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Lenidas Marques de Paula

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ioneida
4 meses atrs

raquel mariano
7 meses atrs

Thiago S alles, ACS at IBGE - Instituto Brasileiro de Geografia e Estatstica

8 meses atrs

Rafael Mendes at Lngua de Gato Banhos em Domiclio

9 meses atrs

Anglica De Paula Langame

11 meses atrs

Nazinha Bezerra
1 ano atrs

lanealbuquerque
1 ano atrs

Lucas Francisco
1 ano atrs

Apostila de imunologia
Document Transcript

1. APOSTILA DEIMUNOLOGIAESTAGIO OBRIGATORIO 7 PERIODO Profa: Las de Paula

2. INTRODUOA Imunologia o estudo das respostas do organismo que fornecem imunidade, ouseja,
proteo s doenas. Ainda que o sistema imune seja muito complexo, certoscomponentes do sistema
imune so facilmente detectados, como por exemplo, osanticorpos.O sistema imunolgico baseia-se nas
relaes Antgeno-Anticorpo.Antgenos (Ag) so substncias estranhas que induzem uma resposta imune
por causaruma produo de anticorpos e/ou linfcitos sensibilizados que reagemespecificamente com a
substncia; Imungeno.Anticorpo (Ac) - Protena do soro que foi induzida por e reage especificamente a
umasubstncia estranha (antgeno); Imunoglobulina.Todos os testes baseados em reaes Ag/Ac ou
dependem da formao de rede outeremos de encontrar forma de evidenciar a formao de complexos
Ag/Ac. Todos ostestes baseados em reaes Ag/Ac podem ser usados para detectar tanto o Ag ou
Ac.VDRL (Venereal Diseases Research Laboratory)PRINCPIO DE AOMetodologia: Reao de
floculao.A combinao de lecitina, colesterol e cardiolipina possui semelhana imunolgica
comantgenos de Treponema pallidum, consistindo em um antgeno no treponmico.A interao dos
anticorpos da amostra com este antgeno produz floculao que podeser detectada ao microscpio
ptico.AMOSTRAPreparo do PacienteColher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes
mdicas.Amostras utilizadasSoro ou lquido cefalorraquidiano (lmpido e isento de fragmentos de
cogulos). Noutilizar soros hemolisados ou lipmicos, pois podem produzir aglutinao inespecfica.A
amostra estvel por 05 dias entre 2 e 8 C. No preciso inativar o soro. recomendvel jejum de 8

horas antes da coleta de sangue.Estabilidade e armazenamento da amostraA amostra estvel por 05 dias
entre 2 e 8 C. No preciso inativar o soro.
3. COMPONENTES DO KITNmero 1 - Antgeno para VDRL em suspenso - conservar entre 2 e 8 C.
Nocongelar. Homogeneizar bem antes de usar. Contm:Cardiolipina 0,44 mol/L, lecitina 3,12 mol/L e
colesterol 23,2 mol/L em tampofosfato 10 mmol/L pH 6,0.Preparo do Reagente de TrabalhoO
Reagente N 1 pronto para o uso. Agit-lo antes da execuo do teste.ESTABILIDADE.Os reagentes
so estveis at a da data de validade impressa no rtulo quandoconservados de acordo com a
temperatura recomendada. Evitar a contaminao doproduto durante o uso para no afetar a sua
estabilidade.CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS1 - Somente para uso diagnstico in vitro;2 - O
Antgeno (Reagente N 1) e a amostra devem estar temperatura ambiente nomomento do uso;3 - No
congelar o reagente;4 - No utilizar plasma;5 - O descarte do material utilizado dever ser feito
obedecendo-se os critrios debiossegurana de acordo com a legislao vigente.6 - O reagente no deve
entrar em contato com materiais de borracha.LIMITAES DO MTODOEstima-se que 1 a 2% dos
pacientes com sfilis secundria apresentam VDRL negativoou fracamente positivo quando se utiliza o
soro no diludo. A positivao do examesomente ocorrer nas diluies maiores - efeito prozona.
Recomenda-se, portanto,testar todas as amostras sem diluir e diludas 1:10 com NaCl 0,85%.Pode
ocorrer resultado falso-positivo em certas patologias como: tuberculose,mononucleose infecciosa,
hansenase, hepatite, doenas do colgeno (lpuseritematoso, artrite reumatide), doenas auto-imunes,
malria e cncer.EQUIPAMENTOSTcnica Manual
4. Condies de Reao Lmina Escavada Microscpio Agitador rotativo Pipetas para medir amostras e
reagentes CronmetroPROCEDIMENTO DO TESTEProcedimento ManualEm um poo da placa
escavada, pipetar:Amostra sem diluir.........................50 LReagente N 1 ................. 1 gota (20
L)Em outro poo da placa escavada, pipetar:Amostra diluda 1:10*.........................50 LReagente N 1
...................... 1 gota (20 L)* Alm do teste sem diluio realizado tambm um teste com uma
diluio de 1:10com NaCl 0,85% (para todos os testes), a fim de evitar o efeito prozona. VideLimitaes
do Processo. (250ul de salina/25ul soro) Em seguida agitar manualmente com movimentos circulares ou
em um agitador por 4 minutos a 180 rpm. Em seguida, examinar no microscpio no aumento de 100 X
(ocular de 10x e objetiva de 10x).RESULTADOSPositivo - Reativo: ocorre floculao com formao de
grumos de tamanhos variveis.Suspenso de aspecto heterogneo. Neste caso, proceder a diluio da
amostra erealizar a prova semi-quantitativa.Negativo - No Reativo: ausncia de floculao, suspenso de
aspecto homogneo.
5. Positivo NegativoSIGNIFICADO CLNICOO mtodo indicado para teste de triagem. O diagnstico
final no deve ser baseadosomente no resultado laboratorial, devendo ser correlacionado com os sinais
esintomas do paciente.Pacientes com infeco sifiltica tratada podem apresentar resultados positivos
emttulos baixos (cicatriz sorolgica).O VDRL pode ser utilizado para acompanhar a teraputica, pela
rpida respostarepresentada pela queda de ttulos ou mesmo pela negativao e modificaes maislentas
ou mesmo inexistentes para os testes treponmicos.ASLO (Antiestreptolisina O)PRINCPIO DE
AOMetodologia: Ltex.Partculas de ltex revestidas com estreptolisina O purificadas e estabilizadas
mostramntida aglutinao quando misturadas, em uma rea do carto-teste, com um sorocontendo nveis
elevados de anticorpos antiestreptolisina.AMOSTRAPreparo do PacienteColher sangue pela manh aps
jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas.Amostras utilizadasUtilizar soro, sem prvia
diluio.Estabilidade e armazenamento da amostraA temperatura de armazenamento dever ser de 2 a 8
C.No congelar.Manter ao abrigo da luz e evitar umidade.COMPONENTES DO KIT
6. Nmero 1 - Ltex ASO - conservar entre 2 e 8 C. No congelar. Contm:Partculas de Ltex
sensibilizadas em suspenso.Nmero 2 - Controle Positivo - conservar entre 2 e 8 C. Contm:Soro com
concentrao > 200 UI/mL, Azida sdica 15,38 mmol/L.Nmero 3 - Controle Negativo - conservar entre
2 e 8 C. Contm:Soro com concentrao inferior a 100 UI/mL, Azida sdica 15,38 mmol/L.Os controles
positivo e negativo foram analisados para deteco de anticorpos anti HIVe antgeno HBs, com resultados
negativos. Entretanto, para maior segurana,considerar e manusear como Potencialmente
Infectantes.ESTABILIDADEOs reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo
quandoconservados entre 2-8 C. Deixar em temperatura ambiente antes de utilizar.Homogeneizar bem
antes de usar. No congelar. Evitar a contaminao do produtodurante o uso para no afetar a sua
estabilidade.CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS1 - Somente para uso diagnstico in vitro;2 Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos;3 - A gua utilizada na
limpeza do material deve ser recente e isenta de agentescontaminantes;4 - No congelar os reagentes;5 Usar sempre os reagentes do mesmo lote;6 - No utilizar soro lipmico. No utilizar soro hemolisado.
No utilizar plasma;7 - Manusear com cuidado os Reagentes No 2 e 3, pois contm Azida sdica;8 - Os
controles positivo e negativo so lquidos humanos e foram analisados paradeteco de anticorpos AntiHIV e Anti-HBs, com resultados negativos. Entretanto,para maior segurana, considerar e manusear

