ISSN 1517-5146

Dezembro, 2000

CIRCULAR TCNICA N 6

MTODOS

DE

ANLISE

UTILIZADOS

NA

DE

TECIDOS VEGETAIS

EMBRAPA SOLOS

Ciraca Arcangela Ferreira de Santana do Carmo

Wilson Sant'Anna de Arajo
Alberto Carlos de Campos Bernardi
Marcelo Francisco Costa Saldanha

Solos

Copyright 2000. Embrapa

Embrapa Solos. Circular Tcnica n 6
Reviso de Portugus
Andr Luiz da Silva Lopes
Tratamento editorial
Jacqueline Silva Rezende Mattos
Fotografia
Claudio Lucas Capeche
Capa
Lipe Dias
Normalizao bibliogrfica
Maria da Penha Delaia
Tiragem desta edio: 300 exemplares
Embrapa Solos
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Embrapa Solos
Catalogao-na-publicao (CIP)

Mtodos de anlise de tecidos vegetais utilizados na Embrapa Solos / Ciraca

Arcangela Ferreira de Santana do Carmo ... [et al.]. - Rio de Janeiro :
Embrapa Solos, 2000.
41 p. (Embrapa Solos. Circular Tcnica; 6).
ISSN 1517-5146
1. Planta - Nutrio. 2. Diagnose foliar. 3. Tecido vegetal - Anlise Mtodo. I. Carmo, Ciraca Arcangela Ferreira de Santana do. II. Arajo, Wilson
Sant'Anna de. III. Bernardi, Alberto Carlos de Campos. IV. Saldanha, Marcelo
Francisco Costa. V. Srie.
CDD (21. ed.) 631.42

AUTORIA

Ciraca Arcangela Ferreira de Santana do Carmo

Wilson SantaAnna de Arajo

Alberto Carlos de Campos Bernardi 1

Marcelo Francisco Costa Saldanha

Pesquisador da Embrapa Solos.

Tcnico de Nvel Superior da Embrapa Solos.

iii

SUMRIO

INTRODUO 1

FLUXOGRAMA DO LABORATRIO 3

AMOSTRAGEM 4

RECEBIMENTO DA AMOSTRA 5

PREPARO DAS AMOSTRAS 8

LAVAGEM DA VIDRARIA 10

SOLUBILIZAO (DIGESTO) 11

DETERMINAES ANALTICAS 15

UNIDADES E EXPRESSO DOS RESULTADOS 40

10 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 41

RESUMO

O crescente aumento da populao, e a conseqente expanso

da demanda por alimentos, gera a necessidade de maior eficincia dos
agrossistemas e maior produtividade das reas cultivadas. Esta eficincia
ser sustentvel, se houver uma otimizao de recursos e insumos,
buscando aumentos da produo atravs do manejo racional da
fertilidade do solo e da nutrio de plantas sem ocasionar danos ao meio
ambiente. Neste contexto, a diagnose foliar constitui-se em uma
ferramenta

extremamente

importante

para

avaliao

monitoramento do estado nutricional das plantas.

Assim sendo, a Embrapa Solos, consciente de suas atribuies
em envidar esforos para a obteno de mximas produtividades com o
mnimo de danos ambientais decorrentes da aplicao de fertilizantes e
corretivos no solo, instalou em 1996, o laboratrio de tecidos vegetais,
que atende os projetos de pesquisa da unidade e das instituies que
fazem parte dos sistemas de pesquisas.
Este trabalho relata os procedimentos analticos utilizados para
a determinao dos principais nutrientes essenciais s plantas, realizados
no laboratrio de anlise de tecidos vegetais da Embrapa Solos. Para
cada

mtodo

sero

apresentados

os

princpios,

materiais

equipamentos, reagentes e solues e procedimentos.

Termos para indexao: metodologias, diagnose foliar, nutrio
de plantas, estado nutricional.

vii

ABSTRACT

Analytical Methods of Plant Tissue Used in Embrapa Solos

The continuous growth of population, allied with foodstuff

requirement expansion, has begotten the need of a larger agrosystem
efficiency

and

effectiveness

will

larger
be

productivity

sustainable

if

on

cultivated

resources

as

areas.

well

as

This
input

optimization befall, in order to increase production by wise usage of soil

fertility and plant nutrition, without damaging the environment. In this
context, leaf diagnosis is an extremely important tool on the evaluation
and monitoring plants nutritional status.
Considering this, Embrapa Soils, conscious of its responsibility
on making efforts so as to obtain maximum productivity with a minimum
environmental harm caused by soil fertilizers and correction products
application, created, on 1996, the plant tissue laboratory, which attends
its own research projects and the institutions belonging to the research
system as well.
This work shows the analytical procedures currently used on
the determination of the main essential nutrients to the plants,
performed at Embrapa Soils plant tissue laboratory. For each analysis
methodology, theoretical principles, equipment and materials used,
reagents and solutions will be shown.
Index terms: analytical methodology, foliar diagnosis, plant
nutrition, nutritional status.

ix

INTRODUO
O crescente aumento da populao e a conseqente expanso

da demanda por alimentos geram a necessidade de maior eficincia dos

agrossistemas e maior produtividade das reas cultivadas. Esta eficincia
ser sustentvel se houver uma otimizao de recursos e insumos,
buscando aumentos da produo atravs do manejo racional da
fertilidade do solo e da nutrio de plantas. Neste contexto, a diagnose
foliar constitui-se em uma ferramenta extremamente importante para a
avaliao e o monitoramento do estado nutricional das plantas.
A diagnose nutricional, atravs da anlise de tecidos vegetais,
tem se mostrado um guia til para o manejo dos nutrientes e realizada
com os seguintes objetivos:

diagnosticar

um

problema

nutricional

no

identificado

visualmente;

identificar causa de sintomas visuais observados no campo;

mapear reas que apresentam suprimento no adequado de

nutrientes;

avaliar se um determinado nutriente aplicado foi absorvido

pela planta;

identificar interaes entre nutrientes;

caracterizar a causa especfica de um problema nutricional;

juntamente com a anlise de solo, orientar um programa

racional de adubao e correo do solo.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

