R. Bras. Zootec., v.27, n.4, p.

651-657, 1998
Caracterizao Morfolgica dos Estdios de Desenvolvimento do Aparelho Reprodutor
Masculino da R-Touro, Rana catesbeiana, no Sistema Anfigranja de Criao Intensiva
1
Cristina Lcia Santana Costa
2
, Samuel Lopes Lima
3
, Dlcio Ricardo Andrade
4
, Cludio ngelo Agostinho
5
RESUMO - O objetivo deste trabalho foi caracterizar morfologicamente os estdios de desenvolvimento do aparelho reprodutor
masculino de r-touro Rana catesbeiana, proveniente do sistema anfigranja de criao extensiva. Durante o perodo de um ano, 657 machos
de r-touro foram retirados dos setores de recria e reproduo do sistema Anfigranja, para se estudarem os aspectos bsicos da reproduo
dessa espcie de r. As coletas foram realizadas mensalmente e, na ocasio, foram registrados os pesos do corpo e dos testculos para cada animal
e anotadas as caractersticas macroscpicas de suas gnadas. Os testculos de 274 machos foram removidos e histologicamente examinados.
A partir da anlise conjunta das caractersticas macro e microscpicas dos testculos, cinco estdios de maturao gonadal para os machos de
Rana catesbeiana foram determinados: juvenil, incio de maturao, maturao intermediria, maturao avanada e esgotado.
Palavras-chave: cativeiro, estdios, machos, gonadas, r-touro, reproduo
Morphological Characterization of Development Stages of Male Reproduction
Apparel of Bullfrog, Rana catesbeiana, in the Intensive Anfigranja System
ABSTRACT - The objective of this work was to caracterize the morphological characterization of the development stages of male
reproduction apparel of bullfrog Rana catesbeiana from intensive Anfigranja system. During the period of one year, 657 bullfrog males
were removed from regrowing and reproduction sections in Anfigranja system to study basic aspects of the reproduction of this specie. The
collections were realized monthly and, in that occasion, the body and testicles weights for each animal were recorded and their macroscopic
gonadal characteristics, registred. Testicles from 274 males were removed and histologically analyzed. From the macro and microscopic
gonadal characteristics, analysis set of the testicles, five stages of gonadal maturation for the male of Rana catesbeiana were determined:
juvenile, beginning of maturation, intermediate maturation, advanced maturation and spent.
Key Words: captivity, stages, males gonads bullfrog, reproduction
Leptodactylus ocellatus e HERMOSILLA et al. (1983)
para a r-chilena, Caudiverbera caudiverbera. Uma
reviso mais detalhada sobre reproduo de anfbios foi
realizada por LOFTS (1974).
Considerando-se a necessidade de se obterem
maiores informaes sobre a reproduo da r-touro em
cativeiro, efetuou-se o presente trabalho com o objetivo
de caracterizar os diferentes estdios de maturao
testicular, bem como realizar breve descrio morfolgica
do aparelho reprodutor dessa espcie de anfbio.
Material e Mtodos
O presente trabalho constitui parte de uma srie
de investigaes sobre a biologia reprodutiva da r-
touro, criada intensivamente no sistema Anfigranja
Introduo
As informaes a respeito do funcionamento
geral do aparelho reprodutor masculino da r-touro
so praticamente inexistentes, devendo-se mencio-
nar a publicao de EASLEY et al. (1979), que
enfoca as influncias ambientais na espermiao
dessa espcie.
Estudos morfolgicos, bem como a caracteriza-
o dos estdios de desenvolvimento do aparelho
reprodutor masculino da r-touro, constituem subsdi-
os importantes para o aprimoramento das tcnicas de
manejo, hoje empregadas nos ranrios brasileiros.
Algumas investigaes, nesse sentido, j foram
efetuadas com outras espcies de rs, mas em condi-
es naturais, como as publicadas por CEI (1948) para
1
Trabalho parcialmente financiado FAPEMIG/CNPq.
2
Biloga, MS em Zootecnia, Professor Assistente - UEPG.
3
Doutor, Professor Titular, DBA - UFV. Pesquisador CNPq.
