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PROTENAS: so cadeias polipeptdicas, condensao de aminocidos.

So
AA ligados por ligaes peptdicas. (so conjuntos de AA).
Caractersticas: Formadas essencialmente por N; H; O; C (S); Dois grupos
funcionais: amino (NH2), carboxlico (COOH-); AA se diferenciam pela cadeia
lateral (diferencia uns aa do outro); So ligados entre si por ligaes
covalentes;
ESTRUTURA PRIMRIA: a seqncia de aminocidos. esta estrutura
que, de fato, determina a forma e a funo da protena.
ESTRUTURA DAS PROTENAS: -Em ambiente aquoso, negativo com
negativo se repelem e positivo com negativo se unem.
- Em meio aquoso, desnatura a protena para ela se esticar pra ocorrer a
quebra, desnaturando ela perde a funo.
Protenas podem ser: simples, apenas Aas; Conjugadas: 1 ou + grupos
de carboidratos,ons, cofatores (cofatores Co enzima A)
FUNO DA PROTENA ESTRUTURAL: Biologicamente ativa (tem
alguma funo em nosso corpo). Ex: Reguladoras (queima gordura);
Armazenadoras (armazena ferro); Enzimas (composio dos sistemas
enzimticos), transportadoras (Translocao e armazenamento de
nutrientes: lipdios, minerais), motoras, sinalizadoras (com baixa injeo de
protena pode comprometer todo o organismo do animal pq a protena no
s msculo).
AA ESSENCIAIS: no produzirmos nem em quantidade e nem em
velocidade, da temos que ingerir.
*As protenas corporais so formadas continuamente no organismo. Aqueles
AAs que no podem ser sintetizados em quantidade e velocidade suficiente
deve ser ingerida.*
-AAs essenciais para aves, ces, sunos e ratos: lisina, triptofano, histidina,
fenilalanina, leucina, isoleucina, treonina, metionina, valina e arginina;
-AAs essenciais para aves em crescimento: os mesmos, mais glicina, cido
glutmico e prolina
-Para ruminantes a exigncia do animal que determina a necessidade de
suplementao protica.
FORMAO DE UMA PROTENA: Ex. hemoglobina todos os AAs
necessrios para sua fabricao devem estar disponveis simultneamente
na corrente sanguinea; constituda de 150 AAs e leva cerca de 1,5 minutos
para ser produzida.
*PROVA: Quanto mais protena bruta melhor a protena. Clculo para
encontrar protena bruta: PB = %N x 6,25 (N=nitrognio encontrado na
cadeia).
*OBS: Dois AA se junta j se tem uma pequena protena.
Ligao pptica: uma ligao se juntando a outro pra formar uma
protena.
Quebra os AA ao ingerirmos algo, se torna em AA livre e ganham a corrente
sanguinea, indo para os locais necessrios.*
OBS: A juno de 2 AAs formam um dipeptdeo.
OBS: Toda enzima uma protena, mas nem toda protena uma enzima.
* PARA RUMINANTES: Em algumas situaes AAs no essenciais podem
se tornar essenciais: deficincias de metionina levam a deficincia de
cistina.*
A qualidade da protena dependente de 2 fatores:
-Da concentrao total de protena (protena bruta), que o teor de
nitrognio total multiplicado pelo fator 6,25; PB = % N x 6,25

