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EMBRIOLOGIA

E
BIOLOGIA DO DESENVOLVIMENTO


AULAS PRTICAS


Jos Manuel Antunes Ferreira da Silva







FMV-UTL
LISBOA
2012
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1 TEMA
ALGUMAS REGRAS A OBSERVAR NO USO CORRECTO DO
MICROSCPIO FOTNICO (PTICO)

Estas regras j foram referidas na 2 Aula Prtica de Histologia I. Com
vista obteno dos resultados ideais na observao microscpica por meio
da consolidao (recapitulao) das regras inerentes, nunca demais recordar
essas regras. A prtica traz a perfeio.

1. POSIO DO MICROSCPIO
a. Deve estar um pouco afastado da borda da mesa de trabalho.
b. Se for monocular, convir que esteja um pouco esquerda do
observador, utilizando este o olho esquerdo, de preferncia, na
observao microscpica. direita do microscpio poder ser
colocado um caderno para tomada de apontamentos e realizao
de desenhos e esquemas.
c. No caso de o observador ser canhoto e o microscpio ser
monocular, as posies indicadas em b. so invertidas.

2. POSIO DA PREPARAO MICROSCPICA
a. Apoiada na platina.
b. Emoldurada pelas sobreplatinas e devidamente imobilizada pela
pina da sobreplatina dos deslocamentos laterais.
c. A lamela deve estar voltada para cima (verificar sempre!).
d. O objecto a observar deve intersectar o eixo ptico do
microscpio. Para se evidenciar a zona, acende-se a fonte
luminosa do microscpio e sobe-se cuidadosamente o
condensador o mais alto possvel (cuidado - devido a folgas nas
engrenagens causadas pelo manuseamento continuado dos
microscpios com fins didcticos, em alguns microscpios o
condensador sobe mais do que aquilo que foi projectado e
colidem com a preparao microscpica). O condensador
projecta na lmina um crculo luminoso no centro do qual passa o
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eixo ptico do microscpio. Seguidamente, coloca-se o objecto no
centro desse crculo por meio de deslocamentos imprimidos
lmina pelas sobreplatinas.

3. POSIO DO OBSERVADOR
a. Sentado de forma a manter uma posio ergonomicamente
correcta (evitando torcer o tronco de maneira a evitar, a longo
prazo, vcios de conformao no sistema locomotor) para a
observao, que sempre um pouco demorada.
b. Se se utilizar um microscpio binocular, deve-se ajustar a
distncia entre as duas oculares at se observar o campo
microscpico perfeitamente e sem cansao visual (sensao de
olhos tortos).
c. Se for empregado um microscpio monocular, convir utilizar-se o
olho esquerdo na observao, no caso de se ser destro (contudo,
no caso de o observador no conseguir assimilar este hbito,
poder observar com o olho direito). O olho que no empregue
na observao ao microscpio deve estar aberto; caso contrrio,
a contraco continuada dos msculos da regio ocular poder
causar cansao e mesmo dor em exploraes microscpicas
prolongadas.
d. O observador deve sempre ter uma mo nos parafusos de
deslocao das sobreplatinas e a outra no parafuso
micromtrico (esta regra particularmente importante durante a
observao com as objectivas de x40 e x100, devido
profundidade do campo microscpico).
e. O caderno de notas e desenhos, no caso dos destros, deve estar
direita do observador; nunca confiar na memria!

4. POSIO DO CONDENSADOR
a. O mais subido possvel (contudo, de ter em conta a nota da
alnea 2.d).
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b. Ligeiramente descido se, durante a observao microscpica, se
v a imagem de poeiras depositadas na lente frontal do
condensador.

5. POSIO DO DIAFRAGMA-RIS
a. No regular a intensidade luminosa do campo microscpico
por meio do diafragma-ris (erro crasso infelizmente comum)!
Para esses efeitos, h dispositivos prprios (restatos). de
lembrar que a funo do diafragma-ris de eliminar os raios
perifricos do feixe luminoso que atravessa o objecto, visto que
os pontos da imagem transportada por eles esto mais sujeitos s
aberraes devidas s lentes.
b. Pode adaptar-se

6. MODO DE FOCAR O MICROSCPIO PARA OBJECTIVAS A SECO

7. MUDANA DE OBJECTIVA

8. FIM DA OBSERVAO

9. UTILIZAO DA OBJECTIVA DE IMERSO

10. MODO DE EXPLORAR UMA PREPARAO MICROSCPICA

11. MANEIRA DE REGISTAR A LOCALIZAO DE UM OBJECTO NA
PREPARAO

12. COMO ASSINALAR A UM SEGUNDO OBSERVADOR A
LOCALIZAO DE UM PORMENOR NO CAMPO MICROSCPICO

13. CORRECO DE DEFICINCIAS NA OBSERVAO
MICROSCPICA

14. ALGUNS CUIDADOS A TER COM O MICROSCPIO
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2 TEMA
IDENTIFICAO DAS CLULAS DA LINHAGEM SEMINAL
MASCULINA POR OBSERVAO DE PREPARAES
MICROSCPICAS

OBJECTIVOS

1) Identificao dos cortes de tubos seminferos ao microscpio fotnico.
2) Identificao das clulas da linhagem germinal:
2.1) Espermatognias de tipo A;
2.2) Espermatognias de tipo B;
2.3) Espermatcitos I;
2.4) Espermtides ou espermatdios;
2.5) Espermatozides;
3) Identificao das clulas de Sertoli.
4) Relacionar a topografia das clulas da linhagem germinal no epitlio seminal
com o seu grau de desenvolvimento.


GENERALIDADES

A espermatognese ocorre no testculo, no interior dos tubos
seminferos. Estes so envolvidos externamente por uma membrana basal que
suporta o epitlio seminal, constitudo por dois tipos de clulas:
a) Clulas da linhagem espermatognica;
b) Clulas de suporte das clulas da linhagem espermatognica clulas de
Sertoli.

As clulas da linhagem espermatognica so:
1) Espermatognias de tipo A esto adjacentes membrana basal do tubo
seminfero. O seu ncleo circular ou oval e a cromatina est moderadamente
condensada, dando ao ncleo uma cor escura.
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2) Espermatognias de tipo B tambm esto prximas da membrana basal
do tubo seminfero. O ncleo, circular ou oval, plido, pois encerra cromatina
descondensada; no interior do ncleo, nota-se um nuclolo evidente.
3) Espermatcitos de 1 ordem (espermatcitos I) Esto situados mais no
interior do tubo seminfero. Como a profase da 1 diviso meitica muito
longa (estadios leptteno, zigteno, paquteno e diplteno, diacinese), o ncleo
dos espermatcitos I est, na maior parte dos casos, em profase I. Assim, a
cromatina dos ncleos est condensada em filamentos enrolados ou em
crostas, que correspondem s ttradas de cromatdeos.
4) Espermatcitos de 2 ordem (espermatcitos II) estes entram
rapidamente na 2 diviso meitica, pelo que praticamente no se observam no
epitlio dos tubos seminferos.
5) Espermtides ou espermatdios esto prximos do lmen central do tubo
seminfero. Tm ncleos redondos e pequenos (clulas haplides), que
apresentam cor clara ou escura.
6) Espermatozides observam-se os seus ncleos em forma de bastonete,
no bordo apical do epitlio seminal. Por vezes, os ncleos dos
espermatozides esto reunidos em pequenos grupos, formando uma espcie
de penacho.

medida que as clulas da linhagem germinal vo avanando no seu
processo de diferenciao, elas vo-se aproximando do lmen do tubo
seminfero (e, por conseguinte, vo-se afastando da membrana basal do tubo
seminfero).
As clulas de Sertoli encerram um ncleo claro, de forma oval ou
triangular, sendo o eixo maior do ncleo perpendicular membrana basal do
tubo seminfero.
Os espermatozides tambm podem ser observados, em grupos
numerosos, no lmen do epiddimo. Neste caso, consegue-se observar o
ncleo (componente principal da cabea do espermatozide) e a cauda.

CRONOLOGIA DA ESPERMATOGNESE

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As primeiras clulas da linhagem germinal, as clulas germinais primordiais
(CGP), diferenciam-se no epiblasto. Em seguida, migram para a parede do
saco vitelino e, finalmente, efectuam uma segunda migrao para os esboos
das gnadas. A chegam cerca da 6 semana do desenvolvimento intra-
embrionrio na espcie humana. A chegada das CGP induz a diferenciao da
gnada indiferente em testculo.
As CGP mantm-se indiferenciadas at maturao sexual do indivduo. Nesta
altura, diferenciam-se em espermatognias de tipo A, que so clulas
diplides (2n cromossomas) e em que cada cromossoma, logo antes da
mitose (perodo G2 da interfase) composto por dois cromatdios
(cromossoma bicromatdico). Nesta altura, a quantidade de ADN de 4c (c
a quantidade de ADN normalmente em picogramas existente no ncleo do
espermatozide).
Nota: uma clula diplide pode ter 2c ADN, se os cromossomas forem
monocromatdicos (perodo G1) ou 4c ADN, no caso de os cromossomas
serem bicromatdicos.
A espermatognia de tipo A uma clula auto-renovvel, isto , pode dar
origem por diviso mittica a duas espermatognias de tipo A. Assim se
mantm uma reserva constante deste tipo celular ao longo do perodo
sexualmente activo, desde a maturao sexual at andropausa.
Algumas espermatognias do tipo A, aps alguns ciclos mitticos, diferenciam-
se em espermatognias do tipo B, que tambm efectuam algumas mitoses.
O perodo da linhagem germinal constitudo pelas espermatognias dos tipos A
e B em actividade mittica o perodo de multiplicao da
espermatognese.
Algumas espermatognias de tipo B deixam de ter actividade mittica e
entram numa fase de crescimento citoplsmico, diferenciando-se em
espermatcitos de 1 ordem ou espermatcitos I, que efectuam a replicao
do seu ADN. Este o perodo de crescimento da espermatognese. Os
espermatcitos I so clulas diplides e os seus cromossomas so
bicromatdicos (4c ADN).

Seguidamente, vem o perodo de maturao da espermatognese, em que
cada espermatcito I sofre duas divises celulares sucessivas, sem replicao
de ADN:
1) Uma primeira diviso reducional o espermatcito I d origem a duas
clulas-filhas, os espermatcitos de 2 ordem ou espermatcitos II, que so
haplides (n cromossomas), de cromossomas bicromatdicos (quantidade 2c
ADN). Esta diviso tem 4 fases (profase I, metafase I, anafase I e telofase I). A
profase I muito longa havendo o emparelhamento dos cromossomas
homlogos bivalentes, ttrada de cromatdios e crossing-over (troca de
material gentico entre os homlogos paterno e materno).
2) Uma segunda diviso equacional semelhante a uma mitose, tambm com
quatro fases: profase II, metafase II, anafase II e telofase II. As clulas-filhas
resultantes, os espermatdios ou espermtides, so clulas haplides de
cromossomas monocromatdicos (quantidade 1c ADN, isto , c ADN).
Cada espermatdeo sofre um processo de diferenciao em que,
essencialmente, se observa:
Condensao da cromatina;
Perda da grande maioria do citoplasma;
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Edificao de um flagelo.
A clula resultante o espermatozide, que ainda ter de sofrer algumas
fases extra-testiculares de maturao bioqumica at ter capacidade fertilizante.

PREPARAES MICROSCPOCAS

Lmina P1A (Histologia II).
Os cortes de testculo examinados com pequena ampliao mostram um
grande nmero de perfis de tubos seminferos seccionados em variadas
direces. Assim, estes perfis apresentam contornos diferentes (circulares,
ovais ou alongadas). No interior dos tubos seminferos, deve distinguir dois
tipos de clulas, as clulas da linhagem espermatognica (espermatognias
A e B, espermatcitos I, espermatdios e espermatozides) e as clulas de
Sertoli (clulas de suporte das clulas da linhagem espermatognica).