4
Doutor, Pesquisador - CCTA - UENF.
5
Doutor, Professor Adjunto - UNESP - Botucatu, SP.
652
COSTA et al.
(LIMA e AGOSTINHO, 1988, 1992).
Os animais amostrados encontravam-se alojados
nos setores de recria (em processo de engorda) e
reproduo (em mantena) do Ranrio Experimental da
Universidade Federal de Viosa, municpio de Viosa,
Minas Gerais. As investigaes foram realizadas no
perodo de junho de 1989 a julho de 1990.
As coletas foram realizadas, mensalmente, e na
mesma ocasio os animais foram medidos e identifi-
cados, utilizando-se a codificao proposta por
MARTOFF (1953). A cada amostragem anotaram-
se os seguintes parmetros: comprimento do corpo
(LC), peso total (WT), caractersticas macroscpicas
das gnadas (quanto colorao, ao formato e
posio) e peso das gnadas (WG).
Calculou-se, para cada exemplar, a relao
gonadossomtica (RGS), obtida mediante a seguinte
expresso:
RGS = (WG/WT) x 100
em que
WG: peso dos testculos
WT: peso total do animal
Dos 657 machos amostrados, 274 tiveram os seus
testculos processados para analise em nvel
histolgico. Para tal, a poro mediana, em corte
transversal, de um testculo de cada animal foi fixada
em lquido de Bouin e, posteriormente, processada
histologicamente, segundo mtodo descrito por
VAZZOLER (1981). Os cortes histolgicos foram
corados pela Hematoxilina-Eosina e a caracterizao
das clulas da linhagem espermatognica foi realiza-
da levando-se em considerao o aspecto morfolgico
dos diferentes tipos celulares e a sua afinidade com
os corantes utilizados, de acordo com HERMOSILLA
et al. (1983) e AGOSTINHO (1988).
A caracterizao dos estdios de desenvolvimen-
to testicular foi realizada com base na anlise conjunta
da proporo dos cistos de clulas germinativas, em
diferentes fases de desenvolvimento no interior dos
tbulos seminferos, e nas variaes da relao
gonadossomtica (RGS) estimada para estes animais.
Resultados e Discusso
O aparelho reprodutor masculino da r-touro
constitudo de dois testculos (Figura 1) geralmente,
de forma ovide, situados ventralmente aos rins,
prximos aos quais se conectam cavidade abdomi-
nal por intermdio do mesrquio (LOFTS, 1974).
Como ocorre para fmeas dessa espcie, em
machos tambm esto presentes os corpos gorduro-
sos ou adiposos (Figura 1), posicionados cranialmente
em relao aos testculos, com os quais se relacionam
intimamente. Na maioria dos animais amostrados no
se observou diferena em tamanho entre os dois
testculos, entretanto, alguns apresentavam o testcu-
Figura 1 - Aparelho reprodutor de machos de r-touro, Rana catesbeiana, destacando-se os testculos (T), e corpos gordurosos (CG).
Figure 1 - Male bullfrog, Rana catesbeiana, reproductive system, with detailed testicles (T), and fatty body (FB).
653 R.Bras.Zootec.
lo direito bem menor que o esquerdo.
Microscopicamente, ao longo do seu desenvolvi-
mento, o testculo passa por diferentes fases morfolgicas,
que no so visveis macroscopicamente. Em seu inte-
rior, esto presentes tbulos seminferos, estruturas
enoveladas e envoltas por tecido conjuntivo, cujo lume
varia, em dimetro, no decorrer de seu desenvolvi-
mento (Figuras 2 a 6).
Os testculos da r-touro (como dos demais
anuros) contm em seu interior tbulos seminferos,
onde se encontram as clulas germinativas, em dife-
rentes estdios de desenvolvimento. Estas ocorrem
em grupos, no interior de cistos formados pelas
clulas de Sertoli, de modo que em um mesmo cisto
todas as clulas se encontram no mesmo estdio de
desenvolvimento. Nas fases finais do processo
espermatognico, os cistos se rompem liberando as
clulas (espermtides ou espermatozides) para o lume
dos tubulos seminferos (Figura 5).
