Disser Ta Cao Final Barbara

UNIVERSIDADE DE SO PAULO
INSTITUTO DE FSICA
Propriedades estruturais e elsticas de

fases lamelares:
O efeito da composio da membrana
Barbara Bianca Gerbelli
Orientadora: Profa. Dra. Elisabeth Andreoli de Oliveira

Dissertao apresentada ao Instituto de Fsica da
Universidade de So Paulo para a obteno do ttulo de
Mestre em Cincias.
Comisso Examinadora:
Profa. Dra. Elisabeth Andreoli de Oliveira (Orientadora, IFUSP)

Profa. Dra.Carla Goldman (IFUSP)
Prof. Dr.Amando Siuiti Ito (FFCLRP)
So Paulo
2012
A minha famlia...
Ao meu querido Pedro.
"A tarefa no tanto ver aquilo que nnguem viu,

mas pensar o que ningum ainda pensou sobre aquilo
que todo mundo v".
Arthur Schopenhauer
Agradecimentos
Primeiramente eu agradeo a Deus por estar ao meu lado em todos os instantes, comeando desde as pessoas que fui encontrando na minha jornada como minha famlia,
mdicos, grandes mestre que me inspiraram para o que sou hoje.
A minha famlia por aguentar todas as minhas reclamaes, estresses e entre outros
causos. Agradeo a minha me por no ser somente o meu brao esquerdo, mas sim
muitas vezes ser o meu brao direito e esquerdo. A voc me, agradeo pela mulher que
sou, aos meus irmos que me zeram aprender o que famlia e esta ser prioridade para
mim. Ao meu pai pelo dom da vida e Denise por todos os conselhos. A todos os meus
tios, mas principalmente ao meu tio Ganso que sempre me disse B! Nunca podemos
parar de estudar!; tio c estou nunca parando!
Agradeo a uma nova famlia que entrou na minha vida para car e agradeo todos da
famlia Oseliero que junto desta pertence o meu namorido Pedro, que agradeo por toda
pacincia durante nossa histria e saiba que sou muito grata a voc, parte deste trabalho
s se concretizou porque voc estava ao meu lado.
Agradeo a Elisabeth pela chance que voc me deu desde o incio da Iniciao Cientca, obrigada por ser uma tima orientadora, mas o que mais importante uma grande
me/amiga companheira desses ltimos 6 anos que trabalhamos juntas.
Agradeo aos Professores Cristiano de Oliveira e Frderic Nallet e a pesquisadora Laurence Navailles por toda a colaborao desde discusses, palpites e at mesmo criar um
software para que eu pudesse analisar as amostras.
Agradeo aos meus amigos de sala e vizinha Renata, Rafael, Emerson , Vivian, Eraldo,
JoernI, Cassio, Bruno, Sandra, Carlos mo no mouse, Daniel, Messias e Fernando que
deixaram muitas estrias da convivncia do dia a dia e congressos que vou poder sempre
Barbara Bianca Gerbelli - Propriedades estruturais e elsticas de fases lamelares: O efeito da

composio da membrana.
ii
lembrar com muito carinho.
Agradeo ainda o Rafael e o Emerson, por me cederem dados para completar o meu
trabalho, alm de podermos discutir juntos nossos trabalhos que acredito que isso tenha
enriquecido muito o meu mestrado.
Agradeo aos meus amigos de graduao Tassiana, Renata, Mauricio, Texas, Mary entre
outros que me acompanharam em todo o rduo percurso da Graduao : festas, conversas,
estudos, estudos e estudos.
Tem aqueles amigos que no so da turma dos doidos do IF que tenho que agradecer
por toda a pacincia quando eu sumia para ir para os laboratrios, congressos e at mesmo
escrever a minha dissertao: Joice, Edneuma, Juju, Danilo, Japa, Juliana (GFCx), Carlinha, Livia e Carolzinha obrigada pela compreenso .
Agradeo a todos os tcnicos que me ajudaram de alguma forma construir o meu aparato experimental: Odair, Z Botina, Daniel e Igino. E claro o Serginho, Tarsis e Antonio
Carlos da Cristalograa. Agradeo ao Grupo de Fludos Complexos que me acompanham
desde o incio da minha Iniciao Cientca e sempre ouvem Uma molcula anflica
....
Agradeo a Universidade de So Paulo, aos funcionrios da secretaria da Ps graduao que me ajudaram muito. Ao INCT de Fluidos Complexos, CAPES e FAPESP pelo
auxilio nanceiro.
Obrigada a todos que zeram e fazem parte da minha vida, pois graas a vocs sou o
que sou!
Barbara.

iii

iv
RESUMO
Neste trabalho, apresentado um estudo sistemtico de uma fase lamelar composta
de lecitina qual incorporado um co-surfactante de uso comercial (Simulsol
), que
consiste de uma mistura de cidos graxos etoxilados. Foi realizado um estudo estrutural,
utilizando a tcnica de espalhamento de raios X em baixo ngulo (SAXS) em amostras
inseridas em capilares, variando a composio da membrana, desde 100% de lecitina at
100% de Simulsol, ao longo da linha de diluio, para cada composio. Os resultados
experimentais de espalhamento foram analisados usando um mtodo que permite o ajuste
direto da intensidade de espalhamento e um procedimento de otimizao que fornece o
perl de densidade eletrnica da bicamada. Com esse mtodo de anlise, alm de parmetros estruturais tais como, periodicidade lamelar e espessura da bicamada obtm-se o
parmetro de Caill, que relaciona as constantes elsticas que caracterizam a exibilidade
do sistema lamelar. As propriedades termodinmicas do sistema lamelar foram investigadas para duas composies de membrana, em experimentos onde o potencial qumico da
gua controlado. A combinao dos resultados obtidos nos estudos estruturais e termodinmicos permitiu a determinao do mdulo de compressibilidade da fase lamelar e da
constante de rigidez da membrana. A incorporao do co-surfactante aumenta a contribuio de interaes de natureza entrpica relacionada s utuaes da membrana, que
resultam na estabilizao da fase lamelar para distncias de separao entre as membranas
muito maiores do que as observadas no sistema lamelar composto apenas por lecitina.
Para pequenas distncias de separao entre as bicamadas, observa-se superposio de regies polares de bicamadas vizinhas, que so acompanhadas de mudanas no comportamento do parmetro de Caill, e consequentemente no comportamento das constantes
de compressibilidade e na constante de rigidez. No regime diludo, a incorporao de
molculas anflicas com apenas uma cadeia carbnica resulta na reduo signicativa da
constante de rigidez da membrana de lecitina de 20kB T para 0, 5kB T .

ABSTRACT
In this work we present a systematic study of structural properties of a lamelar phase
composed of lecithin when a commercial cosurfactant(Simulsol
) which is a mixture of
etoxylated fatty acids. The study was carried out using small angle X ray scattering with
samples encapsulated in glass capillaries, varying membrane composition from 100% of
lecithin to 100% of Simulsol, through the dilution line, for each composition. The experimental results were analyzed using a method that ts directly the scattered intensity
and, by means of an optimization procedure, gives the electronic density prole of the
lipid bilayer. From the analysis of experimental data, in addition to the structural parameters, such as the lamellar period and membrane thickness,we obtain the Caill parameter,
which relates the elastic constants that characterizes the exibility of the lamellar system.
Thermodynamic properties of the lamellar system were also investigated, for two membrane compositions, by controlling the water chemical potential. The combinationof
results obtained in structural and thermodynamic studies allowed determination of the
compressibility modulus of the lamellar phase and the membrane rigidity constant. The
incorporation of co-surfactant to the membrane increases the contribution of entropic
interactions arising from membrane uctuations resulting in the stabilization of lamellar
phase for larger membrane separation distances than observed for the lamellar system
composed of lecithin only. For small membrane separation distances, a superposition
of polar region of neighbor bilayers is observed, with related changes in the behavior of
Caill parameter, and consequently in the behavior of compressibility and membrane rigidity constants. In diluted regime, the incorporation of amphiphilic molecules with a
single carbonic chain results in a signicant reduction in lecithin membrane rigidity, from
20kB T to 0, 5kB T .

NDICE
1.
1.1. Motivao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.2. Estado da arte e objetivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
1.3. Organizao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2.
Introduo
Fundamentao terica
11
2.1. Fenmenos de auto-organizao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

2.2. Fosfolopdios . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12
2.3. Fases Lamelares liotrpicas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13
2.4. Interaes entre bicamadas em fases lamelares . . . . . . . . . . . . . . . . 14
2.5. Teoria de espalhamento de raios X em fases lamelares . . . . . . . . . . . . 18
2.5.1. Fator de estrutura e parmetro de Caill . . . . . . . . . . . . . . . 19
2.5.2. Fator de forma . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21
2.5.3. Propriedades elsticas das fases lamelares . . . . . . . . . . . . . . 23

viii
3.
ndice
Materiais e Mtodos
29
3.1. Preparao das Amostras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29

3.1.1. Composio das amostras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29
3.1.2. Processo de preparao e estabilizao das amostras . . . . . . . . 29
3.2. Experimentos de SAXS e WAXS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31
3.2.1. Fontes convencionais - Nanostar . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 31
3.3. Mtodos de tratamento e ajustes das curvas experimentais de SAXS . . . . 32
3.3.1. Tratamento dos dados . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32
3.3.2. Ajuste das curvas de espalhamento . . . . . . . . . . . . . . . . . . 35
3.3.3. Determinao da espessura da bicamada . . . . . . . . . . . . . . . 38
3.4. Experimentos de GISAXS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40
4.
Resultados
45
4.1. Estudo Estrutural . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45

4.1.1. Membranas de lecitina . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45
4.1.2. Variao na composio da membrana . . . . . . . . . . . . . . . . 57
4.1.3. Estudo termodinmico . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 71
5.
Concluses e perspectivas
87
5.1. Concluses . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 87
5.2. Perspectivas . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 89
A.1. Adaptaes mecnicas para a instalao da tcnica de GISAXS . . . . . . . 91
B.1. Potencial qumico da gua na fase lamelar . . . . . . . . . . . . . . . . . . 95
C.1. Modelo de bicamada rgida . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 99
D.1. Artigo publicado no Journal of Applied Crystallography (J. Appl. Cryst.
(2012). 45, 12781286) . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 103

GLOSSRIO
Molculas anflicas: molculas que apresentam duas regies com diferentes solubilidades, uma hidroflica e hidrofbica.
Hidrofca: Regio que tem anidade com molculas polares, tal como gua.
Hidrofbica: Regio que no tem anidade com molculas polares, tal como gua.
Bicamada: Dupla camada formada por molculas lipdicas em presena de um solvente.
Fases Lamelares e esmtica: Arranjo de bicamadas periodicamente espaadas com ordenamento posicional ao longo de uma direo, enquanto nas outras duas direes as
molculas anflicas podem apresentar diferentes arranjos.
L : Fase lamelar que ocorre temperatura mais alta, e alta hidratao. Nessa fase, as
molculas apresentam uma ordem lquida, com as cadeias carbnicas sem qualquer tipo
de ordenamento.
L e P : Fases que as caudas carbbicas apresentam um arranjo mais ordenado das
cadeias carbnicas. Nessas duas fases as cadeias carbnicas esto estendidas e podem apresentar um certo grau de ordenamento posicional 2D de curto alcance, o que confere maior
rigidez bicamada.
Lipdios Zweterinicos: Classe de lipdio que apresenta carga total neutra, porm, na
regio hidroflica apresenta um momento de dipolo.

ndice
M : Espessura da bicamada
w : Distncia de separao entre as bicamadas, ou espessura da camada aquosa.
Periodicidade lamelar (D): Denida como: M +w , representa o perodo de repetio
de um padro que formado pela bicamada + camada aquosa.
lip : Frao volumtrica de lipdio.
SAXS: Espalhamento de raios X baixo ngulo.
WAXS: Espalhamento de raios X alto ngulo.
GISAXS: Espalhamento de raios X pr incidncia rasante.
Fator de estrutura (I(q)): Intensidade de luz espalhada.
Fator de estrutura (S(q)): Descreve a repetio de um padro que produz espalhamento de raios X.
Fator de forma (P(q)): Descreve caractersticas a forma do padro que produz o espalhamento.
: Parmetro de Caill associado s utuaes das membranas.
D : Amplitude de utuao da distncia de separao entre as bicamadas.
B: Mdulo de compressibilidade [Pa]

: Mdulo elstico de uma nica membrana [kB T ]
K: Mdulo de curvatura do bulk [J/m]
: Contraste de densidade eletrnica.
H e T : Contraste de densidade eletrnica entre cabea polar e cauda apolar, respectivamente.
H : Dimenso da regio polar.
T : Dimenso da regio hidrofbica.
V : Potencial de interao entre as bicamadas.
Vw : Potencial atrativo de van der Waals.
VH : Potencial repulsivo de curto alcance, nomeado de Potencial de Hidratao.

ndice
VE : Potencial repulsivo de longo alcance, de natureza entrpica relacionado s utuaes das membranas.
W : Constante de Hamaker, esta constante depende diretamente da composio da
membrana.
PE : Constante da amplitude do potencial estrico.
PH : Constante da amplitude do potencial de hidratao.
H : Constante de decaimento do potencial de hidratao.
E : Constante de decaimento do potencial estrico.
Wc : Constante de Hamaker crtico.
Lb : Comprimento de Bjerrum do solvente
Iamostra : Espalhamento da fase lamelar dentro do capilar
Iback : Espalhamento do capilar utilizado no experimento de espalhamento de raios X
("background")
Iruido e Isombra : Espalhamento que correspondem a corrente de fundo do equipamento e a sombra do feixe direto incidente no beamstopper.
Itratada : Espalhamento da fase lamelar depois da subtrao dos "backgrounds".
I0 : Padro secundrio de espalhamento usado por ser um padro cujo espalhamento
no depende do ngulo de espalhamento na faixa angular de interesse.
RH: Umidade relativa dentro de um reservatrio
: Potencial qumico
P : Presso necessria para retirar uma molcula de gua entre as bicamadas
P0 : Presso de vapor saturado.
vw : Volume parcial molar da gua.

CAPTULO 1
INTRODUO
1.1. Motivao
A arquitetura e funo da membrana celular tem um papel fundamental para a regulao de suas funes e comunicao com o meio exterior. A formao de protruses ou invaginaes na membrana, poros e a formao de estruturas mais complexas
como aparato de Golgi so controladas por foras elsticas e transies de fase estruturais [1], [2], [3], [4], [5]]. (Figura 1.1)
Figura 1.1.: Esquema de uma clula animal.

Mudanas na composio qumica da membrana so responsveis por alteraes em
suas propriedades mecnicas [6], [7] que se manifestam em diferentes formas de organizao tridimensional [8], [9] e inuenciam processos de adeso de protenas, fuso de mem-

Introduo
branas e interao entre protenas membranares [6]. Flutuaes locais de composio ou
de concentrao, chamados de rafts desempenham um papel importante na formao de
protuses ou invaginaes e esto associadas a mudanas locais na exibilidade da membrana [6].
Figura 1.2.: (A) Modelo esquemtico de uma membrana de lipdios. (B) A formao da
invaginao est ligada a formao de domnios ("rafts") ricos em caveolina
(protena membranaria) e colesterol extrado de [6]).
Sistemas lamelares so compostos por bicamadas de surfactantes regularmente espaadas e tem sido bastante utilizados como sistema modelo para investigaes de processos
biolgicos, pesquisa fundamental de interaes entre membranas e para aplicaes em biotecnologia. A estrutura peridica existe em apenas uma dimenso, enquanto nas outras
duas dimenses, a bicamada comporta-se como um uido. As utuaes trmicas que
ocorrem na membrana do origem interaes repulsivas resultantes do impedimento
estrico mtuo quando as membranas esto prximas. Essas interaes desempenham um
papel fundamental na estabilizao da fase lamelar uma vez que seu alcance e intensidade
so comparveis interao atrativa de van der Waals [10], [11], [12], [13].
Experimentalmente foi observado que alguns sistemas lamelares apresentam um grande
domnio de diluio, utilizando seja gua ou leo como solvente. Essa caracterstica resulta da interao repulsiva de longo alcance devido a alta exibilidade das bicamadas, que
obtida graas adio de um co-surfactante bicamada [14] e [15]. Do ponto de vista
microscpico, a exibilidade da membrana est relacionada desordem orientacional e
posicional das molculas de surfactantes e tambm dimenso da cadeia carbnica. Um
exemplo do efeito da alterao da exibilidade da membrana na estabilidade da fase lamelar o sistema composto por DMPC e gua, que atinge periodicidade lamelar mxima

1.2 Estado da arte e objetivos
em torno de 45 , porm com a incorporao de um cosurfactante a estrutura lamelar

estabiliza-se com periodicidade de at 200 [15].
As tcnicas de espalhamento de raios X e nutrons tem demonstrado serem ferramentas
bastante teis na descrio detalhada da estrutura lamelar [16], [17], [18]. As utuaes
trmicas destrem a ordem posicional de longo alcance e produzem um espalhamento difuso. A anlise cuidadosa dos dados experimentais, incluindo o espalhamento difuso, pode
fornecer informaes relevantes, no apenas dos parmetros estruturais, mas tambm das
propriedades elsticas da estrutura lamelar [18] [19].
1.2. Estado da arte e objetivos

Existe na literatura, desde a dcada de 80, o interesse de compreender o mecanismo
estrutural e funcional de macromolculas que esto presente em sistemas biolgicos, tais
como, descrito anteriormente.
Na literatura existem vrios trabalhos voltados para o estudo de propriedades estruturais de membranas utilizando vesculas ou fases lamelares [20] compostas por um nico
fosfolipdio, como DPPC (dipalmitoil fosfatidilcolina), ou DMPC (dimiristoil fosfatidilcolina), entre outros. Uma abordagem bastante utilizada para o estudo das interaes
entre as bicamadas a preparao da fase lamelar em uma soluo de polmeros [21], onde
a presso osmtica exercida sobre as membranas controlada pela concentrao de polmeros em soluo. Essa abordagem combinada com espalhamento de raios X permite
a determinao da separao entre as membranas em equilbrio para uma dada presso
osmtica e os resultados podem ser utilizados para obteno de parmetros que caracterizam as interaes entre as membranas, tais como constante de Hamaker, constante de
rigidez, e mdulo de compresso [22], [23]. Existem ainda alguns trabalhos onde a composio da membrana variada introduzindo combinao de fosfolipdios [2] ou ainda
colesterol [24].
Partindo desse cenrio este trabalho tem como objetivo apresentar um estudo sistemtico das propriedades estruturais e elsticas de um sistema lamelar composto de lecitina
e um co-surfactante comercial, Simulsol R , que uma mistura de molculas de cadeia
nica etoxiladas. Devido ao carter zwiterionico dos grupos polares da lecitina e o carter
no-inico do Simulsol, a carga total da membrana permanece neutra. A incorporao
sistemtica de molculas com cadeia carbnica simples deve promover aumento na exibilidade da membrana, porm h um efeito secundrio relacionado as cadeias etoxiladas que
as compem. Essas cadeias so hidroflicas e estendem-se na camada aquosa, no espao

Introduo
entre as bicamadas, introduzindo uma repulso extra devido aos efeitos estricos.
Os parmetros relevantes que caracterizam a estrutura lamelar so determinados para
membranas com composio variando de 100% de lecitina 100% de Simulsol, ao longo
da linha de diluio. Na anlise dos dados experimentais de espalhamento de raios X, o
perl de densidade eletrnica modelado utilizando um conjunto de funes Gaussianas
simtricas, cujas amplitude e largura so ajustadas. O mtodo de ajuste aplicado diretamente intensidade espalhada, utilizando uma rotina de mnimos quadrados com vnculo,
o que permite a determinao simultnea dos fatores de forma e estrutura, alm de vrios
parmetros que descrevem o modelo, tais como a espessura da bicamada, a distncia de
separao entre as bicamadas e o parmetro de Caill que relaciona as duas constantes
elsticas.
A abordagem experimental proposta neste trabalho nos permite investigar o efeito das
interaes estricas na estabilidade da fase lamelar pelas mudanas introduzidas na composio da membrana. Por um lado, a membrana torna-se mais uida pela incorporao de
molculas de cadeia simples, e por outro lado, h um aumento da interao repulsiva pela
presena de uma cabeleira na interface da membrana. A varredura da linha de diluio
nos permite investigar diferentes regimes de interaes, desde um regime connado, com
as membranas muito prximas, at regimes muito diludos, onde as interaes repulsivas
devido s utuaes trmicas devem ter um papel predominante.
Um outro aspecto importante deste trabalho consiste no mtodo utilizado para a anlise
dos dados experimentais de espalhamento de raios X que levam determinao do perl
de densidade eletrnica, independente de consideraes prvias sobre a congurao das
cadeias carbnicas e grupos polares. Assim, mudanas importantes que ocorrem na interface entre a bicamada e a camada aquosa, dependentes da composio da membrana,
podem ser detectadas. Esse mtodo de anlise foi aplicado inicialmente fase lamelar com
membranas compostas apenas de lecitina e os resultados obtidos revelam que o processo
de desidratao da fase lamelar promove alteraes na estrutura da bicamada. Alm da tcnica usual de SAXS aplicada ao estudo das propriedades estruturais da fase lamelar, neste
trabalho foi desenvolvida uma montagem experimental para experimentos de difrao de
raios X em lmes orientados, na geometria de reexo em incidncia rasante (GISAXS).
Os lmes orientados so colocados em uma cmara com umidade controlada, o que permite fazer um estudo termodinmico da hidratao (ou desidratao) do lme para uma
dada composio da membrana. A partir da umidade relativa, pode-se determinar a presso osmtica ou o potencial qumico da gua na fase lamelar e esses resultados do acesso
determinao do mdulo de compressibilidade (B).