como Potencialmente Infectantes;9 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os
critrios debiossegurana de acordo com a legislao vigente.EQUIPAMENTOSTcnica Manual Lamina
ou placa de fundo escuro Esptulas Pipetas para medir amostras e reagentes
CronmetroPROCEDIMENTO
7. Procedimento ManualEm cada crculo da placa colocar: Crculo N 1 Crculo N 2 Crculo N
3Controle negativo 25L ---- ----Controle positivo ---- 25L ----Soro ---- ---- 25LBIO - LTEX ASO
25L 25L25L(previamente homogeneizado) Homogeneizar com o auxlio de uma esptula utilizando
toda a extenso de cada crculo da lmina. Logo aps, agitar a lmina com movimentos circulares por
dois minutos. Efetuar a leitura com uma luz artificial, utilizando um fundo escuro para facilitar a
interpretao do teste. Uma aglutinao clara indica a presena de Anti-estrepitolisina O numa
concentrao igual ou superior a 200 UI/mL. Neste caso, realizar a prova semi quantitativa.PROVA SEMI
QUANTITATIVA1 - Realizar diluies da amostra com salina, a partir da amostra inicial (1:2, 1:4,
1:8,1:16, etc);2 - Seguir o processo descrito na prova qualitativa para cada uma das diluies.Ser
considerado como ttulo, a maior diluio do soro que apresentar aglutinao.RESULTADOSPOSITIVO:
Ntida aglutinao.NEGATIVO: Ausncia de aglutinao (suspenso homognea).CLCULOSOs valores
sero expressos em UI/mL.Amostra Concentrao UI/mLSem diluio.................................200
1:2............................................400 1:4............................................800
1:8............................................1600O resultado pode ser expresso em ttulo ou em UI/mL.UI/mL =
200 x ttulo da ltima diluio (n da diluio).Teste negativo: expressar o resultado como negativo ou
menor que 200 UI/mL.Unidade de Medida: UI/MLVALORES DE REFERNCIAAt 200 UI/mLEstes
valores devem ser usados como orientao, sendo que cada laboratrio devercriar sua faixa de valores
de referncia, de acordo com a populao atendida.
8. SIGNIFICADO CLNICOA Estreptolisina O uma exoenzima imunognica txica produzida por
muitosestreptococos -hemolticos do grupo A. Tendo em conta a grande quantidade deexoenzimas
liberadas in vivo, a determinao da resposta dos anticorpos frente presena de Estreptolisina O
converteu- se em um procedimento rotineiro para odiagnstico e tratamento da febre reumtica,
glomerulonefrite aguda, escarlatina,amigdalite, erisipela, sepsis puerperal e outras infeces
estreptoccicas do grupo A.LIMITAES DO MTODONo utilizar plasma, soros hemolisados ou
lipmicos, pois podem produziraglutinao inespecfica.Ao correlacionar mtodos para determinao da
Antiestreptolisina O, verificar asensibilidade dos reagentes.Os resultados obtidos s devem ser
comparados quando expressos em UI/mL.FATOR REUMATIDE (FR / LTEX)PRINCPIO DE
AOMetodologia: Ltex.Quando a suspenso de ltex misturada em uma rea do carto-teste com
sorocontendo nveis aumentados de fator reumatide, observa-se uma aglutinao ntidano perodo
mximo de minutos. A aglutinao visvel em amostra com concentraoigual ou superior a 8 UI/mL,
de acordo com as referncias estabelecidas pelos PadresInternacionais da OMS.AMOSTRAPreparo do
PacienteColher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes mdicas.Amostras
utilizadasUtilizar soro, sem prvia diluio.Estabilidade e armazenamento da amostraA temperatura de
armazenamento dever ser de 2 a 8 C.No congelar.Manter ao abrigo da luz e evitar
umidade.COMPONENTES DO KITNmero 1 - Ltex FR - conservar entre 2 e 8 C. No congelar.
Contm:Partculas de Ltex sensibilizadas em suspenso.Nmero 2 - Controle Positivo - conservar entre
2 e 8 C. Contm:Soro com concentrao igual ou superior a 8 UI/mL, Azida sdica 15,38
mmol/L.Nmero 3 - Controle Negativo - conservar entre 2 e 8 C. Contm:
9. Soro com concentrao inferior a 8 UI/mL, Azida sdica 15,38 mmol/L.Os controles positivo e
negativo foram analisados para deteco de anticorpos anti HIVe antgeno HBs, com resultados negativos.
Entretanto, para maior segurana,considerar e manusear como Potencialmente
Infectantes.ESTABILIDADEOs reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo
quandoconservados de acordo com a temperatura recomendada. Evitar a contaminao doproduto
durante o uso para no afetar a sua estabilidade.CUIDADOS E PRECAUES1 - Somente para uso
diagnstico in vitro;2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos;3 - A
gua utilizada na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentescontaminantes;4 - No congelar
os reagentes;5 - Usar sempre os reagentes do mesmo lote;6 - No utilizar soro lipmico. No utilizar soro
hemolisado. No utilizar plasma;7 - Manusear com cuidado os Reagentes No 2 e 3, pois contm Azida
sdica;8 - Os controles positivo e negativo so lquidos humanos e foram analisados paradeteco de
anticorpos Anti HIV e AntiHBs, com resultados negativos. Entretanto, paramaior segurana, considerar e
manusear como Potencialmente Infectantes;9 - O descarte do material utilizado dever ser feito
obedecendo-se os critrios debiossegurana de acordo com a legislao
vigente.EQUIPAMENTOSTcnica Manual Lamina ou placa de fundo escuro Esptulas Pipetas para medir
amostras e reagentes CronmetroPROCEDIMENTOProcedimento ManualEm cada crculo da placa
colocar: Crculo N 1 Crculo N 2 Crculo N 3Controle negativo 25L ---- ----Controle positivo ---25L ----Soro ---- ---- 25LBIO - LTEX FR 25L 25L25L(previamente homogeneizado)

