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n a n o t e c n o l o g i a s /a r t i g o s

nas quais, atravs de aes multidisciplinares concretas, a bionanointerface pode ser explorada, permitindo estabelecer respostas
proativas aos eventuais/potenciais efeitos nocivos mediatos e imediatos dos nanomateriais frente aos biossistemas.

Interao de nanomateriais
com biossistemas e a
nanotoxicologia: na direo
de uma regulamentao

Sobre biossistemas, nanomateriais e a bionanointerface


Biossistemas representam um complexo conjunto de elementos
correlacionados envolvendo componentes do mundo vivo, os
quais esto estruturados em nveis hierrquicos de organizao:
biomolculas < vias metablicas < organelas < clulas < tecidos <
rgos < sistemas < organismos < comunidades < ecossistemas <
biosfera. Os biossistemas so termodinamicamente abertos, encontram-se permeados por ordens e desordens em um equilbrio
dinmico (longe do equilbrio termodinmico). Estes so sistemas
auto-organizados que absorvem, transformam, produzem e armazenam compostos, energia e informao de maneira sofisticada,
construda ao longo do processo evolutivo da vida na terra h mais
3,5 bilhes anos (3; 4). O reconhecimento da relevncia desses nveis hierrquicos de organizao pode proporcionar uma unidade
conceitual rumo implantao e consolidao de uma nova biologia, capaz de integrar e reintegrar conhecimentos para promover
um profundo entendimento do mundo vivo, um dos pilares para
o desenvolvimento sustentvel (5).
As nanotecnologias podem ser entendidas como a capacidade
humana de compreender, modificar e controlar a matria em escala
nanomtrica (10-9 m). Est cada vez mais evidente que a reduo
do tamanho dos materiais leva ao surgimento de novas propriedades
fsicas e qumicas, devido ao aparecimento de efeitos qunticos de
tamanho e fenmenos de superfcies (6; 7). Ou seja, um material
com seu tamanho reduzido escala nanomtrica pode apresentar
propriedades eletrnicas, mecnicas e trmicas diferentes quando
em seu estado microscpico (slido estendido ou bulk). Outra consequncia da reduo do tamanho dos materiais o aumento da
rea superficial, graas ao aumento significativo da quantidade de
tomos superficiais quando comparado com o volume total da partcula, alterando assim, sua reatividade qumica. O interesse atual
nos nanomateriais est baseado na explorao dessas propriedades
nicas e dependentes do tamanho. Por exemplo, o ouro na forma de
slido estendido, tal como numa aliana de casamento, reflete a luz
atravs de sua superfcie e apresenta a cor amarela. Por outro lado,
quando temos ouro na forma de nanopartculas, ele absorve alguns
comprimentos de onda da luz e, desta maneira, pode apresentar
colorao vermelha, verde e at magenta, em funo do tamanho
das partculas. Outro exemplo, que mostra o efeito de tamanho das
partculas sobre as propriedades a temperatura de fuso do ouro:
quando slido estendido de 1063 C porm quando as partculas
so de 2 nm a temperatura da ordem de 550 C, ou seja, uma diferena de mais de 500 C! (8).
Logicamente, uma vez que as biomolculas (protenas, carboidratos, lipdios e cidos nucleicos) e a unidade bsica da vida
(clulas) esto compreendidas na mesma escala de tamanho que os
nanomateriais, eles podem interagir quando colocados em contato,
havendo a formao de uma bionanointerface (Figura 1).

