ESTUDO FITOQUMICO DE ACESSOS DE MENTRASTO (AGERATUM CONYZOIDES L.) PREVIAMENTE SELECIONADOS COM BASE EM CARACTERES AGRONMICOS.

Anderson Tiara Santos Moscoso De Oliveira; Juan Toms Ayala Osuna; Hugo Neves Brando; Adriana Rodrigues Passos4;
1. Bolsista FAPESB/UEFS, Universidade Estadual de Feira de Santana, Graduando em Biologia, e-mail: anderson_moscoso@yahoo.com.br Orientador, Universidade Estadual de Feira de Santana, Departamento de Ciencias Biolgicas, e-mail: juanayala@uol.com.br Co-Orientador, Universidade Estadual de Feira de Santana, Departamento de Sade e-mail: hugohnb@gmail.com Colaboradora, Universidade Estadual de Feira de Santana, Departamento de Cincias Biolgicas e-mail: adrianarpassos@yahoo.com.br

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PALAVRAS-CHAVE: Fitoqumica, Prognies, Ageratum conyzoides L. INTRODUO A planta Agetaum conyzoides L. uma erva tpica de ambientes tropicais sendo comum em muitas regies da sia, Amrica do Sul e frica Oriental, nascendo de forma espontnea em diversas localidades. Pertence a famlia asteraceae tem cerca de 1 metro de altura, possui tricomas revestindo suas folhas e caule, possui flores que podem apresentar a colorao arroxeada ou esbranquiada utilizada a sculos para tratamento de enfermidades tanto em seres humanos quanto em animais domsticos das mais variadas espcies, sendo conhecidas suas propriedades antipirticas, antiinflamatrias e analgsicas, tambm existem trabalhos sobre o seu uso na cura de doenas psicolgicas como a depresso. A primeira forma de uso de medicamentos efetuada pelo homem foi feita mediante o consumo de plantas medicinais, que, desde os primrdios, so fundamentais tanto na alimentao quanto na cura de enfermidades. Talvez muitas descobertas tenham sido feitas durante a procura de novas fontes de alimento, mas provavelmente um nmero significativo foi devido curiosidade e ao desejo natural de investigao de todo ser humano Niero et al., (2003) Apoud Escobar B.T, (2007). As plantas medicinais durantes muitos momentos na histria da humanidade tem sido a principal forma de combate a doenas, porm a partir do sculo XX comearam a perder espao para os medicamentos artificiais e para as substancias isoladas, porm boa parte dos seres humanos, principalmente em pases subdesenvolvidos utilizam de plantas para curar-se, pois alm da cultura esta uma alternativa mais barata em comparao com o valor de determinados medicamentos industriais. Contudo atualmente est ocorrendo um aumento de pesquisas com plantas de interesse biotecnolgico, pois essas tem sido fontes de descobertas de novas molculas para os pesquisadores tanto para produo de medicamentos, quanto inseticidas e uma sries de substancias de interesse industrial. A industria farmacutica tem investido em pesquisas com plantas medicinais em busca de frmacos com atividades mais contundentes e com menos efeitos colaterais, interessante observar que os pesquisadores costumam recorrer ao conhecimento popular de comunidades tradicionais para escolha de qual espcie pesquisar. O presente trabalho tem como objetivo realizar estudos fitoqumicos de acessos de mentrasto previamente selecionados com base em caracteres agronmicos, com o intuito de obter algum compostos molecular que venha a demonstrar algum interesse biotecnolgico

