Aula06 BioqII-CFBio FosforilaçãoOxidativa CTE

Aula de Bioqumica II SQM04242014201
Bacharelado em Cincias Fsicas e Biomoleculares

Tema:
Fosforilao Oxidativa
Cadeia transportadora de eltrons
Prof. Dr. Jlio Csar Borges
Depto. de Qumica e Fsica Molecular DQFM
Instituto de Qumica de So Carlos IQSC
Universidade de So Paulo USP
E-mail: borgesjc@iqsc.usp.br
Fosforilao oxidativa
Fim das rotas metablicas de produo de energia em
organismos aerbicos
- Representa o estgio 3 do processo
Acoplamento da oxidao de NADH e FADH2 e sntese de ATP
- o principal stio de produo de ATP
- Envolve o consumo de O2 e formao de H20
Teoria Quimiosmtica
- Fluxo de eltrons por carreadores criam um gradiente de
concentrao de prtons na membrana mitocondrial
- A quebra deste gradiente est acoplada com a sntese de ATP
LOCAL: MITOCNDRIA
- Organela de eucariotos
Possui duas membranas
Membrana Mitocondrial externa - MME
- Permevel a pequenas molculas
Membrana Mitocondrial interna - MMI
- Impermevel a maioria das molculas
- Inclusive H+
- Necessidade de transportadores
de membrana
Espao intermembranal
-Cristas membranais
Matriz mitocondrial
- Local de oxidaes
- Ciclo de Krebs
- -oxidao de lipdeos
- Oxidao de Aminocidos
Mitocndria
Os carreadores que transportam os eltrons do NADH e FADH2
at O2 esto na MMI
A oxidao de NADH e FADH2 promovida pela CTE
Alguns desses centros redox so mveis ou protenas
integrais de membrana
LOCAL: MITOCNDRIA
LOCAL: MITOCNDRIA
MMI
-~ 75% de protenas: mais
rica em protenas do que a
MME
A impermeabilidade da MMI para a maioria dos ons e

metablitos permite a formao de um gradiente de ons
atravs dessa barreira
Resulta na compartimentalizao das funes
metablicas entre o citosol e a mitocndria
- permevel a O2, CO2 e

H2O
- Contm protenas de
transporte que controlam a
passagem de metablitos,
como ATP, ADP, o piruvato,
o Ca2+ e o fosfato
A MMI contm protenas que acoplam processos:

Fluxo de eltrons (favorvel) com o fluxo de prtons (desfavorvel);
Fluxo de prtons (favorvel) a fosforilao oxidativa (desfavorvel).
Os eltrons passam por uma srie de carreadores
CADEIA TRANSPORTADORA
DE
ELTRONS
OU
CADEIA RESPIRATRIA
Os carreadores que transportam os eltrons do NADH e FADH2 at O2 esto na MMI

- A oxidao de NADH e FADH2 promovida pela cadeia de transporte de eltrons
- Alguns desses centros redox so mveis ou protenas integrais de membrana
- Dependem dos grupos protticos associados
A sequncia de carreadores de eltrons reflete seus potenciais de reduo relativos
O processo exergnico
Transporte de e
1) 1 e
Fe3+ para Fe2+
2) 1 e + 1 H+
3) 2 e na forma de :H-
DE
ELTRONS
OU
CADEIA RESPIRATRIA
Potencial de transferncia de eltrons

'
0
= potencial de reduo
= potencial redox
= potencial de oxidorreduo
Forma oxidada (oxidante) X

Par redox
H+ : H2
Forma reduzida (redutor) X

Potencial de reduo = 0 V
Potencial de reduo 0
A forma oxidada tem menor afinidade por eltrons que o H2
Potencial de reduo 0
A forma oxidada tem maior afinidade por eltrons que o H2
Um agente redutor forte (como o NADH) tem a tendncia de doar eltrons (E0 < 0);
um agente oxidante forte (como o O2) est pronto para aceitar eltrons (E0 > 0)
A fora impulsora da fosforilao oxidativa o potencial de transferncia
de eltrons de NADH e FADH2 em relao ao do O2
DE
ELTRONS
OU
CADEIA RESPIRATRIA
Os carreadores de e
NAD(P)H
So carreadores de eltrons solveis em gua, que se associam reversivelmente
a desidrogenases
Substrato reduzido + NAD(P)+
**Desidrogenases
Substrato oxidado + NAD(P)H + H+
remoo de 2 tomos de H do substrato