Diego Stfani Teodoro Martinez


Oswaldo Luiz Alves

m dos maiores desafios deste sculo o desenvolvimento com sustentabilidade. Para isto, consenso que devemos buscar um modelo de gesto
que contemple: viabilidade econmica, equilbrio
ambiental, incluso com justia social e preservao
da diversidade cultural. Naturalmente, as nanotecnologias devem
ser includas nessas discusses, por se tratarem de tecnologias em
grande crescimento, e pelo fato de seus produtos (nanomateriais)
apresentarem elevada reatividade qumica e potenciais aplicaes
em diversos setores industriais. As implicaes das nanotecnologias
podem ser observadas, por um lado, pela participao e cobrana de
alguns setores da sociedade organizada em estabelecer marcos regulatrios, medidas de precauo e avaliao dos possveis riscos para a
sade humana e ambiental. Por outro lado, visada a explorao do
seu potencial econmico e cientfico-tecnolgico, atravs do desenvolvimento de processos industriais, metodologias e protocolos de
sntese, preparao, purificao, funcionalizao e caracterizao de
materiais funcionais na escala nanomtrica (1; 2).
Todavia, importante levar em considerao que os nanomateriais podem tornar-se contaminantes ambientais emergentes, em
um futuro no muito distante, uma vez que h um crescente interesse por esses tipos de materiais. Diante desse cenrio, muitas questes
ainda precisam ser respondidas, discutidas e refletidas, como por
exemplo:
Quais so as principais vias de contacto/interao dos nanomateriais com os biossistemas? Atravs de qual meio (aqutico, areo ou
terrestre) os nanomateriais penetram no ambiente?
Quais so os possveis modos de disperso e acmulo dos nanomateriais no ambiente? Esses materiais podem ser transformados
por fatores biticos e/ou abiticos? Eles interagem com outros contaminantes j presentes no ambiente?
Qual a estabilidade qumica da nanoestrutura? So solveis
em gua? Formam suspenses estveis ou se aglomeram em meios
biolgicos?
Quais so os subprodutos gerados durante a sntese dos nanomateriais? Quais so os subprodutos gerados na degradao?
Qual a toxicidade desses materiais frente aos biossistemas?
Quais mecanismos de interao esto envolvidos?
possvel remover ou remediar nanomateriais do ambiente caso
ocorra algum acidente? Qual o ciclo de vida dos produtos contendo esses materiais nanomtricos?
Dentro deste contexto, duas novas reas do conhecimento esto
emergindo, denominadas bionanotecnologia e nanotoxicologia,
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figura 2 evoluo do nmero de publicaes cientficas envolvendo toxicidade de nanomateriais e nanopartculas indexadas no
banco de dados do IsI Web of Knowledge

(11; 12). Talvez uma pergunta interessante neste contexto seria:


a toxicidade dos nanomateriais diferente quando comparamos
com materiais de tamanho micro/macro? Ou seja, a toxicidade
do carvo (formado somente por tomos de carbono), que usamos para fazer fogo, diferente dos nanotubos de carbono que,
por sua vez, tambm so constitudos somente por tomos de
carbono? A resposta : sim!
Nesse sentido, a preocupao com a nanotoxicidade surge na
medida em que diversificados nanomateriais so sintetizados, manipulados e descartados em diferentes ambientes, sejam naturais,
urbanos ou industriais, sem o devido controle e regulamentao.
Alguns motivos para ateno e cautela com os nanomateriais so:
a) crescente produo industrial (aumento do risco de exposio);
b) elevada rea superficial devido tamanho nanomtrico (alta reatividade qumica); c) enorme diversidade composicional e estrutural
(snteses, preparaes, modificaes, funcionalizaes, heterogeneidade e impurezas); d) ensaios toxicolgicos tradicionais no esto
adaptados e padronizados para nanomateriais.
Na Figura 2 apresentamos a evoluo no nmero de trabalhos
indexados no banco de dados do ISI Web of Knowledge, que reportam estudos de toxicidade de materiais nanoestruturados nos
ltimos dez anos. Embora seja expressivo e crescente o nmero de
artigos publicados nesta rea, ainda no h um consenso sobre os
riscos desses materiais para a sade humana e meio ambiente (13).
Um dos pontos cruciais para a avaliao e gesto do risco de
qualquer substncia ou agente a determinao precisa e inequvoca da sua toxicidade, ou seja, o grau ou a intensidade do efeito
adverso/txico sobre determinado bioindicador/biomarcador de
exposio. Classicamente, o corao da toxicologia o emprego de curvas dose-resposta para determinao de valores quantitativos de toxicidade. Neste ponto, a nanotoxicologia tem uma
caracterstica singular, pois difcil avaliar de maneira precisa e
inequvoca a toxicidade dos nanomateriais. O cerne desse problema reside na natureza fsico-qumica dos agentes estudados,

