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UNIVERSIDADE CASTELO BRANCO

QUALITTAS INSTITUTO DE PS-GRADUAO

CURSO DE ESPECIALIZAO EM CLNICA MDICA DE PEQUENOS ANIMAIS

HEMOPLASMOSE FELINA RELATO DE CASO

Adriana Wolf Wander

Porto Alegre, jul. 2009

UNIVERSIDADE CASTELO BRANCO

ADRIANA WOLF WANDER


Aluna do curso de Especializao em Clnica Mdica de Pequenos Animais

HEMOPLASMOSE FELINA RELATO DE CASO

Trabalho monogrfico de concluso do curso de Especializao em Clnica Mdica de Pequenos Animais (TCC), apresentado UCB como requisito parcial para a obteno do ttulo de Especializao em Clnica a Mdica de pequenos Animais, sob a orientao da Prof Fernanda Vieira Amorim da Costa.

Porto Alegre, jul. 2009

ADRIANA WOLF WANDER

HEMOPLASMOSE FELINA RELATO DE CASO

Foi analisado e aprovado com grau: .............................

Porto Alegre, ______ de ____________ de ______.

_____________________________ Professora Orientadora

Porto Alegre, jul. 2009

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RESUMO A hemoplasmose felina causada por hemoplasmas hemotrpicos, ou seja, bactrias pleomrficas que parasitam os eritrcitos dos gatos domsticos. Seus agentes etiolgicos j foram chamados de Eperythrozoon felis, Haemobartonella feliz e atualmente so conhecidos como Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum e Candidatus Mycoplasma turicensis. Estes agentes podem causar anemia primria em gatos, mas quando h co-infeco com as retroviroses felinas, incluindo o vrus da imunodeficincia felina e o vrus da leucemia felina, o quadro clnico mais grave. Foi demonstrado que as transfuses de sangue infectado so eficazes na transmisso do microorganismo (Gary et al 2006), mas ainda no est provado que parasitas hematfagos, por exemplo, mosquitos e pulgas, so vetores adequados. Os sinais clnicos desta enfermidade incluem principalmente anorexia, anemia regenerativa, ictercia e esplenomegalia. O diagnstico deve ser firmado quando encontrarmos o microorganismo na avaliao hematoscpica, juntamente com sinais clnicos da doena e a presena de anemia regenerativa, porm, o teste da Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) conhecido por ser mais sensvel do que a citologia para o diagnstico e permite a diferenciao das duas espcies de hemoplasmas. O tratamento preconizado inlcui o uso de doxiciclina, mas o uso de enrofloxacina vem sendo sugerido recentemente. O presente trabalho objetiva relatar um caso de hemoplasmose felina, enfatizando os sinais clnicos, diagnstico e eficcia do tratamento com o uso da doxiciclina. Palavras-chave: hemoplasmas; anemia; gatos.

ABSTRACT The feline hemoplasmosis is caused by hemoplasmas hemotrpics, or pleomorphic bacterias that parasite the domestic cats erythrocytes. Their etiologic agents have already been called Eperythrozoon felis, Haemobartonella felis and nowadays they are known as Mycoplasma haemofelis, Candidatus Mycoplasma haemominutum and Candidatus Mycoplasma turicensis. These agents may cause primary anemia in cats, but when there are co-infection with feline retrovirosis, including the feline immunodeficiency virus and the feline leukemia virus, the clinical picture is more severe. It was shown that the transfusion of infected blood are effective in the transmission of the microorganism (Gary et al 2006), but is not yet proven that hematophagous parasites, such as mosquitoes and fleas, are suitable vectors. The clinical signs of this disease mainly include anorexia, regenerative anemia, jaundice and splenomegaly. The diagnosis must be established when the microorganism is found in the hematoscopic assessment, in assossiation with clinical signs of the disease and the presence of regenerative anemia, however, the test of Polymerase Chain Reaction (PCR) is known to be more sensitive than cytology for the diagnosis and also allows the differentiation of two species of hemoplasmas The recommended treatment includes the use of doxycycline, but the use of enrofloxacin has been suggested recently. This study aims to report a case of feline hemoplasmosis, emphasizing the clinical signs, diagnosis and effective treatment with the use of doxycycline. Key-words: hemoplasma; anemia; cat.

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SUMRIO
Resumo .................................................................................................................. iv Lista de Figuras...................................................................................................... vi Parte 1. ...............................................................................................................................R eviso bibliogrfica ............................................................................................1 1.1........................................................................................................................I ntroduo.....................................................................................................1 1.2........................................................................................................................E tiologia .........................................................................................................2 1.3........................................................................................................................H istrico .........................................................................................................5 1.4........................................................................................................................E pidemiologia ................................................................................................6 1.5........................................................................................................................P atognese....................................................................................................8 1.6........................................................................................................................S inais Clnicos .............................................................................................10 1.7........................................................................................................................D iagnstico ..................................................................................................10

1.8........................................................................................................................T ratamento ..................................................................................................15 1.9........................................................................................................................P rognstico ..................................................................................................17 2. ...............................................................................................................................R elato de caso....................................................................................................18 3. ...............................................................................................................................D iscusso e concluso.......................................................................................20 Anexos ..................................................................................................................22 Referncias bibliogrficas .....................................................................................23

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 - M. haemofelis e M. haemominutum em sangue de gatos infectados ................ 3

Figura 2 - Precursores imaturos de clulas eritrides em um gato portador do vrus para leucemia viral felina ............................................................................................................ 9

Figura 3 - Esfregao sanguneo demostrando a presena de M. haemofelis em aproximadamente 50% dos eritrcitos ............................................................................. 11

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Figura 4 - Esfregao sanguneo demostrando a presena de M. haemofelis em aproximadamente 65% dos eritrcitos ............................................................................. 12