:H- NAD+
H+ Liberado do meio
NADH carreador de eltrons das vias catablicas at a entrada na CTE

NADPH geralmente supre eltrons para reaes anablicas
[NADH]
[NAD+ ]
Nas clulas
NADH
Razo baixa
carreador de e- no
catabolismo
[NADPH]
[NADP+ ]
Razo
alta
NADPH
Poder redutor a reaes
anablicas
DE
ELTRONS
OU
CADEIA RESPIRATRIA
Os carreadores de e
Flavoprotenas
Contm um nucleotdeo de flavina (FMN ou FAD) parte do stio ativo da
flavoprotena
Pode aceitar 1 eltron semiquinona ou 2 eltrons FADH2 FMNH2
A forma oxidada (FMN) reage com um prton e um eltron, convertendo-se na forma semiquinona
(FMNH); a incorporao de mais um prton e um eltron resulta na forma totalmente reduzida (FMNH2).
Flavoprotenas
podem participar da transferncia de 1 ou 2 e- intermedirios entre reaes
onde 2e- so doados (desidrogenaes) e onde 1 e- doado (reduo de uma quinona
a hidroquinona).
DE
ELTRONS
OU
CADEIA RESPIRATRIA
Os carreadores de e
Carreadores no podem atravessar a MMI, MAS os equivalentes redutores

podem ser lanados atravs da membrana indiretamente
Equivalentes redutores
termo geral para um eltron ou equivalente de eltron na
forma de um tomo de hidrognio ou de um on hidreto.
Ocorrem 3 tipos de transferncia de eltrons na CTE

Transferncia direta como na reduo de Fe3+ a Fe2+
Transferncia na forma de um tomo de hidrognio (H+ + e-)
Transferncia como on hidreto (:H+) que tem 2 eltrons
+ 3 tipos de molculas carreadoras de eltrons atuam na CTE:

Ubiquinona (quinona hidrofbica)
Citocromos
Protenas ferro- enxofre
Protenas (diferentes) que contm ferro
DE
ELTRONS
Os carreadores de eltrons na mitocndria

COENZIMA UBIQUINONA (Q)
- Pequena e Lipossolvel
Quinona composto benznico
com duas funes cetona
Aceita 1 eltron
Constituda de unidades
isoprenides (cada uma com 5C)
A coenzima Q10 a mais
comum em mamferos (10
unidades de isopreno)
Fcil de desprotonar,
formando um radical
aninico de semiquinona
Aceita 2
eltrons
Forma que fixa mais

firmemente seus prtons
Lipossolvel
se difunde livremente no espao
intermembranas
Capaz de fazer a juno entre o doador
de 2e- e um aceptor de 1e- (como as
flavoprotenas)
Carrega tanto eltrons como prtons

** acopla fluxo de e- com o movimento de
prtons
DE
ELTRONS

PROTENAS COM CENTROS DE FERRO-ENXOFRE
- Estrutura varivel simples a complexas
- O on Fe sofre reaes de xido-reduo
Os tomos de ferro esto ligados a tomos de
enxofre inorgnico ou com tomos de enxofre
em resduos de cistena ou com ambos
Podem ter de 1 a 4 tomos de ferro
*** Protenas ferro-enxofre de Rieske

1 Fe est associado com dois resduos de His ao
invs de Cys
DE
ELTRONS

Citocromos a, b e c
Seus grupos prostticos grupos Heme
Citocromo c
solvel no espao intermembrana
Podem interagir com a MMI
DE
ELTRONS
O fluxo de eltrons pelos carreadores vai daquele com menor potencial para o maior
potencial
NADH
Cit b
Cit c1
Cit c
Cit a
Cit a3
O2
DE
ELTRONS
Os carreadores de eltrons na MMI: 4 complexos

Complexo I
do NADH para formar Ubiquinol
NADH:Ubiquinona-oxidoreductase ou NADH-desidrogenase
Complexo II
do FADH2 para formar Ubiquinol