Homogeneizar com o auxlio de uma esptula utilizando toda a extenso de cada crculo da lmina.
10. Logo aps, agitar a lmina com movimentos circulares por dois minutos. Efetuar a leitura com uma
luz artificial, utilizando um fundo escuro para facilitar a interpretao do teste. Uma aglutinao clara
indica a presena de Fator Reumatide numa concentrao igual ou superior a 8 UI/mL. Neste caso,
realizar a prova semi quantitativa.PROVA SEMI QUANTITATIVA1 - Realizar diluies da amostra com
salina, a partir da amostra inicial (1:2, 1:4, 1:8,1:16, 1:32, etc);2 - Seguir o processo descrito na prova
qualitativa para cada uma das diluies.Ser considerado como ttulo, a maior diluio do soro que
apresentar aglutinao.RESULTADOSPOSITIVO: Ntida aglutinao.NEGATIVO: Ausncia de
aglutinao (suspenso homognea).CLCULOSOs valores sero expressos em UI/mL.Amostra
Concentrao UI/mLSem diluio...................................8 1:2............................................ 16
1:4............................................ 32 1:8............................................ 64
1:16............................................128O resultado pode ser expresso em ttulo ou em UI/mL.UI/mL = 8
x ttulo da ltima diluio (n da diluio).Teste negativo: expressar o resultado como negativo ou menor
que 8 UI/mL.VALOR DE REFERNCIAAt 8 UI/Ml.Estes valores devem ser usados como orientao,
sendo que cada laboratrio devercriar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a populao
atendida.SIGNIFICADO CLNICOFator Reumatide refere-se a um grupo de macroglobulinas
(antiglobulinas) quereagem com o fragmento Fc das Imunoglobulinas IgG. Na artrite reumatide o
achadodo Fator Reumatide representa o dado sorolgico mais importante, presente emcerca de 75% dos
pacientes. O seu nvel plasmtico pode estar significativamenteaumentado na velhice, doenas do tecido
conjuntivo, hepatopatias crnicas, sfilis,tuberculose, hansenase, endocardite bacteriana mononucleose,
sarcoidose, calazar,rubola, neoplasias, infestaes parasitrias, transfuses de sangue, transplante
renal,sndrome de Sjgren.LIMITAES DO MTODONo utilizar plasma, soros hemolisados ou
lipmicos, pois podem produziraglutinao inespecfica.
11. Ao correlacionar mtodos para determinao do Fator Reumatide, verificar asensibilidade dos
reagentes.Os resultados obtidos s devem ser comparados quando expressos em UI/mL.PROTENA C
REATIVA- PCRPRINCPIO DE AOMetodologia: Ltex.O mtodo fundamenta-se em uma reao de
aglutinao de partculas de ltexrecobertas com Gama-globulinaanti-PCR, especialmente tratadas para
evitaraglutinaes inespecficas. A aglutinao visvel em amostra com concentrao dePCR igual ou
superior a 6,5 mg/L, de acordo com as referncias estabelecidas pelosPadres Internacionais da
OMS.AMOSTRAPreparo do PacienteColher sangue pela manh aps jejum de 8 horas, salvo orientaes
mdicas.Amostras utilizadasUtilizar soro, sem prvia diluio.Estabilidade e armazenamento da amostraO
analito estvel por 2 dias entre 2 e 8 C.COMPONENTES DO KITNmero 1 - Ltex PCR - conservar
entre 2 e 8 C. No congelar. Contm: partculas deltex sensibilizadas em suspenso.Nmero 2 Controle Positivo - Conservar entre 2 e 8 C. Contm: soro comconcentrao igual ou superior a 6,5
mg/L, Azida sdica 15,38 mmol/L.Nmero 3 - Controle Negativo - Conservar entre 2 e 8 C. Contm:
soro comconcentrao inferior a 6,5 mg/L, Azida sdica 15,38 mmol/L.Os controles positivo e negativo
foram analisados para deteco de anticorpos anti HIVe antgeno HBs, com resultados negativos.
Entretanto, para maior segurana,considerar e manusear como Potencialmente
Infectantes.ESTABILIDADEOs reagentes so estveis at a da data de validade impressa no rtulo
quandoconservados de acordo com a temperatura recomendada. Evitar a contaminao doproduto
durante o uso para no afetar a sua estabilidade.CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS1 - Somente
para uso diagnstico in vitro;
12. 2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obteno de resultados exatos;3 - A gua utilizada
na limpeza do material deve ser recente e isenta de agentescontaminantes;4 - No congelar os reagentes;5
- Usar sempre os reagentes do mesmo lote;6 - No utilizar soro lipmico. No utilizar soro hemolisado.
No utilizar plasma;7 - Manusear com cuidado os Reagentes No 2 e 3, pois contm Azida sdica;8 - Os
controles positivo e negativo so lquidos humanos e foram analisados paradeteco de anticorpos Anti
HIV e AntiHBs, com resultados negativos. Entretanto, paramaior segurana , considerar e manusear
como Potencialmente Infectantes;9 - O descarte do material utilizado dever ser feito obedecendo-se os
critrios debiossegurana de acordo com a legislao vigente.EQUIPAMENTOSTcnica Manual Lmina
ou placa de fundo escuro Esptulas Pipetas para medir amostras e reagentes
CronmetroPROCEDIMENTOProcedimento ManualEm cada crculo da placa colocar: Crculo N 1
Crculo N 2 Crculo N 3Controle negativo 25L --- ---Controle positivo --- 25L ---Soro --- --25LBIO - LTEX PCR 25L 25L25L(previamente homogeneizado) Homogeneizar com o auxlio de
uma esptula utilizando toda a extenso de cada crculo da lmina. Logo aps, agitar a lmina com
movimentos circulares por dois minutos. Efetuar a leitura com uma luz artificial, utilizando um fundo
escuro para facilitar a interpretao do teste. Uma aglutinao clara indica a presena de Protena C
Reativa numa concentrao igual ou superior a 6,5 mg/L. Neste caso, realizar a prova semi
quantitativa.PROVA SEMI QUANTITATIVA1 - Realizar diluies da amostra com salina, a partir da
amostra inicial (1:2, 1:4, 1:8,1:16, 1:32 etc);2 - Seguir o processo descrito na prova qualitativa para cada

