GERMOPLASMA: conjunto de material que preserva a informao gentica da planta (4 DNAs: cloroplasto,

mitocndria, nuclear e nucleomrfo). CONSERVAO DA INFORMAO GENTICA in situ (no local de ocorrncia),
nas reas de preservao ambiental (APA).
BANCOS DE GERMOPLASMA: ativos h repique de culturas e intercmbio de germoplasmas. De base reservam
cpias dos bancos ativos, no manipulam as colees preservadas, geralmente usam criopreservao de sementes
ou meristemas.
SEMENTES RECALCITRANTES: no suportam desidratao e criopreservao, precisando conservar como indivduo
inteiro(ex situ), exemplos: coco, cacau, manga seringueira. Reduz-se a T, disponibilidade de gua e incidncia
luminosa.
IN VITRO: O meio de cultivo pode ser substitudo por leo mineral (sem nutrientes). A planta sobrevive por controle
endgeno, fotossntese fica em nveis basais. Problema: induo de mutao, difcil preservar a longo prazo, efeito
espcie especfico.
Estratgia de conservao: COLETA determina o germoplasma mais adequado. TRANSFERNCIA em condies
asspticas. INDEXAO OU QUARENTENA ensaios para verificar presena atual ou futura de doenas, saber se o
DNA ficou intacto ou teve variao somaclonal. MULTIPLICAO E CONSERVAO crescimento lento para evitar
variao somaclonal.
CRIOPRESERVAO meristema, gemas, embries, clulas em suspenso, protoplastos. Lento evita danos por
desidratao, rpido evita cristais de gelo.VITRIFICAO usa muitos crioprotetores para criopreservao.
ENCAPSULAMENTO desidrata por corrente de ar e encapsula. CRESCIMENTO E RECUPERAO a planta deve
crescer a uma taxa prxima do natural, pode precisar de hormnio para startar (CITOCININA:auxina para parte area
e sacarose para raiz).
TRANSFORMAO GENTICA exemplo da insulina em alface. Monocotilednias no so suscetveis a infeco por
A. tumefaciens ou rhizogenes. Usada para insero de informao controlada, sem fuso de ncleos. INDIRETA
usando vetor, DIRETA inserindo a informao induzindo poros na membrana, pode ser no prprio tubo polnico
(PEG, eletroporao, acelerao de partcula, microinjeo). GENE MARCADOR codifica ptna detectvel, exigindo
co-cultura. GENE REPRTER codifica ptna visualizvel. SISTEMA CO-INTEGRADO usa-se um plasmdeo
manipulado em E.coli que depois cointegrado ao plasmdeo Ti. SISTEMA BINRIO: vetor com baixo peso molecular
no precisa estar fisicamente integrado com o plasmdeo Ti. Explante transformado colocado em meio de
crescimento de calo ou gema, clulas na transformadas so inibidas por antibitico ou agente de seleo. Quando
os brotos diferenciam eles so excisados e colocados em meio de crescimento de raiz, depois as plantas so
aclimatadas.
PEG: exige protoplasto (couve flor, limo, arroz, milho), poliction que aumenta a permeabilidade da membrana
(como PVA). ELETROPORAO(morango, alface, arroz e milho): mistura de DNA e protoplastos so submetidas a um
campo magntico (pode ser acoplado de um tratamento com PEG). LIPOSSOMA: vesculas fosfolipdicas carregadas
neg com DNA encapsulado e fusiona ao protoplasto (baixa eficincia, protege de endonucleases, pode ser composto
de material compatvel). MICROINJEO: no destri as clulas e pode-se usar corantes para verificar o ncleo.
MACROINJEO: injeo de DNA nas partes florais. ACELERAO DE PARTCULA: microprojteis cobertos com DNA.
PROBLEMAS: relacionados com a cultura de tecidos e metodologia de transferncia no h mtodo geral para
transformao ou para regenerao das plantas transformadas, exige protoplastos na direta, poucos genes de
origem vegetal isolados, poucos q controlam vias metablicas e muitos a fisiologia, stio de inserso imprevisvel,
biossegurana de plantas modificadas.
CLONAGEM: necessidade de ter no mercado plantas com ciclo longo de vida. Interesse na melhoria da resistncia,
qualidade da semente, eficincia fotossinttica, produtividade e tolerncia. ISOLAMENTO DO GENE: construo de
uma biblioteca genmica (coleo de fragmentos de DNA clonados em vetor) e uma sonda para reconhecimento.
Escolha do vetor (depende do tamanho do gene) > isolamento (centrifugao diferencial em gradiente de sacarose)
e preparo do DNA > insero > introduo do DNA recombinante na clula (transformao ou transfeco) >
identificao e isolamento dos clones.
HIBRIDAO SOMTICA: casos de incompatibilidade sexual ou barreira reprodutiva, pode promover recombinao
do genoma nuclear e citoplasmtico. Pode produzir anfidiplides (AA + BB = AABB ou AB) que podem produzir
sementes. possvel inserir uma FAMLIA DE GENES. Os hbridos podem ser identificados com uma pr-seleo
usando marcadores morfolgicos. HOMOCRIOS: protoplastos de uma mesma espcie fundidos. A hibridao
somtica uma alternativa promissora para cultura da banana, porque a maioria das cultivares genomicamente
triplides, produz poucas sementes ou quase nenhuma e apresenta falta de variedade e resistncia a doenas.
REGENERAO DA PARECE CELULAR: protoplastos cultivados em meio nutritivo com auxina e citocinina estimulando
diviso celular e regenerao da parede IN VITRO. Em 28 dias d para ver as microcolnias a olho nu, podendo
transferir para meio slido para crescimento de calo, quando s ento colocada em contato com a luz.
Protoplastos podem ser usados para micropropagao (sem fuso, gerando calo q gera nova planta). Resumindo:
protoplastos permitem plantas transgnicas, hbridos somticos e seleo de mutantes.
Introduo de transgnicos no ambiente: risco de fluxo horizontal e vertical, transgnico no pode florescer, machos
estreis ou botes florais cortados. Barreira segura entre ele e qualquer outra planta. Risco da agressividade da
planta. Risco simulado em campo controlado com regio de confinamento. EXPRESSO FENOTPICA DA
TRANSFORMAO a caracterstica mais importante em avaliao de risco.