0

UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO

PR-REITORIA DE PESQUISA E PS-GRADUAO
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM ETNOBIOLOGIA E CONSERVAO DA
NATUREZA

VANESSA DE CARVALHO NILO BITU

ESTUDO BIOPROSPECTIVO DE PLANTAS COMERCIALIZADAS PARA FINS

TERAPUTICOS EM MERCADOS PBLICOS DA REGIO NORDESTE DO
BRASIL

RECIFE
2015

i
1

VANESSA DE CARVALHO NILO BITU

ESTUDO BIOPROSPECTIVO DE PLANTAS COMERCIALIZADAS PARA FINS

TERAPUTICOS EM MERCADOS PBLICOS DA REGIO NORDESTE DO
BRASIL

Tese apresentada ao Programa de PsGraduao em Etnobiologia e Conservao da

Natureza da Universidade Federal Rural de
Pernambuco como parte dos requisitos para
obteno do ttulo de Doutora.
Orientador: Prof. Dr. Irwin Rose de Alencar
Menezes
Departamento de Qumica Biolgica, rea de
Farmacologia e Qumica Molecular/URCA

RECIFE
2015

Ficha Catalogrfica

Ficha Catalogrfica

Ficha Catalogrfica

B624e

Bitu, Vanessa de Carvalho Nilo

Estudo bioprospectivo de plantas comercializadas para

fins
teraputicos em mercados pblicos da regio nordeste do
Brasil / Vanessa de Carvalho Nilo Bitu. -- Recife, 2015.
121 f. : il.
Orientador(a): Irwin Rose de Alencar Menezes.
Tese (Programa de Ps-Graduao em Etnobiologia e
Conservao da Natureza) Universidade Federal Rural de
Pernambuco, Departamento de Biologia, Recife, 2015.
Inclui apndice(s), anexo(s) e referncias.
1. Etnofarmacologia 2. Mercados 3. Plantas medicinais
4. Plantas medicinais - Comrcio 5. Operculina hamiltonii
6. Cephaelis ipecacuanha 7. Lippia gracilis I. Menezes, Irwin
Rose de Alencar, orientadora II. Ttulo
CDD 581.634

ii

ESTUDO BIOPROSPECTIVO DE PLANTAS COMERCIALIZADAS PARA FINS

TERAPUTICOS EM MERCADOS PBLICOS DA REGIO NORDESTE DO
BRASIL
Vanessa de Carvalho Nilo Bitu

Tese defendida e APROVADA pela banca examinadora em 03/08/2015

EXAMINADORES:
________________________________________
Dr. Irwin Rose de Alencar Menezes, Universidade Regional do Cariri (URCA), Orientador (Membro Interno)

____________________________________________
Prof. Dr. Jos Galberto Martins da Costa, Universidade Regional do Cariri (URCA) (Membro Interno)

___________________________________________
Prof. Dr. Henrique Douglas Melo Coutinho, Universidade Regional do Cariri (URCA) (Membro Interno)

____________________________________________
Prof. Dr. Joabe Gomes de Melo, Instituto Federal de Alagoas (IFAL) - (Membro Externo)

_____________________________________________
Prof. Dr. Edinardo Fagner Ferreira Matias, Faculdade Leo Sampaio (FALS) - (Membro
Externo)

____________________________________________
Prof. Dr. Araclio Viana Colares, Faculdade de Juazeiro do Norte (FJN) Suplente

___________________________________________
Prof. Dr. Thiago Fonseca Silva, Faculdade Leo Sampaio (FALS) - Suplente

iii4

Dedico o meu corao e a tese aos alunos que

passaram pelos meus cuidados nos ltimos dez
anos; de modo especial aos filhos que arrebanhei
no Laboratrio de Anatomia da Faculdade Leo
Sampaio.

iv

AGRADEO...

Ao meu Deus que me possibilita vitrias.

Me de Deus pelos seus cuidados.
Aos meus pais Jos Alves Bitu (in memorian) e Valdeneide de Carvalho Nilo Bitu por
sonharem com essa tese enquanto eu ainda treinava as primeiras letras.
Ao meu marido Heron Canjo por ter assumido com excelncia a funo de me, dedicando
aos nossos filhos e a mim o melhor de si, principalmente nos meses em que as
responsabilidades me carregavam para longe.
Aos meus filhos Vincius, Virna, Heron e Mariane por compreenderem as minhas ausncias.
Girlene Frazo, meu anjo da guarda particular, por cuidar da minha vida enquanto eu
construo os meus sonhos.
Ao programa de ps-graduao em Etnobiologia e Conservao da Natureza da Universidade
Federal Rural de Pernambuco.
Ao orientador desse estudo Prof. Dr. Irwin Rose de Alencar Menezes.
Aos professores que contriburam para a minha formao na rea: Henrique Douglas, Jos
Galberto, Ulysses Paulino, Elcida Arajo, Nicola Schiel, Joabe Melo, Angelo Giuseppe e
Marcelo Ramos.
Aos professores que compuseram a banca de qualificao do primeiro artigo da tese Henrique
Douglas Melo Coutinho, Joabe Gomes de Melo e Felipe Silva Ferreira.
Faculdade Leo Sampaio pelo apoio minha capacitao profissional e de modo especial
direo do Campus Sade na pessoa da Profa. Sonia Izabel Romero de Souza, ao Diretor
Presidente Prof. Jaime Romero de Souza e Coordenadora Geral do Campus Crajubar Ana
Qusia Luna Ramos.
Aos alunos, monitores e tcnicos de Anatomia Humana e Anatomia Buco-Facial da Faculdade
Leo Sampaio.
famlia que me abrigou, ofereceu carinho e proteo durante as disciplinas do doutorado
Joo Bosco Sampaio Canjo, Luzia Sampaio Canjo e Laura Sampaio Canjo.
Aos meus amigos Edinardo Fagner, Dbora Sena, Aline Portelo, Joo Marcos Ferreira,
Araclio Viana, Francisco Santos, Celestina Elba, Thiago Pereira, Daniele Cristina, Jos
Aguiar, Karina Botelho e Wenderson Lima.
Aos vendedores de plantas medicinais dos mercados pblicos das cidades de Juazeiro do
Norte, Crato e Barbalha que pacientemente contriburam com os seus conhecimentos para a
realizao desse estudo.

v6

Aos gestores da Secretaria de Obras do Crato, da Secretaria de Meio Ambiente do Juazeiro do

Norte e da Secretaria de Infraestrutura de Barbalha por ter-nos dado a anuncia para que o
trabalho fosse realizado.
Ao Comit de tica e Pesquisa da Faculdade Leo Sampaio a quem o projeto desse trabalho
foi submetido.

vi7

No esmoream da luta, meus filhos. Deus

sempre mostrar solues para as crises e
dificuldades.
Jos Alves Bitu (in memoriam) - meu pai

SUMRIO
LISTA DE SIMBOLOS E ABREVIATURAS ......................................................................09
LISTA DE FIGURAS ............................................................................................................ 10
LISTA DE TABELAS ........................................................................................................... 11
LISTA DE ANEXOS ..............................................................................................................13
RESUMO ............................................................................................................................... 14
ABSTRAT ..............................................................................................................................15
CAPITULO 1: INTRODUO E OBJETIVOS .................................................................... 17
1.1 INTRODUO .................................................................................................................. 18
1.2 OBJETIVOS ....................................................................................................................... 19
1.2.1 Objetivo geral .................................................................................................................. 19
1.2.2 Objetivos especficos ....................................................................................................... 19
CAPITULO 2: REFERENCIAL TERICO ........................................................................... 21
2.1 O comrcio de plantas medicinais em mercados pblicos ................................................. 22
2.2 Bioprospeco de Produtos Naturais de Origem Vegetal ................................................. 25
2.2.1 Prospeco Qumica ....................................................................................................... 26
2.2.2 Atividades antibacteriana e moduladora da atividade de antibiticos ............................. 29
2.2.3 Atividade antiparasitria de espcies vegetais em estudos bioprospectivos ................... 30
CAPITULO 3: METODOLOGIAS ......................................................................................... 32
3.1 Levantamento etnofarmacolgico ...................................................................................... 33
3.1.1 Localizao e caracterizao da rea de estudo............................................................... 33
3.1.2 Procedimentos de coleta de dados ................................................................................... 33
3.1.3 Anlise dos dados ............................................................................................................ 34
3.2 Anlises fitoqumicas ......................................................................................................... 35
3.2.1 Coleta do material vegetal ............................................................................................... 35
3.2.2 Obteno dos produtos naturais ....................................................................................... 35
3.2.3. Anlise da composio qumica dos leos essenciais de L. gracilis .............................. 36
3.2.4 Anlise da composio qumica dos produtos naturais da O. hamiltonii e da C.
ipecacuanha .............................................................................................................................. 36
3.3 Avaliao da atividade antiparasitria da infuso de O. hamiltonii ................................... 37
3.3.1 Linhagens celulares utilizadas ......................................................................................... 37
3.3.2 Reagentes ......................................................................................................................... 38
3.3.3 Ensaio de susceptibilidade epimastigota in vitro............................................................. 38
3.3.4 Ensaio leishmanicida in vitro .......................................................................................... 37
3.3.5 Ensaios citotxicos .......................................................................................................... 37