Portanto, a utilizao da anlise foliar na avaliao nutricional

das plantas pode revelar deficincias ou excessos de um ou mais
nutrientes, permitindo que sejam realizadas as correes, evitando o
comprometimento

da

produtividade

da

qualidade

dos

produtos

agrcolas.
Assim sendo, a Embrapa Solos, consciente de suas atribuies
em envidar esforos para a obteno de mxima produtividade com o
mnimo de danos ambientais decorrentes da aplicao de fertilizantes e
corretivos no solo, instalou, em 1996, o laboratrio de tecidos vegetais.
At o momento tem realizado anlises atendendo necessidade dos
projetos de pesquisa da unidade, como das instituies que fazem parte
do sistema de pesquisa, como as universidades, principalmente no que
se refere execuo de teses de mestrado e doutorado.
Equipado

com

instrumental

analtico

atualizado,

como

espectrmetro de emisso por plasma e analisador elementar para

determinao simultnea de carbono e nitrognio totais por via seca, o
laboratrio conta ainda com diferentes sistemas de purificao de gua
(destilada, bi-destilada em quartzo e ultra pura). Paralelamente, vem
calibrando, adequando e testando novos procedimentos analticos para
utiliz-los na rotina, uma vez que os processos so dinmicos.
Neste trabalho sero descritos os procedimentos analticos
utilizados para a determinao dos principais nutrientes essenciais s
plantas (N, P, K, Ca, Mg, S, B, Cu, Mn, Mo e Zn), realizados no
laboratrio de anlise de tecidos vegetais da Embrapa Solos. Para cada
mtodo sero apresentados os princpios, materiais e equipamentos,
reagentes e solues, e procedimentos. As vidrarias no sero listadas,
uma vez que so as comumente utilizadas em todos os laboratrios.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

FLUXOGRAMA DO LABORATRIO

Na Figura 1, encontra-se esquematizado o fluxograma das

atividades do laboratrio de tecido vegetal, desde o preparo da amostra
at os procedimentos analticos propriamente ditos.

Amostra

Preparo da amostra
(lavagem, secagem e moagem)

Solubilizao
Ntrico-perclrica

P
Colorimetria
(Amarelo
vanadato)

K, Na
Fotometria
de chama

Ca, Mg
Absoro
atmica

S
Turbidimetria

Cu, Fe,
Mn, Zn
ICP

Solubilizao
sulfrica

Solubilizao
via seca

N Kjeldahl

B Colorimetria
(Azometina-H)
Mo Colorimetria
(Ditiol)

Figura 1. Fluxograma das anlises foliares na Embrapa Solos.

Conscientes de que o valor da anlise de plantas para a

diagnose e monitoramento do estado nutricional depende no s da
determinao analtica mais tambm da adoo de metodologias
sistematizadas de amostragem e preparo da amostra, estes tpicos so
brevemente enfocados neste trabalho, apesar de no fazerem parte da
rotina do laboratrio.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

AMOSTRAGEM
A amostragem constitui-se em uma etapa importante na anlise

de plantas, podendo acarretar erros na interpretao dos resultados

analticos e na identificao das limitaes nutricionais. Em geral, a
fase onde ocorrem falhas com maior freqncia. Para garantir resultados
que reflitam o estado nutricional da cultura, a amostra coletada deve ser
representativa da populao, possibilitando assim, melhor interpretao.
Nesta fase, devem ser observadas as instrues especficas da parte da
planta a ser coletada, o estdio de desenvolvimento e a quantidade de
material a ser coletado, uma vez que os resultados obtidos pela anlise
qumica sero comparados com valores padres estabelecidos (valores
crticos ou faixas de suficincia), para ento serem interpretados. As
recomendaes tcnicas para amostragem de plantas encontram-se na
literatura (Osaki, 1991, Malavolta et al. 1997 e Carmo et al. 1998).

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

RECEBIMENTO DA AMOSTRA
As amostras recebidas pelo correio ou entregues diretamente

pelos interessados so rigorosamente identificadas atravs de protocolo

e etiquetadas com o nmero do laboratrio.
Por ocasio do recebimento da amostra preenchido um
formulrio, que tem como objetivo subsidiar a interpretao dos
resultados analticos (Figura 2).

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

LASP
Laboratrio de anlise de gua, solos e plantas

1. Identificao
o

Data:

N . laboratrio:

Nome do proprietrio
Nome da propriedade
Endereo
Telefone:

Fax:

e-mail:

Endereo para remessa dos resultados:

Responsvel pela remessa

2. Descrio da amostra
Cultura:

Variedade:

Produtividade:

c Alta
Data da amostragem:
Estdio de crescimento:

Material enviado:

Idade:
c Mdia

c Perfilhamento
c Frutificao

c Incio
Folha
inteira (com pecolo)
c

c Planta inteira
Descrio de sintomas:

Sintomas em folhas:

c novas
Avaliao do estado da cultura:
c bom

N . de amostras:
c Baixa

___________

c Florescimento
c Maturao
c Outros _____________
c Limbo
c Outros _____________

c velhas
mdio
c

c ruim

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

3. Caractersticas do plantio:
Cultivo:

c Comercial

c Domstico

c Outros________

c Anlise solo

c Adubao

_________________

c Seca

c Pragas

c Doenas

Prticas:
c Irrigao
Ocorrncias:
c Encharcamento
Pulverizaes:

c Adubo
foliar_____________

Defensivos______________

4. Descrio do local:
c Arenoso

Solo:
Relevo:

c Plano

c Argiloso
c Suave

Cor_____________

c Acidentado

c Baixada

Cobertura vegetal predominante:

5. Nutrientes a serem analisados:

N

Ca

Mg

Cu

Fe

Mn

Zn

________

6. Observaes:

Assinatura responsvel:
_________________________________________

Figura 2. Formulrio de recebimento das amostras na Embrapa Solos.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

PREPARO DAS AMOSTRAS

5.1

Lavagem
O ideal que as folhas sejam entregues ainda verdes ao

laboratrio, no mximo 2 dias aps a coleta. Quando no houver essa

possibilidade, realiza-se a lavagem, somente para folhas verdes e
vigorosas.
As amostras inicialmente so lavadas com gua de torneira e
gua ultra pura, posteriormente com detergente neutro, na concentrao
de 1mLL-1, e novamente com gua ultra pura.
No caso de amostras que receberam aplicao de defensivos
agrcolas ou adubao foliar ou estiverem contaminadas com terra, alm
do procedimento anterior, acrescenta-se a lavagem com uma soluo de
HCl 30mLL-1, seguida de lavagem com gua desmineralizada. O tempo
de contato das folhas com a gua ou com as solues descontaminantes
deve ser sempre menor que 2 minutos, para se evitar as perdas dos
nutrientes, principalmente o potssio.

