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Laborat Laborat rio de rio de

Hematologia Hematologia
Regras de segurana
Produtos biolgicos usados. Punes e bipsias
Conservao de amostras
Anticoagulantes
Controlo de qualidade
Parmetros hematol Parmetros hematol gicos usados na gicos usados na
rotina laboratorial rotina laboratorial
(Mtodos manuais)
Hemograma
Eritrograma (contagem de GV, doseamento de
hemoglobina e hematcrito) leucograma (contagem
de glbulos brancos e frmula leucocitria)
Valores normais
Execuo e colorao de esfregaos de
sangue
Velocidade de sedimentao
Contagem de reticulcitos
Estudo da Hemostase:
Contagem de plaquetas. Agregao plaquetria
Tempo de protrombina (Taxa e INR)
Hematologia Hematologia
1 1 Aula Aula Te Te rico rico- -pr pr tica tica
3 3 ano ano 2010 2010- -11 11
Leonor Correia
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Regras de seguran Regras de seguran a a
Manual de Boas Pr Manual de Boas Pr ticas de Laborat ticas de Laborat rio rio
( (Despacho n Despacho n 8835/2001) 8835/2001)
O manual regulamenta a prtica laboratorial em todas as valncias das Anlises
Clnicas, sendo um instrumento de garantia da qualidade nos laboratrios. Foi
elaborado pelas Ordens dos Farmacuticos e dos Mdicos, em conjunto com uma
Comisso Tcnica Nacional.
O Manual:
Define regras de funcionamento do laboratrio no que se refere a
Organizao do laboratrio
Instalaes (inclundo normas de segurana)
Eliminao de resduos
Define regras na execuo dos exames laboratoriais
Colheita, identificao, conservao e transporte de amostras biolgicas
Validao dos resultados
Expresso e transmisso dos resultados
Define regras e processos de garantia da qualidade
Regulamenta o equipamento mnimo necessrio para a realizao das
anlises
Regulamenta o n mnimo de determinaes em cada uma das reas,
para que o laboratrio tenha viabilidade
Estabelece as normas relativas instalao e funcionamento dos postos
de colheita de produtos biolgicos
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Regras de seguran Regras de seguran a a
Procedimento em caso de picada com Procedimento em caso de picada com
agulha usada agulha usada
Espremer bem a zona da picada e desinfect-la com gua de
Javel.
Comunicar a ocorrncia ao Director Tcnico (ou ao docente)
Proceder determinao de HIV, HBV e HCV no soro do utente no qual foi
utilizada a agulha em questo;
Proceder determinao dos mesmos parmetros no soro do do tcnico
picado.
Se o soro do utente for positivo Se o soro do utente for positivo para algum dos parmetros, dever-se-
activar o seguro de acidentes de trabalho e encaminhar o tcnico
para acompanhamento mdico.
Se o soro do utente for negativo Se o soro do utente for negativo, repetem-se as anlises no soro do
tcnico passados 1 e 6 meses. Dever-se- tambm comunicar a
ocorrncia companhia de seguros.
Este procedimento tambm aplicvel em caso de contaminao
por outras vias (ex: contacto de sangue na pele com cortes ou feridas).
4
Regras de seguran Regras de seguran a a
.1
Diapositivo 4
.1
Leonor Correia; 02-03-2009
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Regras de seguran Regras de seguran a a
6
Nas aulas laboratoriais de Nas aulas laboratoriais de Hematologia Hematologia
obrigatrio o uso de bata e de luvas durante o
manuseamento das amostras e durante o trabalho
experimental e analtico.
obrigatria a lavagem das mos quando se deixa a rea
de trabalho.
obrigatria a colocao de todo o material descartvel,
usado no contacto com amostras de sangue e derivados,
nos sacos plsticos colocados em suportes em cima das
bancadas (pipetas Pasteur de vidro ou plstico, capilares,
tubos Eppendorff, pontas de pipetas, papel sujo de sangue,
luvas, etc)
Comunicar de imediato ao docente ou auxiliar de
laboratrio o derramamento de produtos biolgicos na
bancada, nos equipamentos e no cho.
Regras de seguran Regras de seguran a a
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Produtos Produtos biol biol gicos gicos usados usados
em em hematologia hematologia
Bipsias
- Medula ssea
- Bao
- Gnglio
linftico
Punes
- medular
- sangunea
- capilar
- venosa
- arterial
http://www.sigmaaldrich.com/sigma/general%20information/insert_pt_gs10.pdf
http://www.hematologica.pl/Atlas3/Angielska/Erythropoiesis/42e.htm
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Bi
Bi