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1. REVISO BIBLIOGRFICA

1.1. INTRODUO

A anemia infecciosa felina ou hemoplasmose felina causada por hemoplasmas hemotrpicos, ou seja, bactrias pleomrficas que parasitam os eritrcitos dos gatos domsticos. Por esta razo, suas principais espcies, Mycoplasma haemofelis e Candidatus Mycoplasma haemominutum, so comumente conhecidas como hemoplasmas felinos (Neimark et al 2001, Messick 2004). A hemoplasmose causa um distrbio hemoltico extravascular que tambm pode acometer caninos, bovinos, bfalos, veados, ratos, porcos da ndia, esquilos, caprinos, macacos e pessoas (Harvey e Gaskin 1978). A doena tem maior importncia em gatos domsticos e, nos caninos, uma patologia incomum, acometendo principalmente animais esplenectomizados (Jones 2000). O modo de transmisso ainda no foi completamente elucidado, mas suspeita-se que ocorra atravs da transferncia de sangue de um gato para outro (Norsworthy 2004). Foi demonstrado que as transfuses de sangue infectado so eficazes na transmisso do microorganismo (Gary et al 2006), mas ainda no est provado que parasitas hematfagos, por exemplo, mosquitos e pulgas, so vetores adequados (Norsworthy 2004). A infeco j foi realizada experimentalmente por injees parenterais de sangue e tambm por administrao de sangue infectado por via oral (Hoskins 1991). Acredita-se no haver predileo por raa ou sexo, contudo, parece que os machos so mais propensos a apresentarem a hemoplasmose devido aos hbitos mais freqentes de ambulao e luta, e, com isso, maior exposio a gatos infectados por M. haemofelis (Harvey 1998). Gatos mais jovens do que 6 anos de idade, tm maior risco de desenvolver hemoplasmas hemotrpicos, porm, esse risco declina em gatos idosos (Hayes e Priester 1973, Grindem et al 1990, Harrus et al 2002). Um resultado positivo no exame de deteco do vrus da Leucemia felina

(FeLV) e histrico de abscessos causados por mordidas de outros gatos tambm tm sido identificados como um fatores de risco (Grindem et al 1990). Apesar de ser uma das principais causas de anemia em gatos, ainda existem poucas informaes disponveis em relao sua epidemiologia e s doenas que este parasito causa. Um dos principais fatores limitantes investigao desse organismo que ainda no h sucesso no seu cultivo fora do hospedeiro. Contudo, recentemente, estudos moleculares tm avanado nosso entendimento sobre a sua natureza e patogenicidade (Tasker e Lappin 2002). A hemoplasmose uma doena comum em felinos domsticos. Porm, o seu diagnstico s pode ser firmado quando encontrarmos o microorganismo na anlise hematoscpica, juntamente com sinais clnicos da doena e a presena de anemia regenerativa (Grace 2004). Entretanto, devido alta freqncia de falso-negativo na avaliao hematoscpica de esfregaos sanguneos, a enfermidade pouco diagnosticada. O teste da Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) conhecido por ser mais sensvel do que a citologia para o diagnstico e permite a diferenciao das duas espcies de hemoplasmas (Berent et al., 1998; Foley et al., 1998; Westfall et al., 2001). O presente trabalho objetiva relatar um caso de hemoplasmose felina, enfatizando os sinais clnicos, diagnstico e eficcia do tratamento com o uso da doxiciclina.

1.2. ETIOLOGIA

Os hemoplasmas hemotrpicos so organismos pequenos (0,3 a 0,8 m), gram-negativos, epicelulares, firmemente aderidos membrana dos eritrcitos (Davenport 1994). No possuem parede celular nem flagelo, so resistentes penicilina e seus anlogos, mas so suscetveis tetraciclina (Neimark et al 2001, 2002). Estudos ultra-estruturais, em meados dos anos 60, mostraram claramente que esses parasitas esto na superfcie das clulas vermelhas sanguneas e no parecem penetrar no interior das mesmas. (Small e Ristic 1967). Os hemoplasmas possuem DNA e RNA e se replicam por diviso binria. Esses organismos no tm sido cultivados fora de seus hospedeiros, diferenciando-os assim da espcie Bartonella, pois essas so bactrias que podem ser cultivadas em clulas livres (Harvey 1998).

Foram identificadas duas linhagens distintas de M. felis (Figura 1). A forma grande, Mycoplasma haemofelis (Mhf), relativamente patognica associada anemia hemoltica grave em gatos imunocompetentes, e a forma pequena, Candidatus Mycoplasma haemominutum (Mhm), no associada doena em gatos imunocompetentes. (Foley et al 1998, Jensen et al 2001, Westfall et al 2001). Entretanto, gatos co-infectados com Mhm e FeLV so mais susceptveis a desenvolver a anemia clnica do que gatos infectados apenas com o Mhm. H alguns indcios que o desenvolvimento de doenas mieloproliferativas acelerado em gatos infectados

concomitantemente com Mhm e FeLV (George et al 2002). Anlises da seqncia do gene 16S do DNA ribossmico mostraram uma semelhana gentica de 83% entre o M. haemofelis e Candidatus M. haemominutum (Foley e Pedersen 2001).

Figura 1: M. haemofelis (nas clulas azuis) e M. haemominutum (seta, nas clulas vermelhas) em sangue de gatos infectados. Fonte: Foley et al 1998.

Recentemente, um novo hemoplasma, Candidatus Mycoplasma turicensis (Mtc), foi detectado em gatos na Suia com histria de hemlise intravascular grave (Willi et al 2005). Posteriormente, esta espcie foi descrita em gatos na Austrlia, Reino Unido, frica do Sul e Estados Unidos, sugerindo uma distribuio mundial. No Brasil este parasita foi descrito apenas

em felinos selvagens mantidos em zoolgicos (Willi et al 2007). Anlises da seqncia do gene 16S rRNA revelaram que esse organismo est mais estreitamente ligado ao Mycoplasma coccoides e ao Mycoplasma haemomuris, ambos espcies de hemoplasmas de roedores (Iralu e Ganong 1983), do que a outros hemoplasmas felinos. Sua inoculao em gatos resultou em anemia, apesar de sua patogenicidade em condies naturais ainda no ser bem entendida (Sykes et al 2008). Tambm foram detectadas, por meio da Reao em Cadeia da Polimerase (PCR), provas moleculares de infeco em 2 de 263 gatos com e sem anemia por um organismo semelhante, o Candidatus Mycoplasma haematoparvum, que um hemoplasma canino(Sykes et al 2008). Atravs de testes de anlises da seqncia do gene 16S rRNA, verificou-se que o M. haemofelis apresenta mais semelhanas com o M. haemocanis, que causa anemia em ces esplenectomizados, do que com outros M. haemofelis isolados, e por causa disso, foi sugerido que M. haemofelis e M. haemocanis sejam o mesmo organismo infectando diferentes espcies de animais (Brison e Messick 2001, Birkenheuer et al 2002). Ao se inocular o sangue de ces