-Da proporo de AAs componentes das protenas. Valor biolgico das


protenas -> % de N absorvido no TGI disponvel para as funes produtivas
do corpo. a frao da protena digerida que realmente utilizada pelo
organismo; VB = N retido/N ingerido x 100
OBS: Uma vaca produzindo 30 kg de leite secreta 1 kg de protena junto
com o leite.
Para produo de at 10 kg de leite no h limitao;
15 kg necessita de suplementao de metionina e valina;
20 kg necessita de metionina, valina e isoleucina;
+ de 20 kg necessita dos anteriores mais lisina e triptofano.
USO DE PROTENA NA ALIMENTAO ANIMAL:
- fonte de origem vegetal no tem restrio.
-fontes de origem animal tm restrio.
Ruminantes: proibido preocupao com a Bovine . Spongiform
Encephalopathy BSE;
Monogstricos: rgido controle sanitrio com boas. Prticas de fabricao;
Livre para aves; sunos e pets;
(PROVA)
DIGESTO DA PROTENA EM MONOGSTRICO: A digesto da protena
acontece no estmago, nele liberado a gastrina pra dizer que chegou o
alimento. Assim, o estmago vai liberar HCL onde vai quebrar o
pepsinognio, tornando-o ativo por causa do PH cido do estmago. O
pepsinognio vai desnaturar/quebrar a protena e converter o pepsinognio
em pepsina. O HCL vai ser o responsvel para corrigir o PH do estmago
porque ele no aceita acidez baixa e com o PH corrigido, vai ser liberado as
enzimas onde elas vo degradar o resto dos alimentos, a pepsina vai ser
quebrada em aminocidos, dipeptdeo, tripeptdeo, polipeptdeos. Assim vai
comear o processo de absoro: Esse processo tem 3 estgios.
Passiva: sai do meio mais concentrado para o menos concentrado. No
gasta energia.
Ativa: vai depender de outro nutriente para ser absorvido. Depende do
sdio, tem gasto energtico.
Cotransportadores: Vai depender das protenas que ta dentro das clulas
dos entercitos que puxa aminocido, nutrientes para dentro de sua
clula.
OBS: Endopeptidases(trabalha pra dentro); Exodopeptidases(trabalha pra
fora).
OBS: Porque precisa as enzimas que vem do estomago e pncreas
to inativas e no intestino no? Pq tem que ta inativo se no elas se alto
digeriria. To inativa no pncreas a injeta no ID, a a medida q tem estimulo
por ao de outras enzimas ficam ativas e fazem a degradao da protena.
No intestino esto ativas pq elas j chegam prontas no intestino.
A hidrlise feita por ao de enzimas proteolticas.
DIGESTO DA PROTENA EM RUMINANTES: A protena verdadeira
consumida pode ser metabolizada no rmen seguindo dois caminhos: 1.
Sofrer protelise (quebra da cadeia protica de aminocidos) e
desaminao pelas enzimas microbianas, com formao de amnia e
esqueletos carbnicos de cadeia curta. 2. Escapar da degradao
microbiana e passar para o omaso e abomaso, atingido o intestino onde
sofrer digesto e seus aminocidos absorvidos.
- Na boca no ocorre nenhum tipo de processo enzimtico com as protenas.
No rmen, as bactrias liberam enzmas extracelulares quebrando as

ligaes peptdicas at as protenas se tornarem em cadeias menores e


aminocidos livres para ento absorv-los. As bactrias usam esses
aminocidos para sintetizar sua prpria protena microbiana, mas s quando
tem carboidratos suficiente na dieta para a bactria usar como fonte de
energia para esse processo. Quando no tem carboidrato suficiente, a
bactria faz o processo de desaminao que utilizar os aminocidos como
fonte de energia liberando assim amnia. Por isso importante balancear as
protenas e os carboidratos. Se tiver uria na dieta, ela ser quebrada pelas
bactrias ureolticas que iro pegar a amnia liberada juntar com o
esqueleto de carboidrato e sintetizar as protenas microbianas. Entra no
rmen protena verdadeira e uria, e sai protena microbiana e um pouco de
protena verdadeira. No abomaso a protena desnaturada e a pepsina
ativada em pepsinognio para quebrar as protenas. No intestino delgado
ocorre a liberao de enzimas (tripsina e quimiotripsina) que vo quebrando
as protenas restantes em tripeptdeos, dipeptdeos e AA livres, onde esses
aminocidos livres sero absorvidos pelas clulas entorcitas e cairo na
corrente sangunea indo para todas as partes do corpo que precisar.
QUADRO DIGESTO: Endopeptidases: pepsina (estomago-pepsinogenio),
tripsina
(pncreas-tripsinogenio),
quimotripsina
(pncreasquimotripsinogenio);
Exodopeptidases: Carboxipeptidases A, B (pncreas-procarboxipeptidase),
Aminopeptidase (intestino), Dipeptidase (intestino).
Ativador dessas enzimas a tripsina. Da pepsina hcl, pepsina e
enteroquinase. A digesto feita por ao das enzimas proteolticas.
DIGESTO RUMINANTES X MONOGASTRICO: A nica coisa que muda
o estmago. Pq o ruminante tem 4 compartimentos no estomago. No
rmen, retculo e omaso no secretam enzimas. O alimento chega no rmen
e os microorganismo quebram o alimento pra liberar AA. O microorganismo
consegue liberar AA livre. O AA vai pra dentro das bactrias, ele procria e se
transforma em varias. O AA livre vai fazer parte da estrutura da bactria, e
a bactria se alimenta dele. Uma parte do alimento vira corpo da bactria. A
protena no degradada no rmen ela escapa e vai pro intestino intacta. Os
microorganismos chegam no abomaso e no intestino como se fosse
qualquer alimento. Eles chegando no abomaso (estomago verdadeiro,
chegando nele a protena vai para o fgado), eles se desnaturam.
No caso do ruminante, antes de chegar onde secreta HCL, tem uma
digesto antes, vai ter uma digesto da protena antes dela chegar no
abomaso que o estomago verdadeiro.
*O que diferencia o monogstrico do ruminante o rmen reticulo e omaso,
pois ocorre a digesto microbiana. O AA livre vai fazer parte da estrutura da
bactria. E a bactria se alimenta dele.*
*(PROVA) ABSORO EM RUMINANTES:
-Os AAs livres e dipeptdeos so absorvidos pelas clulas epiteliais
intestinais, onde os dipeptdeos so hidrolisados a AA no citosol, antes de
entrarem no sistema porta.
-Apenas AA livres so encontrados na veia porta aps uma refeio
contendo protenas.
-Os AAs so metabolizados pelo fgado ou liberados na circulao geral.
*(PROVA) O que acontece entre o intestino e o fgado?
-O AA que chega ao fgado pode tomar 3 rotas. Virar albumina e ser
encaminhado para os demais tecidos, ser convertido a alfa cetocidos e
virar glicose (gliconeognese) ou corpos cetnicos, ou ainda ser deaminado.