1.3 Organizao
O comportamento do parmetro de Caill ao longo da linha de diluio obtido para

as diferentes composies da membrana e revela a existncia de dois regimes de interao distintos entre as bicamadas. Combinando os valores obtidos para o parmetro de
Caill e os valores obtidos para o mdulo de compresso possvel, ento, obter informaes sobre a constante de rigidez da membrana e o seu comportamento em funo da
hidratao.
1.3. Organizao
No Captulo 2 sero apresentados modelos tericos que descrevem as interaes entre
as membranas e suas propriedades elsticas. Nesse captulo ser apresentado tambm o
mtodo utilizado para anlise dos resultados experimentais de espalhamento de raios X.
Os protocolos utilizados para a preparao das amostras para os experimentos de SAXS e
GISAXS so descritos no Captulo 3, assim como detalhes sobre a montagem de GISAXS
desenvolvida neste trabalho.
No Captulo 4 so apresentados os resultados obtidos neste trabalho, organizados em
duas partes. Em primeiro lugar sero apresentados os resultados obtidos para as membranas compostas apenas de lecitina, com sua caracterizao estrutural. Os resultados obtidos
so comparados a resultados existentes na literatura. Em seguida so apresentados os resultados obtidos para as membranas onde foi introduzido co-surfactante em diferentes
quantidades. O efeito da adio do co-surfactante analisado observando-se o comportamento dos parmetros estruturais, tais como espessura da bicamada, perodo lamelar,
fator de forma, e do parmetro de Caill.
Em segundo lugar so apresentados os resultados dos estudos termodinmicos, onde
a fase lamelar est em contato com um reservatrio de vapor de gua e o processo cintico de hidratao ou desidratao da fase lamelar pode ser estudado. A partir desses
experimentos determinado o mdulo de compressibilidade, que combinado com o parmetro de Caill leva a determinao da constante de rigidez, para duas composies de
membrana.
O Captulo 5 traz uma discusso dos principais resultados obtidos neste trabalho e a
contribuio desses resultados para a compreenso das propriedades elsticas das membranas de lipdios.

CAPTULO 2
FUNDAMENTAO TERICA
2.1. Fenmenos de auto-organizao

Algumas molculas, chamadas de anflicas, apresentam regies com diferentes solubilidades, conforme mostrado de maneira esquemtica na gura 2.1, onde pode-se identicar
uma parte polar, hidroflica e uma parte apolar, hidrofbica. Na presena de um solvente, e a partir de uma certa concentrao, essas molculas tendem a se auto-organizar
formando estruturas mais complexas. O tipo de estrutura que ser formado depende de
Figura 2.1.: Desenho esquemtico de uma molcula anflica.

fatores geomtricos da molcula, (gura 2.2) ,ou seja, da razo entre o volume ocupado
pela parte polar e o volume ocupado pela parte apolar. Assim, utilizando a gua como
solvente, molculas com geometria tipo cone tendem a formar micelas esfricas, com a

12
Fundamentao terica
parte polar na superfcie exposta ao solvente, enquanto molculas com geometria mais
prxima de um cilindro tendem a formar bicamadas, com as cadeias carbnicas voltadas
para o interior da bicamada. [25]
Figura 2.2.: Estruturas formadas a partir do fenmeno de auto-organizao de molculas

anflicas.
2.2. Fosfolopdios
A palavra lipdio vem do grego lipos que signica gordura. Os lipdios so molculas
anflicas que possuem duas cadeias carbnicas ligadas a um grupo polar e na presena
de gua, devido alta hidrofobicidade das cadeias carbnicas, tendem a formar bicamadas
(Figura 2.3).
A membrana celular um exemplo de uma bicamada, composta de diferentes tipos
de lipdios, majoritariamente fosfolipdios, isto que apresentam um grupo fosfato na
parte polar. Na membrana celular os fosfolipdios mais abundantes so fosfatidilcolina,
fosfatidilserina e fosfatidiletaloamina, com cadeias carbnicas variando entre 16 18 car-

2.3 Fases Lamelares liotrpicas
13
Figura 2.3.: Estrutura da molcula da fosfatidilcolina.

bonos [26]. Quanto ao grupo polar, estes podem ou no apresentar carga, ou ainda podem
apresentar um momento de dipolo eltrico, e nesse caso so denominados de zwiterionicos [27].
A membrana celular desempenha um papel muito importante no aparecimento da vida,
pois ao mesmo tempo em que delimita uma regio onde podem ser acomodadas outras
macromolculas que passam a interagir, ela tambm bastante exvel, pois no existem
ligaes covalentes entre as molculas de fosfolipdios. A membrana serve tambm como
substrato para outras biomolculas, como protenas, enzimas e receptores que permitem
a comunicao do meio externo com o meio interno.
2.3. Fases Lamelares liotrpicas

A fase lamelar formada por um arranjo de bicamadas periodicamente espaadas, ou
seja, h um ordenamento posicional ao longo de uma direo, enquanto nas outras duas
direes as molculas anflicas podem apresentar diferentes arranjos. Esse um sistema
liotrpico onde as transies de fase ocorrem principalmente por variaes de concentrao relativa, mas podem tambm ocorrer por variao de temperatura. Essa estrutura
conhecida como fase esmtica observada em cristais lquidos [28].
Os primeiros estudos sobre a morfologia das fases lamelares foram conduzidos por
Luzatti [29], nos anos 60 e 70, com a identicao de trs tipos de fases lamelares, L ,
L e P , que se distinguem pelos diferentes tipos de arranjo adotados pelas molculas na
bicamada (Figura 2.4). A fase L , a que ocorre temperatura mais alta, e alta hidratao.
Nessa fase, as molculas apresentam uma ordem lquida, com as cadeias carbnicas sem
qualquer tipo de ordenamento e por isso essa fase tambm chamada de fase lamelar

14
Fundamentao terica
uida. As outras duas fases se caracterizam por um arranjo mais ordenado das cadeias
carbnicas, como mostrado na gura 2.4. Nessas duas fases as cadeias carbnicas esto
estendidas e podem apresentar um certo grau de ordenamento posicional 2D de curto
alcance, o que confere maior rigidez bicamada.
Figura 2.4.: Diferentes tipos de organizao das molculas de lipdios nas fases lamelares
As transies de fase podem ocorrer por variao da temperatura ou quantidade de

gua, como ilustrado na gura 2.5 para o fosfolipdio DMPC [30] , [14]. De modo geral, o
aumento do nmero de carbonos na cadeia carbnica resulta em temperaturas de transio
mais elevadas. [31] [32]
2.4. Interaes entre bicamadas em fases lamelares

A estabilizao da estrutura lamelar pode ser descrita no contexto clssico da teoria
DLVO, como resultado do balano entre as interaes eletrostticas devido dupla camada e interaes atrativas de van der Waals [33]. Experimentalmente, foi observada uma
fora repulsiva extra para pequenas distncias de separao entre as bicamadas, com decaimento exponencial, e alcance da ordem de 2 . A natureza dessa fora, denominada de
fora de hidratao, no entanto, ainda um tema controverso na literatura, [25] [34] [35] e
existem vrias proposies que consideram a estruturao dos grupos polares na interface
ou polarizao e organizao das molculas de gua [36] [37] [34]. Assim a energia de
interao entre as bicamadas poderia ser escrita diretamente em termos de um potencial
efetivo (por unidade de superfcie), como a soma dos potencias de van der Waals (VW ),
eletrosttico (VE ) e um potencial de hidratao (VH ). [22]

2.4 Interaes entre bicamadas em fases lamelares
15
Figura 2.5.: Diagrama de fases utilizando raios X em amostras de DMPC (adaptada de

[14]).
V =
12 D 2
2
(D + w )2
1
(D + 2w )2
+ PH e
+ PE e
(2.1)
onde w a distncia de separao entre as bicamadas de espessura M . O alcance das

interaes de eletrosttica e hidratao dado pelas constantes E e H , e, W, PE e PH
representam a intensidade das interaes de van de Waals, eletrosttica e de hidratao,
respectivamente.
Como a constante de Hamaker (W) positiva, de acordo com essa descrio, o potencial
efetivo apresenta sempre um mnimo, que corresponde a um conjunto de duas membranas
interagindo e separadas por uma dada distncia, como resultado da interao atrativa de
van der Waals. Quando h um equilbrio entre as interaes repulsivas e atrativas, a
distncia de separao atinge um valor mximo, que chamado de limite de hidratao.
Para alguns sistemas lamelares, no entanto, observa-se experimentalmente que a distncia
entre as bicamadas aumenta indenidamente com a hidratao, ou seja no existe um
mnimo no potencial de interao. [38] [39] [11]
Para explicar essas observaes, Helfrich [40] props a existncia de uma interao re-

16
Fundamentao terica
pulsiva de longo alcance, de natureza entrpica. A amplitude das utuaes de ondulao

reduzida quando as membranas so aproximadas e isso resulta na reduo da entropia,
porm esta acompanhada do aumento da interao repulsiva. A energia elstica por
unidade de volume devido s utuaes pode ser escrita usando a teoria elstica de cristais
lquidos esmticos e para pequenas amplitudes de utuao em torno de uma posio de
equilbrio (Fig. 2.8), pode ser escrita como:
F =B
1 u
2 z
+K
1 2u
2 y 2
2u
x2
(2.2)
onde u(x,y) amplitude da utuao da separao entre as bicamadas em torno da posio de equilbrio, B denido como o mdulo de compresso da camada (bicamada +
gua) concentrao constante, e K o mdulo de curvatura ou splay da estrutura lamelar. A constante B leva em conta as interaes que fazem com que camadas vizinhas
permaneam ligadas, portanto, para uma camada isolada o valor de B igual a zero [41].
Considerando que as interaes entre as membranas devem-se apenas aos efeitos de
volume excludo, a energia de interao entre as bicamadas devido a esses efeitos, segundo
o modelo de Helfrich, dada por [40]:
Vs =
(kB T )2
2
w
(2.3)
onde , o mdulo elstico de uma nica membrana, ( tambm chamado de mdulo de

rigidez da membrana) [40] e est relacionado com a constante elstica K, que representa o
mdulo de curvatura do bulk pela expresso:
(2.4)
= KD.
Somando-se todas as contribuies, o potencial de interao entre as bicamadas poderia

ser escrito ento, como:
12 D 2
2
(D + w )2
1
(D + 2w )2
+ PH e
+ PE e
VT = (2.5)
kB T
+
(2.6)
w
A simples adio da expresso obtida por Helfrich expresso do potencial, no entanto,

2.4 Interaes entre bicamadas em fases lamelares
17
ainda no permite a descrio satisfatria das propriedades de transio de fase do sistema

lamelar, pois esse potencial apresenta um mnimo. Portanto, poderia se esperar uma
transio de primeira ordem entre um sistema de membranas ligadas e interagentes, para
um sistema de membranas completamente separadas. Alguns trabalhos utilizam outras
abordagens, como mtodos estatsticos ou variacionais para avaliar o balano entre as
diferentes interaes, em funo da constante de Hamaker (W) ou da constante de rigidez
da membrana [10] [12] [39] [42]. Essas abordagens resultam na previso de uma transio
de segunda ordem, de um sistema ligado para um sistema no ligado, com a distncia de
separao entre as membranas divergindo quando a constante de Hamaker assume um
valor crtico Wc , a (W Wc ) [12] [39].. Essa transio tambm poderia ocorrer pela
diminuio da constante de rigidez da membrana como mostrado na gura 2.6 [11].
Figura 2.6.: Previso terica para o comportamento da presso (adimensional) em funo

da distncia de separao entre as bicamadas (0 , adimensional) para diferentes parmetros H , onde H um parmetro adimensional proporcional
3 Figura adaptada de [42] .

18
Fundamentao terica
2.5. Teoria de espalhamento de raios X em fases

lamelares
Desde o trabalho pioneiro de Luzatti [29] a tcnica de espalhamento de nutrons e raios
X tem sido empregada para o estudo de vesculas e sistemas lamelares [17] [22] [43]. A
posio dos picos de Bragg permite a determinao da periodicidade lamelar, porm devido s utuaes trmicas, h tambm um espalhamento difuso e esses picos tornam-se
largos e no podem ser descritos por funes delta. A anlise da intensidade de espalhamento, incluindo o espalhamento difuso pode fornecer uma descrio mais detalhada da
fase lamelar quanto sua estrutura global, assim como das utuaes trmicas.
Mtodos de anlise dos dados experimentais de espalhamento que levem em conta no
apenas os picos de Bragg, mas tambm o espalhamento difuso tm recebido bastante ateno [44], pois informaes mais detalhadas podem ser obtidas, mesmo quando existem
poucas ordens de difrao. Esses mtodos levam em conta o mximo possvel do sinal detectado experimentalmente para garantir a conabilidade nos valores obtidos, e ao mesmo
tempo devem ser aplicveis uma variedade de situaes, como por exemplo, membranas
com diversas composies, formando vesculas ou estruturas lamelares.
A intensidade de espalhamento de um conjunto de camadas espaadas periodicamente
est relacionada com a modulao na densidade eletrnica e pode ser descrita como o
resultado da convoluo da funo que descreve a forma e contraste do objeto; fator de
forma (P[q]) e da funo fator de estrutura (S[q]) que descreve o arranjo peridico dos
objetos e tambm carrega informaes sobre a interao entre eles;
Io (q) =
S(q)|P (q)|2
qz 2
(2.7)
Na equao acima, q o vetor de onda de espalhamento relacionado ao ngulo de espalhamento 2 pela expresso, q=(4/)sen, onde o comprimento de onda da radiao
incidente e o fator q 2 no denominador uma correo para espalhadores isotrpicos. A
funo S[q] corresponde transformada de Fourier da funo de rede descrevendo o arranjo peridico unidimensional, chamado de fator de estrutura. Uma aproximao usual
consiste em desacoplar o fator de forma e o fator de estrutura e trata-los separadamente. A
seguir sero apresentados modelos para descrever o fator de estrutura e o fator de forma,
assim como as aplicaes para dados experimentais.