3.4 Avaliao da atividade antibacteriana e moduladora da ao dos antibiticos .................. 38

3.4.1 Material bacteriolgico .................................................................................................... 38
3.3.4 Determinao da Concentrao Inibitria Mnima (CIM) .............................................. 39
3.3.5 Avaliao da atividade moduladora por contato direto ................................................... 39
3.3.6 Avaliao da atividade moduladora por contato gasoso ................................................. 41
3.3.7 Anlises de dados ............................................................................................................ 41
CAPITULO 4: RESULTADOS E DISCUSSO..................................................................... 42
4.1 Ethnopharmacological study plants sold for therapeutic purposes in public markets in the
northeast Brazil ......................................................................................................................... 43
4.2 Composio qumica, atividade antiparasitria e citotoxicidade da Operculina hamiltonii
(G. Don) D. F. Austin & Staples .............................................................................................. 52
4.3 Produtos naturais nerivados na Operculina hamiltonii (G. Don) D. F. Austin & Staples e
da Cephaelis ipecacuanha Rich. como modificadores da atividade antimicrobiana de
aminoglicosdeos e -lactmicos .............................................................................................. 67
4.4 Chemical composition of the essential oil of Lippia gracilis Schauer leaves and its
potential as modulator of bacterial resistance........................................................................... 82
CAPITULO 5: CONSIDERAES FINAIS ........................................................................ 86
REFERNCIAS ....................................................................................................................... 96
ANEXOS ........................................................................................................................... 10200
APNDICE ...................................................................................................................... 10221

10

LISTA DE SIMBOLOS E ABREVIATURAS

Microlitros

Micrometros

BHI

Breat Heart Infusion

CG/EM

Cromatografia gasosa/espectrmetro de massa

CIM

Concentrao inibitria mnima

DCi

Decocto de C. ipecacuanha

DMSO

Dimetilsulfxido

FBS

Soro fetal de bovino

FCI

Fator de consenso do informante

HPLC

High-performance liquid chromatography

IOh

Infuso de O. hamiltonii

IR

Importncia relativa

LOD

Limites de deteco

LOQ

Limites de quantificao

NP

Nmero de propriedades atribudas para uma determinada espcie

NSP

Nmero de sistemas corporais tratados

NT

Nmero de espcies vegetais utilizadas

Nur

Nmero de citaes de uso em cada sub-categoria

OEFF

leos essenciais extrados das folhas frescas

OEFS

leos essenciais extrados das folhas secas

OELG

leo essencial de Lippia gracilis

PCA

Plate Count Agar

11

LISTA DE FIGURAS

Artigo

Ethnopharmacological study plants sold for therapeutic purposes in

public markets in the northeast Brazil .....

Figura 1.

Localizao geogrfica da rea de estudo na regio do Cariri, Cear,

Brasil ...........................................................................................................

Artigo

53

Representao do perfil de cromatografia lquida de alta eficincia da

infuso de Operculina hamiltonii ...............................................................

Artigo

45

Chemical Composition, Antiparasitic Activity and Cytotoxicity Of

Operculina hamiltonii (G. Don) D. F. Austin & Staples......

Figura 1.

44

64

Produtos Naturais Derivados Da Operculina Hamiltonii (G. Don) D. F.

Austin & Staples E Da Cephaelis Ipecacuanha Rich. Como
Modificadores Da Atividade Antimicrobiana De Aminoglicosdeos E Lactmicos ..............................................................

67

Figura 1.

CIM da amicacina e da gentamicina na ausncia e presena do DCi .........

75

Figura 2.

CIM da oxacilina e do benzapen na ausncia e presena do DCi ...............

75

Figura 3.

CIM da amicacina e da gentamicina na ausncia e presena da IOh ..........

75

Figura 4.

CIM da oxacilina e do benzapen na ausncia e presena da IOh ...............

75

Figura 5.

Perfil de cromatografia lquida de alto desempenho do decocto liofilizado

de C. ipepacuanha (DCi)..........................................................................

Figura 6.

75

Perfil de cromatografia lquida de alto desempenho representante da

infuso liofilizada de O. hamiltonii (IOh) ..................................................

75

12

LISTA DE TABELAS

Artigo

Ethnopharmacological study plants sold for therapeutic purposes in

public markets in the northeast Brazil .....

Tabela 1.

List of plants sold in public markets in the Crajubar Triangle, state of

Cear, Northeast Brazil.........................................................................

Tabela 2.

44

47

Informant consensus factor (ICF) for various categories of use or

medicinal plants sold in public markets in the Crajubar Triangle, state of
Cear, Northeast Brazil .................

Artigo

50

Chemical Composition, Antiparasitic Activity and Cytotoxicity Of

Operculina hamiltonii (G. Don) D. F. Austin & Staples.........

53

Tabela 1.

Componentes da infuso de Operculina hamiltonii ................................

65

Tabela 2.

Atividade antiparasitria e citotoxicidade de infuso de Operculina

Hamiltonii .........................................................................................

Artigo

65

Produtos Naturais Derivados Da Operculina Hamiltonii (G. Don) D. F.

Austin & Staples E Da Cephaelis Ipecacuanha Rich. Como
Modificadores Da Atividade Antimicrobiana De Aminoglicosdeos E Lactmicos ................................................................

66

Tabela 1.

Origem das linhagens bacterianas e perfil de resistncia aos antibiticos ...

76

Tabela 2.

Componentes do decocto liofilizado de C. ipepacuanha (DCi) .................

76

Tabela 3.

Componentes da infuso liofilizada de O. hamiltonii (IOh) ......................

76

Artigo

Chemical composition of the essential oil of Lippia gracilis Schauer

leaves and its potential as modulator of bacterial resistance ......

Tabela 1.

Chemical composition and percentage of the components of essential

oils of Lippia gracillis ....................................

Tabela 2.

81

Values

for the minimal

inhibitory concentration

(MIC)

87

of

aminoglycosides on the presence or absence of essential oils from leaves

of L. gracillis by direct contact ..............................................................
Tabela 3.

Values of the zone of inhibition of bacterial growth by EOLG tested

by gaseous contact method ....................................................................

Artigo

88

Effect of collection time on composition of essential oil of Lippia gracilis

Schauer (Verbenaceae) growing in Northeast Brazil .............................

Tabela 1.

88

Chemical composition of essential oils obtained from fresh (EOFL) and dry

90

13

(EODL) leaves of L. gracilis (Schauer)............................................................

Tabela 2.

92

Chemical composition and percentage of the components of essential oils

of Lippiagracillis at different times of collection, on the same day ...

94

14

LISTA DE ANEXOS

ANEXO A - Normas para publicao no peridico Journal of Ethno-pharmacology

ANEXO B - Normas para publicao no peridico International for parasitology:
and drug resistance
ANEXO C - Normas para publicao no peridico BioMed Research International
ANEXO D - Normas para publicao no peridico Natural product research
ANEXO E - Comprovante de submisso de artigo
ANEXO F - Produo Cientfica Paralela a Tese - 2014
ANEXO G - Produo Cientfica Paralela a Tese - 2015
ANEXO H - Produo Cientfica Paralela a Tese - 2015
ANEXO I -

Produo Cientfica Paralela a Tese - 2015

drugs

15

Bitu, Vanessa de Carvalho Nilo; Universidade Federal Rural de Pernambuco; agosto, 2015.
ESTUDO BIOPROSPECTIVO DE PLANTAS COMERCIALIZADAS PARA FINS
TERAPUTICOS EM MERCADOS PBLICOS DA REGIO NORDESTE DO BRASIL.
Irwin Rose de Alencar Menezes.
RESUMO
Esse trabalho bioprospectivo com abordagem etnodirigida levou em considerao o
conhecimento dos vendedores de plantas medicinais em uma regio do Nordeste brasileiro
conhecida como Tringulo Crajubar e objetivou realizar um levantamento das plantas
comercializadas para fins teraputicos nos mercados pblicos da rea estudada, selecionar
espcies vegetais a partir do seu uso etnofarmacolgico e realizar anlises qumicas,
microbiolgicas e parasitolgicas. Foram aplicados aos vendedores de plantas nos mercados
pblicos, formulrios que permitiram o clculo da importncia relativa das espcies e do fator
de consenso dos informantes. Foram indicadas por estes, 91 espcies teis terapeuticamente,
distribudas em 49 famlias botnicas e 89 gneros. Treze espcies apresentaram grande
versatilidade quanto ao seu uso. Foram obtidas 291 indicaes de uso em 13 categorias de
doenas. Com base nesses resultados, foram selecionadas as espcies botnicas Operculina
hamiltonii, Cephaelis ipecacuanha e Lippia gracilis, que foram avaliadas nas etapas
subsequentes, segundo o seu uso etnofarmacolgico. A infuso de Operculina hamiltonii
(IOh) e o decocto de Cephaelis ipecacuanha (DCi) tiveram seus compostos fenlicos e
flavonides quantificados por HPLC-DAD enquanto o leo essencial de Lippia gracilis
(OELG) teve a sua composio qumica analisada por cromatografia gasosa acoplada a
espectrofotometria de massas. A IOh foi submetida a ensaios de susceptibilidade epimastigota
e promastigota in vitro e ensaios citotxicos. Para a IOh, o DCi e o OELG foram
determinadas as concentraes inibitrias mnimas em ensaio de microdiluo em caldo; as
solues dos produtos naturais foram testadas em concentraes subinibitrias para avaliao
da atividade moduladora da resistncia aos antibiticos. Operculina hamiltonii apresentou
uma elevada atividade leishmanicida e tripanossomicida, no entanto com citotoxicidade
significativa. Operculina hamiltonii e a Cephaelis ipecacuanha no apresentaram atividade
antibacteriana clinicamente satisfatria pelo mtodo estudado, no entanto os testes de
avaliao do potencial modulador demonstraram resultados relevantes com sinergismo
observado em vrias combinaes dos antibiticos com os produtos naturais. O leo essencial
de Lippia gracilis teve a capacidade de modular a resistncia bacteriana e pode ser utilizado
como uma terapia coadjuvante contra microrganismos multirresistentes.
Palavras-chave: etnofarmacologia, mercados pblicos, plantas medicinais, comrcio de
plantas teraputicas, Operculina hamiltonii, Cephaelis ipecacuanha, Lippia gracilis.