Succinato-desidrogenase
Complexo III
do Ubiquinol para o Citocromo c
Ubiquinona:Citocromo c-oxidoreductase
Complexo IV
do Citocromo c para o O2
Citocromo c-oxidase
COMPLEXO I: NADH:UBIQUINONA-OXIDOREDUTASE
OU
NADH-DESIDOGENASE
Grupos prostticos: FMN e Fe-S
Porta de entrada dos e do NADH produzidos

dentro da mitocndria
-O Complexo catalisa 2 processos simultneos e
acoplados
1) NADH + H+ + Q
NAD+ + QH2
Exergnico
2) Transferncia de 4 H+ para o espao
intermembrana
Endergnica
COMPLEXO II: SUCCINATO-DESIDOGENASE
Porta de entrada dos e do FADH2 produzidos no ciclo do cido ctrico
Porta de entrada dos e do NADH
produzidos no citoplasma
- Canaliza diretamente os e do succinato
para a cadeia transportadora de e
FADH2 + Q
FAD + QH2
Exergnico
Sem transferncia de H+ para o
espao intermembrana
Porta de entrada de e de outras vias
oxidativas
- -oxidao de cidos graxos
COMPLEXO I
E COMPLEXO
II
4)
Vias de entrada de e para a
ubiquinona:
1) NADH mitocondrial,
2) Succinato do ciclo do cido
ctrico,
2)
3) e da -oxidao de cidos
graxos via Acil-CoA-
3)
1)
desidrogenase e do glicerol dos

triacilglicerois
4) NADH citoslico via glicerol
3-fosfato
A ubiquinona o ponto de convergncia dos e- (Fontes 1 a 4)
O ubiquinol de todas essas reaes (pool de QH2) oxidado no Complexo III
COMPLEXO III: UBIQUINONA:CITOCROMO C-OXIDOREDUTASE
Canaliza os 2 e do Ubiquinol (QH2) para o Citocromo C com a transferncia de H+ da
matriz mitocondrial para o espao intermembrana
- possui duas unidades de Citocromo b enterrados em 1 fenda na membrana
QH2 + 2 Citc1 (Oxi) + 2 H+N
Q + 2 Citc1 (Red) +
4 H+P
COMPLEXO III: UBIQUINONA:CITOCROMO C-OXIDOREDUTASE
2 e do Ubiquinol so afunilados no Citc
carreador de 1 e
2 ciclos de reduo do Citc com a formao da Semiquinona (.Q-)

1 Ciclo
-1 e do QH2 passado para o
Citc no primeiro ciclo e o
outro e (via citocromo b)
para a Q formando
Semiquinona
- 2 H+ transportados para o
espao intermembrana
2 Ciclo
-1 e do QH2 passado para o
Citc e o outro e (via
citocromo b) para a
Semiquinona formando outra
QH2
+
- 2 H transportados para o
espao intermembrana
- 2 outros H+ so retirados da
matriz
1 Ciclo
2 Ciclo
COMPLEXO IV: CITOCROMO OXIDASE
Os e do Citocromo c so entregues ao O2
4 Citc (Red) + 8 H+N +
O2
4 Citc (Oxi) +
4 H+P
2 H2O
Os e- do citocromo c so entregues ao O2 (reduzindo-o a H2O)

Composto por 13 subunidades
aparentemente 3 so essenciais
Sub. II: 2 Cu ligados a resduos de Cys (centro binuclear CuA)

Sub. I: 2 grupos heme (a e a3) e outro on Cu (CuB)
Heme a3 e CuB forma outro centro binuclear
COMPLEXO IV: CITOCROMO OXIDASE
Os e do Citocromo c so entregues ao O2
4 Citc (Red) + 8 H+N +
O2
Envolve a participao de:

Ion CuA
Citocromo a
Citocromo a3-CuB (Centro Fe-Cu)
O2
4 ciclos so necessrios para

reduzir 1 O2 a 2 H2O
4 H+ transportados para o E.I.
4 outros H+ so retirados da
matriz para formar as 2 H2O
2 H+ por par de e-
4 Citc (Oxi) +
4 H+P
2 H2O
DE
ELTRONS
Resumo do processo
Equao Vetorial do transporte de Prtons pela cadeia