2.5 Teoria de espalhamento de raios X em fases lamelares
19
2.5.1. Fator de estrutura e parmetro de Caill
De acordo com a Teoria de Caill modicada, [45] o fator de estrutura para um sistema
multilamellar, com periodicidade D descrito de maneira satisfatria para uma mdia
estatstica:
N 1
S0 (q) = 1 + 2
k=1
n
N
k cos(kqD)exp (
D
2
)2 q 2 (n)( 2 )q .(2.8)
Na equao acima, N representa o nmero de camadas correlacionadas na estrutura multicamadas, a constante de Euler e o parmetro de Caill. Esse parmetro relaciona
as constantes elsticas B e K:
q0 2 kB T
,
8 K B
(2.9)
onde K o mdulo de curvatura e B o mdulo de compressibilidade potencial qumico

constante.
A gura 2.7 representa de maneira esquemtica o efeito das utuaes trmicas na funo S[q]. Para uma estrutura cristalina unidimensional, formada por bicamadas rgidas,
periodicamente espaadas, a funo S[q] seria descrita por picos de Bragg de mesma largura, centrados em qn = 2/D, onde n corresponde ordem de difrao. A largura
do pico inversamente proporcional dimenso do domnio; L = N D, onde N o
nmero de camadas correlacionadas. Para N , a largura dos picos tende a zero, e a
funo S[q] se aproxima de funes delta, com largura nita, determinada pela resoluo
instrumental.
Pequenas utuaes na posio das bicamadas em torno da posio de equilbrio, assim
como utuaes do tipo bending resultam em alargamento dos picos e decaimento da
intensidade dos picos. Na gura 2.7 (b), o fator D 2 representa a amplitude quadrtica
mdia das utuaes do espaamento entre as bicamadas em torno da posio de equilbrio
(Figura 2.8):
D 2 =< (un ) u0 )2 >,
(2.10)

20
Fundamentao terica
(n+1) D
nD
(n-1) D
(n+1) D
nD
(n-1) D
(n+1) D
nD
(n-1) D
Figura 2.7.: Representao esquemtica da fase lamelar e a intensidade de espalhamento

I (q) correspondente :(a) para membranas rgidas; (b) com utuaes da periodicidade lamelar (c) com utuaes de ondulaes da membrana. Figura
adaptada de [19]
que por sua vez, est relacionado ao parmetro de Caill pela relao: [22]
D 2 =
D 2
2
(2.11)

21
Figura 2.8.: Flutuaes trmicas das membranas em uma fase lamelar de periodicidade
igual a D.
2.5.2. Fator de forma
A funo P[q] a transformada de Fourier da modulao de densidade eletrnica ao

longo de uma bicamada. Alguns mtodos de anlise dos dados experimentais consideram
que na vizinhana dos picos de Bragg o valor da funo P[q] aproximadamente constante;
P[q] Pn . Com essa aproximao a densidade eletrnica pode ser escrita como:
nmax
n |Pn |cos
(z) =
n=1
2nz
D
(2.12)
onde n = 1 o fator de fase, Pn corresponde raiz quadrada da amplitude do

pico. Para minimizar os erros de truncamento na srie de Fourier, a aplicao da equao
acima requer a existncia de pelo menos 4 picos de Bragg, o que no muito comum em
sistemas lamelares, principalmente no regime muito hidratado. A grande limitao dessa
aproximao, no entanto, est no fato de que P[q] varia bastante, sobretudo na regio de
picos de Bragg de ordem mais baixa, evidenciado pela assimetria nos picos. Esse modelo
no capaz de ajustar a cauda difusa desses picos [19].
Uma abordagem alternativa e simples foi proposta por Nallet et all [18], e consiste em
descrever a modulao na densidade eletrnica por meio de funes degrau;
P (q) =
4H 2
q2
sin(q(H + T )) sin(qT ) +
T
H
sin(qT )
(2.13)
Onde H e T , representam a densidade eletrnica do grupo polar e da cauda

carbnica, respectivamente e H e T a dimenso (ao longo do eixo z), do grupo polar e
da cauda carbnica, respectivamente de acordo com gura 2.9.
Esse modelo, embora aproximativo, fcil de ser implementado para ns de ajustes
aos dados experimentais, e fornece uma descrio quantitativa satisfatria na regio de

22
Fundamentao terica
Figura 2.9.: Representao esquemtica do contraste de densidade eletrnico da bicamada

obtida pelo modelo de 3 degraus. Nesse modelo a parte positiva do contraste
se refere a cabea polar e negativa as caudas carbnicas.
pequenos ngulos.
Uma descrio mais detalhada da modulao da densidade eletrnica pode ser obtida
utilizando funes gaussianas, onde a funo (z) apresenta variaes mais suaves [17].
Usando duas funes gaussianas, a parte central da bicamada representada por uma gaussiana com amplitude negativa em relao agua, centrada no meio da bicamada, e o grupo
polar representado por uma segunda gaussiana, com amplitude positiva, cujo pico corresponde posio da cabea polar. A suavizao da funo (z) melhora bastante a
qualidade dos ajustes aos resultados experimentais, mas ainda falha na regio de valores altos de q, e com dados de alta resoluo. Uma nova abordagem consiste na utilizao de um
conjunto de funes gaussianas, regularmente espaadas, aliado a um mtodo de otimizao que determina a amplitude e largura das funes que melhor ajustam os dados experimentais. Esse mtodo, chamado de mtodo de deconvoluo gaussiana [44], mostrou-se
bastante adequado para descrever bicamadas simtricas, com o uso de 4 funes gaussianas
para descrever metade da bicamada. De acordo com esse modelo a densidade eletrnica
passa a ser descrita por:

(z) =
23
an [Gs (z, zn , n ) + Gs (z zn , n )]
1 + ij
n=1
(2.14)
(2.15)
podendo i1 = 1, i = 1 e i1 = 0, i = 2, 3, 4
(2.16)
2
(z zn )
1
exp
2 2
2
Z
zn = (n 1)2, =
2nmax 2 ln 2
Gs (z, zn ), n =
(2.17)
(2.18)
Na expresso acima, an representa a amplitude da guassiana Gs , o parmetro o

desvio padro dessa gaussiana, que varia com z. A vantagem na utilizao do conjunto
de funes gaussianas, que para uma bicamada simtrica, possvel obter uma funo
analtica para P(q);
an P (q, n), onde P (q, n) =
P (q) =
n=1
2exp
2q2
2
cos(qzn ) ,(2.19)
Um exemplo do perl obtido para P[q] apresentado na gura 2.10, na simulao de

uma bicamada simtrica. Esse mtodo de anlise foi implementado no GFCx e foi utilizado para ajuste dos dados experimentais de espalhamento obtidos neste trabalho. Uma
descrio mais detalhada sobre o tratamento dos dados experimentais e determinao dos
parmetros ajustveis ser apresentados na seo 4 do captulo 3.
2.5.3. Propriedades elsticas das fases lamelares
Como foi discutido na seo 2.5, a anlise global das curvas de espalhamento de raios X
pode fornecer no apenas os parmetros estruturais que caracterizam a fase lamelar, mas
tambm informaes sobre as utuaes trmicas, caracterizadas pelo parmetro de Caill
que relaciona as constantes elsticas B e K.

Encontram-se na literatura previses para o comportamento do parmetro de Caill
para duas situaes particulares; i) para sistemas lamelares onde a interao predominante
entre as bicamadas de natureza eletrosttica e ii) sistemas lamelares dominados por utuaes trmicas de ondulaes, onde as foras predominantes so de natureza entrpica.

24
Fundamentao terica
Figura 2.10.: Contraste de densidade eletrnico da bicamada obtida pelo modelo de 4

gaussianas .
A seguir sero apresentadas as previses tericas para o comportamento do parmetro
de Caill para esses dois casos assim como resultados experimentais disponveis na literatura. Veremos tambm, como a partir do parmetro de Caill podem ser determinadas a
constante de rigidez da membrana e o mdulo de compresso.
Interaes Eletrostticas
Sistemas lamelares compostos por surfactantes inicos tais como, SDS (decil-sulfato de
sdio), pentanol e gua, ou SDS, hexanol e gua, apresentam um grande domnio de diluio, com perodos lamelares atingindo valores da ordem de 130 [46]. Nesses sistemas,
a interao eletrosttica entre as bicamadas predominante em relao s outras interaes devido dupla camada na interface bicamada-gua. As curvas de espalhamento de
raios X observadas para esses sistemas lamelares mostram picos de espalhamento bastante
estreitos, mesmo para diluies altas (frao volumtrica de gua de 0, 77). Esse fato experimental demostra que as utuaes trmicas no afetam o ordenamento da fase lamelar.
Para um sistema dominado por interaes eletrostticas [47], o comportamento do parmetro de Caill dado por:
ele =
kB T Lb
2
(1
m
D
)3 ,
(2.20)
onde Lb o comprimento de Bjerrum do solvente que no caso da gua da ordem 7

25
. Os dados obtidos e o ajuste feito a partir da equao 2.20 so representados na gura

retirada da referncia [47] (Figura 2.11).
Figura 2.11.: Parmetro de Caill vs. D, para sistemas lamelares compostos de molculas
nionicas. (Figura extrada de [46])
Assim, a partir do ajuste dos dados experimentais de espalhamento, possvel obter o
parmetro de Caill. Resultados experimentais obtidos para os dois sistemas citados acima
mostram que o comportamento do parmetro do parmetro de Caill bem descrito pela
equao 2.20. O ajuste da equao aos dados experimentais permite a determinao da
constante de rigidez; que est entre 2 a 0, 7kB T para o sistema com pentanol e entre 1 a
2kB T para o sistema com hexanol.
Interaes entrpicas
Lipdios s formam fases lamelares para altas concentraes de surfactante, a partir de

60%, e atingem perodo lamelar mximo em torno de 48 . A constante de rigidez das
membranas foi estimada a partir da anlise das utuaes trmicas em vesculas gigantes e
da ordem de 10 40kB T [48]. Como a espessura da membrana da ordem de 36 38
, a distncia de separao entre as bicamadas muito pequena. Portanto, as utuaes
trmicas so de pequena amplitude e a interao repulsiva de carter estrico deve ter uma
contribuio desprezvel em relao s outras interaes.
A adio de co-surfactantes, como um lcool, muda esse quadro de maneira extraordinria. A fase lamelar atinge periodicidade acima de 100 [46] [47] [49], e o comportamento

26
Fundamentao terica
do parmetro de Caill segue uma lei de potncias, compatvel com a expresso obtida por
Helfrich [40] ao considerar um sistema multilamelar dominado por interaes de carter
estrico;
und =
4
3
(2.21)
Esse comportamento, ilustrado na gura (2.12) foi observado para inmeros sistemas lamelares diretos (gua como solvente ) e inversos (que utilizam leo como solvente). No
sistema lamelar composto por SDS-pentanol e gua, as interaes eletrostticas podem
ser blindadas pela adio de sal na gua, e nesse caso, o comportamento do parmetro de
Caill tambm descrito pela expresso 2.21. (Figura 2.12)
Figura 2.12.: (a) Valores experimentias obtidos para o parmetro de Caill em diferentes
sistemas lamelares: DMPC-pentanol-gua, SDS-pentanol-gua+sal e SDSpentanol-gua-leo. A linha slida corresponde ao ajuste dos dados experimentais equao 2.21. (Extrada da referncia de [49])
A incorporao do lcool como cosurfactante membrana tem dois efeitos; promove
o aumento da espessura da bicamada, e do perodo lamelar e reduz a constante de rigidez
da membrana (gura 2.12) para valores da ordem de kB T [49].
Mdulo de compressibilidade para fases lamelares
Podem ser denidas duas constantes de compressibilidade; B e B que tem signicado
ligeiramente diferente; a constante B (eq.2.22 ) representa o mdulo de compressibilidade

potencial qumico constante enquanto a constante B, que est presente na eq. 2.23

27
representa a compressibilidade concentrao contante. B e B esto relacionadas pela

expresso 2.2;
B = B C,
(2.22)
onde C uma constante de acoplamento entre o deslocamento da camada e utuaes

de concentrao e a compressibilidade osmtica, isto a valor constante de D. O
signicado dessas constantes ilustrado na gura (2.13); a constante B est relacionada
principalmente a elasticidade da membrana enquanto a constante B est relacionada s

interaes membrana-membrana e dada por:
B=D
V 2
z 2
(2.23)
onde V o potencial de interao entre as bicamadas.
Figura 2.13.: Representao esquemtica das deformaes elsticas correspondentes s
constantes elsticas B, B e . A elasticidade da membrana est relacionada

e , enquanto B est relacionado s interaes entre as
principalmente B
membranas.
Experimentalmente, a determinao do mdulo de compresso possvel por meio de
experimentos onde a fase lamelar submetida uma presso osmtica controlada. Isso

28
Fundamentao terica
pode ser feito de duas formas; pela preparao da fase lamelar em uma soluo, onde a
presso osmtica controlada pela concentrao de polmeros (PVP) [21] [43], ou por
experimentos em que a fase lamelar est em contato com um reservatrio umidade
controlada [31].
Para bicamadas de DOPC (dioleoilfosfastidilcolina) a razo B/D varia entre 1040

1013 J/m4 , e decresce exponencialmente com o aumento da espessura da camada aquosa,
independente da temperatura [3].
Figura 2.14.: Comportamento do mdulo de compressibilidade (B/D) para a fase lamelar

de DOPC, obtida por experimentos de difrao de raios X em geometria de
reexo. (adaptada de [3])
.

CAPTULO 3
MATERIAIS E MTODOS
3.1. Preparao das Amostras

3.1.1. Composio das amostras
Durante o trabalho realizado o surfactante utilizado para a preparao das amostras foi
a lecitina de soja (Avati Polar R ) e um co-surfactante comercialmente conhecido como
Simulsol R (Sigma Addrich). A lecitina composta de uma mistura de fosfolipdios,
majoritariamente de cidos palmtico (DPPC); 63% 18 : 2, 11, 4% 18 : 1 e 5, 7% de
18 : 3 1 . O segundo fosfolipdio predominante o cido miristoil, 14, 9% e 3, 7 de
16 : 1 de 16 : 0. Levando em conta a proporo de fosfolipdios que constitui a lecitina
calculou-se a massa molar mdia que correspondente aproximadamente 776 g/mol e
massa especca 1, 01g/cm3 .
O Simulsol composto de uma mistura de molculas monocaternrias etoxiladas. A
cauda carbnica da molcula funcionalizada a uma cadeia de polietilenoglicol com mdia
de 10 monmeros. A massa molar mdia do Simulsol de aproximadamente 278 g/mol
e massa especca de 1, 02g/cm3 .
3.1.2. Processo de preparao e estabilizao das amostras
A homogeneidade da mistura do surfactante com o co-surfactante obtida misturandose as quantidades desejadas de cada um dos componentes em um solvente orgnico (ciclo1
Representado no grco so denotados CN:M carbonos que constitui a cadeia hidrofbica e o nmero
de insaturaes dessas mesmas respectivamente

30
Materiais e Mtodos
Figura 3.1.: Frmula estrutural qumica (a) cadeia monocaternria+cadeia polimrica e

(b) da fosfatidilcolina
hexano) numa proporo de 100 g de lipdio (Simulsol+lecitina) preparado para 1, 5
ml de solvente. A mistura submetida a ciclos de sonicao at que a soluo que
homognea. Para evaporao do solvente a soluo distribuda em tubos tipo ependorf
que so colocados em uma estufa vcuo por perodos que podem variar de 24 horas 72
horas. Para cada composio de membrana estudada foi explorada uma linha de diluio,
variando-se a frao volumtrica de lipdio (ou gua) dada por:
i =
mi
i VT
(3.1)
onde i a frao volumtrica do constituinte, mi a massa de gua ou do lipdio usado

na preparao da amostra, i a massa especca do composto e VT o volume total. Foi
adotado o protocolo de preparao das amostras, com um volume total VT = 100L, e a
pesagem da massa de lipdios realizada em uma balana analtica com preciso de 0, 1 mg
temperatura ambiente. Os componentes foram armazenados em tubos tipo ependorf e
mantidos em temperatura da ordem de 5o C. Para a homogeneizao das amostras foram
realizados ciclos alternados de centrifugao de 30 minutos de cabea para cima e depois
de cabea para baixo juntamente com variaes de temperaturas da ordem de 30o . A
velocidade de centrifugao utilizada foi de 600 rmp (rotaes por minuto), onde esse
processo foi realizado pelo menos 4 vezes por dia com intervalos de 2 dias de descanso
aps cada ciclo durante 1 ms. O nmero total de amostras que foram formuladas para a
realizao deste trabalho foi de mais de 205.

3.2 Experimentos de SAXS e WAXS
31
3.2. Experimentos de SAXS e WAXS

Para a tcnica de Espalhamento de Raios X a Baixo ngulo (SAXS) e Espalhamento
de Raios X a Alto ngulo (WAXS) foi utilizado uma mquina convencional Nanostar
Bruker instalada no Laboratrio de Cristalograa do Instituto de Fsica. Nestes experimentos foram utilizados capilares de vidro de 1, 5 mm de dimetro onde por centrifugao as amostras eram depositadas no fundo do capilar. Esse procedimento resulta em uma
orientao aleatria das bicamadas no interior do capilar. Alm da utilizao da mquina
NanoStar experimentos em luz sincrontron foram realizados (linha SWING - SOLEIL
Frana). Esses ltimos experimentos foram realizados por um aluno doutoramento [50],
porm o tratamento dos dados bem como as anlises foram realizados pela autora.
3.2.1. Fontes convencionais - Nanostar
Cerca de 70% dos experimentos realizou-se no equipamento o Nanostar-Bruker (Figura 3.2). A mquina utilizada para estudos estruturais na faixa de 0, 003 0, 85 1 .
O feixe produzido por uma fonte convencional com a radiao pela desacelerao dos
eltrons em um nodo de Cu, com duas linhas caracterstica desse material; K e K .Um
monocromador de silcio 100 seleciona somente a radiao da K1 e K2 para formar
o feixe de ftons que interage com a amostra, e o comprimento de onda mdio das duas
linhas K de 1, 5418 1 . Alm do monocromador, a tica do equipamento consiste
de um sistema de espelhos de Gobel e 3 fendas que geram um feixe de 1mm de dimetro e
o uxo do feixe incidente de 2 106 ftons/s. Foi utilizado um detector a gs Hi-Star
1024 1024 pixels, cada um de 100 1002 e um beamstopper semi-transparente.
As imagens 2D obtidas sofrem correes espaciais e de distoro e para isso utiliza-se um
software fornecido pelo fabricante.
A distncia mdia amostra-detector utilizada para a tcnica de SAXS foi de 65 cm que
nos permitia ter acesso a valores de q no espao recproco no intervalo de 0, 004 <q<
0, 35 1 e para WAXS a distncia utilizada foi de aproximandamente 6 cm varrendo,
no espao recproco, o intervalo de 0, 01 <q< 0, 85 1 .
Na realizao de experimentos de SAXS utilizou-se um porta amostra que acomodava
at 15 capilares de vidro temperatura ambiente de cerca de 22o . Nos experimentos
de WAXS usou-se o mesmo porta-amostra, ligado a um banho trmico com circulao de
gua pelo suporte para o controle da temperatura abaixo e acima da temperatura ambiente.
2
Essas informaes foram obtidas atravs da pagina do Grupo de Cristalograa do IFUSP disponvel em:
http://web.if.usp.br/cristal/node/103

32
Materiais e Mtodos
Figura 3.2.: (a) Fonte convencional de raios X utilizada - Nanostar. (b) porta amostra
no desenvolvimento desse trabalho.
O sistema de operao do Nanostar permite encontrar a posio tima para realizarmos
aquisio de cada amostra fazendo uma varredura nas coordenadas de X e Y de cada
capilar. A realizao da varredura permite ter uma idia da transmitncia das amostras,
possibilitando a determinao do tempo de exposio para cada uma individualmente; esse
tempo varia de 20 60 minutos dependendo da concentrao de gua de cada amostra.
O controle das aquisies foi realizado pelo prprio programa do Nanostar chamado
SAXS BRUKER, onde em cada aquisio feita, so geradas imagens bidimensionais de
formato ".g frm". Para anlise desses arquivos foi utilizado o programa SUPERSAXS [51]
que permite, desde a subtrao de fundo e parasita, at a reduo dessas imagens em curvas
unidimensionais (I(q)) com as respectivas incertezas dos dados experimentais.
3.3. Mtodos de tratamento e ajustes das curvas

experimentais de SAXS
3.3.1. Tratamento dos dados
Antes de realizar as aquisies dos dados necessrio seguir o procedimento de calibrao padro para determinar com preciso a distncia amostra-detector. Como padro

3.3 Mtodos de tratamento e ajustes das curvas experimentais de SAXS
33
utilizou-se o behenato de prata (BeAg) obtendo uma distncia mdia de 65 cm.