uma das diluies.Ser considerado como ttulo a maior diluio do soro que apresentar aglutinao.
13. RESULTADOSPOSITIVO: Ntida aglutinao.NEGATIVO: Ausncia de aglutinao (suspenso
homognea).CLCULOSOs valores sero expressos em mg/L. Amostra Concentrao mg/LSem
diluio............................6,5 1:2.......................................13 1:4.......................................26
1:8.......................................52 1:16.....................................104 1:32.....................................208O
resultado pode ser expresso em ttulo ou em mg/L.mg/L = 6,5 x ttulo da ltima diluio (n da
diluio).Teste negativo: expressar o resultado como negativo ou menor que 6,5 mg/L.Unidade de
Medida: mg/LVALORES DE REFERNCIAAt 6,5 mg/LEstes valores devem ser usados como
orientao, sendo que cada laboratrio devercriar sua faixa de valores de referncia, de acordo com a
populao atendida.SIGNIFICADO CLNICOA Protena C Reativa um til indicador de processo
inflamatrio em atividade, querseja de origem infecciosa (pneumonia, tuberculose) ou no infecciosa
(febre reumticaem atividade, artrite reumatide, lpus eritematoso). Est presente tambm, emvrias
outras condies patolgicas como no infarto agudo do miocrdio, doenasneoplsicas, trauma intenso,
viroses, queimaduras. A determinao de suaconcentrao plasmtica constitui um teste eficaz no
acompanhamento da teraputicautilizada e prognstico das inflamaes.LIMITAES DO MTODONo
utilizar plasma, soros hemolisados ou lipmicos, pois podem produziraglutinao inespecfica.Ao
correlacionar mtodos para determinao da Protena C Reativa, verificar asensibilidade dos reagentes. Os
resultados obtidos s devem ser comparados quandoexpressos em mg/L.BETA-hCG
ImunocromatografiaPRINCPIO DO TESTE
14. O teste -hCG um teste imunocromatogrfico rpido, para deteco qualitativa deGonadotrofina
Corinica Humana (-hCG) em amostras de urina ou soro humano,indicado para o diagnstico precoce
da gravidez.AMOSTRAPreparo do PacientePode ser utilizada uma amostra colhida a qualquer hora do
dia. Entretanto prefervelusar a primeira amostra da manh, que contm concentrao mais elevada de
hCG.Usar recipientes limpos e secos, que no contenham traos de detergente ou sabo.Centrifugar ou
filtrar toda urina turva.Amostras utilizadasUrina e/ou soro.O teste deve ser executado o mais rpido
possvel, de preferncia nas primeiras 24horas aps a coleta. Para anlises tardias, armazenar a amostra a
2-8C por no mximo72 horas.Estabilidade e armazenamento da amostraO hCG estvel na urina por 2
dias entre 2-8 C ou at um ms na amostra congelada.COMPONENTES DO KITTiras
reagentesMATERIAIS NECESSRIOS E NO FORNECIDOSRecipiente para coleta da
amostracronmetroCUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS- No comer ou fumar durante a
manipulao das amostras.- Calar luvas de proteo durante a manipulao das amostras.- Lavar as
mos aps o procedimento.- Evitar respingos ou formao de aerossol.- Descontaminar e descartar todas
as amostras, componentes do kit de reao emateriais potencialmente contaminados, como se fossem lixo
contaminado, em umrecipiente apropriado.- No usar o kit de testes se a embalagem estiver danificada ou
o selo violado.- Todas as amostras devem ser tratadas como potencialmente contaminadas.- Somente
abrir a embalagem da tira reagente na hora de sua utilizao.- Executar o teste imediatamente aps retirar
a tira reagente da bolsa de alumnio.- No reutilizar a tira reagente.- Se for utilizar amostras refrigeradas
ou congeladas, deixar que as amostras atinjam atemperatura ambiente antes de iniciar os procedimentos.
15. - Recomenda-se deixar as amostras a temperatura ambiente por 20 a 30 minutos antesde realizar o
teste. Homogeneizar a amostra.- No misturar os componentes do kit, no utilizar nmeros de lotes
diferentes.- O teste foi desenvolvido para ser conservado a uma temperatura entre 15 -30oC (no
recomendado o armazenamento deste produto em refrigerador).LIMITAES DA METODOLOGIA1Nos resultados duvidosos deve-se repetir o teste com nova amostra de urina,colhida 3 a 5 dias aps a
coleta anterior.2- Em caso de gravidez extra-uterina, toxemia, morte fetal ou ameaa de aborto, aexcreo
de hCG frequentemente diminuda. Essas condies podem levar a umresultado falso negativo.3- Na
gravidez precoce com muito baixa concentrao de -hCG o resultado pode sernegativo. Neste caso, o
teste deve ser repetido em uma nova amostra colhida aps 48horas.4- Como nveis elevados de -hCG
so tambm encontrados em doenas trofoblsticasgestacional e no-gestacional (mola hidatiforme,
coriocarcinoma e neoplasma notrofoblstico), o diagnstico de gravidez deve ser confirmado aps
afastar estaspatologias.5- Nveis elevados de -hCG podem permanecer detectveis por vrias semanas
apsparto normal, cesrea e aborto espontneo ou teraputico.6- Amostras de urina que no sejam a
primeira da manh podem no conter umaconcentrao suficiente de -hCG para positivar o teste. Desta
forma, um resultadonegativo, onde ainda suspeita-se do diagnstico da gravidez, deve ser confirmado
comuma nova amostra da primeira urina da manh.7- Se a amostra de urina estiver diluda devido ao uso
de diurticos ou ingestoexcessiva de gua, os nveis de hCG decrescem artificialmente e podem no
serdetectados. Se a gravidez ainda suspeita, o teste deve ser repetido com a primeiraurina alguns dias
depois.8- Como em qualquer procedimento diagnstico, o resultado deste teste deve sersempre
interpretado com outras informaes clnicas disponveis.9- Urina de mulheres em tratamento com certos
medicamentos podem dar falsosresultados positivos ou negativos.PROCEDIMENTO DO TESTEAmostra
de urina: 1. Coletar a urina em qualquer recipiente limpo e seco. 2. Remover a tira reagente do envelope