psia
psia
Medular
Medular
OSSO: OSSO: Osteoblastos,
osteoclastos, osteide
ESTROMA: ESTROMA:
Vasos, reticulina, fibroblastos,
gordura e ferro
TECIDO TECIDO
HEMATOPOI HEMATOPOI TICO TICO: :
Sries granuloctica,
monoctica, linfoctica,
eritrocitria e megacarioctica
OUTRAS C OUTRAS C LULAS: LULAS:
plasmcitos, macrfagos e
mastcitos
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BI BI PSIA MEDULAR PSIA MEDULAR- - morfologia morfologia
Trabcula
ssea
Adipcitos
Tecido
hematopoitico
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Bi Bi psia psia Medular Medular
fibras de fibras de reticulina reticulina
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1. Local de colheita:
Amostra normalmente retirada do osso liaco (anca) ou
esterno.
Nas crianas pequenas a amostra pode ser recolhida do
osso das costas (vrtebra) ou da perna (tbia).
2. Material de colheita:
Agulhas apropriadas para bipsia
Figura 13: Agulhas prprias para biopsia medular
Pun
Pun

o
o
medular
medular
12
Pun
Pun

o
o
medular
medular
13
Pun
Pun

o
o
medular
medular
14
Pun Pun o o medular medular
Esfrega Esfrega o o - - execu execu o o
15
Esfrega Esfrega o o medular medular
16
Mielograma Mielograma - - Valores Normais Valores Normais
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Esfrega Esfrega o o sangu sangu neo neo
Execu Execu o o
18
Execu Execu o de o de Esfrega Esfrega os os
19
C
O
N
T
A
G
E
N
C
Eritrcitos 4.0-6.0 x 10
12
/L
Hemoglobina 12-18 g/dL
Hematcrito 0.36-0.50 L/L
VGM 80-96 fL
HGM 27-32 pg
CHGM 32-36 g/dL
RDW
11.5-14 %
Leuccitos 4.0-11.0 x 10
9
/L
FL (%)
Neutrfilos 45-70% 2.5-7.5 x 10
9
/L
Eosinfilos 1-5% 0.4-0.44 x 10
9
/L
Basfilos 0-1% 0.01 -0.1x-0.10
9
/L
Linfcitos 20-40% 1.5-3.5 x 10
9
/L
Moncitos
3-10% 0.2 -0.8x 10
9
/L
Plaquetas 150-400 x 10
9
/L
HEMOGRAMA HEMOGRAMA
hama (sangue)
grmma (registo
Contagem e
caracterizao dos
elementos figurados
do sangue perifrico
HEMOGRAMA HEMOGRAMA
Valores normais Valores normais
20
ERITROGRAMA ERITROGRAMA
1) 1) Hemat Hemat crito crito
2) 2) Contagem Contagem de de eritr eritr citos citos
3) 3) Doseamento de Doseamento de
hemoglobina hemoglobina
4) 4) CONSTANTES CONSTANTES
GLOBULARES GLOBULARES
- Volume Globular Mdio (VGM)
- Concentrao de Hemoglobina
Globular Mdia (CHGM)
- Hemoglobina Globular Mdia (HGM)
- Disperso dos volumes globular
(RDW)
Permitem a classifica Permitem a classifica o morfol o morfol gica das gica das
anemias anemias
5) 5) Estudo qualitativo dos Estudo qualitativo dos
eritr eritr citos citos (alteraes de
cor, tamanho e forma)
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ERITROGRAMA ERITROGRAMA
1) 1) Contagem Contagem de de eritr eritr citos citos
Tcnica
Colocar 4 ml de sol de Hayem em
tubo de hemlise.
Pipetar com micropipeta 20 ml de
sangue acabado de homogeneizar.
Limpar a parede externa da ponta
da pipeta com papel absorvente.
Lavar a parede interna da ponta
da micropipeta com o diluente de
forma a que todos os glbulos
medidos fiquem em suspenso
Homogeneizar a suspenso com
movimentos suaves e repetidos
Encher a cmara de Newbauer
Contar os eritrcitos em 5
quadrados tercirios da cmara
Diluente
Soluo de Hayem
Cloreto mercrico.2,5 g
Sulfato de sdio.25 g
Cloreto de sdio..5 g
gua destilada..qbp 1L
rea total de contagem =
0,2mmx0,2mm = 0,04mm2
0,04mm2x5 = 0,2 mm2
Vol. total de contagem =
0,1mmx 0,2 mm2 =0,02 mm3
factor de diluio = 200
