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Esterilizao de meios

de cultura
Disciplina: Engenharia Bioqumica
Profa. Marcia Pedrini
Fundamentos

Esterilizao dos meios de


fermentao
Em

escala

industrial

podemos

considerar

dois

processos de esterilizao de meios, utilizando-se vapor como


fluido de aquecimento: o processo descontnuo (batelada)
e o processo contnuo

Processo
descontnuo

O meio colocado no biorreator


e aquecido com vapor saturado
(calor mido)

Esterilizam-se simultaneamente o meio e o biorreator

Esterilizao dos meios de


fermentao
O aquecimento do sistema pode ser efetuado:

Borbulhando-se diretamente
vapor no meio

Vapor direto

Passando-se vapor por uma


serpentina mergulhada no
meio ou por uma camisa que
envolve o biorreator

Vapor indireto

Esterilizao dos meios de


fermentao
Na esterilizao descontnua distinguem-se trs
fases nitidamente:
a) Aquecimento
120C
b) Esterilizao

c) Resfriamento

Esterilizao dos meios de


fermentao
Algumas
desvantagens
descontnua:

da

esterilizao

a) Manuteno do meio em temperaturas relativamente altas


(acima 100C);
b) Elevados consumos de vapor (no aquecimento) e de gua
(no resfriamento)
c) Problemas de corroso;
d) Tempo no produtivo relativamente elevado;

Esterilizao dos meios de


fermentao
Cintica da destruio trmica de micro-organismos
A velocidade de destruio
pelo calor mido de MOs
depende
dos
seguintes
fatores:
a) Micro-organismo
b) Meio

b) Temperatura

Esterilizao dos meios de


fermentao
Cintica da destruio trmica de micro-organismos
No

estudo

da

destruio

trmica

de

micro-

organismos, costuma-se definir um outro parmetro: o

tempo de reduo decimal, indicado por D.


o tempo necessrio para reduzir

o nmero de

micro-organismos a 1/10 do valor inicial (ou seja, para


destruir 90% dos micro-organismos vivos existentes).

Esterilizao dos meios de


fermentao
Clculo do tempo de esterilizao
Processo descontnuo

Expresso que nos permite calcular o tempo necessrio para


reduzir o nmero de micro-organismos vivos de N0 at N;

Esterilizao dos meios de


fermentao
Problemas da aplicao da equao
1) Meios de fermentao a esterilizar no possuem uma
nica espcie de MO a ser destruda;

2) A constante de velocidade k depender, tambm, do meio


e da temperatura;
3) As clulas microbianas podem se encontrar na forma de
aglomerados, ou ainda partculas slidas (inertes);
4) Finalidade da esterilizao destruir todos os MOs
vivos existentes no meio, N = 0-> a equao no aplicvel;

Esterilizao dos meios de


fermentao
Definio de probabilidade de falha

Et - nmero total de operaes de esterilizao realizadas


nas mesmas condies;
Ef -

nmero de operaes de esterilizao que falharam,

isto , no conduziram a um meio esterilizado;

Esterilizao dos meios de


fermentao
Para o clculo do tempo de esterilizao por
processo descontnuo, precisamos conhecer:
a) o nmero inicial de clulas vivas no meio (N1);
b) a probabilidade de falha (P);
c) as curvas de aquecimento e de resfriamento do meio;

d) a temperatura mnima letal (Tm);


e) a temperatura de esterilizao (Te)
f) a variao de k com a temperatura;

Esterilizao dos meios de


fermentao
-> no aquecimento

-> no resfriamento

-> na esterilizao

Esterilizao dos meios de


fermentao

Processo contnuo

O meio e o biorreator so
aquecidos com calor mido
separadamente

Vapor
Tubo de espera
Injetor

biorreator
V
TC1

Meio

TC2

gua

Esterilizao dos meios de


fermentao
Variao da temperatura
esterilizao contnua
Ti temperatura inicial;
Tf temperatura final do
meio esterilizado;
Te temperatura de
esterilizao;
Tm temperatura mnima
letal;
tempo de esterilizao;

do

meio

durante

Esterilizao dos meios de


fermentao
Quais so as vantagens desse processo??
a) Trabalha a temperatura mais elevada, so rpidas as
operaes de aquecimento e arrefecimento; tempo de
contato do meio com altas temperaturas curto; menor ser
a destruio da composio do meio;
b) Tubo de espera por ser de dimenses reduzidas pode ser
construdo
metlica;

com

ligas

especiais

evitando

contaminao

Esterilizao dos meios de


fermentao
Quais so as vantagens desse processo??
c) Quando o meio tem elevada densidade/viscosidade este
processo dispensa os motores que seriam necessrios para
fazer agitao do meio;
d) Economia de vapor e gua de arrefecimento;

Esterilizao dos meios de


fermentao
Condies
contnuos

de

operao

dos

esterilizadores

a) Vapor de aquecimento: presso de 6,8 a 8,5 atm;


b) Bomba do mosto (meio) no esterilizado
c) Dimetro do tubo de espera: 10 a 30 cm;
d) Tempo de enchimento do biorreator: no > que 8h;
e) Velocidade do meio no tubo de espera: 3 a 60cm/s
f) Nmero de Reynolds no tubo de espera: 36.000 a
80.000;

g) Temperatura de esterilizao: 130 a 165C;

Esterilizao dos meios de


fermentao
Clculo do tempo de esterilizao
Como na esterilizao por processo contnuo, tanto
o aquecimento quanto o resfriamento do meio so
muito rpidos...despreza-se esses tempos;

Esterilizao dos meios de


fermentao
Fixado o meio e o micro-organismo, como a
temperatura afeta k??
Equao de Arrhenius

Esterilizao dos meios de


fermentao
Fixado o meio e o micro-organismo, como a
temperatura afeta k??
Equao de Arrhenius

Esterilizao dos meios de


fermentao
Destruio
dos
nutrientes
consequncia da esterilizao

Aquecimento do
meio

do

meio

como

Pode levar alteraes na


composio do meio

Ex.: decomposio de vitaminas reaes entre glicose e


a.a.

Esterilizao dos meios de


fermentao
Destruio
dos
nutrientes
consequncia da esterilizao
Quanto mais elevada
a temperatura
escolhida para
destruio de uma
certa quantidade de
MOs do meio

do

Menor
destruio
dos
nutrientes

meio

como

Melhores
resultados
obtidos no
processo

Porque energia de ativao de destruio de MOs (65 a 85


kcal/mol) > Energia de destruio trmica dos nutrientes