Resumo: Os tumores testiculares do gato (Felis catus) so raros.
Neste estudo, descreve-se um caso de sertolinoma maligno num testculo ectpico de um gato com metstases disseminadas pelo corpo, nomeadamente no fgado, bao e peritoneu. O diagns- tico defnitivo baseou-se no exame imunocitoqumico das clulas tumorais, que apresentavam marcao citoplsmica homognea com os anticorpos monoclonais anti -NSE (neuron-specic eno- lase - BBS/NC/VI-H14) e anti-vimentina (Vim 3B4), com padro de marcao semelhante ao observado nos sertolinomas caninos. A classifcao TNM deste tumor T3NXM1. O animal no apresentava sinais de feminizao. Palavras-chave: tumor, neoplasia, gato, testculo, clulas de Ser- toli. Summary: Testicle neoplasms are rare in the cat (Felis catus). This paper reports a case of a malignant Sertoli cell tumour in an ectopic testis of a cat with widespread metastases, namely in the liver, spleen and peritoneum. The fnal diagnosis was based in immunocytochemical analysis of the tumour cells, which showed homogenous cytoplasmic staining with the monoclonal antibod- ies anti-NSE (neuron-specifc enolase - BBS/NC/VI-H14) and anti-vimentin (Vim 3B4). This pattern of staining is similar to the one observed in canine Sertoli cell tumours. The TNM classifca- tion of this neoplasm is T3NXM1. The animal didnt show any sign of feminization. Keywords: tumour, neoplasm, feline, testis, Sertoli cells. Introduo Os tumores testiculares so raros no gato (Brodey, 1970; Burke, 1976; OKeefe, 1995; Withrow e Reeves, 1996; Buergelt, 1998; Morrison, 1998; England, 1999), o que refectido no estudo de Cotchin (1957) que, em 253 neoplasias de gatos do sexo masculino, no referiu nenhum tumor testicular ou prosttico. Posteriormente, Dorn et al. (1968; 1968a) estudaram, ao longo de 3 anos, 256 casos de neoplasia em gatos (sexo mascu- lino), no tendo tambm assinalado qualquer tumor tes- ticular. Um dado tambm ilustrativo fornecido por Nielsen e Lein (1974), que afrmaram que os tumores testiculares caninos constituem mais de 90% de todas as neoplasias deste rgo nos mamferos domsticos, seguindo-se-lhe o garanho e o touro. No gato, j foram assinalados tumores das clulas de Sertoli (Meier, 1956; Baptista e Silva, 1985; Johnston, 1993; OKeefe, 1995; Withrow e Reeves, 1996), semi- nomas (Withrow e Reeves, 1996), tumores das clulas de Leydig (OKeefe, 1995; Withrow e Reeves, 1996), um tumor da rete testis (Peyron e Cocu, 1938) e dois teratomas (Johnston, 1993; Miyoshi et al., 2001). Alguns dos tumores das clulas de Sertoli e semino- mas apresentavam metstases (Meier, 1956; Baptista e Silva, 1985; OKeefe, 1995). Tambm j foi referido um tumor de clulas de Leydig ectpicas num gato cas- trado 11 anos antes (Rosen e Carpenter, 1993). Nos feldeos silvestres, assinalaram-se tambm alguns tumores testiculares, como o caso de Doster et al. (1989), referente a um seminoma num leopardo da neve (Panthera unica), e o de Scudamore e Meredith (2001), relativo a um sertolinoma num tigre de Amur (Panthera tigris altaica). Material e mtodos Material Este estudo refere-se a um gato Europeu Comum (Felis catus), com cerca de 5 anos, que foi enviado consulta externa do Hospital da Faculdade de Medi- cina Veterinria de Lisboa em 12 de Maio de 1999. O exame clnico revelou caquexia, desidratao marcada, dilatao do abdmen, temperatura de 38 C, tumefac- o perianal e, palpao, notaram-se massas intrab- dominais. A proprietria informou que o animal tinha sofrido a ablao cirrgica de um testculo. Foi feito o diagnstico provisrio de neoplasia testicular. Tendo em considerao o quadro clnico e o possvel diagns- tico, o animal foi eutanasiado aps consentimento da proprietria. Sertolinoma maligno em testculo ectpico de gato (Felis catus) Malignant Sertoli cell tumour in an ectopic testis of a cat (Felis catus) J.F. Silva SEPAT, DEMOC, Faculdade de Medicina Veterinria, Rua Prof. Cid dos Santos (Polo