Dissertação MIEQ

Joana Serra e Moura Pacheco Mendes
Sntese de hidrogis de base acrlica recorrendo a tcnicas de polimerizao radicalar viva. Potencial aplicao como frmacos polimricos.
Dissertao na rea cientfica de Engenharia Qumica, orientada pelo Doutor Jorge Fernando Jordo Coelho, pelo Doutor Armnio Coimbra Serra e pela Mestre Patrcia Vitorino Mendona apresentada ao Departamento de Engenharia Qumica da Faculdade de Cincias e Tecnologia da Universidade de Coimbra. Julho 2011
Joana Serra e Moura Pacheco Mendes
Sntese de hidrogis de base acrlica recorrendo a tcnicas de polimerizao radicalar viva. Potencial aplicao como frmacos polimricos.
Dissertao na rea cientfica de Engenharia Qumica, orientada pelo Doutor Jorge Fernando Jordo Coelho, pelo Doutor Armnio Coimbra Serra e pela Mestre Patrcia Vitorino Mendona apresentada ao Departamento de Engenharia Qumica da Faculdade de Cincias e Tecnologia da Universidade de Coimbra. Julho 2011
AGRADECIMENTOS um sempre uma mais valia aprender com especialistas. Assim, agradeo desde j ao Professor Doutor Jorge Coelho e ao Professor Doutor Armnio Serra, que me orientaram neste trabalho. Um agradecimento muito especial Mestre Patrcia Mendona pela pacincia, incansvel disponibilidade, apoio, dedicao, e por todo o conhecimento transmitido, vital realizao das minhas tarefas. Agradeo tambm a todos os membros do laboratrio de polmeros do Departamento de Engenharia Qumica pela forma como me receberam, pelo ambiente fantstico que proporcionaram e por estarem sempre disponveis a ajudar. Para finalizar, e no esquecendo os que me so prximos, um Muito Obrigado a toda a minha famlia e amigos pelo apoio e pacincia que demonstraram nestes ltimos meses.
II
MOTIVAO Os mtodos de polimerizao radicalar viva (LRP) tm emergido nos ltimos anos como estratgias para a obteno de novos polmeros, nomeadamente quando se pretendem materiais com controlo sobre a estrutura molecular do polmero, a composio, a arquitetura, o peso molecular e a polidispersidade. Em LRP as cadeias polimricas do polmero produzido tm ainda sempre presente um grupo ativo na terminao da cadeia, o que possibilita que seja facilmente reiniciado com adio de monmero, ou funcionalizado com grupos finais especficos. Deste modo, atualmente possvel sintetizar novos materias por via radicalar, que de alguma forma apresentem caractersticas e propriedades mais adequadas funo a que se destinam. Os agentes sequestradores de cidos biliares (BAS) so frmacos polimricos constitudos por hidrogis catinicos que so capazes de se ligarem aos cidos biliares presentes no intestino, a fim de impedir a sua reabsoro para o fgado. Atualmente esto disponveis no mercado trs tipos de agentes BAS a Colestyramine, o Colestipol e o Colesevelam. O processo de produo destes frmacos envolve a formao de um polmero, por polimerizao radicalar livre, a sua reticulao para formar um hidrogel e, em certos casos, a alquilao que transforma os grupos NH2, presentes nas cadeias, por aminas quaternrias, para induzir a carga positiva para sequestrar os cidos biliares. Tendo em conta a estrutura qumica dos cidos biliares presentes no organismo (ncleo hidrofbico e segmento hidroflico com propriedades aninicas no pH do intestino), a sntese de um BAS tem de ter em conta um balano entre as cargas catinicas (que asseguram as interaes electroestticas), os segmentos hidrofbicos (que estabilizam o hidrogel e asseguram as interaes hidrofbicas) e a parte hidroflica e grau de reticulao (que asseguram as caractersticas de inchao adequadas). Uma desvantagem dos materiais utilizados como frmacos polimricos muitas vezes a sua baixa eficincia teraputica, pois so necessrias elevadas doses de frmaco para produzir os efeitos desejveis. O Colesevelam , de entre os frmacos comerciais, o mais utilizado como BAS. A base polmerica sintetizada com recurso a tcnicas de polimerizao radicalar livre, onde no h qualquer controlo sobre a estrutura molecular do polmero, a composio, a arquitetura, o peso molecular e o ndice de polidispersidade. Sabe-se que a estrutura destes materiais est intimamente ligada sua eficincia teraputica. neste mbito que surge a motivao deste trabalho, a sntese de hidrogis, recorrendo a tcnicas de polimerizao radicalar viva. Deste modo, ser possvel desenvolver polmeros com estrutura controlada, que podero conduzir ao desenvolvimento de materiais mais eficientes para a aplicao em causa e assim analisar a influncia da estrutura do polmero no desempenho do BAS.
III
ABSTRACT The main goal of this work was the synthesis of hydrogels by living radical polymerization for pharmaceutical applications, namely bile acid sequestrants. To accomplish that, the work was focused in the living radical polymerization use of different polymer backbones that could act as bile acids sequestrants. In addition, it was intended to studytheir properties and test their cross-linking ability in order to produce hydrogels that can substitute the current commercially available bile acid sequestrant agents, namely the Colesevelam. The first step of this work was focused on the synthesis of the poly(allylamine) hydrochloride, which is the polymer back bone of Colesevelam, by free radical polymerization. The methodology adopted was based on the procedures described in the patent of the commercial bile acid sequestrant. However, it was not possible to reproduce the results reported in the patent, since the final product obtained was an oil and not a powder form. In order to figure out the real procedure, different experimental conditions were studied, such as the increase of the reaction temperature and the addition of a different initiator with a smaller half-life than that indicated in the patent. In the case where only the initiator was changed, no modification of the polymer final form was observed. On the other hand, for the reaction at higher temperature (80 C) it was possible to obtainpolymer in powder form, as described in the patent. The cross-linking of the synthesized polymerswas tested by using epichlorohydrin, 1,4-butanediol diglycidyl ether and 1,2- ethanediol diglycidyl ether as cross-linking agents, as indicated in the patent. However, once again, it was not possible to reproduce the results reported. For this reason newexperiments were performed using higher amounts ofcrosslinking agents (975%), leading to the formation ofa hydrogel just in one of the studied formulations. Concerning the living radical polymerization, three different monomers (hydroxyethyl acrylate, hydroxyethyl methacrylate and allylamine) were tested as candidates for the preparation of new bile acid sequestrants backbones. The catalytic system used was Fe(0)/CuBr2/Me6TREN, whichwas developed in the Department of Chemical Engineering of the University of Coimbra (DEQ-FCTUC). Due to the low polydispersityobtained for poly(hydroxyethyl methacrylate)and the fact that this polymeriswidely used biomedical applications because of its high biocompatibility, kinetic studies were carried out using different reaction conditions. For the systems studied it was possible to achieve good control over polymers molecular weight, in reaction at room temperature. The results obtained suggest that the catalytic system developed in DEQ-FCTUC is suitable for the controlled polymerization of water-soluble monomers that are good candidates for bile acid sequestrant polymers production. IV
RESUMO Este trabalho teve como tema principal a sntese de hidrogis com base em tcnicas de polimerizao radicalar viva, para possveis formulaes de frmacos sequestradores de cidos biliares. Assim, o objetivo deste trabalho focou-se na sntese por polimerizao radicalar viva de polmeros que pudessem ser usados como sequestradores de cidos biliares, estudar as propriedades dos polmeros resultantes e testar a sua reticulao para formulaes de hidrogis que substituam os atuais agentes sequestradores de cidos biliares, nomeadamente o Colesevelam. A primeira etapa do trabalho centrou-se na sntese do polmero que est na base do Colesevelam, a polialilamina, por polimerizao radicalar livre. A metodologia adoptada para este fim teve por base os procedimentos descritos na patente do Colesevelam. No entanto, no foi possvel reproduzir os resultados da patente em termos de forma do polmero final, obtendo-se um leo em vez de um produto em p. Assim, foram estudadas algumas alternativas ao nvel das condies operatrias, como o aumento de temperatura de reao e a adio de um iniciador com menor tempo de meia vida que o indicado na patente. No processo em que se simulou apenas a substituio do iniciador, no houve alteraes na forma de obteno do polmero final. No entanto, para a reao a elevada temperatura (80 C) verificou-se a obteno de um polmero em p, tal como descrito na patente do Colesevelam. Para todos polmeros produzidos testou-se a reticulao com epicloridrina, com ter diglicdico do 1,4-butanodiol e com ter diglicdico do 1,2-etanodiol tal como indica a patente mas, mais uma vez, no foi possvel obter os mesmos resultados. Assim fizeram-se novos testes de reticulao para grandes quantidades de agente (975 %), obtendo-se um hidrogel apenas para uma das formulaes. No que respeita polimerizao radicalar viva, utilizou-se o sistema cataltico Fe(0)/CuBr2/Me6TREN desenvolvido nos laboratrios do DEQ/FCTUC, na polimerizao de trs monmeros (o hidroxietil acrilato, o hidroxietilo metacrilato e a alilamina) como possveis candidatos a substitutos do Colesevelam. Uma vez que se obtiveram baixas polidispersividades para o poli (hidroxietil metacrilato), e sendo este amplamente usado em aplicaes biomdicas devido sua alta biocompatibilidade, efetuou-se um estudo cintico da reao de polimerizao usando diferentes condies de reao. Para os sistemas estudados obteve-se controlo sobre o crescimento das cadeias do polmero em reaes ocorridas temperatura ambiente. Os resultados obtidos sugerem que o sistema cataltico desenvolvido nos laboratrios DEQ/FCTUC adequado polimerizao controlada de monmeros solveis em gua, conduzindo sntese de polmeros a serem usados como sequestradores de cidos biliares. V
LISTA DE SIGLAS
AAPH AlA ANT ARGET ATRP BAS D2 O d6DMSO DCT DEQ/FCTUC DMF DMSO DP DV EBiB FRP GPG HEA HEMA ka kd kex kp kt LRP MALDI-TOF Me6TREN Mn Mn
GPC
Azobis(amino propano dihidrocloreto) Alilamina Akzo Nobel Trigonox 187 w-40 Activators regenerated by electron transfer - Ativadores regenerados por transferncia de eletro Atom transfer radical polymerization Polimerizao radicalar por transferncia de tomo Sequestrador de cidos biliares gua deuterada Dimetil sulfxido deuterado Iodine transfer polymerization polimerizao por transferncia de tomo de iodo Departamente de Engenharia Qumica/Faculdade de Cincias e Tecnologia da Universidade de Coimbra Dimetil formamida Dimetil sulfxido Degree of polymerization - Grau de polimerizao Viscosmetro diferencial Etil !-bromoisobutirato Free radical polymerization - Polimerizao radicalar livre Gel permeation chromatography cromatografia de permeao em gel Hidroxietil acrilato Hidroxietilo metacrilato Constante de velocidade de ativao Constante de velocidade de desativao Constante de velocidade de transferncia de cadeia degenerativa Constante de velocidade de de propagao Constante de velocidade dede terminao Living radical polymerization - Polimerizao radicalar viva Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionisation - Time Of Flight Mass Spectrometry Tris[2-(dimetilamino)etil]amina Peso molecular mdio numrico [g/mol] Peso molecular mdio numrico determinado por cromatografia permeao em gel [g/mol] Peso molecular mdio numrico terico [g/mol] Peso molecular mdio ponderal [g/mol] Polidispersividade Poli(alilamina) Poli (clorohidrato alilamina) Indce de polidisperssividade Poli hidroxietil acrilato Poli hidroxietil metacrilato Persistent radical effect - efeito do radical persistente Reversible addition-fragmentation chain transfer transferncia de cadeia reversvel por adio-fragmentao Right-angle laser-light scattering ndice de refrao Reverse iodine transfer polymerization polimerizao reversvel por transferncia de tomo de iodo Ressonncia magntica nuclear Stable Free Radical Polymerization - Polimerizaoo radicalar por radical estvel 2,2,6,6-Tetramethylpiperidinyl-1-oxy Tris (2-aminoetil)amina Espectroscopia Ultravioleta-Visvel
Mnterico Mw Mw/Mn PAlA PAlAH PDI PHEA PHEMA PRE RAFT RALLS RI RITP RMN SFRP TEMPO TREN UV -Vis
VI
INDCE
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VII
2.3.7. 2.3.8.
Sntese de hidrogis ...................................................................................................................... 38 Reticulao com epicloridrina ................................................................................................................. 39 Reticulao com ter diglicdico do 1,4-butanodiol ....................................................................... 39 Reticulao com ter diglicdico do 1,2-etanodiol .......................................................................... 39 Testes de Inchao (Swelling) ..................................................................................................... 40 Preparao da soluo tampo fosfato a pH 6 .................................................................................. 40
Seco III - Resultados e Discusso ......................................................................................................... 41 3.1. 3.2. 3.2.1. 3.2.2. Polimerizao radicalar livre Colesevelam. ...................................................................... 42 Polimerizao radicalar viva (LRP) ........................................................................................ 45 Sntese de PHEA, PHEMA e PAlA por LRP .............................................................................. 46 Estudo cintico da LRP catalisada por metais de PHEMA ............................................... 56 Estudo cintico de reao tpica de LRP de HEMA. V0HEMA/VDMSO = 2/1, DP = 222 e Estudo cintico de reao de LRP de HEMA. Variao de V0 HEMA/VDMSO = 1/1 e de DP Estudo cintico de reao de LRP de HEMA. Variao de V0 HEMA/VDMSO (1/1). (BASK Estudo cintico de reao de LRP de HEMA. Variao do ligante (bipiridina). (BASK
Me6TREN como ligante (BASK I)................................................................................................................... 57 =50. (BASK II) ........................................................................................................................................................ 59 III) .............................................................................................................................................................................. 61 IV) ............................................................................................................................................................................. 62 3.2.3. 3.3. Avaliao do carcter vivo do polmero PHEMA ............................................................. 63 Sntese de Hidrogis ..................................................................................................................... 64
Seco IV - Concluses e Trabalho Futuro ............................................................................................ 67 4.1. 4.2. Concluses ........................................................................................................................................ 68 Trabalho Futuro ............................................................................................................................. 68
Bibliografia ...................................................................................................................................................... 70 Anexo .............................................................................................................................................................. 72 Anexo A : Espectro de RMN em CDCl3 do ligante Me6TREN sintetizado para o sistema catatlico de LRP em estudo... 73
VIII
LISTA DE FIGURAS
Figura 1 - Classificao de polmeros quanto sua composio. ......................................................................... 13 Figura 2 Representao esquemtica de diferentes polmeros quanto forma. ................................................. 13 Figura 3 - Etapas de iniciao e propagao para a reao de polimerizao de Colesevelam. ........................... 16 Figura 4 - Equilbrio tpico em LRP, entre espcies dormentes e ativas. .............................................................. 17 Figura 5 - Distribuio de pesos moleculares tpica em FRP e LRP . ................................................................... 18 Figura 6 - Equilbrio qumico tpico de ATRP. ..................................................................................................... 20 Figura 7 - Equilbrio qumico tpico de SFRP . ..................................................................................................... 21 Figura 8 - Esquema simplificado de mecanismo RAFT. ...................................................................................... 22 Figura 9 - Agentes de transferncia de cadeia RAFT. ........................................................................................... 22 Figura 10 Equilbrio dinmico tpico em ITP .................................................................................................... 23 Figura 11 - Esquema simplificado de mecanismo RITP . ..................................................................................... 23 Figura 12 - Representao esquemtica do deslocamento da curva de pesos moleculares do polmero de LRP aps experiencia de reiniciao. ................................................................................................................... 24 Figura 13 - Estrutura qumica de Colsevelam. ...................................................................................................... 28 Figura 14 - Esquema representativo de equipamento GPC . ................................................................................. 32 Figura 15 Esquema de um equipamento tpico de espectroscopia de massa MALDI-TOF . ............................ 34 Figura 16 Montagem utilizada nas cinticas das reaes de LRP de PHEMA. ................................................. 37 Figura 17 - Espectro RMN 1H a 600 MHz de PAlAH a 80C por 72 h (COLV) em D2O. ................................... 45 Figura 18 - Mecanismo de reao sugerido para polimerizao viva catalisada por Fe(0)/CuBr2/Me6TREN. .... 48 Figura 19 - DP normalizado em relao ao volume de reteno. Reao de PHEA em DMSO (BAS 01), de PHEA em gua (BAS 02) e de PHEMA em DMSO (BAS 03), com Mw/Mn (BAS 03) = 1,14. .................. 51 Figura 20 - Espectro RMN 1H a 600 MHz de PHEA em d6-DMSO, obtido por LRP a 30 C durante 24 h (BAS 01). ...................................................................................................................................................... 52 Figura 21- Espectro RMN 1H a 600 MHz de PHEMA em d6DMSO, obtido por LRP a 30 C durante 24 h (BAS 03). ...................................................................................................................................................... 53 Figura 22 Espectro RMN 1H a 600 MHz de PAlA em d6DMSO, obtido por LRP a 30 C durante 24 h (BAS 05). ...................................................................................................................................................... 54 Figura 23 RI normalizado em relao ao volume de reteno. Padro de poliestireno com MP=10050 g/mol e Mw/Mn=1,02 e PAlA por LRP em reao a 30 C (BAS 05) e a 80 C (BAS 06). .................................... 55 Figura 24 - Representao grfica da converso e ln([M]0/[M]) em funo do tempo (a) e de MnGPC e Mw/Mn em funo de Mnterico para reao de polimerizao de PHEMA catalisada por Fe(0) e CuBr2 a 30C em DMSO nas seguintes condies [HEMA]0/ [EBiB]0/[Fe(0)]0/[CuBr2]0/[Me6TREN]0/ = 222/1/1/0,1/1,1 e [HEMA]0/ [DMSO]=2/1 (% vol). ................................................................................................................. 58 Figura 25 - Representao grfica da converso e ln([M]0/[M]) em funo do tempo (a) e de MnGPC e Mw/Mn em funo de Mnterico para reao de polimerizao de PHEMA catalisada por Fe(0) e CuBr2 a 30C em DMSO nas seguintes condies [HEMA]0/ [EBiB]0/[Fe(0)]0/[CuBr2]0/[Me6TREN]0/ = 50/1/1/0,1/1,1 e [HEMA]0/ [DMSO]=1/1 (% vol). ....................................................................................... 60 Figura 26 - Representao grfica da converso e ln([M]0/[M]) em funo do tempo (a) e de MnGPC e Mw/Mn em funo de Mnterico para reao de polimerizao de PHEMA catalisada por Fe(0) e CuBr2 a 30 C em DMSO nas seguintes condies [HEMA]0/ [EBiB]0/[Fe(0)]0/[CuBr2]0/[Me6TREN]0/ = 222/1/1/0,1/1,1 e [HEMA]0/ [DMSO]=1/1 (% vol). ..................................................................................... 61
IX
Figura 27 - DP normalizado em relao ao volume de reteno. PHEMA de BASK IV (esquerda) e padro de poliestireno com MP=10050 g/mol e Mw/Mn=1,02 (direita). ................................................................... 62 Figura 28 - DP normalizado em relao ao volume de reteno. Reao de extenso de cadeia (esquerda) PHEMA-Br macroiniciador (direita). ........................................................................................................... 64
LISTA DE TABELAS
*Ii7DI-B-<--L-'*A'A*+!;]-12+!0+!2+0/1+!0/!D(3G)/*(-!^_/'/*(2_+1,`6-.....................................................................-BH! *Ii7DI-H-h-?3+--1.12+BC(!0/!_10*(FE1-!6-........................................................................................................................-HV! *Ii7DI-P-<-?()D(-'(-!/,a(3a10(-!,+-!*/+Bb/-!0/!M$%H!/-'A0+0+-6-......................................................................-PV! *Ii7DI-U-h-?(,01Bb/-!0+-!*/+Bb/-!0/!-G,'/-/!0/!%"3"J!D(*!:$%!/!*/-A3'+0(-!(;'10(-6-...................................-UP! *Ii7DI-T-h!L[D/*1c,21+-!0/!M$%!/[/2A'+0+-!2()!>%!0/!<<<6-................................................................................-UV! *Ii7DI- V- h- Q;-/*a+Bb/-H! 2(,01Bb/-! 0/! $NSH! 0/! d%?! /! */-A3'+0(-! 0/! D/-(! )(3/2A3+*! ! D+*+! +-! D(31)/*15+Bb/-! 0/! JL"H! JLN"! /! "3"! D(*! M$%H! A'1315+,0(! :/T=XP?AU*<PN/K#$LS! R! 7P=H7P7H7! 2()(!-1-'/)+!2+'+3G'12(!+!@=!e?!0A*+,'/!<I!_6!>%!R!<<<!/!f-(3a/,'/gPf)(,h)/*(g!R!7P<!TaPaX6.........-U]! *Ii7DI-g-h-L-'A0(!?()D+*+'1a(-!0/!*/+Bb/-!0/!+313+)1,+!:$%!/!M$%!+!@=!/!i=!e?6-..........................................-TU! *Ii7DI-W-h-?(,01Bb/-!0+-!21,E'12+-!0/!M$%!0/!%JLN"!/)!>N9QH!+!@=!e?6-........................................................-TV! *Ii7DI-]-<-$/-A3'+0(-!(;'10(-!D+*+!+-!21,E'12+-!0/!M$%!0/!%JLN"!/)!>N9Q!+!@=!e?6-...................................-Tg! *Ii7DI-B^-h-?(,01Bb/-!0/!*/+Bb/-!0/!*/'12A3+BC(!/[/2A'+0+-!j!'/)D/*+'A*+!+);1/,'/6-................................-VT! *Ii7DI- BB- <- $/-A3'+0(-!0/!'/-'/!0/! !"#$$%&'!/)!-(3ABC(!0/!01_10*(F/,(--A3.+'(!0/!-h01(!+!DJ!KH!,A)! -_+k/*!+!@Z!e?!/!8==!*D)6-....................................................................................................................................-VV!
Seco I Introduo !
Seco I Introduo
1. 1.1. Polmeros Um polmero uma macromolcula resultante da unio de molculas mais pequenas designadas por monmeros, assim, a sua estrutura depende do monmero ou monmeros usados na reao qumica de polimerizao [1]. Existem diferentes formas de classificar polmeros, como por exemplo, com base nas caractersticas de processamento, no mecanismo de polimerizao ou at mesmo tendo em conta a sua estrutura bsica [2]. Assim, os polmeros podem, por exemplo, ser distribudos por dois grandes grupos, os termoplsticos ou os termofixos. Quando um polmero deformvel por ao de calor at se obter a forma final desejvel do material, pertence aos termoplsticos. J os polmeros termofixos, tm as cadeias individuais ligadas por ligaes qumicas covalentes (reticulaes). O facto de estarem reticulados impede que o polmero seja amolecido por via trmica, como tambm evita a deformao e sua dissoluo em solventes. O poliestireno (PS), o polietileno, o polipropileno e o policloreto de vinilo so alguns exemplos de termoplsticos comercialmente importantes. Como exemplo de polmeros termofixos podem ser referidos as resinas de fenol-formaldedo e os polisteres insaturados [2]. Adicionalmente, os polmeros podem ser classificados com base nos grupos que constituem a estrutura qumica bsica. A Tabela 1 apresenta alguns polmeros organizados tendo em conta as ligaes das unidades de repetio.
Tabela 1 - Estrutura bsica da cadeia de polmeros heterochain[2]. Polmeros Carbono - Oxignio Politeres Polmeros Carbono - Enxofre Politioteres Polmeros Carbono - Azoto Poliaminas
Polisteres de cidos carboxlicos
Poli(iminas)
Polianidridos de cidos carboxlicos
Polisulfonas
Poliamidas
Policarbonatos
Poliureias
Outros factores que influenciam fortemente as propriedades dos polmeros so a sua composio e a arquitectura das cadeias polimricas. Quanto composio, um polmero sintetizado a partir de um nico monmero designa-se homopolmero, enquanto que a partir de duas ou mais unidades monomricas diferentes designa-se copolmero. Ainda em termos 12
Seco I Introduo
de composio, os copolmeros podem ser classificados segundo quatro subclasses, que se encontram ilustradas na Figura 1 [1].
Homopolmero
Copolmero aleatrio/estatstico
Copolmero gradiente
Copolmero blocos
Copolmero enxerto
Figura 1 - Classificao de polmeros quanto sua composio [1].
No que diz respeito forma, os polmeros podem ser descritos como lineares, ramificados ou reticulados [1]. Um polmero linear no apresenta nenhum tipo de ramificao adicional aos grupos associados ao(s) monmero(s). Outras arquiteturas mais complexas como polmeros em estrela, polmeros em pente, polmeros hiper-ramificados e polmeros cclicos so tambm possveis de se obter, tal como ilustra a Figura 2.
Polmero Linear
Polmero Ramificado
Polmero Reticulado
Polmero em Estrela
Polmero em Pente
Copolmero enxerto/bloco
Polmero em Rede
Polmeros hper-ramificados
Polmero cclico
Figura 2 Representao esquemtica de diferentes polmeros quanto forma [1].
1.2. Reaes de polimerizao - conceitos genricos As reaes de polimerizao podem ser caracterizadas de acordo com o mecanismo de polimerizao envolvido, cuja complexidade consequncia dos grupos funcionais presentes nos monmeros. Se a cadeia de polmero for formada a partir da unio aleatria de molculas de monmeros, oligmeros ou molculas de longa cadeia, o processo de polimerizao 13
Seco I Introduo
envolvido denominado por reao gradual (step-growth) e formam-se dimeros, trimeros ou espcies macromoleculares. Por outro lado, quando a cadeia polimrica formada por sucessivas ligaes de molculas de monmeros com uma cadeia ativa, o processo de polimerizao diz-se de reao em cadeia ou crescimento em cadeia (chain-growth). O crescimento da cadeia pode dar-se atravs de um radical livre ou uma espcie inica (anio ou catio), sendo que as cadeias de elevado peso molecular comeam a ser formadas nos estgios iniciais do processo de polimerizao [3]. Existem duas abordagem para o processo de polimerizao por reao gradual, uma que envolve apenas uma molcula (monmero) com dois grupos funcionais diferentes (Equao 1), e outra que envolve o uso de dois monmeros bifuncionais (Equao 2). As Equaes 1 e 2 representam esquematicamente as duas abordagens possveis deste tipo de polimerizao, considerando dois grupos funcionais hipotticos, A e B, que reagem para formar um grupo X.
(1)
(2)
Como exemplos de reaes de polimerizao gradual pode referir-se, por exemplo, a preparao de polisteres, poliamidas e poliuretanos. Uma policondensao o processo de polimerizao que, com recurso a monmeros no vinlicos, conduz formao de um polmero por sucessivas reaes de condensao e com a eliminao de molculas de baixo peso molecular (gua, metanol e cido clordrico, por exemplo). As reaes de polimerizao em cadeia, chain-growth, requerem a presena de molculas (iniciadores) que por decomposio formam especies reativas que atacam um monmero insaturado, dando assim incio ao processo de polimerizao [3]. As espcies podem ser radicais ou ies (anies ou caties) e o processo de polimerizao designa-se por polimerizao radicalar ou polimerizao inica (aninica e catinica), respectivamente. De referir que reaes em cadeia so caracterizadas por trs etapas com diferentes cinticas: iniciao, propagao e terminao. Os processos de polimerizao por radicais livres representam cerca de 50% da produo mundial de polmeros.
14
Seco I Introduo
1.3. Polimerizao Radicalar Livre (FRP) A polimerizao radicalar livre um processo reativo caracterizado pela existncia de trs etapas bem definidas. A primeira, a iniciao, constituda por dois passos, a dissociao do iniciador (I-I) em duas espcies radicalares (I!), seguida da associao de uma molcula de monmero (M) s espcies referidas. A etapa que se segue a propagao em que as molculas de monmero so continuamente adicionadas aos radicais em crescimento. Finalmente, a terminao pode ocorrer pois dois processos diferentes: quando duas cadeias em propagao com radicais ativos (IMn! e IMm!) se combinam (terminao por combinao); ou quando entre as duas cadeias em propagao (IMn! e IMm!) houver transferncia de electres (terminao por dismutao) [3].
Iniciao Dissociao : ! ! ! ! ! !!! ! Associao : ! !!!! ! ! !" ! Propagao !" !!!! ! ! ! !! ! Terminao Combinao: !! !! !!!! !! !!!! !!! !!!! Dismutao: ! !! !!!! !! !!!! !!! !! ! ! !!
(3) (4)
(5)
(6) (7)
Esta polimerizao em cadeia frequentemente utilizada em tecnologia de polmeros mas ocorre apenas nas cadeias reativas em crescimento. Como consequncia, atingem-se rapidamente altos pesos moleculares para baixas percentagens de converso e o monmero est sempre presente em quantidades significativas durante todo o processo. Neste trabalho, a sntese do Colesevelam ser efectuada por polimerizao radicalar. Assim, as reaes envolvidas no processo so em tudo anlogas s descritas anteriormente para uma reao genrica de FRP (iniciao, propagao e terminao). Explicitando para o caso do frmaco comercial (Colesevelam) a alilamina ser o monmero, M, que se associa s espcies radicalares (I!) oriundas da dissociao do iniciador I, o azobis (amidinopropane) dihidrocloride (AAPH). Estas espcies radicalares so capazes de atacar a ligao dupla do monmero e assim permitir propagao da cadeia de polmero por adio de mais molculas de alilamina. A Figura 3 que se segue ilustra o esquema reacional do frmaco sintetizado.
15
Seco I Introduo
Figura 3 - Etapas de iniciao e propagao para a reao de polimerizao de Colesevelam.
De facto, a polimerizao radicalar convencional (FRP) um mecanismo de extrema importncia para a preparao de muitos polmeros comerciais de elevado peso molecular, na medida em que pode ser aplicada a uma vasta gama de monmeros, permite a utilizao de diferentes condies de reao (em massa, soluo, emulso e suspenso), tolerante a uma ampla gama de grupos funcionais (p.e. OH, NR2, COOH, CONR2), pode ser utilizada para um amplo intervalo de temperatura (80-250 C), para alm de os monmeros poderem ser copolimerizados com diferentes propriedades para inmeras aplicaes [4]. No entanto, a principal limitao da FRP est associada ao reduzido controlo de determinadas propriedades estruturais dos polmeros tais como o peso molecular, a polidispersividade (PDI), a funcionalidade, a arquitetura e composio da cadeia [4]. neste sentido que nos ltimos tempos a polimerizao radicalar viva (LRP) tem sido exaustivamente explorada em trabalhos acadmicos e industriais a fim de colmatar os problemas associados FRP.
1.4. Polimerizao Radicalar Viva (LRP) A polimerizao viva foi descoberta por Szwarc [5], em 1956, e definida como um processo de crescimento de cadeia onde no ocorrem reaes de terminao. Num estudo de polimerizao aninica de estireno com metal alcalino em tetrahidrofurano (THF) , Szwarc [5] descobriu quando a viscosidade parava de aumentar, caso se adiciona-se mais monmero fresco, aps algum tempo de reao, a viscosidade comeava a aumentar novamente. Este resultado conduziu a introduo de uma nova terminologia na cincia de polmeros, a polimerizao viva.. Este tipo de polimerizao apresenta, contudo, alguns problemas, nomeademente: o facto de necessitar de condio de polimerizao extremas (ex: -78 C), no poder ser aplicado a diversas famlias de monmeros e ao facto de ser difcil de implementar 16
Seco I Introduo
escala industrial quando comparado com a polimerizao radical. Com intuito de explorar as vantagens da polimerizao radicalar e ao mesmo tempo permitir um controlo sobre a estrutura do polmero caracterstico da polimerizao viva, ao longo da ltima dcada tem vindo a ser desenvolvido um novo mecanismo de polimerizao a polimerizao radicalar viva (LRP). Hoje em dia, a LRP a rea mais estudada em cincia de polmeros [6]. Esta rea inclui um conjunto de tcnicas de polimerizao por radicais para a sntese de polmeros e copolmeros bem definidos e de baixa polidispersividade [3]. Assim, em LRP preparam-se polmeros por reao de adio sequencial com grupos terminais de cadeia ativos [4]. No entanto, per si este facto no garante as propriedades estruturais no polmero, como o controlo do peso molecular e a estreita distribuio de peso molecular. Para tal, so necessrios dois requisitos adicionais. O iniciador tem de ser completamente consumido no incio da reao e a velocidade da reao que conduz formao de espcies ativas tem de ser igual de formao de espcies dormentes (equilbrio entre espcies dormentes e radicais em propagao), garantindo uma baixa concentrao de radicais [4].
Figura 4 - Equilbrio tpico em LRP, entre espcies dormentes e ativas [4].
Assim, em contraste com a polimerizao radicalar convencional, em LRP todas as cadeias polimricas comeam a crescer ao mesmo tempo a uma velocidade semelhante pois a vida til de um radical ativo normalmente pequena (0,1 - 10ms em LRP e 1s em FRP) [7], pelo que a probabilidade de ocorrem fenmenos de terminao de cadeia muito baixo em LRP, comparativamente com FRP. No entanto, apesar destes fenmenos por vezes ocorrerem, como o nmero de cadeias polimricas em LRP muito maior que em FRP, a taxa de terminao por cadeia e a taxa de transferncia de monmero por cadeia so baixas, pelo que as reaes de terminao podem ser consideradas negligenciveis. Como consequncia, nestes sistemas verifica-se uma distribuio de pesos moleculares estreita (Figura 5). Para alm disso, um aumento linear do peso molecular do polmero com a converso e uma polidispersividade baixa (Mw/Mn < 1,5) so tambm parmetros que caracterizam os sistemas de LRP [4, 7].
17
Seco I Introduo
Figura 5 - Distribuio de pesos moleculares tpica em FRP e LRP [7].
Em LRP existem vrias tcnicas que podem ser utilizadas na polimerizao de diversos monmeros. Apesar disso, seja qual for a estratgia utilizada, os quatro critrios que identificam e que devem ser respeitados para que a polimerizao seja viva, so: 1. A cintica da reao de primeira ordem em relao ao monmero.
!" !! !!"!!"#$% ! !"#!"! !!"#$%! ! (8)
2. Crescimento linear do grau de polimerizao (DPn) com a converso.