16

Bitu, Vanessa de Carvalho Nilo; Universidade Federal Rural de Pernambuco; August, 2015.
BIOPROSPECTIVE STUDY OF PLANTS SOLD FOR THERAPEUTIC PURPOSES IN
PUBLIC MARKETS IN NORTHEAST BRAZIL. Irwin Rose de Alencar Menezes.
ABSTRACT
This bioprospective study with an ethno-directed approach took into consideration the
knowledge of vendors of medicinal plants in a region of Northeast Brazil known as Tringulo
Crajubar. Our aim was to survey the plants sold for therapeutic purposes in public markets in
the area studied, to select the plant species based on ethnopharmacological use and to analyze
them for phytochemical composition and antibacterial and antiparasitic activities. Medicinal
plant vendors were asked to fill out a questionnaire to determine the relative importance of the
species and informant consensus factor. Ninety-one species were indicated as being
therapeutically useful; they were distributed in 49 families and 89 genera. Thirteen species
showed great versatility in their use. There were 291 indications of use in 13 disease
categories. On the basis of these results, the plant species Operculina hamiltonii, Cephaelis
ipecacuanha and Lippia gracilis were selected and evaluated as follows, according to their
ethnopharmacological use. The infusion of O. hamiltonii (IOh) and decoction of C.
ipecacuanha (DCi) were analyzed by HPLC-DAD, while the chemical composition of the
essential oil of L. gracilis (OELG) was determined by gas chromatography coupled to mass
spectrometry. IOh was tested in vitro for epimastigote and promastigote susceptibility and
cytotoxicity. IOh, DCi and OELG were subjected to broth microdilution assays to determine
the minimal inhibitory concentration against bacteria; solutions of the natural products were
also tested at subinhibitory concentrations to evaluate them for antibiotic resistancemodifying activity. O. hamiltonii showed high leishmanicidal and trypanosomicidal activities,
but also substantial cytotoxicity. O. hamiltonii and C. ipecacuanha did not exhibit satisfactory
antibacterial activity, but assays for modulatory potential demonstrated interesting results
with synergism observed using various combinations of antibiotics and natural products.
OELG was able to modulate bacterial resistance and could be used as a coadjuvant therapy
against multidrug-resistant microrganisms.
Key words: public markets, medicinal plants, sale of therapeutic plants, Operculina
hamiltonii, Cephaelis ipecacuanha, Lippia gracilis.

17

CAPITULO 1:
INTRODUO E OBJETIVOS______________________

18

1.1 INTRODUO

As pesquisas na rea da Bioprospeco dos Produtos Naturais envolvem mtodos

complexos e mltiplos objetivos, dentre eles, a descoberta e o desenvolvimento de novos
agentes teraputicos aos quais se chega a partir da confluncia de diversas reas do
conhecimento (MENEZES et al., 2015). Estudos dessa natureza abrangem atividades
multidisciplinares que englobam a localizao, a avaliao e a explorao legal dos recursos
naturais de uma dada regio no sentido de encontrar substncias que possam ser aplicadas em
produtos farmacuticos, aps serem submetidas a ensaios microbiolgicos, farmacolgicos e
toxicolgicos que validem cientificamente o seu uso teraputico (BOLOGA et al., 2013;
PEREIRA et al., 2009; ENRQUEZ, 2005).
As investigaes etnobotnicas e etnofarmacolgicas surgem nesse cenrio como uma
importante ferramenta para seleo de espcies vegetais com potencial teraputico, as quais
podem protagonizar avaliaes experimentais de suas atividades biolgicas em estudos
bioprospectivos com abordagem etnodirigida, os quais levam em conta as indicaes de uso
das plantas medicinais por grupos populacionais especficos dentro de suas prticas
teraputicas (ALBUQUERQUE e HANAZAKI, 2006).
Os mercados pblicos municipais so locais onde comumente se observa a
comercializao de plantas para fins medicinais. Nesses locais, os vendedores que as
comercializam formam um grupo populacional que apresenta conhecimentos empricos sobre
a utilizao desses recursos naturais no tratamento de doenas que geralmente so prevalentes
a nvel local ou regional, funcionando como prescritores populares dentro de um sistema
mdico informal, aberto e dinmico, no qual o conhecimento sobre indicaes, modos de
preparo e de uso, partes das plantas, quantidades utilizadas e outras informaes so
provenientes de diferentes fontes e repassadas de vrias maneiras, demonstrando valores
biolgicos e tambm culturais de um povo (VAN ANDEL et al., 2006; MONTEIRO et al.,
2010; MELO et al., 2009; SANTOS et al., 2009; ALBUQUERQUE et al., 2008; AMOROZO,
1996).
Dentre as importantes informaes que podem ser obtidas a partir de levantamentos
etnofarmacolgicos em mercados pblicos esto as que dizem respeito s espcies vegetais
utilizadas no tratamento de doenas causadas por bactrias e parasitas. Paes e Silva (1999)
chamam a ateno para o impacto social que as doenas infecciosas e parasitrias
representam, uma vez que a sua gnese pode estar relacionada s condies de moradia,
alimentao e higiene da populao; sendo que em pases em desenvolvimento, mesmo

19

quando reconhecida a relevncia de parasitoses como tripanossomase, leishmaniose, dengue

e malria entre outras, estas permanecem negligenciadas apresentando indicadores
preocupantes, baixo investimento em pesquisas de medicamentos e poucas aes que visem o
seu controle (LEMOS e LIMA, 2002).
Ao mesmo tempo, urgente a necessidade de que surjam alternativas teraputicas para
tratar microrganismos que desenvolveram mecanismos de resistncia aos antibiticos de uso
clnico convencional, fato esse que impulsiona tanto estudos direcionados a descoberta de
novas drogas (RIVERN et al., 2003) quanto pesquisas que associem a utilizao de produtos
derivados de plantas s principais classes de antibiticos no sentido de verificar a
possibilidade de potencializar a ao antibitica a partir dessa associao (BITU et al., 2014;
FIGUEIREDO et al., 2013; VERAS et al., 2011).
Nesse processo de desenvolvimento de um possvel frmaco a partir de estudos
bioprospectivos, faz-se necessrio ainda a realizao da prospeco qumica atravs da qual,
identifica-se ou determina-se estruturalmente os metablitos secundrios presentes nas
espcies vegetais que podem ser apontados como princpios ativos nas atividades biolgicas
(OMENA, 2007).
Esse trabalho teve o objetivo de realizar um levantamento das plantas comercializadas
para fins teraputicos nos mercados pblicos de uma regio do Nordeste brasileiro, no sul do
estado do Cear, denominada Tringulo Crajubar, que engloba as cidades de Juazeiro do
Norte, Crato e Barbalha. O local onde a pesquisa aconteceu apresenta caractersticas
marcantes: intensa atividade comercial o que atrai pessoas das regies circunvizinhas, a
diversidade florstica e faunstica e a forte religiosidade em torno da figura do Padre Cicero
Romo Batista. Os resultados obtidos nessa etapa inicial permitiram a seleo de espcies
vegetais (Operculina hamiltonii (G. Don) D. F. Austin & Staples, Cephaelis ipecacuanha
Rich. e Lippia gracillis Schauer) cujos usos populares foram avaliados para testar as
atividades antiparasitria, antibacteriana e moduladora da atividade de antibiticos; os
produtos naturais obtidos a partir dessas espcies foram submetidos prospeco qumica.

20

1.2 OBJETIVOS
1.2.1 Objetivo geral

Realizar estudos bioprospectivos utilizando plantas comercializadas para fins

teraputicos em mercados pblicos da regio Nordeste do Brasil.

1.2.2 Objetivos especficos

- Traar o perfil scio-demogrfico dos vendedores de plantas medicinais nos mercados

pblicos do Tringulo Crajubar.
- Identificar a partir do conhecimento dos vendedores, as famlias e as espcies
botnicas de uso medicinal comercializadas nos mercados da regio..
- Listar as doenas tratadas pelo uso das espcies botnicas comercializadas, o modo de
preparo para cada indicao de uso e as partes das plantas indicadas para as prticas
teraputicas descritas pelos vendedores.
- Selecionar espcies vegetais para estudos de atividade biolgica a partir do clculo do
fator de consenso dos informantes e da importncia relativa das espcies.
- Avaliar a citotoxicidade e o potencial antiparasitrio da infuso de Operculina
hamiltonii (G. Don) D. F. Austin & Staples.
- Avaliar as atividades antibacteriana e modificadora da resistncia bacteriana aos
antibiticos aminoglicosdeos e -lactmicos, dos produtos naturais derivados de Operculina
hamiltonii (G. Don) D. F. Austin & Staples, Cephaelis ipecacuanha Rich. e Lippia gracilis
Schauer.
- Realizar a investigao fitoqumica dos produtos naturais avaliados, identificando os
principais metablitos secundrios.