MATERIAIS E MTODOS. As 24 prognies mais interessantes, selecionadas devido as suas caractersticas agronmicas por Arajo (2010) que durante os anos de 2008 e 2009, iniciou e deu continuidade ao programa de melhoramento do Ageratum conyzoides L. na Universidade Estadual de Feira de Santana (UEFS) foram doadas para realizao desse experimento. A colocao dos substratos e a semeadura foram realizadas durante o ms de Maio de 2011, em recipientes de polietileno com capacidade 2L composto por substrato de terra vegetal e solo na proporo 2:1, alocados no interior de uma estufa tipo tnel alto com 30% de sombreamento. As plantas eram regadas diariamente e, sempre que necessrio foi feita a capina manual para retirar plantas infestantes. Cada um dos 24 prognies tiveram quatro repeties, sendo que cada repetio era composta de quatro plantas, resultando em um total de 384 indivduos, semeados a distancia 0,20 (m) entre as plantas e 0,35 (m) entre as linhas. Aps 50% das plantas apresentarem flores foram realizadas as seguintes medidas, adaptado de Arajo (2010): Dimetro do caule (mm) com auxlio do paqumetro digital 0-150mm modelo Digital Caliper (Digimess) a partir do terceiro interndio Altura das plantas, do solo at o incio do pednculo floral (cm). Contagem do numero de ramos. Matria seca (g). Os dados coletados foram analisados para o teste de Scot Knott no programa Sisvar. As plantas depois de medidas foram coletadas cortando-as na altura da superfcie do solo, sendo em seguida posta para secar em estufa a 60C durante 72h. Aps a secagem retirou-se as folhas e flores, permanecendo apenas com o caule e, este foi modo em moinho de facas e armazenado em erlenmayer para a extrao. Foram realizadas 6 extraes com metanol como solvente, por macerao, e os extratos adquiridos foram ento concentrados no rota-evaporador a 60C com presso reduzida. Posteriormente, esse extrato foi deixado em capela para secar a temperatura ambiente, dando origem ao extrato bruto. O extrato bruto foi submetido partio com hexano, clorfofrmio e acetato de etila para obteno de fraes de diferentes polaridades. Aps a secagem no rota evaporador com presso, as fraes foram levadas capela de exausto para secagem a temperatura ambiente, at obter massa constante e dar origem aos extratos hexnico, clorofrmico e acetato de etila Matos (2009). O extrato clorofrmico foi que apresentou maior massa (2g), sendo assim este foi escolhido para a realizao da cromatografia em coluna (CC) com gel de slica. Para tal foi usado 37g de slica. Aps colocar o eluente e o extrato na coluna, deu-se inicio ao processo de coleta das fraes em erlenmayers. Aps a coleta das diferentes subfraes do extrato clorofrmio, foi realizada cromatografia em camada delgada (CCD) com placas de vidro revestida por slica com o objetivo de reunir as fraes que apresentassem o mesmo perfil cromatogrfico. Durante a realizao da CCD foi constatado que a frao 2 (F2) apresentava cristais em forma de agulha, o que poderia ser a indicao de uma substncia pura isolada ou esta em maior proporo em relao s outras que possivelmente estavam em mistura. Okunade (2002) encontrou na composio qumica do Ageratum conyzoides L. substncias com polaridades relativamente baixas, como triterpenoides e esterides. Portanto, levando em considerao essa informao e devido ao fato da frao que apresentou cristais ter sido uma das primeiras a eluirem da coluna, pensou-se que esta provavelmente seria de baixa polaridade. Dessa forma, foi realizado o teste com o reagente de Liebermann-Burchard, borrifando o reagente sobre a placa de slica contendo a frao numero 2. A eluio foi realizada em cuba cromatogrfica com mistura de hexano e acetato de etila proporo 9:1. Depois de borrifado a placa cromatogrfica foi levado a uma placa de aquecimento a temperatura de 100C por 4 minutos. Observou-se necessidade de uma melhor pureza da amostra. Para purificao da F2, usou-se cromatografia em coluna com Sephadex LH-20 usando como eluente diclorometano e metanol na proporo (1:1). Por ltimo foi usado metanol puro para retirar o material que por ventura continuasse retido na coluna. Aps esse processo, foi realizada novamente CCD para poder unir as fraes de mesmo perfil

RESULTADOS E/OU DISCUSSO O material vegetal seco apresentou 583,8g de massa. Aps a moagem restaram 553,4g indicando que foi perdido 30,4g durante o processo. Esse material passou por macerao com metanol e, o macerado resultante aps secagem apresentou 33,31g, indicando rendimento de 6,01% de droga vegetal em relao massa seca total do caule. Dos 24 prognies semeados 11 foram capinados por um funcionrio de campo, antes que fosse possvel a concluso das medidas. Pelo fato do Ageratum conizoides L. ser uma erva daninha, o funcionrio concluiu que essas eram plantas invasoras e capinou o canteiro onde estas estavam plantadas, ignorando a placa de identificao do material plantado. Dessa forma foi possvel apenas fazer a anlise de 13 gentipos. Com o teste do Skot Knott obteve-se a seguinte tabela: Tabela 1. Comparao de mdias das caractersticas Dimetro do caule (DIAM), altura da planta (ALT), nmero de ramificaes (NRAM) e Massa seca da parte area da planta (MSP). Feira de Santana-BA, 2012. Caractersticas Prognies DIAM 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 4,89 B 4,90 B 5,30 A 5,17 A 5,22 A 5,61 A 5,32 A 5,53 A 5,05 B 4,99 B 4,78 B 4,56 B 4,50 B ALT 57,98 B 56,47 B 56,06 B 61,76 A 68,54 A 68,71 A 69,61 A 49,98 B 56,48 B 64,71 A 59,58 B 58,88 B 48,89 B NRAM 11,25 B 13,81 A 13,75 A 13,31 A 13,87 A 13,12 A 11,62 B 14,25 A 13,87 A 12,87 A 12,87 A 13,25 A 12,12 B MSP 20,94 A 24,56 A 28,37 A 33,87 A 35,62 A 30,56 A 35,94 A 33,44 A 23,44 A 35,56 A 25,94 A 26,37 A 21,69 A