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3. Presena de uma distribuio de peso moleculares estreita, prxima de uma distribuio de Poisson.
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4. As cadeias polimricas tm de manter a sua capacidade de crescimento sempre que for adicionado mais monmero (presena de terminais ativos).
1.4.1. Tcnicas de LRP As diferentes tcnicas de LRP partilham entre si a necessidade de existncia de equilbrio entre espcies ativas e espcies dormentes (Figura 4), o qual proporciona um controlo sobre o peso molecular do polmero. A diferena entre elas reside na estratgia que cada uma utiliza para manter esse equilbrio. Existem dois princpios base pelos quais podemos agrupar as tcnicas LRP, segundo o tipo de equilbrio dinmico que se estabelece : ativao/desativao reversvel de radicais ou processo degenerativo de transferncia reversvel de cadeia [8]. 18
Seco I Introduo
Quando ocorre ativao/desativao reversvel de radicais existe um efeito de auto-regulao, denominado por efeito de radical persistente (persistent radical effect PRE). No inicio da polimerizao ocorrem algumas terminaes radical-radical e, como consequncia, aumenta a quantidade da espcie desativadora em relao quantidade de radicais em crescimento, pelo que o equilbrio dinmico (Figura 4) deslocado no sentido das espcies dormentes. Neste sistemas uma vez que os radicais de propagao so produzidos na etapa de ativao, no necessrio a presena de um iniciador de radical. As tcnicas de LRP baseadas no PRE mais conhecidas so o (Atom Transfer Radical Polymerization ATRP e a Stable Free Radical Polymerization SFRP) [8]. No que diz respeito ao mecanismo reversvel de transferncia de cadeia necessrio recorrerse a um iniciador que forme radicais, visto que o processo de ativao/desativao no est relacionado com uma modificao no nmero de radicais. Nestes sistemas, o equilbrio mantido atravs da transferncia de cadeia entre as cadeias polimricas em crescimento e os agentes de transferncia. Neste grupo incluem-se as tcnicas de LRP Reversible AdditionFragmentation chain Transfer (RAFT) e Degenerative Chain Transfer (DCT) [8]. Neste trabalho, o mecanismo utilizado para a sntese de polmeros por LRP o ATRP. Nas seces seguintes sero brevemente descritas cada uma das tcnicas de LRP referidas.
ATRP - Atom Transfer Radical Polymerization
ATRP uma das tcnicas mais versteis e atualmente a mais amplamente usada em LRP [7]. Em ATRP as espcies envolvidas so um metal de transio (Mtn), que pode aumentar o seu nmero de oxidao, um ligante (L) e um iniciador (haleto de alquilo) [9]. O complexo de metal de transio (Mtn/L) o responsvel pela transferncia de um tomo halogenado (X) a um complexo de propagao macroradical (Figura 6). A espcie ligante forma um complexo com o elemento metlico, dissolvendo o catalisador no solvente da reao. Para alm disso, a espcie ligante fundamental para regular a reatividade do catalisador para diferentes monmeros. A polimerizao controlada pelo equilbrio redox que altamente deslocado para as espcies dormentes, impedindo que ocorram as reaes de terminao de radical [7-9], uma vez dessa forma a concentrao de radicais ativos sempre muito baixa.
19
Seco I Introduo
Figura 6 - Equilbrio qumico tpico de ATRP [8].
A reao geralmente iniciada pela ativao da cadeia halogenada (Pn-X), atravs da abstrao do halognio pelo centro metlico (Mtn/L) para formar uma espcie iniciadora de radical (Pn!) e um complexo metlico oxidado (X-Mtn+1/L), o qual se designa desativador. De seguida, a espcie Pn! adiciona-se a uma unidade de monmero ou reage com o complexo metlico de maior estado de oxidao, levando formao de espcies dormentes [10]. Quanto mais rpido for o equilbrio dinmico, maior o controlo sobre o peso molecular do polmero durante toda a reao. Os catalisadores usados em ATRP pertencem ao grupo dos metais de transio, tais como rutnio, cobre, ferro e nquel [11]. Estas espcies podem controlar a polimerizao de monmeros, como por exemplo: acrilamidas, acrilatos e metacrilatos, estirenos ou monmeros solveis em gua [10]. Um dos catalisadores metlicos de uso mais frequente o cobre devido sua alta reatividade, baixo custo e fcil manuseamento [8]. Assim, o complexo de metal de transio no seu estado de oxidao menor (por exemplo Cu(I)Br/ligante), abstrai o tomo halogenado terminal da cadeia polimrica (ou do iniciador haleto de alquilo) e produz um radical e um complexo num estado de oxidao superior (por exemplo Cu(II)Br2/ligante) [9]. Com a preocupao de implementar sistemas catalticos mais verdes e amigos do ambiente, catalisadores base de ferro tambm tm sido muito usados em sistemas ATRP devido sua abundncia e s excelentes propriedades de biocompatibilade j demonstradas [11]. Recentemente foi desenvolvido um novo sistema de ATRP nos laboratrios do DEQ/FCTUC [8] que utiliza pela primeira vez uma combinao de metais (ferro e cobre - em muito baixa concentrao) como sistema cataltico para a polimerizao de acrilatos, metacrilatos e estireno. Ser este ltimo, o sistema que vai ser usado neste trabalho.
SFRP - Stable Free Radical Polymerization
Em SFRP o equilbrio dinmico (Figura 7) estabelecido entre a espcie dormente (Pn-X) e duas espcies ativas: o radical ativo em crescimento (Pn!) e o radical estvel (persistente) (X!). 20
Seco I Introduo
Para que seja possvel mediar a polimerizao, o mediador radicalar deve ser estvel o suficiente para no reagir consigo prprio nem com o monmero (para no iniciar o crescimento de novas cadeias). Para alm disso, no deve participar em reaes colaterais, como a abstrao de tomos de "-H [7].
Figura 7 - Equilbrio qumico tpico de SFRP [7].
Neste tipo de polimerizao normalmente utilizado um nitrxido como o agente mediador, uma vez que os radicais de nitrxido formados so muito estveis e, consequentemente, mais eficientes. Quando uma reao de SFRP mediada por nitrxido tambm designada por NMP (nitroxide mediated polymerization) [8]. O primeiro sistema de SFRP mediado por nitrxidos a ser implementado com sucesso foi desenvolvido por Georges [11], em 1993, na polimerizao controlada de estireno na presena de perxido de benzolo com 2,2,6,6-tetrametil-1-piperidinil-N-oxi (TEMPO), como mediador de radicais estveis. A evoluo de pesos moleculares de poliestireno durante a reao mostrou uma tendncia linear com a converso de monmero e os polmeros apresentaram uma polidispersividade baixa (inferior a 1,3), numa reao realizada a 120 C [8]. Estes sistema LRP apresenta como principal inconveniente o facto de necessitar de temperaturas muito elevadas.
RAFT
A polimerizao por RAFT indiscutivelmente um processo prtico, j que permite a utilizao de condies de reao mais aproximadas s do processo de polimerizao convencional (FRP) [7]. Esta tcnica recorre a um agente de transferncia de cadeia capaz de reagir com um macroradical em propagao, que foi previamente iniciado por um iniciador de radical, tpico de um sistema de polimerizao convencional (etapa de iniciao) [10]. A Figura 8 ilustra um sistema tpico de RAFT.
21
Seco I Introduo
Figura 8 - Esquema simplificado de mecanismo RAFT [9].
Exemplos de agentes de transferncia de cadeia utilizados neste processo de polimerizao so: ditioesters, ditiocarbamatos, tritiocarbonatos, xantatos e compostos tiocarbonil, cujas estruturas se encontram representadas na Figura 9.
Figura 9 - Agentes de transferncia de cadeia RAFT [10].
Normalmente, estes sistemas so caracterizados por processos bem controlados. Contudo, a seleo do agente de transferncia de cadeia crucial nestes sistemas uma vez que a sua natureza influencia o controle do peso molecular, a distribuio do peso molecular e a arquitetura molecular dos polmeros [8]. Apesar de esta tcnica de LRP poder ser aplicada a grande nmero de monmeros, tem tambm algumas desvantagens. Por um lado, grande parte dos agentes de transferncia de cadeia no esto disponiveis comercialmente (ou so extremamente caros) e, como tal, tm de ser sintetizados. Por outro, os polmeros produzidos tm sempre associados grupos ditio-steres, que induzem alterao na cor dos polmeros (de vermelho/rosa para amarelo) e maus odores. ainda de referir que este grupo pode ser removido por hidrlise, sendo substitudo por um grupo tiol [3]. 22
Seco I Introduo
DCT
Este mtodo decorre fundamentenente ao uso de tomos de iodo (Iodine Transfer Polymerization ou Reverse Iodine Transfer Polymerization - ITP/RITP) que medeiam o mecanismo de transferncia reversivel. Os agentes de transferncia de cadeira so normalmente derivados do iodeto de perfluoroalquilo [10]. A Figura 10 pretende ilustrar o equilbrio dinmico tpico num sistema ITP [10].
Figura 10 Equilbrio dinmico tpico em ITP [9].
J em RITP recorre-se a iodo molecular (I2), como agente de controlo, a fim de gerar in situ, o agente de transferncia de cadeia reversvel, antes da reao de polimerizao ocorrer. O mecanismo de uma reao RITP tpica esquematizado na Figura 11.
Inibio
Polimerizao
Figura 11 - Esquema simplificado de mecanismo RITP [10].
1.4.2. Avaliao do carcter vivo dos polmeros preparados por LRP Como referidoanteriormente, os sistemas LRP so caracterizados por apresentarem uma evoluo linear do peso molecular com a converso de monmero e simultaneamente, uma diminuio da polidispersividade com a converso de monmero. No entanto, estes parmetros no so uma garantia de um polmero vivo. Para tal so necessrias mais informaes, nomeadamente anlises de ressonncia magntica nuclear (RMN) que permitem identificar a presena dos terminais ativos de cadeia. Como complemento a esta tcnica de 23
Seco I Introduo
identificao do terminal ativo de cadeia, dado que nem sempre fcil de ser executada, surgem estratgias experimentais capazes de avaliar este carcter vivo dos polmeros obtidos por LRP, nomeadamente as reaes de reiniciao ou a copolimerizao (se for utilizado um monmero diferente). A reiniciao uma reao de extenso de cadeia em que o polmero obtido por LRP usado como macroiniciador de uma reao LRP com monmero fresco. Como resultado obtm-se um polmero com maior peso molecular e portanto por anlise de cromatografia de permeao em gel (GPC) possvel verificar o deslocamento do pico do polmero aps experincia de reiniciao para valores mais altos de peso molecular, tal como demonstra a Figura 12.
Figura 12 - Representao esquemtica do deslocamento da curva de pesos moleculares do polmero de LRP aps experiencia de reiniciao.
1.5. Hidrogis Um hidrogel um estrutura polimrica tridimensional hidroflica, capaz de absorver e reter grandes quantidades de gua ou de um fludo biolgico sem que ocorra dissoluo do polmero [12]. Esta definio abrange uma grande variedade de materiais naturais (de origem vegetal ou animal), materiais naturais modificados e materiais polimricos sintticos [13]. A sntese ou modificao de materiais para a obteno de hidrogis advm muitas vezes da necessidade de evitar a dissoluo das cadeias hidroflicas de um determinado polmero numa soluo aquosa, induzindo para tal, reticulao no polmero [14]. Assim, a organizao tpica de um hidrogel em redes pressupe a existncia de ligaes cruzadas (reticulaes qumicas ou fsicas) entre as cadeias de homopolmeros ou copolmeros, o que resulta num material insolvel. Os hidrogis reticulados fisicamente so formados por ligaes de hidrognio, ligaes hidrofbicas e/ou electroestticas. Os que so reticulados quimicamente resultam da 24
Seco I Introduo
formao de ligaes covalentes por polimerizao radicalar (ex: monmeros bifuncionais), por reao qumica com agentes reticulantes (ex.: reticulao com aldedos, reao de adio de condensao), ou de radiao de alta energia [15]. Neste sentido, existe uma variedade de mtodos para a reticulao de polmeros, no entanto, para a escolha do mtodo mais adequado surge a necessidade de, em simultneo, avaliar determinados aspectos (ex: condies de reaco e reagentes) e propriedades consoante a aplicao final do material [14]. Por exemplo, em muitas das aplicaes dos hidrogis nas reas biomdica e farmacutica necessrio garantir a biodegradabilidade (qumica ou enzimtica), a biocompatibilidade do material e que os produtos resultantes da degradao tenham baixa toxicidade [14]. A caracterstica comum a todos os hidrogis a compatibilidade com a gua que advm da presena de grupos funcionais hidroflicos (-OH, -COOH, -CONH2, -CONH, -SO3H), fazendo com que inchem facilmente em gua [16]. O teor de gua ou inchao depende fundamentalmente da relao entre o nmero de cadeias polimricas hidroflicas e hidrofbicas, e do grau de reticulao. A forma como um hidrogel incha ou encolhe num meio pode ainda dever-se forma como o polmero responde a determinados estmulos externos tais como mudanas de temperatura, pH, solvente, campo eltrico ou magntico [15], no caso de se utlizar polmeros que respondem aos estmulos referidos. Devido s suas propriedadesde inchao e biocompatibilidade, os hidrogis tm sido exaustivamente estudados para aplicaes mdicas e farmacuticas, nomeadamente, em sistemas de libertao de frmacos, em engenharia tecidos e em dispositivos mdicos [13]. Estes materiais polimricos reticulados podem ser utilizados em lentes de contacto, entre diversas aplicaes, podem ser usados: em cartilagens sintticas; em membranas de biossensores; como pele artificial, como dispositivos de libertao controlada de frmacos; e como matrizes para crescimento celular. Nesta ltima aplicao, os hidrogis atuam como matrizes extracelulares, de forma a criar um ambiente propcio ao crescimento e diferenciao celular, por exemplo para o tratamento de queimaduras [12, 16]. Os hidrogis podem ser classificados tendo em conta diferentes aspectos tais como a composio do polmero, a natureza da carga inica e as suas propriedades estruturais [15, 17]. Estas caractersticas fsico-qumicas que permitem caracterizar um hidrogel esto apresentadas na Tabela 2.
25
Seco I Introduo
Tabela 2 Classificao de hidrogis [15, 17].
Composio do polmero
Natureza da carga inica Aninicos
Propriedades estruturais / estrutura fsica das redes Amorfo