Universitrio - Alto da Ajuda), 1300-477 Lisboa, Portugal. R E V I S T A P O R T U G U E S A DE CINCIAS VETERINRIAS RPCV (2002) 97 (542) 87-92 Telefone: 213 652 888; e-mail: jfsilva@fmv.utl.pt 88 RPCV (2002) 97 (542) 87-92 J. F. Silva Mtodos Foi realizada a necrpsia do animal, tendo sido colhi- dos fragmentos do testculo (trs, um deles com ductos eferentes anexos), de um ndulo na entrada do peito, pulmo, fgado e bao. Os fragmentos foram fxados em formol a 10 % e includos em parafna. Realiza- ram-se ao micrtomo cortes com 5 m de espessura, que foram corados pela hematoxilina de Ehrlich - eri- trosina. Um fragmento de testculo (com os ductos eferentes includos), um de fgado e outro de bao foram selec- cionados, aps o exame histopatolgico de rotina, para investigao imunocitoqumica. O mtodo utilizado foi o da estreptavidina - biotina - peroxidase. Foram utili- zados os anticorpos monoclonais (soros primrios) anti- citoqueratinas 5, 6, 8, 17 e talvez 19 (clone MNF116, Dako), anti-vimentina (clone Vim 3B4, Dako), anti- enolase especfca dos neurnios (neuron-specic eno- lase (NSE), clone BBS/NC/VI-H14, Dako) e anti-des- mina (clone DE-R-11, Dako), nas concentraes, res- pectivamente, de 1:50, 1:200, 1:500 e 1:60. O tempo de actuao para cada um destes soros foi de 1 hora, tendo a marcao imunocitoqumica sido efectuada mecani- camente no aparelho TechMate (Dako), no Instituto Portugus de Oncologia Francisco Gentil - Seco de Anatomia Patolgica (Lisboa). A recuperao dos ep- topos foi feita por alta temperatura em panela de pres- so com tampo citrato a pH = 6,0 (1 minuto), excepto no caso da pesquisa de citoqueratinas, em que foi feita uma pr-digesto em pepsina (Sigma, P-7000) a 0,4%, a pH = 2, durante 20 minutos. Fez-se uma ava- liao semi-quantitativa das clulas neoplsicas mar- cadas com a seguinte notao (CT clulas tumorais marcadas; x preparao microscpica considerada): 0 % CT = -; 0 % CT < x 5 % CT = +/- (no caso de haver raras clulas isoladas positivas, adoptou-se o smbolo +/--); 5 % CT < x 25 % CT = +; 25 % CT < x 50 % CT = ++; 50 % CT < x 75 % CT = +++; 75 % CT < x 100 % CT = ++++. Foram estudados imunocitoqumicamente, como padro, os testculos apresentando morfologia normal (ao exame histolgico, com a colorao da hematoxi- lina de Ehrlich - eritrosina) de dois gatos, respectiva- mente de 6 e 16 anos. Estes animais morreram devido a urmia aguda consequente a obstruo da uretra, apre- sentando ambos cistite hemorrgica com dilatao vesi- cal. Fragmentos de testculo foram fxados em formol a 10 % e includos em parafna. Usaram-se os quatro anticorpos monoclonais j aludidos. Tambm foi uti- lizado como referncia o artigo de Patnaik e Mostof (1993), sobre algumas propriedades imunocitoqumi- cas do testculo normal e neoplsico do co. Resultados Exame anatomopatolgico No exame externo, observou-se caquexia, desidrata- o, tumefaco acentuada na regio perianal e conjun- tivite purulenta bilateral. abertura da cavidade torcica, observou-se uma massa de cor vermelha-acastanhada com 1,5 cm x 0,9cm, situada na extremidade cranial do mediastino, perto do manbrio do esterno. A cavidade pleural apre- sentava alguns cogulos sanguneos. O lmen da regio distal da traqueia encerrava muco com alguns cogu- los sanguneos e os brnquios continham muco no seu interior. A cavidade abdominal apresentava hidro-hemopio- peritoneu (260 ml). Na regio do folheto parietal do peritoneu que atapetava o diafragma, no omento e no mesentrio notavam-se inmeros pequenos ndulos de cor branca-amarelada com um dimetro mdio de 2 mm. O fgado continha dois ndulos volumosos dis- coidais umbilicados, de textura multilobulada (os lbu- los irradiavam desde os centros umbilicados), de cor branca-amarelada, com os dimetros respectivos de 8cm e 7,5 cm; o resto deste rgo apresentava o parn- quima semeado de ndulos menores (com dimetros compreendidos entre 0,5 cm e 2 cm), e de cor seme- lhante