21

CAPITULO 2:
REFERENCIAL TERICO__________________________

22

2.1 O comrcio de plantas medicinais em mercados pblicos

Mltiplos so os fatores que contribuem para a ampla utilizao das espcies botnicas
terapeuticamente. O uso destas nas comunidades tradicionais pode ser atribudo distncia
geogrfica dos grandes centros urbanos, dificultando o acesso das pessoas aos sistemas
mdicos formais, disponibilidade do recurso devido a grande biodiversidade da flora
brasileira, ao valor comercial mais acessvel das plantas em comparao aos medicamentos
sintticos e ao no reconhecimento pela populao dos possveis efeitos adversos (OMENA,
2007; VEIGA-JUNIOR., 2005; COSTA et al., 2005; MACA et al., 2005). Veiga-Junior
(2008) relata que essa utilizao tambm acontece em classes sociais mais abastadas devido
aos modismos de consumo, sendo buscadas nas plantas medicinais solues para o
emagrecimento, o aumento do desejo sexual e o controle da ansiedade. Plantas para fins
medicinais so cultivadas em quintais ou facilmente obtidas em mercados e feiras livres, o
que expande ainda mais o uso destas pela populao (MONTEIRO et al., 2010; SANTOS et
al., 2009; ALBUQUERQUE et al., 2007b; FUNARI e FERRO, 2005; ALVES e ROSA, 2005;
MOREIRA et al., 2002; CHIVIAN, 2002).
Os mercados pblicos funcionam nos centros urbanos como espaos de convivncia
permitindo a socializao entre os comerciantes, os frequentadores habituais e os transeuntes
espordicos (BITU et al., 2015a; FERREIRA et al., 2012; MONTEIRO et al., 2010; MELO et
al., 2009) e dessa forma, acabam por reproduzir em menor proporo a diversidade biolgica
e os hbitos culturais de uma determinada sociedade (ALBUQUERQUE et al., 2007a). Nesses
locais, o comrcio das plantas com finalidade teraputica significa a obteno de um lucro
financeiro relevante, pois as espcies botnicas so largamente comercializadas para
tratamento paliativo e curativo de diversas doenas (MACA et al., 2005; SHANLEY e LUZ,
2003.
Estudos etnofarmacolgicos em mercados pblicos demonstram os saberes empricos
que os vendedores de plantas para fins teraputicos acumulam e transmitem ao longo dos anos
de prtica comercial, agindo como verdadeiros prescritores populares com base nos seus
conhecimentos sobre indicaes, modos de preparo e de uso, partes das plantas e quantidades
utilizadas alm de outras informaes relevantes (SANTOS et al., 2009; SILVA e PEIXOTO,
2009; LEITO et al., 2009), inclusive sendo possvel observar consenso entre os vendedores
de plantas medicinais no que diz respeito as espcies utilizadas para tratar os problemas de
sade (ALBUQUERQUE et al., 2008).

23

Informaes obtidas a partir de entrevistas com vendedores condizem com relatos da

literatura cientfica sobre indicaes de plantas medicinais (USTULIN et al., 2009;
CARNEIRO, 2009; TRESVENZOL et al., 2006), mesmo levando em considerao que esses
vendedores apresentam baixos nveis de escolaridade (NEGRELLE et al., 2007). Trabalhos de
Ustulin et al. (2009) demonstram que informaes obtidas a partir de entrevistas com raizeiros
sobre espcies utilizadas terapeuticamente no Mercado Pblico Municipal de Campo Grande
coincidem aproximadamente em 50% com as indicaes etnofarmacolgicas presentes na
literatura pertinente. Albuquerque et al. (2012) relatam que apesar da qualidade de informao
estar associada ao tempo de atividade nesse ramo, os mercados podem ser locais de grande
aprendizagem para os que esto iniciando na profisso.
As relaes que se estabelecem em torno desse comrcio desempenham um papel
social na troca de informaes sobre o uso tradicional das ervas medicinais entre os diferentes
grupos culturais e sociais a nvel local (LEE et al., 2008). Nesse cenrio, perceptvel que os
levantamentos de natureza etnobotnica impedem que conhecimentos relevantes sejam
perdidos por falta de registro adequado e conveniente, relatando de quais maneiras e como as
pessoas e as plantas interagem em um determinado local (OLIVEIRA et al., 2010;
HEINRICH 2000; LADIO e LOZADA 2004). Essas relaes demonstram um sistema mdico
rico em informaes que atravessam geraes resguardando os valores culturais e biolgicos
locais (BALDAUF, 2003; AMOROZO, 1996) e que por ser aberto e dinmico, pode ser
enriquecido pela adio de novas plantas, indicaes e modos de uso destas pela populao
(ALBUQUERQUE et al., 2007b). Lima et al. (2011) relatam que a procura por novos itens
pelos compradores habituais acaba por introduzir inovaes nos estoques dos vendedores
incrementando o repertrio local de plantas medicinais; e em municpios que participam de
rotas comerciais importantes dentro de uma regio, o compartilhamento de informaes sobre
indicaes e formas de uso das espcies vegetais pode significar maior possibilidade de
transmisso do conhecimento popular.
Van Andel et al. (2006) ao analisarem a procura de plantas consideradas teraputicas
em mercados de Gana, perceberam que as plantas medicinais so usadas para complementar
ou substituir as prticas da medicina formal. No entanto Veiga Jr. (2008) alerta para o quanto
a substituio dos alopticos pela automedicao com plantas medicinais pode ser perigosa
para a sade; outros autores mostram ainda a modificao da atividade de alguns antibiticos
quando utilizados concomitantemente com plantas e seus derivados (MATIAS et al., 2013;
NASCIMENTO et al., 2005; BITU et al., 2014).

24

Em levantamentos etnobotnicos realizados em mercados e feiras livres, esse recurso

natural associado ao tratamento de distrbios em vrios sistemas corporais de acordo com as
atividades biolgicas atribudas determinada espcie pela populao local, como a atividade
analgsica, anti-inflamatria, antibacteriana, antifngica, cicatrizante, antipirtica, diurtica,
antidepressiva, anorexgenas, anti-hiperlipidmicas, dentre outras (MONTEIRO et al., 2011;
MATI e BOER, 2010; MACA et al., 2005; ALMEIDA E ALBUQUERQUE, 2002),
refletindo as preocupaes de sade de um local e a importncia das prticas de medicina
tradicional entre os seus habitantes (VAN ANDEL et al., 2006). Por isso, informaes
oriundas desses estudos podem subsidiar pesquisas bioprospectivas que contribuam para a
descoberta de novos frmacos de interesse mdico (GONALVES et al., 2005; SILVA,
2003).
Diferentes partes do vegetal so aproveitadas pela populao no atendimento de suas
necessidades de sade, por isso so amplamente citadas em trabalhos etnobotnicos realizados
em mercados e feiras livres a comercializao de folhas, frutos, cascas, flores, razes,
sementes, bem como resinas, ltex e leos essenciais (KHAN et al.,2013; AMIRI e
JOHARCHI, 2013; LUKELAL et al., 2013 ). A escolha da parte da planta utilizada no
preparo influenciada pela disponibilidade que varia conforme o perodo do ano ou pela
facilidade de obteno e armazenamento (ALBUQUERQUE e ANDRADE, 2002). Dessa
forma nos mercados so expostas para venda, partes de plantas na forma fresca e seca e ainda
produtos delas derivados em diferentes estados de estocagem e muitas vezes, sem garantia de
qualidade ou efeito comprovado (LIMA et al., 2011; VEIGA-JUNIOR., 2008; MELO et al.,
2009), o que pode representar um risco potencial para a sade dos usurios pois podem estar
contaminadas por fungos e/ou outros microorganismos ( USTULIN et al., 2009; ALVES et
al., 2000), ou mesmo por metais pesados (HARRIS et al., 2011). Nesse sentido, LIMA et al.
(2011) sugerem que as feiras e os mercados pblicos sejam includos nas aes
governamentais sobre polticas de sade por serem locais onde possvel a comercializao
de recursos naturais com finalidade teraputica.
A aceitao dessas prticas mdicas tradicionais provoca um incremento nas vendas
de recursos biolgicos causando uma presso extrativista sobre as espcies vegetais, com o
agravante de algumas tcnicas de coleta serem agressivas e a casca do caule ser intensamente
procurada (ALMEIDA e ALBUQUERQUE, 2002). Paralelo a isso, uma situao
preocupante, demostrada por LIMA et al. (2011), o incremento na chegada de cascas de
plantas ao mercado no perodo de seca e a procura por razes podendo prejudicar a
sobrevivncia da planta e prejudicar a conservao das espcies mais comercializadas.

25

BRANDO et al. (2013) observaram que algumas cascas e razes de plantas so coletadas e
comercializadas em substituio a outras que foram extintas, correndo o mesmo risco de
desaparecimento e muitas vezes sem apresentar efeito comprovado, o que pode gerar
problemas de sade pblica.
O comrcio de plantas com finalidade teraputica requer medidas de monitoramento
que busquem o equilbrio entre a sustentabilidade dos recursos naturais e os benefcios
econmicos associados a essa atividade, levando ainda em considerao a realidade local dos
comerciantes e a dimenso cultural associada ao uso medicinal das espcies (ALVES et al.,
2000). O reconhecimento dos produtos medicinais de origem florestal comercializados em
mercados pblicos fornece informaes teis para futuras investigaes sobre a conservao
das espcies vegetais comercializadas, pois demonstra as espcies importantes no comrcio
regional e local e de que forma o homem est interagindo com os recursos naturais
disponveis (LIMA et al., 2011; MONTEIRO et al. 2010; MELO at al., 2009;
ALBUQUERQUE et al., 2007a). Um exemplo dado por Monteiro et al. (2011) o de espcies
cujo valor comercial vem aumentando ou que se tornaram difceis de serem encontradas na
regio; isto pode significar que as suas reservas estejam prximas exausto (MONTEIRO et
al., 2010).