(molculas orientadas de forma aleatria e entrelaadas)
Homopolmero
(polimerizao de um nico monmero hidroflico)
(se contm apenas cargas negativas)
Catinicos
(se forem constitudos por cargas positivas)
Semi-cristalino
(molculas com empacotamento regular e ordenado em determinadas regies da matriz)
Copolmerico
(polimerizao de dois tipos de monmeros, sendo um deles obrigatoriamente hidroflico)
Anfotricos
(comportam-se como cidos ou bases, dependendo do meio em que esto inseridos)
Ligado por pontes de Hidrognio

(as molculas esto ligadas por pontes de hidrognio)
Neutros
(nmero de cargas positivas igual ao nmero de cargas negativas)
Agregado hidrocoloidal
A absoro de gua a propriedade mais importante nos hidrogis, nomeadamente para aplicaes biomdicas e farmacuticas destes materiais, na medida em que este fenmeno permite conferir propriedades viscoelsticas ao material e possibilita o transporte de nutrientes e produtos resultantes do metabolismo celular [18]. Num hidrogel, os fatores que influenciam mais a sua interao com a gua e o seu comportamento so a natureza hidroflica/hidrofbica dos polmeros utilizados, a carga inica e o grau de reticulo. Como resultado destas interaes, as cadeias de polmero incham, sem que haja dissoluo no meio onde inserido [16]. O grau de inchao est muitas vezes associado quase exclusivamente ao grau de reticulao do hidrogel. Com o intuito de avaliar o grau de inchao coloca-se o material em gua ou soluo aquosa a testar (soro fisiolgico, por exemplo, para testar hidrogis para aplicaes biomdicas, simulando assim as condies corporais). Pesando o composto antes e depois da imerso, durante um determinado tempo t, possvel determinar a quantidade de gua absorvida pelo gel atravs da Equao (11) [18].
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(11)
Onde W0 corresponde ao peso do hidrogel seco e Wt ao peso do hidrogel aps um tempo t em soluo.
26
Seco I Introduo
Os hidrogis de base polimrica tem vindo a suscitar recentemente grande interesse para aplicao como frmacos na medida em que: conduzem a menores toxicidades (porque no so absorvidos para a corrente sangumea), podem ser optimizados com a introduo de diferentes funcionalidades para se produzirem materiais com diferentes atividades biolgicas e tm a capacidade de reconhecer e permitir a ligao a molculas causadoras de doenas [19]. Os cidos biliares so surfactantes biolgicos produzidos no fgado que ajudam na digesto de alimentos e permitirem a absoro de lpidos no intestino. So responsveis por controlarem vrios processos metablicos (glicose, energia de triglicerdeos e a homeostase do colesterol) e so sintetizados a partir do colesterol heptico microsodial no fgado humano [20]. Quimicamente estas molculas tm um ncleo hidrofbico (esqueleto esteride) e um segmento hidroflico com propriedades aninicas ao pH do estmago [19]. Aps serem segregados pelo fgado so armazenados na vescula e entram no lmen intestinal durante a digesto dos alimentos. Posteriormente so absorvidos e regressam ao fgado atravs da circulao portal heptica, mantendo-se deste modo o seu nvel. Durante este processo, designado por ciclo enteroheptico, pode existir perda de cidos biliares (cerca de 5%) atravs da sua eliminao pelas fezes. Este desiquilbrio compensado atravs da produo de mais cido no fgado, por degradao do colesterol. Neste sentido, com o objetivo de tratar doenas associadas hipercolesterolemia (elevados nveis de colesterol no sangue) tm sido produzidos frmacos polimricos que permitem interromper o ciclo enteroheptico. Este frmacos, conhecidos por sequestradores de cidos biliares (BAS), so hidrogis de base polimrica catinica que permite formar complexos com as molculas de cido biliar ionizadas que se encontram no intestino. Devido ao elevado peso molecular dos polmeros, o complexo polmero-cido biliar no reabsorvido pelo intestino, sendo excretados nas fezes. Assim, quanto maior o nmero de molculas de cidos biliares no reabsorvidas, maior a quantidade de cidos biliares que tem que ser produzida, a partir do consumo de colesterol. Desta forma, o nvel de colesterol no plasma sanguneo diminudo. Atualmente existem no mercado trs frmacos polimricos aprovados pela Food and Drugs Administration (FDA) no tratamento de hipercolesterolemia: a Colesteramida, o Colespiol e o Colesevelam [21, 22]. Tendo em conta a natureza qumica dos cidos biliares, estes frmacos so estruturalmente caracterizados por um balano adequado de segmentos hidrofbicos e hidroflicos para permitir a interao com a parte esteroide das molculas de cidos biliares e, tambm, por cargas catinicas para permitirem as interaes electrostticas com as molculas ionizadas a sequestrar. O Colesevelam um dos agente BAS mais recentes presente no mercado (pertence 2 gerao de frmacos desta categoria) e o mais eficaz no tratamento da hipercolesteremia. A 27
Seco I Introduo
sua estrutura (Figura 13) caracterizada por longas cadeias hidrofbicas espaadas, aminas primrias para permitir interaes electrostticas com os cidos biliares ionizados e aminas quaternrias que estabilizam o hidrogel [21, 22].
Figura 13 - Estrutura qumica de Colsevelam [23].
Atualmente a a sntese destes frmacos sequestradores de cidos biliares recorre exclusivamente a processos de polimerizao radicalar livre, nos quais no existe qualquer tipo de controlo sobre estrutura e peso molecular dos polmeros. No entanto, sabe-se que a eficincia destes frmacos est dependente do tipo de estrutura do polmero base (por exemplo posio relativa dos grupos catinicos na estrutura polimrica) [24]. Assim, com o intuito de garantir um controlo sobre a estrutura molecular do polmero, peso molecular e polidispersidade pretendeu-se, neste projecto, sintetizar um novo polmero por polimerizao radicalar viva que seja vivel para substituir as formulaes dos agentes sequestradores de cidos biliares comerciais, nomeadamente o Colesevelam. Sendo o peso molecular dos polmeros de BAS determinante para a eficincia dos frmacos simulou-se os dados da patente de Colesevelam para determinar o peso alvo dos polmeros a sintetizar por LRP. Nesta patente, depois de se obter o polmero por FRP necessrio reticul-lo e proceder ao processo de alquilao do hidrogel para testar as suas propriedades farmacolgicas e compar-las com o frmaco comercial. Estes dois ltimos procedimentos (reticulao e alquilao descritos na patente) sero seguidos para os polmeros de LRP. Neste sentido, ser possvel uma comparao entre os resultados do frmaco original e os dos polmeros obtidos por LRP, nas trs etapas essencial de sntese de um BAS (polimerizao, reticulao e alquilao).
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Seco II Parte Experimental
2. 2.1. Materiais O hidroxietil acrilato (HEA) (Sigma-Aldrich; #99%), o hidroxietil metacrilato (HEMA) (Sigma-Aldrich; #99%) e a alilamina (AlA) (Sigma-Aldrich; #99%) foram passados por uma coluna de alumina/areia para remover o inibidor de radicais antes de cada utilizao. Brometo de cobre (II) (CuBr2) (Acros, 99+% +extra puro; anidro), dimetilformamida (DMF) (SigmaAldrich, 99,8%), dimetilsulfxido deuterado (d6DMSO) (Eurisotop; +1%TMS), DMSO (Acros, 99,8+% extra puro), gua deuterada (D2O) (Eurisotop; +1%TMS), clorofrmio deuterado (CDCl3) (Eurisotop; +1%TMS), etil 2-bromo-2-metilpropionato (EBiB) (SigmaAldrich, 99%), acetato de etilo (Acros; 99,5%), soluo de formaldedo (Sigma-Aldrich; reagente ACS, 37% em peso em H2O) cido frmico (Sigma-Aldrich; ACS reagente; #88,0%), cloreto de metileno (Sigma-Aldrich; purum; #98, 0% GC), hidrxido de sdio (Panreac; pellets), sulfato de sdio (Sigma-Aldrich; reagente ACS, #99,0%, p anidro), tris (2aminoetil) amina (TREN) (Aldrich, 96%), bipiridina (Sigma-Aldrich, #98,0%) e ferro de valncia zero (Acros; p 99%; -70 mesh) foram utilizados como recebidos. Me6TREN foi sintetizado de acordo com procedimentos descritos na literatura [25, 26]. Epicloridrina (Aldrich; #98,0% GC), o 1,4-butanodiol diglicidil ter (Aldrich; #95%) e o 1,2-etanodiol diglicidil ter (Sigma-Aldrich; 99,5%, anidro), isopropanol (Sigma-Aldrich; 99,7%, anidro), metanol (Sigma-Aldrich; 99,8%, anidro) e dihidrogenofosfato de sdio foram utilizados como recebidos na sntese de hidrogis. !
2.2. Tcnicas Esta seco tem como objetivo dar a conhecer os conceitos bsicos das tcnicas utilizadas neste trabalho para a caracterizao das amostras preparadas, bem como, as condies em que foram executadas e as principais caractersticas de cada equipamento.
2.2.1. Espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear A espectroscopia de RMN uma das tcnicas mais informativas e das mais utilizadas para o estudo da estrutura molecular de um composto. A anlise pode ser feita diretamente a partir de um lquido puro, a partir de uma soluo ou a partir de um slido. Os solventes utilizados para este tipo de anlises, principalmente para o estudo de protes, so solventes com uma
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percentagem muito baixa de protes de modo a que no haja interferncia com os elementos em anlise. Para tal recorre-se a solventes deuterados tais como D2O, CDCl3 ou d6DMSO [27]. A teoria de RMN diz que qualquer ncleo com spin pode ser estudado por esta tcnica espectroscpica. Assim, todos os ncleos que tenham nmero de massa mpar ou nmero
! !" !" !" atmico mpar (por exemplo ! !! ! !! ! !! ! !! !! ! !! ), possuem spin, isto tm momento
angular. Neste trabalho apenas ir ser abordada a tcnica de RMN para ! !! [27]. Para se obter um espectro de RMN de uma determinada amostra, esta colocada no campo magntico de um espectrmetro, e sobre ela incide um campo de radiofrequncia. Aumentando o campo magntico o detector detecta a excitao dos ncleos, o que resulta numa absoro de energia no campo de radiofrequncias. Como resultado, obtm-se um grfico de voltagem induzida versus varrimento do campo magntico, o espectro de RMN[27]. Para a anlise destes grficos necessrio ter em conta que: a rea de cada pico depende do nmero total de ncleos que esto a oscilar; que a intensidade do campo necessria para a absoro de energia por um determinado proto depende do seu ambiente mais prximo (estrutura molecular); e que se um proto tem n protes equivalentes (protes equivalentes ocupam ambientes idnticos) em carbonos adjacentes, a sua absoro ser dividida em n+1 picos [27]. Assim, um espectro de RMN fornece trs tipos de informao sobre uma amostra em estudo: (i) o deslocamento qumico de um multipleto, que diz o ambiente do proto envolvido; (ii) a rea doo pico, que revela o nmero de protes envolvidos e (iii) a multiplicidade, que indica quantos protes vizinhos existem. Numa primeira fase, com o intuito de confirmar a estrutura dos polmeros e de avaliar a eficincia das snteses de LRP executadas, realizaram-se estudos de RMN 1H a 400MHz, com tetrametilsilano (TMS) como padro interno e com D2O ou d6DMSO (dependendo da solubilidade do polmero) como solvente das amostras em anlise. Adicionalmente, as amostras que envolviam os estudos cinticos com poli hidroxietil metacrilato (PHEMA) foram analisadas por RMN 1H a 600 MHz, com TMS como padro interno e com d6DMSO como solvente das amostras. Recorrendo a esta tcnica foi ento possvel estudar as cinticas executadas, determinando a converso de monmero por integrao de dois picos, um caracterstico do monmero e outro polmero, no software MestRenova verso 6.0.2-5475. A Equao 12 ilustra o clculo utilizado para determinar a converso de monmero na sntese LRP de PHEMA. Para tal selecionou-se os picos caractersticos da ligao dupla no monmero a 6,06 ppm e a 5,68 ppm, e o grupo metxi (O-CH2) do polmero a 4,09 - 4,12 ppm [28].
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Seco II Parte Experimental ! !! !! ! ! ! ! ! !! !! ! ! ! ! ! ! ! !!!" !! ! ! 12
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2.2.2. GPC/SEC
Gel
Permeation
Chromatography
Size
Exclusion
Chromatography A cromatografia de excluso de tamanhos ou cromatografia de permeao em gel, vulgarmente denominada por GPC uma tcnica largamente utilizada em tecnologia de polmeros para determinao da distribuio de pesos moleculares de polmeros e obter valores para o peso molecular mdio numrico(Mn) e para o peso molecular mdio ponderal (Mw) [29]. A teoria do GPC/SEC a separao de molculas com base no seu raio/volume hidrodinmico (raio/volume equivalente ao de uma esfera que eluiria no mesmo tempo que a amostra em estudo). Ao atravessarem uma coluna porosa de material polimrico reticulado, as molculas da amostra so separadas de acordo com o seu volume. Como as partculas de pequeno tamanho da amostra so suficientemente pequenas para entrarem nos poros da coluna, estas so momentaneamente removidas do fluxo principal de solvente (excluso) ao longo da colunas, pelo que necessitam de mais tempo para atravessar a coluna do equipamento [29]. O esquema que se segue ilustra bem um equipamento tpico de GPC.
Figura 14 - Esquema representativo de equipamento GPC [29].
A amostra injetada no sistema, e passa atravs da(s) coluna(s) onde ocorre o processo de separao por tamanho. Quando a amostra sai da(s) coluna(s) passa atravs de um detector ou uma srie de detectores. A extenso da anlise dos dados depende do tipo e do nmero de detectores usados e juntamente com vrios tipos de calibraes e/ou clculos utilizados pode calcular-se parmetros como peso molecular, distribuio de peso molecular, viscosidade intrnseca ou a densidade molecular, raio hidrodinmico, e raio giratrio. Para a anlise de 32
GPC ser possvel necessrio uma curva de calibrao obtida atravs de padres de GPC, isto , a partir de amostras polimricas de peso molecular conhecido e baixa polidispersividade. Neste trabalho os parmetros das amostras foram determinados utilizando Viscotek (detector Dual 270, Viscotek, Houston, EUA) equipado com um viscosimetro diferencial (DV), um light scattering (RALLS, Viscotek) e um detector de ndice de refrao (RI; Knauer K-2301). O sistema de colunas era constitudo por uma coluna de guarda PL 10 mm (50x7.5 mm2) seguida por duas colunas MIXED PL-B (300x7.5 mm2, 10 mm). Com o auxlio de uma bomba de HPLC (Knauer K-1001) o caudal foi mantido a 1 mL/min. As medies foram realizadas com uma soluo a 0,02% de LiBr em DMF a 60 C, usando para o efeito um aquecedor Elder CH-150. O sistema est equipado tambm com um desgaseificador Knauer on-line. O dn/dc utilizado para as amostras de PHEMA foi de 0,076, com base na bibliografia consultada e na injeo de uma amostra com concentrao conhecida de PHEMA puro [28]. O peso molecular (MnGPC) e a polidispersividade (Mw/Mn) dos polmeros sintetizados foram determinadas recorrendo ao software OmniSEC verso: 4.6.1.354, e utilizou-se a calibrao com trs detectores (RI, DV e RALLS). Nas reaes de estudos cinticos deste trabalho aps conhecer os parmetros fornecidos por GPC, e de se determinar previamente a converso de monmero em cada reao por RMN, foi possvel determinar a constante aparente da velocidade da reao (Kp), atravs da Equao 13, considerando que se trata cintica de primeira ordem.
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(13)
2.2.3. Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization - Time Of Flight Mass Spectrometry (MALDI-TOF MS) Em tecnologia de polmeros a espectroscopia MALDI - TOF uma ferramenta poderosa para a determinao do peso molecular de polmero e que fornecer informaes sobre a composio de um sistema polimrico, atravs da ionizao suave da amostra. A Figura 15 que se segue esquematiza o equipamento tpico de espectroscopia de massa MALDI-TOF constitudo por um recipiente para amostras, um laser ptico, uma fonte de alta tenso, um tubo de vento, e um detector electrnico para os ies [30].
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Figura 15 Esquema de um equipamento tpico de espectroscopia de massa MALDI-TOF [30].
Nesta tcnica, uma determinada amostra colocada numa matriz apropriada e sujeita a alto vcuo para ser cristalizada. A ao de um pulso de laser de gs de azoto com determinado comprimento de onda capaz de ionizar as molculas da amostra. Esta ao leva libertao de molculas e ies da matriz, a partir da placa. Posteriormente os ies so acelerados e um equipamento de anlise mede o tempo que as molculas demoram a percorrer uma determinada distncia (analisador TOF) [30].
2.3. Procedimentos experimentais Esta seco diz respeito aos procedimentos utilizados em todas as atividades laboratoriais envolvidas neste trabalho de investigao.
2.3.1. Sntese do Colesevelam por FRP Com base na informao disponvel na patente [23] que descreve a sntese do produto comercial Colesevelam sintetizou-se por polimerizao radicalar livre o poli(clorohidrato alilamina) (PAlAH). Neste processo utilizou-se 13,1 mL de AlA (monmero) previamente purificado numa coluna de areia/alumina, como iniciador 20,4 mg de AAPH e como solvente 1 mL de gua destilada. Num banho de gelo colocou-se um balo de fundo redondo com 14,4 mL de cido clordrico e adicionou-se o monmero gota a gota. Posteriormente, adicionou-se a soluo aquosa de iniciador e a reao prosseguiu durante 72 h, a 50 C. Ao fim de 24 h de reao adicionou-se mais iniciador ao sistema reacional (20,4 mg de iniciador e 1 mL de solvente) e no final da reao adicionou-se 1 mL de gua destilada, tal como descrito na referida patente.
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O polmero foi isolado por precipitao em metanol frio. O p resultante foi filtrado, e o processo de lavagem e filtrao foi repetido novamente. Finalmente o p resultante foi colocado a secar numa estufa de vcuo.
2.3.2. Exemplo de polimerizao radicalar viva de PHEMA catalisada por Fe0/CuBr2/Me6TREN=1/0,1/1,1 (DP = 222) Aps passar o monmero HEMA (9,0 mL; 74,4 mmol) numa coluna de areia e alumina para remover o estabilizante preparam-se duas solues. A primeira, contendo CuBr2 (7,60 mg; 0,034 mmol), Fe(0) (18,80 mg; 0,336 mmol), Me6TREN (85,0 mg; 0,369 mmol) e DMSO (4,5 mL), onde o solvente foi previamente borbulhado em azoto durante cerca de cinco minutos e a segunda com o monmero e o iniciador EBiB (60,30 mg; 0,336 mmol). Depois de preparar o reator Schlenk de fundo redondo por secagem em vcuo, colocaram-se as solues anteriormente descritas e congelou-se o sistema em azoto lquido. A mistura reacional do reator foi sujeita a um processo de desgaseificao, para remover o oxignio, atravs de ciclos de congelamento-vcuo-descongelamento e purga com azoto. Finalmente preencheu-se a atmosfera do reator com azoto e colocou-se num banho a 30 C com 700 rpm, durante cerca de 24 h. Na Tabela 3 encontram-se todos os materiais envolvidos na reaes de LRP estudadas. A escolha dos monmeros teve em conta o objetivo central do trabalho, a sntese de polmeros funcionais com possvel aplicao em frmacos sequestradores de cidos biliares. Neste sentido pretendeu-se obter por LRP polmeros funcionais que apresentem biocompatibilidade com os tecidos vivos, baixa toxicidade, hidrofilicidade e a presena de grupos hidroxilo com capacidade de funcionalizao. Assim selecionaram-se monmeros acrlicos (HEA e HEMA), como consequncia da vasta utilizao e inmeras aplicaes j existentes para a sntese hidrogis na indstria farmacutica e em aplicaes biomdicas [16].
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Tabela 3 - Compostos envolvidos nas reaes de LRP, estudadas.
Monmeros HEA HEMA AlA
Iniciador EBiB
Ligantes
Me6TREN
TREN
Bipiridina
Solventes DMSO Catalisador Fe (0) + Cu(II)Br2 gua
Hidrogis de acrilatos e de metacrilatos tm sido propostos como potenciais materiais para aplicaes farmacuticas, nomeadamente como sistemas de liberao controlada de frmacos, bioadesivos e como dispositivos segmentveis de agentes teraputicos [16]. A alilamina, sendo o monmero utilizado para a sntese do BAS comercial [23] ser tambm objecto de estudo em reaes de LRP.
2.3.3. Purificao de monmeros (HEA e HEMA) Uma vez que os monmeros HEA e HEMA utilizados neste trabalho esto contaminados inevitavelmente com compostos diacrilatos foi necessrio previamente purific-los por forma a evitar a formao de um hidrogel durante a polimerizao por LRP. O processo utilizado foi adoptado da literatura [31] e [32], respectivamente para o HEA e o HEMA. Preparou-se uma soluo aquosa de monmero 25 % (v/v) que foi posteriormente lavada cinco vezes com hexano. Por cada litro de soluo adicionou-se 250 g de cloreto de sdio, sendo a soluo resultante lavada duas vezes com ter etlico. Aps adicionar sulfato de clcio como agente secante e 0,1% de hidroquinona como agente estabilizante, destilou-se a soluo no evaporador rotativo por forma a evaporar o ter etlico da soluo.
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2.3.4. Sntese de Me6TREN A sntese de Me6TREN foi feita com base em informao da literatura [25] [26]. Uma soluo de formaldedo (37% w/w, 49,3 mL) e cido frmico (88% w/w, 50 mL) previamente agitada foi adicionada, gota a gota, temperatura de 0 C, a 10 mL de TREN e de gua destilada durante uma hora. De seguida, a mistura foi mantida em refluxo a 95 C durante 12 h. Com o intuito de remover os compostos volteis destilou-se a mistura proveniente do refluxo durante 1 h a 70 C. Ajustou-se o pH da soluo castanha resultante at valor de pH superior a 10 com uma soluo saturada de hidrxido de sdio. A mistura foi lavada com cloreto de metilo duas vezes, a fase orgnica foi seca, adicionando sulfato de sdio e colocada no evaporador rotativo a 40 C tendo-se obtido um leo amarelo. O Me6TREN foi analisada por 1H-RMN em 600 Hz para confirmar a sua estrutura. O espectro de RMN do composto sintetizado encontrase no anexo A.
2.3.5. Cintica PHEMA A metodologia adoptada para a reao que envolve a cintica de uma reao LRP em toda igual ao j descrito no ponto 2.3.2 referente polimerizao radicalar viva catalisada por metais. No entanto, aps colocar o reator no banho de 30 C, durante a polimerizao, vo sendo recolhidas amostras de polmero, em tempos previamente definidos. Para tal, em cada amostra uma agulha inserida no reator, utilizando um brao lateral com azoto, e uma seringa recolhe o polmero em cada instante de tempo. Este procedimento garante que no ocorre entrada de oxignio no reator durante a recolha das amostras. Na Figura 16 apresenta-se a montagem utilizada nas reaes de cintica de PHEMA.
Figura 16 Montagem utilizada nas cinticas das reaes de LRP de PHEMA.