infectados com M. haemocanis em gatos sadios, estes permaneceram assintomticos, mas o sangue desses gatos, quando inoculado em ces, reproduz a doena (Lumb 2001). Em outro experimento, o sangue de gatos infectados com M. haemofelis foi inoculado em gatos suscetveis, em ces esplenectomizados e em ces no esplenectomizados, no resultando em anemia ou bacteremia citologicamente detectvel nesses animais (Splitter et al 1956 e Lumb 2001). Por causa desses resultados e devido morfologia diferente desses dois organismos, alguns autores acreditam que o seqenciamento do gene 16S rRNA pode no ser adequado para diferenciar essas espcies (Sykes 2003). Desde o desenvolvimento da PCR para a deteco dos hemoplasmas hemotrpicos, vrios estudos tm investigado a prevalncia da infeco com Mhm e Mhf em diferentes pases, incluindo frica do Sul (Lobetti e Tasker 2004), EUA (Hackett et al e Eberhardt et al 2006, Ishak et al 2007), Austrlia (Tasker et al 2004), Suia (Willi et al 2006), Reino Unido (Tasker et al 2003) e Japo (Watanabe et al 2003).

Morais et al (2008) descreveram a primeira infeco dupla com Mhf e Mhm, na Amrica do Sul, descrevendo sinais clnicos e anormalidades laboratoriais idnticos s observadas em outras partes do mundo.

1.3. HISTRICO

Em 1942, Clark descreveu uma infeco por Eperythrozoon em um gato anmico na frica do Sul nomeando a espcie de Eperythrozoon felis. Flint & Moss, em 1953, atravs de um mtodo experimental, descreveram nos EUA, um organismo similar causando anemia infecciosa em gatos. Em 1955, Flint e Mc Kelvie sugeriram que esse organismo fosse nomeado de Haemobartonella felis, pois ao contrrio da espcie Eperythrozoon, ele no era visto livremente no plasma, alm de serem identificadas formas anelares do parasito. A H. felis foi ento descrita mundialmente (Anderson & Charleston 1967, Bedford1970, Bobade & Akinyemi 1981, Clark 1942, Espada et al 1991, Flagstad & Larsen 1969, Hatakka 1972, Maede et al 1974, Manusu 1961, Mrljak et al 1995, Prieur 1960, Seamer & Douglas 1959, Thry 1966) embora estudos descrevendo a prevalncia da infeco em gatos de diferentes partes do mundo sejam escassas. A descrio em gatos domsticos no Brasil foi relatada pela primeira vez em 1976 (Massard et al). Em 1993, o microorganismo foi classificado na famlia Anaplasmataceae, na ordem Rickettsiales (Carney e England). Posteriormente, achados moleculares provaram que a H. felis era a causa da anemia infecciosa felina (Berent et al 1998, Cooper et al 1999). Em 1997, a anlise da seqncia do gene 16S rRNA demonstrou que alguns membros dos gneros Hemobartonella e Eperythrozoon pertencem ao gnero Mycoplasma (Neimark e Kogan, Rikihisa et al). Em 1998, alguns estudos tambm documentaram a existncia de diferentes linhagens que podem, em ltima anlise, provar haver espcies diferentes de Haemobartonella (Berent et al 1998, Foley et al 1998, Messick et al 1998, Rikihisa et al 1997). Sendo assim, a Haemobartonella felis foi reclassificada como Mycoplasma haemofelis (Neimark et al 2001).

Para Sykes et al 2003, a reclassificao desses microorganismos como hemoplasmas pode parecer inapropriado inicialmente, com base na sua associao com eritrcitos, pois outros agentes micoplasmas patognicos geralmente esto associados com superfcies mucosas dos tratos respiratrios e urogenital causando, ocasionalmente, doenas artrticas. Mas, acredita que a reclassificao das espcies Haemobartonella e Eperythrozoon como Mycoplasma ir ajudar nos estudos desses organismos no futuro.

1.4 EPIDEMIOLOGIA

Gatos mais jovens do que 6 anos de idade tm maior risco de desenvolver hemoplasmas hemotrpicos, porm, esse risco declina em gatos idosos (Hayes e Priester 1973, Grindem et al 1990, Harrus et al 2002). Acredita-se no haver predileo por raa ou sexo, contudo, parece que os machos so mais propensos a apresentarem a hemoplasmose, devido aos hbitos mais freqentes de ambulao e luta, com maior exposio a gatos infectados por M. haemofelis (Harvey 1998). A freqncia pode tambm ser maior nos meses de primavera e vero, presumivelmente como conseqncia do aumento dos passeios dos gatos para fora de casa (Hayes e Priester 1973). Um resultado positivo no exame de deteco de FeLV e histrico de abscessos tambm tm sido identificados como fatores de risco (Grindem et al 1990). O Mycoplasma haemofelis pode causar anemia primaria em gatos e tambm comumente reconhecido com um patgeno associado s retroviroses, incluindo o vrus da imunodeficincia felina e o vrus da leucemia felina, assim como outras doenas debilitantes (Kociba et al 1983, Bobade et al 1988, Lappin 1995, Grindem et al 1990, Harrus et al 2002, George et al 2002). Estudos indicam o Candidatus Mycoplasma haemominutum como a espcie mais prevalente, seguido pelo Candidatus Mycoplasma turicensis e em seguida M. haemofelis (Willi et al 2006, Sykes et al e Peters at al 2008). Willi et al (2006) detectaram DNA de Mhm e Mhf tanto em gatos saudveis como em gatos doentes, j o Mtc foi detectado somente em gatos doentes.