2.2 Bioprospeco de Produtos Naturais de Origem Vegetal

A Bioprospeco o mtodo que engloba a localizao, avaliao e explorao

sistemtica e legal da biodiversidade de um determinado local objetivando-se encontrar
recursos genticos e bioqumicos para diversos fins (ENRQUEZ, 2005). As atividades nesta
rea so complexas, multidisciplinares e relevantes em diversos setores econmicos como o
farmacutico, o cosmtico, o agrcola e o alimentcio (PEREIRA et al., 2009).
Nas ltimas dcadas, as pesquisas na rea da Bioprospeco de Produtos Naturais vm
sendo direcionadas validao cientfica ou descobrimento de substncias que possam
resultar em produtos farmacuticos inditos, a partir da observao de suas atividades pelos
mtodos microbiolgicos, farmacolgicos e toxicolgicos conhecidos (MENEZES et al.,
2015; MATIAS et al, 2013; BITU et al., 2012; COUTINHO et al., 2008). No entanto, as
informaes que levam descoberta de novos frmacos de interesse mdico podem ser mais
efetivas, quando direcionadas a partir das prticas teraputicas descritas em pesquisas
etnodirigidas (ALBUQUERQUE e HANAZAKI, 2006).

26

Albuquerque e Hanazaki (2006) descrevem a abordagem etnodirigida em estudos

bioprospectivos como estratgia de investigao da ao teraputica das plantas medicinais a
partir do conhecimento e da utilizao desses recursos naturais por grupos sociais especficos.
O advento da qumica farmacutica fez com que os recursos provenientes da
biodiversidade fossem explorados de forma cada vez mais intensa, estando os produtos
naturais envolvidos no desenvolvimento de 44% de todas as novas drogas no incio do sculo
XXI (HOSTETTMANN et al., 2003). A principal estratgia para investigar o uso dessas
substncias envolve a combinao entre a utilizao popular das mesmas com pesquisas
laboratoriais cientficas que envolvam a composio, as atividades e a toxicidade dos produtos
naturais, e que tenham como objetivos atender a demanda das indstrias farmacuticas vidas
por encontrar novas substncias teraputicas e corresponder s necessidades do mercado
consumidor onde se observa o surgimento de patgenos cada vez mais resistentes aos
antibiticos disponveis (PACKER e LUZ, 2007). Para Costa et al. (2005) interessante que
essas pesquisas levem ao desenvolvimento de substncias que sejam de baixa toxicidade,
baixo custo e fcil acesso pelas comunidades carentes.
Para que seja desenvolvido um fitofrmaco a partir de investigaes bioprospectivas e
haja a sua prescrio pelo profissional de sade competente necessrio que haja rigoroso
estudo cientfico com a utilizao de protocolos rgidos aceitos internacionalmente; a
segurana e a eficcia do produto so confirmadas aps a realizao dos testes pr-clnicos,
das anlises envolvendo toxicidade aguda e crnica, e dos testes clnicos (CALIXTO, 2000).
No entanto, muitos trabalhos de bioprospeco com abordagem etnodirigida param em uma
etapa inicial e no prosseguem para outras fases a ponto de serem testados clinicamente,
deixando uma grande lacuna no conhecimento (IBRAHIM et al., 2014).

2.2.1 Prospeco Qumica

relevante que as plantas incorporadas cultura popular pelas suas atividades

biolgicas no sejam apenas listadas em levantamentos etnobotnicos, mas que sejam
reconhecidas as formas como estas so utilizadas e as quantidades necessrias em cada
preparo, certificando-se da sua baixa toxicidade e da garantia de que o princpio ativo esteja
presente em propores suficientes para demonstrar a sua eficcia (ELDIN e DUNFORD,
2001; VEIGA-JUNIOR, 2008). Diversas so as pesquisas que buscam identificar e quantificar
o componente qumico presente nas espcies vegetais que possa ser apontado como princpio
ativo nas atividades biolgicas (BITU et al., 2012; JARDIM, SILVA e COSTA-NETO,

27

2005). Os princpios ativos so geralmente substncias provenientes do metabolismo

secundrio dos (GONALVES et. al., 2005; SILVA, 2003).
O metabolismo primrio das plantas responsvel pela produo de celulose, lignina,
protenas, lipdios, acares e outras substncias que realizam suas principais funes vitais,
no entanto os vegetais tambm apresentam o chamado metabolismo secundrio, do qual
resultam substncias, s vezes produzidas em pequenas quantidades, como: alcalides,
esterides, terpenides, flavonides, lignides e derivados de fenilpropanides (ALVES et al.,
2000). Ros e Recio (2005) demonstram que a atividade antimicrobiana dos extratos de
plantas, leos essenciais e dos compostos isolados est relacionado com a presena dessas
substncias. Cushnie e Lamb (2005) correlacionam a estrutura dos flavonides sua atividade
antibacteriana, de modo a reconhecer que a atividade da quercetina decorrente da inibio
da DNA- girase, enquanto a sophoraflavona G e a galato-epigalocatequina inibem a funo da
membrana citoplasmtica e a licochalconas A e C inibem o metabolismo energtico da clula.
Esses compostos ativos so biossintetizados a partir de metablitos primrios e
apresentam distribuio restrita a certas plantas ou microrganismos, sendo que muitas vezes a
sntese desses compostos especfica de um dado gnero ou espcie (ALVES et al., 2000).
Leonard e Viljoen (2015) atribuem aos sesquiterpenides as atividades biolgicas citadas para
o gnero Warburgia, representado por plantas medicinais encontradas exclusivamente no
continente africano, onde so utilizadas como antibiticos naturais contra bactrias, fungos e
protozorios.
A atividade biolgica de uma dada espcie vegetal geralmente atribuda aos
componentes majoritrios presentes nos leos ou extratos vegetais; por exemplo, a
reconhecida atividade antimicrobiana de espcies do gnero Lippia decorrente da presena
de componentes majoritrios como timol e carvacol (BITU et al., 2012; PESSOA et al., 2005;
SILVA et al., 2008); no entanto Kpoviessi et al. (2014) aponta os componentes minoritrios
do leo essencial de Ocimum gratissimum Linn., no caso o mirceno, a citronela e o limoneno,
como os responsveis pela atividade atividade tripanossomicida caracterstica dessa espcie.
Diversos autores demonstram que a produo dos metablitos secundrios pode ser
influenciada por fatores como altitude, poluio atmosfrica, disponibilidade hdrica, radiao
ultravioleta, horrio e poca de coleta, condies climticas e de solo, localizao geogrfica
e ciclo vegetativo da espcie; percebe-se ainda que a atividade do metablito presente no
produto depende do processo de sua obteno e das condies de secagem e estocagem
(GOBBO-NETO e LOPES, 2007; BITU et al., 2015; NEVES et al., 2007; ANDRADE e
GOMES, 2003; AKROUT et al., 2003).

28

Em estudos de prospeco fitoqumica, interessante quantificar os componentes

levando em conta diferentes aspectos que permitam anlises comparativas do teor de
constituintes e da atividade observada, assim como fez Kpoviessi et al. (2014). Seu estudo
envolveu a utilizao da Ocimum gratissimum Linn, que na medicina popular est vinculada
ao tratamento de infeces parasitrias e permitiu averiguar a parte da planta que possui as
melhores propriedades antiparasitrias. Para isso, utilizaram leos e extratos de folhas, caules
e sementes, sendo possvel observar que a atividade varia de acordo com a fase vegetativa e
com a parte da planta utilizada, pois os extratos etanlicos obtidos de folhas e sementes em
fase de florao completa demonstraram ser uma boa fonte de agentes tripanossomicidas.
Bitu et al. (2012) comparam os componentes presentes nos leos essenciais das folhas
frescas e secas de Lippia gracillis Schauer, onde o teor de timol e carvacrol foi
significativamente maior no leo extrado de folhas frescas, demonstrando que o processo de
secagem influencia a fitoqumica do produto e consequentemente a atividade biolgica
esperada.

2.2.2 Atividades antibacteriana e moduladora da atividade de antibiticos

Os antibiticos correspondem a uma classe de frmacos comumente utilizada em

hospitais e comunidades. O seu uso de importncia coletiva, pois impactam no apenas o
indivduo que o utiliza, mas todo o ambiente por alterar a ecologia microbiana, portanto o seu
uso deve ser feito sempre de forma racional. Para que o antibitico realize a sua funo
necessrio que atinja concentrao ideal no local de infeco, seja capaz de atravessar a
parede celular, apresente afinidade pelo stio de ligao no interior da bactria e permanea
por tempo suficiente para exercer seu efeito inibitrio (CAUMO et al., 2010; OLIVEIRA e
SILVA, 2008).
O uso irracional dos antibiticos tem contribudo para que os microrganismos
desenvolvam perfis de resistncia. As bactrias podem desenvolver resistncia ao uso de
antibiticos devido inativao destes por atividade enzimtica, por modificaes
moleculares que impedem a ligao da droga ao seu stio especfico ou ainda por alteraes na
permeabilidade da parede bacteriana com modificao dos canais de entrada; esses trs
mecanismos podem ocorrer ainda de forma simultnea (DAZA, 1998, RIVERN et al.,
2003).
Garca (2003) aponta para as complexas causas da resistncia dos microrganismos aos
antibiticos: o uso abusivo de agentes antimicrobianos, o enfraquecimento dos programas que