5.2

Secagem
O material posto para secar primeiramente ao ar, sobre

superfcie plstica limpa e sombra. Posteriormente, embalado em

sacos de papel etiquetados e colocado para secar em estufa com
circulao forada de ar em temperaturas variando de 65 a 70o C at
atingir peso constante. A temperatura no ultrapassa 70o C, para se
evitar a perda de nutrientes.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

5.3

Moagem
A moagem realizada em moinhos tipo Willey, com facas e

cmara de ao inoxidvel e com peneiras de 0,5 ou 1mm de dimetro

(20-40mesh), visando assegurar a homogeneizao da amostra.
No caso de materiais ricos em leos e resinas, faz-se a
macerao em gral. As amostras com grande volume so trituradas
previamente com picadeira ou moinho de martelo.

5.4

Armazenagem
O armazenamento das amostras realizado em sacos ou

frascos plsticos, identificados com o nmero do laboratrio.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

10

LAVAGEM DA VIDRARIA

Considerando que as determinaes realizadas no laboratrio de

tecidos vegetais so de alta sensibilidade e que os trabalhos so de
baixas concentraes de nutrientes, procedimentos devem ser adotados
a fim de se evitar possveis contaminaes, que podem invalidar a
anlise do material. Ento, cuidados especias so tomados, como o de
separar a vidraria utilizada para determinadas rotinas especiais, com, por
exemplo, lodo de esgoto, e na fase de exagamento dos tubos.
Os seguintes procedimentos so utilizados na lavagem:

lavar a vidraria em gua corrente por duas vezes;

imergi-la em soluo de cido ntrico 5 a 10% (v/v);

enxaguar
abundantemente
(18,3Mcm1).

em

gua

ultra

pura

Quando os tubos de digesto apresentam resduos ou crostas,

so inicialmente lavados em gua corrente e imersos em soluo de
detergente neutro a 5%, escovados at a completa eliminao dos
resduos e lavados com gua corrente. Em seguida, so imersos em uma
cuba plstica, com soluo de cido ntrico a 5% (v/v) por
aproximadamente 48 horas, seguido de enxge por vrias vezes, com
gua ultra pura.
As vidrarias no aferidas so colocadas para secar em estufa
temperatura entre 50 e 60o C e as aferidos so secas ao ar, em local
protegido da poeira.

6.1

Materiais e equipamentos
cubas plsticas e escovas de diversos tamanhos;
estufa com controle de temperatura.

6.2

Reagentes e solues

detergente neutro;

cido ntrico.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

11

SOLUBILIZAO (DIGESTO)

A decomposio do tecido vegetal, visando a determinao dos

nutrientes essenciais s plantas, realizada por via seca ou atravs da
solubilizao com cidos ntrico e perclrico.

7.1

Via seca

7.1.1

Princpio

A amostra de tecido vegetal incinerada em mufla eltrica a

uma temperatura entre 500 e 550C. A cinza resultante dissolvida em
soluo diluda cida de cido ntrico. O extrato resultante utilizado
para determinao de B e Mo.
7.1.2

7.1.3

Materiais e equipamentos

mufla eltrica com controle de temperatura;

balana analtica;

cadinho de porcelana.

Reagentes e solues

7.1.4

HNO 3 .

Procedimentos

transferir 500mg de amostra para cadinho de porcelana;

levar mufla eltrica com temperatura controlada;

aumentar gradativamente a temperatura para 500 a 5500C,

por 2 a 4 horas, at a obteno de cinza branca. A cinza
resultante deste processo dissolvida em 25mL de HNO3
0,1mol L-1.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

12

7.2

Via mida

7.2.1

Solubilizao ntrico perclrica

7.2.1.1 Princpio
As amostras so solubilizadas com cidos ntrico (65%) e
perclrico (70%). Este mtodo realizado para determinao dos
elementos P, K, Ca, Mg, S, Cu, Fe, Mn e Zn.
7.2.1.2 Materiais e equipamentos

capela de exausto;

balana analtica;

bloco digestor para 40 tubos de digesto.

7.2.1.3 Reagentes e solues

cido ntrico 65%;

cido perclrico 70%.

7.2.1.4 Procedimentos

transferir 500mg de material vegetal seco e modo para

tubo digestor;

adicionar 4,0mL de cido ntrico;

deixar em repouso por aproximadamente 12 horas (digesto

prvia);

aquecer gradativamente at 120o C;

permanecer nesta temperatura at cessar totalmente o

desprendimento de NO 2 (vapor castanho). Nesta etapa, a

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

13

matria orgnica encontra-se parcialmente digerida e o

volume do cido ntrico reduzido metade do volume
inicial;

7.2.2

adicionar 2,0mL de cido perclrico;

aumentar a temperatura gradativamente para 180o C;

evitar neste processo o aquecimento elevado para no

haver perdas, principalmente, de fsforo e enxofre;

colocar pequenos funis, tampando o tubo digestor, a fim de

no s evitar possveis perdas de HClO4, como tambm a
secagem do extrato;

manter a temperatura at se obter fumos brancos de HClO4

e o extrato se apresentar incolor;

esfriar;

completar o volume para 25mL com gua ultra pura.

Solubilizao sulfrica

7.2.2.1 Princpio
Esta tcnica baseia-se na oxidao da matria orgnica,
transformando o nitrognio orgnico em mineral (sulfato de amnio),
atravs da ao do H2 SO4 e catalisadores a quente.
7.2.2.2 Materiais e equipamentos

capela de exausto;

balana analtica;

bloco digestor.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

14

7.2.2.3 Reagentes e solues

H2SO4 concentrado;

Na2SO4 ;

CuSO 4.5H2O;

mistura cataltica:
-

pesar 180g de Na2SO4 ;

dissolver em aproximadamente 1L de gua ultra pura em

balo aferido de 2L;

adicionar 18g de CuSO 4 .5H2O;

adicionar 600mL de H2SO 4 concentrado;

deixar esfriar;

completar o volume;