figura 1 elementos que do origem bionanointerface e suas


interaes em funo da escala nanomtrica

Como consequncia, dependendo da natureza das bionanointeraes, podero ocorrer significativos reflexos sobre os nveis
superiores da organizao dos biossistemas, devido interconectividade entre todos os nveis (9;10). As implicaes da bionanointerface podem causar fortes desdobramentos nos diferentes setores da sociedade como: sade e cuidados pessoais, agropecuria e
nutrio, meio ambiente e energia, militar e defesa, e outros. Tal
situao nos permite asseverar que os nanomateriais apresentaro
impactos (positivos ou negativos) sobre todas as tecnologias e cincias da vida, visto que esto sendo planejados e construdos nanossistemas com a capacidade de interagir com os nveis inferiores da
organizao biolgica, como o DNA e clulas. As principais motivaes para o estudo da interao de nanomateriais com biossistemas so: a) tamanho nanomtrico equivalente com a dimenso
das biomacromolculas e clulas; b) capacidade de interao e penetrao celular; c) superfcie qumica pode ser estrategicamente
modificada (funcionalizao); d) potencial para modulao e controle de funes biolgicas especficas; e) avaliao da toxicidade e
seus impactos sobre a sade humana e ambiental.
NaNotoxIcologIa A toxicologia pode ser definida como a cincia que estuda os efeitos adversos de agentes de natureza fsica,
qumica ou biolgica sobre os biossistemas, tendo como meta o
tratamento, o diagnstico e, principalmente, a preveno da intoxicao. evidente que a toxicologia possui grande importncia
na sociedade contempornea, sendo uma rea do conhecimento
essencial para o desenvolvimento sustentvel. Assim, a nanotoxicologia emerge como uma nova diviso dentro das cincias
toxicolgicas, tendo como objeto de estudo os nanomateriais
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pois, em geral, a toxicologia clssica est envolvida com o estudo
de toxicantes que so moleculares enquanto que em nanotoxicologia so estudados toxicantes que so partculas. Esta dualidade na
natureza dos toxicantes estudados (molculas versus partculas)
impe srias implicaes durante a avaliao da toxicidade. Todavia, tambm importante mencionar que a presena dos nanomateriais no ambiente no significa que haver sempre a manifestao e observao de efeitos adversos ou nocivos (txicos) a eles
associados. importante lembrar que a expresso desses efeitos
depende das caractersticas da exposio e de seu comportamento
no meio. Alm das propriedades fsico-qumicas do nanomaterial
avaliado, devemos considerar, por exemplo: a magnitude, durao e frequncia da exposio, a suscetibilidade dos organismos e,
sobretudo, as vias de introduo e contacto com os biossistemas,
sendo esta ltima diretamente interligada aos processos cinticos
e dinmicos da biointerao, e consequentemente, com a manifestao da nanotoxicidade (14; 15).
Diante de tal situao, apresentamos um conceito, ainda em
construo, mas que acreditamos ser oportuno difundir e discutir
dentro do emergente campo da nanotoxicologia. Este conceito
baseado na ideia da existncia de trs entidades interdependentes
(sinttica-coloidal-biolgica) em interao, que so fundamentais
para a avaliao da toxicidade de nanomateriais (Figura 3).

