UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPRITO SANTO

CENTRO TECNOLGICO - DEPTO DE ENGENHARIA AMBIENTAL

DISCIPLINA: LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA E ECOTOXICOLOGIA

ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE AMOSTRAS AMBIENTAIS

LAS MONTEIRO
LOUISE CADE JORGE

VITRIA/ES
2015

1.

INTRODUO

Os fungos so microrganismos popularmente conhecidos por bolores, mofos,

fermentos, cogumelos, etc. Eles so encontrados no ar atmosfrico, solo, na gua,
nos vegetais, em animais, no homem e em detritos em geral. O isolamento de
fungos obtido em cultura pura a partir de tecidos doentes do hospedeiro, quando
obtido um organismo em cultura pura no significa que ele seja o agente causal da
doena. Vrios meios so utilizados, porm o mais usado o Batata-Dextrosegar (BDA) e Extrato de Malte-gar (EMA).
Os mtodos utilizados na pratica foram de isolamento direto e indireto. O
isolamento direto a transferncia com auxlio de um estilete, de estruturas do
patgenos (hifas, esporos, rizomorfos, esclerdios) direto do rgo infectado. J o
isolamento indireto a transferncia para meio de cultura, de pores infectadas
de tecido do hospedeiro em que o patgeno est no interior do tecidos da planta
porem sem produzir frutificaes na superfcie do rgo lesionado.

2. OBJETIVOS
Isolar fungos a partir de uma amostra de terrio utilizando o mtodo de diluio em
placas, e a partir de tecidos vegetais necrosados utilizando os mtodos de
isolamento direto e indireto. Alm disso, analisar o desenvolvimento das colnias
fngicas obtidas pelos mtodos acima.

3. RESULTADOS E DISCUSSO
O experimento foi dividido em trs partes. Inicialmente foi utilizado o mtodo de
diluio em placas para isolar fungos a partir de uma amostra de terrio. Na
segunda parte houve o isolamento de fungos presentes em tecidos vegetais
necrosados pelo mtodo do isolamento direto. E por fim, foi feito o isolamento
indireto de fungos a partir do tecido vegetal lesionado de trs espcies de plantas.

3.1ISOLAMENTO A PARTIR DE AMOSTRA DE TERRIO

Figura 1. Amostra de terrio aps 7 dias de

incubao.

Realizando um estudo macroscpico do isolamento da amostra de terrio, o

resultado foi a formao de uma colnia fngica de superfcie lisa e textura velutina
e uma colnia bacteriana de forma circular e aspecto brilhoso. Ou seja, sem a
presena de antibitico bacteriano, pode ser visto que no houve o isolamento
somente dos fungos que estavam presentes, mas tambm de bactrias contidas na
amostra de solo.

O nmero de colnias fungicas foi abaixo de esperado, uma vez que segundo
Kuravov, dentre os microrganismos de solo, a biomassa fngica predominante e
nela se encontram vrias espcies com potencial antagnico e de promoo de
crescimento. A presena de microrganismos em um determinado solo funo das
condies ambientais relacionadas. As caractersticas biolgicas de fungos so
influenciadas quando as amostragens so feitas em camadas superficiais do solo;
onde as condies climticas e de umidade sofrem variaes. So nestas camadas
que ocorrem maior atividade microbiana devido ao constante depsito de material
orgnico sobre o solo (MOREIRA, 2006). A pequena quantidade de colnias
fungicas e microbianas obtidas no experimento pode ter sido motivada por erro na
metodologia ao semear incorretamente a amostra de terrio na placa de Petri.

3.2.

ISOLAMENTO

DE

FUNGOS

A PARTIR

DE

TECIDOS

VEGETAIS

NECROSADOS
3.2.1ISOLAMENTO DIRETO

Figura 2. Alimentos selecionados para a prtica de isolamento direto de

Aps

fungos: beringela, maracuj, laranja, 4caule de banana, 5abobrinha.

a inoculao, a placa foi devidamente vedada com papel filme e incubada a 28C
durante 7 dias. O resultado aps a incubao se encontra na figura 3.
4

Figura 3. Isolamento direto de fungos: beringela,

maracuj,

laranja,

caule

de

banana,

abobrinha. Aps 7 dias de incubao.