Para o tratamento dos dados deve-se levar em conta todas as contribuies possveis
para I(q). No caso das bicamadas de lipdios, quando preparadas esto imersas em um
solvente (gua) e temos que considerar que este meio deve contribuir para o espalhamento
nal que observamos. Alm do solvente as membranas esto contidas dentro do capilar
de vidro que tambm contribui para o espalhamento nal. Levando-se em conta do que o
espalhamento possui de 3 contribues, a anlise dos dados passa por trs momentos.
Para obter apenas o espalhamento da fase lamelar so feitas aquisies de dados para
um capilar de vidro vazio e outro capilar preenchido com o solvente, e os espalhamentos
gerados por ambos so subtrados da curva de espalhamento obtida para a fase lamelar no
capilar de vidro. Aps este processo obtm-se um sinal I(q) que chamado de I(q)tratada
(equao 3.2).
Itratada =
Iamostra (q)
s Ts ts
Iback (q)
b Tb tb
Iruido (q)
d
dagua,20o
truido (s Ts b Tb tb ) Isombra (q) I(0)agua,20o
onde, Iamostra corresponde ao espalhamento do conjunto amostra+solvente+capilar;

Iback corresponde ao espalhamento do solvente+capilar ("background").
As intensidades Iruido , Isombra so pr-aquisies que correspondem a corrente de
fundo do equipamento e a sombra do feixe direto incidem no beamstopper, respectivamente. i representa o uxo do feixe incidente onde os ndices s e b indicam a amostra
e o parasita, respectivamente. As transmitncias so representadas pelas letras T. Para o
o
d
/d
termo I(0) agua,20 utilizamos como um padro secundrio a gua, por ser um padro
agua,20o
cujo espalhamento no depende do ngulo de espalhamento na faixa angular de interesse.
temperatura de 20o o valor para a seo de choque da gua de 0, 01632cm1 [52].
O clculo da transmitncia da amostra dada pela equao 3.3
TS =
IS+GC TGC IGC Iruido

I + GC
(3.3)
onde IS+GC so aquisies com um centro espalhador (carvo vtreo) colocado na frente
da amostra, no caso do Nanostar. IGC corresponde a uma aquisio em um intervalo de
tempo de 30 minutos 1 hora, a transmitncia do carvo vtreo obtida juntamente nesse
procedimento. O clculo da incerteza dado pela equao 3.4

,(3.2)
34
Materiais e Mtodos
tratado (q) =
i 2 (q)
2
Isombra (q)
+(
Iamostra (q)
s T s ts
2
2
2
1 (q) = amostra (q) + back (q) + ruido (q)
sombra 2 (q)
1/2
2
Isombra (q)
1
s Ts
1
b T b
(3.4)
onde i representa um erro estatstico para cada ponto com os mesmos ndices utilizados
para descrever as intensidades. O termo sombra representa um erro estimado para o erro
correspondente contribuio da sombra atrs do beamstopper [52]).
Figura 3.3.: Exemplo de curva de SAXS bruto e as contribuies do espalhamento de gua

e capilar vazio.

35
3.3.2. Ajuste das curvas de espalhamento
Para uma fase lamelar a intensidade espalhada pode ser descrita como:
I(q) =
S(q)|P (q)2 |
q2
(3.5)
onde q o mdulo do vetor de espalhamento de raios X, S(q) representa a funo do

fator de estrutura, P(q) o fator de forma do sistema. O fator de forma depende somente
do espalhamento gerado por uma nica bicamada, enquanto o fator de estrutura deve
corresponder ao espalhamento produzido por um conjunto de bicamadas, periodicamente
espaadas com orientao aleatria. Para descrever o fator de forma foram testados dois
modelos chamados d: 3 degraus e deconvoluo de gaussianas (4 gaussianas para este
trabalho).
Fator de estrutura
Como discutido no Captulo 3 os parmetros que descrevem a estrutura e a exibilidade da membrana podem ser determinados pelos parmetros determindos no ajuste
das curvas experimentais entre eles os principais so: periodicidade lamelar, nmero de
camadas correlatas e parmetro de Caill.
Nesta seo tem-se como objetivo ilustrar a inuencia de cada um dos parmetros descritos acima na curva de espalhamento I(q) resultante. A periodicidade lamelar pode ser
determinada pela lei de Bragg, o comportamente de D inversamente proporcional ao
vetor de onda, pode ter-se ento uma ideia de como a periodicidade lamelar modica I(q).
Na gura 3.4 observa-se que os picos de espalhamento deslocam-se para valores menores
de q com o aumento da hidratao da fase lamelar.
O efeito da variao do parmetro de Caill e do nmero de camadas correlatas ilustrado na gura 3.5 e 3.5(b). O decrescimento de qualquer um desses parmetros produz
alargamento nos picos, e tambm a diminuio no nmero de picos observveis.

36
Materiais e Mtodos
Figura 3.4.: Simulao de curvas de espalhamento variando a periodicidade lamelar, com

N=50 e = 0, 1

37
(a)
(b)
Figura 3.5.: Simulao de curvas de espalhamento variando (a) e (b) N com D=65 .

38
Materiais e Mtodos
Fator de forma
O fator de forma descreve a densidade do contraste eletrnico da bicamada como discutido Captulo 3. A diferena entre os modelos que o modelo de 3 de graus representa
uma mudana no contraste eletrnico de forma abrupta no apresentando uma descrio
precisa da interface membrana-camada aquosa. Utilizando o modelo de deconvoluo de
gaussianas a variao do contraste eletrnico descrita de maneira mais suave. (Figura 3.6)
Figura 3.6.: Representao esquemtica do contraste de densidade eletrnico da bicamada

obtida pelo modelo de 3 degraus e pelo modelo de 4 gaussianas. Nesse modelo a parte positiva do contraste se refere a cabea polar e negativa as caldas
carbnicas. Contraste de densidade eletrnico da bicamada obtida.
Na gura 3.7 possvel comparar o ajuste utilizando os dois modelos de fator de forma
para descrever a bicamada discutidos na seo 2.4.2. Na regio de baixo ngulo (q pequenos) ambos os modelos fornecem um ajuste satisfatrio, porm, medida que q aumenta,
o modelo de 3 de graus j no descreve de maneira adequada os dados experimentais.
No Captulo 4, a anlise dos dados que sero apresentados far uso do modelo de 4
gaussianas para o fator de forma da bicamada.
3.3.3. Determinao da espessura da bicamada
O ajuste dos dados experimentais de espalhamento fornece a periodicidade lamelar e o

perl de densidade eletrnica que descreve a bicamada. O pico representa a posio das

39
Figura 3.7.: Ajuste da curva experimental com os dois modelos para o fator de forma.
cabeas polares e no centro (r=0 na gura 3.8) corresponde ao meio da bicamada. O contraste de densidade eletrnico da regio descrito por uma funo gaussiana e tomando-se
a distncia do centro da bicamada at o ponto correspondente a meia altura da gaussiana,
tem-se a metade da espessura da bicamada. Nesse ponto pode-se ter uma boa aproximao
da interface dos grupos polares da molcula da bicamada e as molculas de gua.
Figura 3.8.: Perl de contraste de densidade eletrnico para uma membrana lipdica.

40
Materiais e Mtodos
3.4. Experimentos de GISAXS

Uma das principais contribuies deste trabalho foi o desenvolvimento da implementao da tcnica de Incidncia Razante de Raios X Baixo ngulo (GISAXS) realizando
adaptaes no equipamento NanoStar-Bruker. A primeira mudana foi na cmara do
equipamento que passou a funcionar em presso atmosfrica. Para isso foi necessrio introduzir uma janela entre a cmara e a fonte de raios X, e uma segunda montada em um
cone entre a cmara e o detector (Figura 3.9 a e b).
Figura 3.9.: Imagens do cone de adaptao entre a cmara e o detector vista (a) lateral e
(b) superior.
Adaptaes mecnicas foram desenvolvidas para conseguir acomodar o gonimetro
WT-90 (Micos) cmara de raios X, que so descritos com maiores detalhes no apndice A.
Para estudar o processo cintico de hidratao/desidratao da fase lamelar foi desenvolvido um porta-amostra, com duas janelas de polmero transparente ao raios X permitindo
a passagem do feixe de raios X. No interior do porta-amostra colocada uma lmina de vidro, sobre o qual a fase lamelar depositada e cisalhada unidirecionalmente. Esse processo
leva orientao das bicamadas paralelas superfcie da lmina de vidro.
O porta-amostra est conectado um umidicador e o uxo de vapor de gua pode ser
controlado externamente. A umidade relativa no interior do porta-amostra medida por

3.4 Experimentos de GISAXS
41
um sensor de umidade, que est posicionado prximo lmina de vidro.

O porta-amostra montado sobre uma mesa tica que permite a rotao do conjunto
em torno de um eixo vertical, para que as janelas do porta-amostra sejam alinhadas com
o feixe. Esse conjunto ento montado sobre um gonimetro, que usado para variar o
ngulo de incidncia do feixe de raios X sobre a lmina contendo o lme. Para o estudo
das fases lamelares os ngulos de incidncia utilizados esto entre 0, 5 a 2, 5o (Figura 3.10).
Figura 3.10.: Porta amostra com controle de umidade instalado sobre o gonimetro na
cmara do NanoStar.
Para iniciar os experimentos necessita-se uma primeira varredura em X-Y para estabelecer os limites da janela para acesso ao feixe incidente. Em seguida uma varredura mais na
no eixo Y feita para determinar o plano da amostra, na Figura 3.11 tem-se um grco da
intensidade do feixe em funo da coordenada Y do porta amostra. O plano da amostra
escolhido, tomando o de y para qual a intensidade do feixe cai para a metade do valor
mximo.
Para a calibrao da distncia amostra-detector foi preparado um lme de behenato de
prata (BeAg) sobre uma lmina de vidro semelhante que usada como substrato para a
fase lamelar. Para encontrar o ngulo de Bragg foram feitas aquisies de 30 s variando o
ngulo de incidncia com passos de 0, 2o na inclinao do plano da amostra.
No detector so observados bandas circulares, concntricas, que correspondem aos picos de espalhamento do BeAg Figura 3.12 cujos valores de qexp so conhecidos. A integrao da imagem do detector usando o valor aproximado para a distncia detector-amostra
(Lap ) fornece valores de qmed . A distncia experimental amostra-detector (Lexp ) deter-

42
Materiais e Mtodos
Figura 3.11.: Intensidade pela posio y, para encontrar o plano da amostra.

minada usando a equao 3.6. Esse procedimento ilustrado na gura 3.13
Lexp = Lap
qesp
qmed
(3.6)

3.4 Experimentos de GISAXS
43
Figura 3.12.: (a) Difratograma obtido para o BeAg e (b) Intensidade em funo do vetor
de onda q, nos experimentos de GISAXS.
Figura 3.13.: (a) Calibrao da distncia do detector-amostra para os experimentos de

GISAXS.

CAPTULO 4
RESULTADOS
Nesse captulo ser apresentadp os resultados experimentais obtidos no estudo estrutural da fase lamelar variando a composio da membrana. Em primeiro lugar sero investigadas as propriedades estruturais de membranas compostas apenas por lecitina. Em
seguida a investigao do efeito da incorporao do co-surfactante comparando as alteraes nos parmetros estruturais e no parmetro de Caill. Tambm sero apresentados
os resultados experimentais obtidos no estudo termodinmico para duas composies de
membrana, que levam determinao do mdulo de compressibilidade. A combinao
desses resultados com o parmetro de Caill permite a determinao da constante de rigidez da membrana.
4.1. Estudo Estrutural

4.1.1. Membranas de lecitina
Apresentao dos resultados
O padro de espalhamento caractersticos de fases lamelares registrados em um detector

bidimensional (Figura 4.1) consiste de anis concntricos e igualmente espaados. Algumas imagens tpicas so mostradas na gura 4.1 para diferentes diluies. Em alguns
difratogramas a intensidade espalhada no se d de maneira uniforme, apresentando reforo em alguma direo (Figura 4.1(e)). Esse efeito pode ser explicado pela existncia de
pequenos domnios orientados que so gerados no processo de insero das amostras nos
capilares de vidro por centrifugao.

46
Resultados
(a) lip = 0, 87
(b) lip = 0, 86
(c) lip = 0, 78
(d) lip = 0, 73
(e) lip = 0, 60
(f) lip = 0, 58
Figura 4.1.: Difratogramas de fases lamelares compostas de lecitina em diferentes dlues.
realizada a integrao dos difratogramas onde os dados reduzidos so curvas unidimensionais que representam a intensidade espalhada (I(q)) em funo do vetor de onda q,
apresentadas na gura 4.2. Para todo o domnio estudado observa-se uma fase lamelar.
medida que o sistema hidratado observa-se claramente um deslocamento dos picos de
Bragg para valores de q pequenos. Utilizando a lei de Bragg pode-se obter a periodicidade
lamelar q1 = 2 , onde q1 o vetor de onda do pico de primeira ordem.
D
Considerando que a espessura da bicamada no alterada com a hidratao, com um
modelo geomtrico simples (descrito no apndice C) pode-se obter uma relao entre a
frao volumtrica de lipdio (lip ) na soluo aquosa e a periodicidade lamelar (equao
C.3).
D=
M
lip
(4.1)

4.1 Estudo Estrutural
(a)
47
(b)
Figura 4.2.: Curvas de I(q) vs. q para fases lamelares compostas de lecitina em diferentes
diluies.
De acordo com a equao C.3 podemos construir um grco de D vs. 1/lip onde
se espera uma reta cujo coeciente angular a espessura da membrana. Na Figura 4.3
so observadas duas regies distintas; na primeira regio os pontos seguem um comportamento linear, porm no seguem a lei de diluio usual (eq. C.5). Essa regio corresponde
periodicidade lamelar variando de 48 62 , porm a reta que ajusta os pontos no
passa pela origem. Isso mostra que o modelo de membranas rgidas no adequado para
descrever o comportamento observado. Na segunda regio, a partir de lip = 0, 65, a
periodicidade lamelar se mantm constante (Dmax ) em torno de 62, 8 , indicando o limite de hidratao da membrana. Isto , pode-se aumentar a quantidade de gua e mesmo
assim a periodicidade lamelar se mantm constante. Acima dessa frao volumtrica de
lipdio a fase lamelar com periodicidade mxima coexiste com excesso de gua.
Utilizou-se o mtodo de anlise de deconvoluo gaussiana descrito no Captulo 2 para

48
Resultados
Figura 4.3.: Periodicidade lamelar vs. 1/lip .

o ajuste dos dados experimentais de espalhamento. Obtm-se, ento, para cada curva o
fator de forma (P[q]) e o fator de estrutura (S[q]) que melhor ajustam a intensidade de
espalhamento. A comparao das curvas experimentais e o ajuste obtido apresentada na
gura 4.4 como as respectivas funes P[q] e S[q].
Observa-se na gura 4.4, que para altas concentraes de lipdio (lip 0, 86
0, 87) o pico de Bragg de segunda ordem est ausente ou pouco visvel reaparecendo para
concentrao de lip = 0, 83. A ausncia do pico de segunda ordem incompatvel
com o aumento da quantidade de lipdio, pois seria esperado o aumento do comprimento
de correlao da ordem esmtica. Isso pode ser explicado pelo fato de que, para essas
concentraes o mnimo local do fator de forma ocorre para um valor de q prximo
do pico de segunda ordem do fator de estrutura. O conjunto dos resultados obtidos
mostra que o fator de forma no se mantm constante com a hidratao da membrana,
evidenciando alteraes na estrutura da bicamada.
O ajuste dos dados experimentais fornece tambm o valor da periodicidade lamelar
compatvel com as calculadas pela posio do pico de Bragg como descrito acima, porm
a determinao da espessura da bicamada segue o procedimento descrito na seo 3.3.3.
O comportamento desses parmetros em funo da frao volumtrica de lipdio apresentado na gura 4.5. Nessa gura observa-se que para fraes volumtricas inferiores a

49
0, 65, a periodicidade lamelar se mantm praticamente constante.

Na gura 4.6 so apresentados os pers de contraste eletrnico para duas fraes volumtrica de lipdios deslocados de uma periodicidade lamelar. Para a amostra com frao
volumtrica de lipdio igual a 0, 87 observa-se a superposio correspondente a regio das
cabeas polares enquanto para lip = 0, 73 o contraste entre a regio polar e a camada
aquosa bem ntido. A superposio das cabeas polares acompanhada do aumento
da rea por cabea polar ( ) sendo acompanhada de uma diminuio da espessura da
bicamada C.6.
A partir de lip
0, 65 a desidratao da bicamada resulta no apenas na reduo
da periodicidade lamelar, mas tambm produz alteraes na espessura da bicamada, que
passa de 35 para 41 . Esse efeito mostra que a desidratao da fase lamelar no consiste apenas na remoo de molculas de gua da camada aquosa entre as bicamadas, e
que, a desidratao tem efeitos tambm sobre a estrutura da membrana. Uma possvel
interpretao para o arranjo das molculas de lipdio na interface representada na gura
4.7.
Para obter informaes referentes organizao das caudas hidrocarbonadas utilizou-se
a tcnica de WAXS. Para esses experimentos foram escolhidas trs composies distintas;
uma no regime muito concentrado, uma no limite de hidratao e uma intermediria.
Os experimentos foram realizados vrias temperaturas 5, 10, 22 e 35, 5o C. Os dados
obtidos so apresentados na gura 4.8 onde observa-se um pico difuso em torno de 1, 5 ,
para todas as composies e temperaturas estudas. Este pico corresponde distncia mdia
entre as caudas carbnicas, igual 4, 4 . A largura do pico no alterada evidenciando
o carter lquido na organizao das cadeias carbnicas. Sendo assim, conclui-se que em
todo o domnio de diluio estudado, e no intervalo de temperatura considerado, todas
as amostras apresentam se na fase uda (L ). Alm do pico difuso, em algumas curvas
observou-se um segundo pico difuso com menor intensidade indicado pela seta que se
refere ao espalhamento das molculas de gua.

50
Resultados
(a)
(b)
(c)
(d)
Figura 4.4.: Dados ajustados para diversas fraes volumtricas de lecitina. Os pontos representam os dados experimentais, a linha cheia representa o ajuste dos dados,
a linha pontilhada representa o fator de forma e a linha tracejada o fator de
estrutura.
51
Figura 4.5.: Parmetros estruturais (D e M ) em funo de lip
Figura 4.6.: Contraste de densidade eletrnica para duas fraes volumtricas de lipdio.

52
Resultados
Figura 4.7.: Representao esquemtica da interface cabeas polares-gua de acordo com

o perl de densidade eletrnica obtido do ajuste dos dados experimentais de
espalhamento de raios X; (a) No regime concentrado com superposio da
regio polar da bicamada e, (b) no regime diludo, com as regies polares da
bicamada separadas por uma camada aquosa.