tocando apenas na parte escrita hCG; 3. Colocar cuidadosamente a tira no coletor de plstico contendo a
urina. Segurar a tira na posio vertical durante 10-20 segundos. 4. Respeitar o limite mximo da tira
indicado pela seta. 5. Remover a tira reagente de dentro da amostra e coloc-la em uma superfcie plana e
seca. Aguardar o resultado.
16. 6. Interpretar o resultado do teste em at 5 minutos. No interpretar o resultado aps 5 minutos.
Qualquer reao que ocorra na tira aps 5 minutos no deve ser considerada.Amostra de soro: 1. Coletar
e preparar a amostra seguindo as normas de Biossegurana locais. 2. Separar uma alquota do soro (1ml)
e transferir para um tubo de ensaio limpo e seco. 3. Colocar cuidadosamente a tira na amostra. Segurar a
tira na posio vertical durante 10-20 segundos. 4. Respeitar o limite mximo da tira indicado pela seta. 5.
Remover a tira reagente de dentro da amostra e coloc-la em uma superfcie plana e seca. Aguardar o
resultado. 6. Interpretar o resultado do teste em at 5 minutos. No interpretar o resultado aps 5
minutos. Qualquer reao que ocorra na tira aps 5 minutos no deve ser
considerada.RESULTADOSNEGATIVO: quando aparecer somente uma linha colorida na janela de
resultados: aLinha Controle C. Como indicado na ilustrao a seguir, esta linha deve
aparecersempre.POSITIVO: Quando aparecer duas linhas coloridas na janela de resultados: a
linhaControle C e a Linha Teste T como indicado na ilustrao a seguir.INVLIDO: Quando
nenhuma linha aparecer na janela de resultados dentro de 5minutos; ou quando a Linha Controle C no
aparecer na janela de resultados dentro de5 minutos (conforme ilustrado abaixo). Neste caso, considere o
teste invlido. Repetiro teste com uma nova tira.INTERFERNCIASAs seguintes substncias podem
provocar interferncias nos resultados:
17. Acetaminofeno 20mg/dLcido acetilsaliclico 20mg/ dLcido ascrbico 20mg/ dLAtropina 20mg/
dLBilirrubina (no soro) 40mg/ dLTriglicrides (no soro) 1200mg/ dLCafena 20mg/ dLcido Gentsico
20mg/ dLGlicose 2g/ dLHemoglobina 1mg/ dLBilirrubina 2mg/ dLSIGNIFICADO CLNICOA
gonadotrofina corinica humana (hCG) um hormnio glicoprotico produzido pelaplacenta durante a
gravidez.Homens sadios e mulheres sadias no-grvidas no possuem nveis de
hCGdetectveis.Normalmente, encontra-se presente no soro e urina de mulheres grvidas aps ostimo
dia da concepo.O hCG secretado 6 a 8 dias aps a concepo, aumentando rapidamente at um
picode 50.000 a 200.000 mUI/mL na 6 a 8 semana. A partir de ento, sua concentraocomea a cair,
atingindo aps a 20 semana, um plateau de 5.000 a 20.000 mUI/mLpara o restante da gravidez.Aps o
parto, o nvel de hCG cai rapidamente e geralmente volta ao normal dentro dealguns dias.Alm da
gravidez, valores altos de hCG podem ser encontrados em enfermidadestrofoblsticas de origem
gestacional e no gestacional (Mola Hidatiforme). Essassituaes devem ser identificadas antes de se
fazer o diagnstico de uma gravidez.FENOTIPAGEM ABOPRINCPIO DO TESTEDetectar a presena
ou a ausncia dos antgenos A e B nas hemcias. A prova direta sebaseia na aglutinao das hemcias da
amostra em teste em presena de anti-sorosconhecidos contendo anticorpos Anti-A e AntiB.AMOSTRANo necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para a coleta dasamostras
de sangue. Para melhores resultados utilizar, de preferncia, amostrasrecentemente colhidas ou em
conformidade com os critrios locais de aceitao deamostras. As amostras de sangue devem ser
anticoaguladas com Citrato EDTA ou CPD-A.COMPONENTES DO KITConservar entre 2-8 C.
18. Anticorpos monoclonais, prontos pra uso, em frascos de 10ml- Soro anti-A- Soro anti-BMATERIAIS
Tubos para suspenso Suporte para tubos Pipetas Centrifuga de tubosESTABILIDADEOs reativos so
estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo doproduto e na caixa quando
conservados entre 2-8 C. Manter os frascos bem vedadosna temperatura recomendada e evitar a
contaminao durante o uso.CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS- Os reagentes no podem ser
congelados, pois o congelamento promove a liberaodo anticorpo.- No trocar as tampas dos frascos.Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostrabiolgica.Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para a execuo doteste.- De acordo
com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem sermanuseadas como materiais
potencialmente infectantes.- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues
normativas locais,estaduais e federais de preservao do meio ambiente.- Recomendamos o uso de
equipamentos de proteo individual (EPI) como avental,culos de segurana, luvas descartveis e outros
que se fizerem necessrios para arealizao do teste.- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de
reagentes, amostra ou qualqueroutra substncia.LIMITAES Reaes fracas podem ocorrer quando:
recm-nascidos que no tenham antgenos A ou B bem expressos; nas leucemias e outras doenas
malignas; pacientes recentemente transfundidos e deteco fraca das variantes A ou B que requerem
leitura microscpica. Na presena de crioaglutininas, lavar os eritrcitos de 4 a 6 vezes com soluo
fisiolgica a 0,85% aquecida a 37oC, para permanecer somente os caracteres ABO. O antgeno B pode
ser ocasionalmente adquirido em pacientes do grupo A, devido deacetilao do antgeno A por enzimas
bacterianas, particularmente associadas com infeco intestinal. Estes pacientes sero AB com a presena
de anti-B no sangue. A reduo do pH do sangue para 6.0 reduzir ou eliminar o antgeno B adquirido.