29

visem o controle de infeces, o aumento do uso de dispositivos e os procedimentos mdicos

invasivos. As consequncias disso so o insucesso da terapia, o aumento dos ndices de
morbidade e mortalidade e o incremento dos custos crescentes de assistncia mdica.
Os mecanismos de resistncia desenvolvidos por microrganismos frente aos
antibiticos utilizados clinicamente geraram um problema de consequncias imprevisveis na
sade pblica mundial e alertaram a comunidade cientfica para o fato de que a descoberta de
novas drogas no est acompanhando a velocidade com que surgem microrganismos
resistentes aos medicamentos de uso clnico convencional (RIVERN et al., 2003). Essa
situao tem impulsionado muitos pases a identificar quais os problemas mais srios
relacionados resistncia e qual o seu impacto na sade coletiva com o intuito de direcionar
pesquisas posteriores voltadas para a descoberta de novas alternativas teraputicas
(RIVERN et al., 2003; COMEGNA et al., 2000; BENAVIDES-PLASCENCIA et al., 2005).
So muitos os trabalhos de prospeco biolgica com o objetivo de validar
cientificamente o conhecimento popular sobre a atividade antibacteriana de produtos naturais
derivados de plantas. Esses estudos so impulsionados principalmente pela necessidade atual
de encontrar novas alternativas teraputicas devido ao desenvolvimento dos mecanismos de
resistncia bacteriana ao dos antibiticos j existentes (SHARIFI-RAD et al. , 2015;
FOURNOMITI et al., 2015; MUHAISEN et al., 2015).
Em avaliaes que buscam possveis agentes antimicrobianos com base nas indicaes
de uso popular das espcies vegetais, Ros e Recio (2005) estabelecem algumas etapas de
importncia fundamental como: detectar-se a atividade antimicrobiana em relao parte da
planta, concentrar-se na flora natural de uma regio ou pas especfico e testar a atividade de
uma planta contra um princpio patolgico ou um microrganismo concreto. necessrio ainda
que sejam definidos parmetros como material vegetal, tcnicas empregadas, meio de
crescimento e microrganismos testados.
Outra linha de pesquisa que surge nesse contexto a que associa a utilizao dos
produtos naturais s principais classes de antibiticos, observando se h efeito modulador da
ao antibitica decorrente dessa associao (AGUIAR et al., 2015; LAVOR et al., 2014;
FIGUEREDO et al., 2013; VERAS et al., 2011).

2.2.3 Atividade antiparasitria de espcies vegetais em estudos bioprospectivos

30

As doenas parasitrias ocupam um papel relevante entre as principais causas de morte

no Brasil e no mundo e apresentam relevncia devido ao seu impacto social, pois geralmente
esto relacionadas s condies de moradia, alimentao e higiene, explicitando as condies
socioeconmicas de uma populao (PAES e SILVA, 1999). Lemos e Lima (2002)
descrevem a relevncia de doenas dessa natureza no cenrio mundial, mas cita vrias que so
negligenciadas quanto ao seu controle como clera, leishmaniose, febre amarela, parasitoses
intestinais, malria, esquistossomose, tripanossomase e a dengue.
Nas regies geogrficas onde essas patologias so mais prevalentes, geralmente as
comunidades locais conhecem um vasto repertrio de plantas que podem ser usadas
terapeuticamente (IBRAHIM et al., 2014), impulsionando diversas pesquisas de natureza
bioprospectiva com o objetivo de descobrir substncias oriundas do metabolismo vegetal que
possam apresentar atividade antiparasitria (RIBEIRO et al., 2015; ANOSA et al.,2014;
KPOVIESSI et al., 2014).
As indicaes populares de uso da Stryphnodendron obovatum Benth. para tratar
doenas causadas por protozorios levaram Ribeiro et al. (2015) a validar cientificamente a
atividade dos compostos presentes na sua casca como teraputica alternativa para o
tratamento de Leishmania amazonensis (Ribeiro et al., 2015). A espcie Cephaelis
ipecacuanha Rich., utilizada popularmente como antidiarrica, teve a sua atividade
antiparasitria reconhecida por Lee (2008) contra Entamoeba histolytica. Anosa et al. (2014)
analisaram extratos etanlicos da entrecasca da Enantia polycarpa (PC) Engl. Et Diels
(Annonaceae), usada tradicionalmente no sul da Nigria no tratamento da malria, seus
resultados validam cientificamente a indicao etnofarmacolgica e demonstram ser seguro o
uso dessa planta oralmente. Santos et al. (2012) apresentam a Eugenia uniflora L. como
planta promissora no desenvolvimento de uma medicao que trate a tripanossomase.
Algumas buscas por agentes antiparasitrios voltam-se sobre um gnero de plantas.
Kpoviessi et al. (2014) demostraram que espcies do gnero Cymbopogon so grandes fontes
de agentes antitripanossmicos e antiplasmdicos. Espcies do gnero Operculina so citadas
em estudo etnobotnicos como recurso teraputico no tratamento de doenas parasitrias
(CARVALHO et al., 2013; RODRIGUES et al., 2007; MARTINS et al., 2000). Silva et al.
(2010) mostrou que a Operculina hamiltonii (G. Don) D. F. Austin & Staples foi eficaz no
controle de parasitas gastrointestinais de caprinos naturalmente infectados no serto semirido do Brasil.
Apesar de muitos trabalhos j terem sido realizados, vrios autores relatam a
necessidade de aprofundar a busca por plantas que possam apresentar potencial contra

31

parasitas. Morais- Braga et al.(2013) demonstraram a atividade antiparasitria da Lygodium

venustum SW., por ser essa a primeira espcie da famlia Lydodiaceae a ter a sua atividade
antiparasitria validada cientificamente, esses autores sugerem que outros estudos sejam
realizados nesse sentido com outras espcies da mesma famlia.
Traore et al. (2013) realizaram um levantamento etnofarmacolgico em Guin com o
intuito de recolher informaes sobre remdios a base de plantas usados popularmente no
tratamento da malria; esse estudo demonstrou que os curandeiros locais apresentam um
grande repertrio de plantas antimalricas, no entanto ficou evidente a necessidade de novas
anlises que abordem a atividade antimalrica de diferentes espcies comparativamente
validando cientificamente essas informaes. Ibrahim et al. (2014), a partir de uma reviso
sistemtica da literatura, listam vrios compostos obtidos a partir de plantas medicinais
africanas com atividade tripanossomicida e relatam que para a maioria delas ainda no
existem estudos clnicos comprobatrios.

32

CAPITULO 3:
METODOLOGIAS___________________________________

33

3.1 Levantamento etnofarmacolgico

3.1.1 Localizao e caracterizao da rea de estudo
O Cariri cearense engloba outras seis cidades, alm do Crato (latitude -7o1403N,
longitude -39o2434 W), Juazeiro do Norte (latitude -7o1247N, longitude -39o1855 W) e
Barbalha (latitude -7o1840 N, longitude -39o1815W), sendo que esses trs municpios
citados so os mais importantes do ponto de vista econmico e cultural. Pela proximidade
territorial, Crato, Juazeiro do Norte e Barbalha sofreram um processo de conurbao
formando uma rea denominada Tringulo Crajubar, onde as atividades tercirias, formadas
pelo comrcio e servios, so predominantes e sempre exerceram forte atrao e influncia
sobre os centros locais circunvizinhos (OLIVEIRA, 2012). A regio considerada um polo
cultural no estado, apresentando diversas manifestaes artsticas entre as quais se destacam
as danas folclricas, as esculturas, as pinturas e as xilogravuras, as cantorias e a literatura de
cordel que acontecem muitas vezes nos espaos pblicos dos mercados. Outra caracterstica
local a forte religiosidade em torno da figura do Padre Ccero Romo Batista, o que atrai
milhares de turistas em datas anuais especficas (AUGUSTO e GES, 2007).
Os mercados pblicos registrados nos rgos oficiais das cidades do Tringulo
Crajubar, so em nmero de oito, distribudos da seguinte forma: um mercado na cidade de
Barbalha (Mercado Municipal de Barbalha), cinco em Juazeiro do Norte (Centro de
Abastecimento Dr. Mozart Cardoso de Alencar, Centro de Abastecimento Raimundo Viana,
Centro de Abastecimento Jos Tefilo Machado, Mercado Governador Gonzaga Mota,
Mercado Governador Adauto Bezerra) e dois no Crato (Centro de Abastecimento Walter
Peixoto e Mercado Wilson Oriz). O levantamento etnofarmacolgico do presente estudo foi
realizado em seis dos mercados do Tringulo Crajubar; o Centro de Abastecimento Raimundo
Viana e Mercado Wilson Oriz foram excludos porque neles no havia comercializao de
plantas para fins teraputicos no perodo da coleta de informaes.

3.1.2 Procedimentos de coleta de dados

A amostragem foi no aleatria-intencional, sendo pr-definidos como informantes os

vendedores de plantas medicinais encontrados nos mercados pblicos da rea em estudo no
perodo de maro de 2012 a junho de 2014 (ALBUQUERQUE e LUCENA, 2004).

34

Aps a obteno do termo de anuncia nas Secretarias Municipais, realizamos visitas

preliminares aos mercados para conhecimento dos espaos e estabelecimento de contato com
os possveis entrevistados. Nessas primeiras visitas, fomos acompanhados sempre pelos
administradores ou gerentes locais para estabelecimento de uma relao de confiana entre
pesquisadores e participantes. A partir disso, os vendedores foram convidados a participar da
pesquisa como informantes. Eles foram informados e esclarecidos previamente sobre os
objetivos do estudo e o aceite foi dado mediante a assinatura de um Termo de Consentimento
Livre e Esclarecido, conforme exigncia do Comit de tica em Pesquisa (Resoluo N 292,
de 08/07/1999). O presente projeto foi submetido e aprovado pelo Comit de tica em
Pesquisa com Seres Humanos da Faculdade Leo Sampaio (FALS), conforme parecer
477.828.
As informaes foram coletadas atravs de entrevistas semiestruturadas. Foi utilizado
um formulrio atravs do qual foram levantados dados referentes parte da planta utilizada,
modo de preparo, quantidade necessria, indicaes de uso e efeitos adversos conhecidos
(AMOROZO e VIERTLER, 2010, ALBUQUERQUE et al., 2007b).
As espcies citadas foram fotografadas nos mercados e registradas pelo seu nome
vulgar de acordo com a fala dos entrevistados. Foram confeccionadas as excicatas de plantas
coletadas com a ajuda de dois vendedores, tambm coletores seguindo a tcnica convencional
(MORI et al., 1989). Para complementar este procedimento, amostras e fotografias das plantas
que no puderam ser coletadas foram identificadas e comparadas com materiais depositados
em herbrios (ALBUQUERQUE et al., 2010).

