Cintica Enzimtica

A concentrao do substrato afeta a velocidade da enzima:

Um fator importante para a velocidade da reao a [S]. Quanto mais substrato
adicionamos a reao, maior a atividade da enzima. Entretanto, um complicador para tais
medidas o fato de que a [S] varia durante o curso da reao, j que o substrato vai sendo
convertido em produto.
Uma maneira de contornar este problema sempre medir o produto da reao quando
ela ainda est acontecendo em sua velocidade inicial, ou seja, quando a diminuio da
concentrao de substrato ainda insignificante. Isso possvel se adicionarmos todos os
componentes da reao ao tubo de ensaio e, somente a, colocarmos a enzima e medirmos a
formao do produto. O intervalo de tempo entre colocar a enzima e medir a formao do
produto um parmetro chave.
Em concentraes relativamente baixas de substrato, a velocidade inicial da aumenta
quase que linearmente em funo do aumento da [S]. medida que aumentamos a [S], a
resposta de V0 aumentando cada vez menor, at que, em determinado ponto, o aumento de
V0 praticamente nulo. Neste momento, a enzima alcanou sua capacidade mxima de catlise.
(Vmx)
Dois importantes cientistas descobriram que a formao do complexo enzima-substrato
influencia diretamente a velocidade mxima de catlise de uma enzima. Eles propuseram que a
enzima, inicialmente, se combinava com o substrato de forma rpida e reversvel. O passo
seguinte, mais lento, era a dissociao de ES, gerando enzima livre e produto.
Como a segunda reao mais lenta, ela a etapa que limita a converso de substrato
em produto. A velocidade de formao do produto ser proporcional concentrao de ES, ou
seja, a rapidez com que o complexo ES se desfaz determina a velocidade de formao do
produto.
Quando uma reao atinge sua Vmx, dizemos que a [S] SATURANTE. Afinal, se
todas as enzimas esto ocupadas com substrato, aumentar mais ainda a [S] no ir resultar em
nenhum aumento da velocidade da reao.
Estado estacionrio aquele em que apesar de estar mudando a concentrao de S
(diminuindo) e P (aumentando), no h variao da concentrao dos intermedirios da reao
(ES).
Somente quando o substrato comea a sair da concentrao saturante (por ter sido
convertido em produto) que a reao sai do estado estacionrio. Normalmente, nesta situao,
ela se encaminha para o seu fim: o substrato praticamente acaba, grande quantidade de produto
formada e o complexo ES se desfaz, deixando a enzima (E) livre novamente.

Modo cintico de Michaelis-Menten:

A curva que expressa a relao entre Vo e [S] tem em geral a mesma forma para muitas
enzimas.
KM A RELAO ENTRE AS
CONSTANTES DE VELOCIDADE
DE FORMAO E DISSOCIAO
DO COMPLEXO ES.

Para uma determinada concentrao de substrato, a velocidade inicial da reao

apresenta valor numrico igual metade do valor da Vmx que esta reao alcanar.
Escrevendo isso por uma frmula, como no grfico, temos:
Vo = 1/2 Vmx

Uma enzima que precise de uma

quantidade de substrato pequena para
alcanar a metade da sua Vmx uma
enzima capaz de se associar com facilidade
ao seu substrato. J uma enzima que precise
de muito substrato para que sua velocidade
inicial chegue metade da Vmx uma
enzima que no se associa ao seu substrato
to facilmente. Essa facilidade, maior ou
menor, de uma enzima se associar ao seu
substrato chamada afinidade.
ALTO KM -> ENZIMA COM BAIXA
AFINIDADE PELO SUBSTRATO
BAIXO KM -> ENZIMA COM ALTA
AFINIDADE PELO SUBSTRATO

Catlise de reaes com dois ou mais

substratos
Reaes enzimticas com dois ou
mais
substratos
geralmente
envolvem a transferncia de um
grupamento funcional ou um tomo
de um substrato para o outro.
Em alguns casos, os dois substratos
podem estar ligados enzima em
um mesmo momento, formando um complexo ternrio.
Os substratos podem se ligar enzima em uma ordem especfica, ou de maneira
aleatria. Em outros casos, um dos substratos convertido a produto e se dissocia antes
da ligao do segundo substrato (mecanismo ping-pong).