7.2.2.4 Procedimentos

pesar 0,2g da amostra moda e seca em tubos para

digesto de 50mL;

adicionar 15mL de mistura cida de sulfatos;

proceder digesto, por 1 hora ou mais em bloco digestor,

aumentando a temperatura gradativamente at cerca de
335C;

deixar esfriar, aps a completa digesto da matria

orgnica, caracterizada por um lquido incolor ou levemente
esverdeado;

determinar o teor de nitrognio.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

DETERMINAES ANALTICAS

8.1

Nitrognio

15

A determinao do nitrognio pode ser realizada atravs da

solubilizao sulfrica seguida do mtodo semi-micro Kjeldahl ou com a
amostra slida, no analisador elementar. Neste caso, determinado o N
total.
8.1.1

Semi-micro Kjeldahl

8.1.1.1 Princpio
Tcnica de solubilizao mida, seguida por destilao a vapor
e titulao para a quantificao do NH4 . A solubilizao sulfrica (H2 SO4
+ catalisadores) transforma protena e aminocidos do tecido vegetal
em N-NH4+ que destilado e complexado em cido brico com indicador
misto, e titulado com soluo padronizada de H2 SO4 diludo.
8.1.1.2 Materiais e equipamentos

destilador semi-micro Kjeldahl;

balana analtica.

8.1.1.3 Reagentes e solues

cido brico a 20g L-1:

-

pesar 20g de H3 BO3;

adicionar 800mL de gua destilada, agitando at

dissolver o sal;

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

16

adicionar 15mL de verde de bromocresol a 0,1gL-1, 6mL

de vermelho de metila a 0,1g L-1 e 2mL de hidrxido de
sdio a 0,1mol L-1, aps dissoluo;

completar para 1L com gua destilada;

verde de bromocresol 1gL-1:

-

pesar 0,1g;

dissolver em lcool etlico, completando o volume para

100mL;

vermelho de metila 1gL-1:

-

pesar 0,1g;

dissolver em lcool etlico, completando o volume para

100mL;

soluo estoque de H2 SO4:

-

transferir 28mL de H2SO4 concentrado p., para balo

volumtrico de 1L;

completar com gua ultra pura;

soluo estoque de H2 SO4 0,014molL-1:

-

adicionar 100mL da soluo estoque em balo

volumtrico de 1L, completando o volume. Esta soluo
deve ser padronizada com soluo de NaOH 0,01molL-1,
preparada a partir de ampolas de TITRISOL;

NaOH 13 molL-1:
-

pesar 520g de NaOH;

dissolver em 1.000mL de gua ultra pura;

lcool etlico 99.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

17

8.1.1.4 Procedimentos

destilao e titulao:
-

transferir todo o extrato digerido para o destilador semimicro Kjeldahl;

conectar um erlernmeyer de 50mL, contendo 10mL da

soluo de H3 BO3 20gL-1 com a mistura de indicadores,
na extremidade de refrigerao do destilador;

adicionar gradativamente 10mL de NaOH 13molL-1 ao

digerido;

proceder destilao at atingir um volume de 30mL;

retirar o frasco e titular com soluo de H2 SO4

0,014molL- 1, at a mudana da cor para rosa. Uma prova
em branco deve ser levada conjuntamente com as
amostras.

8.1.1.5 Clculo
N-NH4 g kg -1 = ( VolA Vol B) x 1,4
Onde:
VolA = volume de H2 SO4 gasto na amostra (ml);
VolB = volume de H2 SO4 gasto na prova em branco (ml).
8.1.2

Analisador elementar

8.1.2.1 Princpio
A tcnica baseia-se no mtodo de Pregal e Dumas, onde as
amostras so queimadas em um ambiente de oxignio puro, e os gases
resultantes desta combusto so carreados por hlio de alta pureza (um
gs inerte) at a zona de deteco.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

18

8.1.2.2 Materiais e equipamentos

analisador elementar Perkin-Elmer CHNS/OPEZ 400 Series.

8.1.2.3 Reagentes e solues

oxignio de alta pureza;

hlio de alta pureza.

8.1.2.4 Procedimentos
As amostras, encapsuladas em cadinhos de estanho, so
inseridas na zona de combusto do equipamento, e, na presena de
excesso de oxignio e dos reagentes de combusto, so totalmente
queimadas, formando os gases CO2, H2O e N2. Em seguida, so
carreadas pelo gs inerte (He) at a zona de controle gasoso. Nesta rea,
os gases formados so encerrados em uma cmara fechada, onde so
rapidamente misturados e mantidos em condies controladas de
presso, temperatura e volume. Aps a homogeneizao, a cmara de
mistura despressurizada e os gases vo para uma coluna na zona de
separao do instrumento. Nesta etapa, utiliza-se a tcnica de
cromatografia frontal, onde h a reteno seletiva dos gases, de maneira
a produzir um cromatograma de sinal estvel, por etapas, como se
fossem degraus, em lugar dos picos. Os gases, ao sarem da coluna
cromatogrfica, passam por um detetor de condutividade trmica na
zona de deteco do aparelho, onde se mede, uma a uma, as mudanas
da linha de base do gs carreador.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

8.2

Fsforo

8.2.1

Espectrometria com amarelo de vanadato

19

8.2.1.1 Princpio
O nion H2PO4- reage com molibdato (MoO 42-) e vanadato (VO 32-),
em meio cido, formando um complexo de colorao amarela que
absorve a luz na regio de 420nm.
8.2.1.2 Materiais e equipamentos

Espectrmetro UV-VIS.

8.2.1.3 Reagentes e solues

H2SO4 ;

(NH4)6 .MoO 24 ;

(NH4)2 VO 3;

curva analtica de P:
-

preparar soluo de P, contendo 0,0; 5,0; 10,0; 15,0 e

20,0mgL-1 em H2SO4 0,2molL-1 ;

soluo de molibdato 50gL-1:

-

dissolver 50g de (NH4 )6.MoO 24 p.a. em 800mL de gua

quente;

esfriar;

completar o volume para 1.000mL com H2O;

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

20

soluo de vanadato 2,5gL-1:

-

dissolver 2,5g de (NH4)2 VO 3 p.a. em 500mL de gua

quente;

adicionar 350mL de HNO 3 65%;

esfriar;

completar o volume para 1.000mL com gua ultra pura;

misturar em partes iguais as solues de molibdato e

vanadato.

