PRODUO DE AMILASE POR Aspergillus niger A PARTIR DO RESDUO DO

FRUTO DA PUPUNHEIRA (Bactris gasipaes, Kunth)

Elck Almeida Carvalho1, Clissiane Soares Viana Pacheco2 , Biano Alves de Melo Neto1,
Alesxandra Nascimento Ferreira2, Thiago Jos Onrio Rocha2, Tamires Carvalho dos Santos3,
Maria das Graas Conceio Parada Costa Silva4, Marcelo Franco5
1

Professores do Ncleo de Tecnologia de Alimentos - NUTEC do IF Baiano/campus Uruuca.

Rua Joo Nascimento, s/n, Centro, Uruuca - Bahia. (elckcarvalho@gmail.com,
biano.neto@urucuca.ifbaiano.edu.br)
2
Discente do curso de Licenciatura em Qumica e bolsista ITI-A/CNPq. UESB. Praa
Primavera, 40, Campus de Itapetinga, BA. (alesxandraquimica@hotmail.com;
tjor.mqf@gmail.com; clissianesoares@hotmail.com);
3
Discente do curso de Engenharia Ambiental e bolsista ITI-A/CNPq. UESB, Praa
Primavera, 40, campus de Itapetinga, BA. (eng.tamirescarvalho@yahoo.com.br)
4
Pesquisadora da Comisso Executiva de Planejamento da Lavoura Cacaueira - CEPLAC.
Km 22, Rodovia Ilhus / Itabuna, Bahia (gracaparada@ceplac.gov.br)
5
Professor Adjunto do Departamento de Estudos Bsicos e Instrumentais DEBI da
Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia UESB, Praa Primavera, 40, campus de
Itapetinga, BA. (marcelofranco@pq.cnpq.br)

INTRODUO
A pupunheira (Bactris gasipaes, Kunth) uma palmeira de ciclo perene que ocorre,
naturalmente, desde Horduras, na America Central, at a Amaznia brasileira (MORA-URP
et al., 1997). O cultivo da pupunheira relativamente recente, a sua cultura est sendo
aperfeioada aos poucos e estabelecida em diferentes estados do Brasil (KULCHETSCKI,
2001). Segundo Clement (1991) a composio mdia de carboidratos nos frutos da
pupunheira pode variar de 59,7 a 81,0% em base seca, o que evidencia a potencialidade de
seus subprodutos como fonte de amido para produo de amilase por microrganismos.
Diferentes processos industriais produzem resduos que necessitam de destino
adequado, pois alm de criar potenciais problemas ambientais, representam perdas de
matrias-primas e energia, exigindo investimentos em tratamentos para controlar a poluio
gerada (PELIZER et al., 2007). Das diversas tecnologias empregadas para reduzir ou
minimizar esses resduos, a utilizao de processos biolgicos uma das alternativas viveis
j que estes podem ser empregados como biomassa para cultivo de fungos de interesse
econmico (TONINI et al., 2007).
Das varias enzimas produzidas, as amilases so amplamente estudadas devido
importncia na hidrolise do amido (SPIER et al., 2008) para aplicaes nas industrias
alimentcias, txtil e de papel (GUPTA et al., 2003; PANDEY et al., 2005). As amilases esto
entre as mais importantes enzimas industriais e so de grande importncia na biotecnologia
atual (PANDEY et al., 2000). As amilases hidrolisam os amidos e so classificados de varias
formas, dependendo de como atua sobre suas molculas.
A fermentao em estado slido (FES) consiste em uma tcnica de crescimento de
microrganismos sobre e no interior de partculas porosas midas na qual o contedo de
lquido contido na matriz deve ser mantido em valores de atividade de gua que assegure o
adequado crescimento e metabolismo celular, mas que no exceda a capacidade mxima de
reteno de gua na matriz (PALMA, 2003). Os fungos filamentosos so os mais adaptveis a