3.1.3 Anlise dos dados

Para a anlise dos dados, foram utilizadas tcnicas descritas na literatura e comumente
utilizadas em trabalhos da rea para clculo do fator de consenso do informante (FCI) e da
importncia relativa (IR) (TROTER e LOGAN, 1986; BENNET e PRANCE, 2000).
O FCI utilizado para identificar os sistemas corporais que apresentam maior
destaque local. Na categoria uso medicinal cada sistema uma subcategoria e o valor
mximo que cada uma pode atingir 1 o que significa que quanto mais prximo da unidade
for o valor obtido, maior a concordncia entre os informantes (ALBUQUERQUE et al.,
2010). Esse ndice obtido pelo uso da frmula:
FCI= (nur nt) / (nur 1); onde nur corresponde ao nmero de citaes de uso em
cada sub-categoria e nt o nmero de espcies vegetais utilizadas nesta categoria.

35

O clculo da IR aponta para as plantas mais versteis que so aquelas com maior
nmero de indicaes teraputicas ou que pertenam a mais sistemas corporais. O valor
mximo que uma espcie pode obter 2, e o clculo feito a partir da frmula:
IR= NSP+NP; onde NSP o nmero de sistemas corporais tratados por uma
determinada espcie sobre o nmero total de sistemas tratados pela espcie mais verstil,
enquanto NP corresponde ao nmero de propriedades atribudas para uma determinada
espcie sobre o nmero total de propriedades atribudas espcie mais verstil
(ALBUQUERQUE et al., 2010).
3.2 Anlises qumicas
3.2.1 Coleta do material vegetal

As espcies vegetais C. ipecacuanha, O. hamiltonii, e L. gracilis foram coletadas

respectivamente nas cidades de Patos-Paraba, Serrita- Pernambuco e Crato- Cear. As
exsicatas foram depositadas respectivamente nos herbrios Geraldo Mariz da Universidade
Federal de Pernambuco (no. 35844) e herbrio Caririense Drdaro de Andrade Lima da
Universidade Regional do Cariri URCA (no. 4022 e no. 44.456). As folhas de L. gracillis
foram coletadas em quatro diferentes horrios do dia (7:00, 10:00, 13:00 e 16:00 horas), sendo
parte das folhas submetida desidratao.

3.2.2 Obteno dos produtos naturais

O tubrculo da O. hamiltonii e as razes da C. ipecacuanha foram triturados e

submetidos respectivamente infuso e decoco, seguindo o protocolo da Farmacopia
Brasileira (2010) quanto proporo de material vegetal e quantidade de gua bem como ao
tempo de abafamento. Posteriormente os materiais obtidos, infuso de O. hamiltonii (IOh) e
decocto de C. ipecacuanha (DCi), foram filtrados e levados refrigerao e posteriormente
submetidos ao processo de liofilizao utilizando aparelho modelo Chisrt Alpha 1-4.
Os leos essenciais extrados das folhas de L. gracilis foram obtidos, separadamente,
por hidrodestilao em um balo de vidro de 5 L contendo 2,5 L de gua destilada, utilizando
aparelho tipo Clevenger modificado por Gottlieb (1960) da marca Quims, durante um
perodo de 2 horas. Em seguida as misturas leo/gua foram coletadas, secas com sulfato de

36

sdio anidro (Na2SO4), filtradas e armazenadas sob refrigerao a menos 4C at a realizao

das anlises qumicas e dos ensaios antimicrobianos.

3.2.3. Anlise da composio qumica dos leos essenciais de L. gracilis

As anlises das composies qumicas dos leos essenciais de L. gracilis foram

realizadas usando um espectrmetro Shimadzu CG-17A / EM QP5050A (sistema de
CG/EM): DB-5HT coluna de capilaridade (30 m x 0,251 mm); gs de portador: hlio 1,7
mL/min; presso da coluna 107,8 kPa; velocidade linear = 47,3 cm/seg; fluxo total 24
mL/min; fluxo de portador 24 mL/min; temperatura do injetor 270 C; temperatura de detector
290 C; temperatura da coluna 60 (2 min) - 180 C (1 min) a 4 C/min, ento 180 - 260 C a
10 C/min (10 min), operando sob energia de ionizao de 70 eV. A identificao dos
componentes foi baseada na fragmentao espectral, usando padres da biblioteca de
computador Wiley 229, alm de dois outros argumentos: os ndices de reteno e a
comparao com dados da literatura (ADAMS, 2001; ALENCAR et al.,1990).

3.2.4 Anlise da composio qumica dos produtos naturais da O. hamiltonii e da C.

ipecacuanha

As anlises cromatogrficas foram realizadas sob as condies de gradiente usando

coluna de Phenomenex C18 (4,6 mm x 250 mm) embaladas com partculas de 5 M de
dimetro; a fase mvel foi gua contendo 2% de cido frmico (A) e metanol (B), e a
composio gradiente foi: 5% de (B) durante 2 min; 25% (B), at 10 min; 40, 50, 60, 70 e
80% (B) a cada 10 minutos; seguindo o mtodo j padronizado. A IOh e a fase mvel foram
filtradas atravs de membrana de 0,45 5 M (Millipore) e, em seguida, desgaseificou-se por
banho de ultra-sons antes da utilizao, o extracto foi analisado para uma concentrao de 15
mg / mL. A taxa de fluxo foi de 0,7 mL / min e o volume de injeco foi de 40 5 L. As
solues estoque de referncia de normalizao foram preparadas em fase mvel de HPLC
numa gama de concentraes de 0,030-0,500 mg/mL para o cido glico, cido cafeico, cido
elgico e cido clorognico, e 0,025-,300 mg/mL para a quercetina, rutina e luteolina.
Quantificaes foram realizadas por integrao dos picos utilizando o mtodo do padro
externo, a 254 nm para o cido glico e cido elgico; 327 nm para cidos clorognicos e
cafico, e 366 para a quercetina, rutina e luteolina. Os picos foram confirmados por
cromatografia de comparao do seu tempo de reteno com os de padres de referncia e por

37

espectros de DAD (200 a 600 nm). Todas as operaes de cromatografia foram realizadas a
temperatura ambiente e em triplicata. Os limites de deteco (LOD) e de quantificao (LOQ)
foram calculados com base no desvio padro das respostas e a inclinao por meio de trs
curvas de anlise independentes. LOD e LOQ foram calculados como 3,3 e 10 /S,
respectivamente, onde o desvio padro da resposta e S o declive da curva de calibrao.
As diferenas entre os grupos de HPLC foram avaliadas por uma anlise de modelo de
varincia e teste de Tukey. O nvel de significncia para as anlises foi definido como p
<0,05. Estas anlises foram realizadas usando o software livre R verso 3.1.1.

3.3 Avaliao da atividade antiparasitria da infuso de O. hamiltonii

3.3.1 Linhagens celulares utilizadas

Para os estudos in vitro com Tripanossoma cruzi, foi usado o clone CL-B5 ( Le Senne
et al., 2002). Os parasitas foram estavelmente infectados com o gene da -galactosidase
(lacZ) da Escherichia coli que foram fornecidos pelo Dr. F. Buckner atravs do Instituto
Comemorativo Gorgas (Panam). As epimastigotas cresceram a 28C em caldo de infuso de
fgado (Difco, Detroit, MI) com 10% de soro fetal de bovino (FBS) (Gibco, Carlsbad, CA),
penicilina (Ern, SA, Barcelona, Espanha) e estreptomicina (Reig Jofr SA, Barcelona,
Espanha), conforme descrito por Rolds et al. (2008), e colhidas durante a fase de
crescimento exponencial. As culturas de Leishmania brasiliensis e Leishmania infantum
foram obtidas a partir do Instituto de Investigaciones en Ciencias de la Salud, Assuno,
Paraguai - IICS. A manuteno da presso, a forma de cultura e isolamento da forma
promastigota seguiram os procedimentos descritos por Rolds et al. (2008). Os ensaios de
inibio de promastigotas foram realizados utilizando a estirpe de L. braziliensis e L. infantum
(MHOM / BR / 75 / M2903), cultivadas a 22C em meio de Drosophila de Schneider
suplementado com 20% de FBS. Para os ensaios de citotoxicidade, foi utilizada a clula de
fibroblasto linhagem NCTC929 cultivadas em Meio Mnimo Essencial (Sigma). O meio de
cultura foi suplementado com FBS inativado por calor (10%), penicilina G (100 U / mL) e
estreptomicina (100 mg / mL). As culturas foram mantidas a 37C em atmosfera mida com
5% de CO2. A viabilidade destas estirpes foi avaliada de acordo com Rolds et al. (2008),
atravs da utilizao de resazurina como um mtodo colorimtrico.