0,02 mm3 ___ N (eritrcitos)
1 mm3 ___ X
X = N /0,02
N leuccitos/mm3 de sangue
= (N/0,02)x200
= Nx104
N leuccitos/L de sangue
= Nx1010
VN adulto: 4-6x1010
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2) HEMAT 2) HEMAT CRITO CRITO
VN: H: 0,45 5 L/L
M: 0,41 5 L/L
Volume relativo ocupado pelos
eritrcitos numa coluna de
sangue centrifugado
Hematcrito = Poliglobulia
H>0,52 e M>0,50 = volmia,
viscosidade
Hematcrito (anemia)
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3) Doseamento de hemoglobina 3) Doseamento de hemoglobina
M M todo da todo da cianometahemoglobina cianometahemoglobina
Reagente Reagente
Soluo de Drabkin*
Ferricianeto de
K.0,2g
Cianeto de
K.0,005g
Bicarbonato de
Na.....1g
gua destilada
..qbp 1 L
*elevada toxicidade
Fundamento Fundamento
O ferricianeto de k existente na soluo de
Drabkin vai oxidar o Fe2+ da Hb, que passa
a Fe3+, com consequente formao de
meta-hemoglobina. Esta, em presena do
cianeto de k, passa a cianometahemoglobina,
que estvel e que pode ser doseada
espectrofotomtricamente (560 nm)
T T cnica cnica
Dispensar (com doseador automtico), para tubo de ensaio 5 ml de
reagente de Drabkin.
Pipetar com micropipeta 20 ml de sangue acabado de homogeneizar
(dil:1/251). Limpar a parede externa da ponta da pipeta com papel
absorvente
Inserir o volume de sangue medido no sol. de Hayem. Lavar a parede
interna da ponta da micropipeta no diluente.
Homogeneizar a suspenso no Vortex.
Deixar repousar 5-10 minutos.
Ler, em espectrofotmetro (540 nm) a absorvncia da amostra contra
um branco de sol de Drabkin.
Calcular a concentrao de Hb da amostra (g/dl), introduzindo o valor
da absorvncia obtido numa curva de calibrao prviamente
estabelecida.
Valores de referncia Valores de referncia
H: 16 2 g/dL ;
M: 14 2g/dL
ANEMIA: Hb <12 g/dL (Mulher)
Hb <14 g/dL (Homem)
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4) CONSTANTES GLOBULARES 4) CONSTANTES GLOBULARES
1) Volume Globular Mdio (VGM)
2) Hemoglobina Globular Mdia (HGM)
3) Concentrao de Hemoglobina Globular
Mdia (CHGM)
4) Disperso dos volumes globular (RDW) e
plaquetar mdios (PDW)
Permitem a classifica Permitem a classifica o morfol o morfol gica das anemias e a sua gica das anemias e a sua
orienta orienta o etiol o etiol gica gica
25
f
L
%
Volume Globular M Volume Globular M dio dio (VGM) (VGM)
Normocitose Normocitose (VGM: 80 (VGM: 80- -96 96 fL fL) )
VGM>96 VGM>96 fL fL
Macrocitose Macrocitose
VGM<80 VGM<80 fL fL
Microcitose Microcitose
4) 4) Indices Indices globulares globulares
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Microcitose Microcitose
Normocitose Normocitose
27
Concentra Concentra o de Hemoglobina Globular M o de Hemoglobina Globular M dia dia
(CHGM) (CHGM)
%
0 5
0
Normocromia Normocromia
(CHGM:32 (CHGM:32- -36 g/dl) 36 g/dl)
Hipocromia Hipocromia
(CHGM: <32 g/dl) (CHGM: <32 g/dl)
Hipercromia Hipercromia
(CHGM: >36 g/dl) (CHGM: >36 g/dl)
28
Hipocromia
Normocromia Normocromia
29
Indices Indices globulares globulares
Coeficiente de variao da
distribuio do volume
eritrocitrio.
Executado apenas pelos
aparelhos automticos a partir
do histograma de distribuio do
volume dos eritrcitos
VN: 11,5-14%
RDW>15% Anisocitose
Hemoglobina Globular M Hemoglobina Globular M dia dia - - (HGM) (HGM)
RDW RDW
30
Estudo qualitativo dos eritrcitos
(alteraes de cor, tamanho e forma)
5) EXAME MORFOL 5) EXAME MORFOL GICO GICO