Observao: as duas solues so misturadas apenas na hora

do uso.
8.2.1.4 Procedimentos

pipetar 5,0mL do extrato da solubilizao ntrico-perclrica;

completar o volume para 20mL com gua;

adicionar 4mL da mistura dos reagentes;

efetuar, aps 5 minutos, a leitura no espectrmetro a

420nm, construindo a curva analtica e estimando a
concentrao de P no extrato solubilizado.

8.2.1.5 Clculo
Pgkg

-1

= leitura em mg L-1 X 0,2

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

8.3

Potssio e Sdio

8.3.1

Espectrometria de chama de emisso

21

8.3.1.1 Princpio
O mtodo baseado na atomizao das partculas da soluo
atravs da projeo da soluo sobre uma chama. H uma excitao dos
tomos, isto , o deslocamento dos eltrons para nveis energticos mais
elevados; quando os tomos voltam ao nvel energtico normal, h
emisso da energia absorvida na forma de radiaes. Os tomos
excitados dos nutrientes potssio e sdio, emitem luz a certos
comprimentos de onda que so caractersticos para aquele elemento
(entre 766 e 767nm para o K e 589 e 589,6nm para o Na). Como a
intensidade da luz emitida por cada nutriente depende da concentrao
de seus tomos, a medida possibilita sua determinao quantitativa.
8.3.1.2 Materiais e equipamentos

fotmetro de chama;

estufa com temperatura controlada;

balana analtica.

8.3.1.3 Reagentes e solues

KCl p.a;

HClO4 ;

NaCl;

soluo estoque de K (1.000mg L-1 de K):

-

dissolver 1,9067g de KCl p.a., seco em estufa a 100C

por 2 horas, em gua ultra pura, completando o volume
a 1.000mL;

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

22

curva analtica de K:
-

armazenar em frasco de polietieno sob refrigerao;

pipetar 0,8mL de HClO4 , 0,0; 1,0; 2,0; 3,0 e 5,0mL da

soluo estoque (1.000mg L-1 de K), em bales
volumtricos de 100mL, completando o volume com
gua
deionizada.
Estas
solues
contm,
respectivamente, 0,0; 10,0; 20,0; 30,0 e 50,0mgL-1 de
K;

soluo estoque de sdio (1.000mgL-1 de Na):

-

dissolver 2,5421g de NaCl p.a., seco em estufa a

200C por 24 horas, em gua ultra pura, completando o
volume a 1.000mL;

armazenar em frasco de polietieno sob refrigerao;

soluo padro de sdio (100mgL-1 de Na):

-

transferir 100mL da soluo estoque 1.000mgL-1 de Na

para balo de 1.000mL; completando o volume com
gua ultra pura;

armazenar em frasco de polietieno sob refrigerao;

curva analtica Na:

-

pipetar, em bales volumtricos de 100mL, 0,8mL de

HClO4 , 0,0; 1,0; 2,0; 3,0; 5,0; 7,0 e 10,0mL da
soluo estoque (100mgL-1 de Na), completando o
volume com gua ultra pura. Estas solues contm,
respectivamente, 0,0; 1,0; 2,0; 3,0; 5,0; 7,0 e
10,0mgL-1 de Na.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

23

8.3.1.4 Procedimentos para determinao de K

diluir o extrato obtido na solubilizao ntrico-perclrica,

para que a concentrao de K da soluo fique dentro da
curva padro preparada. Geralmente, este extrato diludo
10 vezes, na proporo 1:9, usando uma parte de extrato
para nove partes de gua ultra pura;

calibrar o fotmetro com os padres 0 e 50mgL-1 K,

respectivamente, para as leituras 0 e 100;

proceder s leituras dos demais padres, quando aparelho

estabilizar;

proceder a leitura da curva analtica obtendo a respectiva

equao e a leitura das amostras.

8.3.1.5 Procedimentos para determinao de Na

a determinao de Na dever ser realizada diretamente no

extrato obtido por solubilizao ntrico-perclrica;

calibrar o fotmetro com os padres 0 e 10mgL-1 Na,

respectivamente, para as leituras 0 e 100;

realizar s leituras dos

estabilizao do aparelho;

proceder a leitura da curva padro obtendo a respectiva

equao e as leitura das amostras.

demais

padres,

quando

da

Observao: mesmo na chama de propano, pode haver

ionizao do potssio. Para suprimir esse efeito,
adiciona-se sdio nos padres e nas amostras, na
concentrao de 0,1g L-1.
8.3.1.6 Clculo para determinao de potssio
K g kg-1 = leitura em mgL-1 x 0,5

24

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

8.3.1.7 Clculo para determinao de sdio

Na g kg

8.4

-1

= leitura em mgL-1 x 50

Clcio e Magnsio

Os nutrientes so determinados por espectrometria de absoro

atmica e, mais recentemente, por espectrometria de emisso atmica
com induo de plasma (ICP), com bons resultados.
8.4.1

Espectrometria de absoro atmica

8.4.1.1 Princpio
Na tcnica de espectrometria de absoro atmica (EAA), a
soluo amostra aspirada e nebulizada em uma chama ar-acetileno ou
xido nitroso-acetileno e convertida em vapor atmico. Alguns destes
tomos sero termicamente excitados pela chama, mas a maioria deles
permanecer em seu estado fundamental. Para serem excitados, estes
tomos precisam absorver radiao especfica proveniente de uma
lmpada de ctodo oco, que emite radiao no mesmo comprimento de
onda que ser absorvido por eles, na chama. Os metais das solues
aspiradas na chama a 2.000-2.500o C transformam-se em seu estado
fundamental. O tomo de cada elemento qumico absorve a energia em
um comprimento de onda definida. A quantidade de energia absorvida
proporcional concentrao da soluo. No extrato resultante da
oxidao do material vegetal pela digesto ntrico-perclrica, o Ca e o
Mg so determinados por este mtodo, utilizando-se lmpada de ctodo
oco. Para determinao destes elementos, necessria a adio de
lantnio e estrncio para controlar a interferncia de ons como fosfato,
sulfato e alumnio.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

25

8.4.1.2 Materiais e equipamentos

espectrmetro de absoro atmica;

lmpada de ctodo oco de Ca e Mg.