53
(a) lip = 0, 82
(b) lip = 0, 77
(c) lip = 0, 68
Figura 4.8.: Dados de WAXS para trs fraes de lipdio diferentes, variando-se a temperatura no intervalo de 5 a 35, 5o C

54
Resultados
O outro parmetro que obtido do ajuste das curvas experimentais o parmetro

de Caill (,) que est relacionado s propriedades elsticas da membrana. O comportamento desse parmetro () representado na gura 4.9 onde pode-se observar trs regimes
distintos. O primeiro regime, onde praticamente constante, corresponde a regio da
coexistncia da fase lamelar com hidratao mxima e excesso de gua. Na segunda regio
observa-se um decrescimento exponencial do parmetro de Caill at aproximadamente
lip = 0, 8. No terceiro regime, correspondente a regio de forte connamento das bicamadas, apresenta novamente um valor constante e muito pequeno, prximo de 102 .
Nesse regime a distncia tpica de separao entre as bicamadas menor que 8 .
Figura 4.9.: Parmetro de Caill em funo de lip .

A partir do parmetro de Caill pode-se calcular a amplitude quadrtica das utuaes
da espessura da camada aquosa ( 2 ) de acordo com a equao 2.11. A gura 4.10 ilustra
o comportamento de em funo da periodicidade lamelar, que comparvel com resultados existentes na literatura para a lecitina de ovo, no intervalo de periodicidade lamelar
compreendido entre 50 e 60 [22]. Em ambos os grcos observa-se o crescimento aproximadamente linear de com a hidratao das membranas, mas a taxa de crescimento de
no constante. A amplitude de utuao da distncia de separao entre as membra-

55
nas no limite de diluio atinge o valor mximo, da ordem de 6 o que compatvel

com dados disponveis na literatura.
(a) Lecitina de soja
(b) Lecitina de ovo
Figura 4.10.: Amplitude das utuaes da espessura da camada aquosa em funo da periodicidade lamelar. Lecitina de (a) soja (b) ovo. Na gura (a) as linhas pontilhadas so apenas guia para os olhos. A gura (b) foi adaptada da ref. [22]

56
Resultados
Discusso dos resultados
Nesta seo foram apresentados os resultados obtidos na investigao das propriedades

estruturais da fase lamelar de lecitina de soja. Foi observado que, em todo domnio de
concentrao e temperatura explorados, as membranas se mantm na fase uida.
Existem na literatura vrios estudos de fases lamelares de lecitina, porm neste trabalho
a aplicao do mtodo de deconvoluo gaussiana para o ajuste dos dados experimentais de
espalhamento de raios X revelou novos aspectos sobre a estrutura e propriedades elsticas
desse sistema. Neste trabalho foi explorado um regime fortemente concentrado, trazendo
luz novos aspectos sobre a estrutura da fase lamelar que no esto relatados na literatura.
Uma vantagem do mtodo utilizado para obter a informao da variao da espessura
da bicamada, que esta extrada do perl de densidade eletrnico, no dependendo,
portanto, de modelos que se baseiam na conformao das caudas carbnicas ou grupos
polares. Essa abordagem permite uma descrio mais detalhada da estrutura da fase lamelar. Os resultados aqui apresentados mostram que a desidratao da fase lamelar no
consiste apenas na remoo de gua do espao entre as bicamadas, mas afeta tambm a
estrutura da membrana com consequncia em suas propriedades elsticas.
Foi observada uma variao da espessura da bicamada em torno de 5 compatvel com
previses de Luzzati utilizando argumentos geomtricos [29]. Na literatura, a variao da
espessura relatada para a bicamada da ordem de 2 [43], porm o modelo utilizado para
descrever a modulao da densidade eletrnica assume previamente uma congurao das
molculas de lipdios [45] [53] [54].
O parmetro de Caill de importncia fundamental para revelar mudanas no regime
de interaes entre as membranas. Os dados experimentais no regime connado cobrem
distncias de separao entre as membranas de 5 8 e nesse domnio, embora a quantidade de gua aumente, o parmetro de Caill se mantm constante, indicando que as
molculas de gua incorporadas provavelmente passam a se ligar fortemente aos grupos
polares. A dependncia exponencial do parmetro de Caill no descrita por modelos
existentes na literatura. No intervalo onde o parmetro de Caill varia, o mecanismo de
ondulao, previsto por Helfrich, provavelmente compete com as foras de hidratao
(repulsiva) e van der Waals (atrativa).
possvel que existam outros modos de utuao, como por exemplo peristltico, que
sejam relevantes, alm de interaes dipolares entre as molculas de gua com os grupos
polares das molculas anflicas [34].

57
4.1.2. Variao na composio da membrana
Nesta seo sero apresentados os resultados obtidos no estudo estrutural da fase lamelar variando a composio da membrana com a incorporao do co-surfactante Simulsol.
Para cada composio de membrana foi explorada a linha de diluio. A anlise dos dados
experimentais de raios X foi realizada seguindo a mesma metodologia descrita na seo
3.3.3. Para algumas composies da membrana, ao fazer a varredura na linha de diluio,
foi identicado um domnio bifsico, caracterizado pela presena de um pico de Bragg
extra na regio de baixo ngulo. Em alguns casos foi possvel identicar apenas um pequeno ombro superposto ao pico de primeira ordem da fase lamelar predominante, como
ilustrado na gura 4.11.
A incorporao de at 10 % em massa de Simulsol membrana no resulta em domnios
bifsicos, e para composies de membrana contendo entre 10% e 50% em massa de
Simulsol o domnio bifsico ocorre para fraes volumtricas de lipdio em torno de 0, 7.
A partir da, a incorporao de mais Simulsol desloca o domnio bifsico para frao
volumtrica de lipdio em torno 0, 8. Esse domnio bifsico corresponde coexistncia
de duas fases lamelares; uma mais diluda e uma mais concentrada. O diagrama de fase
temperatura constante apresentado na gura 4.12 onde os pontos correspondem
observaes experimentais de coexistncia de fase. A identicao dos limites precisos
desse domnio necessitam, no entanto, de uma investigao mais detalhada.
O comportamento da periodicidade lamelar em funo de 1/lip mostrado na gura
4.13, para algumas composies de membrana. Como no caso da lecitina pura, duas regies com comportamentos diferentes so observadas. A primeira segue um crescimento
linear semelhante ao comportamento observado para membranas compostas de lecitina.
Com a insero de Simulsol membrana a inclinao da reta aumenta, indicando um
aumento na espessura da bicamada. Na segunda regio que corresponde ao limite de diluio, observa-se que para pequenas quantidades de Simulsol possvel identicar uma
periodicidade mxima que, no entanto, aumenta com o aumento da quantidade de Simulsol. Aumentando-se ainda mais a quantidade de Simulsol na membrana, esse limite
no claramente identicado. Para uma mesma frao volumtrica de lipdio, diferentes
periodicidades lamelares podem ser obtidas variando-se a quantidade de Simulsol.

58
Resultados
(a) = 0, 6
(b) = 0, 7
(c) = 0, 8
Figura 4.11.: Curvas de espalhamento I(q) obtidos para fases lamelares com diferentes
composies de membrana (% em massa de Simulsol).
59
Figura 4.12.: Diagrama da fase lamelar contendo Simulsol, com a identicao de um domnio de coexistncia de duas fases lamelares, representado pelos pontos experimentais (% Simulsol em massa).
Figura 4.13.: Periodicidade lamelar vs. 1/lip variando a quantidade de Simulsol incorporado membrana. As linhas so apenas um guia para os olhos.

60
Resultados
Na gura 4.14 so mostradas curvas experimentais de espalhamento de raios X para

algumas composies de membranas ao longo da linha de diluio. As curvas ajustadas
e seus respectivos fatores de forma e estrutura (P[q] e S[q]) tambm so apresentados. O
fator de forma otimizado pelo ajuste muito susceptvel presena de uma regio de coexistncia de duas fases lamelares, o que inuencia no aspecto global da curva ajustada.
medida que o Simulsol incorporado membrana observa-se que o fator de forma
sofre alteraes. Essas mudanas so mais visveis quando se compara o perl de contraste de densidade eletrnica () para diferentes quantidades de Simulsol incorporado
membrana.
O comportamento de em funo da porcentagem em massa de Simulsol na membrana representado na gura 4.15. Para composies da membrana com baixa concentrao de Simulsol a curva na regio central da bicamada exibe ombros que representam
certa interdigitao das caudas carbnicas (gura 4.15(a)) e com o aumento da quantidade
de Simulsol na membrana esses ombros desaparecem (gura 4.15(d)) tornando a curva
mais suave. As molculas de Simulsol apresentam uma nica cauda carbnica e ocupam
um volume menor do que as molculas de lecitina, resultando no aumento do volume
disponvel para as acomodao das cadeias carbnicas.
O outro efeito da incorporao do Simulsol membrana visvel na interface da bicamada com a gua. Para membranas com baixa concentrao de Simulsol observa-se um
pico estreito, representando os grupos polares na superfcie da bicamada, porm, com o
aumento da quantidade de Simulsol esses picos tornam-se mais difusos. Esse efeito bastante visvel quando a quantidade de Simulsol na membrana de 60 % em massa (Figura
4.15(c)).
A incorporao de Simulsol membrana resulta tambm na mudana da interface com
a gua devido s cadeias etoxiladas ligadas aos cidos graxos. Na gura 4.16 observa-se a
evoluo do contraste de densidade eletrnica, para duas bicamadas espaadas de D. Para
membranas contendo 3 % de Simulsol em massa, observa-se superposio da regio dos
grupos polares no regime concentrado, semelhante ao que foi observado para membrana
composta de lecitina. medida que a quantidade de Simulsol na membrana aumenta, a
regio polar torna-se menos denida e ocorre maior superposio das interfaces.

61
(a) 3% de Simulsol
(b) 5% de Simulsol
(c) 30% de Simulsol
(d) 100% de Simulsol
Figura 4.14.: Curvas de espalhamento I(q) obtidos para fases lamelares com diferentes
composies de membrana % em massa de Simulsol. A linha cheia representa o ajuste dos dados, a linha pontilhada representa o fator de forma e a
linha tracejada o fator de estrutura.
62
Resultados
(a) 3% de Simulsol em massa na membrana
(b) 50% de Simulsol em massa na membrana
(c) 60% de Simulsol em massa na membrana
(d) 100% de Simulsol em massa na membrana
Figura 4.15.: Contraste de densidade eletrnica para diversas composies de membrana.

Nessas guras a escala vertical de cada curva a mesma, e as curvas so apenas
deslocadas para efeito de visualizao. A setas indicam o aparecimento de
ombros na interface com a gua.

63
(a) 3% de Simulsol em massa
(b) 100% de Simulsol
Figura 4.16.: Contraste de densidade eletrnica para duas bicamadas espaas de D, para
duas composies de membrana.
64
Resultados
As molculas anflicas de Simulsol apresentam uma cadeia de polmero hidrosolvel

ligada cadeia carbnica. A incorporao do Simulsol modica a interface da membrana, pois essas cadeias polimricas se estendem para a camada aquosa podendo adquirir
diferentes conformaes (Figura 4.17). Para pequenas quantidades de Simulsol a conformao mais provvel das cadeias polimricas enovelada. Devido ao efeito de volume
excludo, aumentando-se a quantidade de Simulsol na membrana, a conformao mais
provvel da cadeia polimrica passa a ser a conformao estendida e a interface membranagua adquire um aspecto semelhante um tapete. Essa mudana de conformao das cadeias polimricas na interface conhecida na literatura como uma transio "cogumelo"escova"(mushroom-brush).
O efeito da diluio tambm representado na gura (4.17) ilustrando que para membranas ricas em Simulsol, mesmo no regime diluido, pode ocorrer a superposio das
cadeias polimricas. Quando a interface adquire esse aspecto a interface torna-se difusa e
ocorre superposio das interfaces de bicamadas vizinhas.
Figura 4.17.: Representao esquemtica do arranjo das molculas anflicas nas bicamadas contendo Simulsol cujas molculas apresentam uma cadeia polimrica
ligada cauda carbnica. medida que aumenta a quantidade de Simulsol
na membrana as cadeias polimricas mudam de conformao e a interface
passa ter o aspecto de um tapete.

65
Os parmetros estruturais obtidos nos ajustes das curvas I(q) so apresentados na gura
4.18 em funo da quantidade de Simulsol incorporado membrana para trs fraes
volumtricas de lipdio; lip = 0, 6; 0, 7 e 0, 8. A frao vomultrica de lipdio 0, 6
corresponde a um domnio monofsico, e para essa concentrao de lipdio observamos
que a periodicidade lamelar aumenta com o aumento de Simulsol na membrana, enquanto
a espessura da bicamada se mantm praticamente constante em torno de 40 (Figura
4.18(a)).
Para quantidades de Simulsol na membrana entre 10% e 50% em massa, a frao volumtrica lip = 0, 7 corresponde ao domnio de coexistncia de duas fases lamelares e
para quantidades acima de 60%, correspondente a um domnio monofsico, com periodicidade lamelar constante. Os valores obtidos para a espessura da bicamada apresentam
maior utuao, associados mudanas na interface membrana-gua que se torna mais
difusa. (Figura 4.18(b)).
Para a frao volumtrica de lipdio lip = 0, 8 o domnio bifsico ocorre para quantidades de Simulsol na membrana entre 60% e 70% em massa. No domnio mais rico
em Simulsol observa-se que a periodicidade lamelar e a espessura da bicamada aumentam
com o aumento da quantidade de Simulsol (Figura 4.18(c)).

66
Resultados
(a) lip = 0, 6
(b) lip = 0, 7
(c) lip = 0, 8
Figura 4.18.: Parmetros geomtricos obtidos atravs do ajuste dos dados em funo de %
Simulsol em massa. A rea em laranja representa o domnio de coexistncia
de duas fases lamelares. Na gura (b) os pontos que esto nesse domnio
representam apenas uma das fases lamelares (mais concentrada).
67
O parmetro de Caill obtido do ajuste dos dados experimentais de espalhamento

de raios X e seu comportamento para diferentes composies de membrana mostrado
na gura 4.19. Para pequenas quantidades de Simulsol na membrana, o comportamento
de nas regies II e III so semelhantes ao que foi observado para membrana composta
apenas de lecitina (Figura 4.19(a)). No domnio diludo (I), para membranas contendo
Simulsol o parmetro de Caill apresenta um decrescimento exponencial com o aumento
da frao volumtrica de lipdio, enquanto para membrana composta apenas de lecitina
esse parmetro se mantm constante.
Para membranas contendo quantidades de Simulsol maior que 50 % em massa observase mudanas no comportamento do parmetro de Caill nos domnios II e III (Figura
4.19(b)) quando comparados ao comportamento da membrana composta apenas de lecitina. Nesses domnios o parmetro de Caill apresenta uma tendncia de crescimento, que
no observada para membranas contendo quantidades menores de Simulsol.
A mudana da exibilidade da membrana devido incorporao do co-surfactante pode
ser visualizada tambm pelo comportamento da amplitude mdia de utuao da distncia
de separao entre as bicadas, , que apresentado na gura 4.20. Para periodicidades at
cerca de 62 (linha pontilhada na gura 4.20(a)) cresce exponencialmente seguindo o
mesmo comportamento observado para membranas compostas apenas de lecitina. Com
a incorporao de Simulsol membrana abre-se um novo regime de interaes onde se
observa que de at 40 , que comparvel espessura da bicamada.

68
Resultados
(a)
(b)
Figura 4.19.: Comportamento do prmetro de Caill para diferentes quantidades de Simulsol em massa incorporados membrana de lecitina. As linhas slidas
so apenas um guia para os olhos e as linhas tracejadas separam regies com
comportamento distintos.

69
(a)
(b)
Figura 4.20.: Amplitude mdia de utuao da distncia de separao entre as bicamadas

para diferentes quantidades de Simulsol em massa. As linhas tracejadas separam regies com comportamento distintos de

70
Resultados
A incorporao do Simulsol membrana promove um aumento do domnio de diluio da fase lamelar que atinge periodicidades de at 120 . Esse valor, no entanto, no
representa uma periodicidade limite para a fase lamelar, pois no foi possvel identicar
claramente esse valor limite para membranas ricas em Simulsol. Observa-se tambm o
surgimento de um domnio bifsico para lip entre 0, 7 e 0, 8 dependendo da quantidade
de Simulsol na membrana.
As molculas de Simulsol apresentam uma nica cauda carbnica ligada a uma cadeia
polimrica, e a presena dessas molculas na membrana resulta em mudanas estruturais
e na interface bicamada-gua, ilustrada pelas curvas de perl de contraste eletronico.
As alteraes nas propriedades elsticas da fase lamelar so caracterizadas pelo comportamento do parmetro de Caill e da amplitude de utuaes das membranas. Observa-se
que o parmetro de Caill tem uma tendncia a decrescer quando a distncia de separao
entre as membranas diminui, que resulta na diminuio da amplitude de utuao das
membranas. Como o parmetro de Caill inversamente proporcional a (KB) a diminuio de corresponde a um aumento da rigidez da membrana. De fato esse comportamento observado para membranas compostas de lecitina e para membranas contendo
baixa quantidade de Simulsol (menor que 50 % em massa).
Para quantidades de Simulsol acima desse valor, entretanto, observa-se, que o parmetro
de Caill apresenta uma tendncia de crescimento com a diminuio da distncia de separao entre as bicamadas. Esse resultado pode ser interpretado como devido diminuio
do produto (KB), ou seja, o aumento da exibilidade da membrana.

Na prxima seo sero apresentados resultados de experimentos que levam a determinao do mdulo de compressibilidade de maneira independente. A combinao dos
valores de B obtidos combinados com os valores do parmetro de Caill permitem a

determinao da constante de rigidez da membrana.