Lmina P2 (Histologia II).
Os cortes de testculo examinados com pequena ampliao mostram um
grande nmero de perfis de tubos seminferos seccionados em variadas
direces. Assim, estes perfis apresentam contornos diferentes (circulares,
ovais ou alongadas). No interior dos tubos seminferos, deve distinguir dois
tipos de clulas, as clulas da linhagem espermatognica (espermatognias
A e B, espermatcitos I, espermatdios e espermatozides) e as clulas de
Sertoli (clulas de suporte das clulas da linhagem espermatognica).

Lmina - Testculo de co.
Tubos seminferos.
Tente identificar as vrias clulas da linhagem germinal.

Lmina Testculo de co.
Tente identificar os espermatcitos de 1 ordem. Porque tm estas clulas a
cromatina disposta de forma to peculiar?

Lmina - Testculo de co.
Espermatognias ncleo assente na membrana basal dos tubos
seminferos; algumas tm o ncleo escuro, outras apresentam-no claro com
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nuclolo evidente. Espermatcitos de 1 ordem (espermatcitos I) ncleo
grande, vesiculoso, com cromatina disposta em grumos. Espermatdios
ncleos redondos e pequenos, sem nuclolo. Espermatozides s se nota a
cabea na maior parte dos perfis de tubos seminferos.

Lmina - Testculo de co.
Clulas da linhagem germinal:
1) Espermatognias;
2) Espermatcitos de 1 ordem;
3) Espermatcitos de 2 ordem (existncia efmera; no se conseguem
identificar);
4) Espermatdios;
Espermatozides.

Lmina - Testculo de co.
Nos tubos seminferos, a espermatognese efectua-se em fases sucessivas,
conforme o sector do tubo seminfero.
Por isso, alguns cortes de tubos seminferos no encerram espermatozides.

Lmina - Testculo de co.
Notar o aspecto caracterstico dos ncleos dos espermatcitos de 1 ordem:
ncleos grandes, redondos, vesiculosos (claros), com a cromatina disposta em
grumos e em fios. Porqu este aspecto da cromatina?

Lmina - Testculo de co.
Animal de 4 anos. Testculos ectpicos (em posio anormal) localizados na
regio inguinal, subcutneos.
A populao celular dos tubos seminferos reduz-se a clulas de Sertoli e
espermatognias (aspecto semelhante ao do testculo pr-pbere).

Lmina Testculo de co.
Animal de 4 anos (Fox Terrier).
Testculo ectpico (intra-abdominal).
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A espermatognese s se desenrola at ao estadio de espermatcito de 1
ordem.

Lmina - Testculo de co.
No lmen do tubo seminfero, os espermatozides esto reunidos em grupos,
assemelhando-se cada grupo a um penacho (esta disposio dos
espermatozides nem sempre se observa).

Lmina - Testculo de co.
Tubo seminfero:
Membrana basal
Espermatognias

Espermatcitos de 1 ordem

Espermatdios

Espermatozides (dispostos em penachos)
Lmen central.

Lmina - Testculo de co.
Tente identificar as vrias fases da espermatognese.

Lmina - Testculo de co.
Colorao pelo mtodo de Giemsa - Esfregao.
As clulas dos tubos seminferos encontram-se espalhadas pela lmina, no se
observando a arquitectura dos tubos seminferos. Os ncleos dos
espermatcitos de 1 ordem so fceis de identificar, pois observam-se os
cromossomas homlogos emparelhados (ttradas de cromatdios), dispostos
em vrias direces.
Objectiva x100 imerso no mudar a objectiva.

Lmina Testculo de gato.
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Hematoxilina-eritrosina No se consegue individualizar as clulas de Sertoli
dos tubos seminferos.

Lmina - Testculo de gato.
Marcao imunocitoqumica com soro anti-NSE (neuron-specific enolase).
Mesmo gato da preparao microscpica anterior.
O citoplasma das clulas de Sertoli destaca-se bem com a sua cor castanha-
anarelada, com o aspecto de farrapos que envolvem as clulas da linhagem
germinal, de citoplasma no marcado.

Lmina - Testculo de gato.
Marcao imunocitoqumica com anticorpo anti-NSE (neuron-specific
enolase).
O citoplasma das clulas de Sertoli foi marcado (cor castanha-amarelada),
rodeando as clulas germinais, cujo citoplasma no foi marcado.
Os ncleos dos espermatcitos de 1 ordem so bem visveis, devido s suas
caractersticas morfolgicas.

Lmina - Testculo de gato.
Marcao imunocitoqumica com anticorpo anti-NSE (neuron-specific
enolase).
marcado o citoplasma das clulas de Sertoli (castanho-amarelado), que
forma um rendilhado entre as clulas da linhagem germinal (cujo citoplasma
no marcado).

Lmina - Testculo de co.
Cortes de tubos seminferos em fases diferentes da espermatognese.
Por isso, em alguns deles no se notam espermatozides.

Lmina Epiddimo de co.
Revestido por epitlio pseudostratificado com estereoclios.
Lmen de vrios cortes do epiddimo contendo numerosos espermatozides.

Lmina Epiddimo de co.
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Presena de espermatozides no lmen do epiddimo. A cabea dos
espermatozides pode estar colocada de frente ou de perfil. Notam-se as
peas intermdia e principal.
Objectiva x100 imerso no mudar a objectiva.

Lmina P13 (Histologia II).
Espermatozides (esfregao) As cabeas dos espermatozides s esto
colocadas de frente.

Lmina Testculo de lobo (estatuto hierrquico mega).
Testculo em inactividade sexual.
Notam-se clulas de Sertoli, de ncleos pequenos e alongados,
espermatognias (ncleos redondos) e raros espermatcitos de 1 ordem
(ncleos redondos e grandes).

BIBLIOGRAFIA
Young B, Lowe JS, Stevens A & Heath JW (2006) - Wheaters Functional
Histology: A Text and Colour Atlas. 5 edio. Churchill Livingstone Elsevier.
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3 TEMA
IDENTIFICAO DAS CLULAS DA LINHAGEM SEMINAL
FEMININA POR OBSERVAO DE PREPARAES
MICROSCPICAS

OBJECTIVOS
1) Identificar um folculo ovrico em corte histolgico de ovrio.
2) Identificar o tipo de folculo ovrico (primordial, primrio, secundrio, tercirio
e tercirio maduro ou folculo de de Graaf.
3) Identificar o ocito e a zona pelcida. No objectivo desta aula a
identificao das tecas interna e externa do folculo ovrico nem a identificao
de folculos atrsicos.
4) No objectivo desta aula a identificao dos corpos hemorrgicos e corpos
amarelos ou lteos.
5) Identificar se o ovrio de Mamfero ou de Ave.

BASES TERICAS
O ocito uma clula redonda e volumosa, de citoplasma apresentando
uma fina pontuao eosinfila. O ncleo claro (incolor) e encerra um nuclolo
fortemente corado. Devido ao volume desta clula, o corte histolgico no
atinge por vezes o ncleo, aparecendo o ocito aparentemente sem ncleo. O
ocito envolvido por clulas de origem ovrica, as clulas foliculares. O
conjunto ocito clulas foliculares constitui o folculo ovrico.

De acordo com as caractersticas morfolgicas das clulas foliculares, os
folculos ovricos podem classificar-se em:
Folculos primordiais o ocito est rodeado por uma fiada de clulas
foliculares achatadas, que formam um epitlio simples pavimentoso.
Folculos primrios o ocito rodeado por uma camada de clulas
foliculares que adquiriram forma cubide e que formam, portanto, um epitlio
simples cbico. Em alguns folculos primrios, j se pode observar a zona
pelcida.
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Folculos secundrios o ocito envolvido por clulas foliculares
cubides dispostas em vrias camadas (epitlio estratificado cbico). O
conjunto das clulas foliculares chama-se granulosa, pelo que estas clulas
tambm so denominadas clulas da granulosa. Entre o ocito e a granulosa,
observa-se a zona pelcida, membrana espessa e acidfila que reveste
exteriormente o ocito.
Folculos tercirios ou antrais na granulosa, comeam a surgir espaos
intercelulares, que acabam por convergir numa nica cavidade, o antro
folicular. Nos folculos tercirios em grau de desenvolvimento mais avanado,
a zona da granulosa que encerra o ocito faz salincia para o antro folicular,
constituindo o cumulus oophorus. As clulas do cumulus oophorus mais
prximas do ocito chamam-se, no seu conjunto, corona radiata. Entre estas
clulas e o ocito, nota-se uma ntida zona pelcida.
Folculos tercirios maduros ou de de Graaf este folculo est prestes a
sofrer a ovulao. O antro folicular tm as suas dimenses mximas. bem
evidente o cumulus oophorus. A zona pelcida ntida.

Os folculos ovricos no se dispem homogeneamente no ovrio.
Ocupam a zona perifrica, isto , o crtex, enquanto que a medula (zona
central) encerra vrios vasos sanguneos. Portanto, a observao microscpica
do ovrio deve ser feita prximo da superfcie deste rgo. Outras estruturas,
cujo estudo no faz parte dos objectivos da presente aula prtica, podem
dificultar o estudo dos folculos ovricos, pois podem distrair a ateno do
observador: folculos ovricos em atrsia, corpos amarelos ou lteos
(funcionais e em regresso) e as clulas intersticiais (glndula intersticial). O
observador deve estar ciente da sua presena, mas no deve perder tempo na
sua observao.

CRONOLOGIA DA OOGNESE
A oognese , nos seus princpios gerais, semelhante espermatognese,
mas observam-se diferenas importantes sob os pontos de vista cronolgico e
biolgico.
Tal como na gametognese masculina, as clulas germinais primordiais (CGP)
formam-se no epiblasto, migrando primeiro para a parede do saco vitelino e,
da, para os esboos gondicos. Quando as CGP chegam s gnadas
indiferentes, diferenciam-se em oognias. Estas clulas so diplides (2n
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cromossomas) e, antes de entrarem em mitose, os seus cromossomas so
bicromatdicos (quantidade 4c de ADN). As oognias efectuam vrias mitoses.
A certa altura, algumas diferenciam-se em ocitos de 1 ordem ou ocitos I.
Estas clulas so tambm diplides e os seus cromossomas so
bicromatdicos (4c ADN) e entram na profase da 1 diviso meitica, ficando
paradas no ltimo estadio (diacinese). A maior parte das oognias continua a
multiplicar-se mitoticamente. No 5 ms de vida intra-uterina (na espcie
humana), o nmero total de clulas da linhagem germinal mximo
(7.000.000).
A maior parte destas clulas sofre apoptose (atrsia). Na altura do nascimento,
os ovrios apenas encerram 600.000 a 800.000 ocitos I parados em
diacinese. Cada um deles est rodeado por clulas foliculares, formando um
folculo ovrico.
At maturidade sexual, continua a apoptose macia de ocitos I, de modo
que na altura do primeiro ciclo sexual (menstrual na mulher) os ovrios s
contm cerca de 40.000 ocitos I.
No primeiro ciclo menstrual, entre 15 e 20 ocitos I parados em diacinese
comeam a desenvolver-se rapidamente, juntamente com as respectivas
clulas foliculares. Perto da ovulao, d-se o pico de hormona liuteinizante
(LH) adeno-hipofisria (secreo intensa e de curta durao de LH), o que faz
com que um dos ocitos termine a 1 diviso da meiose (diviso reducional).
Formam.se duas clulas-filhas de tamanhos muito diferentes:
1. Uma recebe a grande maioria do citoplasma. o ocito de 2 ordem ou
ocito II. Esta clula haplide (n cromossomas) e os seus cromossomas
so bicromatdicos (quantidade 2c de ADN). Entra imediatamente na 2
diviso meitica, parando em metafase (metafase II).
2. Outra recebe pouco citoplasma o 1 glbulo polar (ou 1 corpsculo
polar). Tal como o ocito II, tem n cromossomas bicromatdicos. Devido
escassez de citoplasma, esta clula pode ou no efectuar a segunda
diviso meitica.
D-se a ovulao: o ocito II e o 1 glbulo polar (ambos envolvidos pela zona
pelcida) so ejectados do ovrio. Os outros ocitos I que tinham iniciado um
desenvolvimento acelerado no incio do 1 ciclo menstrual degeneram
juntamente com as respectivas clulas foliculares (atrsia folicular).
O ocito II s completa a segunda diviso da meiose se se fundir com um
espermatozide. Caso contrrio, degenera nas vias genitais femininas cerca de
24 horas aps a ovulao.
Se houver fertilizao, o ocito II termina a segunda diviso meitica dando
origem a duas clulas desiguais:
O vulo, que herda a maior parte do citoplasma, no qual se encontra o
espermatozide (logo, nos Mamferos e tambm nas Aves, o vulo no tem
existncia individualizada). uma clula haplide com cromossomas
monocromatdicos (quantidade c de ADN).
O 2 glbulo polar ou 2 corpsculo polar, possuindo pouco citoplasma. Esta
tambm uma clula com n cromossomas monocromatdicos.
No segundo ciclo sexual, novamente 15 a 20 ocitos I sero recrutados para
realizar um desenvolvimento acelerado, dos quais s um atingir a ovulao.
Assim, na espcie humana, entre o incio da vida sexual e a menopausa, s
entre 400 e 500 ocitos sero ovulados.