O modo de transmisso ainda no foi completamente elucidado, mas suspeita-se que ocorra atravs da transferncia de sangue de um gato para outro (Norsworthy 2004). Foi demonstrado que as transfuses de sangue infectado so eficazes na transmisso do microorganismo (Gary et al 2006), mas ainda no est provado que parasitas hematfagos, por exemplo, mosquitos e pulgas, so vetores adequados (Norsworthy 2004). A infeco j foi realizada experimentalmente por injees parenterais de sangue e tambm por administrao de sangue infectado por via oral (Hoskins 1991). Os gatos portadores servem como reservatrios da infeco, uma vez que o M. haemofelis pode ser um organismo comensal em gatos saudveis e a infeco pode resultar em doena aguda quando os gatos infectados so submetidos a condies de estresse ou acometidos por infeces ou doenas concomitantes, como a infeco pelo vrus da leucemia felina, Diabetes melittus, dentre outras (Harvey 1998). Segundo Messick (2003), o M. haemofelis pode desaparecer e reaparecer ciclicamente na superfcie das clulas vermelhas do sangue dos gatos. Em menos de uma hora, mltiplos organismos detectados em eritrcitos infectados podem transformar-se em no detectveis, pois possvel que os organismos alterem os antgenos de superfcie celular permitindo que eles se separem da clula sangunea. A perda da capacidade de aderncia s clulas de seus hospedeiros traz vrios benefcios para o M. haemofelis, contribuindo para a sua sobrevivncia. Ela permite o desenvolvimento de um estado de portador, por mutao ou por sobreposio de certos antgenos superficiais, o que inibe a resposta imune e faz com que o M. haemofelis estabelea uma infeco em outro tipo de clula. O retorno da aderncia nos eritrcitos auxilia em um novo ciclo de infeco, facilitando assim a transmisso do M. haemofelis para um vetor sugador de sangue. Lappin et al (2003), em seu estudo, mostraram que pulgas infectadas com M. haemofelis podem transmitir o parasita e produzir a doena em gatos suscetveis. Entretanto, a transmisso do M. haemominutum por pulgas no foi bem sucedida e os autores sugeriram que o baixo nmero de pulgas usado no estudo poderia ser responsvel por esses achados negativos. (Lappin et al 2003). Para Woods et al (2005), o vetor em potencial para ambos os hemoplasmas de gatos a pulga Ctenocephalides felis. Pereita e Santos (1998) acreditam que, por serem encontradas

comumente nos gatos brasileiros, as pulgas podem servir como vetores da doena na Amrica do Sul.

1.5 PATOGNESE

A hemoplasmose causa um distrbio hemoltico (Harvey e Gaskin 1978), sendo a hemlise classificada primariamente como extravascular. As clulas parasitadas so identificadas como anormais pelo sistema imune e retiradas da circulao sangunea atravs de eritrofagocitose, a qual realizada pelos macrfagos no bao, fgado, pulmes e medula ssea (Norsworthy 2004 e Fighera 2001). Os organismos podem ainda ser retirados dos eritrcitos por um processo denominado corroso (pitting). Em alguns casos, desenvolve-se uma anemia hemoltica imune-mediada secundria infeco, podendo ocorrer hemlise intravascular e, assim, hemoglobinria (Fighera 2001). Diversos mecanismos esto envolvidos no desenvolvimento da anemia, dentre eles destacam-se: 1) leso direta das hemcias, causada pela interao de anticorpos e sistema complemento contra os antgenos de M. haemofelis; 2) hemlise imune-mediada pela exposio de antgenos das prprias hemcias que resultam na produo de anticorpos; 3) eritrofagocitose, na qual hemcias parasitadas so fagocitadas por macrfagos e destrudas no bao; 4) seqestro de hemcias nos pequenos vasos por causa da formao de esfercitos que, por serem menores e pouco deformveis, so destrudos no sistema mononuclear fagocitrio (Harvey 1998). A infeco aguda com M. haemofelis est associada com uma parasitemia massiva dos eritrcitos, causando anemia hemoltica grave e, s vezes, fatal. A anemia associada com a infeco por M. haemofelis tipicamente regenerativa, mostrando anisocitose e policromasia, com um aumento absoluto do nmero de reticulcitos. Contudo, a gravidade da anemia depende do estgio da infeco e o hematcrito pode cair para menos de 20% no pico da parasitemia. A PCR tem sido usada para correlacionar a presena da parasitemia com a doena clnica em gatos que foram experimentalmente infectados com M. haemofelis (Berent et al 1998, Messick et al 1998). Os gatos saudveis que foram infectados experimentalmente com M. haemominutum desenvolveram apenas mnimos sinais clnicos da doena aguda e mudanas hematolgicas

negligenciveis. O hematcrito dos gatos declinou ao longo de todo o curso da infeco, mas nunca abaixo dos valores de referncia para gatos (Foley et al 1998). Foi sugerido que gatos que possuem infeco retroviral pr-existente podem ter um grande risco de se infectarem por hemoplasmas felinos, desenvolvendo sinais de anemia mais graves do que gatos infectados apenas com o parasita (Nash e Bobade 1986, Grindem et al 1990, Lappin 1995, Harrus et al 2002, Hartmann et al 2001, George et al 2002, Inokuma et al 2004). Sendo assim, gatos que esto co-infectados com hemoplasma e retrovrus apresentam risco maior de desenvolver linfoma, leucemia e sndrome da imunodeficincia adquirida (Priester e 1973; Cotter et al 1975; Bobade et al 1988; George et al 2002; Harrus et al 2002). A infeco crnica por M. haemofelis pode promover transformaes neoplsicas das clulas hematopoiticas em gatos infectados por FeLV (Figura 2). tambm importante reconhecer que apesar de uma intensa resposta imunolgica ou tratamento com antibitico, os gatos infectados tanto com M. haemofelis ou M. haemominutum provavelmente ainda sero portadores crnicos do parasita (Messick 2003).

Figura 2: Precursores imaturos de clulas eritrides em um gato portador do vrus para leucemia viral felina. Notar os parasitas epicelulares nos eritrcitos. Fonte: Messick (2003).