71
4.1.3. Estudo termodinmico
Para o estudo termodinmico de membranas lipdicas utilizou-se a tcnica de GISAXS

com o controle da umidade relativa (RH) do meio em temperatura ambiante aproximadamente 22o . O procedimento de preparao, bem como de calibrao dos experimentos
foram descritos no Captulo 3. O processo de hidratao da fase lamelar foi investigado
pela tcnica de GISAXS apenas para membranas compostas de lecitina e membranas contendo 30% de Simulsol em massa.
A gura 4.21 apresenta os difratogramas obtidos variando a umidade relativa (RH),
onde observam-se agora pontos de Bragg, ao invs de anis com espalhamento isotrpico.
A distncia entre os pontos de Bragg so inuenciadas pela umidade relativa do meio,
sendo que, medida que RH aumenta, a distncia entre os picos diminui, como ilustrado
pelas curvas I(q) para o lme binrio de lecitina e gua (gura 4.22). Observa-se que,
aumentando a umidade relativa, o pico de primeira ordem se desloca para valores de q
menores, indicando aumento da periodicidade lamelar.
Uma das diculdades desse experimento reside na calibrao do sensor de umidade.
Quando a umidade relativa se aproxima do ponto de condensao da gua pode ocorrer
a formao de gotas de gua sobre o sensor, e a partir da a leitura da umidade passa a ser
superior a 100 %, embora a periodicidade medida para fase lamelar no tenha atingido o
limite de hidratao que foi obtido para as amostras em capilares (SAXS). Verica-se que
a periodicidade ainda aumenta com o aumento do uxo de vapor de gua (Figura 4.23).
No entanto, possvel utilizar a periodicidade lamelar determinada pelo experimento
de GISAXS para calibrar o sensor de umidade, combinando resultados de um experimento
independente, onde a fase lamelar est submetida presso osmtica controlada [55]. Na
gura 4.24 observa-se que a presso descrese com o aumento da periodicidade lamelar para
as duas composies de membrana estudadas. Os dados experimentais foram ajustados
por uma funo exponencial P (D) = eA+BD , onde A e B so constantes arbitrrias
determinadas a partir do ajuste.
A variao no potencial qumico da gua a energia necessria para remover 1
mol de gua do espao entre as membranas e transferi-la para o vapor saturado uma
dada presso (P) e temperatura (T), ou seja igual variao da energia livre de Gibbs. A
variao do potencial qumico pode ser expressa como
= RT ln
P
Po
(4.2)

72
Resultados
(a) RH= 91, 4%
(b) RH= 93, 4%
(c) RH= 97, 1%
(d) RH= 99, 2%
(e) RH= 99, 8%
(f) RH= 0, 999
Figura 4.21.: Difratogramas de padres de fases lamelares para diferentes hidrataes utilizando a tcnica de GISAXS.
onde P a presso na gua, P0 a presso de saturao do vapor, que temperatura ambiente (22o ) igual a 2, 33 Pa e R a constante universal dos gases, igual 8, 21 J/mol.
A umidade relativa do meio formado pela mistura liqudo+vapor saturado expressa por:
RH = 100
P
P0
(4.3)
Portanto a variao do potencial qumico pode ser expressa em termos de RH;

= RT ln
RH
100
(4.4)

73
Figura 4.22.: I(q) vs. q variando RH.
Dividindo pelo volume molar parcial da gua (vw );
vw
energia mol
F orca
.
=
,
mol
vol
Area
(4.5)
tem-se a presso diferencial aplicada bicamada, quando uma molcula de gua removida. Assim tem-se uma expresso que relaciona a presso exercida sobre a fase lamelar e
a umidade relativa;
P =
RT
vw
ln
RH
100
(4.6)
Portanto, para uma dada periodicidade lamelar, utilizando a equao ajustada aos dados
experimentais com presso osmtica controlada, possvel determinar a presso correspondente a esse estado de equilbrio (P[D]). Esse procedimento aplicado apenas para
o domnio de periodicidades lamelares comuns aos dois experimentos (presso osmtica
controlada e GISAXS). De posse do valor de P[D] obtm-se o valor correspondente da
umidade relativa utilizando a equao 4.6; RHcalc (D).

74
Resultados
Figura 4.23.: Periodicidades lamelares obtidas por GISAXS no experimento com controle
de umidade; para duas composies da membrana. As echas na gura,
indicam o processo de hidratao ou desidratao.
A calibrao do sensor de umidade feita representando em um grco os valores de
RHcalc (D) em funo dos valores de RHexp (D), como mostrado na gura 4.25. Os dados experimentais so ajustados com uma funo que melhor descreva o comportamento
observado, fornecendo uma funo RH = RH (RHexp ), que permite calcular os
valores de umidade relativa para todo o domnio de periodicidade lamelar varrido no
experimento de GISAXS.

75
Figura 4.24.: ln(P), onde P a presso osmtica em funo da periodicidade lamelar (Cedidos por RUBIM. R. L.).
Figura 4.25.: Calibrao do sensor de umidade com RHcal dado pela equao 4.6

76
Resultados
(a)
(b)
Figura 4.26.: (a) Comportamento da periodicidade lamelar determinada por experimentos

de GISAXS aps a calibrao do sensor de umidade (b) Comportamento
esperado para D em funo do potencial qumico da gua de acordo com
a equao B.14.

77
Observa-se que, grandes variaes da periodicidade lamelar ocorrem somente para umidades relativas altas acima de 95% .
Para a membrana contendo 30% de Simulsol observa-se que, tanto no processo de hidratao, como no de desidratao da membrana, h um salto no intervalo de periocidades
lamelares entre 50 e 60 , que corresponde ao domnio de coexistncia de fase observado
nos experimentos com amostras em capilares.
Esses resultados podem ser comparados com o comportamento esperado para o potencial qumico da gua (w ) na fase lamelar. A expresso abaixo foi obtida a partir de um
modelo termodinmico para fases lamelares apresentado no apndice B [56]
s =
89
w
(1 + w )9
C23
w
(1 w )9
(4.7)
C uma constante que est relacionada razo entre o potencial atrativo de van der Waals
(VW ) e o potencial repulsivo de curto alcance (VH ).
Os valores de RH*(D) so, ento, utilizados para a determinao da presso correspondente, que ser denominada P*, para distingui-la da presso osmtica obtida por
outro mtodo experimental. Na gura 4.27 apresentado o comportamento de lnP*
em funo da periodicidade lamelar para as duas composies estudadas Nessa gura
observa-se que a presso decresce exponencialmente com a hidratao da fase lamelar;
P (D) = P0 exp[D/], com igual 2 . Esse comportamento compatvel com
resultados encontrados na literatura para fases lamelares de alguns lipdios, ilustrando o
predomnio de uma interao repulsiva de curto alcance, e que tem sido denominada de
fora de hidratao [54]. Na mesma gura so apresentados os dados obtidos no experimento com controle da presso osmtica com uma soluo de polmero [55] para ns de
comparao.
A incorporao do Simulsol membrana modica o comportamento de P* (gura
4.27(b)), introduzindo dois regimes de interaes entre as membranas, no entanto, ainda
possvel descrever de maneira aproximada o comportamento dos dados experimentais
por uma funo com decaimento exponencial. Para periodicidades lamelares entre 50 e
60 , existe um domnio de coexistncia de duas fases lamelares; uma mais diluda e uma
mais concentrada. Nessa passagem pelo domnio bifsico, o potencial qumico da gua
igual para a fase lamelar mais concentrada e para a fase lamelar mais diluda, e isso pode
ser observado na gura 4.27(b) para lnP 14.
Os resultados experimentais obtidos para a membrana contendo Simulsol podem ser
comparados previso de um modelo terico, que considera um sistema lamelar onde a

78
Resultados
interao predominante a interao repulsiva devido s utuaes, a partir da proposio

de Helfrich. Com esse modelo possvel obter uma funo analtica para P(D), que segue
uma lei de potncia dada por [57]:
PD =
3 2 (kB T )2
64
1
D m
(4.8)
Na gura 4.28 so traadas algumas curvas utilizando a expresso acima, assumindo alguns valores para a constante de rigidez da membrana. Dentro da preciso das medidas,
os resultados experimentais poderiam ser descritos por duas curvas; uma para o regime
concentrado, com = 1, 5kB T , e outra curva no regime diludo, com = 0, 1kB T .
No entanto, esse modelo no ser utilizado para a determinao do mdulo de compressibilidade por duas razes; a primeira que o modelo de Helfrich no capaz de descrever
o comportamento do parmetro de Caill observado, e a segunda razo, que os pers de
densidade eletrnica obtidos mostram que a estrutura da bicamada sofre alteraes com a
hidratao. Portanto, razovel supor que possa tambm possa variar com a hidratao
da membrana.

79
(a) 0% de Simulsol
(b) 30 % de Simulsol em massa
Figura 4.27.: lnP* em funo da periodicidade lamelar (a) para as membranas de lecitina e
(b) membrana contendo 30% de Simulsol em massa

80
Resultados
Figura 4.28.: Comparao entre os valores experimentais e valores calculados pela expresso 4.8.

81
O mdulo de compressibilidade da membrana determinado pela expresso 2.23 (B =

P
D D ). Para o clculo de P/D, os dados experimentais foram ajustados por funes
exponenciais, para as duas composies de membrana estudadas. Na gura 4.29 apresentado o comportamento de lnB em funo de D e, novamente, observa-se que para a
membrana de lecitina os pontos experimentais esto sobre uma nica reta.
O comportamento da constante de rigidez representado na gura 4.30(b) em funo
da periodicidade lamelar, para as duas composies de membrana estudadas, e para ambas,
observa-se, novamente, a existncia de dois regimes diferentes. No primeiro regime, com
periodicidade lamelar inferior a 50 , a constante de rigidez cresce exponencialmente
com o aumento da hidratao da membrana, porm, a membrana contendo Simulsol
mais rgida, atingindo valores de aproximadamente 102 kB T . A superposio das cadeias
polimricas das molculas de Simulsol quando as membranas esto muito prximas, poderia explicar a maior rigidez dessa membrana, em relao membrana contendo lecitina.
Os valores de so calculados utilizando os valores de B/D obtidos nos experimentos

termodinmicos combinados com os com valores de , obtidos pelo ajuste das curvas de
SAXS. Na gura 4.30(a) so reapresentados os valores de para a membrana de lecitina
e para membrana com 30% de Simulsol em funo da periodicidade lamelar. As linhas
slidas representam ajustes de funes exponenciais aos pontos experimentais e as linhas
tracejadas delimitam domnio de coexistncia de fases para membrana contendo Simulsol.
Para uma dada periodicidade (D) determinada no experimento de GISAXS obtm-se o
valor de na gura 4.30(a) e esse valor utilizado na equao 2.9 para o clculo de .
=
K
D
B q 0 2 kB T
D
(4.9)
Para a membrana de lecitina, os valores de obtidos situam-se no intervalo entre 0, 2

a 20 kB T , que so compatveis com resultados existentes na literatura, para a lecitina e
para outros lipdios ( Tabela 4.1). Parece paradoxal que a constante de rigidez aumente
com o aumento da hidratao, pois a incorporao de molculas de gua no espao entre
as bicamadas contribui para o aumento da distncia de separao. Nesse regime de diluio, porm, como existe uma superposio das regies polares de bicamadas vizinhas,
possvel que as molculas de gua incorporadas venham a se ligar fortemente s cabeas
polares, ou no caso do Simulsol, s cadeias carbnicas que so hidroflicas e assim no
teriam mobilidade, como no estado lquido em bulk".
A interao entre as regies polares das bicamadas vizinhas deve ter uma contribuio
importante para pequenas distncias de separao, pois a passagem para a situao em que

82
Resultados
(a) 0% de Simulsol
(b) 30 % de Simulsol
Figura 4.29.: Mdulo de compressibilidade para as duas composies de membrana

estudadas.
no ocorre mais a superposio das regies polares corresponde mudanas no comportamento do parmetro de Caill e uma descontinuidade no comportamento de .

83
(a)
(b)
Figura 4.30.: (a) Comportamento do parmetro de Caill em funo da periodicidade lamelar para duas composies de membranas. No quadro interno destaque
para os valores obtidos para a membrana de lecitina. (b) Comportamento da
constante de rigidez.

84
Resultados
(kB T )
15 20
8
20
Tcnica
Referncia
SAXS
[23]
SAXS/MLV
[22]
SAXS
[22]
Lipdio
DOPE
DOPE
Lecitina de ovo
Tabela 4.1.: Valores de constante de rigidez para membranas disponveis na literatura.

A constante de rigidez da membrana contendo Simulsol, com periodicidade lamelar
entre 60 e 80 aproximadamente constante 0, 5 kB T . Nesse regime, embora possa
ocorrer superposio das cadeias polimricas na camada aquosa, a presena das molculas
de Simulsol na membrana confere maior exibilidade membrana, pois essas molculas
ocupam um volume menor comparado s molculas de lecitina. Esse valor da mesma ordem de grandeza da constante de rigidez de membranas de DMPC e pentanol [49], e, para
esse sistema lamelar o comportamento do parmetro de Caill segue o comportamento
previsto pelo modelo de Helfrich, (gura 2.12), indicando a predominncia de interaes
estricas devido s utuaes da membrana. Para esse regime, a quantidade [1 m /D]2 ,
que aparece na gura 2.12 corresponde a valores entre 0, 12 e 0, 25 da membrana contendo 30% de Simulsol em massa, portanto, um intervalo ainda muito pequeno para
conrmar a previso do modelo de Helfrich. Experimentos de SAXS, explorando o regime diludo at o limite de diluio, se ele existe, podem ser esclarecedores.

85
Os experimentos realizados com lmes orientados em um ambiente com umidade controlada permitiram o estudo do processo cintico de hidratao e desidratao da fase
lamelar para duas composies de membrana; apenas de lecitina e contendo 30% de Simulsol em massa. A diculdade tcnica de medir umidade relativa muito alta foi contornada, utilizando resultados de um experimento independente, com controle da presso
osmtica, que permitiram a calibrao do sensor de umidade. Com esses experimentos
tem-se acesso experimental variao do potencial qumico permitindo a investigao de
propriedades termodinmicas do sistema lamelar. A combinao do experimento termodinmico com estudos estruturais da fase lamelar permite a determinao das constantes
elsticas que caracterizam a exibilidade das membranas; o mdulo de compressibilidade
e a constante de rigidez.
O aumento do perodo lamelar com o aumento da umidade relativa mostra um comportamento qualitativo compatvel com o comportamento esperado para o potencial qumico
da gua em uma fase lamelar e revela que, de fato, preciso que a umidade relativa seja bastante alta, para que as variaes no perodo lamelar sejam observadas. A coexistncia das
duas fases lamelares, identicado para a membrana contendo Simulsol nos experimentos
de SAXS, observada claramente no experimento de GISAXS, pelo salto da periodicidade
lamelar para um dado valor da presso osmtica (ou potencial qumico).
interessante notar que, no regime concentrado (D < 50 ), o mdulo de compressibilidade da fase lamelar contendo Simulsol menor do que o da fase lamelar de lecitina,
porm a constante de rigidez da membrana maior. A constante de rigidez da membrana
est relacionada s utuaes de ondulaes e o aumento observado pode ser atribudo
superposio das cadeias polimricas na camada aquosa entre as bicamadas, como mostrado na gura 4.20. Por outro lado, o mdulo de compressibilidade est relacionado s
utuaes na distncia de separao entre as membranas (g. 2.7), e a diminuio no valor
de B com a incorporao de Simulsol signica que a camada aquosa contendo algumas

cadeias de polmero mais uida do que a camada aquosa entre as molculas de fosfolipdios. O aumento de uidez da camada aquosa poderia ser atribudo, ento, presena das
cadeias polimricas, que inibem a organizao das molculas de gua.
A constante de rigidez da membrana de lecitina, no regime diludo, reduzida de maneira signicativa com a incorporao de Simulsol e esse efeito pode ser interpretado pela
reduo do volume ocupado pelas molculas de Simulsol, que possuem uma cadeia carbnica. difcil, no entanto, explicar que a constante de rigidez da membrana de lecitina
continue a aumentar, com o aumento da distncia de separao entre as membranas.

86
Resultados
At o momento, os modelos tericos que descrevem as interaes entre as membranas

no so adequados para descrever os resultados obtidos. Embora a interao eletrosttica
devido presena da dupla camada de ons e contra-ons na interface da bicamada no
esteja presente no sistema lamelar estudado, interaes dipolares entre os grupos fosfatos presentes na cabea polar das molculas anflicas entre esses grupos e as molculas
de gua, sobretudo no regime connado, para o qual a distncia de separao entre as
bicamadas da ordem de 5 e 8 .

CAPTULO 5
CONCLUSES E PERSPECTIVAS
5.1. Concluses
Neste trabalho foi realizado um estudo das propriedades estruturais e elsticas de uma
fase lamelar de lipdios. Os aspectos inovadores deste trabalho residem primeiro, na abordagem experimental que consiste na modicao sistemtica da composio da membrana
para investigar o papel dos mecanismos entrpicos (volume excludo) para a estabilizao
da fase lamelar. O segundo aspecto est na aplicao de um mtodo global para a anlise dos dados experimentais de espalhamento de raios X que permitem a determinao
do perl de densidade eletrnica e do fator de estrutura. A partir dessa anlise possvel descrever mudanas importantes que ocorrem na interface entre a bicamada-gua que
dependem da composio da membrana. Finalmente, o terceiro aspecto consiste no desenvolvimento de uma montagem para experimentos de espalhamento de raios X com
controle de umidade, adaptada ao NanoStar. Esses experimentos permitiram o estudo
cintico do processo de hidratao-desidratao de maneira contnua explorando o comportamento termodinmico da fase lamelar.
Os experimentos de espalhamento de raios X baixo ngulo (SAXS) com anlise global
dos dados permitem a determinao do parmetro de Caill, que caracteriza as utuaes
das membranas, assim como parmetros estruturais. A incorporao de Simulsol membrana aumenta o domnio de diluio e periodicidades da ordem de 120 so observadas.
Para algumas composies de membrana, mais ricas em Simulsol, no est claro se existe
uma periodicidade limite. Esse um aspecto que ser investigado no futuro. Outro efeito
do co-surfactante na membrana so as mudanas estruturais na bicamada e na interface

88
Concluses e perspectivas
que se torna mais difusa.

O comportamento do parmetro de Caill revela que mudanas na composio da
membrana abrem um novo regime de interao entre as membranas, que no era acessvel para a fase lamelar de lecitina. Os modelos disponveis na literatura que descrevem
o comportamento do parmetro de Caill so adequados apenas para duas situaes limites; quando a interao predominante entre as membranas puramente de natureza
eletrosttica ou puramente de natureza entrpica devido s utuaes. Nenhum desses
modelos adequado para descrever os resultados obtidos neste trabalho, provavelmente
porque para as fases lamelares estudadas h uma combinao dessas interaes. A interao eletrosttica no caso da membrana de lecitina seria possivelmente devido interaes
dipolares entre os grupos fosfato em interfaces opostas ou ainda entre molculas de gua
organizadas em torno desses grupos.
Combinando os resultados dos experimentos de SAXS com os experimentos umidade
relativa controlada foi possvel determinar as constantes que caracterizam as propriedades
elsticas da membrana; o mdulo de compressibilidade e a constante de rigidez. A ordem
de grandeza dos valores obtidos para a membrana de lecitina compatvel com valores
disponveis na literatura, porm mostram que rigidez da membrana varia com a hidratao.
A insero de molculas de Simulsol na membrana, no regime connado, resulta no
aumento da constante de rigidez, que pode ser explicado pela superposio das cadeias
polimricas das molculas de Simulsol, porm no regime diludo, contribuem para o aumento da exibilidade da membrana, reduzindo drasticamente a constante de rigidez.

5.2 Perspectivas
89
5.2. Perspectivas
Esto programados novos experimentos para determinar com maior preciso as fronteiras do domnio bifsico e a existncia de um limite de diluio para as membranas
mais ricas em Simulsol. Para descrever de maneira mais precisa o efeito da incorporao do Simulsol membrana devem ser realizados experimentos de GISAXS para outras
composies de membranas. Esses resultados sero utilizados para a redao de artigos
cientcos.
Os resultados obtidos neste trabalho fornecem subsdios para preparao de complexos
de lipdios no catinicos com DNA. A composio da membrana desempenha um papel
fundamental no controle das interaes de origem entrpicas e na estabilizao da fase lamelar. possvel, para uma dada periodicidade lamelar, preparar membranas com propriedades elsticas distintas a partir da escolha da sua composio. Por outro lado, tambm
foi mostrado que possvel preparar fases lamelares com espessuras de camada aquosa
de cerca de 100 , abrindo-se a possibilidade de encapsulao de fragmentos de DNA
mais longos. Partindo primeiramente de tamanhos muito pequenos (menores de 150pb),
que se comportam como esferas rgidas podemos passar para fragmentos de 150pb que se
comportam como bastes rgidos, e aumentando ainda mais o nmero de pares de base,
os fragmentos devem se comportar como cadeia exvel.