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PREPARAES MICROSCPICAS

Lmina R1 (Histologia II) Ovrio de Mamfero.
Observe o ovrio com fraca ampliao e procure distinguir uma parte perifrica,
o crtex, contendo formaes arredondadas, os folculos ovricos, e uma
zona mais interna, a medula, onde se encontram numerosos vasos
sanguneos.

Lmina R0 (Histologia II) Ovrio de gata recm-nascida.
Cordes de ocitos I (cordes de Valentin- Pflger) perpendiculares
superfcie do ovrio. Notam-se alguns ocitos de 1 ordem na primeira profase
da meiose (cromatina disposta em grnulos e em fios).

Lmina R2 (Histologia II) Ovrio de Mamfero impbere.
Cordes de Valentin-Pflger.
No interior do ovrio, notam-se folculos ovricos, constitudos por um ocito de
1 ordem e uma fiada de clulas foliculares (achatadas ou cbicas) a rode-lo.
Clulas foliculares achatadas folculo primordial.
Clulas foliculares cbicas folculo primrio.

Lmina A4 (Histologia I e II) Ovrio de Mamfero.
Procure identificar os diferentes tipos de folculos: folculos com uma camada
de clulas foliculares folculos primrios; folculos em crescimento, com
vrias camadas de clulas foliculares folculos secundrios, tercirios e
folculos maduros ou de de Graaf. Nos folculos maduros e em crescimento
procure identificar a zona pelcida, em torno do ocito, e as tecas foliculares,
em torno do folculo. Na preparao A4 pode encontrar, igualmente, um corte
de trompa uterina.

Lmina 343/06 Ovrio de gata.
Folculos primordiais.
Folculos em atrsia.

Lmina 1947/05 B Ovrio de cadela.
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Folculos primordiais e secundrios.
Folculos tercirios.
Folculos em atrsia.

Lmina 2074/05 - Ovrio de cadela.
Folculo secundrio ocito (o corte no atingiu o ncleo) rodeado por espessa
zona pelcida eosinfila (rosada pela colorao da hematoxilina-eritrosina). As
clulas foliculares, cubides, dispem-se em vrias camadas (o conjunto das
clulas foliculares denomina-se granulosa).
No mover a platina do microscpio.

Lmina 211/06 - Ovrio de cadela.
Folculos secundrios. Um deles encerra dois ocitos.
Corpos lteos funcionais.

Lmina 128/07 Ovrio de cadela.
Folculos ovricos em vrios estadios de desenvolvimento.
Corpo lteo funcional.
Folculo ovrico encerrando dois ocitos.

Lmina 473/05 Ovrio de cadela.
Folculos primordiais.
Folculos primrios.
Folculos secundrios.
Folculos atrsicos.
Corpo lteo em involuo.

Lmina 481/05 Ovrio de cadela.
Folculo maduro (de de Graaf).
Antro folicular bem desenvolvido.
A rea de clulas da granulosa (isto , clulas foliculares) que envolvem o
ocito faz salincia no antro folicular e forma o cumulus oophorus.
O folculo apresenta-se em incio de atrsia (ligeira desorganizao das clulas
foliculares).
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Lmina 1557/ - Ovrio de gata.
Folculo maduro (de de Graaf).
Antro folicular bem desenvolvido.
A rea de clulas da granulosa (isto , clulas foliculares) que envolvem o
ocito faz salincia no antro folicular e forma o cumulus oophorus.
Zona pelcida bem evidente (acidfila).

Lmina 1802/06 Ovrio de gata.
Folculos primordiais perto da superfcie do ovrio.
Corpo hemorrgico.

Lmina 2060/06 Ovrio de gata.
Folculos primordiais cada ocito (encerrando um ncleo com respectivo
nuclolo) envolvido por uma camada de clulas achatadas (clulas
foliculares), que mal se nota.
No mudar o campo microscpico.

Lmina 187/07 Ovrio de gata.
Nesta preparao microscpica, nota-se bem a teca interna (que envolve
externamente a camada granulosa), pois os seus capilares esto cheios de
samgue.
A rodear a teca interna (vascular), nota-se a teca externa (fibrosa), que
irregular e, por isso, difcil de definir.

Lmina 240/07 Ovrio de gata.
Folculos maduros ou de de Graaf.
Em alguns no se nota o ocito, porque o corte no o atingiu.

Lmina 1230/06 Ovrio de cadela.
Folculos primordiais.
Folculos primrios.
Folculos secundrios.
Folculos tercirios.
19
Folculo encerrando dois ocitos (cada um rodeado por uma zona pelcida).
Folculos em atrsia.
Corpo lteo funcional.

Lmina 473/05 Ovrio de cadela.
Folculos primordiais, primrios e secundrios. Folculo tercirio em fase inicial
de atrsia folicular.

Lmina 1947/05 - Ovrio de cadela.
1) Folculos primordiais ocito envolvido por uma fiada de clulas foliculares
achatadas.
2) Folculos secundrios ocito envolvido por vrias fiadas de clulas
foliculares cbicas (granulosa). Nota-se bem a zona pelcida.
3) Folculo tercirio antro folicular. Zona pelcida.

Lmina - Ovrio de papagaio (Ave).
O aspecto muito diferente do observado nos Mamferos. Os ocitos
apresentam vrios tamanhos (conforme a fase de acumulao de vitelo no
citoplasma). Em alguns ocitos nota-se o ncleo que, frequentemente, est
separado do citoplasma por um espao artefactual.
A camada de clulas foliculares sempre pouco desenvolvida (epitlio cbico
simples ou biestratificado), independentemente do grau de desenvolvimento do
ocito.

Lmina - Ovrio de papagaio (Ave).
Os ocitos so sempre envolvidos por apenas uma ou duas fiadas de clulas
foliculares.

Lmina 289/07 Ovrio de escinco de lngua azul (Rptil Surio).
Ocitos telolecticos envolvidos por estreita camada de clulas foliculares de
volumes desiguais.

Lmina 826/05 B Ovotestis. Candeo Basset Hound, 7 meses.
Folculos primordiais, primrios e secundrios.
20
Tubos seminferos sem espermatognese.

Lmina 1819/04 Ovotestis. Candeo Basset Hound. 2 anos.
Folculos ovricos em vrios estadios de desenvolvimento.
Folculo ovrico encerrando dois ocitos.
Corpos lteos em involuo.
Tubos seminferos sem espermatognese.

BIBLIOGRAFIA
Young B, Lowe JS, Stevens A & Heath JW (2006) - Wheaters Functional
Histology: A Text and Colour Atlas. 5 edio. Churchill Livingstone.
21
4 TEMA
OBSERVAO DO VULO TELOLECTICO DA GALINHA E SEUS
INVLUCROS
OBSEVAO DE OVOS EMBERIONADOS

OBJECTIVOS
1) Saber distinguir o vulo telolectico de Ave das estruturas envolventes
(albmen, membranas da casca, casca).
2) Identificar, no vulo, o vitelo e o disco germinativo.
3) Identificar os diversos tipos de invlucros; albmen fluido, albmen denso,
membranas da casca (interna e externa), cmara de ar e casca.

BASES TERICAS
O vulo da galinha (assim como das outras Aves, Rpteis e Mamferos
Monotrmatos [ornitorrinco e equidna]) um vulo telolectico. , pois, uma
clula volumosa, com cerca de 3 cm de dimetro, em que o citoplasma quase
totalmente ocupado por reservas nutritivas o vitelo ou deutolecito - de cor
amarela. O citoplasma funcional ou protolecito forma, junto com os
cromossomas, um pequeno crculo branco com 2 a 4 mm de dimetro, o
disco germinativo, adjacente membrana celular do vulo, chamada oolema.
Na altura da ovulao, a clula germinal feminina , tal como sucede nos
Mamferos, um ocito II bloqueado em metafase. expulso do ovrio rodeado
por uma fina membrana vitelina proteica, elaborada pelas clulas foliculares e
que cobre externamente o oolema, reforando-o.
A membrana vitelina um dos invlucros do ocito, tal como o albmen, as
calazas, as membranas da casca e a casca.
O albmen rodeia a membrana vitelina e um meio fluido transparente, incolor
e viscoso, com um grande teor em gua (88%). Apresenta trs camadas
concntricas:
Uma camada interna de albmen fluido, que rodeia a membrana vitelina;
Uma camada mdia de albmen denso, que se estende do plo mais
largo do ovo (coloquialmente falando) at ao plo nais esterito:
Uma canada externa de albmen fluido.
22
O albmen contm vrias protenas. A mais abundante a ovalbumina. Trs
outras protenas tm propriedades antibacterianas:
A lisozima desintegra a parede das bactrias gram-positivas;
A ovotransferrina liga-se ao ferro, impedindo a utilizao deste
oligoelemento pelas bactrias;
A avidina tem grande afinidade pela biotina (vitamina do complexo B),
impedindo a sua utilizao pelos microorganismos.
Duas outras protenas presentes no albmen, a ovomucina e a cistatina, tm
possivelmente aco antiviral.
Em dois pontos diametralmente opostos do ocito fixam-se duas estruturas
helicoidais proteicas de textura fibrosa, as calazas, que se fundem com a
membrana vitelina.
As membranas da casca, translcidas e de cor branca, contendo fibras
elsticas colocadas em vrias direces, cobrem externamente o albmen
(membrana interna) e a face interna da casca (membrana externa). Esto
estreitamente aderentes uma outra, excepto no plo mais largo do ovo,
onde se separam, formando um espao a cmara de ar.
A casca composta essencialmente (98%) por carbonato de clcio (CaCO
3
),
sob a forma de calcite. composta por:
Uma camada interna, a camada mamilar;
Uma camada externa, a camada esponjosa.
A superfcie externa da casca coberta por uma fina pelcula brilhante
glicoproteica, a cutcula.