Entidade
Sinttica

Entidade
Coloidal

Entidade
Biolgica

Figura 3 Entidades interdependentes envolvidas na avaliao da


toxicidade de nanomateriais

Entidade sinttica Atualmente, esto disponveis na literatura


centenas de mtodos, tcnicas e protocolos para sntese de nanomateriais. Portanto, dependendo da aplicao final almejada possvel
sintetizar em laboratrio um nanomaterial que venha atender a
esse propsito. Adicionalmente, aps sua sntese, os nanomateriais
podem passar por processos de modificaes qumicas intencionais
(funcionalizao). Desse modo, a entidade sinttica a responsvel
pela gerao de nanomateriais que apresentam caractersticas ou
propriedades fsico-qumicas exclusivas (composio, estrutura,
tamanho, forma, grupamentos qumicos superficiais, carga e rea
superficial, impurezas, defeitos estruturais, condutividade eltrica,
resistncia mecnica etc). extremamente necessrio o emprego
de instrumentao avanada (microscopias eletrnicas, espectroscopias, anlises trmicas etc) para determinao das caractersticas
ou propriedades fsico-qumicas de cada nanomaterial sintetizado e/
ou funcionalizado, exigindo assim, o uso concertado e aprofundado
das diferentes tcnicas de caracterizao.

nos coloidais na toxicidade deve ser avaliada, pois evidente que


estes determinaro implicaes crticas sobre os resultados. Neste
caso, a entidade coloidal responsvel pela gerao de suspenses
de nanomateriais controladas e com qualidade para a adequada
aplicao em estudos toxicolgicos.
Entidade biolgica Existem muitos modelos biolgicos disponveis para acessar a toxicidade de substncias ou agentes, contudo,
usual dividi-los em dois grupos: in vitro e in vivo. Nos modelos in
vitro geralmente so utilizadas clulas isoladas em tubos de ensaio
que so expostas aos agentes de interesse. Posteriormente, parmetros indicadores da toxicidade so avaliados, como a inibio
do crescimento e respirao celular, produo de radicais livres,
leses no DNA e outras manifestaes bioqumicas e celulares.
Por outro lado, modelos in vivo so empregados utilizando organismos como camundongos e coelhos, como tambm minhocas,
microcrustceos, algas, peixes, plantas, entre outros. Alteraes no
desenvolvimento dos organismos (crescimento, reproduo, mortalidade etc) so indicadores de toxicidade. Agncias reguladoras
(e.g. EPA, FDA, OECD, ISO, ABNT etc) (16) j possuem protocolos padronizados para realizao desses ensaios de toxicidade in
vitro e in vivo. Contudo, para nanomateriais esses ensaios precisam
ser reavaliados, levando sempre em considerao as relaes existentes entre as trs entidades descritas, tendo como perspectiva
a construo de um mtodo apropriado para a determinao da
nanotoxicidade. Deve ficar claro que os ensaios ou testes de toxicidade no so realizados para demonstrar que um agente seguro,

Entidade coloidal crucial dispersar os nanomateriais em um


meio biolgico adequado (gua mineral, tampes, plasma sanguneo, meio de cultura celular, e outros fludos) para determinao
da sua toxicidade. Porm, dependendo do tipo de nanomaterial
em estudo, este apresentar uma boa capacidade de disperso ou
no, que determinar sua estabilidade ou agregao/aglomerao
nesses meios e fluidos biolgicos Outro aspecto importante que
as biomolculas presentes nesses meios biolgicos vo interagir
com a superfcie dos nanomateriais, levando a formao de sistemas hbridos (protena-nanomaterial ou matria orgnica-nanomaterial, por exemplo). Desse modo, a influncia desses fenme34

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mas para determinar sua toxicidade (grau ou intensidade de um
efeito txico). A segurana de qualquer substncia ou agente vai
depender de um processo mais elaborado de avaliao e gesto do
risco, tendo como subsdio os valores experimentais de toxicidade.