19. Em algumas patologias comum a formao de aglutinao das hemcias observadas microscopia.
Esta anormalidade causada por alteraes na superfcie das clulas. Este fenmeno habitualmente
encontrado em hiperproteinemias tais como Mieloma Mltiplo, Macroglobulenemia de Waldenstrom,
Sndrome de Hiperviscosidade e Cirrose. Resultados falso-positivo ou reaes fracamente positivas
podem ocorrer com amostras de sangue de subgrupos A e B ou aps estocagem prolongada. Variveis
relativas ao procedimento tcnico, tais como: tcnica; suspenses muito concentradas ou diludas;
centrifugaes ou incubaes inadequadas; amostra e salina contaminadas ou vidraria suja podem causar
falsas reaes positivas ou negativas.PROCEDIMENTO DO TESTEPREPARAO DAS AMOSTRAS
DE SANGUEPreparar a suspenso de hemcias a 5% em suspenso salina isotnica com a
seguintetcnica: 1- Dispensar 1 mL de salina isotnica no tubo de suspenso. 2- Pipetar 50 L de
concentrado de hemcias e homogeneizarPROCEDIMENTOSTeste em tubo 1- Identificar 2 tubos: um
com o A e outro com o B (alm do nmero do paciente). 2- Pipetar 50 L (1 gota) da suspenso de
hemcias a 5 % em cada tubo. 3- Pipetar 50 L (1 gota) do Anti-A e 50 L (1 gota) do Anti-B nos
respectivos tubos. 4- Homogeneizar. 5- Centrifugar por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400
rpm. 6- Ressuspender suavemente as suspenses de hemcias e observar a aglutinao
macroscpica.RESULTADOS:a) PrincpioPositivo: excluindo-se as limitaes do teste (vide a seguir), a
aglutinao doseritrcitos pelo reagente indica a presena de antgeno correspondente.Negativo:
excluindo-se todas as limitaes do teste, a ausncia de aglutinao doseritrcitos pelo reagente indica a
ausncia de antgeno correspondente.b) Reaes para grupos ABO
20. Anti- A Anti- B Grupo Sanguneo + negativo A negativo + B + + AB negativo negativo OReaes
fracas podem indicar a presena de subgrupos de A (ABO1) ou B (ABO2), oque requer procedimentos
adicionais. Para uma interpretao correta, deve-se fazeruma fenotipagem completa (prova direta com
anti-A, anti-B e prova reversa comhemcias A1, A2, B e O).TIPAGEM REVERSAEnquanto a tipagem
direta do grupo sanguneo ABO (descrito acima) realizado comhemcias do paciente suspensas em
soluo fisiolgica contra soros comerciais (anti-A,anti-B e anti-AB); a TIPAGEM REVERSA utiliza o
soro ou plasma do paciente contrahemcias fenotipadas A1 e B (comerciais). Alm destas duas hemcias
A1 e B, o serviopoder utilizar hemcias A2 e O (comerciais).AMOSTRANo necessrio nenhum
preparo prvio do doador ou paciente para a coleta dasamostras de sangue. Para melhores resultados
utilizar, de preferncia, amostrasrecentemente colhidas ou em conformidade com os critrios locais de
aceitao deamostras. As amostras de sangue podem ser colhidas com anticoagulantes (CitratoEDTA ou
CPD-A) ou sem anticoagulante.COMPONENTES DO KITConservar entre 2-8 C.Hemcias fenotipadas,
prontas para uso, em frascos de 10ml- Hemcias A1- Hemcias BMATERIAIS Tubos para suspenso
Suporte para tubos Pipetas Centrifuga de tubosESTABILIDADEOs reativos so estveis at o vencimento
da data de validade impressa no rtulo doproduto e na caixa quando conservados entre 2-8 C. Manter os
frascos bem vedadosna temperatura recomendada e evitar a contaminao durante o uso.
21. CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS- Os reagentes no podem ser congelados, pois o
congelamento promove a lise dashemcias.- No trocar as tampas dos frascos.- Aplicar os cuidados
habituais de segurana na manipulao dos reagentes e amostrabiolgica.- Recomendamos o uso das Boas
Prticas em Laboratrio Clnico para a execuo doteste.- De acordo com as instrues de
biossegurana, todas as amostras devem sermanuseadas como materiais potencialmente infectantes.Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues normativas locais,estaduais e federais
de preservao do meio ambiente.- Recomendamos o uso de equipamentos de proteo individual (EPI)
como avental,culos de segurana, luvas descartveis e outros que se fizerem necessrios para
arealizao do teste.- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de reagentes, amostra ou
qualqueroutra substncia.PROCEDIMENTOSTeste em tubo 1. Identificar 2 tubos: um com o A1 e outro
com o B (alm do nmero do paciente). 2. Pipetar 100 L do plasma do paciente em cada tubo. 3.
Pipetar 50 L (1 gota) da hemcia A1 e 50 L (1 gota) da hemcia B nos respectivos tubos. 4.
Homogeneizar. 5. Centrifugar por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400 rpm. 6. Ressuspender
suavemente as suspenses de hemcias e observar a aglutinao macroscpica.RESULTADOS:a)
PrincpioPositivo- presena de aglutinaoNegativo- ausncia de aglutinao A1 B Grupo Sanguneo
negativo + A + negativo B + + O negativo negativo ABFENOTIPAGEM RhDPRINCPIO DO TESTE
22. A fenotipagemRhD se baseia na aglutinao das hemcias da amostra em teste empresena de antisoroanti-DAMOSTRANo necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para a coleta
dasamostras de sangue. Para melhores resultados utilizar, de preferncia, amostrasrecentemente colhidas
ou em conformidade com os critrios locais de aceitao deamostras. As amostras de sangue devem ser
anticoaguladas com Citrato EDTA ou CPD-A.COMPONENTES DO KITConservar entre 2-8
C.Anticorpos monoclonais, prontos pra uso, em frascos de 10ml- Soro anti-D- Soro controle
RhMATERIAIS Tubos para suspenso Suporte para tubos Pipetas Centrifuga de
tubosESTABILIDADEOs reativos so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo
doproduto e na caixa quando conservados entre 2-8 C. Manter os frascos bem vedadosna temperatura

recomendada e evitar a contaminao durante o uso.CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS- Os