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ainda de referir que cada amostra recolhida foi analisada por espectroscopia de RMN 1H, para determinar a converso de monmero, e por GPC para determinar o peso molecular e a polidipersividade dos polmeros.
2.3.6. Reiniciao ou copolimerizao Para concretizar esta experincia executou-se o procedimento anterior de LRP (seco 2.3.2), no entanto, o inciador EBiB foi substitudo pelo macroiniciador PHEMA, obtido numa reco nas seguintes condies [HEMA]0/[EBiB]0/[Fe(0)]0/[CuBr2]0/[Me6TREN]0 = 50/1/1/0,1/1,1 e [HEMA]0/[DMSO]=1/1 (% vol). Assim, aps purificar HEMA (1,80 mL; 14,86 mmol) numa coluna de areia e alumina preparou-se o reator Schlenk de fundo redondo, secando em vcuo. De seguida adicionou uma soluo de CuBr2 (0,70 mg; 0,003 mmol), Fe(0) (1,7 mg; 0,03 mmol), Me6TREN (7,5 mg; 0,033 mmol) e DMSO (1,8 mL) e outra com o monmero e o macroiniciador PHEMA (60,30 mg; MnGPC=1,0x104 g/mol; Mw/Mn =1,32 ). Depois de executar os mesmo procedimentos de desgaseificao descritos nas reaes de LRP deixou-se a reo ocorrer por 24 h a 30 C e 700 rpm.
2.3.7. Sntese de hidrogis Os hidrogis podem ser preparadas por vrias tcnicas de polimerizao ou por transformao de polmeros existentes [33]. Neste trabalho a sntese de hidrogis foi feita com base no trabalho desenvolvido por Mandeville [23], que descreve o processo utilizado para a reticulao de polmeros de alilamina que conduz obteno de um hidrogel. Assim, pretende-se reticular os grupos amina do polmero, por reao com um agente de reticulao, em meio bsico, temperatura ambiente, at se obter um gel. Colocando o gel em gua e agitando durante algumas horas h a formao de partculas slidas, que so lavadas em gua, em alguns processos de lavagem, e secas em estufa de vazio. Para cada polmero, sintetizado por FRP ou LRP, preparam-se solues de 25% de polmero e utilizaram-se trs agentes de reticulao a epicloridirna, o ter diglicdico do 1,4-butanodiol e o ter diglicdico do 1,2-etanodiol, com diferentes percentagens de agente. diferenas que so descritas e seguida. Embora os procedimentos de reticulao sejam semelhantes para os agentes utilizados, h pequenas
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Reticulao com epicloridrina
Preparou-se uma soluo de polmero em gua a 25% [23] em massa e ajustou-se o pH da soluo a 10 com soluo aquosa de hidrxido de sdio. De seguida adicionou-se a epicloridrina como agente de reticulao para diferentes relaes de massa de agente reticulante e massa de polmero 5,9% [23], 200% e 975%. Deixou-se a soluo em agitao, temperatura ambiente, at gelificar. Depois de remover o polmero em gel procedeu-se lavagem com gua e as partculas foram recolhidas por filtrao. Depois de repetir o processo de lavagem colocaram-se as partculas na estufa de vazio para secagem. Com este procedimento testaram-se os polmeros de polialilamina sintetizada por FRP, bem como, o PHEMA e a PAlA sintetizados por LRP.
Reticulao com ter diglicdico do 1,4-butanodiol
Para os polmero de PAlAH de FRP prepararam-se solues de 25% [23] (em massa) em gua e ajustou-se o pH da soluo a 10 com soluo aquosa de hidrxido de sdio. Por adio de ter diglicdico do 1,4-butanodiol, como agente de reticulao, a 14% [23] e 975% (massa de agente reticulante/massa de polmero) prepararam-se os hidrogis, temperatura ambiente, at gelificar. Depois de remover o polmero em gel procedeu-se lavagem com gua, durante uma hora, e as partculas foram recolhidas por filtrao. O procedimento de lavagem foi executado por duas vezes e o produto final foi seco a vcuo durante alguns dias para garantir a ausncia de gua.
Reticulao com ter diglicdico do 1,2-etanodiol
O procedimento de reticulao de polmeros de polialilamina com o ter diglicdico do 1,2etanodiol idntico ao do ter diglicdico do 1,4-butanodiol. Neste caso prepararam-se solues de polmero em gua a 25% [23] e a relao de massa de agente/massa de polmero foi de 25% [23] e 975%. A diferena para o agente 1,4-butanodiol diglicidil ter reside apenas no processo de lavagem. Neste caso a lavagem feita com metanol e aps filtrao adicionado gua, ficando a suspenso em agitao por uma hora. Aps nova filtrao o processo de lavagem com gua repetido e adiciona-se isopropanol antes de colocar o hidrogel a secar em vcuo [23].
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2.3.8. Testes de Inchao (Swelling) Com o intuito de avaliar o grau de inchao dos hidrogis de PAlA FRP reticulados com epicloridrina, executaram-se testes de swelling. Nestes testes seguiu-se o trabalho desenvolvido por Sadahira [34] para a caracterizao e avaliao do perfil de liberao in vitro de hidrogis do lcool polivinlico. Este trabalho avalia a quantidade de gua que o hidrogel capaz de absorver em trs solues fosfato a pH de 3, 6 e 9. No presente trabalho prepararam-se trs pequenos frascos com quantidades de hidrogel semelhantes (100 mg). Adicionou-se um volume predefinido de soluo tampo fosfato a pH 6 (4 mL) e colocaram-se as amostras num shaker (Thermoshake com cmara com temperatura controlada) a 37 C e 900 rpm durante 25 h. Durante as primeiras 4 h as amostras foram recolhidas em intervalos regulares de uma hora, e o excesso de gua superficial retirado com papel de filtro, pesadas numa balana e determinado o grau de inchao.
Preparao da soluo tampo fosfato a pH 6
1,7 g de dihidrogenofosfato de sdio (NaH2PO4) foram pesados e solubilizados em 200 mL de gua miliQ temperatura ambiente. O pH da soluo foi ajustado a 6,0 com soluo de NaOH a 10 M e o volume da soluo foi ajustado com gua at perfazer 250mL de soluo.
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Seco III Resultados e Discusso
3. Neste captulo sero apresentados e discutidos todos os resultados obtidos e decises tomadas no decorrer do trabalho. Esta seco est dividida em trs partes fundamentais. A primeira diz respeito tentativa de sintetizar o frmaco comercial que funciona como agente sequestrador de cidos biliares, o Colesevelam, com base na informao obtida em Mandeville [23]. A segunda parte relativa sntese de polmeros por LRP utilizando HEMA, HEA e AlA como monmeros. Nesta parte so abordadas as cinticas de reao de sntese de PHEMA e discutidos os resultados obtidos quando se variam parmetros de polimerizao, como: grau de polimerizao, rcio monmero/solvente e alterao do ligante. Os polmeros obtidos podem vir a ser possveis candidatos a hidrogis para agentes BAS e portanto, a terceira parte diz respeito fase se sntese de hidrogis a partir dos polmeros obtidos por LRP. A fase de alquilao para obter os agentes sequestrados de cidos biliares no ser abordada neste trabalho por limitao de tempo.
3.1. Polimerizao radicalar livre Colesevelam. Com base na informao da patente do Colesevelam [23], a primeira etapa do trabalho foi a preparao deste frmaco polimrico por FRP. Com isto, pretendeu-se desenvolver conhecimento nesta rea e determinar as propriedades do polmero, nomeadamente o seu peso molecular dada que esta informao no existia na literatura. Desta forma pretendia-se, posteriormente, proceder sntese da polialilamina (polmero base do Colesevelam) com peso molecular igual ao do polmero comercial, mas seguindo uma nova abordagem baseada em LRP. Esta estratgia permitiria verificar se o controlo sobre o peso molecular (homogeneidade das cadeias) do polmero teria alguma influncia na capacidade de sequestrao de cidos biliares. O procedimento experimental executado para a sntese da PAlAH encontra-se descrito no ponto 2.3.1 deste trabalho e consistiu na reproduo exata procedimento descrito na patente do produto [23]. Segundo a referncia, aps adio do monmero (AlA) ao cido clordrico deve levar-se a mistura ao evaporador rotativo a 60 C. Ao executar-se este procedimento verificou-se que a soluo ficou viscosa. De facto, dada a grande estabilidade do radical allico improvvel que suceda alguma autopolimerizao. A explicao mais plausvel a transformao da amina na forma de hidrocloreto o que aumenta as interaes intermoleculares. 42
Aps esta primeira tentativa, foi necessrio recorrer a vrias alteraes ao procedimento devido ao facto dos resultados obtidos no serem de forma alguma concordantes com o que se encontra descrito na patente. A Tabela 4 apresenta as condies de reao para todas as snteses de PAlAH por FRP realizadas neste trabalho, definidas com base nos resultados preliminares, bem como os resultados obtidos em termos de processo de obteno do polmero e peso molecular.
Tabela 4 Condies das reaes de sntese de PAlAH por FRP e resultados obtidos. Cdigo experincia COL I COL II COL III COL IV COL V
1 2
Monmero AlA AlA AlA AlA AlA
Iniciador AAPH1 AAPH + ANT2 ANT AAPH AAPH
Temperatura (C) 50 50 60 60 80
Tempo reaco (h) 72 120 72 72 120
Precipitao em metanol frio No precipitou Precipitou como p No precipitou No precipitou Precipitou como p
Precipitao em hexano frio Precipitou como leo Precipitou como leo Precipitou como leo Precipitou como leo
Azobis(aminopropano dihidrocloreto) Akzo Nobel Trigonox 187 w-40
Com base nas observaes indicadas na Tabela 4 possvel constatar que todas as formulaes conduziram formao de polmero, j que houve sempre precipitao do produto final num no solvente do polmero. No entanto, a necessidade de realizar vrias experincias de FRP com diferentes condies surgiu pelo facto de a tentativa de reproduo da patente do Colesevelam no ter produzido os resultados esperados. A experincia COLI corresponde sintese do Colesevelam recorrendo ao procedimento descrito na patente, excluindo a parte de levar a mistura inicial ao evaporador rotativo (como descrito anteriormente). A precipitao do polmero em metanol frio (de acordo com o descrito na patente) no resultou. Nesse sentido, duas situaes poderiam ter ocorrido, ou no tinha havido polimerizao ou o peso molecular era muito baixo. Tentou-se precipitar o polmero tambm em hexano visto que um solvente muito apolar, tendo sido possvel obter um precipitado na forma de leo, o que veio confirmar possibilidade de se tratar de um polmero de baixo peso molecular. Dessa forma, no foi possvel isolar o polmero como p branco tal como descrito na patente. O baixo peso molecular pode ser explicado pela grande estabilidade do monmero na reao de polimerizao. Neste sentido, considerou-se a possibilidade da patente no estar a especificar a temperatura correta de reao, parmetro que influencia o peso molecular de polmeros preparados por FRP. Assim, com o objetivo de testar a influncia da temperatura da reao e adicionalmente a obteno de 43
polmeros de maior peso molecular realizaram-se diversas experincias (COL II, COL III, COL IV e COL V) utilizando diferentes temperaturas e um iniciador mais rpido que o AAPH. Com estas experincias pretendeu-se verificar qual o peso molecular da PAlAH necessrio para que se consiga obter um p no processo de precipitao, aproximando-nos assim das condies da patente. Uma vez obtido o polmero COL I (aps 72 h de reao) adicionou-se um novo iniciador disponvel no laboratrio, Akzo Nobel Trigonox187-w40 (ANT), ao sistema com o intuito de testar um iniciador com tempo de meia vida inferior (1 h a 56 C, e AAPH tem um tempo de meia vida de 10 h a 56 C). A reao prosseguiu por mais 48 h (num total de 120 h) , tendo-se obtido uma mistura reacional visualmente semelhante COL I. No entanto, quando precipitada em metanol a frio formou-se um p branco, o que sugere que o peso molecular obtido maior do que o obtido em COL I. Este resultado demonstra que de facto as condies de reao descritas na patente no devero estar corretas, uma vez que no permitem obter o polmero na forma desejada. A introduo de um iniciador mais rpido permitiu criar mais radicais temperatura de reao em causa, e com isso iniciar mais cadeias polimricas. Tendo em considerao este resultado, para verificar a eficcia deste novo iniciador procedeuse sntese do COL III e COL IV nas mesmas condies em termos de quantidades de monmero e temperatura de 60 C mas com diferentes iniciadores (COL III utilizou-se o AAPH em COL IV utilizou-se o ANT). Nestas experincias os polmeros continuaram a precipitar como leo em hexano e no houve qualquer formao de slido em metanol. No entanto, quanto se simulou os dados da patente, variando apenas a temperatura da reao de 50 para 80 C a situao alterou-se e verificou-se a formao de partculas slidas quando se precipitou a soluo com polmero a metanol frio. Dado que a temperatura de polimerizao tm um influncia decisiva no peso molecular dos polmeros preparados por FRP, era um objetivo inicial deste trabalho preparar a PAlAH, seguindo o procedimento da patente, para que fosse possvel depois determinar o peso molecular do polmero. Esse valor seria importante para definir o peso molecular alvo a atingir por LRP. Nesse sentido, seria possvel ento comparar influncia do controlo do peso molecular no desempenho do BAS para o mesmo peso molecular alvo. Recorrendo ao produto comercial impossvel determinar o valor de peso molecular dado que o polmero na forma comercial j se encontra reticulado o que impossibilita as determinaes por GPC. A Figura 17 que se segue apresenta o espectro RMN em gua deuterada da reao de Colesevelam a 80 C .
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Figura 17 - Espectro RMN 1H a 600 MHz de PAlAH a 80C por 72 h (COLV) em D2O.
Analisando o espectro de RMN da Figura 17 possvel observar trs sinais de absores de protes do polmero de PAlAH. O sinal a $=1,48 ppm (b) consequncia do desvio referente aos protes presentes no grupo metileno (-CH2-) na cadeia principal do polmero e o sinal a $=1,98 ppm (c) corresponde ao grupo -CH- da mesma cadeia. No que diz respeito, ao grupo CH2- ligado ao grupo caracterstico das polialilaminas (NH2) responsvel pelo sinal a $=3,01 ppm (a). O facto de este ltimo grupo estar associado a um tomo de maior electronegatividade (tomo de azoto) provoca um efeito de desblindagem e aumenta o deslocamento qumico [35]. O sinal adicional a $=4,20 ppm caraterstico do solvente utilizado para preparar a amostra, a D2O. Os sinais referidos anteriormente para a PAlAH so os mesmos encontrados na literatura [35].
3.2. Polimerizao radicalar viva (LRP) Com o objetivo de controlar o peso molecular, a distribuio de pesos moleculares, a estrutura, a arquitetura e a funcionalidade dos polmeros que possam ser usados em agentes sequestradores de cidos biliares, estudou-se a sintese de trs polmeros por ATRP. Neste trabalho sero apresentados e discutidos os sistemas de ATRP aplicados sntese de PHEA, PHEMA e PAlA, com grau de polimerizao (DP) de 222, em dois solventes diferentes, gua e DMSO. As reaes foram catalisadas por por metais de ferro (Fe(0)) e cobre (Cu(II)Br2), utilizando EBiB como iniciador, na presena de diferentes ligantes (Me6TREN, TREN) temperatura ambiente. 45
Importa salientar, que devido aos resultados promissores obtidos na polimerizao do HEMA em DMSO, esta reao foi estudada em termos cinticos para vrios DP (50, 222), diferentes relaes Vmonmero/Vsolvente (1:1, 1:2) e testando dois ligantes (Me6TREN e a bipiridina). Para avaliar o carcter vivo dos polmeros PHEMA foram analisados os dados de RMN para identificar o terminal ativo de cadeia e foi realizada uma experincia de reiniciao utilizando como macroiniciador PHEMA-Br resultante de uma reao ATRP.
3.2.1. Sntese de PHEA, PHEMA e PAlA por LRP O sistema cataltico utilizado no presente trabalho, Fe(0)/CuBr2/Me6TREN = 1/0,1/1,1, foi desenvolvido recentemente por nos laboratrios do DEQ/FCTUC [8]. A sua escolha foi feita com base nas caractersticas do sistema nomeadamente, a utilizao de baixas quantidades de cobre como catalisador, o recurso a um outro catalisaor (Fe(0)) biocompatvel (caracterstica fundamental para possvel implementao em frmacos). Neste captulo sero estudadas uma srie de polimerizaes com DP=222, [monmero]0/[solvente] = 2/1 (% v/v), que ocorreram durante 24 h a 30 C e 700 rpm (Tabela 5). O valor de 222 um valor tipicamente usado na literatura para estudos de polimerizao do acrilato de metilo, e foi utilizado neste trabalho para que se pudesse comparar mais facilmente o resultados obtidos.
Tabela 5 Experincias de LRP executadas com DP de 222.
Cdigo Experincia BAS 01 BAS 02 BAS 03 BAS 04 BAS 05
Monmero HEA HEA HEMA HEMA AlA
Iniciador EBiB EBiB EBiB EBiB EBiB
Sistema cataltico Fe(0) e CuBr2 Fe(0) e CuBr2 Fe(0) e CuBr2 Fe(0) e CuBr2 Fe(0) e CuBr2
Ligante Me6TREN TREN Me6TREN TREN Me6TREN
Solvente DMSO gua DMSO gua DMSO
Os monmeros HEA e HEMA foram selecionados para este sistema, tendo em conta a aplicao final, por diversas razes: dado o seu potencial demonstrado em aplicaes farmacuticas [14] (libertao controlada de frmacos) e em formulaes de hidrogis (lentes de contacto) [14]; dado que possuem grupos ~OH na sua estrutura que podem ser funcionalizados; e o facto das estratgias de LRP descritas na literatura para estes monmeros no permitem obter polmeros com baixa polidispersividade [32]. Segundo Coca e colaboradores [31] a sntese de PHEA por ATRP a 90 C, utilizando CuBr como catalisador, metil 2-bromoproprionato como iniciador e bipiridina como ligante, 46
conduziu a polidispersividades elevadas (superiores a 1,6). Pretendeu-se, assim, estudar a viabilidade do sistema cataltico desenvolvido por Mendona [8] para a sntese destes polmeros. No que diz respeito a alilamina, um monmero difcil de polimerizar por FRP e apenas se produzem oligmeros para baixos rendimentos, dado que ocorrem reaes de auto-terminao entre os tomos de hidrognio allicos e os radicais [35]. No entanto, pretendeu-se estudar a viabilidade do mesmo sistema cataltico de LRP na medida em que a PAlAH o polmero que est na base do agente sequestrador de cidos biliares mais eficiente no mercado, o Colesevelam. A escolha do iniciador um factor de extrema importncia em LRP uma vez que este que determina a estrutura de um dos terminais do polmero, determina a reactividade inicial (abstrao do halogneo) e a sua estrutura necessita de ser compatvel com o monmero a polimerizar. O iniciador selecionado neste sistema o etil 2-bromoisobutirato (EBiB), que se tem revelado eficiente na iniciao de acrilatos e metacrilatos [8, 36]. Tipicamente, em ATRP utiliza-se um complexo de cobre(I)X/Ligante (X: halogneo; L: ligante) como ativador da reao de polimerizao. Este reage reversivelmente com as espcies dormentes do sistemas para gerar o desactivador Cu(II)X2/L e produzir um radical (R!). O radical propaga-se por adio de mais monmero (M) at reagir com o desativador e ocorrer a reao de desativao, formando de novo a espcie dormente e o ativador Cu(I)X/L [28]. Para o sistema em estudo utiliza-se como catalisadores o CuBr2 que atua como desativador de radicais em crescimento e o Fe(0) que se pensa servir de ativador inicial de espcies dormente e agente oxidante que regenera o ativador Cu(I)Br durante a polimerizao [8], na presena de Me6TREN. O esquema que se segue ilustra o possvel mecanismo das reaes ocorridas no processo catalisado por Fe(0)/CuBr2/Me6TREN.
47
Figura 18 - Mecanismo de reao sugerido para polimerizao viva catalisada por Fe(0)/CuBr2/Me6TREN [37].
A escolha do solvente para um sistema deste tipo deve ter em conta alguns aspetos fundamentais. O solvente tem que minimizar a transferncia de cadeia para si prprio, ter a menor interao com o sistema cataltico (a estrutura do catalisador pode mudar com a presena de diferentes solventes) e conduzir ao menor nmero de reaes colaterais [38]. O DMSO foi utilizado como solvente, porque promove reaes LRP muito rpidas [8, 36]. Neste trabalho, como os monmeros acrlicos em estudo so solveis em gua, este solvente foi tambm testado com o sistema cataltico. Neste caso, trata-se de uma mais valia em termos ambientais tendo em conta uma futura implementao em processo industrial. Relativamente aos ligantes, o Me6TREN tem sido usado em combinao com catalisadores base de cobre, conduzindo a bons resultados em termos de controlo da polidispersividade dos polmeros, para a polimerizao de acrilatos em DMSO [8, 36]. Como uma das funes do ligante dissolver o catalisador no meio reacional, nas reaes em gua optou-se por escolher um ligante mais hidroflico (TREN) que tambm se tem revelado eficiente na polimerizao de acrilatos [8, 36]. Nas primeiras experincias de LRP desenvolvidas neste trabalho para os sistemas de HEA e HEMA em DMSO e gua (BAS 01, 02, 03 e 04 na Tabela 5) executou-se o procedimento descrito em 2.3.2. Para as polimerizaes de HEA e HEMA em DMSO (BAS 01 e BAS 02 na Tabela 5) verificou-se que a soluo ficou muito viscosa logo nos primeiros instantes da reao e que, aps tentar dissolver os polmeros finais em DMF (bom solvente dos polmeros PHEA e PHEMA), estes inchavam e no se dissolviam. Aps consulta bibliogrfica, verificou-se que os grupos de investigao de Coca [31] e Beers [32] referiam que este tipo de monmeros vm normalmente contaminados com espcies de diacrilatos. Esta contaminao dos monmeros conduziu, no formao de um polmero aps 24 h de reao, mas sim 48
formao de um hidrogel. Com base neste resultado foi necessrio purificar inicialmente os monmeros (descrito em 2.3.3) para se poder obter polmeros lineares durante as reaes de LRP. Neste ponto importante referir que, para garantir a reprodutibilidade de todos os trabalhos laboratoriais com estes monmeros (HEA e HEMA), foi purificada uma quantidade suficiente para todas as experincias. A ausncia de impurezas prejudiciais s snteses por LRP foi confirmada por RMN. Para evitar que ocorresse qualquer reao de polmerizao durante o armazenamento dos reagetnes adicionou-se hidroquinona, como inibidor de radicais. Importa referir que este composto removido do monmero durante a de purificao que efectuada imediatamente antes das reaes, com o recurso a colunas de alumina/areia. Aps a purificao dos monmeros, executou-se novamente os procedimentos de LRP (ponto 2.3.2) para cada sistema apresentado na Tabela 5. resultados obtidos.
Tabela 6 Observaes, condies de RMN, de GPC e resultados de peso molecular para as polimerizaes de HEA, HEMA e AlA por LRP, utilizando Fe(0)/CuBr2/Me6TREN = 1/0,1/1,1 como sistema cataltico a 30 C durante 24 h. DP = 222 e [solvente]/[monmero]0 = 1/2 (v/v).
Na Tabela 6 esto apresentadas as
principiais observaes deste trabalho, as condies de cada amostra para RMN e GPC, e os
Cdigo das Experincias
BAS 01
HEA/DMSO
BAS 02
HEA/gua
BAS 03
HEMA/DMSO
BAS 04
HEMA/gua
BAS 05
AlA/DMSO
Cor da soluo Observaes Solvente RMN Solvente GPC Mn Terico

