GENTICA E BIOLOGIA MOLECULAR

Frederick Griffith - Primeiro experimento fundamental

Forneceu um teste bioqumico para tentar isolar a informao transformadora da substncia
gentica
Duas sepas: Sepa S (lisa)/Sepa R (aspera).
Teste em camundongos injetando subcutneo, a S morria e a R vivia.
Pneumococos virulentos mortos por temperatura e pneumococos avirulentos vivos se ele
injetasse simultaneamente, os camundongos morriam.
Existia um principio que era capaz de transformar avirulentos em virulentos. O princpio
transformante.
A identificao do princpio transformante seria possvel se as fraes de naturezas qumicas
diferentes fossem isoladas, centrifugadas e purificadas, e assim ver qual era a frao capaz de
ser o princpio transformante. Mas isso ele no conseguiu realizar.
AveryMacLeodMcCarty - Segundo experimento fundamental (Continuao do primeiro)
Isolaram em fraes proteicas, polissacardeas e a que continha o desoxirribonucleico. E a que
era capaz de transformar era a que continha o DNA.
Trataram esse DNA com proteases e mesmo assim mantinha a capacidade de transformar o
pneumococos, se fosse a protena iria degradar e perderia sua capacidade. Tambm trataram
essa frao com rnases que degradam RNA, e a capacidade tambm se mantinha. Se tratasse
com enzimas que degradavam DNA, as dnases, perdia a capacidade. E viram que essa
resistncia indicava que essa frao era o DNA.
Alfred Hershey e Martha Chase - Terceiro experimento fundamental
Eles trabalharam com um vrus que ataca bactria. Esse tipo de vrus chamado de
bacterifago (comedor de bactria) ou simplesmente fago. J se conhecia que o vrus se
associava a superfcie da bactria e depois de um tempo ela explodia, espalhando partculas
virais. O vrus injetava na bactria a substncia que carreava a informao para sntese de
novas partculas de vrus. O vrus uma capa proteica com DNA dentro. Queria saber o que o
bacterifago injetava para gerar essa nova produo. Protena ou DNA?
Eles trabalharam com um vrus, um bacterifago que tinha protena marcado com um istopo
radioativo enxofre 35, e o DNA marcado com o fsforo 32. Isolaram esses vrus e infectaram
um outra colnia de bactrias, esperaram elas se misturarem e agitaram para que o capsdeo
ficasse desconectado da bactria. Centrifugaram e analisam qual istopo estava presente, o
que o vrus que injetou foi o fsforo 32.
Mostraram que o princpio transformante o DNA e no a protena.
Erwin Chargaff - Quarto experimento fundamental
No DNA as propores de adenina e timina/citosina e guanina eram de 1:1. Isso foi
fundamental para que Watson e Crick propusessem a teoria da estrutura de dupla hlice do
DNA.
Watson e Crick
Modelo dupla hlice do DNA.
Modelo semiconservativa: onde as fitas se separam e so complementadas com uma fita filha.
Modelo conservativo: a fita me se conserva e um novo modelo dupla hlice surge sendo fitas
filhas iguais a fita me.
Meselson-Stahl
Esses dois cientistas trabalhavam com um mtodo de ultracentrifugao, que uma tcnica de
biologia molecular muito utilizada. Eles trabalharam com dois istopos de nitrognio, 14
(comum) e 15 (pesado). Eles usaram esses istopos para produzir DNAs diferentes. Pegaram
N15 e deram para a bactria, e ela produziu suas bases nitrogenadas com N15, o DNA dessa
bactria era todo composto por molculas de nitrognio pesado. Quando comparado com o
DNA 14, as caractersticas qumica so as mesmas mas uma propriedade fsica muda, pesado
e em um volume igual. Quando voc coloca mais massa num mesmo volume tem uma
densidade maior, eles conseguiram produzir um DNA com uma densidade maior, o DNA com
N15 um DNA mais denso. Eles fizeram isso e depois trocaram o nitrognio disponvel pelo
N14, e deixaram a bactria crescer, sintetizar DNA. E isolaram esse DNA. E um outro meio com
bactria com N15, deixaram ela se duplicar duas vezes.
Eles compararam essas densidades atravs da ultracentrifugao. O cloreto de csio mede
essas densidades, quanto mais cloreto de csio maior a densidade.
Em uma molcula comum (DNA N14), migravam para um gradiente de densidade at uma
densidade igual a dela mesma. O DNA N15 se movimentava um pouco mais para o fundo do
tubo do que o DNA N14.
Eles desenvolveram essa tcnica, eles podiam misturar DNA N14 e N15 e depois eles podiam
separar esses dois DNAs, olhando a regio onde foi parar o DNA mais pesado e o leve.
Quando eles pegaram a bactria que tinha crescido em ambiente N15, tiraram desse meio e
colocaram no meio de cultura com N14, deixaram ela sintetizar um novo DNA uma vez. Esse
DNA era o chamado de intermedirio. Isso mostra que essas novas quantidades de DNA
tinham uma fita de cada DNA (N14 e N15). Eram molculas hbridas e mostraram a teoria
semiconservativa aplicada.