NADH + 11 H+N +
O2
NAD+ +
10 H+P
FADH2 + 6 H+N +
O2
FAD+ +
6 H+ P
+
+
1 H2O
1 H2O
NADH
H+ +
O2
DE
ELTRONS
NAD+
1 H2O
A G da reao pode ser medida a partir da diferena de voltagem entre meias clulas
Aoxn+ + Bred Ared + Boxn +
n+
[
A
][
B
0'
red
ox ]
G = G + RT ln n+
n
[ Aox ][ Bred ]
- Se G = w' = wel referente ao trabalho eltrico realizado a presso e volume constante

-Se o
wel = nfE
onde f a constante de Faraday (96.485 Cmol-1) e

- n o nmero de e/mol portanto:
G = nfE
Reorganizando
n+
[
][
A
B
RT
0'
red
ox ]
E = E
ln n+
n
nf [ Aox ][ Bred ]
Equao
de Nernst
- O E0 representa o potencial de reduo padro nas condies padres para

bioqumica
- Um Valor positivo para o E (potencial de reduo ou fora eletromotiva) sugere
espontaneidade da reao
- um valor positivo para o E representa um valor negativo para o G
NADH
NADH/NAD+
O2/H2O
H+ +
DE
ELTRONS
NAD+
O2
E0 = + 0,320 V
E0 = +0,816 V
TERICO
+
1 H2O
E0= E0Red + E0oxi = + 1,14 V
G0' = nfE 0' = 2(96,5kJ / V .mol )1,14V = 220kJ / mol(deNADH)

Succinato
O2
Fumarato
1 H2O
G 0' = nfE 0' = 2(96,5kJ / V .mol).0,785V = 150kJ / mol(deSuccinato)

A razo da [NADH]/[NAD+] >1 o que sugere que a G mais negativa do que -220 kJ/mol!
E energia liberada usada para gerar um gradiente de prtons que ento
utilizado para a sntese de ATP e para o transporte de metablitos pela
membrana mitocondrial
DE
ELTRONS
EFETIVO
A energia da transferncia de e eficientemente conservada em um gradiente
- Gradiente de prtons
- Gradiente eletroqumico
FORA PROTON-MOTRIZ
DE
ELTRONS
ENERGIA ELETROQMICA
A G associada ao processo de criao dos 2 gradientes :
C2
G = RT ln( ) + zf
C1
C2 = H+p
C1 = H+n
Lado positivo da MMI

Lado negativo da MMI
Espao intermembrana
Matriz mitocondrial
Z = valor absoluta da carga eltrica
1 para 1 H+
= Diferena do potencial transmembrana
pH = log[H + ]
C2
ln
= 2,3(log[H + ]p log[H + ]n ) = 2,3( pHn pHp ) = 2,3pH
C1
Logo:
G = 2,3RTpH + zf = (5,7kJ / mol ).pH + (95,6kJ / mol ).
DE
ELTRONS
A pH da MMI de 0,75 unidades de pH

A da MMI de 0,15-0,20 V
G = (5,7kJ / mol ).0,75 + (95,6kJ / mol ).0,15 = 19kJ / mol

A G associada oxidao de 1 mol de NADH :
Equao Vetorial do transporte de Prtons pela cadeia
NADH + 11 H+N +
O2
NAD+ +
10 H+P
Logo:
G = 19 kJ/mol*10 = ~190 kJ/mol
G0 = 220 kJ/mol
1 H2O
SISTEMAS
DE
TRANSPORTE MITOCONDRIAL
Espao intermembrana: entre a MME e MMI

- equivalente ao citosol no que se refere s concentraes em metablitos e ons
A MMI composta por cerca de 75%
de protenas mais rica em protenas
MME
- A MMI permevel a O2, CO2 e H2O
- Contm protenas de transporte que
controlam a passagem de metablitos,
como ATP, ADP, o piruvato, o Ca2+ e o
fosfato
A impermeabilidade da MMI para a
maioria dos ons e metablitos permite
a formao de um gradiente de ons
atravs dessa barreira
Resulta na compartimentalizao
das funes metablicas entre o citosol
e a mitocndria
SISTEMAS
DE
Transporte seletivo de eltrons produzidos no citoplasma para a mitocndria