APNDICE A
A.1. Adaptaes mecnicas para a instalao da

tcnica de GISAXS
A primeira adaptao feita foi por meio de uma placa que colocada entre a base do
porta amostra xo na cmara responsvel pelo movimento do porta amostra nas coordenadas de X e Y e o gonimetro. As furaes e a xao na base do motor so mostradas na
gura 2, com 2 parafusos M4 nas posies indicadas pelas setas. O gonimetro xado
Figura A.1.: Adaptador que encaixa na base do porta amostra e no gonimetro

ento na placa por meio de 2 parafusos mostrados com setas na gura A.2. Na gura
A.2(b) pode-se ver o gonimetro j montado sobre a base.

92
(a)
(b)
Figura A.2.: (a) Vista de cima e (b) lateral da base de adaptao entre o gonimetro e a
base de adaptao da base do porta amostra.
Na parte superior do gonimetro foi instalada uma mesa tica que permite um pequeno
movimento na direo perpendicular ao movimento do gonimetro (Figura A.2(b) ). Essa
mesa possui ajustes nos para a rotao da amostra e ajuste do ngulo azimutal (Figura
A.3(a)e A.3(b)).
A regulagem do ngulo de Bragg (2) feita por meio de rotaes em torno do eixo z,
que so feitas no gonimetro. As rotaes em torno dos eixos x e y permitem, regulagens
dos ngulos e , utilizando os parafusos da mesa tica.

A.1 Adaptaes mecnicas para a instalao da tcnica de GISAXS
93
(a)
(b)
(c)
Figura A.3.: (a) Esquema da montagem experimental e descreve os possveis movimentos

em relao a amostra. (c) vista Lateral e (d) superior da mesa tica instalada
em cima do gonimetro.

APNDICE B
B.1. Potencial qumico da gua na fase lamelar

Para descrever o comportamento termodinmico de uma fase lamelar parte-se da expresso do potencial de interao entre as bicamadas, que tem a contribuio de um potencial atrativo (Va ) de van der Waals, de longo alcance, e um potencial repulsivo de curto
alcance (VR ). Para expressar o potencial repulsivo, utilizaremos uma expresso que assume uma forma analtica aproximada, para simplicao do modelo. Assim a energia de
interao entre as membranas, por unidade de superfcie pode ser escrita como:
Vint (D) =
VR
(D M
)8
Va
(D M )2
(B.1)
onde VA e VR so constantes que podem ser estimadas a partir de dados na literatura.

A energia livre de Helmholtz ser escrita em funo da frao volumtrica de lipdio
(lip ), usando a relao D = M /lip ;
f () =
VR
M (m (lip M )8
f () =
lip VR
8
lip
8
M M (1 lip )8
Va
(m (lip M )2
Va
2
lip
2
M (1 lip )2
(B.2)

96
f () =
3
lip
f () =
9
M
VR
6
lip
Vatr
(1 lip )2
VR 3
lip
6
lip
9
M
(1 lip )8
f () = F 3
lip
6
lip
6
lip
(1 lip )
Vatr 6
lip
VR
(1 lip )2
(1 lip )2
C
(1 lip )2
(B.3)
Na equao acima a F e C so constantes dadas por: F = VR / 9 , C = VA . 6 /VR para

a regio de limite de diluio. O potencial qumico do solvente pode ento ser calculado;
s =
F
Nw
(B.4)
onde Ns refere-se ao nmero de molculas do solvente, e F = V f (lip ) e V o volume

total da fase lamelar. Por sua vez, o volume da fase lamelar pode ser expresso em termos
do volume molecular do solvente (vw ) do volume molecular do soluto, que nesse caso a
molcula de lipdio (vlip );
(B.5)
V = (Nw vw + Nlip vlip ).

Portanto, a energia livre da fase lamelar pode ser expressa como:
(B.6)
F = (Nw vw + Nlip vlip )f (lip ),

e a frao volumtrica de lipdios ser calculada por:
Nlip vlip
Nw vw + Nlip vlip
(B.7)
Derivando a expresso (B.6) em relao a Nw , obtm-se o potencial qumico do solvente, ou seja da gua;
s =
F
Nw
= vw f () + (Nw vw + Nlip vlip )
Nw vw
(Nw vw + Nlip vlip )2
(B.8)

B.1 Potencial qumico da gua na fase lamelar
97
s = vw f (lip ) lip
(B.9)
lip
Derivando a expresso B.3 com relao a , tem-se:
f
lip
98
lip
(1 lip )8
89
lip
(1 lip )9
3C2
lip
(1 )2
lip
3C3
lip
(1 lip )3
(B.10)
rearranjando os termos:
f
98 (1 lip ) + 89
lip
lip
(1 lip
f
lip
)9
C
(1 lip )3
99 (1 lip ) + 10
lip
lip
(1 lip
)3
[32 (1 lip ) + 23 ] (B.11)

lip
lip
C
)3
[33 4 ]
lip
lip
(1 lip
9
lip (1 lip )
C3 (1 lip )
lip
f (lip ) =
9
(1 lip )
(1 lip )3
(B.12)
(B.13)
Substituindo f(lip ) e f /lip na expresso B.9, obtm-se nalmente o potencial qumico da gua na fase lamelar, dado por:
s =
89
lip
(1 + lip )9
C23
lip
(1 lip )9
(B.14)
Onde a constante C foi estimada e aproximadamente igual a 1, 92.

APNDICE C
C.1. Modelo de bicamada rgida

A fase lamelar pode ser descrita como um empilhamento regular de bicamadas de espessura M separadas por uma camada aquosa de espessura w . A periodicidade lamelar
determinada pelos experimentos de espalhamento de raios X, dado por D = 2/q1 ,
onde q1 , o vetor de onda do pico de primeira ordem.
Considerando um certo volume ocupado pela fase lamelar, em uma caixa de comprimento H, e rea transversal A (gura C.1), o nmero de bicamadas (nb ) na caixa, igual
a nb = H/D.
O volume da caixa pode ser expresso em termos do volume molar do solvente e do
soluto (lipdio) como:
Figura C.1.: Desenho esquemtico representando a clula unitria de uma fase lamelar.
.

100
V = Nw .vw + Nl vl = H.A.
(C.1)
Onde os ndices s e l referem-se ao solvente (gua) e lipdio respectivamente, e N o

nmero de molculas de cada espcie.
A razo entre o volume total ocupado pelas molculas de lipdios e o volume da caixa,
a frao volumtrica de lipdios;
w =
Nw vw
HA
nb M A
HA
(C.2)
ou ainda,
D = M /lip
(C.3)
A equao acima, chamada de lei de diluio. Em um grco de D em funo de 1/lip ,

os pontos experimentais devem estar sobre uma reta, cujo coeciente angular a espessura
da membrana.
Outro parmetro importante para caracterizar o empacotamento das molculas anflicas rea por cabea polar na superfcie da bicamada, . Para uma dada rea transversal
A, da bicamada, pode-se escrever que:
A=
Nl
2nb
(C.4)
Tomando H=D, na eq. C.2, e substituindo o valor de A, tem-se:
2vlip
D
(C.5)
Combinando a expresso acima com a lei de diluio, pode-se ainda escrever que:
m =
2vlip
(C.6)

C.1 Modelo de bicamada rgida
101
Esse modelo geomtrico foi utilizado como argumento para prever, que o aumento
na espessura da bicamada est relacionado diminuio da rea ocupada por surfactante,
considerando o volume molecular constante.

APNDICE D
D.1. Artigo publicado no Journal of Applied

Crystallography (J. Appl. Cryst. (2012). 45,
12781286)
Gaussian Deconvolution: A powerful method for form-free modeling scattering
data from mono and multilayered planar systems using constrained least-square tting
Cristiano L. P. Oliveira, Barbara B. Gerbelli, Emerson R. T. Silva, Frdric Nallet, Laurence
Navailles, Elisabeth A. Oliveira and Jan Skov Pedersen
Abstract
A new method for analysis of scattering data from lamellar bilayer systems is presented.
The method employs a form-free description of the cross-section structure of bilayer and
the t is performed directly to the scattering data introducing also a structure factor when
required. The cross-section structure (elec-tron density prole in the case of x-ray scattering) is described by a set of Gaussian functions and it is termed Gaussian deconvolution.
The coefcients of the Gaussians are optimized using a constrained least-squares routine
that induces smoothness on the electron density prole. The optimization is coupled
with the point-of-inection method (Glatter, 1977) for determining the optimal weight
of the smoothness. With the new approach, it is possible to optimize simultaneously
the form factor, structure factor and several other parameters in the model. The applicability of this method is demonstrated by using it in a study of a multilamellar system
composed of lecithin bilayers, where the form factor and structure factor are obtained

104
simultaneously and the obtained results provided new insight into this very well-known
system.
Introduction
Lamellar systems of lipid bilayers have been widely used as model system for biological
membranes. They allow the study of, for example, phase transitions, and interactions
between membranes and with biological macromolecules. The organization of the lipid
molecules on the microscopic level is closely related to macroscopic properties of membrane, and determines the key properties such as elasticity, permeability to small molecules and interactions with proteins or peptides. X-ray scattering techniques are particularly
suited for obtaining information of the microscopic organization of the molecules. Since
the pioneering work of Luzzati (Luzzati et Tardieu, 1974), many researchers have developed new methods to analyze experimental data allowing determination of relevant
parameters characterizing the lamellar structure.
Several methods for analyzing X-ray scattering proles for lamellar systems have been
proposed. Seminal works using Gaussians functions to describe the electron density prole were described by Pape and Kreutz (Pape et Kreutz, 1978) and by Nagle and Wiener
(Nagle et Wiener, 1989), however, these me-thods are very sensitive to the rst estimate
of the parameters describing the prole, i.e., they require good a priori information about
the signs and the positions of the Gaussians. The situation is even more complicated when
multilayered lamellar systems have to be described and several strategies for modelling the
form factor and structure factor effects have been proposed (Nallet et al., 1993; Nagle et
al., 1996; Petrache et al., 1998). More recently, an approach was presented by Pabst
(Pabst et al., 2000), where Gaussian functions were again used to describe the lamellar
cross-section prole, and as the coupling between the form factor and structure factor was
taken into account, the full scattering intensity prole could be described by this method.
However, the approach was restricted to the use of only two Gaussian functions to avoid
model instabilities as previously mentioned by other authors (Pape et Kreutz, 1978).
An approach to overcome instabilities in the modeling of electron density proles was
introduced in the so-called Square-Root Deconvolution Method, originally proposed by
Glatter (Glatter, 1981). It enables retrieving of the electronic density prole for a given
geometry (planar, cylindrical or spherical) by describing the electron density prole by a
set of basis functions (step functions) and using these for modeling the pair distance distribution function. The method was originally applied to scattering data from uncorrelated
objects (i.e., without structure factor effects) but later was also adapted for including possible high order arrangements (Fritz et Glatter, 2006). However, one of the limitations

D.1 Artigo publicado no Journal of Applied Crystallography (J. Appl. Cryst. (2012).
45, 12781286)
105
of this approach is the need of making the intermediate step of rst determining the pair
distance distribution function which might preclude the optimization of other structural
features that might also be present, such as, for example, free bilayers (Pabst et al., 2000).
On the other hand, the main advantage of this procedure is the possibility of retrieving
the electron density prole on a free form without any previous assumptions. The number of degrees of freedom in the expression for the electron density proles is usually large
and this means that the solution has to be stabilized. This stabilization can be done by
the addition of a smoothness constraint to the usual chi-squared as a penalty function with
a certain weight relative to chi-squared. The weight of the penalty function is determined by the use of point-of-inection method during the minimization procedure (Glatter,
1977). A similar two-step analysis method for analysis of specular reectivity data was
introduced by Pedersen (Pedersen, 1992). A new and more sophisticated approach is to
model the lipid membrane based on scattering density prole (SDP) methods (Heberle et
al., 2012). This approach permits the inclusion of molecular information and the use of
molecular dynamics simulations as inputs for the tting of scattering data. Although this
method can provide more advanced results, it requires several a priori information about
the system, its composition and ne details about the lipid molecules. As will be described below, the Gaussian deconvolution approach, on the other hand, does not require
any a priori information for the tting procedure and the obtained prole can be used as
input for other more sophisticated analysis.
In the present work a new method is presented for modelling Small-Angle X-ray Scattering experimental data for systems containing both unilamellar and multilamellar planar
membranes. As will be discussed in next section, a model approach similar to the one used
by Glatter in his deconvolution method (Glatter, 1981) can be used to stabilize the modeling of the electron density prole by a set of Gaussian functions. However, the main
advantage of this approach is the fact that the scattering intensity is adjusted and not the
pair distance distribution function. This is similar to the method introduced by Pedersen
and Hamley (Pedersen et Hamley, 1994a, b) for analysis of specular reectivity data. By
the new method it is possible to retrieve a smooth electron density prole for which the
calculated intensity gives the best t of the experimental data. The approach allows, by
the use of the least-squares procedure, the simultaneous determination of the amplitudes of the Gaussian functions that describe the electron density prole and several other
parameters as, for example, the ones describing structure factor effects, backgrounds, etc.
The new method is applied for determining the swelling properties of a lamellar phase
composed of lecithin bilayers, providing a good t quality for the full set of experimental

106
scattering curves for a series of increasing degree of membrane hydration. New insight
emerges from the analysis of the experimental data on the structure of the bilayer as extracted from the electronic contrast prole. It is shown that the Caill parameter, which
characterizes the exibility of lipid membranes together with inter-membrane interactions, passes through two regimes. This provides information on the role of hydration and
uctuation forces for stabilizing the lamellar structure.
Theoretical Model description The scattering from a system of scattering objects can
be described by the following expression:
(D.1)
I(q) = c < P (q)3D S(q) >
where c is related to the concentration of particles in the system, P (q)3D = |F (q)|2 is

the form factor of the three dimensional objects and carries information about particles
shapes and contrasts and S(q) is the system structure factor, which carries information
about possible interparticle interactions and ordering. The parameter q is the modulus
of the scattering vector and it is given by q = 4sin()/, where 2 is the scattering
angle and is the wavelength of the radiation. The brackets <> indicate that in the
general case these two contributions have to be averaged together in the calculation. For
locally highly anisotropic systems, like planar systems or large vesicles for example, where
the transverse dimensions are much larger than the perpendicular dimension, the form
factor can be described by a product of a form factor, for the perpendicular direction (1D
function), and a factor 1/q 2 related to the transverse dimensions. With this, equation ??
can be rewritten as (Glatter and Kratky, 1982),
I(q) =
c
q2
(D.2)
< P (q)S(q) >
An often used approach is to use the decoupling approximation and treat the form
factor and structure factor separately (Kotlarchyk and Chen, 1983). For a multilayered
lamellar system, with periodicity d , the structure factor is well described by the Modied
Caill Theory (MCT) (Zhang et al., 1994);
N 1
S0 (q) = 1 + 2
k=1
n
N
k cos(kqD)exp (
D
2
)2 q 2 (n)( 2 )q (D.3)
.
The mean number of coherent scattering bilayers in the stack is denoted as N, and

45, 12781286)
107
is Eulers constant. The Caill parameter is related to both the bending modulus K of
lipid bilayers and the bulk modulus B for compression (Zhang et al., 1994; Caill, 1972);
q0 2 kB T
,
8 K B
(D.4)
In this expression k is Boltzmanns constant and T is the absolute temperature. The

description of the form factor can be done at several levels of detail. The form factor has
to describe the differences in electron density for the molecules constituting the bilayer.
In addition, for several applications it is a good approximation to assume that the bilayer
is symmetric with respect to its centre. One of the simplest ap-proximations is to consider
a two-steps model given by (Worthington, 1969; Nallet et al., 1993; Brotons et al., 2005),
P (q) =
4H 2
q2
sin(q(H + T )) sin(qT ) +
T
H
sin(qT )
(D.5)
where H and T are, respectively, the head group and tail group electron density
contrasts and H and T are the respective sizes of the head group and tail group regions. Since this expression is very simple, it usually gives a too crude description of the
electron density prole and in several cases a better descrip-tion is needed. With a similar step-model strategy, Glatter and co-workers developed the deconvolution square-root
method (Glatter, 1981; Fritz and Glatter, 2006) where the electron density is described
by a series of step functions. The height of the steps are determined using a constrained
least-squares tting procedure. However, in this approach the t is done to the pair distance distribution and not directly to the experimental intensity. The intermediate step
of determining the pair distance distribution function by a Fourier transform can cause
several limitations for the method.
Another strategy was proposed by Pabst et al. (Pabst et al., 2000b), who suggested to
model the bilayer using two Gaussian functions: A central Gaussian placed at the origin,
which models the central part of the bilayer where hydrocarbon tails from the opposite
sides meet and a second Gaussian placed at a certain distance for modeling the head group
region. The central part is known to have negative con-trast with respect to a water buffer
for X-Rays, whereas the headgroups are electron rich and have a posi-tive contrast. This
model is also a crude approximation of the electron density prole since it assumes that
the tail groups have almost the same electron density as the water and that it is only the
most central part of the bilayers where the hydrocarbon chain meets that have a negative

108
contrast. But surprisingly, the model is sufcient to obtain a reasonable description of the
scattering data for several examples in the literature (Pabst et al., 2000a). The smoothness
introduced by the Gaussian proles seems to improve the t quality as compared to the
simple two step model. However, this model also fails for high quality data, in particular for high q values where high-resolution information on the structure is probed. In
the present work we combine the advantages of the Gaussian description of the electron
density proles with the stability introduced by Glatter in the free-form method. This
enables a more exible and stable modeling procedure. In the new approach, the prole
is described by a set of equally spaced Gaussian functions. During the optimization, it is
necessary to constrain only the amplitudes of the Gaussian functions and not the other
model parameters. As will be shown in the next section, this can be done by a proper
change of the design matrix of the least-squares problem, introducing the Lagrange multiplier only at the necessary positions in the matrix. During the tting procedure, the
Lagrange multiplier is varied and the other parameters are optimized for each value. By
using the point-of-inection method, it is possible to obtain the value by an automatic
procedure that gives both a good t to the scattering data and the optimum constraint of
the Gaussians amplitudes. With this approach is possible to obtain a smooth prole that
can describe more accurately the electron density of the lipid bilayer simultaneously with
the optimization of the structure factor and other model parameters. In the following we
present the procedure for symmetric and asymmetric bilayers.
Symmetric Bilayer
For the description of a symmetric planar bilayer, a given number, nmax , of Gaussian
functions are used for describing the prole. This basis of functions is constructed in
such a way that there is a central Gaussian at z = 0 and that the rest of the Gaussians
are at equidistant positions mirrored so that a symmetric prole is obtained. The central
Gaussian can represent the ends of the bilayer tail groups and the other centro-symmetric
Gaussians build the remaining parts corresponding to the tail groups and the head groups.
The electron density is thus described by:
(z) =
n=1
an [Gs (z, zn , n ) + Gs (z zn , n )]
1 + ij
(D.6)
i1 = 1, i = 1 e i1 = 0, i = 2, 3, 4
(D.7)
(D.8)

