) - Folha de milho - Caule de Tradescantia (monocotilednea) - Medula de sabugueiro - Lminas de corte ou bisturi - Vidros de relgio - Lminas e lamelas

Corante usado na tcnica de Mirande Prepara-se misturando 9 partes de Carmim aluminado de Grenacher com 1 parte de Verde-iodo. (Utilizando esta tcnica de colorao dupla as paredes celulsico-pcticas coram de vermelho ou rosa intenso; as paredes lenhificadas coram de verde; as paredes suberificadas coram de amarelo acastanhado, castanho amarelado ou mesmo de verdeclaro).

Carmim aluminado de Grenacher Prepara-se com base na seguinte frmula: 100 ml gua destilada 4 g Almen de Potssio 1 g Carmim Ferver a mistura em fogo lento durante 15-20 minutos, deixar arrefecer e filtrar. Verde Iodo Prepara-se adicionando: 0,1 g Verde - iodo 35 g gua destilada