Descrio detalhada do ovo
O vulo (na realidade, um ocito de 2 ordem) das Aves corresponde gema da
estrutura que coloquialmente se chama ovo e extremamente rico em reservas
mutritivas, sendo denominado de vulo telolectico.
uma clula muito volumosa, que apresenta uma membrana celular, o oolema,
reforada externamente por uma membrana acelular, a membrana vitelina. Esta
membrana no produzida pelo ocito, sintetizada pelas clulas foliculares que o
rodeiam no ovrio.
O citoplasma do ocito apresenta dois constituintes:
1. O citoplasma funcional, ou protolecito, que encerra os organitos celulares e o
ncleo haplide do ocito II. Este citoplasma st localizado superfcie do ocito,
formando uma pequena mancha branca com dimetro entre 1 e 3 mm, o disco
germinativo ou cicatrcula.
23
2. As reservas nutritivas, deutolecito ou vitelo. O vitelo constitudo por camadas
concntricas alternadas de:
2.1. Vitelo amarelo rico em lpidos e tem cor amarela-alaranjada devido
presena de pigmento carotenide. sintetizado durante o dia.
2.2. Vitelo branco na realidade incolor e de natureza proteica. sintetizado
durante a noite.
As camadas alternadas de vitelo branco e amarelo reflectem a sucesso dos dias e das
noites.
O centro do ocito ocupado por uma esfera de vitelo branco, a ltebra.
O citoplasma funcional (com o ncleo haplide includo) assenta numa almofada de
vitelo branco chamada ncleo de Pander. Este est ligado ltebra por um longo e
estreito cilindro de vitelo branco, o poo da ltebra, que perfura as camadas de vitelo
amarelo.
A membrana vitelina, como j foi referido, no pertence ao ocito propriamente dito,
uma das estruturas que envolvem esta clula.

O ocito liberta-se do ovrio esquerdo (a gnada direita rudimentar na maior parte das
Aves; uma das excepes o falco) por ruptura da parede deste rgo segundo uma
linha. Se um vaso sanguneo atravessa o local da linha de ruptura, d-se uma pequena
hemorragia (hemorragia de ovulao), ficando uma pequena quantidade de sangue
depositada superfcie da membrana vitelina ou suspensa no albmen. Este sangue
pode ter cor vermelha-viva ou castanha-ferruginosa, neste caso devido degradao da
hemoglobina.

Na ovulao, o ocito j terminou a primeira diviso da meiose, sendo portanto um
ccito de 2 ordem, como j foi referido. S se houver a fertilizao por um
espermatozide que se completa a segunda diviso meitica.

Ao longo do percurso do ocito pelo oviducto e tero, vo sendo adicionadas estruturas
com funes de alimentao e proteco. Estas estruturas so: as calazas, o albmen,
as membranas da casca (interna e externa), a casca e a cutcula.
Calazas so duas formaes helicoidais inseridas em duas reas diametralmente
opostas da membrana vitelina. Tm estrutura filamentosa e a sua funo manter o
disco germinativo voltado para cima, qualquer que seja a posio do ovo.
Albmen o que prosaicamente se designa de clara do ovo. essencialmente uma
soluo aquosa de protenas (88% de gua). A protena principal a ovalbumina. Esto
presentes outras protenas, estas com propriedades bacteriostticas ou bactericidas,
como a lisozima (que destri a parede celular das bactrias Gram-positivas), a
ovotransferrina (que fixa o ferro, tornando o acesso das bactrias a este io impossvel)
e a avidina (que fixa a biotina, vitamina do complexo B, um importante factor de
crescimento bacteriano). O albmen dispe-se em trs camadas concntricas em torno
do ocito:
Uma camada interna de albmen fluido;
Uma camada mdia de albmen denso;
Uma camada externa de albmen fluido.
Quando se quebra a casca dum ovoe se vaza o seu contedo, o albmen dispe-se em
dois andares: um mais prximo do ocito, constitudo por albmen denso, de maior
espessura e menor dimetro; outro, que se estende em torno do albmen denso,
constitudo pela juno das duas camadas de albmen fluido, e que tem menor
espessura e ocupa uma rea mais extensa.
24
Membranas da casca interna e externa. So compostas por material fibroso
semelhante elastina. Aderem estreitamente uma outra, excepto no plo mais rombo
do ovo; aqui, separam-se uma da outra, delimitando a cmara de ar. A face interna da
membrana interna contacta com o albmen em toda a sua extenso. A face externa da
membrana externa adere face interna da casca.
Casca uma fina camada constituda por 98% de carbonato de clcio cristalino e 2%
de material protico que estabiliza os cristais, impedindo que a casca seja
excessivamente quebradia. A casca porosa, o que permite as trocas gasosas entre o
embrio e o meio exterior.
Cutcula a fina camada glicoproteica que cobre a face externa da casca.

MATERIAL
Um tabuleiro de plstico.
Uma tesoura.
Uma pina bico-de-pato.
Um estilete.
Uma lupa estereoscpica.

ESTUDO DO OVO
1) Medir o eixo maior e o eixo menor da casca.
2) Com um instrumento rombo, dar uma pancada leve na face lateral do ovo,
de maneira a quebrar a casca mas mantendo intactas as membranas da
casca.
3) Retirar cuidadosamente os fragmentos de casca com a pina bico-de-pato.
4) Alargar o orifcio da casca (mantendo as membranas subjacentes
inclumes) at este ter cerca de 1,5 a 2 cm de dimetro.
5) Abrir um orifcio nas membranas com o estilete. No enterrar o estilete para
no danificar o vulo (gema).
6) A partir do orifcio criado, cortar a casca e membranas subjacentes segundo
um plano equatorial (perpendicular ao eixo maior do ovo).
7) Separar as metades da casca e verter o contedo no tabuleiro de plstico.
necessrio muito cuidado com a passagem do vulo pela linha de fractura
da casca, para evitar a ruptura da membrana vitelina (ruptura da gema).
8) Examinar o vulo e albmen depositados no tabuleiro
9) Medir o dimetro do vulo e identificar o disco germinativo e possveis
pontos de hemorragia da ovulao.
10) Identificar o albmen fluido, albmen denso e as calazas.
25
11) Identificar a cmara de ar.

Nos ovos embrionados, abre-se na casca uma janela com cerca de 2 cm de
dimetro e observa-se o embrio na lupa estereoscpica. Notam-se
nitidamente as artrias vitelinas (direita e esquerda), que se ramificam na
superfcie do saco vitelino (gema). Seguidamente, corta-se a casca segundo
um plano equatorial e deposita-se o embrio, saco vitelino (gema) e o albmen
num tabuleiro de plstico.

Em caso de haver acesso a ovos com tempo de incubao mais longo (8
dias em diante), procede-se da mesma maneira. Identificar o feto, o mnios
que o envolve, o saco vitelino vascularizado e a membrana corio-
alantoideia (na superfcie interna da casca; vem-se essencialmente os vasos
corio-alantroideus).

BIBLIOGRAFIA
http://www.msstate.edu/dept/poultry/avianemb.htm
26
5 TEMA
OBSERVAO DO CROMOSSOMA X INACTIVO (CROMATINA
SEXUAL) EM ESFREGAO DA MUCOSA BUCAL HUMANA

OBJECTIVO
a) Aprender a tcnica de realizao do esfregao da mucosa bucal.
b) Identificao da cromatina sexual em ncleos interfsicos de clulas
pertencendo a indivduos do sexo feminino;
c) Confirmao da inexistncia da cromatina sexual em ncleos interfsicos de
clulas pertencentes a indivduos do sexo masculino.

BASES TERICAS
Em qualquer espcie de Mamfero (e, mais concretamente, no Homem), as
funes fisiolgicas podem ser reunidas em dois grupos:
a) As funes que visam conservao do indivduo fisiologia somtica.
b) As funes que se destinam conservao da espcie fisiologia sexual.
Enquanto que a fisiologia sexual diferente no homem e na mulher, a
fisiologia somtica muito semelhante nos dois sexos.

A guarnio cromossmica da espcie humana :
a) 44 cromossomas somticos ou autossomas + cromossomas sexuais (ou
gonossomas) XY no homem;
b) 44 cromossomas somticos ou autossomas + cromossomas sexuais (ou
gonossomas) XX na mulher.

Os cromossomas somticos contm genes implicados na fisiologia
somtica. O cromossoma Y quase totalmente constitudo por genes
determinantes testiculares. O cromossoma X, alm de possuir genes
determinantes ovricos, apresenta muitos genes ligados fisiologia somtica.
Da anlise da guarnio gonossmica masculina (XY) versus feminina (XX),
esperar-se-ia que os genes somticos de X fossem expressos com duas vezes
mais intensidade na mulher do que no homem. Isto levaria a grandes
27
diferenas entre as fisiologias somticas masculina e feminina, o que na
realidade no acontece. Como explicar esta situao?

Resposta: um dos cromossomas X femininos est inactivo. Este
cromossoma apresenta a cromatina condensada, formando um corpsculo de
cromatina condensada com cerca de 1 m de dimetro, chamado cromatina
sexual ou corpsculo de Barr.

1949 Barr e Bertram descobriram a cromatina sexual em ncleos de
clulas nervosas de gatas; tal corpsculo no se observava nos ncleos do
mesmo tipo de clulas em gatos (dimorfismo sexual dos ncleos).
1960 Ohno et al. descobriram que a cromatina sexual correspondia a um
cromossoma X.
1961 Lyon emitiu a hiptese de, nas clulas somticas em interfase dos
Mamferos, estar sempre um cromossoma X inactivo.

Num zigoto feminino, ambos os X esto activos. Assim se mantm durante
a segmentao at fase de blastocisto. Aqui, as clulas do trofoblasto so
as primeiras a sofrer a inactivao de um dos cromossomas X; esta
selectiva, pois atinge sempre o X paterno.
O embrioblasto mantm os dois X activos. Quando se diferenciarem os
diversos tecidos a partir do embrioblasto, comea a dar-se a inactivao de um
dos cromossomas X, que aleatria, pois pode atingir tanto o X paterno (50%
de probabilidade) como o X materno (50% de probabilidade).

Mecanismo de inactivao do X cada cromossoma X apresenta um
segmento especfico, o XIC (X-inactivation center), que contm vrios genes,
um dos quais o XIST (X-inactivation specific transcript). No cromossoma X
que vai ser inactivado, o XIST transcreve um ARN particular, que vai cobrir
todo o cromossoma X, tornando-o inactivo.

Teoricamente, todos os ncleos de clulas somticas em interfase da
mulher tm uma cromatina sexual. Contudo, se houver outros grnulos de
28
heterocromatina no ncleo, a identificao da cromatina sexual pode ser
ambgua ou impossvel. Assim, convencionou-se que:
a) Pelo menos 10% dos ncleos apresentam cromatina sexual sexo
feminino.
b) Menos de 4% dos ncleos encerram um corpsculo semelhante a
cromatina sexual (falso positivo) sexo masculino.
c) Entre 4 e 10% de ncleos com cromatina sexual franja dos casos
duvidosos. Um caritipo estabelece a concluso.

Considerando caritipos normais, no ncleo das clulas somticas do
sexo feminino h uma cromatina sexual, enquanto que o ncleo das
mesmas clulas no sexo masculino no se observa cromatina sexual (h
0 cromatinas sexuais). No caso de cromossomas X supranumerrios:
a) 44 autossomas + XXY (sndrome de Klinefelter) uma cromatina sexual.
b) 44 autossomas + X0 (um nico X sndrome de Turner) 0 cromatinas
sexuais.
c) 44 autossomas + XXX 2 cromatinas sexuais.
d) 44 autossomas + XXXX 3 cromatinas sexuais.

Em geral:
N CS = N cromossomas X 1
CS cromatina sexual.