1.6 SINAIS CLNICOS

Os sinais clnicos observados incluem letargia, anorexia, febre e anemia, tanto em gatos infectados naturalmente e como experimentalmente. Em geral, a temperatura retal normal, exceto na fase aguda, quando se encontra aumentada e, na fase terminal da doena, pode ainda se apresentar diminuda (Hagiwara 2003). Entretanto, a pirexia normalmente intermitente e o animal pode apresentar picos febris que ocorrem quando o nmero de parasitas maior na circulao perifrica. A esplenomegalia e a ictercia so causadas principalmente pela hemlise intravascular e podem ser vistas ocasionalmente (Messick 2003). O exame fsico revela mucosas plidas ou ictricas, aumento do esforo ventilatrio (especialmente em situao de estresse), sopro cardaco sistlico suave, taquicardia, taquipnia e esplenomegalia palpvel (Norsworthy 2004; Grace 2004). A infeco pode ser assintomtica na doena subclnica, de forma que os animais apresentem apenas uma anemia discreta. Os sintomas esto na dependncia do estado da doena e da rapidez com que se desenvolve a anemia. Se a anemia se desenvolver gradualmente, o gato pode exibir perda de peso, mas se mantm vivaz e alerta. Ao contrrio, a diminuio precoce e acentuada do hematcrito, em associao com a parasitemia grave, pode causar pouca diminuio do peso corporal, mas uma marcante depresso mental (Hagiwara 2003).

1.7 DIAGNSTICO

Os achados hematolgicos so de anemia hemoltica com intensa regenerao, resultando em uma anemia macroctica hipocrmica. Evidencia-se policromasia e anisocitose excessivas, presena de grande quantidade de corpsculos de Howell-Jolly e precursores eritrides nucleados (metarrubrcitos e rubrcitos). O plasma mostra-se ictrico, podendo raramente apresentar-se avermelhado, em virtude de eventual hemlise intravascular. Quando

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ocorre o desenvolvimento da anemia hemoltica imune-mediada, podemos encontrar esfercitos em grande quantidade, bem como eritrofagocitose (Fighera (2001). O mtodo mais comumente usado para o diagnstico definitivo da hemoplasmose a verificao dos organismos na superfcie dos eritrcitos durante o exame microscpico de um esfregao sanguneo de bem confeccionado (Butt 1990). O microorganismo encontrado ao redor da periferia do eritrcito, podendo estar sozinho, em pares ou em cadeias nas infestaes graves (Figura 3). Na avaliao da hematoscopia, o parasita encontra-se em forma de anel, basto ou pequenos pontos formando cadeias. importante salientar que esses no devem ser confundidos com precipitados de protena, debris que se depositam no fundo da lmina ou artefatos (VanSteenhouse et al 1993). Estes se diferenciam dos hemoplasmas por apresentarem bordas irregulares e aparecerem com menor colorao quando os eritrcitos esto focados no microscpio (Tasker e Lappin 2002). Os M. haemofelis tambm devem ser diferenciados de outras incluses eritrocitrias, como por exemplo, os corpsculos de Howell-Jolly, que so encontrados constantemente em qualquer anemia regenerativa (Hahn 1999) e representam resqucios de ncleo eritrocitrio, os quais podem ser diferenciados do M. haemofelis simplesmente por apresentarem maior tamanho (Figura 4) (Bobade e Nash 1987, Small e Ristic 1967).

Figura 3: Esfregao sanguneo demostrando a presena de M. haemofelis em aproximadamente 50% dos eritrcitos. Fonte: Tasker e Lappin (2002).

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Figura 4: Esfregao sanguneo demostrando a presena de M. haemofelis em aproximadamente 65% dos eritrcitos. Formas anelares de M. haemofelis so visveis (setas grandes). Corpsculos de Howell-Jolly, que se apresentam maiores e mais densos, podem ser vistos para comparao (setas menores). Fonte: Tasker e Lappin (2002).

diagnstico

de

hemoplasmose

pode

ser

firmado

quando

encontrarmos

microorganismo juntamente com sinais clnicos e a presena de anemia regenerativa. O M. haemofelis observado em muitos gatos assintomticos, portanto, a simples presena desse microorganismo no esfregao sanguneo no deve resultar em um diagnstico de hemoplasmose. Quando o microorganismo identificado, alm de associar o diagnstico aos sinais clnicos do paciente, deve-se investigar alguma causa adjacente, pois a hemoplasmose pode ocorrer secundariamente outra doena ou um evento gerador de estresse (Grace 2004). Os microorganismos se destacam das hemcias quando o sangue preservado com anticoagulante. Por esta razo, recomenda-se a confeco do esfregao com sangue fresco, imediatamente aps a sua colheita (Hagiwara 2003, Alleman et al 1999). A sbita ausncia da parasitemia detectvel atribuda rpida depurao das hemcias parasitadas por macrfagos no bao, fgado e medula ssea (GAUNT 2000), o que contribui para a anemia progressiva. A menos que os parasitas estejam presentes na circulao sangunea, praticamente impossvel diferenciar hemoplasmose de anemia hemoltica auto-imune (Harvey 1998), j que o teste de Coombs pode ser positivo na fase aguda e negativo na fase crnica (Hagiwara 2003). Devemos proceder a contagem de reticulcitos (eritrcitos imaturos) circulantes sempre que o hematcrito estiver menor que 20 %, para que possa ser avaliada a resposta da medula