-No fgado o aminocido que est em excesso ser desaminado. Ou seja, o


grupamento amino (NH3) separado do restante da cadeia carbnica do
aminocido.
-O grupamento amino no pode ser armazenado livre ento ser excretado
como uria. E o restante da molcula do aminocido vira energia no ciclo de
Krebs e pode acabar virando gordura (cido graxo) pela sntese de AG a
partir do Citrato.
- A uria produzida pelo fgado e transportada no sangue at os rins, para
excreo na urina.*
Caderno: Chegam um AA no fgado. Ele pode se juntar a outros AA e formar
uma albumina. Se ele perder o NH ele vai entrar no ciclo da uria. Ele
txico e te q ser encaminhado pra fora do corpo pela urina. O animal
comeu, digeriu e foi o AA parar no fgado, o AA qformou a albumina vai
embora pra o corpo todo (glndula mamarica). Se a necessidade de
albumina foi atendida vai sobrar AA e o grupamento NH vai formar a ureia
e encaminhada pra o rim e vai pela uria. O resto do AA pode formar
glicose, gordura, etc.
*(PROVA)OBS: Nitrognio no protico (NNP=uria)
S industrializado pq ele nitrognio que vem da atmosfera e a industria
captura e fixa ele numa molcula chamada uria. fornecida para o animal.
No rmen cheio de microorganismo, eles utiliza a uria para formar o seu
tecido (seu AA). S que ele vive em ambiente de pH cido. O fluxo do
alimento indo pro abomaso que tem o pH cido, a o monte de
microorganismo morre e vai vir enzimas do pncreas, do intestino e vai
fazer a desnaturao da protena e as enzimas do pncreas vo fazer o
resto do trabalho at formar os AA livres. A os AA vo para corrente
sanguinea e vo pro fgado e vo ser absorvidos.
Obs: Ureia s serve para ruminantes. A absoro igual em todas as
espcies, no intestino.
Formas de excreo de nitrognio:
- Peixes excretam o nitrognio do grupo amino atravs de suas guelras
como amnia,
-Humanos excretam o nitrognio do grupo amino como ureia. A ureia
formada no fgado pelo ciclo da ureia.
-Aves excretam o nitrognio do grupo amino numa forma semi-slida,
como cido rico,
OBS: Excesso de uria vai perder s dinheiro pq o animal vai perder no xixi.
Pra formar a uria vai precisar de gua se no vai formar cido rico.
Dependendo da qtidade de gua q tem no corpo pode formar uria, acido
rico ou amnia. Porque tem muito H livre da gua. A gente usa pouca gua
e o carbono da respirao e forma uria. Nas aves precisa economizar gua
pq a gua pesa, pq eles voam. Da eles so mais pobres em gua pq fazem
m 1 e 2 juntos. A formam cido rico.
FONTE NO PROTEICA (UREIA) CLEBER
Quando a uria alcana o rmen, ela rapidamente desdobrada em amnia
e CO2 => enzima urase (bactrias).
A amnia presente no rmen (pH 5,5 a 7), resultante da uria ou de uma
fonte protica, utilizada pelos microorganismos (ureolticos e proteolticos)
para sntese sua prpria protena.
essencial a presena de uma fonte de energia (celulose, amido, por
exemplo). A protena assim formada chamada de protena bacteriana.