8.4.1.3 Reagentes e solues

La203;

HN03;

TITRISOL;

soluo de lantnio 1,14gL-1:

transferir 1,14g de La203 para frasco de 1.000mL;

adicionar soluo de HN03 100mLL-1 at total dissoluo

do xido;

completar o volume com gua ultra pura;

curva analtica de Ca e Mg:

-

preparar, a partir da soluo TITRISOL de Ca e Mg

1.000mg L-1, solues com misturas de Ca e Mg: 0,0 e
0,0; 1,0 e 0,2; 2,0 e 0,4 e 4,0 e 0,8mgL-1,
respectivamente, em solues cidas.

8.4.1.4 Procedimentos

pipetar 1,0mL da soluo do extrato obtido atravs da

digesto ntrico-perclrica, para copo de polipropileno;

completar o volume para 20mL com gua ultra pura

(alquota A);

retirar 1,0mL da alquota A para tubo de ensaio;

adicionar 4,0mL da soluo de lantnio a 1,14gL-1;

determinar Ca e Mg no espectrmetro de absoro atmica.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

26

8.4.1.5 Clculos para determinao de Ca

Ca g kg-1 = leitura mgL-1 x 5
8.4.1.6 Clculos para determinao de Mg
Mg g kg-1 = leitura mgL-1 x 5

8.5

Enxofre

8.5.1

Turbidimetria

8.5.1.1 Princpio
Este mtodo tem como base a turbidez provocada pela
precipitao do on sulfato pelo cloreto de brio, na forma de sulfato de
brio (BaSO 4 ). Essa turbidez quantificada espectrometricamente.
Observao: a adio de gelatina ao cloreto de brio permite que o
precipitado mantenha-se em suspenso.
8.5.1.2 Materiais e equipamentos

espectrmetro UV-VIS.

8.5.1.3 Reagentes e solues

BaCl2 p.a.;

K2S04 p.a.;

HCl p.a.;

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

27

soluo estoque de S (contendo 1.000mgL-1 de S):

-

pesar 5,434g de K 2S04 p.a., seco em estufa,

dissolver em gua ultra pura;

completar o volume para 1.000mL;

curva analtica de sulfato:

-

adicionar, em bales volumtricos de 100mL,

respectivamente, 0,0; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 4,0 e
5,0mL da soluo estoque de S;

completar o volume com gua ultra pura;

soluo de HCl 6molL-1 (contendo 20mgL-1 de S):

-

dissolver 0,1087gde K2SO4 , seco previamente

estufa, em 200mL de gua ultra pura;

em

adicionar 500mL de HCl p.a.;

agitar at completa dissoluo do sal;

completar o volume para 1.000mL com gua ultra pura.

8.5.1.4 Procedimentos

pipetar 2,0mL do extrato obtido na digesto;

completar o volume para 20mL com gua deionizada;

pipetar alquota de 10mL para tubo de 30mL, adicionando

1,0mL de HCl 6molL-1 e 0,5g de BaCl2;

agitar vigorosamente por 30 segundos;

efetuar leitura, aps exatos 5 minutos cronometrados, no

espectrmetro, em comprimento de onda de 420nm ou no
turbidmetro;

construir a curva analtica e estimar a concentrao de S.

Observao: a leitura deve ser realizada impreterivelmente aps

5 minutos, uma vez que o precipitado de BaSO4
decanta-se rapidamente.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

28

8.5.1.5 Clculo
S (mgL -1) = leitura mgL-1 x 0,5

8.6

Cobre, Ferro, Mangans e Zinco

Os nutrientes cobre, ferro, mangans e zinco so determinados

por espectrometria de absoro atmica e, mais recentemente, por
Espectrometria de Emisso Atmica com Induo de Plasma (EEA-ICP).
8.6.1

Espectrometria de absoro atmica

8.6.1.1 Princpio
O tecido vegetal solubilizado pela via mida (ntricoperclrica) e a determinao dos elementos realizada diretamente no
extrato por espectrometria de absoro atmica. As interferncias
qumicas ou de ionizao so desprezveis neste mtodo.
8.6.1.2 Materiais e equipamentos

espectrmetro de absoro atmica;

lmpada de ctodo oco de Cu, Fe, Mn E Zn;

balana analtica.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

29

8.6.1.3 Reagentes e solues

HCl;

H2SO4 p.a.;

CuSO4.5 H2O;

Fe(NH4 )2(SO)4 (sulfato ferroso amoniacal);

ZnSO 4 .7H2O;

MnSO 4 .H2 O;

HNO 3 ;

HClO4 ;

padro TITRISOL;

soluo padro de cobre (contendo 100mg L-1 de Cu):

-

dissolver 0,393g de CuSO 4 .5 H2O em soluo de HNO 3

0,2M (9mL de HNO 3 concentrado por L de gua);

curva analtica de cobre:

-

transferir alquotas de 0,0; 0,4; 0,6; 0,8; 1,0; 1,5 e

2,0mL para bales volumtricos de 100mL, a partir da
soluo de 100mg L-1 de Cu;

adicionar 10,0mL de HClO4 2,5molL-1 (149,5mL de

HClO4 concentrado por L de H2O ultra pura);

completar o volume com H2O ultra pura. Estas solues

contm de 0,0 a 2,0mgL-1 de cobre;

soluo estoque de ferro (contendo 100mgL-1 de Fe):

-

pesar
0,702g
de
Fe(NH4 )2(SO)4 .6H2O;

sulfato

ferroso

amoniacal

dissolver em 50mL de H2O ultra pura que contenha

10,0mL de H2 SO4 concentrado;

completar o volume para 1.000mL com H2O ultra pura;

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

30

soluo estoque diluda de ferro (contendo 10mgL-1 de

ferro):
-

dissolver 10,0mL da soluo estoque;

completar o volume para 100mL com H2O ultra pura;

soluo estoque de zinco (contendo 100mgL-1 de zinco):

-

pesar 0,440g de ZnSO 4 .7H2O;

dissolver em soluo de HNO3 0,2molL-1, completando o

volume para 1.000mL, com esta soluo. Pode-se
tambm usar o Zn metlico (10mgL-1) ou padro
TITRISOL;

curva analtica de zinco:

-

transferir, a partir da soluo estoque de 100mgL-1 de

zinco, alquotas de 0,0; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5 e 3,0mL
para bales volumtricos de 100mL;

adicionar 10,0mL de HClO4 2,5molL-1;

completar o volume com H2O ultra pura;

soluo estoque de mangans (contendo 100mgL-1 de Mn):

-

pesar 0,308g de MnSO 4 .H2O;

dissolver em soluo de HNO3 0,2molL-1, completando o

volume para 1.000mL. Pode-se usar Mn metlico ou
padro TITRISOL;

curva analtica de mangans:

-

transferir, a partir da soluo padro estoque de 100mg

L-1 de mangans, alquotas de 0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 5,0;
10,0 e 15,0mL para os mesmos bales volumtricos de
100mL em que se colocou as solues padro de uso de
Cu, Fe e Zn;

adicionar 10,0mL de HCl04 2,5molL-1;

completar o volume com H20 deionizada. Estas solues

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

contm, respectivamente, de 0,0 a 15,0mgL-1

mangans.