Colorao pela hematoxilina

Protocolo:
1) Execuo do esfregao da mucosa bucal (face interna da bochecha).
2) Fixao: em lcool a 100 durante 20 minutos.
3) 10 banhos sucessivos em lcool a 70.
4) 10 lavagens em gua destilada.
5) Colorao: em hematoxilina durante 2 minutos.
6) Lavagem em gua corrente durante 1 minuto.
7) Banho em lcool amoniacal a 10%; durao: 20 segundos
8) Lavagem em gua destilada durante 1 minuto.
29
9) 10 banhos sucessivos rpidos em lcool a 70.
10) 10 banhos sucessivos rpidos em lcool a 95
11) 10 banhos sucessivos rpidos em lcool a 100.
12) 2 banhos em xilol.
13) Montagem em resina hidrfoba.

Reagentes:
gua destilada.
lcool etlico a 70, 95 e 100.
lcool amoniacal a 10%.
Hematoxilina.
Xilol.
Meio de montagem (resina sinttica).

TCNICA DE CONTAGEM
As clulas epiteliais da mucosa bucal que surgem no esfregao
pertencem camada mais superficial, tendo, portanto, forma achatada.
Apresentam um ncleo oval e citoplasma abundante.
Devem ser avaliados os ncleos de cromatina clara. A cromatina sexual
aparece como um pequeno grnulo encostado superfcie interna do invlucro
nuclear. Este grnulo tem a forma de um ponto ou pequeno bastonete.
A observao faz-se com objectiva de imerso (x100). Percorre-se o
esfregao em zigzag para evitar contar o mesmo ncleo duas vezes.
Os ncleos em picnose (cromatina condensada, tamanho diminudo) e
ncleos que se apresentem parcialmente tapados por grandes grnulos de
origem citoplsmica no devem entrar na contagem.
O ideal ser contar 200 ncleos, registando-se quais os que apresentam
cromatina sexual. Como o processo cansativo, podem ser contados 100 ou
mesmo 50 ncleos, sendo o resultado estatisticamente menos significativo.
Ser conveniente examinar-se um esfregao proveniente de um
indivduo do sexo masculino e outro esfregao obtido a partir de um indivduo
do sexo feminino e compararem-se os resultados.


30
BIBLIOGRAFIA
http://www.eighthfloor.org/academy/ahumes/genetics/focus3.html
31
6 TEMA
OBSERVAO DE MODELOS DE EMBRIES

Modelo 1 Embrio de Porco com 12 dias
O embrio achatado e, visto de cima, tem forma aproximadamente
oval, sendo largo na extremidade cranial e afilado na extremidade caudal.
Observam-se a linha primitiva e o n primitivo (ou de Hensen).
Notem-se os bordos de corte do mnios e do saco vitelino.

Modelo 2 Embrio de Porco com 12 dias.
Descrio igual do Modelo 1.

Modelo 3 Embrio de Porco com 13 dias.
Embrio achatado. Visto de cima, tem forma oval, sendo o plo cranial
mais estreito do que nos modelos anteriores e apenas um pouco mais largo
que o plo caudal. A metade anterior da ectoderme apresenta-se ligeiramente
elevada, formando a placa neural, que apresenta na sua regio mdia o sulco
neural. Posteriormente a este, observam-se o n primitivo e a linha
primitiva.
Observem-se os bordos de corte do mnios e do saco vitelino.

Modelo 4 Embrio de Porco com 14 dias.
Este embrio j tem forma alongada. Na face dorsal, nota-se uma
goteira neural bem evidente, com as respectivas pregas neurais, no
havendo ainda formao do tubo neural. Apresenta 7 pares de somitos, que
podem ser apreciados pela salincia que fazem na superfcie corporal dorsal.
Cada par de somitos dispe-se de um e do outro lado da goteira neural, ao
mesmo nvel.
Nota-se a formao do intestino primitivo, com os seus trs
segmentos: intestino anterior, intestino mdio e intestino posterior.
Observam-se tambm os portais intestinais anterior e posterior.
A insero do saco vitelino (pedculo do saco vitelino) comea a
estreitar-se.
32
Observar os bordos de corte do mnios e do saco vitelino.

Modelo 5 Embrio de Porco com 15 dias.
O embrio tem forma ainda mais alongada do que a do modelo anterior.
Apresenta 11 pares de somitos, dos quais se podem ver, por salincia na
superfcie dorsal do embrio, dez. O tubo neural est em formao avanada,
observando-se as pregas neurais e os neuroporos anterior e posterior (este
ltimo mais longo, em forma de fenda).
Abaixo do neuroporo anterior, nota-se a salincia cardaca. A insero
do saco vitelino mais estreita (pedculo do saco vitelino). Na superfcie
externa do saco vitelino, nota-se a presena de vasos sanguneos
(vasculognese e angiognese). Observam-se os portais intestinais anterior
e posterior.
O intestino posterior faz salincia na face ventral do embrio.
Identificar o bordo de corte do mnios.

Modelo 6 - Embrio de Porco com 15 dias.
Descrio igual do Modelo 5.

Modelo 7 Embrio de Porco com 16 dias.
O embrio, de forma alongada, comea a enrolar-se em torno do seu
eixo antero-posterior. Apresenta 17 pares de somitos, dos quais s se notam
13 a 14 pares.Os neuroporos anterior e posterior esto quase fechados. Na
regio anterior, notam-se o 1 e 2 arcos farngeos (branquiais) e, a seguir, a
salincia cardaca. De cada lado da futura cabea nota-se o placdio do
cristalino (mais cranial) e o placdio tico (mais caudal).
O pedculo do saco vitelino ainda mais estreito do que nos Modelos 5 e
6. Na superfcie externa do saco vitelino, nota-se a presena de uma rede
vascular mais desenvolvida do que a dos modelos j referidos. Observam-se
os intestinos anterior, mdio e posterior e os portais intestinais anterior e
posterior.
Identificar o bordo de corte do mnios e do saco vitelino.

Modelo 8 - Embrio de Porco com 16 dias.
33
Descrio igual do Modelo 7.

Modelo 9 Embrio de Mamfero com 25 pares de somitos.
A metade direita est coberta por ectoderme, a outra foi representada
sem a ectoderme e mesoderme subjacente de maneira a evidenciarem-se os
rgos internos. O tecto do saco vitelino tem cor verde clara.
O sistema nervoso central est representado a amarelo. 1 e 4 so
derivados do prosencfalo ou vescula cerebral anterior (respectivamente o
telencfalo, precursor dos hemisfrios cerebrais, entre outras estruturas e o
diencfalo, que originar a epfise, o tlamo e o hipotlamo, entre outras
estruturas). 5 corresponde ao mesencfalo ou vescula cerebral mdia. 6 e 6a
indicam os derivados do rombencfalo ou vescula cerebral posterior
(respectivamente, o metencfalo, que se diferencia em cerebelo e ponte de
Varlio, e o mielencfalo). de notar a vescula ptica (agora, taa ptica),
com o nmero 2, associada ao cristalino (3) e a vescula tica (7). A medula
espinal est indicada com 8.
O intestino primitivo est colorido a verde, notando-se na sua parte
mais cranial (intestino farngeo) as bolsas farngeas (branquiais). A
membrana cloacal est indicada pelo nmero 22. Na superfcie externa,
observam-se as fendas farngeas (branquiais).
O corao est indicado a rosa (9a trio; 9 e 9b ventrculo; direita
do ventrculo est o bulbo artico).
As artrias esto a vermelho e as veias a azul-violeta.
23 e 24 correspondem ao tecto do saco vitelino (com a mesma cor do
intestino farngeo)
A cauda do embrio est assinalada com o nmero 33.

Modelo 10 Embrio de Mamfero em estadio mais evoludo do que o
representado no Modelo 9
A metade esquerda est coberta por ectoderme, enquanto que a direita
se apresenta sem ectoderme e mesoderme subjacente para exposio dos
rgos internos.
O sistema nervoso central e perifrico esto representados a
amarelo:
34
1 Telencfalo.
2 Diencfalo (9 epfise ou glndula pineal). O telencfalo e o diencfalo
derivam do prosencfalo.
3 Mesencfalo.
4 Metencfalo.
5 Mielencfalo.
6 Medula espinal.
7 Taa ptica.
8 Cristalino.
Observam-se nervos cranianos (com gnglios 11 e 17) e nervos espinais.
O intestino est representado a verde:
Entre 43 e 46 intestino farngeo com as bolsas farngeas (branquiais).
47 e 48 Divertculo respiratrio (47) e esboo de um brnquio extrapulmonar
(48).
51 intestino mdio
53 intestino posterior
O corao est representado a rosa, as artrias a vermelho-escuro e
as veias a azul-claro.
No lado esquerdo do embrio, esto representados os relevos da taa
ptica (7) e do cristalino (8), a vescula tica (no numerada, acima dos
arcos farngeos), os arcos farngeos (44a), o esboo do membro anterior
(60), o primrdio do membro posterior (61) e a cauda.
35
7 TEMA
ASPECTOS MICROSCPICOS DO DESENVOLVIMENTO
EMBRIONRIO

Objectivos deste Tema:
1. Observao de aspectos citolgicos relativos fertilizao e meiose.
2. Tornar o Aluno ciente da diversidade do desenvolvimento embrionrio
entre as vrias Classes de Vertebrados (em particular, nas espcies de
interesse Veterinrio e Zootcnico).
3. Saber as caractersticas do desenvolvimento embrionrio dos Peixes,
Anfbios, Rpteis e Aves.
4. Apreender as semelhanas e diferenas do desenvolvimento
embrionrio dos Peixes, Anfbios, Rpteis e Aves.
5. Integrao dos conhecimentos adquiridos no panorama geral da
Ontognese dos Seres Vivos.

No Reino Animal, o desenvolvimento embrionrio varia bastante entre os
diversos Filos. Considerando-se o Sub-filo Vertebrata, pertencente ao Filo
Chordata, pode-se comparar o desenvolvimento embrionrio / fetal entre as
vrias Classes de acordo com os aspectos morfolgicos da segmentao /
gastrulao e os anexos embrionrios.
No que respeita s caractersticas morfolgicas, pode dividir-se a
segmentao (clivagem) em:
1. Holoblstica a diviso celular atinge todo o citoplasma do zigoto. A
segmentao d origem a uma massa de clulas esfrica compacta
chamada mrula. o que sucede nos Anfbios e nos Mamferos. Nos
Mamferos, os blastmeros da mrula tm volumes semelhantes, pelo
que a segmentao holoblstica se diz igual. Pelo contrrio, nos
Anfbios, a mrula constituda por clulas pequenas (micrmeros) no
plo animal e por clulas grandes (macrmeros) no plo vegetativo.
Este tipo de segmentao holoblstica chama-se desigual.
2. Meroblstica a diviso celular limita-se a parte do citoplasma do
zigoto inicial, o citoplasma funcional ou protolecito. O deutolecito
36
(reservas nutritivas) mantm-se indiviso. A consequncia da
segmentao a formao de uma massa celular aplanada chamada
blastoderme. Observa-se nos Peixes e nos Sauropsdeos (Rpteis e
Aves). Note-se que o desenvolvimento posterior do embrio diferente
nos Peixes, por um lado, e nos Rpteis e Aves, pelo outro. Nestas duas
ltimas Classes, o desenvolvimento embrionrio ps-blastoderme
semelhante.

De acordo com os anexos embrionrios (crion, alantide, mnios e
vescula vitelina), os Vertebrados classificam-se em:
1. Amniotas possuem, tal como o nome indica, mnios e, tambm,
crion, alantide e vescula vitelina (Rpteis, Aves e Mamferos).
2. Anamniotas falta o mnios e, tambm, o crion e a alantide. Os
Peixes possuem vescula vitelina, os Anfbios no, pois as clulas da
endoderme so muito ricas em vitelo, substituindo o saco vitelino.