dos ndulos maiores; alguns deles eram umbi- licados. No bao, notavam-se ndulos disseminados, em geral esfricos, sem umbilicao, com dimetros de 1 cm a 3 cm e de cor semelhante dos ndulos hepticos. O espao retroperitoneal apresentava ndu- los semelhantes aos j mencionados, formando placas compactas e frmes que invadiam os msculos sublom- bares. A tumefaco da regio perineal correspondia a um testculo com 4 cm x 2 cm x 1,8 cm (Figura 1), de aspecto oval, superfcie micronodular e superfcie de corte multilobulada e de cor branca. Este testculo estava em parte situado na regio inguinal, sendo coberto por pele intacta no seu polo posterior, que no apresentava diferenciao anatmica de escroto. Exame histopatolgico Testculo - As clulas tumorais agrupavam-se em cordes de dimetros diferentes, uns fnos, outros bas- tante grossos (Figura 2). O centro de alguns dos cor- Figura1 - Aspecto macroscpico do testculo tumoral (indicado por um bisturi), retirado do cadver. Notam-se tambm ndulos metastticos no fgado (1) e no bao (2). 89 des de maior dimetro era ocupado por reas extensas de necrose. Os cordes eram separados uns dos outros por septos conjuntivos de espessura varivel. O exame de alguns cordes celulares grossos com a objectiva de x40 revelou que estes eram formados por agregados de cordes fnos estreitamente justapostos, separados uns dos outros por septos conjuntivos muito delicados. A fada de clulas tumorais mais perifrica formava um arranjo em paliada ao longo dos septos conjunti- vos; estas clulas tinham uma forma aproximadamente rectangular (Figura 3). As clulas mais interiores eram arredondadas ou polidricas, emitindo pequenos prolon- gamentos fnos; o citoplasma destas clulas era escasso e acidflo. Os ncleos de todas estas clulas eram redondos ou ligeiramente ovides, hipercromticos ou ento ricos em eucromatina; nestes ltimos, notava-se um nuclolo evidente. As fguras de mitose eram raras, estando presentes tambm algumas fguras de apoptose. Em alguns campos, notavam-se agregados de clulas de citoplasma volumoso, polidrico, fnamente vacuoli- zado e ligeiramente acidflo, estreitamente associadas num arranjo epiteliide. Os seus ncleos eram peque- nos e hipercromticos. A albugnea e a regio dos ductos eferentes estavam invadidas por clulas tumorais. Notavam-se alguns mbolos de clulas tumorais em vnulas. Fgado - As metstases eram constitudas por cor- des fnos e grossos de clulas neoplsicas. Nestes, notava-se uma ntida fada perifrica de clulas cbicas em paliada (Figura 4). Na maior parte das vezes, os cordes estavam separados uns dos outros por septos conjuntivos muito fnos, notando-se menos frequen- temente septos um pouco mais espessos e fbrosos. As clulas tumorais apresentavam ligeira anisocariose. No eram visveis as clulas de citoplasma volumoso e espumoso observadas no tumor primrio. O parn- quima heptico adjacente s metstases apresentava atrofa por compresso. Bao - A anisocariose das clulas tumorais das mets- tases neste rgo era mais acentuada do que a obser- vada no tumor primitivo e nas metstases hepticas. O citoplasma era mais abundante e fracamente acidflo. Notava-se congesto da polpa vermelha no parnquima esplnico no atingido pelo processo tumoral. RPCV (2002) 97 (542) 87-92 J. F. Silva Figura 2 - Estrutura histolgica do sertolinoma, composto por cordes de clulas alongadas, separados uns dos outros por septos conjuntivos. Colorao pela hematoxilina de Ehrlich - eritrosina. Objectiva x 10. Figura 3 - Entre o tero direito e mdio da fotografa, situa-se um fno septo vertical de tecido conjuntivo. As clulas neoplsicas adjacentes a ele formam uma paliada, em alguns pontos um pouco irregular. Colorao pela hematoxilina de Ehrlich - eritrosina. Objectiva x 40. Figura 4 - Metstase heptica. O aspecto em fada (paliada) das clulas neoplsicas perifricas de cada um dos dois cordes evidente. Colorao pela hematoxilina de Ehrlich - eritrosina. Objectiva x 40. Ndulo da entrada do peito Esta formao corres- pondia a um linfonodo mediastnico anterior com con- gesto intensa. Notavam-se abundantes imagens de eri- trofagocitose por macrfagos. Estavam presentes trs micrometstases do tumor testicular, em posio predo- minantemente subcapsular (seio subcapsular). Pulmo - Notava-se congesto dos capilares interal- veolares. O lmen de muitos alvolos estava ocupado por um exsudado fbrinoso ou fbrino-hemorrgico. No lmen dos brnquios e bronquolos notavam-se rolhes de fbrina e muco, encerrando alguns eritrcitos e clu- las infamatrias, a par de descamao do epitlio da mucosa brnquica (bronquite e bronquiolite). Obser- vava-se tambm hiperplasia moderada das glndulas brnquicas. Uma veia de mdio calibre encerrava um trombo. Exame imunocitoqumico Exame do tumor Anticorpo anti-NSE (BBS/NC/VI-H14) - Este anti- corpo marcou homogeneamente o citoplasma das clu- 90 las tumorais testiculares (Figura 5) e das clulas volu- mosas de citoplasma vacuolizado. O padro de marca- o ao longo do corte era heterogneo, havendo algu- mas zonas com clulas neoplsicas no marcadas (mar- cao global do corte: ++++). O mesmo padro foi observado nas metstases heptica e esplnica, embora as reas no marcadas fossem mais vastas do que as observadas no testculo (bao: +++; fgado: +++). Os controlos positivos internos (ou intrnsecos) eram cons- titudos no testculo por terminaes nervosas no ms- culo liso dos ductos eferentes, no bao por linfcitos da polpa branca e no fgado por fbras nervosas dos espaos porta. Estes controlos internos foram marca- dos pelo anticorpo anti-NSE. Anticorpo anti-vimentina (Vim 3B4) - O citoplasma das clulas neoplsicas testiculares foi marcado homo- geneamente em pequenos focos celulares (marcao +/-). Na metstase esplnica, o padro de marcao foi semelhante ao testicular (marcao ++). Na mets- tase heptica, s raras clulas isoladas foram marcadas (marcao +/--). Os controlos positivos internos foram fornecidos pelos endotlios vasculares e fbroblastos, que no foram marcados no caso do bao e do fgado, e muito poucos apresentaram marcao no testculo. Anticorpo anti-citoqueratinas (MNF116) As clu- rentes (testculo) e da cpsula esplnica. O fgado no apresentava controlos internos positivos adequados (os ramos da artria heptica localizados nos espaos porta dispunham de uma tnica mdia pouco evidente). Exame dos tecidos testiculares normais As clulas de Sertoli s foram marcadas pelo anti- corpo anti-NSE, adquirindo o citoplasma um padro de marcao homogneo e fnamente granuloso (marca- o: ++++). As clulas germinais no foram marcadas por nenhum dos quatro anticorpos monoclonais utili- zados. Discusso H que considerar dois factores para a possvel expli- cao da raridade dos tumores testiculares no gato: a) O mais bvio a castrao a que so submetidos muitos gatos (Brodey, 1970; Burke, 1976; Withrow e Reeves, 1996). Como exemplo, pode citar-se a obser- vao de Cotchin (1957) de que em 457 felinos do sexo masculino ingressados num Hospital Veterinrio da Gr-Bretanha para exames clnicos, 61 % eram cas- trados. b) Outro factor residir numa caracterstica fsiol- gica / fsiopatolgica inerente espcie (Felis catus domesticus) presentemente desconhecida, hiptese alu- dida por Bloom (1954) e Ladds (1985). Os sertolinomas pouco diferenciados podem asse- melhar-se a seminomas (Bloom, 1954; Scudamore e Meredith, 2001). Apesar de o sertolinoma deste caso ser pouco diferenciado, o fentipo histolgico das suas clulas (nomeadamente a disposio em paliada das clulas perifricas dos cordes neoplsicos) sugere este tipo de tumor. Alm disso, as mitoses so pouco fre- quentes (tal como sucede com o sertolinoma de outras espcies e ao contrrio do que acontece com o semi- noma - Bloom, 1954; Nielsen e Lein, 1974; Meier e Hauser, 1998) e no se observam as infltraes linfoci- trias que so comuns nos seminomas caninos (Bloom, 1954; Nielsen