31

de

8.6.1.4 Procedimentos

proceder s leituras no extrato

espectrmetro de absoro atmica;

construir as curvas analticas e estimar as concentraes de

cobre, ferro, mangans e zinco.

ntrico-perclrico

no

8.6.1.5 Clculo
Leitura mgL-1 x 60 (diluio) = Resultado mgL-1

8.6.2

Espectrometria de Emisso Atmica com Induo de Plasma

(EEA-ICP)

O uso do plasma como fonte de excitao para a emisso

atmica tornou-se muito importante em anos recentes. A tcnica de
Plasma Acoplado Indutivamente com deteco por emisso atmica
passou a ser comercialmente disponvel em 1974.
8.6.2.1 Princpio
O acoplamento induzido no ICP causado pelo efeito de um
campo eletromagntico que atua sobre um fluxo de argnio com
trajetria, em geral, espiral ascendente, radial ao campo eletromagntico.
O argnio flui atravs de um tubo de quartzo, ao redor do qual h uma
espiral de rdio-freqncia, tipo um solenide, feita normalmente de
cobre. A espiral energizada por um gerador de rdio-freqncia que
opera na faixa entre 5 a 75MHz, com potncia entre 1 e 2kW, criando
um campo eletromagntico alternado. O argnio que passa pelo tubo de
quartzo submetido a este campo magntico fortssimo, de tal maneira

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

32

que seus tomos entram em choque, produzindo ons de argnio,

eltrons livres e calor. Neste ponto, o argnio passa a ser um gs
condutor de energia, caracterstica que ele no possui temperatura
ambiente. O acoplamento propriamente dito ocorre quando se energiza o
fluxo de argnio a ponto de ser possvel a visualizao da tocha de
argnio incandescente e azulada. Este acoplamento se d pela aplicao
de uma centelha de Tesla ou centelha piloto (uma fasca como a de um
aparelho Magiclick) ao fluxo de argnio energizado. O argnio
rapidamente energizado, uma vez que a centelha aplicada perturba mais
ainda o sistema, fazendo com que os choques interpartculas tornem-se
mais intensos, e maior quantidade de energia seja liberada. Neste ponto,
tem-se uma tocha de argnio estvel, com temperaturas entre 9.000 e
10.000K em seu centro.
Esta fonte de excitao apresenta grandes vantagens sobre as
outras tcnicas espectromtricas, uma vez que as temperaturas
alcanadas propiciam maior nmero de transies eletrnicas que as
outras tcnicas de mesmo tipo. Os instrumentos atuais, providos de
dectetores no estado slido (CCD), so capazes de detectar e quantificar
simultaneamente at 60 elementos, com concentraes tpicas entre 1 e
100g L-1 com muita preciso. A alta temperatura do plasma elimina
muitas das interferncias qumicas presentes na tcnica de chama e a
maioria dos elementos so prontamente excitados. A tcnica adequada
para determinao de todos os elementos essenciais s plantas, mesmo
os que formam xidos (elementos refratrios), como boro e fsforo, e
tambm para elementos difceis de serem excitados, como zinco e
cdmio.
8.6.2.2 Reagentes e solues

solues padro de Fe, Cu, Mn e Zn: concentraes de

1.000mgL-1.

8.6.2.3 Procedimentos
A calibrao do equipamento feita a partir de padres mistos
contendo concentraes crescentes dos elementos a serem analisados.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

33

Tais concentraes so estipuladas levando-se em considerao a

concentrao dos elementos na soluo analtica (o extrato das amostras
solubilizadas), de maneira que a curva analtica abranja a faixa de
concentrao dos elementos nas amostras. Na Tabela 1, esto as
concentraes dos elementos utilizadas na curva analtica.
Tabela1. Concentraes dos elementos utilizadas na curva analtica do
EEA-ICP.
Curva analtica

Elemento

(nm)**
Padro #1

Padro #2

Padro #3

Fe

1,0 (20)*

5,0 (100)

10 (200)

238,204

Cu

0,1 (2,0)

0,2 (4,0)

0,4 (8,0)

324,754

Mn

1,0 (20)

2,0 (40,0)

4,0 (80)

257,610

Zn

0,1 (2,0)

0,2 (4,0)

0,4 (8,0)

213,856

* Os valores entre parnteses referem-se ao volume, em L, de soluo 1.000mg L-1

necessrios o preparo de 20,00mL de padro misto.
** (nm): comprimento de onda da linha principal do elemento.

Aps feita a calibrao e todos os ajustes necessrios, pode-se

proceder leitura das amostras.

8.7

Boro

8.7.1

Azometina-H

8.7.1.1 Princpio
Neste mtodo, a solubilizao realizada por via seca e a
determinao baseada na formao de um complexo de colorao

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

34

amarelo resultante da reao do cido brico com o reagente azometinaH e determinado espectrometricamente.
8.7.1.2 Materiais e equipamentos

cadinho de porcelana;

mufla;

espectrmetro UV-VIS.

8.7.1.3 Reagentes e solues

cido ascorbico-L;

acetato de amnio;

EDTA (sal sdico);

cido actico glacial;

azometina H;

cido brico;

HCl;

soluo de cido ascrbico-L 10g L-1 :

pesar 1g de cido ascrbico-L;

dissolver em 100mL de gua ultra pura (Soluo A);

soluo tampo:
-

pesar 500g de acetato de amnio e 30g de EDTA (sal

bissdico);

dissolver em 800mL de gua ultra pura;

adicionar lentamente 250mL de cido actico glacial;

homogeneizar;

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

35

soluo de azometina H:
-

dissolver 0,45g de azometina-H em 100mL da Soluo

A.