1 Lmina Fecundao em Ascaris sp Hematoxilina frrica.
No interior do tero deste Verme Nemtode, observam-se inmeros
ovos rodeados por uma casca tripla espessa, cujo componente principal
cromfobo (incolor), muito refringente e de natureza quitinosa. Os ovos s
apresentam este invlucro aps a fecundao. Entre os ovos, podem ser
observadas algumas cabeas de espermatozides, de cromatina condensada e
em forma de bala.
O ocito de 1 ordem s inicia a 1 diviso meitica depois da fuso com
o espermatozide. O proncleo masculino pequeno, circular e de cromatina
condensada. O fuso acromtico da 1 diviso meitica (reducional)
excntrico, notando-se as ttradas de cromatdeos. Segue-se a emisso do 1
glbulo polar, de ncleo em forma de bastonete ou circular e com cromatina
compacta, que se situa perto da superfcie do ocito ou est encostado
superfcie interna da casca trilaminada.
A segunda diviso meitica do ocito tambm excntrica e d-se a
emisso do 2 glbulo polar. O ncleo do vulo transforma-se no proncleo
feminino, redondo e de aspecto vesicular. O proncleo masculino tem um
aspecto semelhante, pelo que o zigoto apresenta-se como uma clula
37
binucleada, estando os dois ncleos semelhantes muito prximos. O passo
seguinte ser a anfimixia.
A parede do tero formada por uma fiada de clulas volumosas cujo
plo apical cupuliforme.

2 Lmina Segmentao em Ascaris sp Hematoxilina-eosina.
Num dos cortes do tero, nota-se a primeira diviso de segmentao
(clivagem), com o fuso acromtico. Cada um dos seus plos apresenta um
ster. Os cromossomas so escuros, longos e finos (todos estes aspectos
observam-se bem com a objectiva de x40, rodando-se sempre o parafuso
micromtrico para se atingir todos os planos da clula). Noutro corte do tero,
observam-se embries com dois e quatro blastmeros (segmentao
holoblstica).

3 Lmina Embrio de Truta (Peixe) cortes transversais.
Abaixo do corpo, nota-se um volumoso saco vitelino de contedo
homogneo e acidfilo (rosado). Notar que o embrio no envlovido por
mnios.
No corte transversal do embrio, nota-se a medula espinal e o
notocrdio, em posio ventral relativamente medula. O notocrdio apresenta
uma grossa bainha colagnica (portanto, acidfila) perifrica, que atapetada
interiormente por uma fiada de clulas cbicas de citoplasma basfilo os
cordoblastos. O centro do notocrdio ocupado por volumosas clulas
arredondadas devido a terem um volumoso vacolo citoplsmico que ocupa
quase toda a clula.
Observa-se tambm abundncia de clulas musculares estriadas
esquelticas cortadas transversalmente e dispostas em feixes.
Um dos cortes atinge tambm a cabea do embrio, onde se notam o
encfalo (em posio mdia) e os olhos (estruturas simtricas em relao ao
encfalo).

4 Lmina Ovrio de Anfbio (Trito)
Ocitos de dimenses variadas (de acordo com o seu grau de
desenvolvimento), ncleo de grandes dimenses. Cada ocito envolvido por
38
uma ou duas fiadas de clulas foliculares cbicas altas, cbicas baixas ou
pavimentosas. Observam-se centros melano-macrofgicos (agregados de
clulas pigmentares de natureza macrofgica normal em Peixes e Anfbios).

5 Lmina vulo de Sapo (Anfbio) no momento da emisso.
Este estadio precede a fecundao, que externa. O vulo, mais
precisamente, o ocito de 2 ordem parado em metafase, esfrico e, por
consequncia, tem perfil circular em corte histolgico. O citoplasma rico em
pequenos corpsculos ovais de deutolecito, que so eosinfilos (cor rosa-viva).
Estes corpsculos so as plaquetas vitelinas.

6 Lmina Blstula e gstrula de sapo (Anfbio).
Nesta preparao notam-se dois cortes de um conjunto de cinco
embries.
Um dos embries uma blstula. O plo animal apresenta os
micrmeros, clulas poligonais de citoplasma contendo pequenos grnulos
acidfilos. Os limites celulares so bem ntidos. Estas clulas encerram
tambm um pigmento de textura granulosa e cor castanha, mais abundante na
face externa dos micrmeros situados mais perifericamente.
A cavidade de segmentao ou blastoclio excntrica.
Os macrmeros so mais volumosos do que os micrmeros e
apresentam, como estes, forma poligonal e limites bem definidos. No
citoplasma, observam-se corpsculos acidfilos ovais, as plaquetas vitelinas.
Outro embrio est em princpio de gastrulao, pouco antes da
formao do lbio dorsal do blastporo. O blastoclio parece uma fenda devido
incidncia do corte histolgico.
Num terceiro embrio, nota-se j a formao do lbio dorsal do
blastporo, sendo as bottle cells muito pigmentadas.

7 Lmina Embrio de Sapo em fim de neurulao corte transversal.
J se formou o tubo neural, que est separado da ectoderme
suprajacente. Abaixo do tubo neural, observa-se o notocrdio, que tem
contorno circular e formado por clulas polidricas.
39
De cada lado do tubo neural e notocrdio situa-se a mesoderme para-axial,
que se continua dorso-ventralmente, em cada lado do embrio, pela
mesoderme da placa lateral. Esta formada por dois folhetos de clulas:
a) O que est mais prximo da ectoderme a mesoderme somatoplurica
intra-embrionria;
b) O que rodeia externamente o intestino primitivo constitui a mesoderme
esplancnoplurica intra-embrionria.
O intestino primitivo apresenta un lmen excntrico (situado dorsalmente
em relao ao centro do intestino), sendo as clulas da poro ventral deste
rgo muito volumosas (macrmeros).

8 Lmina Embrio de Discoglossus (Anfbio Anuro).- cortes transversais
A preparao microscpica consta de vrios cortes. Devem-se escolher os de
menores dimenses.
Observa-se a epiderme pigmentada, o tubo neural, o notocrdio (em alguns
cortes formado por clulas de aspecto vesiculoso), os somitos em processo
de diferenciao (com cavidade central, o somitocelo), o esclertomo
(populao de clulas de forma estrelada que se estende desde o somito ao
notocrdio) e o intestino primitivo (derivado da endoderme). Na face ventral
(oposta ao tubo neural), a superfcie do corpo apresenta duas formaes
cncavas, as glndulas adesivas.

9 Lmina Girino de R corte frontal (metades dorsal e ventral).
Cabea e corpo nota-se a cavidade bucal rodeada de peas de
cartilagem embrionria (epiteliide), de grandes condroblastos vesiculosos e
matriz extracelular muito escassa. Estas peas de cartilagem esto associadas
a clulas musculares estriadas esquelticas jovens (observa-se a estriao
transversal). cavidade bucal segue-se a faringe (em comunicao com as
brnquias internas, de forma ramificada e apresentando peas de cartilagem
embrionria). Notam-se tambm cortes de estmago, intestino, fgado
(constitudo por cordes de hepatcitos, alguns dos quais em mitose; estes
cordes formam uma rede), pncreas (caudal ao fgado) e mesonefro
(apenas num dos lados do girino).
40
Cauda o corte atingiu o notocrdio em corte oblquo, sendo este
formado por clulas volumosas de citoplasma cromfobo (incolor). O
notocrdio rodeado direita e esquerda por feixes de clulas musculares
estriadas esquelticas. Caudalmente ao notocrdio, nota-se a medula espinal
(em corte oblquo).

10 Lmina Girino corte frontal (estadio mais avanado).
Observam-se:
a) A epiderme, com glndulas cutneas.
b) A mucosa bucal com epitlio cilndrico estratificado e glndulas
mucosas, tubulosas simples ramificadas na lmina prpria.
c) A lngua, atapetada por um epitlio cilndrico estratificado e encerrando
glndulas serosas na lmina prpria (plos apicais com grnulos de
secreo eosinfilos) e feixes de clulas musculares esquelticas.
d) Peas de cartilagem hialina (futuros ossos do crnio e da face).
A seguir face, e na linha mdia, observa-se a glndula tiride, com
folculos tiroideus contendo colide eosinfilo. Depois, situa-se o corao (dois
trios e um ventrculo), o fgado volumoso com hepatcitos claros e
melanforos disseminados, o pncreas e o intestino.
Os elementos da cintura plvica so cartilagneos.

11 Lmina Girino de R corte transversal ao nvel dos olhos.
Nota-se o encfalo, com cavidade central, rodeado por peas de
cartilagem epiteliide que daro origem aos ossos da caixa craniana. De cada
lado do encfalo situa-se um olho, com a retina colocada internamente
(apresenta trs estratos de ncleos) e uma coride pigmentada a envolv-la
externamente. Devido incidncia do corte, s se observa o cristalino num dos
olhos.
Ventralmente s cartilagens do crnio e em posio mdia observam-se
os folculos da tiride.
Brnquias internas (ramificadas).
O folheto parietal da serosa pleuroperitoneal pigmentado.

41
12 Lmina Girino de R corte transversal feito caudalmente ao corte da
11 Lmina.
Observa-se, na parte mdia, o encfalo, com cavidade central, que
rodeado por peas cartilagneas (futuros ossos do crnio). De um dos lados,
observa-se um dos olhos em corte quase tangencial (com a coride,
pigmentada, perifrica e a retina interna).
Abaixo do crnio localiza-se o corao (trios em posio dorsal,
ventrculo ventral). De cada lado do corao observa-se uma cmara que
encerra as brnquias internas (estruturas ramificadas diferenciar-se-o em
pulmes).
O folheto parietal da serosa pleuroperitoneal pigmentado.
Externamente a este folheto, notam-se a epiderme e a derme (pele)

13 Lmina Girino de R corte transversal parte posterior.
Medula espinal envolvida por vrtebras ainda cartilagneas. O notocrdio
bem evidente. Dos dois lados da medula observam-se gnglios nervosos
espinais.
Clulas musculares estriadas esquelticas da regio lombar bem
desenvolvidas (aspecto de clulas adultas). Folheto parietal da serosa
toracoabdominal pigmetado.
Notam-se vrios cortes de intestino, que encerra material de diversas
provenincias, principalmente vegetal.
Fgado hepatcitos claros e volumosos.
Rim mesonefro.

14 Lmina - Girino de R corte transversal parte posterior.
Semelhante 13 Lmina.
NOTA: os cortes da 11, 12. 13 e 14 Lminas provm do mesmo
espcime.

15 Lmina Embrio de Vbora (Rptil) 3 mm.
O embrio tem forma enrolada, pelo que o corte o atinge em quatro
pontos (correspondentes a duas voltas do corpo).
42
Observam-se o sistema nervoso central, os somitos em diferenciao,
o notocrdio, o tubo digestivo e o corao (miocrdio ventricular em
diferenciao). O embrio envolvido por uma fina membrana (rasgada em
alguns pontos devido tcnica histolgica) o mnios.

16 Lmina Embrio de Vbora mais velho.
O encfalo cortado num ponto (perto dele est a retina de um olho em corte
tangencial) e a medula espinal em trs outros pontos (dois transversais e um
oblquo). Observa-se o notocrdio, ventralmente medula espinal.
Notam-se tambm:
a) O corao (um dos trios e o ventrculo), contendo eritrcitos ovais e
nucleados.
b) O fgado (os hepatcitos dispem-se formando estruturas vagamente
tubulares; notam-se tambm os sinusides hepticos).
c) Os rins mesonfricos direito e esquerdo.
d) O intestino.