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3.3.2 Reagentes

A resazurina sdica foi obtida a partir de Sigma-Aldrich (St. Louis, MO) e

armazenada a 40C protegida de luz. Uma soluo de resazurina foi preparada em tampo de
1% de fosfato, pH 7, e esterilizada antes da utilizao. O clorofenol vermelho-b-Dgalactopiransido (CPRG; Roche, Indianapolis, IN) foi dissolvido em 0,9% de Triton X- 100
(pH 7,4). A penicilina G (Ern, SA, Barcelona, Espanha), estreptomicina (Reig Jofr SA,
Barcelona, Espanha) e dimetilsulfato tambm foram utilizados.

3.3.3 Ensaio de susceptibilidade epimastigota in vitro

O ensaio de rastreio foi realizado em microplacas de 96 poos com as culturas que no

atingiram a fase estacionria (Vega et al., 2005). As formas epimastigotas de T. cruzi foram
semeadas a 1x105 mL-1 em 200 L de meio de cultura de caldo de fgado. As placas foram
ento incubadas com as drogas em concentraes variveis entre 0,1 e 50 g/mL) a 280C
durante 72 horas, ao mesmo tempo que 50 L de uma soluo CPRG foi adicionada para dar
uma concentrao final de 200 M. As placas foram incubadas a 37C durante um tempo
adicional de 6 horas e foram, em seguida, avaliadas por um espectrmetro a 595 nm. Cada
experimento foi realizado duas vezes e de forma independente, cada uma das concentraes
foi testada em triplicata para cada experimento. A eficcia de cada composto foi estimada
pelo clculo dos percentuais anti-epimastigota.

3.3.4 Ensaio leishmanicida in vitro

Esse ensaio foi efetuado utilizando uma modificao do mtodo anteriormente

descrito. As culturas de promastigotas de L. brasiliensis e L. infantum foram cultivadas a uma
concentrao de 106 clulas/mL e depois transferidas para o teste. Os compostos foram
dissolvidos em DMSO nas concentraes a serem testadas e foram transferidos para
microplacas. Cada teste foi realizado em triplicata. A atividade dos compostos foi avaliada
aps 72 h por contagem direta das clulas aps diluies em srie e em relao com um
controle no tratado.

3.3.5 Ensaios citotxicos

39

Os fibroblastos NCTC929 foram plaqueados em microplacas de 96 poos a uma

definitiva concentrao de 3x104 clulas/poo. As clulas foram cultivadas a 37C numa
atmosfera de 5% de CO2. Depois disso, o meio de cultura foi removido e os compostos foram
adicionados a 200 L, e realizada uma nova cultura por 24 h. Aps esta incubao, 20 L de
uma soluo de 2 mM de resazurina foi adicionado a cada poo. As placas foram incubadas
durante 3 horas e a reduo da resazurina foi mensurada usando dupla absoro de
comprimentos de onda de 490 e 595 nm. O valor do controle foi subtrado. Cada concentrao
foi testada em triplicata.

3.4 Avaliao da atividade antibacteriana e moduladora da ao dos antibiticos

3.4.1 Material bacteriolgico

Foram utilizadas nos testes seguintes bactrias Gram-negativas e Gram-positiva, sendo

sete cepas bacterianas: quatro linhagens padro cedidas pela Fundao Oswaldo CruzFIOCRUZ (E. coli ATCC 10536, P.aeruginosa ATCC 15442 e S.aureus ATCC 12692 e
ATCC 25923) e trs isolados clnicos (S. aureus 358, e P. aeruginosa 03 e E. coli 27).
Previamente aos testes, as cepas bacterianas foram reavivadas em caldo BHI 3,8%
durante 24 horas a 37C. Aps esse sulbcultivo, procedeu-se a padronizao do inculo, que
consistiu na preparao de uma suspenso bacteriana em BHI, apresentando turvao similar
ao tubo 0,5 da Escala Mac Farland (1 x 108 UFC/ mL) em caldo BHI a 10%.

3.3.4 Determinao da Concentrao Inibitria Mnima (CIM)

A concentrao inibitria mnima (CIM) dos produtos naturais (IOh, DCi e OELG) foi
avaliada dos pelo mtodo de microdiluio em caldo, com base no documento M7-A6 para
bactrias (NCCLS, 2003). As amostras dos produtos naturais a serem testados (IOh, DCi,
OELG) foram previamente preparados para obteno de uma concentrao inicial de 10 mg /
mL, sendo observada a seguinte proporo: 10 mg da amostra solubilizada em 1 mL de
DMSO. A partir desta concentrao, foi efetuada uma diluio de 1: 10 em gua destilada
estril (10 mg / mL), e em seguida, esta foi diluda da mesma forma formando uma soluo
estoque de 1024 g/ mL. Aps esse processo, diluies seriadas foram realizadas na
proporo 1:1 em gua destilada, obtendo-se as concentraes que variaram de 512-8 g/ mL.

40

Foram utilizados 100 L de meios e de amostras, distribudos em cavidades de

microplacas estreis. As amostras estavam preparadas em concentrao dobrada (1.024 g/
mL) em relao concentrao inicial definida em volumes de 100 L e posteriormente
foram diludas seriadamente 1:2 em caldo BHI 10%. Em cada cavidade com 100 L do meio
de cultura foi colocada uma amostra da suspenso bacteriana diluda na proporo de 1: 10
Figura 5 (pag. 43) resultando no inculo final de 1 x 105 UFC/mL.
O controle negativo foi realizado com o caldo BHI, enquanto o controle positivo foi o
caldo mais o inculo. A concentrao inibitria mnima (CIM) foi definida como a menor
concentrao capaz de inibir completamente o crescimento microbiano Os ensaios foram
realizados em triplicata e as placas incubadas por 24 h 37 + 2 C (JAVADPOUR et al.,
1996). Como revelador foi utilizado 20 L/ poo de resazurina sdica (SIGMA) preparada em
gua destilada estril na concentrao de 0,01% (p/v), por um perodo de 1 hora em
temperatura ambiente. A leitura dos resultados para determinao da CIM foi considerada
como positiva para os poos que permaneceram com a colorao azul e negativa os que
obtiveram colorao vermelha (COUTINHO et al., 2008).

3.3.5 Avaliao da atividade moduladora por contato direto

Para a verificao do produto natural como modulador da atividade antibitica

somente foram testados a IOh, o DCi e o OELG. A sua concentrao inibitria minima (CIM)
e a dos antibiticos aminoglicosdeos (neomicina, canamicina, amicacina e gentamicina) e lactmicos ( oxacilina e benzapen) foram determinados de acordo com o mtodo da
microdiluio descrito no documento CLSI M7-A6, utilizando concentraes subinibitrias
em BHI a 10%.
As amostras a serem testadas foram preparadas em concentrao dobrada (1024 g/
mL) em relao concentrao inicial (JAVADPOUR et al.,1996). Para avaliao do leo
essencial como modulador da resistncia dos antibiticos, foram adicionados nos poos das
placas de microdiluio, as bactrias a serem testadas, juntamente com os antibiticos (Sigma
Chemical Co. All) e tambm, os produtos naturais em concentraes subinibitrias (CIM/8).
O teste foi acompanhado de um controle negativo que consistia na soluo de microrganismos
e dos antibiticos supracitados. As placas foram incubadas por 24 h a 37 C. A leitura foi
realizada pela adio da resazurina sdica, conforme descrito anteriormente.

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3.3.6 Avaliao da atividade moduladora por contato gasoso

A modificao da atividade dos antibiticos pelos componentes volteis do OELG foi

determinada pelo mtodo do contato gasoso (modificado por INOUYE, TAKIZAWA e
YAMAGUCHI, 2001). A avaliao foi realizada em triplicata, utilizando as solues
contendo 50, 25, 12.5, 6.25 e 3.12 % dos leos essenciais diludo em DMSO.
Foram utilizadas duas culturas padro, sendo uma Gram- negativa, P. aeruginosa
ATCC 15442 e outra Gram-positiva, S. aureus ATCC 12692, reavivadas em meio BHI, sendo
incubadas por 24 horas a 37 C. A seguir, as bactrias foram colocadas em suspenso no tubo
de ensaio alcanando uma turvao equivalente a 0,5 na escala de McFarland (1x 108
UFC/mL). Em seguida, os microrganismos foram semeados com o auxlio de um swab estril
em placas de Petri com Plate Count Agar (PCA, Difco). Na poro inferior e central das
placas, foram utilizados discos com os antibiticos amicacina (30 g), gentamicina (10 g) e
tetraciclina (10g) da LABORCLIN para verificar alteraes no dimetro da zona de inibio
do crescimento dos microorganismos. As placas foram invertidas e na poro superior delas
foi colocado 50 L de cada concentrao dos leo essencial, para que os componentes
volteis interagissem com os antibiticos. Foram utilizadas como controle: placas contendo
DMSO sem o leo essencial e placas contendo somente os antibiticos. A leitura foi realizada
aps um perodo de incubao por 24 horas a 35 + 2 C, como auxlio de uma rgua
milimetrada.

3.3.7 Anlises de dados

Os resultados dos testes microbiolgicos foram obtidos em triplicata e expressos como

mdia geomtrica. Para anlise estatstica foi aplicada a ANOVA seguida do Bonferroni post
test utilizando o software GraphPad Prisma 6.0 A significncia foi considerada com p< 0,05
(MATIAS et al., 2013)..

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CAPITULO 4:
RESULTADOS E DISCUSSO__________________

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4.1 Ethnopharmacological study plants sold for therapeutic purposes in public markets
in the northeast Brazil
Vanessa de Carvalho Nilo Bitu, Valdeneide de Carvalho Nilo Bitu, Edinardo Fagner Ferreira
Matias, Wenderson Pinheiro de Lima, Aline da Costa Portelo, Irwin Rose Alencar de
Menezes

Artigo aceito no peridico Journal of Ethno-pharmacology

(Normas para publicao no anexo A)

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