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ssea anemia (Grace 2004). A contagem de reticulcitos fica substancialmente aumentada, a menos que ela tenha sido feita imediatamente aps uma queda abrupta no volume globular, ou se existe concomitantemente alguma doena supressora da medula ssea. Depois da hemlise, devero transcorrer quatro a seis dias para que aumente a contagem de reticulcitos (Norsworthy 2004). Podem estar presentes dois tipos de reticulcitos. Os reticulcitos agregados refletem mais uma resposta regenerativa recente, pois contm numerosos aglomerados de ribossomos que se coram intensamente de azul, enquanto que reticulcitos pontilhados contm pequenos aglomerados de material ribossmico (Grace 2004). A presena de reticulcitos agregados o indicador mais confivel de uma resposta regenerativa recente, sabendo-se que diante de uma anemia grave, que estimule a produo de eritrcitos, h a presena de 0,5% a 5% de reticulcitos agregados (Grace 2004). Eritrcitos nucleados circulantes no indicam resposta regenerativa, a menos que estejam acompanhados por aumento da contagem de reticulcitos. As causas do aparecimento de eritrcitos nucleados circulantes na ausncia de anemia regenerativa so neoplasia, leso hipxica ou txica da medula ssea, intoxicao por chumbo e esplenomegalia (Grace, 2004). Cerca da metade de todos os gatos com hemoplasmose clnica so positivos para FeLV. Embora se saiba que a infeco por FeLV suprime a imunidade e predispe gatos a diversas doenas infecciosas, o oposto tambm pode ser verdade. Estudos experimentais demonstram que a hemoplasmose pode predispor gatos infeco por FeLV (Norsworthy 2004). Na avaliao bioqumica, destacam-se os altos nveis de bilirrubina, principalmente em sua frao no-conjugada (indireta), e o aumento da atividade da alanina aminotransferase, decorrentes da necrose heptica secundria anemia aguda e hipxia decorrente. Em casos mais raros, nos quais ocorre um componente hemoltico intravascular, podemos ter aumento da uria e creatinina, pela ao txica que a hemoglobina exerce no nfron (Grauer e Lane 1995). Devido dificuldade de cultivo do M. haemofelis, at recentemente o diagnstico da infeco era primariamente baseado na identificao citolgica dos organismos na superfcie das clulas sanguneas vermelhas. Entretanto, h vrios fatores que resultam em casos falso-positivos e falso-negativos quando se utiliza esse mtodo de diagnstico (Tasker e Lappin, 2002). O teste

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da Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) conhecido por ser mais sensvel do que a citologia para o diagnstico e permite a diferenciao das duas espcies de hemoplasmas (Berent et al., 1998; Foley et al., 1998; Westfall et al., 2001), sendo atualmente o teste de escolha para o diagnstico da infeco por M. hemofelis por ser comercialmente vivel em muitos laboratrios

da Amrica do Norte. A disponibilidade de um teste de diagnstico sensvel tem permitido estudos mais precisos, inclusive para se avaliar a eficcia do tratamento (Tasker e Lappin, 2002). O exame da Reao em Cadeia da Polimerase (PCR) uma tcnica molecular sensvel que permite a amplificao de um fragmento particular de DNA de um microorganismo (Messick 2003). A amplificao do gene 16S do DNA ribossmico a base para todos os ensaios de PCR desenvolvidos at hoje para a deteco de hemoplasmas hemotrpicos (Foley et al 1998, Berent at al 1998, Messick 1998, Jensen et al 2001). Dois ensaios distintos baseados na PCR so utilizados para detectar a infeco no gato: um ensaio detecta M. haemofelis, e outro detecta C. M. haemominutum (Messick 2003). A PCR que foi desenvolvida para a deteco do M. haemofelis (Berent at al 1998) tambm detecta o parasita canino M. haemocains (Brinson e Messick 2001). Jensen e colaboradores desenvolveram, em 2001, um nico teste de PCR para a deteco de ambas as espcies de hemoplasmas hemotrpicos que infectam gatos. Braddock, J.A.; Tasker, S.; Malik R. (2004) relataram pela primeira vez a utilizao de uma PCR em tempo real para a confirmao do diagnstico de infeco por M. haemofelis e para quantificar a resposta a um tratamento em gatos infectados naturalmente. Para chegar-se a um diagnstico, deve-se associar a visualizao de organismos em um esfregao sanguneo, a presena de um elevado nmero de cpias de M. haemofelis quantificados por PCR e a identificao de uma grave anemia regenerativa com uma resposta ao tratamento com doxiciclina, pois resultados positivos da PCR para M. haemofelis tm sido relatados em gatos saudveis assintomticos (Tasker et al 2003a). A eficincia do tratamento obtida com um resultado negativo na PCR obtido 383 dias aps o trmino do tratamento de 42 dias com doxiciclina. Existe a possibilidade de um resultado falso-negativo quando os microorganismos so seqestrados em rgos como o bao e os pulmes, pois desse modo, a PCR do sangue perifrico produz um resultado negativo (Tasker et al 2003b).

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Recentemente, um estudo realizado por Peters et al (2008) mostrou que possvel desenvolver um teste de PCR espcie-especfico para hemoplasmas felinos, baseado na seqncia 16S do DNA ribossmico do microorganismo, duplicado com um ensaio de controle interno baseado no 28S do DNA ribossmico felino. Essa foi a primeira descrio desse tipo de ensaio para o diagnstico de infeces por hemoplasmas felinos (Peters et al 2008). Os testes descritos anteriormente (Tasker at al 2003, Willi et al 2005, Willi et al 2006) no tinham includo uma avaliao de controle interno. A vantagem do uso de um ensaio de controle interno que ele permite a confirmao de que a amostra contm DNA amplificado e que os fatores inibitrios da PCR no esto presentes. Alm disso, a utilizao de um teste de controle interno em uma duplicao permite a confirmao de que a amostra foi adicionada reao. O sangue contm uma srie de potenciais inibidores de PCR (Al-Soud and Radstrom 2001) e embora alguns, como a hemoglobina, possam ser visveis no DNA extrado, outros podero ser incolores e sua presena impossvel de detectar sem a utilizao de um teste de controle interno (Peters et al 2008).