(para 100% de converso)
Vermelha Magneto parado em 2h d6-DMSO
Verde Magneto parado em 2h d6-DMSO
Verde Magneto parado em 2h d6-DMSO
Castanho Magneto parado em 2h d6-DMSO
Azul
d6-DMSO
DMF
DMF
DMF
DMF
DMF
25 000 * *
25 000 * *
25 000 1,14 44 000
29 000 ** **
19 000
Mw/Mn Mn GPC
***
***
* Ver resultados qualitativo na Figura 19 ** No foi possvel determinar *** Ver resultados qualitativo na Figura 23
49
No que se refere cor soluo, achou-se pertinente colocar este parmetro como observao para cada experincia uma vez que est relacionado com o estado de valncia dos catalisadores metlicos presentes no sistema. Como descrito na literatura [37], o uso do sistema cataltico Fe(0)/CuBr2/Me6TREN na polimerizao do metacrilato em DMSO (condies semelhantes experincia BAS 01) conduziu a uma soluo verde, dado presena de CuBr2 no sistema. O perfil caracterstico de absorvncia do complexo foi confirmado por espectroscopia de ultravioleta-visvel (UV-vis). No entanto, no presente trabalho, em BAS 01 a soluo ficou vermelha, pelo que pode ter havido formao de outros estados de valncia de cobre. Assim, o mecanismo de reao proposto para polimerizaes catalisadas por Fe(0)/CuBr2/Me6TREN pode sofrer alguma alterao quando aplicado aos monmeros em estudo neste trabalho. Dado a limitaes de tempo, no foi possvel fazer estudos de espectroscopia UV-Vis para perceber que espcies metlicas estariam presentes nas diversas polimerizaes. Assim, este estudo dever ser tido em conta em trabalhos futuros para uma melhor compreenso do mecanismo de reao para este sistema cataltico, consoante as condies de polimerizao. Como j referido, no final de cada reao procedeu-se anlise de cada amostra de soluo. Atravs de anlise de GPC, preparada em soluo de DMF, pretendeu-se avaliar a formao ou no de polmero, e qual o peso molecular e polidispersividade obtidos. Nesta etapa surgiram algumas limitaes, dado que no foi possvel encontrar na literatura valores de dn/dc para todos os polmeros em estudo, nas condies de operao do GPC (solvente: DMF; T = 60 C). O dn/dc um parmetro que descreve a variao do ndice de refrao com a variao da concentrao de polmero no solvente e essencial para o clculo do peso molecular. Quando no existe informao sobre este parmetro, a nica via que permite determinar o peso molecular por GPC a a preparao de uma soluo de polmero purificado e de concentrao exata. No caso deste trabalho, tambm no foi possvel isolar alguns polmeros de forma conveniente a obter produtos puros. O nico polmero para o qual se obteve valor de dn/dc foi o PHEMA. Assim, pretendeu-se recorrer a uma tcnica alternativa de determinao de peso molecular de polmeros, a espectroscopia de massa MALDI-TOF, no entanto, os resultados no chegaram a tempo da entrega deste trabalho. Apesar destas limitaes, para o PHEA possvel fazer uma anlise qualitativa da polidispersividade, por comparao com o cromatograma obtido para o PHEMA (BAS 03) que apresenta Mw/Mn = 1,14 (Figura 19).
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Figura 19 - DP normalizado em relao ao volume de reteno. Reao de PHEA em DMSO (BAS 01), de PHEA em gua (BAS 02) e de PHEMA em DMSO (BAS 03), com Mw/Mn (BAS 03) = 1,14.
Como possvel observar atravs da Figura 19, a polidispersividade e o peso molecular do PHEA obtido usando DMSO (BAS 01) ou gua (BAS 02) como solvente de reao no difere muito, j que os cromatogramas esto praticamente coincidentes. Assim, pode dizer-se que neste caso o solvente da reao no teve influncia sobre o grau de controlo sobre o peso molecular e sobre a converso final de monmero atingida na polimerizao do PHEA. Relativamente polidispersividade, verifica-se que esta superior do PHEMA (BAS 03), pois os cromatogramas apresentam uma distribuio de pesos moleculares com maior abertura do que a do anterior. Uma possvel explicao para este resultado o facto do monmero HEA (radical secundrio) ter uma velocidade de propagao superior do HEMA (radical tercirio), o que faz com que a diferena entre a velocidade do ciclo de ativao/desativao, que mantm o equilbrio dinmico LRP, no seja suficiente para promover um controlo eficaz sobre o crescimento das cadeias. Para alm da determinao de pesos moleculares, recorreu-se a anlises de RMN a fim de confirmar as estruturas polimricas obtidas nas reaes. Na Figura 20, 21 e 22 encontram-se representados os espectros de RMN do PHEA, PHEMA e PAlA.
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Figura 20 - Espectro RMN 1H a 600 MHz de PHEA em d6-DMSO, obtido por LRP a 30 C durante 24 h (BAS 01).
A figura 20 representa o espectro de RMN de PHEA obtido nas condies de reao de BAS 01 (30 C, 24 h, DMSO como solvente). A polimerizao de HEA para obter o PHEA ocorre como consequncia da reao dos grupos vinlicos, pelo que na estrutura do polmero ocorre a repetio de grupos -CH2- na cadeia principal, juntamente com o grupo COOCH2CH2OH lateral. A anlise de RMN em DMSO revela a presena de: um sinal (a) a $=4,74 ppm que corresponde ao hidrognio do grupo -OH; dois sinais (c) e (b) a $=4,01 ppm e $=3,55 ppm que correspondem aos grupos CH2- do hidroxietil. A $=4,20 ppm seria espectvel a presena de (f) que corresponde ao CH2- ligado ao terminal ativo [39], no entanto, este sinal encontra-se no mesmo desvio do CH2- de (c). O sinal (e) a $=2,26 ppm representa o grupode CH2- da cadeia principal do polmero e finalmente em (d) a $=1,00 ppm encontra-se o sinal CH- da cadeia principal. Adicionalmente a $=2,55 ppm e a $=3,35 ppm encontramse os picos de solventes da reao e monmero, DMSO e gua, respetivamente. Os sinais obtidos foram idnticos aos descritos por Cocca [31] e Vargun [40]. O espectro de RMN do PHEMA (BAS 03) preparado a 30 C em DMSO encontra-se na Figura 21.
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Figura 21- Espectro RMN 1H a 600 MHz de PHEMA em d6DMSO, obtido por LRP a 30 C durante 24 h (BAS 03).
Analisando a figura anterior so notrias as semelhanas com o grfico de RMN de PHEA. A diferena reside essencialmente na presena de um grupo metil, na posio (d) a $=0,78 ppm. Tal facto j seria de esperar na medida em que a nica diferena entre BAS 01 e BAS 03 reside no monmero, em que HEMA possuiu um -CH3 ao contrrio do que acontence no HEA. Na posio de $=4,35 ppm supe-se que o sinal corresponde ao terminal ativo de cadeia, no entanto este no foi possvel confirmar na literatura. Adicionalmente, realizou-se uma reao de extenso de cadeia (ver discusso na seco 3.2.3 que se segue), onde foi possvel comprovar a presena do terminal ativo no polmero, na medida em que, se obteve um copolmero com peso molecular superior ao que esteve na sua origem (PHEMA, BAS 03).
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Figura 22 Espectro RMN 1H a 600 MHz de PAlA em d6DMSO, obtido por LRP a 30 C durante 24 h (BAS 05).
O espectro de RMN da PAlA obtida por ATRP a 30 C ao fim de 24 h encontra-se na Figura 22. possvel identificar trs sinais caractersticos do polmero e um sinal caracterstico do solvente deuterado a $=2,55 ppm. O sinal do CH2- ligado ao grupo amina aparece em (a) para $=3,15 ppm. Os sinais a $=4,94-5,13 ppm (b) e a $=5,91 ppm (c) so respectivamente os protes dos grupos -CH2- e -CH- da cadeia principal do polmero. Dado que no ponto referente polimerizao radicalar livre da PAlAH, uma das experincias que permitiu precipitar o polmero na forma de p (aps precipitar soluo em metanol) foi a que simula os dados da patente mas com temperatura de 80 C, achou-se pertinente realizar uma reao LRP de AlA a 80 C. Desta forma, poderia comparar-se os resultados com FRP a 80 C e LRP a 30 C, e assim verificar influncia da tcnica de polimerizao usada e da variao da temperatura, respetivamente, nas propriedades do polmero. Na Tabela 7 encontram-se referidas as condies de reaco de cada experincia.
Tabela 7 Estudo Comparativos de reaes de alilamina FRP e LRP a 30 e 80 C.
Cdigo Experincia BAS 05 BAS 06 COL V
Tcnica de polimerizao LRP LRP FRP
Monmero/solvente AlA/DMSO AlA/DMSO AlA/gua
Temperatura reao (C) 30 80 80
Mn alvo (g/mol) (conv=100%) 19 000 20 000 -
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Injetando uma amostra de final de reao (aps 24 h) de experincia LRP da alilamina a 80 C (BAS 06) no equipamento de GPC verificou-se a existncia de polmero pelo aparecimento de um pico no cromatograma (Figura 23), no entanto este no precipitou em metanol frio sob a forma de p.
Figura 23 RI normalizado em relao ao volume de reteno. Padro de poliestireno com MP=10050 g/mol e Mw/Mn=1,02 e PAlA por LRP em reao a 30 C (BAS 05) e a 80 C (BAS 06).
Com base nos dados qualitativos obtidos para o peso molecular do polmero verifica-se que em LRP, um aumento da temperatura no conduziu a diferenas significativas no peso molecular do polmero, j que os cromatogramas dos polmeros obtidos a 30 C e 80 C so coincidentes. Este resultado seria de esperar uma vez que nos mecanismo de LRP o peso molecular terico definido apenas pela razo entre a concentrao de monmero e a concentrao de iniciador. A temperatura de polimerizao influencia apenas a velocidade de polimerizao uma vez que altera a constante de equilibrio entre as espcies dormentes e o radicais ativos em crescimento. Este fenmeno no ocorre por exemplo na polimerizao por FRP, uma vez que tipicamente as temperaturas mais elevadas favorecerem reaes secundrias (e.x transferncia de cadeia para o mnomero) o que diminui o peso molecular final. Este efeito tanto mais pronunciado quanto mais instvel for o radical em crescimento. Para radicais muitos estveis como os allicos (ex: PAlA) a influncia da temperatura no peso molecular no muito pronunciada. Ao contrrio, em radicais resultantes de monmeros no ativados (ex: cloreto de vinilo) o efeito da temperatura bastante pronunciado. Considerando o peso alvo dos polmeors (indicado na Tabela 7), a converso de monmero atingida ao fim das 24 h deve ser baixa, pois o pico do cromatograma saiu num volume de 55
eluio muito inferior a um padro de PS de peso molecular 10 050 g/mol. No que diz respeito polidispersividade, esta parece ser muito baixa por comparao com a curva do padro de PS (Figura 23), que uma das principais caractersticas que se espera de um polmero produzido por LRP. No entanto, ser necessrio proceder optimizao do sistema cataltico para a polimerizao da AlA a fim de tentar aumentar a converso de monmero final atingida.
3.2.2. Estudo cintico da LRP catalisada por metais de PHEMA Neste tpico do trabalho sero apresentados e discutidos os resultados obtidos para trs cinticas realizadas para a reao de HEMA em DMSO, onde se executou o procedimento descrito em 2.3.5. Neste estudo comparativo, fez-se variar o DP, a relao monmero/solvente e o ligante utilizado. Na Tabela 8 esto indicadas as condies de cada reao.
Tabela 8 Condies das cinticas de LRP de PHEMA em DMSO, a 30 C.
Cdigo Experincia BASK I BASK II BASK III BASK IV
[HEMA]/[DMSO]
(%v/v)
DP 222 50 222 222
Iniciador EBiB EBiB EBiB EBiB
2:1 1:1 1:1 1:2
Sistema cataltico Fe(0) e CuBr2 Fe(0) e CuBr2 Fe(0) e CuBr2 Fe(0) e CuBr2
Ligante Me6TREN Me6TREN Me6TREN Bipiridina
A escolha do HEMA para este estudo foi feita tendo em conta o objetivo central do trabalho, a sntese de polmeros funcionais com possvel aplicao em frmacos BAS. Sendo o HEMA um monmero j muito utilizado para formulaes de hidrogis para a indstria farmacutica, apresenta biocompatibilidade com os tecidos vivos, baixa toxicidade, hidrofilicidade e a presena de grupos hidroxilo com capacidade de funcionalizao [15], pode ser um potencial candidato para formulaes de agentes BAS. Importa referir que por limitaes inerentes determinao do incremento de ndice de refrao (dn/dc) dos polmeros, valor necessrio para o clculo do peso molecular utilizando o algoritmo do TriSEC, necesrio purificar o polmero e injet-lo com concentrao conhecida. No decurso do trabalho e por limitaes relacionadas com tempo, s foi possvel purificar o PHEMA e determinar o seu valor dn/dc para as condies operatrias utilizadas no GPC (solvente DMF e T = 60 C). Para os outros polmeros em estudo no foi possvel determinar valores de dn/dc nem encontr-los referenciados na literatura. Estudos futuros permitiro preparar pesos molecular suficientemente grandes de forma a isolar os polmeros e proceder ao clculo do dn/dc. 56
Assim, as experincia indicadas na Tabela 8 descrevem as polimerizaes do HEMA catalisadas pelos metais Fe(0) e Cu2Br e iniciada por EBiB em DMSO a 30 C. Este sistema foi utilizado com o intuito de determinar o seu potencial na polimerizao controlada do PHEMA e, tambm, para comparar os resultados obtidos com os descritos na literatura relativamente LRP do HEMA catalisada por cobre [32]. Os dados obtidos para pesos moleculares terico e experimental (GPC e MALDI-TOF), de polidispersividade (Mw/Mn), de converso de monmero no final da reao e da constante aparente de velocidade (kpapp) so apresentada na Tabela 9.
Tabela 9 - Resultados obtidos para as cinticas de LRP de PHEMA em DMSO a 30 C. Rcios espcies qumicas1 222/1/1/0,1/1,1 50/1/1/0,1/1,1 222/1/1/0,1/1,1 222/1/1/0,1/1,1 [HEMA]0 / [DMSO]
(%Vol.)
Cdigo BASK I BASK II BASK III BASK IV