Ao observar a tabela temos que ter em mente que o programa Sisvar ao fazer as anlises pelo mtodo de Skot Kontt gera grupos. Esses grupos na tabela so representados pelas letras A e B. O grupo A desperta interesse, pois o prognie apresentou um maior DIAM, ALT e NRAM sendo interessante para nosso estudo, j o grupo B no nos provoca tanto interesse pois suas caractersticas foram inferiores ao grupo A. A caracterstica MSP no apresentou divergncia entre os gentipos, sendo assim todos foram classificados no grupo A. Ao analisar a tabela possvel concluir que os gentipos mais interessantes so o 4,5,6.

Do extrato metanlico foram obtidas as fraes de hexano (1,6g), clorofrmio(2g) e acetato de etila(0,4g) com rendimento de 4,8% para a frao hexano, 6% para a frao clorofrmio e 1,2% para a frao acetato de etila. Foi feito um teste para saber qual o melhor sistema de eluente para passar na coluna e concluiu-se que o sistema clorofrmio:metanol era o melhor sistema de eluente para a frao. Com a CC foram obtidas 26 fraes. Uma amostra foi coletada da frao 2 e usada na tcnica de CCD para estimar a quantidade de substancias na F2, aps ser revelada em luz ultravioleta (UV) 365 nm e em seguida pelo reagente de Liebermann-Burchard, essas tcnicas indicaram a presena de aproximadamente oito compostos, sendo um majoritrio. Foi possvel observar a presena de manchas azuladas e manchas avermelhadas, sugerindo a presena de esteris e/ou triterpenides na frao segundo Matos (2009). Na tentativa de purificao por Sephadex LH 20, foram coletadas 33 fraes que foram analisadas em CCD para que pudesse observar quais tinham caractersticas qumicas prximas para poderem ser unidas no mesmo recipiente. Obteve-se duas sub fraes, essas foram identificadas como F2-12 e F233. A amostra da F2-12 apresentou massa de 0,0016g e da F2-33 tem 0,0187g, sendo que esta ltima ser enviada para obteno de dados espectroscpicos que ajudaro na identificao. Atravs do presente estudo foi possvel concluir que quanto maiores os valores das caractersticas DIAM, ALT, NRAM maior ser a massa. Os gentipos mais interessantes seriam os de numero 4,5,6 visto que apresentaram maiores valores para as caractersticas DIAM, ALT, NRAM o que influenciou em uma MSP maior. Foi encontrado esteris e triterpenides na composio qumica do Ageratum conyzodes L. concordando com os resultados de Okunade (2002). Todos os resultados ainda no foram completamente obtidos, pois a F2-32 ainda ser enviada para anlise com tcnicas espectroscpicas que possibilitem uma identificao de suas molculas. Para a completa caracterizao qumica seria necessrio mais tempo e uma maior quantidade de material vegetal, para purificao das outras fraes e realizao de testes para outras classes de molculas como alcaloides, fenis, etc.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 1 ESCOBAR B.T. Avaliao psicofarmacolgica de Ageratum conyzoides L.( ASTERACEAE), Dissertao de mestrado 2007. 2 ARAJO, G. da S Seleo de prognies e estimativas de parmetros genticos em Ageratum conyzoides L. (Asteraceae) para caracteres morfo-agronmicos, Dissertao de mestrado, 2010. 3. OKUNADE L. A. Review Ageratum conyzoides L. (Asteraceae). Fitoterapia, v. 73, 2002. 4. MATOS, F. J .A. Introduo a fitoqumica experimental, 3ed. EUFC, 2009.