Pela observao macroscpica, ficou evidenciado que o crescimento se deu de

dentro para fora dos crculos desenhados na placa. O que obteve maior
crescimento foi o fungo isolado a partir de esporos no maracuj, que est no
crculo n2, de colorao amarelada. O mesmo pode ser identificado como um
fungo filamentoso, que tem como caracterstica o crescimento radial formando
anis concntricos.
O fungo presente no circulo de n3, retirado da laranja, tambm apresenta fios
caractersticos de fungos filamentosos. J nos crculos de n4 e n5 os fungos
isolados esto entre fungos filamentosos e leveduras. Pode ser visto que, como o
meio no seletivo, permite o crescimento de vrios microrganismos presentes em
uma mesma leso.
No foi claro um crescimento no crculo n1, isolado a partir da berinjela. Isso pode
ter ocorrido devido ao maior crescimento do n2 que impediu a visualizao, ou por
erro de metodologia, por ter sido transferido um esporo fungico incorretamente.

3.2.2 ISOLAMENTO INDIRETO

Figura 4. Amostras de tecidos vegetais para a pratica de

isolamento indireto de fungos: folha de mangueira, folha de
cajueiro, folha de oiti.

Os resultados aps 7 dias de incubao a 28C se encontram na Figura 5.

Figura 5. Isolamento indireto de fungos: fragmento de

folha de mangueira, fragmento de folha de mangueira,
fragmento de folha de cajueiro, 4 fragmento de folha de
cajueiro, 5 fragmento de folha de oiti.
6

Realizando a anlise macroscpica, percebeu-se que houve um crescimento dos

fungos dentro das delimitaes feitas ao redor das amostras. Foi possvel observar
o crescimento de fungos filamentosos no meio de cultura nas amostras de nmero
2, 3 e 4. Evidenciados pela textura de algodo e crescimento radial. No ficou
evidenciado crescimento no crculo n1, de fragmento de folha de mangueira,
provavelmente por erro na metodologia.

4. QUESTES
1)Qual a finalidade e como se classificam os meios de cultura utilizados para o
cultivo de fungos em laboratrio?
Os

meios

de

cultura

tm

por

finalidade

proporcionar

isolamento

desenvolvimento dos microrganismos para facilitar o estudo e identificao por

meio da observao das caractersticas das colnias formadas.
Os meios de cultura para crescimento de fungos em laboratrio podem ser
classificados em: Meio definido, no qual toda a composio quimicamente
conhecida; Meio complexo, onde toda ou parte da composio no quimicamente
conhecida; Meio seletivo, que favorece o crescimento de fungos impedindo o
crescimento de outros microrganismos, ou de um determinado fungo de interesse,
impedindo o crescimento de outros fungos; Meio diferencial, facilita a diferenciao
das colnias de um determinado fungo desejado em relao a outras colnias
crescendo na mesma placa; Meio de enriquecimento, favorece o desenvolvimento
de uma populao fngica, que estaria em desvantagem entre as populaes.

2) O que uma cultura pura de um fungo e qual a sua importncia?

Cultura pura um meio de cultivo que apresenta apenas o organismo de interesse
presente, ou seja, uma cultura isenta de todos os demais tipos de organismos,
onde todas as clulas na populao sejam idnticas (originrias de uma mesma
clula parental). A obteno de culturas puras de fungos essencial para o
crescimento dos microrganismos de interesse e assim, ser possvel a
caracterizao, identificao e utilizao desses microrganismos em inmeras
atividades cientficas e tecnolgicas.

3) O que so condies asspticas de trabalho na manipulao de fungos em

laboratrio? Cite exemplos de como proceder neste sentido e a importncia destes
procedimentos.
So condies de trabalho essenciais para evitar contaminaes provenientes dos
meios de cultura e materiais utilizados na manipulao dessas culturas e do meio
8

ambiente. Ou seja, no permitir que microrganismos existentes no laboratrio

contaminem as amostras e no permitir que as culturas em estudo contaminem o
laboratrio.
Essas tcnicas so indispensveis para o isolamento, cultivo e identificao de
microrganismos, pois evitam contaminaes do meio de cultura e material utilizado.
Alguns procedimentos so: esterilizar o material a ser utilizado, desinfectar a rea
de trabalho, trabalhar na rea de segurana da lamparina ou bico de Bunsen.

4)Qual o papel dos fungos no saneamento ambiental, com nfase em processos de

biorremediao ao nvel do solo? Cite exemplos.
A biorremediao um processo espontneo ou manipulado no qual os
contaminantes, por meio de procedimentos microbiolgicos, so transformados
e/ou degradados at a obteno de estruturas qumicas menos txicas e/ou
inofensivas, podendo chegar at a mineralizao; diminuindo, dessa forma, o
impacto ambiental (CETEM/MCT, 2008)
Os fungos apresentam um papel muito importante no saneamento ambiental, pois
estes microrganismos so bons biodegradadores. O processo de biorremediao
do solo utilizando os fungos pode ser utilizado em recuperao de solos
contaminados por agrotxicos, petrleo e seus derivados, e em solos
contaminados por organoclorados.
Dentre os fungos que degradam hidrocarbonetos de petrleo importante
distinguir os filamentosos, degradadores de lignina, tais como Phanaerochaete
chrysosporium, e os no degradadores de lignina como Cunninghamella elegans
(CAMERON et al., 2000).