1 2
Tempo de reao
(min)
Mn Terico
(g/mol)
Mn GPC
(g/mol)
M w/ Mn 1,28 1,32 1,08 -
Converso2
(%)
(min-1)
kpapp
2/1 1/1 1/1 2/1
90 180 150 90
2,9x104 7,0x103 2,9x104 2,9x104
2,7x104 1,0x104 5,6 x104 -
78,7 91,4 78,6 -
0,012 0,008 0,010 -
[HEMA]0/ [EBiB]0/[Fe(0)]0/[CuBr2]0/[Me6TREN]0 para BASK I, II e III e [HEMA]0/ [EBiB]0/[Fe(0)]0/[CuBr2]0/[Bipiridina]0 para BASK IV Converso de PHEMA determinada por RMN
Estudo cintico de reao tpica de LRP de HEMA. V0HEMA/VDMSO = 2/1, DP = 222 e Me6TREN como ligante (BASK I)
A reao realizada no estudo cintico BASK I em tudo idntica s reaes de LRP j efetuadas no ponto anterior deste trabalho, e que demonstraram sucesso na obteno de polmeros. A Figura 24 apresenta os dados cinticos obtidos para a experincia BASK I, nomeadamente a converso de monmeros ao longo do tempo (Figura 24 a), bem como a evoluo do peso molecular experimental (MnGPC) e a polidispersividade (Mw/Mn) com o peso molecular terico (Mnth )(figura 24 b).
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Figura 24 - Representao grfica da converso e ln([M]0/[M]) em funo do tempo (a) e de MnGPC e Mw/Mn em funo de Mnterico para reao de polimerizao de PHEMA catalisada por Fe(0) e CuBr2 a 30C em DMSO nas seguintes condies [HEMA]0/ [EBiB]0/[Fe(0)]0/[CuBr2]0/[Me6TREN]0/ = 222/1/1/0,1/1,1 e [HEMA]0/ [DMSO]=2/1 (% vol).
A reao de polimerizao foi conduzida durante noventa minutos, tendo-se atingido uma converso de monmero de 80%. Ao longo do tempo de reao a viscosidade do meio foi aumentado pelo que foi cada vez mais difcil recolher as amostras do reator. No que diz respeito, evoluo de ln[M]0/[M] com o tempo de reao linear em dois perodo diferentes. O primeiro perodo ocorre at aos 10 minutos de reao e o seguindo a partir deste. Como consequncia seriam de esperar dois parmetros de velocidade distintos para cada perodo, no entanto como nos primeiros 10 minutos de reao apenas foi recolhida uma amostra no possvel determinar este parmetro. Para o segundo perodo obteve-se uma constante aparente de velocidade de 0,012 min-1. A estes dois perodos esto tambm associados dois momentos com converso de monmero numa cintica de primeira ordem. Ao primeiro perodo, desde o incio da reao at 50% de converso, segue-se um perodo mais lento, que atinge 80% de converso em 80 minutos. Em 1999 foi publicado um estudo de polimerizao ATRP de HEMA por Beers [32]. Neste artigo, h um estudo de reaes de sntese de PHEMA, num sistema cataltico homogneo com 2,2-bipiridina como ligante, CuBr como catalisador, e etil 2-bromoisobutiurato (BriB) como iniciador, no seguinte rcio de espcies qumicas [HEMA]0/ [BriB]0/[CuBr]0 = 100/1/1. As reaes de PHEMA com DMF como solvente foram realizadas com sucesso, no entanto, temperatura ambiente e para uma diluio de 80% em DMF, a reao foi lenta (obteno de 90% converso completa de monmero em 65 h de reao) [32]. Neste estudo as reaes foram realizadas em DMF ( temperatura ambiente e a 50 C), e os resultados mostram 58
claramente uma curvatura na representao de ln([M]0/[M]) em funo do tempo, o que indica a ocorrncia de reaes de terminao devido a reaes paralelas [32]. Este efeito foi significativamente maior quando a reao ocorreu a 50 C j que no se obteve mais de 30% de converso [32]. No que diz respeito ao presente trabalho, para a reao de PHEMA em DMSO a 30 C para o sistema cataltico em estudo obteve-se tal como Beers [32] uma curva quando se representou ln([M]0/[M]) em funo do tempo. No que diz respeito polidispersividade dos polmeros obtidos no trabalho citado, estes valores foram aumentando de forma constante com a converso (1,2%Mw/Mn%1,8) [32], o que no de esperar de um sistema bem controlado. Os valores de polidisperssividade obtidos com o sistema cataltico desenvolvido por Mendona [8, 19, 37] (Figura 24 b) esto compreendidos entre 1,18-1,32, pelo que se obtm um maior controlo sobre o crescimento das cadeias de PHEMA. Outra vantagem deste sistema face aos reportados na literatura [28, 32] para a LRP do PHEMA o facto de ser realizado temperatura ambiente. Analisando ainda a variao do peso molecular experimental em funo do peso molecular terico possvel verificar que esta relao linear. No entanto, existe um pequeno desvio em relao reta ideal, bissetriz do quadrante, devido tambm s determinaes destes valores estarem afetadas pelos erros das tcnicas de RMN e GPC.
Estudo cintico de reao de LRP de HEMA. Variao de V0 HEMA/VDMSO = 1/1 e de DP =50. (BASK II)
Com o intuito de avaliar a eficincia do controlo do peso molecular de PHEMA com estes sistema cataltico, realizou-se uma experincia com um DP baixo. Sendo as cadeias finais de polmero pequenas, qualquer diferena no seu tamanho ir produzir grandes desvios na polidispersividade final do polmero. Como esta reao em teoria mais rpida que a de DP = 222 (BASK I), e esta ltima apresentou cerca de 50% de converso de monmero em 10 min (Figura 24 a) decidiu-se aumentar a quantidade de solvente em relao de monmero usado na reao (velocidade de reao diretamente proporcional concentrao de monmero). Esta escolha iria permitir a eficiente recolha de amostras durante toda a reao, caso contrrio a viscosidade iria aumentar muito e no seria possvel seguir a reao. A Figura 25 representa a converso de monmero ao longo do tempo de reao e a evoluo da cintica de primeira ordem (Figura 25 a), bem como, a evoluo do peso molecular experimental (de GPC) e da polidispersividade com o peso molecular terico (figura 25 b) para a reao ATRP de BASK II, HEMA em DMSO. 59
Figura 25 - Representao grfica da converso e ln([M]0/[M]) em funo do tempo (a) e de MnGPC e Mw/Mn em funo de Mnterico para reao de polimerizao de PHEMA catalisada por Fe(0) e CuBr2 a 30C em DMSO nas seguintes condies [HEMA]0/ [EBiB]0/[Fe(0)]0/[CuBr2]0/[Me6TREN]0/ = 50/1/1/0,1/1,1 e [HEMA]0/ [DMSO]=1/1 (% vol).
Com o intuito de atingir a converso completa de monmero a reao de BASK II em estudo foi prolongada por 150 min, comparativamente com a reao BASK I, j que o sistema usado tinha maior quantidade de solvente o que reduz a velocidade de reao. Verifica-se, pela anlise da Figura 25 a) que a converso completa de monmero atingiu os 80 %, de igual modo ao verificado para BASK I. O parmetro referente constante aparente de velocidade (kpapp) da mesma ordem de grandeza do obtido em BASK I (kpapp (BASK I) = 0,012 min-1; kpapp (BASK II) = 0,008 min-1). No entanto, estes valores no podem ser diretamente comparados j que as condies de operao, nomeadamente a concentrao de monmero, no a mesma nas duas reaes. A cintica BASK II, utilizando um DP muito baixo, permitiu constatar que se continua a ter um bom controlo sobre o crescimento das cadeia, uma vez que a polidispersividade se manteve abaixo de 1,4. Este parmetro muito importante pois, como as cadeias polimricas so muito pequenas (para DP = 50), qualquer diferena no tamanho se iria traduzir num aumento da polidispersividade do polmero. Estes resultados demonstram que o sistema cataltico usado tem potencial para ser usado na polimerizao controlada do PHEMA. Com posterior optimizao ser, certamente, possvel diminuir ainda mais o valor de polidispersividade obtido. Outro fator relevante neste sistema a evoluo linear do peso molecular, no entanto continua a verificar-se um afastamento dos valores experimentais (determinado por GPC) dos valores tericos, tal como na cintica anterior.
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Estudo cintico de reao de LRP de HEMA. Variao de V0 HEMA/VDMSO (1/1). (BASK III)
No sistema anterior (BASK II) fez-se variar dois parmetros em simultneo, DP e V0