reagentes no podem ser congelados, pois o congelamento promove a liberaodo anticorpo.- No trocar
as tampas dos frascos.- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e
amostrabiolgica.- Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para a execuo
doteste.- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem sermanuseadas como
materiais potencialmente infectantes.- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues
normativas locais,estaduais e federais de preservao do meio ambiente.- Recomendamos o uso de
equipamentos de proteo individual (EPI) como avental,culos de segurana, luvas descartveis e outros
que se fizerem necessrios para arealizao do teste.- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de
reagentes, amostra ou qualqueroutra substncia.PROCEDIMENTOS
23. Teste em tubo 1- Identificar 2 tubos: 1 para o anti-soroanti-D e 1 para o soro controle-Rh e com o
nmero do paciente; 2- Adicione 1 gota da suspenso de hemcias a 5% da amostra a cada um dos
tubos; 3- Coloque 1 gota do anti-soroanti-D no tubo D e 1 gota do soro controle Rh no tubo Rh e
homogeneze; 4- Centrifugue os tubos por 1 minuto a 1000 rpm ou 20 segundos a 3400 rpm. 5- Agitar
suavemente os tubos para pesquisar ou no a presena de aglutinao.Observao: Se houver aglutinao
no controle Rh o resultado da fenotipagemestar INVLIDO. A reao com controle Rh deve ser sempre
NEGATIVA.RESULTADOS Anti-D Controle Rh Interpretao + ou - + Resultado invlido + negativo
RhD Positivo negativo negativo Determinar D fracoDETERMINAO DO D FRACOPRINCPIO DO
TESTEO antgeno D fraco determinado atravs do teste indireto da antiglobulina humana(AGH). O teste
indireto da AGH para a determinao do antgeno D fraco se baseia naaglutinao de hemcias
sensibilizadas com anticorpos anti-D, em presena de soroantiglobulina humano.AMOSTRANo
necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente para a coleta dasamostras de sangue. Para
melhores resultados utilizar, de preferncia, amostrasrecentemente colhidas ou em conformidade com os
critrios locais de aceitao deamostras. As amostras de sangue devem ser anticoaguladas com Citrato
EDTA ou CPD-A.COMPONENTES DO KITConservar entre 2-8 C.- Soro anti-IgG (soro de Coombs)O
produto fornecido em frascos de 10 ml acompanhados de conta-gotas. Cada gotaequivale a 50l.
24. MATERIAIS Tubos para suspenso Suporte para tubos Pipetas Centrifuga de
tubosESTABILIDADEOs reativos so estveis at o vencimento da data de validade impressa no rtulo
doproduto e na caixa quando conservados entre 2-8 C. Manter os frascos bem vedadosna temperatura
recomendada e evitar a contaminao durante o uso.CUIDADOS E PRECAUES ESPECIAIS- Os
reagentes no podem ser congelados, pois o congelamento promove a liberaodo anticorpo.- No trocar
as tampas dos frascos.- Aplicar os cuidados habituais de segurana na manipulao dos reagentes e
amostrabiolgica.- Recomendamos o uso das Boas Prticas em Laboratrio Clnico para a execuo
doteste.- De acordo com as instrues de biossegurana, todas as amostras devem sermanuseadas como
materiais potencialmente infectantes.- Descartar os reagentes e as amostras de acordo com as resolues
normativas locais,estaduais e federais de preservao do meio ambiente.- Recomendamos o uso de
equipamentos de proteo individual (EPI) como avental,culos de segurana, luvas descartveis e outros
que se fizerem necessrios para arealizao do teste.- No deve ser utilizada a boca para pipetagem de
reagentes, amostra ou qualqueroutra substncia.PROCEDIMENTO DO TESTE1- Colocar em um tubo
de ensaio uma gota de reagente anti-D e identific-lo. Em um segundo tubo, colocar uma gota de controle
Rh como controle negativo.2- A cada tubo acrescentar uma gota de suspenso de hemcias a 5%
previamente preparada em soluo fisiolgica. Misturar bem.3- Incubar os dois tubos a 37 C durante 15
minutos.4- Centrifugar a 3.400 r.p.m. por 15 segundos ou a 1.000 r.p.m. por um minuto.5- Agitar
suavemente os dois tubos para pesquisar ou no a presena ou no de aglutinao.6- Lavar as hemcias
dos dois tubos por trs vezes com soluo fisiolgica. Aps a ltima lavagem, desprezar o sobrenadante,
secando as bordas do tubo para retirar toda soluo fisiolgica.7- A cada tubo adicionar duas gotas de
Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS). Misturar bem.8- Centrifugar a 3.400 r.p.m. por 15 segundos ou a
1.000 r.p.m. por um minuto.9- Agitar suavemente os tubos para pesquisar ou no a presena de
aglutinao.
25. RESULTADOS:- Se no houver aglutinao em nenhum dos tubos, o sangue deve ser
classificadocomo Rh negativo.- Se houver aglutinao apenas no tubo que recebeu o reagente Anti-D, o
sangue portador do Fator Du e deve ser considerado Rh positivo.- Se houver aglutinao em ambos os
tubos, a determinao do Fator Du ficaprejudicada e portanto, estaremos diante de hemcias j
sensibilizadas por algumanticorpo. Se o sangue for de um doador, o mesmo no poder ser usado para
finstransfusionais. - Se no ocorrer aglutinao no tubo anti-D e se o controle Rh estiver negativo,
preciso validar esse resultado com o controle de Coombs, para garantir que o anti-soroAGH est
funcionando e o teste foi bem realizado.VALIDAO DOS RESULTADOS COM CONTROLE DE
COOMBS 1- Adicione uma gota de reagente controle de Coombs aos tubos anti-D com resultado
negativo com anti-soro AGH; 2- Homogeneze e centrifugue os tubos de reao; 3- Leia e interprete os
resultadosRESULTADOS Anti- D Controle Rh Controle de Interpretao Coombs + ou negativo + No

realizado Resultado invlido + negativo No realizado Rh positivo (D fraco) negativo negativo + Rh