5)Qual o papel dos fungos na produo e no armazenamento de produtos

agrcolas e quais as conseqncias ambientais decorrentes? Cite exemplos.
Os fungos so to prejudiciais como benficos agricultura. Por um lado,
prejudicam a colheita ocasionando perdas por causa das enfermidades que
produzem nas plantaes. Tambm podem ocasionar vrios problemas aos
produtos armazenados. Alm disso, os fungos podem produzir toxinas em produtos
9

como: amendoim, arroz e muitos outros. Eles tambm ajudam a abrir caminho para
outros agentes de deteriorao como as leveduras e as bactrias, bem como aos
insetos.
Em contraste aumentam a fertilidade do solo. Um exemplo a interao entre
fungos e razes, denominada associao micorrzica, constitui importante fator de
sobrevivncia e crescimento das plantas. Tambm so utilizados no controle
biolgico de pragas, como: o Metarrhizium para eliminao de gorgulhos, o
Coniothyrium minitans para controle de fungos que destroem culturas de soja e
feijo e o Paecilomyces fumosoroseus para controle de cupins.

5. CONCLUSO

Atravs da pratica realizada, foi possvel observar que o meio de cultura utilizado
possibilitou realmente o crescimento dos microrganismos que foram isolados, e
induziu
estruturas

a
reprodutivas

formao
da

maioria

de
dos

fungos

testados.
Tambm ficou evidente a importncia do conhecimento adquirido. Pudemos
aprender a realizar esse isolamento e tornar vivel a repicagem e o estudo da
cultura pura do fungo a ser estudado. Alm disso, foi possvel perceber a
diversidade de fungos presentes no meio ambiente e algumas de suas diferencias
macroscpicas.

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6. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
CAMERON M. D.; TIMOFEEVSKI S.; AUST S. D. Enzymology of Phanerochaete
chrysosporium with respect to the degradation of recalcitrant compounds
and xenobiotics. Applied Microbiology and Biotechnology. December 2000.
CASSINI, Servio Tulio.; KELLER, Regina; RODRIGUES, Celson; WAGNNER,
Paulo. Apostila de Aulas Prticas. UFES, Departamento de Engenharia
Ambiental, Laboratrio de Anlises Fsico-Qumicas.
KURAKOV, A. V.; NECHITAILO, T. Yu.; GOLYSHIN, P. N.; ZVYAGINTSEV, D.G.
Pinotti, Santos, Klauberg Filho, Michelleti & Castro. Diversity of facultatively
anaerobic microscopic Mycelial Fungi in Soils. Microbiology. Rev. Bras. de
Agroecologia vol. 77, N1, pp 90-98. 2008
LINHARES, Srgio; GEWANDSZNAJDER, Fernando. Biologia. Editora tica,
volume nico, 1 edio, 2007.
LEMOS, J. L. S.; BARROS, C. A.; OLIVEIRA, S. D.; REICHE, A. P.. Fungos
filamentosos: agentes de degradao de petrleo e de hidrocarbonetos
aromticos policclicos (HAPs). Srie Tecnologia Ambiental, CETEM/MCT, 2008.
Disponvel em < http://mineralis.cetem.gov.br/handle/cetem/323>. Acessado em 6
de setembro de 2015
MOREIRA, F. M. S.; SIQUEIRA, J.O.. Microbiologia e Bioqumica do solo. 2ed,
Lavras MG: Ed UFLA, 2006, v.7, p.98.il.
PINOTTI, Maria Margareth Zamboni; SANTOS, Jlio Csar Pires; KLAUBERG
FILHO, Osmar; MICHELLUTI, David Jos; CASTRO, David Ricardo Lima.
Isolamento de Fungos de Solo Associados a culturas de Amora, Framboesa e
Mirtilo no sul do Brasil. Rev. Bras. de Agroecologia. 6(1): 67- 80.2011. Disponvel

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em

<http://orgprints.org/24151/1/Pinotti_Isolamento.pdf>.Acessado

em

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de

setembro de 2015.
TORTORA, Gerard J.; CASE, Christine L.; FUNKE, Berdell R. Microbiologia. 10.
ed. Porto Alegre: Artmed, 2012. xviii, 934 p.

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