Quando o bolo alimentar alcana o abomaso (pH 2 a 3) as bactrias so


destrudas e o seu contedo liberado. No abomaso e no intestino delgado
todas as fraes alimentares so digeridas.
A digesto da protena bacteriana nada mais do que sua quebra em
aminocidos, os quais sero absorvidos no intestino e novamente
transformados em protenas, agora pelo prprio animal.
A uria do prprio metabolismo do animal: uria endgena e sintetizada
no fgado.
Nesse processo, a amnia proveniente da degradao da protena ou da
uria, absorvida pela parede do rmen, alcana o fgado pela veia porta.
No fgado, a amnia convertida em uria. Parte dessa uria volta ao
rmen, parte vai para saliva e parte excretada pela urina. Esse processo
conhecido como ciclo da uria.
FUNES DA PROTENA
Estrutural: Formao dos tecidos: pele, plos, penas, unhas, chifres e
msculos.
Manuteno e reparo: Construo dos tecidos novos e renovao dos
mesmos
Fonte de energia: Excesso ou falta dos carboidratos e gordura.
Regulao do metabolismo: Secrees Glandulares: Hormnios e
enzimas so materiais proticos ou contm resduos de aminocidos pepsina e tripsina. Insulina (pelo menos 9 aminocidos). Tiroxina aminocido iodado. Adrenalina - substncia fundamental a tirosina.
Desintoxicao do organismo: cido benzico (txico) + glicina = cido
hiprico (atxico).
Sntese de outras substncias importantes para o metabolismo creatina.
Mecanismo de defesa: Anticorpos - imunoglobulinas.
Balano de fluidos: Manuteno equilbrio cido-base. A albumina srica
tem poder
tamponante neste sistema.
Gentica: Formao de nucleoprotenas.
Transporte: Hemoglobina, mioglobina e globulinas.
DIGESTO E ABSORO DE PROTENAS
Protenas _ aminocidos.
Pequenos peptdeos podem ser absorvidos nas vilosidades intestinais.
Protena no digerida = aparece na MS fecal, juntamente com as protenas
de origem microbiana e das enzimas utilizadas na digesto.
20% a 25% da protena ingerida so excretados.
QUALIDADE DAS PROTENAS: O valor de uma determinada protena
depende de seus aminocidos presentes nas substncias proticas. Da
deduz a importncia de se conhecer a qualidade das protenas que
comumente integram os alimentos utilizados.
Valor protico bruto: Protenas de um alimento estimadas quimicamente
a partir do seu contedo em N. PB = %N obtida x 6,25 (16/100). Processo
baseado em duas suposies:
1. Todas as protenas contm 16% de nitrognio;
2. Todo o nitrognio contido no alimento est na forma protica.
Suposies no so inteiramente corretas, por que:
-PTNs com diferentes teores de nitrognio: necessrio usar fatores de
converso . Na verdade o teor de nitrognio varia de 13% a 18%.

-Todo nitrognio presente no alimento vem da protena?... Outros compostos


nitrogenados no proticos (amidas, aminas, aminocidos livres, sais de
amnio, glicosdeos, alcalides, pigmentos, etc.). Sem problema - apenas
aminas e os aminocidos tm importncia quantitativa. Quantidade em um
n pequeno de alimentos de origem vegetal, consumidos mais
frequentemente por ruminantes.