- O NADH produzido no citosol pela gliclise deve ter acesso cadeia transportadora de
eltrons para a oxidao aerbica
- No h uma protena
transportadora de NADH
na MMI
- Somente os eltrons do
NADH citoslico so
transportados para a
mitocndria por um dos
vrios sistemas de
transporte
LANADEIRA DE MALATOASPARTATO
SISTEMAS
LANADEIRA
DE
GLICEROL-3-P
A glicerol-3-fosfato desidrogenase
catalisa a oxidao do NADH
citoslico pela DHAP para produzir
NAD+, o qual retorna gliclise
Os eltrons do glicerol-3-fosfato
so transferidos para a
Flavoprotena-desidrogenase da
MMI, formando FADH2,
O FADH2 fornece eltrons
diretamente para Cadeia
Transportadora de Eltrons
DE
SISTEMAS
TRANSLOCADOR
DE
DE
ATP/ADP-PI
A maior parte do ATP gerado na matriz

mitocondrial pela fosforilao oxidativa
utilizado no citosol
A MMI contm um translocador de ADPATP (ou adenina-nucleotdeo translocase)
- Transporta o ATP para fora da matriz
mitocondrial acoplado importao de
ADP e Pi produzidos no citoplasma a
partir de ATP
- Sistema antiporte
- Mantm balano eletroltico pelo gasto
de energia quimiosmtica

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Bacharelado em Cincias Fsicas e Biomoleculares

A impermeabilidade da MMI para a maioria dos ons e

- permevel a O2, CO2 e

A MMI contm protenas que acoplam processos:

Os carreadores que transportam os eltrons do NADH e FADH2 at O2 esto na MMI

Potencial de transferncia de eltrons

Forma oxidada (oxidante) X

Forma reduzida (redutor) X

Substrato oxidado + NAD(P)H + H+

remoo de 2 tomos de H do substrato

NADH carreador de eltrons das vias catablicas at a entrada na CTE

Carreadores no podem atravessar a MMI, MAS os equivalentes redutores

Ocorrem 3 tipos de transferncia de eltrons na CTE

+ 3 tipos de molculas carreadoras de eltrons atuam na CTE:

Protenas (diferentes) que contm ferro

Os carreadores de eltrons na mitocndria

Forma que fixa mais

Carrega tanto eltrons como prtons

Os carreadores de eltrons na mitocndria

*** Protenas ferro-enxofre de Rieske

Os carreadores de eltrons na mitocndria

Os carreadores de eltrons na MMI: 4 complexos

do FADH2 para formar Ubiquinol

Grupos prostticos: FMN e Fe-S

Porta de entrada dos e do NADH produzidos

desidrogenase e do glicerol dos

2 ciclos de reduo do Citc com a formao da Semiquinona (.Q-)

Os e- do citocromo c so entregues ao O2 (reduzindo-o a H2O)

Sub. II: 2 Cu ligados a resduos de Cys (centro binuclear CuA)

Envolve a participao de:

4 ciclos so necessrios para

Equao Vetorial do transporte de Prtons pela cadeia

Aoxn+ + Bred Ared + Boxn +

- Se G = w' = wel referente ao trabalho eltrico realizado a presso e volume constante

onde f a constante de Faraday (96.485 Cmol-1) e

- O E0 representa o potencial de reduo padro nas condies padres para

E0= E0Red + E0oxi = + 1,14 V

G0' = nfE 0' = 2(96,5kJ / V .mol )1,14V = 220kJ / mol(deNADH)

G 0' = nfE 0' = 2(96,5kJ / V .mol).0,785V = 150kJ / mol(deSuccinato)

A energia da transferncia de e eficientemente conservada em um gradiente

A G associada ao processo de criao dos 2 gradientes :

Lado positivo da MMI

Z = valor absoluta da carga eltrica

= Diferena do potencial transmembrana

G = 2,3RTpH + zf = (5,7kJ / mol ).pH + (95,6kJ / mol ).

A pH da MMI de 0,75 unidades de pH

G = (5,7kJ / mol ).0,75 + (95,6kJ / mol ).0,15 = 19kJ / mol

Espao intermembrana: entre a MME e MMI

Transporte seletivo de eltrons produzidos no citoplasma para a mitocndria

A maior parte do ATP gerado na matriz

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