As clulas de Sertoli apresentam citoplasma hialino
e ncleo volumoso, medianamente basfilo e sem
nuclolos aparentes.
No interior dos testculos, observou-se ainda um
sistema de ductos coletores (Figura 2), cuja parede
formada por uma camada nica de clulas cbicas.
Esses ductos parecem originar nos tbulos seminferos
e, depois, convergem a ductos coletores comuns que
deixam os testculos em direo aos rins, via mesrquio.
Figura 2 - Corte transversal de testculo no estdio 1 (juvenil). Nota-se a presena de espermatognias primarias (G1), na
parede dos tubulos seminferos, alm do sistema de ductos coletores de espermatozides (D). Aumento
aproximado: 200 x.
Figure 2 - Testicle cross-section in stage 1 (juvenile); the presence of primary spermatogonia (G1) can be seen on the seminiferous tubules
well and the sperm collectors ducts system (D). Approximate enlargement: 200 x.
Figura 3 - Corte transversal de testculo no estdio 2 (incio de maturao). Destaca-se a presena de cistos de espermatognias
secundrias (G2), espermatcitos primrios (E1) e espermatcitos secundrios (E2) no interior dos tbulos
seminferos. Aumento aproximado: 300 x.
Figure 3 - Testicle cross-section in stage 2 (begininng of maturation). The presence of secundary spermatogonia cysts (G2), primary
spermatocits (E1) and secondary spermatocits (E2) are shown inside the seminiferous tubules. Approximate enlargement: 300 x.
654
COSTA et al.
Clulas da linhagem espermatognica
Espermatognias
Estas so as primeiras clulas da linhagem
espermatognica (Figuras 2 a 6). Dois tipos de
espermatognias foram observados nos testculos de
r-touro: as espermatognias primrias (G1) e as
espermatognias secundrias (G2) (Figura 2 e 3).
As espermatognias primrias constituem as
maiores clulas da linhagem espermatognica. Ocor-
rem sempre isoladas no interior do cisto, distribuindo-
se ao longo de todo o tbulo seminfero. Seu ncleo
grande, claro e apresenta em seu interior a cromatina
condensada, formando finas granulaes uniforme-
mente distribudas.
Mediante sucessivas divises mitticas, a partir
das espermatognias primrias, formam-se as
espermatognias secundrias (LOFTS, 1974). Estas
clulas ocorrem em nmero de duas ou mais por cisto
nos testculos da r-touro e apresentam tamanho
menor em relao s primrias. Seu ncleo volu-
moso e basfilo, apresentando a cromatina
condensada em grumos uniformemente distribudos,
o que lhe confere aspecto granuloso.
A denominao utilizada no presente trabalho,
para as espermatognias primrias e secundrias,
bem como as observaes realizadas a respeito de
suas caractersticas morfolgicas, esto de acordo
com os relatos de LOFTS (1974).
J HERMOSILLA et al. (1983) utilizaram o
termo clulas germinativas primordiais para definir
as espermatognias primrias. Os mesmos autores
separaram as espermatognias secundrias em dois
tipos diferentes, utilizando o termo espermatognias
primrias para as pequenas agregaes celulares
(duas ou mais) e espermatognias secundrias
para aquelas clulas que ocorrem em maior nmero
dentro dos cistos no interior dos tbulos seminferos.
A partir do momento em que as espermatognias
secundrias entram no processo de diviso meitica,
estas do origem aos espermatcitos, que sero
descritos a seguir.
Espermatcitos primrios (E1)
Quanto s caractersticas morfolgicas, os
espermatcitos primrios (Figura 3) so menores que as
G2 e apresentam ncleo esfrico, com muita afinidade
pela hematoxilina.
Espermatcitos secundrios (E2)
Estas clulas (Figura 3) so menores que as E1 e
apresentam o ncleo com a cromatina condensada
em grumos prximos e arranjados em crculo incom-
pleto, deixando uma regio central clara, o que lhe
confere a forma de U.