2)DIGESTO NOS RUMINANTES


Classificados como animais de estmago composto, constitudo de 4
compartimentos: rmen, retculo, omaso e abomaso. Inicialmente so
considerados pr-ruminantes por terem uma digesto verdadeira que ocorre
no abomaso. Com o avano da idade e o fechamento da goteira esofgica
ocorre o desenvolvimento do rmen e reduo do abomaso, passando a
digesto a ser principalmente microbiana.

Ruminao: Inicialmente as forrageiras passam diretamente para o rmen


e o retculo. Estes compartimentos no secretam enzimas e suas paredes
so revestidas por mucosa contendo inmeras pregas. O retculo funciona
na movimentao do alimento ingerido para o rmen ou para o abomaso,
na regurgitao do alimento, e na expulso dos gases (eructao). O rmen
o principal compartimento do TGI e ocupa quase todo o lado esquerdo da
cavidade abdominal. Tm funo de cmara de armazenamento e de
fermentao. A ruminao consiste na regurgitao do alimento para
mastig-lo, o que permite aos ruminantes aproveitar melhor a energia dos
alimentos fibrosos.
PROVA:
* 1) pH Ruminal: variao de 5,5 a 7,2; Valores < 6,0: inibe bactrias que
degradam celulose e diminui a sntese de novos MicOrg;
2) Temperatura: variao de 38 a 410C, com mdia de 390C;*
Microrganismos Ruminais: Microrganismos: bactrias, protozorios e
fungos.
So seres anaerbios obrigatrios ou facultativos.
Em ruminantes recm-nascidos (adeso e colonizao): Bactrias do fludo
ruminal: em 38 horas aps nascimento; Fungos: dentro de 8 a 10 dias;
Protozorios: dentro de 12 a 20 dias.
Associao e Adeso dos MicOrgs ao alimento: Bactrias e PTZ : 5
minutos aps a ingesto se aderem as partculas;
Diviso das populaes de MO que interagem com partculas de
alimentos: Associados ao fludo ruminal; Levemente aderidos s partculas,
removidas por uma lavagem suave; fortemente aderidos s partculas,
permanecem retidas aps uma lavagem suave.
Responsveis por: 70 a 80% da massa microbiana; 80% da atividade de
endoglucanase; 70% da atividade de amilase; 75% da atividade de
protease; Maior parte da atividade de celulases e hemicelulases;
(PROVA) TIPOS DE BACTRIAS
a) Bactrias fermentadoras de carboidratos estruturais
(Celulolticas e Fibrolticas)
Fibrobacter succinogenes; Ruminococcus albus; Ruminococcus flavefaciens;
Produzem: acetato, propionato, butirato, succionato, formato, CO2 e H2. E
ainda etanol e lactato.
b) Bactrias fermentadoras de carboidratos no estruturais
(Amilolticas e Pectinolticas)
-Amido: fermentado principalmente por espcies do gnero Bacteroides.
Entre essas, Bacteroides amylophilus.
- Streptococcus bovis e Selenomonas ruminantium: fermentam amido e
acares solveis -> acetato.
- Amido e acares solveis -> produzem acetato, formato e etanol, ou
acetato e propionato quando concentrao de substrato prontamente
fermentvel decrescem (essas rotas metablicas ATP num ambiente
anaerbico).
- Lachnospira multiparus e Streptococcus bovis: fermentam pectina.
- Megasphaera elsdenii : fermentam acares, AA e lactato.

c) Bactrias Lipolticas
-Grupo que hidrolisa lipdeos no rmen no numeroso, pois o rmen
apresenta um potencial de xidorreduo muito baixo;
- Anaerovibrio lipolytica: hidrolisa lipdeos;
- Utilizam tb ribose, frutose, glicerol e lactato -> fermentados -> acetato,
propionato e CO2, e o glicerol vai a propionato e succinato.
d) Bactrias Proteolticas
- Peptostreptococcus sp; Clostridium aminophilum e Clostridium sticklandii:
fermentadoras estritas de aminocidos.
- No utilizam CHO como fonte de energia e desaminam aa em taxa 20 X
superiores a outras bact. Ruminais (Krause e Russell, 1996);
e) Bactrias Metanognicas
- Espcies: Methanobrevibacter sp., Methanosarcina sp., Methanomicrobium
sp., Methanobacterium sp.; - CH4: dreno de H2;
- Bovinos: 17 L de CH4/hora, perda de energia oriundo do alimento de at
12 % da energia bruta (Russell, 2002).
FUNGOS: Anaerbicos e colonizam as fibras presentes no rmen. A
colonizao pelos fungos ocorre principalmente nas regies mais
lignificadas das fibras como esclernquima e, comparado s bactrias, sua
atividade fibroltica mais intensa.
PROTOZORIOS: No contedo ruminal de animais alimentados com varios
tipos de dietas variam de 104 e 106 protozorios/mL de contedo ruminal
(40 a 60 % da massa microbiana total no rmen)