Observao: esta soluo deve ser preparada semanalmente,

armazenada em frasco escuro e conservada no
refrigerador;

soluo estoque de boro (50mgL-1 de B):

-

dissolver 0,286g de cido brico em HCI 0,1molL-1;

completar o volume com 1.000mL do mesmo;

guardar em frasco plstico;

curva analtica:
-

pipetar para bales volumtricos de 100mL 0,0; 0,5;

1,0; 2,0; 3,0; 4,0 e 5,0ml da soluo estoque;

completar o volume com HCI 0,1molL-1, guardando em

frascos
plsticos.
Essas
solues
contm,
respectivamente, 0,0; 0,25; 0,5; 1,0; 1,5; 2,0, e
2,5mgL-1 de B;

cido clordrico 0,1molL-1:

-

dissolver 8,3mL de HCl concentrado em 1.000mL gua

ultra pura;

guardar em frasco plstico.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

36

8.7.1.4 Procedimentos

transferir para tubos de ensaio de polipropileno, uma

alquota de 2,0mL do extrato proveniente da amostra;

adicionar 2,0mL da soluo tampo;

homogeneizar;

adicionar 2,0mL da soluo de azometina H 4,5gL-1;

agitar;

transferir, aps 30 minutos, as solues

avermelhadas para cubetas do espectrmetro;

proceder s leituras em filtro azul, em 420nm, acertando o

zero do aparelho com HCI 0,1molL-1;

construir curva analtica;

estimar a concentrao de B.

amarelo-

8.7.1.5 Clculo
B mg kg-1 = Leitura mg L -1 x 25

8.8

Molibdnio

8.8.1

Espectrometria de absoro atmica

8.8.1.1 Princpio
A solubilizao processa-se por via seca. O molibdnio
complexado com o tiocianato de amnio em meio cido. O complexo
solvel em metil iso-butil cetona. A determinao realizada por
espectrometria de absoro atmica em chama de N2O-acetileno.

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

37

8.8.1.2 Materiais e equipamentos

espectrmetro de absoro atmica;

lmpada de ctodo oco de Mo;

queimador de xido nitroso-acetileno;

mufla;

banho-maria.

8.8.1.3 Reagentes e solues

HCl;

Tiocianato de amnio;

Cloreto estanhoso;

metil-iso butil cetona p.a;

molibdato de sdio (Na2 MoO 4 2H2O p.a.);

NaOH;

soluo de HCl 6molL-1:

pesar 560mL de HCl concentrado;

dissolver em 1.000mL de gua ultra pura;

soluo de HCl 1,0molL-1:

-

soluo aquosa de tiocianato de amnio a 50gL-1:

-

dissolver 86mL de HCl concentrado em 1.000mL de

gua ultra pura;

dissolver 25,0g do sal em 500mL de gua ultra pura;

soluo de cloreto estanhoso a 100mgL-1:

-

dissolver 10g de SnCl2 2H20 com 20mL de soluo de

HCl 6molL-1 por aquecimento;

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

38

adicionar, aps esfriamento, 100mL de gua ultra pura;

filtrar, se ficar turvo;

preparar diariamente;

soluo estoque de molibdnio (contendo 100mgL-1 de Mo):

-

dissolver 242mg de molibdato de sdio (Na2MoO 4 2H2O

p.a.) em um pequeno excesso de NaOH 1molL-1;

diluir a cerca de 450mL com gua ultra pura;

acidular ligeiramente com HCl 1,0molL-1;

diluir a 500mL;

soluo estoque diluda de molibdnio (contendo 0,5mgL-1

de Mo):
-

diluir 5,0mL da soluo estoque (100mgL-1 de Mo) a

1.000mL com gua ultra pura;

curva analtica:
-

transferir para funis de separao de 125mL, 1, 3, e

5mL da soluo contendo 0,5mgL-1 de Mo (0,5; 1,5 e
2,5g de Mo);

adicionar 10mL da soluo de HCl 6molL-1 e gua ultra

pura at aproximadamente 45mL;

adicionar 3mL de soluo de tiocionato de amnio a

50mgL-1;

realizar a leitura, em filtro verde, em comprimento de

onda de 470nm, acertando o zero com gua deionizada.

8.8.1.4 Procedimentos

adicionar 3mL de soluo de tiocianato de amnio a 50gL-1

e 1mL de soluo de cloreto estanoso a 100gL-1,
homogeneizando aps a adio de cada reagente;

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

39

extrair o complexo por agitao durante 1 minuto, com

5mL de metil iso-butil cetona;

separar a fase orgnica;

proceder leitura no espectrmetro em escala expandida

dez vezes, usando o solvente para acertar a leitura zero;

usar chama de xido nitroso-acetileno.

8.8.1.5 Clculo
Mo mg kg-1 = Leitura g L -1x 0,20

40

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

UNIDADES E EXPRESSO DOS RESULTADOS

As

unidades

utilizadas

nesta

publicao

seguem

as

recomendaes da Sociedade Brasileira de Cincia do Solo para a adoo

do Sistema Internacional e tm o objetivo de uniformizao das mesmas
(Cantarella & Andrade, 1992).

Mtodos de Anlise de Tecidos Vegetais utilizados na Embrapa Solos

10

41

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

CANTARELLA, H; ANDRADE, J. C. O sistema internacional de unidades

e a cincia do solo. Boletim informativo da Sociedade Brasileira de
Cincia do Solo, Campinas, v. 17, n. 3, p. 91-102, 1992.
CARMO, C. A. F. S. do; NOGUEIRA, A. R. A.; OLIVEIRA, A. S.;
ALMEIDA, D. G.; FERNANDES, F. D.; PITTA, G. V. E.; CARLOS, G. M.;
OLIVEIRA, H.; MAMO, J. B.; ARMELIN, M. J. A.; SALDANHA, M. F.
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Tecidos vegetais. In: NOGUEIRA, A. R. A.; MACHADO, P. L. O.;
CARMO, C. A. F. S. do; FERREIRA, J. R. (Ed.) Manual de laboratrios:
solo, gua, nutrio vegetal, nutrio animal e alimentos. 1. Coleta,
acondicionamento e preparo de amostras. So Carlos: EMBRAPA Centro de Pesquisa de Pecuria do Sudeste, 1998. p. 32 - 42.
MALAVOLTA, E.; VITTI, G. C.; OLIVEIRA, S. A. Avaliao do estado
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