crescerem em substratos slidos, pois so capazes de crescer com pouca gua e muitos slidos
presentes, alm de sua forma de crescimento favorecer a colonizao do meio (DURAND,
2003). Os substratos para FES so, em geral, resduos ou subprodutos da agro-indstria
(PANDEY, 2003).
O objetivo deste trabalho foi avaliar o aproveitamento de resduos da pupunheira, para
produo da enzima, amilase, por fermentao em estado slido com auxilio do fungo
Aspergillus niger dentro dos tempos ( 24, 48, 72, 96 e 120h), com 40% e 50% de umidade a
35 C.
MATERIAIS E MTODOS
Materiais e inculo do microrganismo
A cepa de A. niger utilizada foi proveniente do Laboratrio de Reaproveitamento de
Resduos Agroindustriais da UESB campus de Itapetinga. O resduo do fruto da pupunheira
foi cedido pelo IFBaiano - Campus Uruuca. O resduo foi seco em estufa de secagem e
esterilizao (SOLAB) a 70 C por 24h, sendo posteriormente triturado em moinho tipo Wiley
(20 mesh) e autoclavados a 121 C e 1 atm por 15 minutos. O microrganismo foi incubado em
meio de cultura PDA (Potato Dextrose Agar) e incubado a 35 C por 7 dias em estufa
bacteriolgica modelo SL 101 SOLAB. Os esporos foram recuperados em soluo de gua
estril e a contagem do numero de esporos em suspenso foi efetuada sobre a cmera de
Neubauer com auxilio do microscpio binocular BIOVAL L1000.
Fermentao em estado slido e extrao
As fermentaes foram realizadas em erlenmeyers contendo 10 g de resduo,
previamente autoclavados a 121 C por 15 minutos. Nesses erlenmeyers foram adicionados
uma suspenso de 108 esporos por gramas de substrato a 40% e 50% de umidade e incubada
em estufa a 35 C nos tempos (24, 48, 72, 96 e 120h). Aps o processo fermentativo, foram
misturados 100ml de gua destilada estril, esta suspenso permaneceu sobre agitao
contnua durante 30 minutos a 200rpm. Em seguida foi feita a extrao mecnica do extrato
enzimtico para a remoo do solido, o extrato obtido foi centrifugado a 3000 rpm durante 15
minutos e o sobrenadante foi utilizado para determinar a atividade enzimtica.
Determinao da atividade Amilsica
Para a determinao de amilase, em um tubo foram adicionados 1 mL de tampo fosfato 0,5M
e pH 7,0 contendo 1% de amido solvel e 1 mL do extrato enzimtico. A mistura foi incubada
por 30 minutos a 37 C. Os acares redutores foram determinados pela tcnica do cido
dinitrosalicilico (DNS), onde 1 mL desse reagente foi adicionado a 1 mL do extrato anterior e
deixando em fervura por 5 minutos. A leitura foi feita em 570nm usando-se glicose como
curva padro (MILLER, 1959). Uma unidade de atividade enzimtica corresponde
quantidade de enzima capaz de liberar 0,1 mg/mL de aucares redutores.
RESULTADOS E DISCUSSO
Na figura 1 so apresentados os valores de atividade amilasica, no resduo do fruto da
pupunheira em funo do tempo de fermentao e umidade na temperatura de 35 C.

Figura 1- Atividade de amilase ao longo do tempo de fermentao a 35 C com

()40% e ()50% de umidade.
Observa-se que a maior atividade enzimtica est no tempo de 72h nas umidades 40 e
50%, com valores respectivamente 18,22 U/mL e 17,92, isto se d pelo fato que a glicose
uma fonte de carbono facilmente metabolizvel, o que pode fazer com que o microrganismo
consuma primeiramente a glicose como fonte de carbono sem que haja a necessidade de
expresso de enzimas e, posteriormente, com o esgotamento dessa fonte o microrganismo
sente a necessidade de expressar enzimas que podem metabolizar outra fonte de carbono
presente no meio (MONTEIRO e ULHOA, 2006). A alta densidade celular e alta taxa de
crescimento podem ser obtidas com glicose, mas alta atividade e produo de enzimas so
obtidas com amido (PANDEY, 2000).
Os resultados indicam que no tempo de 72h ocorreu uma elevada atividade enzimtica
nas umidades de 40% e 50%, isto se deve pelo fato que o microrganismo nas primeiras horas
consumiu a glicose como fonte de carbono, e com esgotamento dessa fonte no tempo 72h teve
essa elevada atividade. Com isso pode-se concluir que o tempo de fermentao e a umidade
afetam a quantidade de produo dessa enzima
AGRADECIMENTOS
Os autores agradecem ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientfico e
Tecnolgico (CNPq), Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior
(CAPES) e ao Banco do Nordeste (BNB) pelo apoio financeiro concedido.
REFERNCIAS
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