As descries realizadas no presente trabalho em
relao aos espermatcitos primrios e secundrios coinci-
dem com as realizadas por LOFTS (1974) e HERMOSILLA
et al. (1983), para outras espcies de anfbios anuros.
Figura 4 - Corte transversal de testculo no estdio 3 (maturao intermediria). Nota-se alm dos tipos celulares citados nas
figuras anteriores, a presena de espermtides (E) no interior dos tbulos seminferos. Aumento aproximado: 300 x.
Figure 4 - Testicle cross-section in stage 3 (intermediate maturation). Besides the mentioned cell types for figures above, the presence of
spermatides (E) can be seen inside the seminiferous tubules. Approximate enlargement: 300 x.
655 R.Bras.Zootec.
Constatou-se ainda no presente trabalho a pre-
sena de pequenos espaos vazios, semelhantes a
vacolos nos cistos de espermatcitos, que gradu-
almente se tornaram mais evidentes, atingindo grau
mximo de ocorrncia nos cistos de espermatcitos
secundrios. De acordo com HERMOSILLA et al.
(1983), esta ocorrncia normal em anfbios anuros.
Espermtides (E) e Espermatozides (Z)
Segundo a literatura, os espermatcitos secund-
rios, ao se dividirem, do origem s espermtides
(Figura 4), aqui observadas como pequenas clulas
de ncleo esfrico, compacto e fortemente corado
pela hematoxilina. Estas clulas passam por transfor-
maes morfolgicas, que se expressam na mudana
do formato de seu ncleo que se torna alongado.
Os espermatozides, resultantes do processo de
espermiognese, so visveis com o ncleo bastante
alongado, em forma de bastonete e fortemente basfilo,
acumulados no lume dos tbulos seminferos (Figura 5).
Aps liberados no lume dos tbulos seminferos, os
espermatozides so canalizados para os tbulos cole-
tores (vasos eferentes resultantes da convergncia
entre diversos tbulos seminferos), deixando os test-
culos, em direo aos rins, via mesrquio
(HERMOSILLA et al.,1983). Padro semelhante foi
observado nos testculos de r-touro.
Foram observados ovcitos 1 e 2 no interior dos
testculos de 9,6% do total das lminas analisadas. CEI
e CARUSO (1948) relataram um caso de
hermafroditismo em Leptodactylus ocellatus e afirma-
ram que a ocorrncia desse fenmeno rara entre
anfbios anuros. Esses autores citaram tambm a ocor-
rncia de hermafroditismo em Rana catabrigensis e
Rana temporaria. No presente trabalho a ocorrncia
de ovcitos no parnquima testicular no foi o suficiente
para caracterizar um caso de hermafroditismo.
Estdios do desenvolvimento testicular
Os estdios testiculares da r-touro (Figuras 2 a 6)
foram definidos a partir da avaliao microscpica da
proporo dos cistos de clulas germinativas em
diferentes fases de desenvolvimento no interior dos
tbulos seminferos. Estes dados, em conjunto com a
observao das variaes da relao gonadossomtica
(RGS), possibilitaram definir, para os testculos, cinco
diferentes estdios de desenvolvimento.
Estdio 1 - Juvenil
No decorrer desse estdio (Figura 2), o lume dos
tbulos seminferos apresentou-se pouco aberto e a
Figura 5 - Corte transversal de testculo no estdio 4 (maturao avanada). Observa-se grande quantidade de espermatozides
(Z) no interior dos tbulos seminferos. Aumento aproximado: 300 x.
Figure 5 - Testicle cross-section in stage 4 (advanced maturation). A large number of spermatozoides can be seen (Z) inside the seminiferous
tubules. Approximate enlargement: 300 x.
656
COSTA et al.
parede dos mesmos esteve ocupada por cistos de
espermatognias, principalmente as G1. Os dados mdios
de RGS, WT e LC para animais nesta fase estiveram em
torno de 0,040%; 17,92 g; e 5,74 cm, respectivamente.