3)INTEGRAO METABLICA
Integrao e regulao do metabolismo: composta por rotas anablicas e
catablicas, que interagem nos diferentes rgos e tecidos em vias de
manuteno do organismo.
CARACTERSTICAS:
-As vias metablicas interagem entre si;
- Regulao enzimtica;
- Regulao hormonal: Sinais hormonais integram e coordenam as
atividades metablicas
- O ATP a moeda energtica da clula, gerada pelas reaes catablicas;
OBS: ATP gerado pela oxidao de molculas de alimento
As macromolculas da dieta so quebradas at suas unidades
fundamentais:
-Essas unidades so convertidas em um intermedirio comum: acetil-CoA;
- O acetil-CoA completamente oxidado a CO 2 no ciclo de Krebs e os
eltrons so transportados pelo NADH e FADH2 para a cadeia respiratria;
- Os eltrons so transferidos at o O2 formando H2O enquanto prtons so
bombeados para fora da matriz mitocondrial gerando um gradiente que
impulsiona a sntese de ATP.
(PROVA) ESTGIOS METABLICOS: A gerao de energia por degradao
de molculas complexas ocorre em trs estgios.
1 - Hidrlise das molculas complexas at seus blocos constitutivos.
2 - Converso dos blocos construtivos em acetil CoA.
3 - Oxidao do acetil Coa; fosforilao oxidativa.
- (Quadro): A dieta do animal de carne, gordura, carboidrato, etc. A dieta
nos fornece protena, gordura, carboidrato. Na digesto so as protenas so
quebrados em AA, carboidratos em polissacardeos, monossacardeos e as
gorduras em cidos graxos e glicerol. Isso est acontecendo na boca,
estmago e ID. A 1 clula que absorve essas substncias so os
entercitos, dentro da clula, tudo vai ser convertido em acetil CoA.
Independente do que ingerirmos, tudo vai se transformando em acetil CoA.
A acetil CoA entra no ciclo de Krebs, a l tem a cadeia transportadora de
eltrons que vai formar o ATP. Se no tem necessidade de ATP, essas
substncias se acumulam a vai engordar, quem sedentrio engorda por
isso. Se tiver necessidade de caminhar, tem mais drenos de ATP.
- Dois desses estgios ocorre dentro da clula e 1 fora.
O 1 acontece ao longo do trato digestivo: Acontece a digesto das
molculas complexas at seus blocos constituintes.
O 2 e 3 acontece dentro da clula. As substncias que vo ser convertidas
em acetil e o 3 do acetil at a formao de ATP.
(PROVA) PRINCIPAIS METABLITOS: que resultam dos microorganismos.
Glicose-6-fosfato: 1 produto do metabolismo da glicose.
Origens: - Digesto e absoro dos monossacardeos; - Glicogenlise:
quebra do glicognio;
- Gliconeognese: formao do novo glicognio a partir de uma protena.
Destinos: armazenamento como glicognio; formar gliclise = converso a
piruvato; converso para ribose-5-fosfato na via das pentoses-fosfato.
Piruvato: Origens: - gliclise (formao de energia?), quando falta O no
vai formar ATP, a vai transformar em lactato; - oxidao do lactato; oxidao de aminocidos;

Destinos: - carboxilao a oxaloacetato = gliconeognese; - descarboxilao


a acetil-CoA: convertido em acetil CoA, perdendo um carbono; - reduo a
lactato = fermentao lctica.
Acetil-CoA: Origens: - descarboxilao do piruvato; - b-oxidao de c.
graxos;
Destinos: - segue o ciclo de Krebs e pode voltar a formar gordura (isso se
sobrar acetil), pode virar corpos cetnicos (desordem metablicos);
oxidao a CO2 no ciclo de Krebs; - sntese de c. graxos; - converso a
HMG-CoA = sntese de corpos cetnicos ou colesterol.