Grfico de Lineweaver-Burk (duplo-recproco)

No grfico gerado a partir da equao de Michaelis-Menten, no fcil encontrar o

ponto exato em que a velocidade inicial se iguala metade da velocidade mxima. No entanto,
no grfico do duplo recproco, os dados obtidos geram uma reta, a qual cruza o eixo y (que,
neste caso, o inverso da V0 ) e o eixo x (que, neste tipo de grfico, o inverso da [S]).
O valor em que a reta cortar o eixo y equivaler ao inverso da velocidade mxima. O
valor em que a reta cortar o eixo x equivaler ao inverso de KM. Alm disso, a inclinao da
reta pode ser obtida apenas dividindo-se o KM pela Vmx.
Assim, s de olhar um grfico do duplo recproco e de fazer alguns clculos bastante
simples, encontramos as informaes importantes sobre a cintica de uma enzima: km e Vmx.
Metabolismo do lcool:
Quando a gente bebe, o etanol sofre uma reao da lcool desidrogenase. Uma enzima
catalisa essa reao p ser mais rpida. As pessoas mais fracas q ficam bbadas rapidamente
possuem um aa trocado nessa enzima q catalisa a reao e isso faz com q o sitio ativo seja

menos ativo, ou seja, a afinidade entre a enzima e o substrato (lcool) menor. E ai essa reao
da decomposio do etanol mais lenta e ai a pessoa fica mais bbada rapidamente.

Inibio Enzimtica
Um inibidor enzimtico uma molcula capaz de se associar enzima e reduzir ou at
zerar sua velocidade de catlise, isto , de gerar produto a partir do substrato.
Classificao:
Irreversveis
Reversveis
Competitiva
Acompetitiva
Mista
No competitiva

Irreversvel:
Na inibio irreversvel, o inibidor se liga covalentemente enzima, ou destri um
grupamento funcional, ou forma um complexo estvel por associao no covalente
estvel ou ligao covalente.

Reversveis:
1. Inibio competitiva

O inibidor ocupa o stio ativo, impedindo a ligao do substrato.

Quando a [S] excede a [I], a probabilidade do inibidor se ligar a enzima diminui, e a

reao apresenta o valor normal de Vmx. Isso porque, se aumentamos a concentrao de
substrato, favorecemos o acontecimento da catlise por dois mecanismos:
aumentando a chance de enzimas livres se associarem ao substrato em vez de ao
inibidor;
deslocando o inibidor da enzima.
Por isso, o Vmx se mantm.
Esse tipo de inibidor compete com o substrato pelo stio ativo da enzima. A medida que
o I ocupa o stio ativo, ele impede que o substrato se ligue a enzima para formar o complexo ES.
Como o stio estar menos disponvel para o substrato, isso diminuir a afinidade ES e por isso
o km aumentar.
Como ele no se liga ao complexo, ele no alterar a atividade cataltica da enzima,
logo, a Vmx se mantm.

2. Inibio incompetitiva
O inibidor no ocupa o stio ativo. Se liga a outro stio na enzima e somente ao
complexo ES. Logo, o aumento da [S] no reverte a inibio.
Como ele se liga ao complexo ES, ele vai alterar a atividade cataltica da enzima,
diminuindo sua Vmx. Independente de uma concentrao alta de substrato, vai existir
enzima ligada ao inibidor, como se tivesse menos enzima.
Nesse caso, a variao do km apenas matemtica. Mudar pq a vmax mudar, eles
iro mudar na mesma proporo e por isso o coeficiente angular da reta igual, e as
retas sero paralelas.