1.8 TRATAMENTO

As medicaes recomendadas pela literatura incluem tetraciclina na dosagem de 20 mg/Kg a cada 8 horas, por via oral, durante 21 dias (Harvey 1998), cujos efeitos colaterais incluem principalmente febre. A tetraciclina no elimina totalmente o microorganismo, e desta maneira, os animais recuperados permanecem infectados de forma crnica, o que pode ser verificado pela PCR (Berent et al 1997, Gaunt 2000). Outra medicao de escolha a doxiciclina , na dosagem de 5 a 10 mg/Kg a cada 12 ou 24 horas, por via oral, durante 21 dias (Berent et al 1998, Foley et al 1998). O efeito colateral mais observado foi irritao da mucosa gastrointestinal, resultando em desconforto abdominal, vmito e anorexia em gatos e ces (Melendez et al 2000). Foram relatados casos de formao de
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estenose esofgica aps a administrao oral de comprimidos de doxiciclina. (McGrotty e Knottenbelt 2002, Melendez et al 2000), devido esofagite e posterior fibrose que o medicamento causa no local. Para minimizar esse efeito, sugere-se a administrao da medicao antes de uma
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Tetraciclina Schering-Plough, Cotia So Paulo Doxiciclina Univet, So Paulo SP

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refeio ou seguida por um pequeno volume de gua dado atravs de uma seringa, por via oral, para encorajar o felino a engolir completamente o comprimido. Vrios gatos infectados experimentalmente tiveram episdios recorrentes dos sinais clnicos e apresentaram resultados laboratoriais anormais, incluindo parasitemia e anemia aps o tratamento com doxiciclina (Foley et al 1998). Outros antibiticos anti-hemoplasmas, incluindo enrofloxacina e azitromicina , tm sido propostos para o tratamento da hemoplasmose (Winter 1993, Westfall et al 2001). O uso da enrofloxacina, na dosagem de 5 a 10 mg/Kg a cada 24 horas, por via oral, durante 14 dias, foi considerado igual ou superior doxiciclina no tratamento de infeces por hemoplasmas em gatos (Dowers et al 2002). A sua freqncia de utilizao de uma vez ao dia e a baixa incidncia de efeitos adversos tornam seu uso atrativo (Dowers et al 2002). Cegueira aguda e irreversvel e degenerao de retina tm sido relatadas em gatos tratados com enrofloxacina, entretanto, a prevalncia dessa toxicidade desconhecida (VanSteenhouse et al 1993). Tem sido demonstrado que a azitromicina controla surtos de infeces no trato respiratrio por hemoplasmas em humanos, mas foi ineficaz como tratamento os parasitas de eritrcitos na dosagem de 15 mg/kg, por via oral, com intervalos de 12 horas (Wesfall et al 2001). Estudos tambm demonstraram que a administrao de diproprionato de imidocarb na dose de 5 mg/kg, por via intramuscular, duas vezes por semana, tanto em gatos com M. haemofelis como em gatos com M. haemominutum no efetiva em deixar o animal livre da infeco. (Lappin et al 2002). Deste modo, o tratamento com doxiciclina ou enrofloxacina pode controlar efetivamente a infeco aguda nos gatos, mas nenhum dos antibiticos testados at hoje conseguem curar o paciente de forma consiste (Messick 2003). Norsworthy (2004) preconiza ainda o confinamento em gaiolas para minimizar o estresse em gatos anmicos e a transfuso de sangue total em gatos que apresentam volumes globulares abaixo de 15%, lembrando apenas que os eritrcitos transfundidos tambm esto sujeitos ao
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3 4

Baytril Bayer, So Paulo - SP Zitrex Cepav, So Paulo - SP 5 Imizol - Schering-Plough, Cotia So Paulo

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parasitismo. O autor sugere ainda o uso de prednisolona na dose de 1 a 2 mg/kg, por via oral, a cada 8 ou 12 horas, para reduzir a eritrofagocitose, estimular a medula ssea e aumentar o apetite, no esquecendo do apoio nutricional com alimentao por sonda orogstrica ou nasogstrica A administrao de sangue total, na dosagem de 2 a 3 mL/Kg por hora, com dose mxima de 30 ml/kg pode ser uma medida til em gatos com anemia intensa. Contudo, apenas o uso do hematcrito como indicador da necessidade de transfuso pode ser errneo, pois muitos gatos com anemia crnica grave mostram-se relativamente estveis. A presena de hemlise ou hemorragia aguda justifica uma transfuso sangnea se o hematcrito estiver menor que 20% (Grace 2004).

1.9. PROGNSTICO

O prognstico para a hemoplasmose felina geralmente bom se a crise anmica puder ser rapidamente revertida. Porm, alguns gatos sofrem anemias fatais em decorrncia de

baixssimos volumes globulares. O estado de portador que freqentemente ocorre deixa o gato susceptvel recidiva. Esse gato no deve doar de sangue, mas considerado como nocontagioso para outros gatos, mesmo sendo portador (Norsworthy 2004).

Predi-Medrol Unio Qumica, Pouso Alegre MG

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2. RELATO DE CASO

Um animal da espcie felina, sem raa definida, fmea, com aproximadamente seis anos de idade, pesando 2,3 Kg foi atendido na Clnica Veterinria A Casa do Snoopy, em Porto Alegre Rio Grande do Sul. O animal apresentava anorexia, emagrecimento e apatia h cerca de dois meses. Ela era proveniente de um stio que abrigava cerca de 60 gatos, todos recolhidos da rua, castrados, alimentados com alimento super Premium e tratados h nove meses contra endo e ectoparasitas. O exame clnico revelou mucosas plidas. desidratao, desnutrio, fraqueza, taquipnia e esplenomegalia. O animal foi submetido oxignio-terapia por vinte minutos por causa da dificuldade respiratria e recebeu fluidoterapia intravenosa com 150 ml durante 2 horas de Soluo de cloreto de sdio a 0,9% como tratamento emergencial. Aps este perodo, a gata j estava um pouco mais ativa e respirava melhor, demonstrando inclusive aumento do apetite. Os exames hematolgicos mostraram grave anemia regenerativa macroctica
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normocrmica, leucocitose com desvio esquerda, trombocitopenia, plasma ictrico e presena de Mycoplasma haemofelis na avaliao da hematoscopia (ANEXO 1). O exame ultra-sonogrfico evidenciou esplenomegalia, presena de gs no estmago, linfonodos mesentricos

hipoecognicos e aumentados, hepatomegalia e presena de lquido abdominal livre. O proprietrio declinou em realizar a pesquisa de anticorpos para o vrus da imunodeficincia felina e antgenos para o vrus da leucemia viral felina por razes financeiras. Devido ao resultado do eritrograma, o paciente foi hospitalizado e submetido a uma transfuso sangunea de 40 mL de sangue. Durante os quinze dias seguintes, o paciente recebeu 50 mL/kg/dia de fluidoterapia endovenosa com Soluo de cloreto de sdio a 0,9% adicionada de 0,2 ml/Kg/dia de um complexo vitamnico
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a base de cianocobalamina, cloridrato de tiamina, cloridrato de piridoxina,

nicotinamida, pantotenato de clcio, frutose, cloridrato de L-arginina, acetil metionina, aspartato de potssio, aspartato de magnsio e selenito de sdio, at comear a se alimentar sozinha.
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Cloreto de Sdio 0,9% - Basa Indstria Farmacutica, Caxias do Sul - RS Bionew - Vetnil, Louveira - SP