17 Lmina Embrio de Frango 3 dias.
O corte atingiu a cabea e o tronco em dois pontos diferentes, devido
flexura ceflica.
Na cabea, nota-se o tubo neural dilatado (encfalo) e o mesnquima da
cabea e face que o rodeia.
No tronco, observa-se um corte de tubo neural de dimetro menor do
que o observado ao nvel da cabea. O tubo neural rodeado pelos somitos
em diferenciao (esclertomo e dermomitomo). Ventralmente ao tubo neural
dispe-se o notocrdio e, ventralmente a este, a aorta dorsal, de parede fina e
encerrando eritrcitos arredondados e com ncleo.
Estruturas relacionadas com a mesoderme intermdia (aparelho
excretor) em incio de diferenciao. Observam-se tambm o corao e o
mnios.
43
8 TEMA
OBSERVAO DA PLACENTA DE ALGUNS MAMFEROS

1 Fundamentos tericos

1.1 Anexos embrionrios
Os anexos embrionrios do concepto de Mamfero so quatro:
1) mnios saco cheio de lquido que envolve o embrio ou feto.
2) Saco vitelino no Homem e em quase todos os Mamferos Domsticos,
pouco desenvolvido e regride precocemente. No Cavalo, na fase inicial da vida
intra-uterina, apresenta um desenvolvimento razovel, contribuindo para a
formao da interface de troca de metabolitos entre o feto e a me (placenta
corio-vitelina ou onfaloplacenta). Posteriormente, entra em regresso. O saco
vitelino est ligado ao intestino mdio por um ducto vitelino, que se situa no
cordo umbilical.
3) Alantide rudimentar no Homem, mas bem desenvolvida nos Mamferos
Domsticos. A sua face externa acaba por se fundir com a placa corial do
crion (ver a seguir), formando a placenta corio-alantoideia ou alantocrion
(tipo de placenta). Est ligada ao seio urogenital pelo uraco, que est
incorporado no cordo umbilical.
4) Crion envolve o embrio (ou o feto) e o mnios, saco vitelino e a
alantide. Corresponde parte fetal da placenta. constitudo por duas
camadas: uma externa, o trofoblasto, e uma interna, a placa corial, que
pertence ao folheto parietal (ou somatoplurico) da mesoderme extra-
embrionria.

1.2 A placenta
A placenta a interface de trocas feto-maternais:
a) O feto recebe princpios nutritivos do sangue materno;
b) O feto excreta os seus produtos de catabolismo para o sangue da me.
A placenta composta por:
a) Parte materna o endomtrio.
44
b) Parte fetal - formada nos Mamferos domsticos pelo crion e, numa fase
posterior, tambm pela alantide (alantocrion). No Homem, a alantide
rudimentar, mas a circulao alantoideia (vasos umbilicais) est bem
desenvolvida, pelo que a placenta humana corio-alantoideia.

1.3 Classificao da placenta
A placenta pode ser classificada segundo critrios macroscpicos
(classificao de Strahl, 1906) e histolgicos (classificao de Grosser, 1927,
estudada nas aulas tericas). A classificao de Strahl apresenta dois grupos
principais de placentas: as semiplacentas (em que no h eroso do
endomtrio pelo trofoblasto - caso do Cavalo, Ruminantes e Porco) e as
placentas verdadeiras (tambm designadas de completas), em que o
trofoblasto invade o endomtrio (caso do Co, Gato e Homem).
Quanto aos aspectos macroscpicos da interface feto-maternal, a
placenta pode ser:
a) Simples Est presente s uma interface de trocas feto-maternais.
b) Mltipla Esto presentes vrias interfaces de troca feto-maternal (os
cotildones), espalhados uniformemente pela face externa do crion.
Exemplos: Boi, Carneiro e Bode.
A placenta simples pode ser:
a) Difusa Toda a superfcie externa do crion (ou a maior parte dela)
participa na formao da placenta. Se todo o crion est implicado nas trocas
feto-maternais, a placenta simples difusa dita completa (exemplo: Cavalo).
Pelo contrrio, as extremidades do crion no participam nas trocas, a placenta
simples difusa chama-se incompleta (exemplo: Porco).
b) Local S uma rea delimitada do crion est implicado nas trocas feto-
maternais. Esta placenta subdivide-se em:
b.1) Zonal A placenta tem forma de anel, que envolve o saco corial.
Exemplos: Co e Gato (Carnvoros).
b.2) Discoidal A placenta tem a forma de um disco oval. Exemplos: Homem,
Coelho e Rato.

2 Observao de exemplares fixados em formol a 10 %
45
Placenta mltipla de Ovino, placenta simples local discoidal de Rato,
Coelho e Lebre, placenta simples local zonal de Co.
46
9 TEMA
DETERMINAO DA IDADE DE FETOS DE MAMFEROS

1 Introduo
A idade de um embrio ou de um feto pode ser determinada de duas formas.
Nesta aula prtica, recorre-se a dois critrios:
a) Medio da distncia entre o ponto mais saliente do crnio e a base da
cauda (transio cccis-1 vrtebra caudal) distncia vrtex-cccis (ou
vertex-coccix) ou, em Ingls, distncia crown-rump. Nesta medio, o feto
deve estar numa posio semelhante que ocuparia no tero materno, caso
contrrio a distncia vrtex-cccis pode ficar falseada (maior se o pescoo do
feto estiver en extenso). Com a ajuda de uma tabela, converte-se a distncia
vertex-coccix em dias de gestao.
b) Determinao da idade do feto por meio da avaliao de caractersticas
morfolgicas externas, de acordo com o indicado noutra tabela.
c) Comparao dos resultados obtidos em a) com os resultados obtidos em b).
Sero concordantes ou discordantes? No segundo caso, tentar encontrar uma
justificao (explicao).

2 Material e protocolo
Um tabuleiro, uma pina, uma rgua e as dua tabelas j aludidas.
Fetos de Ovelha, Porca e Cadela fixados em formol a 10 %.
Cada grupo de trabalho recebe trs fetos. Em cada um deles, determina
a idade de acordo com as duas tabelas, anota os resultados e observa se h
concordncia de resultados ou no.
47
10 TEMA
OBSERVAO DE CARACTERSTICAS ANATMICAS
RELATIVAS AO FETO E PLACENTA DA ESPCIE CANINA (Canis
familiaris)

1 Circulao fetal
Ver Sadler pags. 267-270 (verso americana) ou pags. 176-178 (verso
brasileira).

2 Observao de estruturas particulares vida intra-uterina
Fetos de termo de co (Canis familiaris).
Determinao da idade pela distncia vertex-coccix e por meio de tabela de
caractersticas morfolgicas exteriores. Os resultados obtidos pelos dois meios
so concordantes ou diferentes? No caso de haver discordncia, tentar explicar
tal facto.
Observao de alguns anexos fetais: mnios (quando est intacto), membrana
corioalantoideia e placenta simples local zonal com os hematomas marginais
(que contm pigmento verde-escuro proveniente da degradao da
hemoglobina).
Estruturas observadas por necrpsia dos fetos (protocolo praticado nas aulas
prticas de Anatomia Patolgica I e Anatomia Patolgica II) e respectivo
destino no adulto:
Veia umbilical ligamento redondo do fgado.
Artrias umbilicais ligamentos umbilicais mediais ou ligamentos redondos
da bexiga.
Timo regresso desde a puberdade.
Canal arterial ligamento arterial.
Foramen oval fossa oval.
Lobao fetal do rim desaparece.

48
11 TEMA
OBSERVAO DE PREPARAES MICROSCPICAS
RELATIVAS HISTOGNESE DE RGOS E TECIDOS DE
MAMFERO

1 Observao microscpica de cortes histolgicos de embries e fetos

1.1 Generalidades
Os objectos de estudo da Anatomia so em geral estudados por meio do olho
nu, isto , da vista desarmada (forma, cor e inter-relaes dos rgos)
anatomia macroscpica. No domnio da Histologia, necessrio o uso do
microscpio de luz (ampliaes baixas e fortes) para um estudo completo dos
tecidos e clulas anatomia microscpica. No estudo de cortes histolgicos
de embries e fetos de pequeno tamanho, h pormenores que se observam
primeiro vista desarmada e, em seguida, com o uso do microscpio de luz em
baixas ampliaes ou pelo recurso a uma lupa anatomia mesoscpica.


1.1 Algumas regras
Um corte sagital ou mediano divide o embrio em metades direita e
esquerda simtricas. Um corte parassagital paralelo ao corte sagital e,
portanto, as metades obtidas (direita e esquerda) so desiguais. Um corte
transversal divide o embrio em metades cranial e caudal e pode ser feito a
nvel torcico ou abdominal. Um corte frontal ou dorsal paralelo fronte
(caso do ser humano) ou ao dorso, dividindo o embrio numa metade dorsal e
noutra ventral. Um corte diferente dos j citados ser um corte oblquo.
No campo da Histologia, muitas vezes possvel observar-se um corte
que englobe apenas um rgo. O estudo, neste caso, refere-se morfologia
dos constituintes do dito rgo, no sendo necessrio ter-se uma noo do
espao ocupado por ele no corpo. Devido ao pequeno tamanho dos embries e
dos fetos, o respectivo corte histolgico abrange muitas vezes estruturas
diversas. Assim, na observao microscpica de embries ou fetos,
conveniente ter-se presentes algumas regras:
49
1) Observar a preparao microscpica ao olho desarmado contra uma
superfcie branca ou cinzenta-clara. Tal permite ajuizar sobre o tipo de corte
(mediano, sagital, transversal, dorsal ou oblquo) e, consequentemente, permite
prever quais os rgos que podero ser vistos.
2) Comear a observao microscpica com a objectiva de menor
ampliao (x4) e explorar o corte histolgico completamente (por exemplo, pelo
mtodo do ziguezague).
3) Quando se est a efectuar o passo 2), ter em mente a disposio
espacial de cada rgo embrionrio ou fetal e a inter-relao entre todos eles.
Assim, por exemplo, a partir do corao e da parede dorsal (num corte
sagital), consegue-se detectar os pulmes, a traqueia e o esfago (se tiverem
sido includos no corte), o fgado, ansas intestinais, o mesonefroe o metanefro.
4) Ter em conta que, no embrio, o corao e, principalmente, o fgado
so os rgos mais volumosos.
5) Tendo-se descoberto um corte de rgo cuja estrutura se deseja
estudar mais detalhadamente, coloc-lo no centro do campo microscpico e
mudar a objectiva para outra de maior ampliao. Pode-se mudar para a
objectiva x10 e, depois, para x40.
6) No fim dessa observao, voltar objectiva x4 para descobrir outro
rgo que se queira observar com mais detalhe.
7) Ter em mente de que a estrutura histolgica de um rgo em
formao diferente da microarquitectura que tal rgo apresenta no estado
adulto.


1.2 Preparaes microscpicas

Lmina P10-1 Embrio de coelho, respectiva placenta e tero envolvente. No
embrio, podem ser notadas as seguintes estruturas: encfalo, um olho em
formao, corao, fgado, intestino, cristas urogenitais e medula espinal. A
membrana que envolve o embrio e apresenta vilosidades viradas para fora
(para o miomtrio) o saco vitelino. Placenta discoidal com trofoblasto.
Miomtrio do tero materno.

50
Lmina P10-2 Embrio de rato situado no interior do tero materno. No
embrio, podem ser vistas vrias estruturas: encfalo, lngua, pulmo, fgado
(volumoso, com trs lobos abrangidos pelo corte histolgico), ansas intestinais
e rim. O saco vitelino a membrana que rodeia o embrio e cuja face externa
apresenta vilosidades. Placenta discoidal. Miomtrio e endomtrio do tero
materno.

Lmina P10-3 Feto humano. Membro superior. Miognese.
Mioblastos clulas uninucleadas semelhantes a fibroblastos.
Miotubos Clulas cilndricas acidfilas multinucleadas, de ncleos redondos
dispostos em fiada.

Lmina P10-4 Feto humano (5 meses). Miognese. Clulas musculares
estriadas esquelticas ainda pouco desenvolvidas (de calibre fino). Com a
objectiva de x40, notam-se as estriaes transversais.