Dentre os documentos selecionados pelo CNBSS destaca-se


aquele do governo francs que especifica, de forma mandatria, o
contedo e os requisitos para a submisso de declaraes anuais de
informao relacionadas s substncias em estado nanoparticulado,
tanto como substncias simples ou como componentes em misturas. O decreto fornece detalhes sobre como as empresas devem cumprir as obrigaes de declarao obrigatria e entrou em vigor em
primeiro de janeiro de 2013.
As preocupaes sobre a regulao das nanotecnologias tambm
comeam a fazer parte mais efetiva da agenda do governo brasileiro
at porque foi identificado, por vrias empresas, que sua ausncia
cria gargalos para a sua efetiva introduo nos diferentes setores industriais. Do ponto de vista societal, muito h que se fazer no sentido
de aumentar a percepo da sociedade brasileira sobre os riscos e benefcios das nanotecnologias. Neste momento, tramita na Cmara
dos Deputados uma proposta de Projeto de Lei que visa regulamentar a rotulagem de produtos das nanotecnologias e de produtos que
fazem uso das nanotecnologias (20).

Regulamentao de nanomateriais: o que j existe e o que


vem por a O espectro de aplicao dos nanomateriais, dada a
sua versatilidade e um grande nmero de funcionalidades sem
a menor dvida , inauguraram uma real revoluo tecnolgica.
Atualmente, existem mais de 1.300 produtos contendo nanotecnologia no mercado global e estima-se que a produo industrial
de materiais nanoestruturados deve chegar a 100 mil toneladas na
prxima dcada (17).
A despeito das enormes vantagens e aplicaes esperadas para
as nanotecnologias e aqui os nanomateriais so atores importantes , tambm sabido que essas nanoestruturas podem causar
efeitos deletrios aos humanos e ao meio ambiente, de modo que
absolutamente premente a necessidade de diretivas para seu uso seguro. Tal necessidade est ligada a uma minimizao da exposio
dos pesquisadores, trabalhadores e consumidores, bem como, do
Consideraes finais Apesar da grande expectativa quanto ao
meio ambiente. Um dado que chama a ateno
potencial inovador e os benefcios das nanotecque os investimentos visando a avaliao da toxinologias, caracterizada pelo domnio da matria
cidade dos nanomateriais so ainda muito pequeem nanoescala, importante e necessrio manter
h dificuldade
nos apesar de, neste momento, serem crescentes.
uma viso abrangente sobre a interao de nanopara se
Por exemplo, uma consulta base de dados ISI
materiais com biossistemas, os quais so auto-orcomparar os
Web of Knowledge em maro de 2013, usando
ganizados (espao-temporalmente) atravs de recomo palavras-chaves os tpicos nanotecnologia,
des, onde propriedades emergentes surgem a cada
resultados de
nanomateriais ou nanopartculas, revela que menvel de organizao. A morte de um biossistema
toxicidade de
nos que 4,5% dos trabalhos esto relacionados
ocorre quando h a desintegrao dessas redes.
materiais em
com toxicidade ou ecotoxicidade. Contudo, desOu ento, podem ocorrer processos de adaptao
nanoescala
de 2003 a questo dos riscos dos nanomateriais
pela seleo de novas redes, visto que as conexes
tem sido abordada em vrias regies e pases, tais
entre os elementos dessas redes esto diretamencomo, Comunidade Europeia, Estados Unidos,
te relacionadas com a estabilidade e manuteno
Canad e Austrlia.
dos biossistemas (21). Obviamente, desenvolver um entendimento
No Brasil, a questo da toxicidade associada s nanopartculas
integrado da interao dos nanomateriais nos diferentes nveis da
um tema que comea a ser relevante, sobretudo aps a iniciativa do
organizao biolgica (das biomolculas aos ecossistemas) e suas
Ministrio de Cincia, Tecnologia e Inovao (MCTI) que passou a