Estdio 2 - Incio de maturao
Esta fase marca o incio da atividade
espermatognica, aparecendo os tbulos seminferos,
agora com o lume mais aberto, apresentando muitos
cistos de G2 em suas paredes, alm de espermatcitos
nas fases 1 e 2 (Figura 3). Os dados mdios de RGS, WT
e LC mdios para os animais nesta fase estiveram em
torno de 0,049%; 66,86 g; e 9,32 cm, respectivamente.
Estdio 3 - Maturao intermediria
Nesta fase os testculos apresentam atividade
espermatognica mais acentuada, marcada pelo au-
mento, em nmero, dos cistos de espermatcitos
secundrios (Figura 4). Alm destes, ocorreram tam-
bm cistos de espermtides, bem como pequena
quantidade de espermatozides livres no interior de
alguns tbulos seminferos, principalmente naqueles
com o lume mais evidente. Ainda neste estdio, cistos
de espermatognias, em nmero bem reduzido, so
observados na parede tubular em meio aos demais
tipos celulares. Os dados mdios de RGS, WT e LC
para os animais nesta fase estiveram em torno de
0,008%; 128,30 g; e 11,28 cm, respectivamente.
Estdio 4 - Maturao avanada
Nesta fase (Figura 5), os testculos atingiram o seu
grau mximo de desenvolvimento, com os tbulos
seminferos apresentando o lume amplo e repleto de
espermatozides. Nestes tbulos observou-se, tambm,
pequena quantidade de cistos de espermatognias e de
outras clulas da linhagem espermatognica.
Observaram-se ainda, com freqncia, vrios
graus de fuso dos tbulos seminferos, alm de
ductos coletores, em vrios planos, repletos de
espermatozides. Os dados mdios de RGS, WT e
LC para os animais nesta fase estiveram em torno de
0,12%; 240,42 g; e 13,69 cm, respectivamente.
Na escala de maturao testicular adotada para
o presente trabalho, no se utilizou o termo maduro,
por se entender que a metodologia utilizada no
permitiu a visualizao do momento exato em que as
rs se encontravam prontas para esgotar suas gnadas.
Estdio 5 - Esgotado
Neste estdio (Figura 6), os tbulos seminferos
encontram-se com o lume amplo e praticamente
vazio contendo apenas espermatozides residuais.
Nas paredes internas dos tbulos, observaram-se
ainda alguns cistos em vrias fases de desenvolvi-
Figura 6 - Corte transversal de testculo no estdio 5 (esgotado). Observa-se espermatozides residuais no interior do lume
ainda bem aberto. Aumento aproximado: 300 x.
Figure 6 - Testicle cross-section in stage 5 (spent). Residual spermatozoides can be seen inside the still wide open lume. Approximate
enlargement: 300 x.
657 R.Bras.Zootec.
mento. Os dados mdios de RGS, WT e LC para os
animais nesta fase estiveram muito prximos dos
valores estimados para os machos de r-touro em
maturao avanada.
No presente trabalho no se observou o retorno
ao estdio de repouso, para os machos, aps o estdio de
maturao avanada, o que se refora pela constatao
de que todos os machos com peso acima de 240,42 g
encontravam-se no estdio de maturao avanada ou
esgotados, sugerindo que o processo de espermatognese
ocorra continuamente nos indivduos adultos.
A suposio supracitada encontra apoio em LOFTS
(1974), segundo o qual espcies de anfbios anuros que
habitam regies tropicais e subtropicais, em que a tempe-
ratura ambiental no sujeita a grandes flutuaes
sazonais, normalmente apresentam produo contnua de
espermatozides durante todo o ciclo reprodutivo anual.
Concluses
A estrutura do aparelho reprodutor masculino da r-
touro segue o mesmo padro descrito para outras
espcies de anfbios anuros, tanto em seus aspectos
macroscpicos quanto histolgicos.
Para machos de r-touro a maturao testicular
ocorre em cinco estdios: 1 (juvenil), 2 (incio de
maturao), 3 (maturao intermediria), 4 (maturao
avanada) e 5 (esgotado).
Para essa espcie de anfbio anuro, nas condies
experimentais adotadas, o estdio de repouso dos
testculos no foi diagnosticado, o que sugere que a
atividade espermatognica desses animais seja contnua.
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