45, 12781286)
109
Gs (z, zn ), n =
(z zn )2
1
exp
2 2
2
(D.9)
(D.10)
and the Kronecker delta function i1 is used to avoid double counting for the central
Gaussian. n is the order of Gaussian used. The prole is dened by the values of the
amplitudes an. The half bilayer width Z is dened as the distance between the center
of the bilayer and the posi-tion where the last Gaussian reaches a width of two standard
deviations (). With this denition, the positions of the Gaussians and the standard
deviations ( values) are calculated as follows:
zn = (n 1)2, =
2nmax 2 ln 2
(D.11)
This choice of the centers and standard deviation gives a reasonable overlap between
the Gaussian func-tions enabling the construction of smooth proles. The choice of the
number of Gaussian functions (nmax) will depend on the level of details that is needed to
build the prole. Since the scattering prole contains a low information content (Moore,
1980) a general rule that can be used is to use the minimum required number of terms for
the modeling, which can be obtained from a few simple tests. If it is used a number of
terms larger than the ideal value, the obtained prole will have the same shape but some
articial oscillations. A typical prole built using equation ?? is shown in Figure 1A. One
of the advantages of using a Gaussian set of functions for the representation of the prole
is that, for the one-dimensional case of centro-symmetric bilayers, the Fourier transform
of the electron density has an analytical solution, providing the scattering amplitudes
(Abramowitz and Stegun, 1972; Pabst et al., 2000a):
F (n, q) =
2exp(
2q2
2
)cos(qzn )
(D.12)
The nal prole scattering amplitude of the lamellar cross section is just the sum of all
the F(q,n) terms:
nm ax
F (q) =
an F (q, n)
(D.13)
n=1

110
and the form factor of the innite lamellar system is:
P (q) = |F (q)|2 .
(D.14)
A theoretical simulation is shown in Figure 1B, where a prole with four Gaussian
functions was used and combined with the structure factor of the Modied Caill theory
to provide the combined I(q) intensity.
Asymmetric Bilayer
An expression for the form factor from the asymmetric bilayer was proposed by Brzustowicz and
P (q) =
< F (q)2 >=
(D.15)
ak ak1 k k1 exp[q 2 k + k1 /2]cos[q(zk + zk1 )]

k,k1
where i are the Gaussians widths, ai are the Gaussian amplitudes and zi are the Gaussians
centers, with respect to a common origin. For this case the construction of the prole is
slightly different. Since the symmetry is lost, the electron density prole is given by
an Gs (z, zn , )
(z) =
(D.16)
n=1
In this case, Z, which is a measure of the full bilayer thickness, the centers of the
Gaussians, and the stan-dard deviation ( value) are dened and related as follows:
zn = (n 1)2, =
2nmax 2 ln 2
(D.17)
This choice of the centers and standard deviation gives again a reasonable overlap
between the Gaussian functions enabling the construction of smooth proles. A typical
prole made using equation D.16 and the corresponding scattering intensity calculated
by equation D.15 are shown in Figure 2.
Final intensity expression
The expressions given in the previous sections permit the calculation of the scattering
intensity for the proposed electron density proles. In the case of multilamelar planar

45, 12781286)
111
(a)
(b)
Figura D.1.: (a) Construction of the electron density prole using four Gaussians (G1,
G2, G3 and G4) with four different amplitudes (1, 0.3, 1, 0.3). They
are shown by four different line styles. The nal resultant electron density
prole from the Gaussian model is shown in solid thick line. (b) Final intensity and respective form factor and structure factor. In each gure the
instrumentally smeared (solid line) and ideal non-smeared (dotted line) curves are presented. In this simulation the number of layers used was N = 50,
the interplanar distance d = 73.5(0.2) , bilayer half size of Z = 30 and
the Caill parameter = 0.12.

112
(a)
(b)
Figura D.2.: (a) An electron density prole cstructed using ve Gaussians. The prole
is symmetric (Sim, solid curve) and becomes increasingly more asymmetric
(A1). This asymmetry is obtained by the proper choice of the Gaussians amplitudes. (b) Calculated intensity for the different proles. Interestingly, the
breaking of the symmetry induces signicantly changes on the form factor
prole.
membranes (or large vesicles), this electron density prole will be a repeating unit and
a structure factor has to be included for describing the ordered stacks. In the present
context it is the structure factor from the modied Caill theory (equation 3), which is
used and the nal scattering intensity of the cross-section structure of the system is then
(Pabst et al., 2000a):
IM LV (q) = (|F (q)|2 SM CT (q) + Ndif f |F (q)|2)
(D.18)
where the second term is included for describing the diffuse scattering which might
appear from the presence of single bilayers in the system. Instrumental smearing effects, which are a consequence of the collimation of the camera pinholes, wavelength
bandwidth, detector resolution, etc, can be taken into account by smearing the intensity expression by the resolution function R(< q >, q) as described by Pedersen and

45, 12781286)
113
co workers (Pedersen et al., 1990). The nal expression used to describe the data from
multilamellar planar bilayers is:
If it (q) = Sc1
IM CT (< q >)
q2
+ Back,
(D.19)
where Sc1 is an overall scale factor and Back is a background expression. All parameters are optimized during the data tting. One of the main advantages of this approach
is the fact that the scattering intensity is adjusted and not the pair distance distribution
function. In this way, it is very simple to add additional contribution for the scattering
like particle exibility (which would lead to a polymer-like contribution at high angles)
or a given low scattering angle contribution, and optimize all parameters in the same
least-squares t. Using the above mentioned procedure it is possible to perform a full
curve tting, retrieving simultaneously information about the form factor and structure
factor.
Optimization Method
In the previous section, the expressions for the theoretical intensity I mod (q) for planar
bilayers with or without structure factor effects has been given. As mentioned above, the
next step is to optimize the model parameters, which is done by a least-squares procedure.
The coefcients are obtained by the minimization of the weighted chi-squared (or mean
deviation) 2
M
2
2
I(q)exp I mod (q)]2 /i
(D.20)
i=1
where M is the number of experimental points, I exp (qi) and i are the experimental
data and the standard errors, respectively. Since the theoretical intensity is not expressed as a linear combination of the model coefcients, the minimization of (17) requires
the application of a nonlinear least-squares procedure. There are several minimization
methods available in the literature and in the present work we applied the MarquardtLevenberg algorithm (Pedersen, 1992, 1997; Glatter and Hainisch, 1984). The set of
normal equations that need to be solved iteratively are:

114
v v = ,
(D.21)
= 1, 2....J
(D.22)
v=1
where J is the number of tting parameters and v are the changes in the parameters
v at each interaction. The iteration procedure is continued until the changes are zero
within some specied limit. The matrix v and the vector are given as follows:
v =
i=1
I mod (qi) I mod (qi)
[I mod (qi) I mod (qi)]
v =
v
I mod (qi)
i=1
2
/i
(D.23)
2
/i
(D.24)
As required for any nonlinear procedure, a set of starting values has to be used. For the
case where only the electron density prole is modeled an initial square function where
all parameters have the same value, chosen in such a way that the forward scattering value
is reproduced, is good enough to ensure the convergence of the minimization procedure.
For more complicated cases where both form factor and structure factor are optimized,
some prior knowledge or manual adjustments are required. In all cases, due to the low
information content in scattering proles and the description of a very small fraction of
the reciprocal space, the solution of the inverse scattering problem (obtain real space information from the reciprocal space data) usually leads to ill poised problems, generating
solutions with large oscillations, which have no physical meaning. In order to overcome
this problem, it is necessary to add model constraints, which lead to solutions that are
more physically reasonable. One procedure is to add a stabilizing function (Nc ) to 2 .
P 1
(n+1 n )2
(D.25)
= Nc = min
(D.26)
Nc =
n=1
2
where P are the number of parameters that are wanted to be constrained (P

J ). The
modied normal equations are (Pedersen, 1992; Pedersen and Hamley, 1994a, b)

45, 12781286)
115
(D.27)
(v + Kv )v = ( + L ),
v=1
The matrix Kv is dened as,
1 1
1 2 1
1 2 1
K=
... ... ....
0
1
2 1
1 1
0
On the right hand of (21) Lmu is given by,
i i+1
for i = 1
L =
2i i+1 i1 for 2 i P 1
i i1
for i = P
Since it is in general only some of the t parameters that describe the prole, only these
parameters have to be constrained. Therefore P < J and the sum in equation (20) will
run only over the parameters that are to be constrained. For example, when tting the
form factor and structure factor, only the amplitudes related to the form factor (electron
density prole) have to be constrained, whereas the parameters in the structure factor or
background factors should not.
The weight of the constraint relative to 2 is given by the parameter (also called
Lagrange multi-plier), which can be determined by the point-of-inection method, as
described by Glatter (Glatter, 1977). In this method, the optimum lambda (opt ) value
is obtained using graphs of the dependency of Nc , the rst derivative of Nc , second
derivative of Nc , and the mean deviation as a function of . The parameter is generally
varied over ten or more orders of magnitude with equidistant steps on a logarithm scale.
In this so-called stability plot, the value given by a position where the Nc is on a plateau,
the rst derivative is at a minimum, and the second derivative is positive, while the mean
deviation is still low, is the optimum Lagrange multiplier. By a proper scaling of all these
quantities, it is possible to build a functional that can be minimized in order to give the
most suitable opt .

116
opt = M in[1 2 + 2 |(Nc ) | + 3 |(Nc ) |],
(D.28)
where 1 , 2 and 3 are normalization parameters and the prime and double prime denotes rst and second derivative of NC against . The normalization is performed in such
a way that the variables are restricted to the interval from 0 to 1. This minimization can
be easily performed by tting a parabolic function to the functional and the minimum of
the parabola provides the optimal value opt . This procedure can be implemented to give
an automatic determination of opt . It has previously been successfully applied for indirect Fourier transformation of small-angle scattering from particulate systems (Oliveira
et al., 2009), providing a reliable determination of opt t. Automatic determinations of
the Lagrange multiplier in indirect Fourier transformation procedures had already been
proposed by other authors (Semenyuk and Svergun, 1991; Hansen, 2000).
The constrained optimization method and the automated point-of-inection procedure
for deter-mining the optimum Lagrange multiplier were implemented for the Gaussian
deconvolution method permitting the determination of the cross-section electron density
prole through the simultaneous tting of form factor and structure factor in systems of
planar multilayers. An example of the automatic determination of the Lagrange multiplier is shown in Figure 3.
Application
Hydration effects on PC lamellar multilayers
Lamellar phases were prepared by hydrating soya lecithin (Avanti Polar), used without
any further purication, using Milli-Q water in desired proportions. The density of
lecithin was considered as 1, 07 g/cm3 and samples of various volume fractions were
prepared scanning the dilution line. The homo-geneity of the samples was achieved by
shaking and centrifugation processes. X-ray scattering was performed on powder (randomly oriented lamellar) samples, placed in glass capillaries using the laboratory SAXS
equipment (Nanostar-Bruker) placed at the Institute of Physics in the University of So
Paulo. The experiments were performed at room temperature ( 22o C). X-ray experiments
in WAXS geometry have shown that for this temperature all the samples are in uid lamellar phase, as conrmed by the broad band at q = 1, 5 (not shown here). The beam
diameter is about 1mm at the sample position which leads to smearing effects that have to
be taken into account in the modeling procedure (peak broadening)(Pedersen et al., 1990).
In the standard SAXS setup (0.01 < q < 0.34 1 ), up to three Bragg reections could
be observed in the experimental scattering curves, as illustrated in gure 4 for varying li-

45, 12781286)
117
Figura D.3.: Automatic determination of the optimum Lagrange multiplier value. The
information about the mean deviation value, smoothness parameter Nc and
its derivatives against are combined and adjusted by a parabolic tting in
order to provide the optimum value.
pid volume fractions (lip ). In the gure, it can also be observed that the intensity of the
second-order peak decreases with increasing lipid content and it is completely absent for
the more concentrated sample: lip = 0.87. This effect, however, cannot be ascribed to
a decrease of smectic ordering, since the distance between the membranes is decreasing.
Using the analysis method presented above (with nmax xed and chosen equal to 4) it
was possible to obtain the form and structure factors that give the best t to the scattered
intensity, shown in gure 4 as dashed and dotted lines, respectively. It was observed that
the local minimum of the form factor moved in q space with decreasing amounts of water,
which reects structural changes in the bilayer. Therefore it is not possible to t the set
of experimental curves by the same form factor. The changes become more evident for
samples with high concentrations, where the minimum of the form factor approaches the
second-order peak of the structure factor.
In the diluted regime, for lipid volume fraction lower than 0, 65, the lamellar phase
has attained the hydration limit, interplanar distance of approximately 62, and coexists

118
with water in excess. In this regime, the lamellar period and membrane thickness do not
change signicantly (Figure 5a) when compared to the variations taking place for lipid
volume fraction above 0, 65. In this second regime the lamellar period decreases with
dehydration, and the bilayer thickness 2Z increases by approximately 6. In the literature a smaller variation of bilayer thickness has been reported, about 2 (McIntosh et
al., 1987), however, the determination of this parameter is based on previous assumptions
about the conformation of carbonic chains and polar groups to obtain the electronic contrast or from pair correlation function calculations which are not optimized during the
tting procedure (Nagle et al., 1996; Zhang et al., 1994; McIntosh et al., 1987).
The behavior of Caill parameter,, also indicates signicant changes in membrane
elasticity upon dehydration, as shown in Figure 5b. Three regimes can be identied; the
rst one, corresponding to maxi-mum hydrated lamellar phase, has a constant and high
value of Caill parameter; the second regime has an exponential decrease of the Caill
parameter with increasing lipid volume fraction. Finally, a third regime can be identied,
corresponding to a strong connement of bilayers and typical separation distances (d-2Z)
smaller than 8 . For such small separation distances, the hydration force (McIntosh
et al., 1987; Parsegian et al., 1979) is dominant and responsible for a strong repulsion
between bilayers resulting in a constant value of Caill parameter around 102 .

45, 12781286)
119
(a)
(b)
Figura D.4.: (a) Experimental scattering curves of the lamellar phase for varying lipid volume fraction (lip ). The solid thin line shown for lip = 0.582 represents
the resolution functions at the three peaks positions. The dashed lines are
the form factor and the dotted lines are the structure factors obtained from
the minimization procedure described in the text. The solid lines represent
the nal tted scattered intensity. (b) Electronic density proles and denition of effective membrane thickness M . In all cases the curves were shifted
for clarity.

120
(a)
(b)
Figura D.5.: (a) Variation of lamellar period, d, and membrane effective thickness, M ,
for varying lipid volume fractions. The dashed line indicates the separation
of the two dilution regimes (see discussion in text). (b) Behavior of Caill parameter. The second dashed line was added to identify the conned regime.

45, 12781286)
121
Conclusions
Although many studies of lecithin lamellar systems have been published in the literature, the application of Gaussian deconvolution method to t the small-angle X-ray scattering experimental data of lecithin lamellar phase have revealed new aspects about structure and elastic properties of such system. The determination of the membrane thickness
and the Caill parameter are of crucial importance for obtaining information on the interactions between the membranes. The results presented here showed that dehydration
does not consist only of removing water from the space between bilayers, but that it also
affects the membrane structure with consequences on its elastic properties. The change of
behavior of the Caill parameter in the conned regime occurs when water space between
bilayers is reduced to a few layers of water molecules and this seems to play a major role
for the elastic properties of the bilayers. The exponential dependence of the Caill parameter on the lipid volume fraction shows that the interactions between the membranes in
the dilution range are not dominated by steric interactions due to membrane uctuations
and that dipolar electrostatic interactions arising from water organization probably is also
relevant.
These new aspects of lecithin lamellar system could only be obtained by the full curve
tting and simultaneous optimization of the form factor and structure factor, which is
possible with the Gaussian deconvolution method. The obtained electron density prole
can be subject to further analysis as, for example, specic assumptions about the membrane components (Heberle et al., 2012) which would permit the determination of the
individual contributions. The new results obtained for simple lecithin systems demonstrates the robustness and potential of this modeling approach which can be applied to
mono or multilayered systems. x
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UNIVERSIDADE DE SO PAULO

Propriedades estruturais e elsticas de

Barbara Bianca Gerbelli

Orientadora: Profa. Dra. Elisabeth Andreoli de Oliveira

Profa. Dra. Elisabeth Andreoli de Oliveira (Orientadora, IFUSP)

Ao meu querido Pedro.

"A tarefa no tanto ver aquilo que nnguem viu,

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1.2. Estado da arte e objetivos . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

2.1. Fenmenos de auto-organizao . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

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3.1. Preparao das Amostras . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29

4.1. Estudo Estrutural . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 45

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B: Mdulo de compressibilidade [Pa]

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Figura 1.1.: Esquema de uma clula animal.

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1.2 Estado da arte e objetivos

em torno de 45 , porm com a incorporao de um cosurfactante a estrutura lamelar

1.2. Estado da arte e objetivos

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determinao do mdulo de compressibilidade (B).

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O comportamento do parmetro de Caill ao longo da linha de diluio obtido para

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2.1. Fenmenos de auto-organizao

Figura 2.1.: Desenho esquemtico de uma molcula anflica.

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Figura 2.2.: Estruturas formadas a partir do fenmeno de auto-organizao de molculas

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2.3 Fases Lamelares liotrpicas

Figura 2.3.: Estrutura da molcula da fosfatidilcolina.

2.3. Fases Lamelares liotrpicas

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As transies de fase podem ocorrer por variao da temperatura ou quantidade de

2.4. Interaes entre bicamadas em fases lamelares

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2.4 Interaes entre bicamadas em fases lamelares

Figura 2.5.: Diagrama de fases utilizando raios X em amostras de DMPC (adaptada de

onde w a distncia de separao entre as bicamadas de espessura M . O alcance das

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pulsiva de longo alcance, de natureza entrpica. A amplitude das utuaes de ondulao

onde , o mdulo elstico de uma nica membrana, ( tambm chamado de mdulo de

Somando-se todas as contribuies, o potencial de interao entre as bicamadas poderia

A simples adio da expresso obtida por Helfrich expresso do potencial, no entanto,

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2.4 Interaes entre bicamadas em fases lamelares

ainda no permite a descrio satisfatria das propriedades de transio de fase do sistema

Figura 2.6.: Previso terica para o comportamento da presso (adimensional) em funo

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2.5. Teoria de espalhamento de raios X em fases

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2.5 Teoria de espalhamento de raios X em fases lamelares

2.5.1. Fator de estrutura e parmetro de Caill

onde K o mdulo de curvatura e B o mdulo de compressibilidade potencial qumico

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