inter-relaes constitui um dos maiores desafios dentro da bionafinanciar especificamente esses estudos atravs de redes nacionais de
notecnologia e nanotoxicologia.
nanotoxicologia, criadas em 2011 (18).
Um importante ponto a ser destacado, a dificuldade enconDe acordo com o Centre for NanoBioSafety and Sustainability
trada para comparar os resultados de toxicidade de materiais em
(CNBSS, em portugus Centro para Nanobiossegurana e Sustennanoescala disponveis na literatura atual, devido no s grande
tabilidade) o ano de 2012 foi importante para as questes relaciovariedade de mtodos de sntese e preparao de nanomateriais, mas
nadas com a regulao das nanotecnologias. Foi compilado no site
tambm falta de trabalhos sistemticos relatando uma adequadesse centro espanhol os mais relevantes documentos relacionados
da caracterizao fsico-qumica da amostra utilizada nos estudos.
com regulao, recomendaes, relatrios, registro de nanomateSoma-se a isso, ainda, a ausncia de protocolos de disperso coloidal
riais e padres, entre outros. Segundo o CNBSS:
adequados e modelos biolgicos robustos. De fato, tal situao adTodos estes (documentos) recomendam uma abordagem preventiva
vm da dificuldade encontrada para trabalhar de maneira harmocom base na exposio mnima atravs da substituio (por exemplo, de
nizada as trs entidades apresentadas (sinttica-coloidal-biolgica)
ps por suspenses), isolamento (ambiente fechado), uso de ventilao
durante a realizao de estudos toxicolgicos. Outro ponto imporespecfica e de equipamento de proteo individual adequado (dado
tante a dificuldade enfrentada para determinar cenrios realsticos
que os nanomateriais podem atravessar as barreiras de um equipamento
de exposio aos nanomateriais. Evidentemente, novos conceitos,
padro) e, finalmente, uma monitorizao cuidadosa dos potenciais
metodologias experimentais e computacionais precisam ser aprimoefeitos crnicos (19).
radas, ou mesmo desenvolvidas, para acessarmos e interpretarmos
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a bionanointerface em profundidade, bem como os seus reflexos
fsico-qumico-biolgico-toxicolgicos. importante termos em
vista a amplitude do tema abordado neste artigo, que o coloca como
uma rea do conhecimento altamente multidisciplinar e que est
dando seus primeiros passos.
Muitos dos aspectos aqui tratados so caracterizados pelo fato
que as cincias biolgicas e toxicolgicas ainda no atingiram o mesmo nvel de discernimento que as cincias fsicas e qumicas quanto
ao entendimento de nanossistemas. Da, devemos ser prudentes,
evitar extrapolaes simplistas e manter o foco nas inter-relaes.
mister favorecer e desenvolver uma forma de conciliar a inovao
que torna os nanomateriais cada vez mais sofisticados, com a normatizao exigida para serem reprodutveis e seguros para o meio
ambiente e por, consequncia, para os humanos. Somente assim,
acreditamos que avanaremos em direo a uma nanotecnologia
segura e sustentvel.

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Diego Stfani Teodoro Martinez bilogo e doutor em qumica pela Universidade Estadual de
Campinas (Unicamp) , pesquisador de ps-doutorado do CNPq junto ao Instituto Nacional de
Cincia e Tecnologia em Materiais Complexos Funcionais (INCT-Inomat), onde desenvolve estudos e pesquisa em bionanotecnologia e nanotoxicologia. Email: diegostefani.br@gmail.com.
Oswaldo Luiz Alves professor titular do Instituto de Qumica da Unicamp, fundador/coordenador cientfico do Laboratrio de Qumica do Estado Slido (LQES/Unicamp) e coordenador do
Laboratrio Associado NanoBioss-SisNano do MCTI. autor da Cartilha sobre nanotecnologia
publicada pela ABDI em 2010. Membro da Academia Brasileira de Cincias (ABC). Email:
oalves@iqm.unicamp.br.

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