negativo negativo negativo negativo Resultado invlidoCOOMBS INDIRETOPRINCPIO DO TESTEA
prova de Coombs indireto atualmente chamada de pesquisa de anticorposirregulares (PAI). Esta prova
avalia a presena de anticorpos irregulares circulantes no
26. soro de doadores de sangue, receptores, gestantes, pacientes com suspeita de anemiahemoltica por
presena de anticorpos, entre outros.O teste antiglobulina humano baseia-se na aglutinao de hemcias
sensibilizadaspreviamente com anticorpos humanos ou fraes do complemento atravs do anti-soro
AGH (SORO DE COOMBS).AMOSTRANo necessrio nenhum preparo prvio do doador ou paciente
para a coleta dasamostras de sangue. Para melhores resultados utilizar, de preferncia,
amostrasrecentemente colhidas ou em conformidade com os critrios locais de aceitao deamostras. As
amostras de sangue podem ser colhidas com ou sem a adio deanticoagulantes.COMPONENTES DO
KITConservar entre 2-8 C.- Soro anti-IgG (soro de Coombs)O produto fornecido em frascos de 10 ml
acompanhados de conta-gotas. Cada gotaequivale a 50l.MATERIAIS- Tubos de vidro- Pipetas PasteurBanho-Maria a 37C- Centrfuga- Salina Isotnica.PROCEDIMENTO DO TESTEEste teste utilizado na
pesquisa de anticorpos bloqueadores (incompletos), os quaisse fixam as hemcias in vitro, mas no as
aglutinam. Para que a reao sejaobservada necessrio a adio do Soro Anti-IgG (SORO DE
COOMBS) ao teste.O teste de Coombs Indireto realizado em pesquisas de anticorpos
bloqueadores,pesquisa de antgenos (usando o soro classificador apropriado) e provas decompatibilidade,
desde que tais reaes no dependam do complemento para suadeteco. 1- Colocar em tubo de ensaio
uma gota de suspenso de hemcias a 5% escolhidas para o teste (geralmente O positivo), previamente
preparadas em soluo fisiolgica. 2- Adicionar duas gotas de soro a ser utilizado no teste. 3- Acrescentar
2 gotas de albumina bovina a 22%. 4- Incubar o tubo em Banho-Maria durante 15-30 minutos a 37 C. 5Preparar tambm os controles positivo e negativo** 6- Lavar as hemcias do tubo por trs vezes em
soluo fisiolgica, secando as bordas do tubo a ltima lavagem para retirar toda soluo. 7- Acrescentar
duas gotas de Soro Anti-IgG (SORO DE COOMBS). Misturar bem. 8- Centrifugar a 3.400 r.p.m. por 15
segundos ou a 1.000 r.p.m. por 1 minuto. 9- Agitar suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no
de aglutinao.
27. **Controle positivo e controle negativo para o teste de Coombs Indireto 1- Na execuo do teste de
Coombs Indireto de primordial importncia realizar em paralelo os controles Positivo e Negativo. 2Colocar em 2 tubos de ensaio uma gota de suspenso a 5% de hemcias O Rh Positivo, previamente
preparadas em soluo fisiolgica. Identific-los. 3- Adicionar ao tubo Controle Negativo uma gota de
soluo fisiolgica e ao Controle Positivo uma gota de reagente Anti-D. 4- Executar o mesmo
procedimento tcnico descrito para o teste de Coombs Indireto a partir do item n
3.RESULTADOSPositivo (presena de aglutinao): Presena de anticorpos livres no soro do paciente,os
quais correspondem a um ou mais antgenos presentes nas hemcias usadas noteste.LIMITAES IResultados FALSO-NEGATIVOS podem ocorrer: 1- Quando as hemcias no forem apropriadamente
lavadas ou globulinas humanas estiverem presentes na vidraria, resultando numa neutralizao das
antiglobulinas humanas. 2- Quando os anticorpos se eluem das hemcias durante incubao inadequada,
no permitindo uma apropriada sensibilizao dos glbulos. 3- Quando hemcias e/ou reagente no so
adequadamente conservados na temperatura indicada, perdendo sua reatividade. 4- Quando o Soro AntiIgG (SORO DE COOMBS) foi omitido durante o teste II- Resultados FALSO-POSITIVO podem
ocorrer: 1- Quando hemcias do teste de Coombs Direto Positivo so usados durante o procedimento
tcnico do teste de Coombs Indireto. 2- Quando so utilizadas Amostras de sangue contaminado. 3Quando foi realizada uma centrifugao excessiva. 4- Quando o soro, as hemcias e Soro anti-IgG
(SORO DE COOMBS) estiverem excessivamente frios, detectando a presena de aglutininas
frias.COOMBS DIRETOPRINCPIO DO MTODO:Este teste empregado na pesquisa de anticorpos
(gamaglobulinas) j fixados shemcias, como ocorre na Doena Hemoltica do Recm-Nascido, Anemia
HemolticaAdquirida e em pacientes que tenham recebido transfuses incompatveis.
28. PROCEDIMENTO: 1. Colocar em um tubo de hemlise uma gota da suspenso de hemcias do
paciente a 5%, previamente preparadas em soluo fisiolgica ou no prprio soro. 2. Lavar as hemcias
do tubo por trs vezes com soluo fisiolgica. Desprezar o sobrenadante, secando as bordas do tubo, na
ltima lavagem para retirar toda soluo. 3. Acrescentar duas gotas do Soro Anti-IgG (Soro de Coombs).
Misturar bem. 4. Centrifugar a 3400 rpm por 15 segundos ou a 1000 rpm por 1 minuto. 5. Agitar
suavemente o tubo para pesquisar a presena ou no de aglutinao. RESULTADOS: Positivo: presena
de aglutinao Negativo: ausncia de aglutinaoSorologia para DengueO teste ELISA Panbio de captura
para IgMAnti-Dengue destina-se detecoqualitativa de anticorpos IgM contra dengue, como auxiliar no
diagnstico clinicolaboratorial de pacientes com sintomas clnicos compatveis com a febre da
dengue.PRINCPIO DE AOMetodologia: Ensaio imunoenzimticoQuando presentes, os anticorpos
sricos da classe IgM se combinam com anticorposIgM ligados superfcie de poliestireno dos
micropoos das tiras do teste.Uma mistura do concentrado de antgenos 1 a 4 do vrus da Dengue

diludo com odiluente do antgeno para se obter o volume de trabalho correto (os antgenos
soproduzidos usando um sistema de expresso da clula do inseto e imunopurificaopor anticorpo
monoclonal (MAb) especfico). Adiciona-se ao antgeno diludo um igualvolume do anticorpo monoclonal
conjugado HRP (enzima), o que permitir aformao de complexos antgenos-MAb. Aps a lavagem da
placa para remoo dosoro residual, adiciona-se placa o complexo antgeno-MAb.Aps incubao, os
micropoos so lavados e adiciona-se um sistema de substratoincolor (tetrametilbenzidina/perxido de
hidrognio- cromgeno TMB). O substrato hidrolisado pela enzima (HRP), e o cromgeno adquire cor
azul. O desenvolvimento decor indicativo da presena de anticorpos IgMAnti-Dengue na amostra sob
teste.

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