3. Inibio mista
O inibidor pode ligar a enzima livre ou o complexo ES.
Como o inibidor pode se ligar a enzima livre, ele vai competir com o substrato pela
enzima, ou seja, vai diminuir a afinidade enzima substrato, aumentando o km.

 Como o inibidor vai se ligar ao complexo ES, ele ir diminuir a atividade cataltica da
enzima, logo, a Vmx ir diminuir.
Como altera o km/vmx, ir alterar a inclinao da reta.

4. Inibio no competitiva
Caso raro, medido experimentalmente, onde a = a
Inibidor liga-se a um stio diferente do stio ativo da enzima.
No diminui a afinidade enzima substrato pq o substrato pode ligar normalmente na
enzima. Mas ele atrapalha a funo da enzima, logo, diminui a Vmx.

Enzimas Regulatrias

 Regulam as questes do metabolismo da clula, ou seja, apresentam atividade cataltica

aumentada ou diminuda em resposta a sinais especficos;
Podem controlar a velocidade de uma reao, modulando toda a cadeia metablica, de
acordo com as necessidades
Na maioria dos sistemas multienzimticos, a primeira enzima da sequncia a
regulatria. Esta estratgia permite que cadeias de reaes que gerariam produtos
desnecessrios em um determinado momento sejam reguladas em suas etapas iniciais;
Existem tambm outras enzimas, ao longo de um sistema como este, capazes de regular
etapas intermedirias, modulando o fluxo ao longo de uma determinada via;
As enzimas alostricas mudam sua conformao em resposta a ligao de algo
modulador. Esses ligantes podem tornar a enzima mais ou menos ativa.

Passos regulatrios so catalisados por enzimas alostricas

Em alguns sistemas multienzimticos a enzima regulatria inibida pelo produto final
daquela via, sempre que a concentrao deste produto exceder as necessidades
celulares; (Se voc j produziu mais do que deveria, a enzima regulatria percebe q j
formou mt coisa e v que est na hora de parar)
Quando a enzima regulatria tem sua atividade diminuda, as outras enzimas podem
operar em velocidades diferentes, de acordo com a quantidade de seus respectivos
substratos;
A velocidade de produo de um determinado produto desta forma regulada de acordo
com as necessidades da clula (inibio por feedback). o produto de uma via
metablica inibe a atividade de uma enzima envolvida na sua sntese.
Os inibidores por feedback geralmente no exibem semelhana estrutural com o
substrato ou com o produto da enzima que inibem.

 Enzimas alostricas so enzimas que contm uma regio separada daquela em que se
liga o substrato, na qual pequenas molculas regulatrias (efetores) podem ligar-se e
modificar a atividade cataltica dessas enzimas.

O rompimento do equilibro T-R faz com q haja a mudana na curva.

A enzima reagiu vrias subunidades para chegar ao produto final, elas tem q
catalisar essas subunidades p formar o produto e no tudo direto de uma vez, e isso
explica a cooperatividade negativa de algumas enzimas.
A alosteria no uma propriedade s das enzimas. A hemoglobina tambm
possui. Qnd ela se liga ao CO, muda sua forma.

A cooperatividade significa que as enzimas alostricas exibem um efeito limiar: abaixo

de certa [S] pouca atividade enzimtica. Aps o limiar ter sido alcanado a atividade enzimtica
rapidamente aumenta.

Efetor negativo diminui a afinidade e o positivo aumenta. Por isso, o positivo diminui o km e o
negativo aumenta o km.

O estado R, altamente ativo, a curva fica igual do modelo de Michaeles-Menden. J quando

est pouco ativo, a reta mais pra baixo porque no atinge a Vmx. Logo, o km fica entre essas
duas curvas, com aspecto sigmoide.

Elas alteram o km sem alterar o Vmx porque elas no esto inibindo o prprio
substrato. Ento o resultado vai ser uma velocidade maior ou menor numa msm concentrao do
substrato, dependendo apenas se o estado mais presente ser o R ou o T.

Outras estratgias de regulao:

Modificaes covalentes reversveis
(De) Fosforilao
Clivagem proteoltica