HEMA/VDMSO .
Para analisar qual a influncia do volume de monmero em relao ao volume
de solvente no sistema cataltico por si s, aumentou-se apenas a quantidade de solvente em relao ao sistema LRP base (BASK I). Os dados cinticos obtidos apresentam-se na Figura 26.
Figura 26 - Representao grfica da converso e ln([M]0/[M]) em funo do tempo (a) e de MnGPC e Mw/Mn em funo de Mnterico para reao de polimerizao de PHEMA catalisada por Fe(0) e CuBr2 a 30 C em DMSO nas seguintes condies [HEMA]0/ [EBiB]0/[Fe(0)]0/[CuBr2]0/[Me6TREN]0/ = 222/1/1/0,1/1,1 e [HEMA]0/ [DMSO]=1/1 (% vol).
BASK III igualmente uma reao de ATRP de HEMA que ocorre a 30 C em DMSO. Neste sistema variou-se a relao Vmonmero/Vsolvente , adicionando-se igual quantidade volmica de DMSO e HEMA. Como resultado, a evoluo da converso de monmero ao longo do tempo tornou-se mais lenta, no entanto ao fim de 150 min obtiveram-se os mesmos 80% de converso, tal como nas reaes anteriores. importante salientar que para todas as condies testadas, a converso final de monmero manteve-se na mesma ordem de grandeza. Estudos futuros relacionados com a optimizao do sistema, nomeadamente relacionados com a variao da temperatura do sistema podero permitir a obteno de maior converso de monmero. Tendo ainda em conta a representao (a) da Figura 26, possvel constatar que ln([M]0/[M]) em funo do tempo traduz-se numa relao linear, com interseo na origem do referencial, sinal de reao de primeira ordem. Assim, quando o volume de monmero igual ao volume de DMSO houve uma diminuio dos radicais no sistema, pelo que a probabilidade de ocorrncia de reao de terminao diminuiu.
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Analisando a variao do peso molecular experimental em funo do peso molecular terico possvel verificar que esta relao linear. No entanto, estes valores apresentam um afastamento da linha terica maior do que os obtidos nas reaes anteriores. Tendo em conta que a polidispersividade do polmero baixa durante toda a reao (Figura 26 (b)), no deveria de existir uma diferena to notria. Este facto dever-se- a possveis erros na determinao dos pesos molecular por GPC. Por uma questo de tempo no foi possvel explorar esta possibilidade. No entanto, os valores de polidispersividade podem ser tidos em conta para a discusso dos resultados, pois a sua determinao feita com base na largura do pico obtido no cromatograma e no pelo volume de eluio da amostra. Os valores de polidispersividade obtidos para com este sistema reacional so mais baixos do que os obtidos anteriormente, revelando que a diminuio da concentrao de radicais na polimerizao do PHEMA permite um melhor controlo sobre o crescimento das cadeias sem sacrificar a converso de monmero final.
Estudo cintico de reao de LRP de HEMA. Variao do ligante (bipiridina). (BASK IV)
Para avaliar o efeito da natureza do ligante no sistema cataltico em estudo substituiu-se o Me6TREN utilizado em BASK I por bipiridina, j que este foi o ligante usado por Beers [32] em 1999 com sucesso. Aplicando o mesmo procedimento que nas cinticas anteriores verificou-se que, durante o tempo de reao em que foi feita a recolha de amostras (90 min), a viscosidade do meio no se alterou e, por RMN e GPC, no houve formao de polmero. Assim, optou-se por deixar a reao prosseguir at 18 h e analisar-se uma amostra ao fim deste tempo. A Figura 27 que se segue apresenta os dados obtidos no cromatograda de BASK IV ao fim de 18 h e o padro de poliestireno (Mp=10050 g/mol e Mw/Mn =1,02) injetado.
Figura 27 - DP normalizado em relao ao volume de reteno. PHEMA de BASK IV (esquerda) e padro de poliestireno com MP=10050 g/mol e Mw/Mn=1,02 (direita).
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Nesta anlise (Figura 27), verificou-se no cromatograma de GPC um pico largo quando comparado com o de um padro de poliestireno, o que denota baixo controlo do peso molecular do PHEMA quando se utiliza a bipiridina como ligante para os catalisadores metlicos em estudo. O peso molecular do polmero no foi possvel determinar devido ao elevado rudo presente nos detectores RI e RALLS. Assim, estes resultados permitem comprovar a teoria de que os sistemas catalticos tm sempre de ser adequados aos monmeros a polimerizar e aos solventes usados, para que se possam obter reaes controladas. Neste caso, a bipiridina revelou-se que no um ligante adequado ao sistema cataltico em questo.
3.2.3. Avaliao do carcter vivo do polmero PHEMA Em LRP uma etapa essencial da sntese de novos polmeros a avaliao do carcter vivo da macromolcula. Para tal, possvel e aconselhvel dois tipos de estudos que se complementam identificao do terminal ativo de cadeia e experincia de reiniciao. No entanto a identificao dos terminais activos das cadeias polimricas por RMN, para este estudo, tal como visto no ponto na seco referente discusso de sntese de PHEMA por LRP, verificou-se que o pico associado ao terminal ativo no estava claramente separado dos restantes pelo que no possvel garantir o carter de vida do polmero recorrendo a esta tcnica de espectroscopia. Contudo, importante tambm referir que a identificao de terminais activos por RMN, no garante por si s, que o polmero vivo dado que, em muitos casos, ser impossvel ativar os terminais. A prova inequvoca do caracter vivo, consiste na experincia de reiniciao, que dever demonstrar o movimento claro da cromatograma para pesos molecular superiores, utilizando o polmero vivo como macroiniciador. Neste trabalho a experincia de reiniciao foi executada tendo em conta o procedimento descrito no ponto 2.3.6, usando como macroiniciador o polmero final obtido na reao BASK II (tabela 9). Aps a reao de reiniciao que durou 24 h a 30 C procedeu-se analise de GPC das duas amostras, ou seja, do PHEMA-Br macroiniciador e do PHEMA resultante da reao de extenso de cadeia. Os resultados encontram-se ilustrados na Figura 28, na qual se representou o grau de polimerizao normalizado em relao ao volume de reteno.
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Figura 28 - DP normalizado em relao ao volume de reteno. Reao de extenso de cadeia (esquerda) PHEMA-Br macroiniciador (direita).
Com base Figura 28 possvel verificar o deslocamento da curva inicial de PHEMA-Br macroiniciador para valores de pesos moleculares superiores. Este facto permite garantir a iniciao eficiente do polmero e portanto, o carcter vivo dos polmeros produzidos pelo sistema ATRP testado neste trabalho. Assim, estes polmeros podem ser utilizados para a preparao de copolmeros.
3.3. Sntese de Hidrogis Sendo o objetivo deste trabalho a sntese de hidrogis, a etapa posterior sntese dos polmeros foi a sua reticulao. Para tal foi necessrio em primeiro lugar eliminar impurezas do polmero, nomeadamente solventes, catalisadores e monmero, atravs da purificao do polmero. Os polmeros PHEA e PHEMA produzidos em DMSO por LRP, foram dissolvidos em etanol para lavagem e a soluo resultante foi precipitada em hexano. Repetiu-se o procedimento de lavagem com etanol e passou-se a soluo em coluna de areia/alumina para eliminar vestgios de catalisadores. Finalmente, precipitaram-se os polmeros em hexano sob a forma de p. O slido resultante foi posteriormente colocado na estufa para secar. Para os estudos de reticulao foram utilizados os polmeros de PAlA, PHEA e PHEMA produzidos por LRP. Este ltimo polmero, resultou de uma experincia de estudo cintico (BASK I, seco 3.2.2) aps purificao por meio de dilise numa membrana apropriada, seguido de liofilizao. Nesta etapa de reticulao utilizou-se o procedimento da patente do Colesevelam (experincia H01) e introduziram-se novas percentagens de agente de reticulao para cada um, dado que no foi possvel obter nenhum hidrogel, quando a patente foi seguida na integra. A Tabela 10 64
apresenta todos os polmeros produzidos por LRP e FRP que se tentaram reticular com recurso a trs agentes de reticulao (a epicloridirna, o 1,4-butanodiol diglicidil ter e o 1,2etanodiol diglicidil ter) em meio bsico (pH =10).
Tabela 10 Condies de reaes de reticulao executadas temperatura ambiente. Reao obteno polmero COL I COL I COL I COL II COL I COL I COL I COL I BAS 03 BAS 03 BAS 05 Polmero em soluo % (m/v) 25 4,0 25 25 25 25 25 25 40 26 4,0 Agente em polmero % (m/m) 6,6 975 960 998 15,0 936 25,0 972 7,00 192 975 Observaes de reao No se formou hidrogel Formao de um gel Formao de um gel Formao de um gel No se formou hidrogel Formao de um gel No se formou hidrogel Formao de um gel No se formou hidrogel No se formou hidrogel No se formou hidrogel
Cdigo H 01 H 02 H 03 H 04 H 05 H 06 H 07 H 08 H 09 H 10 H 11
Polmero PAlAH PAlAH PAlAH PAlAH PAlAH PAlAH PAlAH PAlAH HEMA HEMA PAlA
Solvente gua gua gua gua gua gua gua gua DMSO DMSO gua
Agente Epicloridrina Epicloridrina Epicloridrina Epicloridrina 1,4-butanodiol diglicidil ter 1,4-butanodiol diglicidil ter 1,2-etanodiol diglicidil ter 1,2-etanodiol diglicidil ter Epicloridrina Epicloridrina Epicloridrina
Ao executar o procedimento de reticular descrito na seo experimental deste trabalho nem sempre foi possvel obter hidrogel em todas as reaes e nos casos em que houve formao de fases distintas durante a reao de reticulao, nem sempre foi possvel isolar o hidrogel com facilidade. Nos processos em que houve formao de fases distintas aps o processo de lavagem, consoante o agente de reticulao utilizado, apenas foi possvel isolar e secar o hidrogel produzido por COL II em 25% de gua obtido com recurso a 998% de agente de reticulao em relao massa de polmero (experincia H04). O hidrogel resultante foi isolado e seco numa estufa de vazio a fim de remover todos os solventes presentes. Normalmente nos estudos de capacidade de inchao (ou swelling) , procede-se anlise da quantidade de gua absorvida por, no mnimo, trs amostras de material de massa semelhante nas mesmas condies. Isto deve-se ao facto de a reticulao, muitas vezes, no ser homognea em todo o material e portanto o resultado obtido a partir da mdia dos trs ensaios mais representativo de todo o hidrogel do que seria obtido apenas com uma nica amostra. Para avaliar o grau de inchao do hidrogel poder-se-ia ter feito um estudo mais aprofundado em diferentes pHs, ou seja para o pH cido do estmago e por exemplo para dois pHs do intestino ( 6<pH<9), a fim de se simular as condies do trato gastrointestinal. No entanto, 65
como a quantidade de hidrogel obtido no processo de reticulao era reduzida para preparar 9 amostras e dado o curto tempo deste trabalho, apenas foi possvel estudar o grau de inchao do hidrogel de H04 para um pH =6). Assim, simulando as condies do intestino com uma soluo tampo de dihidrogenosulfato de sdio a pH = 6, recolheram-se quatro amostras durante quatro horas de contato do hidrogel com o fluido, num shaker a 37 C e 900 rpm. O perodo de tempo selecionado para fazer esta anlise foi de 4 h, tempo mximo de digesto humana, ao qual se adicionou uma ltima recolha ao fim de um dia em contacto com o meio aquoso para verificar a evoluo da capacidade de inchao [30]. Os resultados obtidos neste estudo encontram-se registados na Tabela 11.
Tabela 11 - Resultados de teste de swelling em soluo de dihidrogenossulfato de sdio a pH 6, num shaker a 37 C e 900 rpm. Grau de inchao (%) I 16,55 15,71 18,38 19,43 25,21 II 8,56 9,07 7,46 6,91 11,41 III 14,89 13,62 11,81 7,42 24,34 13,33 12,80 12,55 11,25 20,32 4,21 3,40 5,49 7,08 7,72
Tempo (h) 1 2 3 4 25
Mdia
Desvio Padro
Como possvel verificar atravs da anlise dos dados da Tabela 11, o hidrogel de PAlAH obtido por FRP no apresenta uma reticulao homognea em toda a sua massa, confirmado pelas diferenas significativas existentes no valor da capacidade de inchao para as vrias amostras analisadas. Para alm disso, a capacidade de inchao assume sempre um valor inferior a 25%, valor mnimo tpico apresentado por hidrogis, podendo ser consequncia da grande quantidade de agente reticulante usada no processo de reticulao, conduzindo formao de uma estrutura rgida. A utilizao desta quantidade de agente reticulante foi adaptada de um trabalho similar descrito na literatura [41], depois de se ter verificado que a quantidade descrita na patente do Colesevelam no se revelou eficiente na reticulao da PAlAH sintetizada (com peso molecular provavelmente inferior do polmero comercial). Assumindo que a informao da patente est correta, pode dizer-se que o peso molecular do polmero tem influncia no processo de reticulao do mesmo, tendo que se ajustar a quantidade de agente reticulante para que se atinjam as propriedades de swelling desejadas. Apesar destes resultados serem muito preliminares, achou-se pretinente colocar esta informao no relatrio j que permite perceber que necessrio trabalhar no procedimento experimental descrito na patente do Colesevelam, de modo a conseguir-se reproduzir o produto final. 66
Seco IV Concluses e Trabalho Futuro
4. 4.1. Concluses No que diz respeito preparao do hidrogel Cosevelam no foi possvel reproduzir os resultados descritos na patente existente, mesmo seguindo todos os procedimentos descritos. Realizaram-se experincias adicionais para obter mais informaes sobre a utilizao de AlA como monmero e testou-se diferentes temperaturas e iniciadores. Com estas experincias foi possvel confirmar que a AlA um monomero muito estvel e que apenas se forma um polmero de maior peso molecular quando se utiliza temperaturas elevadas (80 C) ou quando se utilizam dois iniciadores na reao de FRP. Para LRP o sistema Fe(0)/CuBr2/Me6TREN em estudo foi aplicado com sucesso para as polimerizaes dos monmeros HEA, HEMA e AlA. Os resultados obtidos para a reao de PHEMA, na presena de um solvente polar (DMSO), revelaram-se promissores dadas as baixas polidisperssividades, pelo que se fizeram estudos cinticos. Como resultados obtiveram-se sempre polmeros com pesos meleculares controlados (Mw/Mn<1,5) nas reaes de polimerizao utilizando EBiB como iniciador. O carcter vivo de PHEMA foi confirmado por uma reao de exteno cadeia com sucesso. Os estudos cinticos permitiram tambm concluir que a bipiridina no um ligante adequado ao sistema cataltico em questo. A etapa de reticulao para obteno de hidrogis constituu uma primeira abordagem ao mtodo, no se obtendo resultados promissores nesta fase. Com este trabalho foi possvel sintetizar polmeros que podem ser usados como BAS dadas as suas caractersticas, mas so ainda necessrios mais ajustes experimentais para que se possa obter o Colesevelam comercial e optimizar o sistema cataltico metlico para a polimerizao LRP de monmeros solveis em gua, nomeadamente da PAlA.
4.2. Trabalho Futuro Relativamente parte do trabalho dedicado reproduo da patente do Colesevelam, atravs da polimerizao da AlA por FRP, em estudos futuros deve proceder-se execuo de reaes a diferentes temperaturas, entre 30 C e 80 C, a fim de verificar em que condies se consegue obter um polmero na forma de p. Uma posterior anlise de peso molecular dos polmeros resultantes ir permirtir avaliar se existem diferenas significativas entre eles. Os passos seguintes de reticulao e alquilao devero ser efectuados de acordo com a patente do Colesevelam. Finalmente, testes de complexao de cidos biliares devero ser efectuados 68
para que se possa comparar o desempenho do hidrogel sintetizado com o do frmaco comercial. Na rea de LRP, o trabalho revelou-se promissor principalmente na obteno de PHEMA com peso molecular controlado. Os estudos seguintes devero ser direcionados para a anlise do complexo cataltico Fe(0)/CuBr2/Me6TREN por espectroscopia UV-Vis, nas condies de reao, para auxiliar o estudo do mecanismo de reao e para a optimizao das condies de reao, com o objetivo de tentar diminuir o valor da polidispersividade de PHEMA obtida neste trabalho. Num passo seguinte de reticulao do PHEMA (tendo em conta a aplicao final do polmero como BAS), sugere-se o uso de agentes reticulantes mais reativos, dado que os compostos usados neste trabalho no permitiram reticular o polmero devido baixa reatividade dos grupos OH quando comparada com a do grupo NH2 da PAlA.
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71
Anexo
Anexo A
Anexo A : Espectro de RMN em CDCl3 do ligante Me6TREN sintetizado para o sistema catatlico de LRP em estudo.
Figura A 1 - RMN 1H a 600 MHz em CDCl3: 2,58 (dd, 6H); 2,36 (dd, 6H); 2,21 (s,18H) ppm, usando TMS como padro interno.
73