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Como tratamento especfico foi utilizado doxiciclina, na dosagem de 5 mg/Kg a cada 12 horas, por via oral, durante 15 dias, quando ento a formulao injetvel foi substituda pela oral na mesma dosagem, durante mais 7 dias. Tambm foi instituda terapia com acetato de metilprednisolona, na dose de 40 mg/gato, por via via intra-muscular, em dose nica. Foi realizado novo hemograma para acompanhamento do paciente, no qual ainda se observou anemia regenerativa e plasma ictrico, mas no havia mais hemoparasitas visveis na hematoscopia e o leucograma se encontrava dentro dos valores de normalidade para a espcie (ANEXO 2). Aps este resultado, a gata recebeu alta hospitalar para a manuteno do tratamento em casa. Aps 31 dias foi trazida para reviso. Apresentava-se mais disposta, com mucosas rosadas, bom apetite, mostrando-nos que o tratamento surtiu efeito.

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3.0. DISCUSSO E CONCLUSO

Os sinais clnicos apresentados pelo animal relatado neste trabalho esto de acordo com os descritos em literatura (Hagiwara 2003, Norsworthy 2004, Grace 2004). Atravs deles e dos resultados dos exames laboratoriais, que demonstraram uma anemia regenerativa e a presena do hemoplasma no esfregao sanguneo, podemos concluir o diagnstico definitivo de hemoplasmose, o que nos fez optar pelo tratamento indicado pelos autores, com doxicilcina e prednisolona, alm do tratamento de suporte (Berent et al 1998, Foley et al 1998). Entretanto, no foi verificado aumento de temperatura corporal no paciente, provavelmente porque a pirexia intermitente e o animal pode apresentar picos febris, os quais ocorrem quando h um alto nmero de parasitas na circulao perifrica (Messick 2003). Apesar da PCR ser mais especfica para a identificao do microorganismo causador da hemoplasmose felina (Messick 2003, Tasker et al 2003a), h restrio do acesso a este exame na cidade em que ocorreu o caso relatado. O diagnstico foi ento realizado com base na identificao do hemoplasma no esfregao sanguneo, juntamente com os sinais clnicos e histrico do animal (Grace 2004, ). A PCR seria indicada para confirmar a infeco e identificar a espcie envolvida (Brinson e Messick 2001, Peters et al 2008). O teste imunoenzimtico para a deteco dos vrus da imunodeficincia felina e da leucemia viral felina tambm so indicados nestes casos para verificar se no havia doena imunodepressora concomitante (Norsworthy 2004), mas infelizmente este no foi realizado, pois a proprietria declinou por questes financeiras. O tratamento do paciente foi baseado nos achados clnicos e laboratoriais. No foram identificados efeitos colaterais, como esofagite, por exemplo, mesmo aps o tratamento oral (Melendez et al 2000). O uso da metilprednisolona objetivou evitar a eritrofagocitose conforme indicao de Norsworthy (2004).

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Aps o acompanhamento clnico da paciente, conclumos que o tratamento escolhido foi eficaz, visto que o animal apresentou-se clinicamente saudvel aps 21 dias de tratamento. Devido elevada casustica de animais portadores de anemias serem atendidos na clnica mdica de pequenos animais, torna-se imprescindvel a melhor compreenso dos aspectos epidemiolgicos desta enfermidade, assim como seus mtodos diagnsticos e formas de tratamento. Embora o modo de transmisso da hemoplasmose ainda no esteja completamente elucidado, a infesto por pulgas deve ser prevenida em gatos por causa da grande suspeita de seu envolvimento como vetor da doena. Como esta infeco bastante frequente em felinos e seu tratamento eficaz, a hemoplasmose deve ser sempre lembrada como diagnstico diferencial nos casos de anemia nesta espcie.

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ANEXO 1

Hemograma: Eritrcitos Hemoglobina Hematrcito(VG) VGM CHGM Leuccitos Neutrfilos - Ncleo em basto Neutrfilos - Ncleo Segmentado Eosinfilos Linfcitos Moncitos ALT (TGP) Fosfatase Alcalina Creatinina GGT Contagem de plaquetas Observaes : Plasma ictrico

Valores de Referncia 1,95 milhes/mm3 5,0 9,5 3,8 g/mm3 8 16 10% 28 45 51,28 U 39 - 55 38% 32 35 23600 mm3 6000 17000 1% - 236/mm3 0282% - 19352/mm3 40- 75 3% - 708/mm3 1 12 8% - 1888/mm3 20 50 6% - 1416/mm3 15 26,1 U/l 40 U/l 0,48 6 (1,3 -5,1) 107,250 (300.000 - 800.000) Fonte: Laboratrio Petlab

Pesquiza de hemocitozorios: presena de Mycoplasma haemofelis

ANEXO 2

Hemograma: Eritrcitos Hemoglobina Hematrcito(VG) VGM CHGM Leuccitos Neutrfilos - Ncleo em basto Neutrfilos - Ncleo Segmentado Eosinfilos Linfcitos Moncitos Observaes : Plasma ictrico.

3,89 milhes/mm3 6,6 g/mm3 17% 43,7 U 38,82% 13900 mm3 80% - 11120/mm3 3% - 417/mm3 14% - 417/mm3 3% - 417/mm3

Pesquisa de hemocitozorios: No foram observados hemoparasitas na amostra enviada.

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