Lmina P10-5 Feto humano (5 meses). Osteognese. Vrtebra. Focos de
ossificao endocondral nos arcos e no corpo da vrtebra. Nota-se a medula
espinal e dois gnglios espinais (direito e esquerdo).

Lmina P10-6 Feto humano (5 meses). Osteognese. Ossificao
intramembranosa dos ossos da abbada craniana. Espculas de tecido sseo
rodeadas por uma fiada de osteoblastos e encerrando ostecitos.

Lmina P10-7 Feto de cavalo. Pulmo. Estadio pseudoglandular. Notam-se
alguns bronquolos a ramificarem-se num estroma conjuntivo abundante de
origem mesodrmica. Os bronquolos so atapetados por epitlio
pseudostratificado.

Lmina P10-8 Embrio humano (80 dias). Pulmo. Estadio pseudoglandular.
Ramificao intensa dos bronquolos. Ainda no esto presentes os
bronquolos respiratrios. Estroma mesodrmico abundante. O corte histolgico
do pulmo assemelha-se ao de uma glndula excrina.

51
Lmina P10-9 Feto humano (5 meses). Pulmo. Estadio canalicular.
Ramificao bronquiolar mais extensa do que no estadio pseudoglandular. O
estroma mesodrmico torna-se mais escasso.

Lmina de Histologia II Bovino adulto. Pulmo normal. Estroma escasso em
relao rvore bronquolo-alveolar. Alvolos arejados.

Lmina P10-10 Embrio humano. Esfago. Epitlio endodrmico estratificado
cbico. Diferenciao da tnica muscular em fase inicial. Ainda no se
diferenciou a muscularis mucosae, pelo que impossvel separar-se a mucosa
da submucosa.

Lmina P10-11 Feto humano (5 meses). Esfago. Epitlio estratificado
prismtico ciliado. Tnica muscular (com as suas duas sub-camadas) bem
diferenciada. J se notam elementos da muscularis mucosae.

Lmina P10-12 Feto humano (5 meses). Estmago. Fossetas gstricas
desenvolvidas. Glndulas gstricas pouco desenvolvidas. Muscularis mucosae
em diferenciao. Tnica muscular ainda pouco espessa,

Lmina P10-13 Embrio de rato. Intestino. Epitlio endodrmico simples
cilndrico envolvido por mesnquima condensado de origem mesodrmica.

Lmina P10-14 Feto humano (5 meses). Intestino delgado. Vilosidades
intestinais bem desenvolvidas. Notam-se algumas clulas caliciformes. Embora
a tnica muscular seja evidente, ainda no se nota a muscularis mucosae.

Lmina P10-15 Embrio de rato. Fgado.Este rgo formado apenas por
cordes anastomosados de hepatcitos, situando-se entre eles os capilares
sinusides. No h arquitectura lobular. Notar os eritrcitos nucleados.

Lmina P10-16 Feto humano (4 meses). Fgado. Os cordes de hepatcitos
esto parcialmente cobertos por abundantes clulas de diversas linhagens
52
hematopoiticas, de ncleo redondo. De vez em quando, notam-se
megacaricitos, de ncleo grande e multilobulado.

Lmina de Histologia II Fgado. Animal adulto (no suno). Arquitectura
lobular evidente. Ausncia de hematopoiese.

Lmina P10-17 Embrio humano. Crista urogenital. A gnada apresenta-se
formada por mesnquima condensado. Nota-se tambm o mesonefro, com
tubos excretores cortados em vrias direces, que nunca de bifurcam.
Observam-se tambm os ductos mesonfrico (de Wolff) e paramesonfrico (de
Mller).

Lmina P10-18 Feto humano (5 meses). Rim metanefro. Os nefrnios
subcapsulares esto ainda em diferenciao. Glomrulos profundos (e
respectivas cpsulas de Bowman) diferenciados. Distino entre mesonefro e
metanefro no mesonefro, as estruturas tubulares epiteliais no se ramificam;
no metanefro, observa-se essa ramificao.

Lmina P10-19 Embrio humano (60 dias). Gnada com cordes medulares
paralelos que encerram clulas germinais primordiais (goncitos) de citoplasma
abundante e cromfobo (incolor). O desenvolvimento dos cordes medulares
permite o diagnstico da gnada testculo. Cordes medulares tubos
seminferos.

Lmina P10-20 Feto humano (5 meses). Pnis. Uretra revestida por epitlio
de transio. Corpo esponjoso (corpo cavernoso da uretra) em formao.

Lmina P10-21 Embrio humano (60 dias). Tente identificar:
1) Cavidade bucal com lngua.
2) Esfago.
3) Traqueia.
4) Pulmes.
5) Corao.
6) Fgado.
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7) Mesonefro.
8) Metanefro com glndula adrenal anexa.

Lmina P10-22 Embrio humano. Corte transversal. Abdmen.
Tenteidentificar:
1) Medula espinal.
2) Fgado (com hematopoiese).
3) Intestino delgado.
4) Mesonefro.
5) Primrdio de gnada.
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12 TEMA
NOES GERAIS DE TERATOLOGIA VETERINRIA
OBSERVAO DE ALGUNS CASOS CONCRETOS

Generalidades sobre a Teratologia
A Teratologia a Cincia que estuda as malformaes congnitas. A
palavra deriva dos vocbulos gregos teratos (monstro) e logos (estudo,
discurso). No campo da Medicina Humana, apresenta uma considervel
carga discriminatria (mesmo pejorativa) em relao aos portadores de
desvios do desenvolvimento normal (por vezes, j bastante discriminados
pela sociedade). Assim, o termo sinonmico Dismorfologia ser de emprego
prefervel.

Quanto etiologia (causa), as dismorfologias dividem-se em:
Malformaes o erro na diferenciao de um (ou mais) rgos
intrnseco e devido a uma mensagem defeituosa do genoma.
Deformaes as reaces moleculares inerentes diferenciao
dos diversos rgos so normais, mas o desenvolvimento afectado
por alteraes mecnicas exgenas (exemplo: p boto no Homem,
devido a presses exercidas pelo mnios corrigvel por meio da
Ortopedia).
Desorganizaes - as reaces moleculares inerentes ao
desenvolvimento so normais, mas factores exgenos adversos
causam a morte de grupos de clulas em diferenciao, com
consequente desenvolvimento insuficiente dos rgos.
Um exemplo de desorganizao dado pelo vrus da panleucopnia felina.
Este vrus de ADN provoca no gato adulto uma grave gastroenterite e uma
baixa na produo de leuccitos. Numa gata grvida infectada por este
vrus, ele pode atravessar a placenta e, nos fetos, provoca a morte de
neurnios em desenvolvimento no cerebelo. Por isso, este rgo nunca
atinge o volume normal, e os gatinhos apresentam graves dficits de
equilbrio.
Ainda quanto causa, esta :
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Desconhecida em 50% dos casos;
Devida ao genoma (causas endgenas ou intrnsecas) em 18% dos
casos; neste caso, podem ser:
o Mutaes de um nico gene;
o Troca de ADN entre cromossomas no homlogos;
o Alterao do nmero de cromossomas.
Causada por factores ambientais (causas exgenas ou extrnsecas)
em 7% dos casos.
Provocada por factores gnicos e ambientais (etiologia multifactorial)
em 25% dos casos.

Classificao das dismorfologias
Sob um ponto de vista anatmico, as dismorfologias podem ser
classificadas em:
Simples atingem um nico indivduo (num ou em vrios rgos).
Duplas observam-se dois (ou mais) indivduos ligados por
formaes anatmicas.
O estudo e a classificao das dismorfologias simples muito complexo e,
em Medicina Humana, est anexo a cada especialidade (exemplo: as
malformaes cardacas so estudadas em profundidade em Cardiologia).
Foram desenhados vrios sistemas de classificao das dismorfologias
duplas, alguns bastante complexos. No objectivo da Embriologia e
Biologia do Desenvolvimento o seu estudo detalhado. Pode-se acrescentar
que uma classificao simples e suficiente para uma prtica clnica ou
mdico-legal Veterinria est descrita no livro Patologia Geral para
Veterinrios, de W. Frei, J. Dobberstein, D. Matthias, S. Rubarth, G.
Pallaske e H. Stnzi, editado pela Fundao Calouste Gulbenkian (Lisboa).
Outra classificao simples e clara est descrita no artigo Anatomic
description of conjoined twins: a plea for standardized terminology, de R.
Spencer, publicado no Journal of Pediatric Surgery (1996), Vol. 31, N 7, pp.
941-944.
Um pouco de Histria
Desde que os seres multicelulares apareceram na Terra, houve a
possibilidade da ocorrncia de alteraes no padro corporal. Na antiga
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cidade de Nnive (Assria Babilnia), foram descobertos relatos datados
do sculo VII a.C. relativos a malformaes humanas e em animais (porco).
Ao longo da Histria foram descritos diversos casos, como o de Sebastian
Brant, antes de 1496, relativo a um leito com dois corpos e oito patas. No
sculo XIX, tienne Geoffroy Saint-Hilaire (1772-1844) e o seu filho, Isidore
Geoffroy Saint-Hilaire (1805-1861) lanaram as bases cientficas da
Teratologia, tendo criado uma classificao das dismorfologias duplas
(gmeos siameses). Willem Vrolik (1801-1862) debruou-se sobre
algumas malformaes, em particular a ciclopia (em crianas, leites,
cordeiros e gatos).

Feto Lepordeo
Anencefalia. Polimelia.
Membro anterior suplementar inserido no dorso.
Membro posterior extranumerrio inserido na regio dorsal do sacro.
Notas de apoio -

Leito
Perosomus elumbis desenvolvimento muito rudimentar das regies
lombar e sagrada com subsequente encurtamento do tronco.
Ausncia de fuso, ao nvel mdio ventral, das paredes laterais do corpo,
com exteriorizao das vsceras do tronco.
Notas de apoio -

Feto pequeno ruminante
Membro anterior direito hipoplsico e malformado meromelia.
Membro anterior esquerdo de conformao externa normal.
Ausncia dos membros posteriores amelia.
Notas de apoio

Feto pequeno ruminante
Duplicao total da regio facial.
Duplicao parcial do crnio.
Tronco e membros de morfologia externa normal.
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Duplicao simtrica incompleta anterior diprosopo (ou parpago
diprosopo).
Notas de apoio

Cordeiro cabea empalhada
Duplicao completa da regio facial.
Duplicao parcial do crnio.
Duplicao simtrica incompleta anterior diprosopo (ou parpago
diprosopo).
Notas de apoio

Leito
Duplicao da cabea.
Duplicao do tronco com dois membros anteriores normais (posio lateral
direito e esquerdo); membro anterior parcialmente duplicado entre as
cabeas.
Dois membros posteriores.
Juno lateral dos troncos ao nvel das regies lombar distal e sagrada.
Duplicao simtrica incompleta anterior parpago dicfalo.
Notas de apoio

Feto pequeno ruminante
Uma cabea.
Dois troncos completos (com os respectivos membros) situados frente-a-
frente.
Duplicao simtrica completa cefalpago.
Notas de apoio

Leito
Uma cabea.
Um pescoo largo.
Dois troncos completos (com os respectivos membros) unidos frente-a-
frente, ao nvel do trax e parte superior do abdmen.
Duplicao simtrica completa cefalpago.
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Notas de apoio

Leito
Cabea globosa (ao tacto, tem consistncia mole possvel hidrocefalia).
Pescoo largo.
Dois troncos completos (com os respectivos membros) unidos frente-a-
frente, ao nvel do trax.
Duplicao simtrica completa cefalpago.
Notas de apoio

Gato
Monstro parasita (parte posterior) inserido na face ventral da parede
torcica do autosita.
Duplicao assimtrica posterior.
Notas de apoio -