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Joana Serra e Moura Pacheco Mendes

Joana Serra e Moura Pacheco Mendes

Polisteres de cidos carboxlicos

Polianidridos de cidos carboxlicos

Figura 1 - Classificao de polmeros quanto sua composio [1].

Figura 2 Representao esquemtica de diferentes polmeros quanto forma [1].

Figura 3 - Etapas de iniciao e propagao para a reao de polimerizao de Colesevelam.

Figura 4 - Equilbrio tpico em LRP, entre espcies dormentes e ativas [4].

Figura 5 - Distribuio de pesos moleculares tpica em FRP e LRP [7].

2. Crescimento linear do grau de polimerizao (DPn) com a converso.

ATRP - Atom Transfer Radical Polymerization

Figura 6 - Equilbrio qumico tpico de ATRP [8].

SFRP - Stable Free Radical Polymerization

Figura 7 - Equilbrio qumico tpico de SFRP [7].

Figura 8 - Esquema simplificado de mecanismo RAFT [9].

Figura 9 - Agentes de transferncia de cadeia RAFT [10].

Figura 10 Equilbrio dinmico tpico em ITP [9].

Figura 11 - Esquema simplificado de mecanismo RITP [10].

Natureza da carga inica Aninicos

Propriedades estruturais / estrutura fsica das redes Amorfo

(se contm apenas cargas negativas)

Ligado por pontes de Hidrognio

Figura 13 - Estrutura qumica de Colsevelam [23].

Seco II Parte Experimental

Seco II Parte Experimental

Seco II Parte Experimental

Seco II Parte Experimental ! !! !! ! ! ! ! ! !! !! ! ! ! ! ! ! ! !!!" !! ! ! 12

Figura 14 - Esquema representativo de equipamento GPC [29].

Seco II Parte Experimental

Seco II Parte Experimental

Figura 15 Esquema de um equipamento tpico de espectroscopia de massa MALDI-TOF [30].

Seco II Parte Experimental

Seco II Parte Experimental

Monmeros HEA HEMA AlA

Solventes DMSO Catalisador Fe (0) + Cu(II)Br2 gua

Seco II Parte Experimental

Figura 16 Montagem utilizada nas cinticas das reaes de LRP de PHEMA.

Seco II Parte Experimental

Seco II Parte Experimental

Reticulao com epicloridrina

Reticulao com ter diglicdico do 1,4-butanodiol

Reticulao com ter diglicdico do 1,2-etanodiol

Seco II Parte Experimental

Preparao da soluo tampo fosfato a pH 6

Seco III Resultados e Discusso

Seco III Resultados e Discusso

Seco III Resultados e Discusso

Monmero AlA AlA AlA AlA AlA

Iniciador AAPH1 AAPH + ANT2 ANT AAPH AAPH

Tempo reaco (h) 72 120 72 72 120

Azobis(aminopropano dihidrocloreto) Akzo Nobel Trigonox 187 w-40

Seco III Resultados e Discusso

Seco III Resultados e Discusso

Seco III Resultados e Discusso

Cdigo Experincia BAS 01 BAS 02 BAS 03 BAS 04 BAS 05

Monmero HEA HEA HEMA HEMA AlA

Iniciador EBiB EBiB EBiB EBiB EBiB

Ligante Me6TREN TREN Me6TREN TREN Me6TREN

Solvente DMSO gua DMSO gua DMSO

Seco III Resultados e Discusso

Seco III Resultados e Discusso

Seco III Resultados e Discusso

Na Tabela 6 esto apresentadas as

Cdigo das Experincias