e Lein, 1974; Meier e Hauser, 1998) e RPCV (2002) 97 (542) 87-92 J. F. Silva Figura 5 - O citoplasma das clulas tumorais marcado homogeneamente pelo anticorpo anti-NSE. Os fbroblastos dos septos conjuntivos (contro- los internos negativos) no so marcados. Colorao imunocitoqumica. Objectiva x 40. las neoplsicas testiculares e as das metstases heptica e esplnica no foram marcadas (marcao: -). Con- tudo, este anticorpo marcou clulas epiteliais (colora- o ++++ = 100%), como as da rete testis, da lamina epithelialis mucosae dos ductos eferentes, os hepatci- tos e o mesotlio da cpsula esplnica (controlos posi- tivos internos, respectivamente, do testculo, fgado e bao). Notaram-se descontinuidades no revestimento da rete testis, devidas a invaso desta pelas clulas tumo- rais (Figura 6). Anticorpo anti-desmina (DE-R-11) - Tal como acon- teceu com o MNF116, as clulas neoplsicas do tumor primrio e das metstases no foram marcadas (marca- o: -). O controlo interno positivo foi constitudo pelos micitos lisos da tnica muscular dos ductos efe- Figura 6 - Marcao pelo soro MNF116. As clulas epiteliais do ducto da rete testis so marcadas, notando-se descontinuidade do revestimento epitelial direita devido a invaso por clulas tumorais no marcadas. Objectiva x 40. humanos (Cotran et al., 1999). Estas trs caractersti- cas morfolgicas permitem um diagnstico diferencial relativamente seguro em relao ao seminoma. Todavia, no caso presente, os cordes de clulas tumorais eram separados frequentemente por septos fnos de tecido conjuntivo, ao contrrio do que sucede na maioria dos sertolinomas, em que os septos intercordonais so espessos (Kennedy et al., 1998; Acland, 2000). Assim, a colorao de rotina pela hematoxilina de Ehrlich - eritrosina no permitiu a elaborao de um diagnstico realmente defnitivo. Para se poderem interpretar os dados imunocitoqu- micos relativos a um tumor, deve ter-se previamente em conta as caractersticas da substncia qumica pes- quisada nos tecidos correspondentes normais (de las Mulas et al., 1995). As informaes bibliogrfcas sobre a imunocitoqumica do testculo normal do gato e do co presentemente muito escassa. O autor s tem conhecimento de um estudo relativo ao co, o de Pat- naik e Mostof (1993), e de dois relativos ao gato (Scu- damore e Meredith, 2001; Silva, 2001). No exame imunocitoqumico, os dois testculos-con- trolo normais apresentaram um padro de marcao, no que respeita aos anticorpos anti-NSE e anti-vimentina, semelhante ao observado por Scudamore e Meredith (2001). Enquanto que as clulas de Sertoli normais no foram marcadas pelo soro anti-vimentina (ao contrrio do que sucede no co - Patnaik e Mostof, 1993 - e no homem - Achtsttter et al., 1985), as clulas de Sertoli tumorais deste caso apresentaram marcao. possvel que as clulas de Sertoli normais do gato possuam vimentina cujos eptopos estejam mascarados por outras molcu- las (ies, protenas) e que se d a exposio desses ep- topos com a transformao tumoral. Outra hiptese ser uma possvel alterao estrutural do eptopo com a alte- rao neoplsica (Schaafsma et al., 1989). A marcao das clulas neoplsicas pelos soros pri- mrios anti-NSE e anti-vimentina mostrou-se seme- lhante que se observa no sertolinoma do co (Patnaik e Mostof, 1993). Nesta espcie, as clulas tumorais do seminoma no so marcadas pelo soro anti-NSE e a marcao citoplsmica pelo soro anti-vimentina no homognea, apresentando-se sob a forma de um halo perinuclear (Patnaik e Mostof, 1993). interessante referir-se que, no seminoma humano, as clulas tumo- rais so marcadas pelo soro anti-NSE (Ujie e Monma, 1991), que, por sua vez, tambm marca alguns sertoli- nomas (Bufo et al., 1999). Os agregados de clulas volumosas de citoplasma vacuolizado observados no tumor primrio correspon- dem a clulas de Sertoli neoplsicas de citoplasma car- regado de fnas gotculas lipdicas, como a anlise imu- nocitoqumica mostrou (citoplasma positivo ao soro anti-NSE). A marcao heterognea ao longo do corte das clu- las tumorais pelos anticorpos anti-NSE e Vim 3B4 explica-se pela m conservao dos eptopos dos res- pectivos antignios, que caracterstica da fxao pelo formol a 10 %, sendo neste caso agravada pelo uso de formol no neutralizado (Battifora, 1991; Allsbrook e Simms, 1992; Werner et al., 2000). A conservao dos eptopos da vimentina era particularmente defciente, visto que os controlos internos positivos (fbroblastos, clulas endoteliais) no foram marcados, enquanto que, num controlo externo positivo (endotlios, linfcitos e adipcitos de um corte de apndice cecal humano), a marcao foi do tipo ++++. Outro ponto a assinalar o criptorquidismo unila- teral observado neste caso. Para Burke (1976), uma situao que est longe de ser pouco comum. Contudo, Millis et al. (1992), num grupo de 1345 gatos, apenas detectaram 1,7 % de criptorquidismo. Segundo estes autores, desconhece-se presentemente se os testculos ectpicos felinos esto sujeitos a sofrer transformao neoplsica, tal como ocorre no co. Devido ao que se observa nesta ltima espcie, Burke (1976) recomenda a remoo cirrgica de testculos ectpicos no gato. No co, a percentagem de sertolinomas que metasti- zam baixa (entre 2 e 15 % - Withrow e Reeves, 1996). Neste caso, notava-se metastizao disseminada pelo corpo; j foram referidos casos de sertolinomas no gato com metstases (Meier, 1956; Baptista e Silva, 1985; OKeefe, 1995). 25 a 50 % dos ces com sertolinoma apresentam sinais de feminizao devido a um aumento de secre- o de estrogneos pelas clulas de Sertoli neoplsicas (Withrow e Reeves, 1996). Estas clulas, no indivduo normal, segregam quantidades mnimas de estrogneos para o sangue (Guyton, 1986; Wrobel e Dellmann, 1993). No gato do presente caso, no foram observados sinais de hiperestrogenismo, como ginecomastia, alo- pcia simtrica do abdmen ou ditese hemorrgica. A prstata no foi observada microscopicamente, mas o aspecto macroscpico no apresentava alteraes dignas de registo (a metaplasia escamosa muitas vezes provoca um aumento de volume do rgo). Segundo o sistema TNM adaptado para os animais domsticos (Johnston, 1993), o tumor deste caso classifcado como T3NXM1. de referir que foi o exame imunocitoqumico que permitiu o estabeleci- mento do staging T3 (invaso da rete testis pela neo- plasia). Devido existncia de inmeros ndulos de pequenas dimenses no espao retroperitoneal, no se pde avaliar os linfonodos regionais, de onde o NX. Agradecimentos O autor deseja agradecer ao Sr. Prof. Dr. Jorge Soares e Sra. Prof. Dr. Odette de Almeida, respectivamente ex-Director e Directora do Servio de Anatomia Pato- lgica do Instituto Portugus de Oncologia Francisco Gentil, de Lisboa, por terem gentilmente disponibili- zado os meios para a execuo das marcaes imuno- citoqumicas, Sra. D. Paula Cardoso, que as realizou, ao Prof. Dr. Fernando Bernardo, pela digitalizao de RPCV (2002) 97 (542) 87-92 J. F. Silva 91 92 algumas imagens e Dr. Sandra de Jesus, pela apre- sentao do caso. Bibliografa ACHTSTTTER, T., MOLL, R., MOORE, B. E FRANKE, W.W. (1985). Cytokeratin polypeptide patterns of different epithelia of the human male urogenital tract: immunofuorescence and gel electrophoretic studies. J Histochem Cytochem, 33, 415-426. ACLAND, H.M. (2000). Reproductive System: Male. In: Thomsons Special Veterinary Pathology. 3 edio. Editores: W.W. Carlton e M.D. McGavin. Mosby-Year Book, Inc.(St. Louis), 635-652. ALLSBROOK, W.C. E SIMMS, W.W. (1992). Histochemistry of the prostate. Hum Pathol, 23, 297-305. BAPTISTA, R. E SILVA, M.C. (1985). Blastomas dos animais - dados estatsticos. Repositrio de Trabalhos do Laboratrio Nacional de Investigao Veterinria, 17, 95-110. BATTIFORA, H. (1991). Assessment of antigen damage in immunohistochemistry (the vimentin internal control). 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